RU2429486C2 - Анализ циркулирующих опухолевых клеток - Google Patents

Анализ циркулирующих опухолевых клеток Download PDF

Info

Publication number
RU2429486C2
RU2429486C2 RU2008147415/15A RU2008147415A RU2429486C2 RU 2429486 C2 RU2429486 C2 RU 2429486C2 RU 2008147415/15 A RU2008147415/15 A RU 2008147415/15A RU 2008147415 A RU2008147415 A RU 2008147415A RU 2429486 C2 RU2429486 C2 RU 2429486C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
igf
sample
ctcs
tumor cells
cells
Prior art date
Application number
RU2008147415/15A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2008147415A (ru
Inventor
Антонио ГВАЛЬБЕРТО (US)
Антонио ГВАЛЬБЕРТО
Луиза Мария РОБЕРТС (US)
Луиза Мария РОБЕРТС
Кэрри Линн МЕЛВИН (US)
Кэрри Линн МЕЛВИН
Маделин И. РЕПОЛЛЕ (US)
Маделин И. РЕПОЛЛЕ
Дэвид Аллен ЧАЙЭНИЗ (US)
Дэвид Аллен ЧАЙЭНИЗ
Марк Карл КОННЕЛЛИ (US)
Марк Карл КОННЕЛЛИ
Леонардус Венделинус Матиас Мария ТЕРСТАППЕН (US)
Леонардус Венделинус Матиас Мария ТЕРСТАППЕН
Original Assignee
Пфайзер Продактс Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Пфайзер Продактс Инк. filed Critical Пфайзер Продактс Инк.
Publication of RU2008147415A publication Critical patent/RU2008147415A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2429486C2 publication Critical patent/RU2429486C2/ru

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57496—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving intracellular compounds
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
    • G01N33/5023—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects on expression patterns
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5064—Endothelial cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4742—Keratin; Cytokeratin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4745—Insulin-like growth factor binding protein
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/71—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/91—Transferases (2.)
    • G01N2333/912—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • G01N2333/91205—Phosphotransferases in general
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2458/00—Labels used in chemical analysis of biological material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Sampling And Sample Adjustment (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области иммунологической диагностики. Предложены способы определения эффективности терапии антагонистами рецепторов инсулиноподобного ростового фактора-1 (ИФР-1Р). Способы основаны на выявлении и подсчете количества циркулирующих опухолевых клеток, экспрессирующих ИФР-1Р. Изобретение может быть использовано для скрининга и определения стадии рака, разработки схем лечения и мониторинга ответов на лечение, рецидивов рака. 2 н. и 10 з.п. ф-лы, 6 ил., 3 табл.

Description

Известный уровень техники
Настоящее изобретение относится к областям онкологии и диагностического тестирования и, более конкретно, к способам скрининга рака, а также предсказания и мониторинга ответов на химиотерапевтическое лечение, рецидивов рака или тому подобному.
Инсулиноподобный ростовой фактор (ИФР-1) представляет собой полипептид 7,5 кДа, который циркулирует в плазме в высоких концентрациях и определяется в большинстве тканей. ИФР-1, который структурно сходен с инсулином, стимулирует клеточную дифференцировку и клеточную пролиферацию, и необходим большинству клеточных типов млекопитающих для поддержания пролиферации. Эти клеточные типы включают среди прочего диплоидные фибробласты человека, эпителиальные клетки, гладкомышечные клетки, Т-лимфоциты, нервные клетки, миелоидные клетки, хондроциты, остеобласты и стволовые клетки костного мозга.
Первой стадией в передаче сигнала, ведущей к стимулированной ИФР-1 клеточной пролиферации или дифференцировке, является связывание ИФР-1 или ИФР-2 (или инсулина в гиперфизиологических концентрациях) с рецептором ИФР-1 (ИФР-1Р). ИФР-1Р принадлежит к семейству тирозинкиназных рецепторов ростовых факторов (Ullrich et al., Cell 61: 203-212, 1990) и структурно сходен с рецептором инсулина (Ullrich et al., EMBO J. 5: 2503-2512, 1986).
В эпидемиологических исследованиях предполагается, что высокие и нормальные уровни ИФР-1 повышают риск развития рака, такого как рак легкого, молочной железы, простаты и колоректальный рак, по сравнению с индивидуумами с уровнями ИФР-1 на нижней границе нормы. Кроме того, имеется существенное доказательство роли ИФР-1 и/или ИФР-1Р в поддержании опухолевых клеток in vitro и in vivo. Уровни ИФР-1 повышены в опухолях легкого (Kaiser et al., J. Cancer Res. Clin. Oncol. 119: 665-668, 1993; Moody et al., Life Sciences 52: 1161-1173, 1993; Macauley et al., Cancer Res., 50: 2511-2517, 1990), молочной железы (Pollak et al., Cancer Lett. 38: 223-230, 1987; Foekens et al., Cancer Res. 49: 7002-7009, 1989; Arteaqa et al., J. Clin. Invest. 84: 1418-1423, 1989), простаты и ободочной кишки (Remaole-Bennet et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 75: 609-616, 1992; Guo et al., Gastroenterol. 102: 1101-1108, 1992). Нарушение регуляции экспрессии ИФР-1 в эпителии простаты ведет к неоплазии у трансгенных мышей (DiGiovanni et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 97: 3455-3460, 2000). Кроме того, ИФР-1, очевидно, является аутокринным стимулятором глиом человека (Sandberg-Nordqvist et al., Cancer Res. 53 (11): 2475-78, 1993), наряду с этим ИФР-1, как показано, стимулирует рост фибросарком, которые гиперэкспрессируют ИФР-1Р (Butler et al., Cancer Res. 58: 3021-3027, 1998). В качестве обзора взаимодействия ИФР-1/ИФР-1Р, играющего роль в росте различных опухолей человека, см. Macaulay, Br. J. Cancer, 65: 311-20, 1992.
При использовании антисмысловых экспрессионных векторов или антисмысловых олигонуклеотидов к РНК ИФР-1Р было показано, что интерференция с ИФР-1Р ведет к ингибированию опосредованного ИФР-1 клеточного роста (см., например, Wraight et al., Nat. Biotech. 18: 521-526, 2000). Рост может также ингибироваться при применении пептидных аналогов ИФР-1 (Pietrzkowski et al., Cell Growth & Diff. 3: 199-205, 1992; Pietrzkowski et al., Mol. Cell. Biol. 12: 3883-3889, 1992), или вектора, экспрессирующего антисмысловую РНК к РНК ИФР-1 (Trojan et al., Science 259: 94-97, 1992). Кроме того, антитела к ИФР-1Р (Arteaga et al., Breast Canc. Res. Treatm. 22: 101-106, 1992; и Kalebic et al., Cancer Res. 54: 5531-34, 1994) и доминантные негативные мутанты ИФР-1Р (Prager et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 91: 2181-85, 1994; Li et al., J. Biol. Chem. 269: 32558-2564, 1994; Jiang et al., Oncogene 18: 6071-6077, 1999) могут обращать трансформированный фенотип, ингибировать развитие опухолей и индуцировать потерю метастазного фенотипа.
ИФР-1 важен также для регуляции апоптоза. Апоптоз, который представляет собой программируемую клеточную смерть, вовлечен в большое количество разнообразных процессов развития, включая созревание иммунной и нервной систем. В дополнение к его роли в развитии апоптоз вовлечен в качестве важного клеточного предохранительного фактора против развития опухолей (Williams, Cell 65: 1097-1098, 1991; Lane, Nature 362: 786-787, 1993). Подавление программы апоптоза может вносить вклад в развитие и прогрессию рака.
ИФР-1 защищает от вызываемого удалением цитокинов апоптоза ИЛ-3-зависимых гематопоетических клеток (Rodriguez-Tarduchy, G. et al., J. Immunol. 149: 535-540, 1992), и вызываемого удалением сыворотки в клетках Rat-1/mycER (Harrington, E. et al., EMSO J. 13:3286-3295, 1994). Демонстрация того что управляемые c-myc фибробласты зависят от ИФР-1 в отношении своего выживания, предполагает, что рецептор ИФР-1 играет важную роль в поддержании опухолевых клеток с помощью специфического ингибирования апоптоза, роль, отличную от пролиферативных эффектов ИФР-1 или ИФР-1Р.
Защитные эффекты ИФР-1 в отношении апоптоза зависят от присутствия на клетках ИФР-1Р, взаимодействующих с ИФР-1 (Resnicoff et al., Cancer Res. 55: 3739-41, 1995). Подтверждение антиапоптозной функции ИФР-1Р при поддержании опухолевых клеток было также получено при исследовании с применением антисмысловых олигонуклеотидов к ИФР-1Р, в котором идентифицировано количественное взаимоотношение между уровнями ИФР-1Р, степенью апоптоза и опухолевого потенциала сингенной опухоли крысы (Resnicoff et al., Cancer Res. 55: 3739-3741, 1995). Было обнаружено, что гиперэкспрессия ИФР-1Р защищает опухолевые клетки in vitro от апоптоза, индуцированного этопозидом (Sell et al., Cancer Res. 55: 303-06, 1995), и даже более важно, что снижение уровней ИФР-1Р ниже уровней дикого типа вызывает массовый апоптоз опухолевых клеток in vivo (Resnicoff et al., Cancer Res. 55: 2463-69, 1995).
В некоторых исследованиях предполагается, что уровни экспрессии ИФР-1Р коррелируют с клиническим исходом. В моделях опухолей ИФР-1 модулирует клеточную пролиферацию, выживание и метастазирование и индуцирует устойчивость к направленной терапии. Ингибирование ИФР-1Р существенно повышает активность цитотоксических агентов (Cohen, B. et al., Clin. Cancer Res. 11(5): 2063-73). Ингибирование сигнализации ИФР-1Р, таким образом, очевидно, является многообещающей стратегией для разработки новых вариантов терапии рака.
Злокачественные опухоли эпителиальных тканей являются наиболее общей формой рака и ответственны за большинство смертей, связанных с раком. Благодаря прогрессу в хирургическом лечении этих опухолей, смертность все больше связана с ранним метастазированием и рецидивом, который часто скрыт во время постановки первичного диагноза (Racila et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:4589-94, 1998; Pantel et al., J. Nat'l Cancer Inst. 91(13): 1113-24, 1999). Например, отдаленная анатомическая локализация некоторых органов делает маловероятным то, что опухоли этих органов будут выявляться, перед тем как произойдет их инвазия в соседние структуры и они вырастут более 1 см. Даже в отношении рака молочной железы 12-37% маленьких опухолей рака молочной железы (<1 см), определяемых с помощью маммографии, уже метастазируют к моменту диагноза (Chadha M. et al., Cancer 73(2): 350-3, 1994).
Циркулирующие опухолевые клетки (CTCs) представляют собой клетки эпителиального происхождения, которые присутствуют в циркуляции больных с различными формами солидного рака. Они происходят из клонов первичной опухоли и являются злокачественными. (См. Fehm et al., Clin. Cancer Res. 8: 2073-84, 2002.) В литературе накоплены доказательства, демонстрирующие, что CTCs могут рассматриваться как независимый диагностический параметр раковой прогрессии карцином Beitsch & Clifford, Am. J. Surg: 180(6): 446-49, 2000 (молочной железы); Feezor et al., Ann. Oncol. Surg. 9(10): 944-53, 2002 (колоректального рака); Ghossein et al., Diagn. Mol. Pathol. 8(4): 165-75, 1999 (меланомы, рака простаты, щитовидной железы); Glaves, Br. J. Cancer 48: 665-73, 1983 (легких); Matsunami et al., Ann. Surg. Oncol. 10(2): 171-5, 2003 (желудка); Racila et al., 1998; Pantel et al., 1999.
Определение и установление количества циркулирующих опухолевых клеток важно для лечения больного по ряду причин. Их можно определить до первичной опухоли, таким образом давая возможность поставить диагноз на ранней стадии. Они снижаются в ответ на лечение, так что возможность установления количества CTCs позволяет прослеживать эффективность данного режима лечения. Они могут быть использованы в качестве средства для отслеживания рецидива у больных с отсутствием измеряемого проявления заболевания при адъювантной химиотерапии. Например, CTC, как обнаружено, присутствуют у 36% больных раком молочной железы через 8-22 года после мастэктомии, очевидно, из микрометастазов (отложений единичных опухолевых клеток или очень маленьких кластеров неопластических клеток). Meng et al., Clin. Can. Res. 10(24): 8152-62, 2004.
Кроме того, CTCs могут применяться для предсказания свободного от прогрессии выживания (PFS) и предельного выживания (OS), так как присутствие/количество циркулирующих опухолевых клеток у больных с метастазирующей карциномой, как показано, коррелирует с PFS и OS. См., например, Cristofanilli et al., J. Clin. Oncol. 23(1): 1420-1430, 2005; Cristofanilli et al., N. Engl. J. Med. 351(8): 781-791, 2004.
Однако остается потребность в быстрых и надежных тестах, которые являются более чувствительными, чем простое определение CTCs.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение направлено на способ предсказания эффективности терапии больного антагонистом ИФР-1Р, включающий стадии: a) получения биологического образца от больного; b) подготовки образца, где биологический образец смешивают с лигандом, который специфически взаимодействует с опухолевыми клетками для значительного исключения других компонентов образца; c) контактирования образца, по меньшей мере, с одним реагентом, который специфически связывается с эпителиальными клетками; d) контактирования образца с агентом, обладающим связывающим сродством к рецепторам инсулиноподобного ростового фактора (ИФР-1Р) на клетках; и e) анализа образца для определения присутствия опухолевых клеток, экспрессирующих ИФР-1Р, причем присутствие в образце опухолевых клеток, экспрессирующих ИФР-1Р, служит прогностическим фактором эффективности терапии больного антагонистом ИФР-1Р.
Настоящее изобретение также направлено на способ мониторинга эффективности терапии больного антагонистом ИФР-1Р, включающий стадии: a) получения первого биологического образца от больного; b) подготовки первого образца, где первый биологический образец смешивают с лигандом, который специфически взаимодействует с опухолевыми клетками для значительного исключения других компонентов образца; c) контактирования первого образца, по меньшей мере, с одним реагентом, который специфически связывается с эпителиальными клетками; d) контактирования первого образца с агентом, обладающим связывающей аффинностью к рецепторам инсулиноподобного ростового фактора (ИФР-1Р) на клетках; e) анализа первого образца для определения присутствия и количества опухолевых клеток, экспрессирующих ИФР-1Р; f) введения больному в виде терапии антагониста ИФР-1Р; g) получения второго биологического образца от больного после введения в виде терапии антагониста ИФР-1Р; h) подготовки второй пробы из второго биологического образца, где второй биологический образец смешивают с лигандом, который специфически взаимодействует с опухолевыми клетками, и осуществления стадий c)-e) со вторым образцом; и i) сравнения количества опухолевых клеток, экспрессирующих ИФР-1Р, в первом образце с количеством опухолевых клеток, экспрессирующих ИФР-1Р, во втором образце, причем их меньшее количество во втором образце служит показателем эффективности терапии больного антагонистом ИФР-1Р.
В предпочтительном осуществлении терапия антагонистом ИФР-1Р представляет собой антитело против ИФР-1Р.
Настоящее изобретение дополнительно направлено на набор для скрининга образца больного на присутствие циркулирующих опухолевых клеток, экспрессирующих ИФР-1Р, включающий: a) покрытые магнитные наночастицы, включающие вещество магнитной основы, покрывающее вещество на основе белка и антитело, которое специфически связывается с отличительной детерминантой опухолевых клеток, причем антитело прямо или непрямо соединено с указанной основой покрывающего вещества; b) специфичный для клеток краситель для исключения из анализа компонентов образца, отличных от опухолевых клеток; и c) по меньшей мере, один меченый для выявления агент, обладающий связывающей аффинностью к ИФР-1Р.
С вышеупомянутыми и другими задачами, преимуществами и признаками изобретения, которые будут очевидны здесь далее, природа изобретения может быть более ясно понята при ссылке на последующее подробное описание изобретения, чертежии прилагаемую формулу изобретения.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 представлено наложение гистограмм окрашивания ИФР-1Р-фикоэритрином различных клеточных линий.
На фиг. 2 представлена коллекция изображений, полученных с помощью флуоресцентного микроскопа, меченых клеток MCF-7 рака молочной железы (панель A) и клеток мочевого пузыря T-24 (панель B).
На фиг. 3 представлена коллекция изображений, полученных с помощью флуоресцентного микроскопа, потенциальных циркулирующих опухолевых клеток.
На фиг. 4 показано графическое представление количества суммарных циркулирующих опухолевых клеток и ИФР-1Р-позитивных циркулирующих опухолевых клеток у четырех больных, подвергаемых лечению антителом против ИФР-1Р.
На фиг. 5 показано графическое представление количества суммарных циркулирующих опухолевых клеток и ИФР-1Р-позитивных циркулирующих опухолевых клеток у четырех больных, подвергаемых лечению антителом против ИФР-1Р в сочетании с доцетакселом.
На фиг. 6 показано графическое представление количества суммарных циркулирующих опухолевых клеток и ИФР-1Р-позитивных циркулирующих опухолевых клеток у четырех больных, подвергаемых лечению антителом против ИФР-1Р в сочетании с паклитакселом и карбоплатином.
Подробное описание изобретения
Если здесь не указано иначе, научные и технические термины, применяемые в связи с настоящим изобретением, должны иметь значения, которые обычно понятны специалистам в данной области техники. Далее, если в контексте не требуется иначе, термины в единственном числе должны включать множественное и термины во множественном числе должны включать единственное.
Каждый год в Соединенных Штатах диагностируется более 1 миллиона новых случаев рака; приблизительно одна из каждых пяти смертей в этой стране вызвана раком или осложнениями, связанными с его лечением. Множество попыток постоянно направлено на улучшение лечения и диагностики этого заболевания. Большинство больных раком умирают не от их первичной опухоли; наоборот, они погибают от метастазов; множественных, широко распространяющихся колоний опухоли, образованных малигнизированными клетками, которые сами отделились от исходной опухоли и распространились по организму, часто в отдаленные места. К сожалению, колонии метастазов часто выявить и уничтожить труднее, чем первичную опухоль, и часто невозможно успешно лечить их всех. Способность малигнизированных клеток метастазировать остается одной из главных преград для лечения рака и может быть ускорена рецептором ИФР-1. См., например, Bahr et al., Growth Factors 23:1-14, 2005.
Основываясь на сложности рака и метастазов рака и неудовлетворенности лечением больных раком через несколько лет, было сделано много попыток разработки диагностических тестов для управления лечением и прослеживания эффектов такого лечения на метастазы или рецидивы. Такие тесты предположительно могут также использоваться для скрининга рака, замещая относительно грубые тесты, такие как маммография для опухолей молочной железы или ректальные исследования с помощью пальпации для рака простаты.
Учитывая знание взаимоотношения ИФР-1 и ИФР-1Р в определенных типах рака, были проведены исследования для оценки эффектов антител против ИФР-1Р на ряд циркулирующих опухолевых клеток и их экспрессию ИФР-1Р, а также клиническую эффективность антител. Сейчас разработан тест на определение и подсчет количества циркулирующих опухолевых клеток, экспрессирующих ИФР-1Р (ИФР-1Р-позитивные CTCs), который пригоден для диагностики и лечения рака, и он превосходит способы предшествующего уровня техники, использующие CTCs. Тест может вносить вклад в лучшее понимание биологических функций рецептора ИФР-1. Например, в то время как было предположено, что повышенные уровни ИФР-1 необходимы для индукции инвазивного/метастазного фенотипа опухолевых клеток, взаимоотношение между уровнями экспрессии ИФР-1 и метастазным потенциалом до сих пор полностью не выяснены. В настоящее время обнаружено, что больные с высоким количеством ИФР-1-позитивных CTCs, очевидно, имеют более агрессивные опухоли, о чем свидетельствует быстрая прогрессия заболевания. Потенциальное взаимоотношение между повышенной экспрессией ИФР-1 и метастазным потенциалом может, таким образом, служить основанием для определения ИФР-1Р-позитивных CTCs как предикторов плохого исхода и/или терапевтического вмешательства.
Во-первых, способы определения CTC-ИФР-1Р настоящего изобретения пригодны для раннего выявления опухоли или подтверждения диагноза. Они также могут быть пригодны для оценки прогноза.
Способы настоящего изобретения также пригодны для планирования лечения. Обнаружено, что больные с ИФР-1Р-позитивными циркулирующими опухолевыми клетками до лечения с большей вероятностью будут отвечать на лечение антагонистом ИФР-1Р, чем те, у которых их нет. С помощью скрининга больных на ИФР-1Р-позитивные антитела до начала лечения возможно предварительно отобрать популяцию, с наибольшей вероятностью отвечающую на лечение антагонистом ИФР-1Р, и соответственно спланировать схему лечения. Потенциальное использование тестов на CTC-ИФР-1Р в качестве биомаркеров антител против ИФР-1Р может включать идентификацию оптимальной биологической дозы, выбор дозы и схемы лечения и определение продолжительности лечения.
Было обнаружено, что существует хорошая корреляция между изменениями уровня ИФР-1Р-позитивных CTCs в крови и химиотерапией и клиническим статусом. С точки зрения этой корреляции возможно также оценить ответ больных на лечение или прогрессию заболевания с применением способов тестирования настоящего изобретения. Измерение рецепторов ИФР-1 на циркулирующих опухолевых клетках дает реальную конечную точку фармакодинамики (PD). Как только начато лечение, измерение ИФР-1Р на опухолевых клетках может быть пригодно для определения, будет ли достигнуто максимальное ингибирование мишени без достижения максимальной допустимой дозы (MTD). Может быть также прослежено развитие устойчивости к данному лечению. Дополнительным преимуществом настоящего изобретения является то, что эффект лекарства может быть определен с помощью измерения CTC более часто, чем при традиционных способах.
Наконец, способы настоящего изобретения могут быть также использованы для определения рецидива опухоли даже в отсутствие клинических симптомов.
Способы настоящего изобретения могут быть использованы в сочетании с диагностикой и/или лечением не гематологических злокачественных опухолей, включая рак молочной железы, простаты, яичников, легкого и ободочной кишки, особенно немелкоклеточный рак легкого (NSCLC) и гормононезависимый рак простаты (HRPC).
Скрининг больных с множественными типами опухолей указывает на то, что CTCs и ИФР-1Р-позитивные CTCs часто определяются у больных HRPC. Идентификация этих клеток при HRPC может иметь прогностическое или терапевтическое применение. Действительно, в предшествующем исследовании присутствие CTCs, как обнаружено, является наиболее существенным параметром, предсказывающим выживаемость больных HRPC (Moreno et al., Urology 65: 713-718, 2005). Во многих исследованиях установлена роль ИФР-1Р в развитии рака простаты, и данные in vitro предполагают, что повышенная экспрессия и/или активность ИФР-1Р связаны с прогрессией гормононезависимого фенотипа (Hellawell et al., Cancer Res., 62: 2942-2950, 2002; Chott et al., Am. J. Pathol. 155: 1271-1279, 1999). В одном описанном здесь исследовании больные HRPC, которые рассматривались как ИФР-1Р-позитивные (т.е. определялась, по меньшей мере, одна ИФР-1Р-позитивная CTC), имели уровень медианы ПСА сыворотки при регистрации выше, чем те больные, у которых не было определяемых CTCs. Более того, уровни ПСА и подсчитанное количество CTC и ИФР-1Р-позитивных CTCs изменялись параллельно в течение ответа на лечение или при прогрессии заболевания. Ранее показано, что больные с прогрессирующим метастазирующим HRPC обладают количеством CTCs существенно более высоким, чем таковые в группе с более ранней стадией заболевания, и снижение количества CTCs через одну неделю после начала лечения доцетакселом наблюдалось у двух больных (Moreno et al., 2005, выше). У обоих больных, однако, наблюдалась прогрессия, проявляющаяся в подъеме количества CTCs и уровней ПСА, несмотря на дополнительные дозы доцетаксела. Описанные здесь исследования предполагают, что только постоянное снижение количеств CTCs связано с ответом на терапию при HRPC. Таким образом, подсчеты количества CTCs могут дать прогностическую информацию, независимую от таковой для уровня ПСА. Важно, что доклинические данные указывают на то, что изменения в ПСА в ответ на лечение анти-ИФР-1Р отражают изменения роста опухоли простаты (Wu et al., Clin. Cancer Res. 11: 3065-3074, 2005).
Было также обнаружено, что пропорция отвечающих на сочетанную терапию антителом против ИФР-1Р и доцетакселом была выше у тех больных, у которых определялись ИФР-1Р-позитивные CTCs в начале исследования, чем у тех, у которых эти клетки не определялись. Более того, поздние ответы, которые необязательно связаны с клиническим преимуществом (см., например, Petrylak et al., J. Nat'l Cancer Inst. 98: 516-521, 2006), наблюдались у больных, негативных в отношении ИФР-1Р-CTCs. Эти данные предполагают возможность использования подсчета количества ИФР-1Р CTC для идентификации больных HRPC, которые могут получить преимущества от анти-ИФР-1Р терапии.
Способы настоящего изобретения могут быть использованы при планировании и/или мониторинге лечения различными химиотерапевтическими соединениями, которые ингибируют сигнализацию ИФР-1Р. Особенно предпочтительными являются антитела против ИФР-1Р, такие как описанные в патенте США No. 7037498 и в публикации патентной заявки США No. 2005/0069539. Другие предпочтительные антитела против ИФР-1Р включают F-50035 и MK-0646 (Pierre Fabre/Merck); 19D12 (Schering-Plough); R1507 (Roche/Genmab); EM-164/AVE-1642 (Immunogen/Sanofi-Aventis); IMC-A12 (ImClone Systems); AMG479 (Amgen); а также антитела, описанные в международной патентной заявке No. WO2006/069202; в публикации патентной заявки США No. 2005/0147612; в публикации патентной заявки США No. 2005/0084906; в публикации патентной заявки США No. 2005/0249730; в публикации патентной заявки США No. 2004/0018191; в публикации патентной заявки США No. 2005/0136063; в публикации патентной заявки США No. 2003/0235582; в публикации патентной заявки США No. 2004/0265307; в публикации патентной заявки США No. 2004/0228859; в публикации патентной заявки США No. 2005/0008642; европейской патентной заявке No. 1622942; в публикации патентной заявки США No. 2003/0165502; и в публикации патента США No. 2005/0048050.
Другие классы молекул, подходящие для применения в настоящем изобретении, включают пептидные аптамеры, которые специфически связываются с ИФР-1Р, антисмысловые олигонуклеотидные модуляторы ИФР-1Р; и низкомолекулярные ингибиторы ИФР-1Р. Предпочтительные низкомолекулярные ингибиторы ИФР-1Р включают OSI-906 (OSI Pharmaceuticals); AEW-541 (Novartis); BMS-536924 и BMS-554417 (Bristol-Myers Squibb); INSM-18 (Insmed); AG-1024 (Pfizer); XL228 (Exelixis), пикроподофиллин и те, которые раскрыты в международных патентных заявках No WO2004/043962 и WO2004/054996.
Как изложено ниже более подробно, способы настоящего изобретения включают селективное удаление клеток, обладающих определенными реактивными антигенными сайтами, из образца больного. Способы и приборы для такого селективного удаления хорошо известны специалисту в данной области техники. См., например, патенты США Nos. 4551435; 4795698; 4925788; 5108933; и 5200084; и публикацию патентной заявки США No. 2004/0157271. В предпочтительном осуществлении интересующие клетки выделяют из образца больного иммуномагнитным способом с применением ферромагнитных жидкостей. Ферромагнитные жидкости содержат крошечные магнитные частицы в коллоидной суспензии, чей поток может контролироваться магнитом или магнитными полями.
Для того чтобы это изобретение могло быть лучше понято, описываются следующие примеры. Эти примеры представлены только в целях иллюстрации и не истолковываются как ограничивающие любым образом объем изобретения.
Примеры
В представленных здесь примерах образцы крови собирали от человеческих субъектов во многих географических точках в пробирки для консервации CELLSAVE (Immunicon, Huntingdon Valley, PA), вакуумированные 10-мл пробирки для взятия крови, содержащие консервант для клеток для сохранения клеточной морфологии и экспрессии антигенов клеточной поверхности. Образцы хранили при комнатной температуре и обрабатывали, как описано выше, в пределах 72 часов после сбора крови.
Ответ больного на лечение оценивали радиологически с использованием критериев оценки ответа солидных опухолей (RECIST) (см. Therasse et al., J. Nat'l Cancer Inst. 92: 205-216, 2000) или, у больных HRPC, с помощью критериев рабочей группы по специфичному для простаты антигену (PSAWG) (см. Bubley et al., J. Clin. Oncol. 17:3461-3467, 1999).
Пример 1
Разработка теста на опухолевые клетки крови с ИФР-1Р
Клеточная культура и обогащение клеток: клетки линии MCF-7 рака молочной железы, клетки линии PC3-9 простаты, клетки линии T-24 мочевого пузыря и гематопоэтические клетки линии CEM культивировали в сосудах, содержащих среду RPMI-1640 для культивирования клеток с добавкой 10% FCS, и затем собирали с помощью трипсина. Использовали только те клеточные суспензии, жизнеспособность которых, оцененная по исключению трипанового синего, превышала 90%. Для определения действительного количества клеток 50-мкл аликвоту клеток пермеабилизировали и флуоресцентно метили добавлением 200 мкл ЗФР, содержащего 0,05% сапонина и 10 мкл моноклонального антитела против цитокератина, конъюгированного с фикоэритрином (PE), с конечной концентрацией 0,5 мкг/мл. Через 15 минут инкубации при комнатной температуре добавляли 200 мкл буфера и 20 мкл флуоресцентных шариков (Beckman-Coulter, Inc., Miami, FL) с общим содержанием шариков приблизительно 20000. Две параллельные пробирки, содержащие только шарики, пропускали через проточный цитометр (FACSCalibur, BD Biosciences, San Jose, CA) до 100% отбора образца. Это обеспечивало точное определение количества шариков, содержащихся в 20 мкл. Затем тестировали экспериментальные пробирки в трех параллелях на проточном цитометре до подсчета 10000 шариков в каждой пробирке. Используя известное количество шариков на единицу объема, определяли концентрацию клеток. Для определения ИФР-1Р было установлено количество обогащенных клеток, которое должно составлять от 130 до 220 в 7,5 мл крови.
Выделение и определение количества CTCs: образцы для выделения клеток из крови получали и анализировали с помощью системы CELLTRACKS (Immunicon, Huntingdon Valley, PA), которая состоит из системы CELLTRACKS AUTOPREP, набора реагентов и анализатора CELLSPOTTER. Система CELLTRACKS AUTOPREP представляет собой автоматизированную систему подготовки образца для редкого выявления клеток. Набор реагентов состоит из ферромагнитных жидкостей, покрытых антителами против обогащенных иммуномагнитом клеток, смеси антител, конъюгированных с флуоресцентной меткой (антител, конъюгированных с PE и аллофикоцианином (APC), для промечивания эпителиальных клеток и лейкоцитов, соответственно), ядерного красителя и буферов для промывки, пермеабилизации и ресуспендирования клеток. Для выявления карциномных клеток 7,5 мл крови смешивают с ферромагнитными жидкостями, покрытыми антителами против ассоциированного с опухолью антигена EpCAM (молекулы адгезии эпителиальных клеток или антигена поверхности эпителиальных клеток). После иммуномагнитного обогащения добавляли меченые флуоресцеином изотиоцианатом (FITC) антитела, узнающие цитокератины 4, 5, 6, 8, 10, 13, 18 и 19, меченые APC антитела, узнающие антиген CD45 лейкоцитов, меченые PE антитела, узнающие ИФР-1Р, и краситель нуклеиновых кислот 4',6-диамидино-2-фенилиндол (DAPI) в сочетании с буфером пермеабилизации для флуоресцентного промечивания иммуномагнитно-меченых клеток. После инкубации в системе повторяли магнитное разделение, и избыток красящих реагентов удаляли. На конечной стадии обработки клетки ресуспендировали в устройстве для презентации клеток MAGNEST (Immunicon, Huntingdon Valley, PA). Это устройство состоит из камеры и двух магнитов, которые направляют иммуномагнитно-меченые клетки для анализа с помощью флуоресцентной микроскопии.
MAGNEST помещали в анализатор CELLSPOTTER, четырехцветный полуавтоматический флуоресцентный микроскоп. Записывали рамки изображения, охватывающие всю поверхность картриджа для каждого из четырех кубов флуоресцентного фильтра. Записанные изображения, содержащие объекты, отвечающие заранее определенным критериям, представлялись в Web-браузер, из которого оператор осуществлял конечный отбор клеток. Критерии для определения объекта как CTC включали круглую или овальную морфологию, видимое ядро (DAPI-положительное), положительное окрашивание на цитокератин и отсутствие экспрессии CD45 (определяемое как отрицательное окрашивание CD45-APC). Результаты подсчета клеток всегда выражали в виде количества клеток на 7,5 мл крови.
Выбор антител против ИФР-1Р и выявление ИФР-1Р на клетках опухолевых линий: антитела против ИФР-1Р 1H7 (конъюгат PE; BD Biosciences, San Jose, CA) и 33255.111 (R&D Systems, Minneapolis, MN) титровали на клетках клеточной линии рака молочной железы MCF-7. Эксперименты с перекрестным блокированием показали отсутствие ингибирования, что позволяет предполагать связывание этих антител с различающимися и неконкурирующими эпитопами на ИФР-1Р. Эксперименты с перекрестным блокированием с антителом CP-751871 против ИФР-1Р человека (Pfizer Inc.; см. патент США No. 7037498) показали, что связывание антитела 33255.111 с клетками полностью блокируется практически эквимолярными количествами CP-751871. Напротив, ингибирования связывания антитела 1H7 не наблюдалось в присутствии CP-751871. Эти результаты показывают, что 33255.111 и CP-751871 связываются с одним и тем же или родственными эпитопами. Поскольку связывание антитела 1H7 с ИФР-1Р не блокируется в присутствии CP-751871, для дальнейшей оценки было выбрано 1H7.
Плотность антигена на клетках гематопоэтической линии CEM, клеточной линии рака простаты PC3-9, клеточной линии мочевого пузыря T-24 и клеточной линии рака молочной железы MCF-7 оценивали окрашиванием меченым PE антителом 1H7 против ИФР-1Р с последующим анализом проточной цитометрией. На фиг. 1 показано наложение гистограмм окрашивания ИФР-1Р-PE линий клеток. Окрашивание клеток CEM было сходным с окрашиванием контроля и, таким образом, плотность ИФР-1Р была ниже пределов определения. Окрашивание ИФР-1Р-PE клеток PC3-9 можно было отличить от фона, а клетки T24 и MCF-7 имели явно более яркую окраску. Определение плотности антигена было достигнуто калибровкой проточного цитометра шариками с известным количеством молекул PE. Плотность ИФР-1Р на клетках PC3-9 составляла приблизительно 10000 антигенов ИФР-1Р, на клетках T-24 - приблизительно 50000 антигенов ИФР-1Р и на клетках MCF-7 - приблизительно 1000000 антигенов ИФР-1Р.
Оценка анализа ИФР-1Р: стандартный анализ CTC с применением системы CELLTRACKS с использованием PE для выявления цитокератина, находящегося на клетках эпителиального происхождения, APC для выявления CD45, находящегося на клетках гематопоэтического происхождения, и FITC для выявления специфичными реагентами вещества на CTCs, определяемых как цитокератин-положительные, CD45-отрицательные ядерные клетки. Существующий в настоящее время предел определения анализатором CELLSPOTTER антигенов с помощью меченых FITC антител составляет приблизительно 100000 антигенов на клетку. Для увеличения этой чувствительности анализ CTC был изменен для снижения порога выявления ИФР-1Р. Цитокератин, экспрессируемый с высокой плотностью на эпителиальных клетках, метили FITC, что дало возможность применения меченых PE антител против ИФР-1Р. В отдельных экспериментах от 130 до 200 клеток PC3-9, T-24 или MCF-7 добавляли к 7,5 мл крови и получали с помощью измененных окрашивающих реагентов. После приготовления образцы сканировали на анализаторе CELLSPOTTER. Анализатор перестраивали таким образом, что пользователю представлялись FITC-положительные, ядерные DAPI-положительные случаи в качестве кандидатов CTC.
На панели A фиг. 2 представлен типичный пример клеток MCF-7, выделенных из 7,5 мл крови. В верхнем ряду показан кластер из 3 клеток MCF-7, явно экспрессирующих рецептор ИФР-1Р, отметка после сложного изображения указывает на то, что оператор классифицировал клетку как CTC, и отметка после изображения окраски ИФР-1Р показывает, что оператор классифицировал данную CTC как экспрессирующую ИФР-1Р. Все клетки, показанные на панели A, явно экспрессируют рецептор ИФР-1Р. В крови шестнадцати здоровых индивидуумов с добавлением клеток MCF-7 80,6% (ст. откл. 7,7) выделенных клеток MCF-7 было классифицировано как CTCs, экспрессирующие ИФР-1Р. На панели B фиг. 2 представлен типичный пример клеток T-24, выделенных из 7,5 мл крови. Экспрессия ИФР-1Р в четырех T-24 клетках была явно ниже по сравнению с окраской ИФР-1Р клеток MCF-7, и оператор классифицировал в качестве CTCs, экспрессирующих ИФР-1Р, только две нижние клетки. В крови шести здоровых индивидуумов после добавления клеток T-24 13,6% (ст. откл. 3,9) выделенных клеток MCF-7 было классифицировано как CTCs, экспрессирующие ИФР-1Р. В крови шести здоровых индивидуумов после добавления клеток PC3-9 3,8% (ст. откл. 6,0) выделенных клеток MCF-7 было классифицировано как CTCs, экспрессирующие ИФР-1Р. Эти данные служат в качестве ориентира в отношении плотности антигена ИФР-1Р на CTCs больных метастатическими карциномами, подлежащими выявлению с помощью данного анализа.
Экспрессия ИФР-1Р на CTCs при метастатических карциномах: в 7,5 мл крови от 139 здоровых индивидуумов CTCs практически отсутствовали (0 CTCs у 135 и 1 CTC у 4). Для определения того, действительно ли ИФР-1Р может быть выявлен на CTCs у больных с метастатическими карциномами, были протестированы образцы крови от 50 больных. Из этих 50 больных 18 имели рак молочной железы, и в 28% случаев были выявлены CTCs, у 13 больных был колоректальный рак, и в 31% случаев были выявлены CTCs, у 3 больных был рак простаты, и CTCs были выявлены в 33% случаев, у 12 больных был рак легкого, и CTCs были выявлены в 8% случаев, но CTCs не были обнаружены ни у одного из 4 больных с раком яичника. Примеры выявленных CTCs показаны на фиг. 3. На чертеже показаны восемь кандидатов CTC. Случаи 1, 4, 5, 7 и 8 были классифицированы как CTCs, но лишь CTCs в ряду 1 и 4 были классифицированы как CTCs, экспрессирующие ИФР-1Р. Примечательно, что потенциальное окрашивание ИФР-1Р можно наблюдать в ряду 5 и 7, но оно не рассматривалось как достаточное для классификации в качестве ИФР-1Р-позитивных CTCs. В таблице 1 показано количество CTCs, выявленных у 11 больных с CTCs, количество CTCs, экспрессирующих ИФР-1Р, и доля CTCs, экспрессирующих ИФР-1Р. У 8 из 11 (91%) больных были выявлены экспрессирующие ИФР-1Р CTCs. Доля экспрессирующих ИФР-1Р CTCs, однако, сильно варьировала.
Таблица 1
  CTCs ИФР-1Р(+) CTCs % ИФР-1Р(+) CTCs
Молочной железы 180 47 26
  25 11 44
  5 1 20
  4 1 25
Колоректальный 6 1 17
  5 0 0
  4 0 0
  2 0 0
  1 1 100
Простаты 16 1 6
  2 1 50
Пример 2
Экспрессия ИФР-Р на CTCs в фазе 1 исследования по определению дозы антитела против ИФР-1Р
Исследование 1 представляло собой фазу 1 определения дозы исследования, разработанного для определения безопасности и переносимости полностью человеческого антитела против ИФР-1Р, как описано в патенте США No 7037498, у больных с солидными опухолями на поздней стадии. В этом исследовании лечение антителом против ИФР-1Р проводили на каждый 21 день (21-дневный цикл) в дозах от 3 до 20 мг/кг. Для оценки влияния лечения антителом против ИФР-1Р на количество CTCs и CTCs, экспрессирующих ИФР-1Р, у данных больных собирали образцы крови при скрининге на 1 день перед введением дозы и на 8 день каждого 21-дневного цикла лечения. Всякий раз, когда больной выбывал из исследования из-за прогрессирования заболевания, собирали один дополнительный образец. Были получены образцы крови от двадцати шести больных для определения количества CTC в ходе данного исследования.
У шестнадцати из двадцати шести больных (61%) имелись одна или более CTCs в определенный момент на протяжении исследования (перед введение дозы или во время лечения). У трех из шестнадцати больных с CTCs, выявленными в определенный момент на протяжении исследования, ИФР-1Р-позитивные CTCs не были обнаружены. В двух случаях в 7,5 мл крови была выявлена лишь одна CTC. Уровни CTCs и ИФР-1Р-позитивных CTCs откладывали на время, и наблюдалось несколько типов ответа на лечение антителом против ИФР-1Р. Четыре примера представлены на фиг. 4. На панели A показано количество CTC у больного, получившего однократную дозу 6 мг/кг антитела против ИФР-1Р. У этого больного количество CTCs и ИФР-1Р-позитивных CTCs снижалось на 8 день лечения, CTCs исчезали на 15 день и вновь появлялись перед началом цикла 2. На панели B показано количество CTC у больного, получившего однократную дозу 10 мг/кг антитела против ИФР-1Р. После небольшого снижения CTCs через 8 и 15 дней после лечения количество CTCs и ИФР-1Р-позитивных CTCs увеличивалось к моменту, когда больной был выведен из исследования. У этого больного наблюдалось развитие заболевания по данным сканирования CT. На панели C показано количество CTC у больного, получившего однократную дозу 20 мг/кг антитела против ИФР-1Р. Количество CTCs и ИФР-1Р-позитивных CTCs не изменялось, за исключением всплеска CTCs через 15 дней после введения дозы. На панели D показано количество CTC у больного, получившего однократную дозу 3 мг/кг антитела против ИФР-1Р, у которого почти все выявленные CTCs экспрессировали ИФР-1Р. Повышение CTCs было отмечено в момент, когда больной был выведен из исследования. Одна из возможных интерпретаций данных результатов заключается в том, что большая часть циркулирующих опухолевых клеток этих больных экспрессирует ИФР-1Р и что лечение антителами против ИФР-1Р, по-видимому, блокирует сигнал выживания, необходимый для сохранения CTCs. Альтернативно, действие антител против ИФР-1Р может производиться непосредственно на опухолевую массу, подавляя миграцию CTCs.
Несмотря на вариабельность, наблюдались снижение количества CTCs и ИФР-1Р-позитивных CTCs после введения дозы, а также восстановление количества циркулирующих клеток к концу цикла лечения. Повышение количества CTCs и ИФР-1Р-позитивных CTCs отмечалось также при дополнительных визитах после окончания исследования. Эти данные поддерживают значимость анализа CTC и CTC-ИФР-1Р для мониторинга биологического и клинического ответа на антитела против ИФР-1Р.
Пример 3
Экспрессия ИФР-1Р на CTCs в исследовании антитела против ИФР-1Р в сочетании с доцетакселом
Исследование 2 служило фазой 1b исследования по определению дозы полностью человеческого антитела против ИФР-1Р, как описано в патенте США No 7037498, в сочетании с доцетакселом (TAXOTERE) у больных с солидными опухолями на поздней стадии. Доцетаксел и антитело против ИФР-1Р вводили на 1 и 22 дни в дозах 75 мг/м2 и 0,1-10 мг/кг, соответственно. Были получены образцы крови от двадцати семи больных для определения количества CTCs, включая девятнадцать больных гормононезависимых раком простаты (HRPC). Образцы CTC собирали в каждом цикле в 1 день перед введением дозы и на 8 день.
У девятнадцати из двадцати семи больных (70%) имелись одна или более CTCs в определенный момент на протяжении исследования. Лишь у одного из девятнадцати больных с CTCs, выявленными в определенный момент исследования, не были обнаружены ИФР-1Р-позитивные CTCs. Интересно, что во всех 5 анализах данного больного CTCs выявлялись, а ИФР-1Р-позитивные CTCs не обнаруживались, что позволяет предположить, что сама опухоль у данного больного, возможно, не экспрессирует ИФР-1Р.
Снижение количества CTCs в ответ на лечение наблюдалось у большинства больных. Уровни CTCs и ИФР-1Р-позитивных CTCs откладывали на время, и наблюдалось несколько типов ответа на лечение антителом против ИФР-1Р. На фиг. 5 представлено четыре примера. На панели A показано количество CTCs и ИФР-1Р-позитивных CTCs у больного с гормононезависимым раком простаты, подвергнутого лечению 10 мг/кг антитела против ИФР-1Р и 75 мг/м2 доцетаксела (21-дневный цикл). После лечения общее количество CTCs снижалось, что отражает ответ на сочетанное лечение. Величины PSA, полученные у данного больного, подтвердили ответ на лечение. Кроме того, у данного больного приблизительно 50% CTCs были исходно ИФР-1Р-позитивными до лечения антителом против ИФР-1Р/доцетакселом; количество ИФР-1Р-позитивных CTCs быстро снижалось при лечении. Поскольку биологическое действие антитела против ИФР-1Р заключается в индукции подавления ИФР-1Р, эти результаты подтверждают потенциальное значение анализа CTC и CTC-ИФР-1Р для мониторинга и клинической, и биологической (биомаркерной) активности антител против ИФР-1Р. На панели B представлен больной со сходным снижением CTCs и ИФР-1Р-позитивных CTCs. На панелях C и D представлены данные по двум больным, у которых количество CTCs и ИФР-1Р-позитивных CTCs снижалось после введения каждой дозы, но каждый раз восстанавливалось. Обоих больных лечили низкими дозами антитела против ИФР-1Р (0,8 и 3 мг/кг, соответственно).
Больные HRPC, включенные в исследование 2, у которых при включении в исследование имелась, по меньшей мере, одна выявляемая ИФР-1Р-позитивная CTC, имели более высокий уровень PSA (n=10, медиана PSA 475 нг/мл) по сравнению с больными, имевшими негативные ИФР-1Р-CTC (n=8, медиана PSA 92 нг/мл). У двух больных оценка была невозможна из-за утраты образцов. Несмотря на кажущуюся большую тяжесть опухоли, доля больных, позитивных по ИФР-1Р-CTC при включении, отвечающих на сочетание доцетаксела и антитела против ИФР-1Р по критерию PSA, была выше (6 из 10) и в целом быстрее, чем среди ИФР-1Р-CTC-негативных больных (2 из 8), как показано в таблице 2:
Таблица 2
HRPC больные, отвечающие на лечение Исходный PSA (нг/мл) Исходные CTCs Исходные ИФР-1Р(+) CTCs Цикл лечения иcходного ответа PSA
1006 238 2 1 3rd
1008 471 4 1 12th
1014 9944 12 5 2nd
1019 617 44 19 3rd
1022 1639 6 2 1st
1025 807 160 37 1st
1003 13 0 0 6th
1011 131 0 0 12th
Из восьми больных HRPC, у которых не было выявляемых CTCs в начале исследования, шестеро не отвечали на лечение, и у троих из них действительно происходило увеличение количества CTCs и ИФР-1Р-позитивных CTCs во время прогрессии заболевания. Наконец, один больной HRPC, которого лечили доцетакселом и антителами против ИФР-1Р, с выявляемыми CTCs, но с отсутствием выявляемых ИФР-1Р-позитивных CTCs, не отвечал на сочетанное лечение. Снижение у него количества CTC также было краткосрочным (1 цикл).
В таблице 3 представлена сводка лучших ответов больных для больных HRPC в исследовании 2. Двое из восьми (25%) больных с неопределяемыми в 7,5 мл ИФР-1Р-позитивными CTCs перед началом лечения показали частичный ответ на лечение, в то время как шестеро из одиннадцати больных (55%) с ≥1 ИФР-1Р-позитивных CTCs в 7,5 мл показали частичный ответ. Эти результаты служат важным аргументом в поддержку точки зрения о том, что анализ CTC-ИФР-1Р можно было бы использовать для выявления больных, которые выиграли бы от лечения антителом против ИФР-1Р, а также для определения оптимальной дозы и определения длительности лечения.
Таблица 3
ИФР-1Р-позитивные циркулирующие опухолевые клетки и лучший ответ больных в исследовании 2
Больной Исходные ИФР-1Р(+) CTCs (n) Наилучший ответ
1001 2 PD
1005 2 SD
1006 1 PR
1008 1 PR
1012 31 PD
1013 4 PD
1014 5 PR
1019 19 PR
1021 4 PD
1022 2 PR
1025 37 PR
    Всего = 6 PR/11 больных
Больной Исходные ИФР-1Р(+) CTCs (n) Наилучший ответ
1002 0 SD
1003 0 PR
1010 0 PD
1011 0 PR
1015 0 SD
1016 0 PD
1018 0 SD
1020 0 SD
    Всего = 2 PR/8 больных
PD = прогрессирующее заболевание; SD = стабильное заболевание; PR = частичный ответ
Пример 4
Экспрессия ИФР-1Р на CTCs в исследовании сочетания антитела против ИФР-1Р с пацитакселом и карбоплатином
Исследование 3 представляло собой фазу 1b исследования полностью человеческого антитела против ИФР-1Р, как описано в патенте США No 7037498, в сочетании с пацитакселом (TAXOL) и карбоплатином (PARAPLATIN) у больных с солидными опухолями на поздней стадии. Дозы пацитаксела, карбоплатина и антитела против ИФР-1Р составляли 200 мг/м2, AUC 6 и 0,05-10 мг/кг, соответственно. Для определения количества CTCs были использованы образцы крови от сорока одного больного. Образцы крови собирали в каждом цикле на 1 день перед введением дозы и на 8 день.
У двадцати одного из сорока одного больного (51%) имелись одна или более CTCs в определенный момент на протяжении исследования, в то время как у десяти из сорока одного больного (24%) имелись одна или более CTCs перед введением первой дозы. У шестнадцати из сорока одного больного (39%) имелись одна или более ИФР-1Р-позитивных CTCs в определенный момент на протяжении исследования, в то время как у восьми из сорока одного больного (20%) имелись одна или более ИФР-1Р-позитивных CTCs перед введением первой дозы. У одного больного HRPC, включенного в исследование, имелось большое количество CTCs в начале исследования (71 CTCs и 15 ИФР-1Р-позитивных CTCs), которое снижалось в ответ на лечение (21 CTCs и 2 ИФР-1Р-позитивных CTCs на 21 день лечения).
Уровни CTCs и ИФР-1Р-позитивных CTCs откладывали против времени, и наблюдалось несколько типов ответа на лечение. На фиг. 6 представлено четыре примера. На панели A показаны данные для больного, который был введен в исследование с очень низким количеством CTCs. После 6 циклов лечения пацитакселом/карбоплатином и 0,05 мг/кг антитела против ИФР-1Р и 2 дополнительных циклов с 3 мг/кг антитела против ИФР-1Р больной перестал отвечать на лечение. Это отсутствие клинического ответа было связано с резким увеличением количества CTCs и ИФР-1Р-позитивных CTCs. Прогрессия заболевания у данного больного была подтверждена сканированием CT. На панели B представлены данные для больного со сходным типом увеличения CTCs и ИФР-1Р-позитивных CTCs в ходе исследования. На панелях C и D иллюстрированы двое больных с CTCs до начала лечения. Больные получали 1,5 и 6 мг/кг антитела против ИФР-1Р, соответственно. Количество ИФР-1Р-позитивных клеток, по-видимому, снижается (панель C) или остается низким (панель D) в период лечения больного антителом против ИФР-1Р. Эти данные дополнительно подтверждают потенциальное значение анализа CTCs и CTC-ИФР-1Р для мониторинга действия и развития устойчивости к лечению антителом против ИФР-1Р.
Хотя здесь были описаны некоторые в настоящее время предпочтительные осуществления изобретения, специалистам в области техники, к которой относится изобретение, должно быть вполне ясно, что могут быть произведены изменения и модификации описанных осуществлений без выхода за пределы сущности и объема изобретения. Соответственно подразумевается, что изобретение ограничивается только в той степени, которая определяется прилагаемой формулой изобретения и применимыми законодательными правилами.

Claims (12)

1. Способ предсказания эффективности терапии больного антагонистом ИФР-1Р, включающий стадии: а) получения биологического образца от больного; b) подготовки образца, где биологический образец смешивают с лигандом, который специфически взаимодействует с опухолевыми клетками для значительного исключения других компонентов образца; с) контактирования образца, по меньшей мере, с одним реагентом, который специфически связывается с эпителиальными клетками; d) контактирования образца с агентом, обладающим связывающей аффинностью к рецепторам инсулиноподобного ростового фактора (ИФР-1Р) на клетках; и е) анализа образца для определения присутствия опухолевых клеток, экспрессирующих ИФР-1Р, где лиганд представляет собой антитело, которое специфически связывается с молекулой адгезии эпителиальных клеток на опухолевой клетке, реагент представляет собой меченое FITC антитело, узнающее цитокератины, агент представляет собой меченое РЕ антитело, причем присутствие в образце опухолевых клеток, экспрессирующих ИФР-1Р, служит прогностическим фактором эффективности терапии больного антагонистом ИФР-1Р.
2. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию определения количества опухолевых клеток, экспрессирующих ИФР-1Р.
3. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию добавления к образцу специфичного для клетки красителя для возможности исключения из анализа остаточных безъядерных клеток и клеточных обломков.
4. Способ пo любому из пп.1-3, где меченые опухолевые клетки анализируют с помощью, по меньшей мере, одного способа, выбранного из группы, состоящей из мультипараметрической проточной цитометрии, иммунофлуоресцентной микроскопии, лазерной сканирующей цитометрии, анализа изображений на основе яркого поля, капиллярной волюмометрии, спектрального анализа изображений, клеточного анализа вручную, CELLSPOTTER анализа и автоматического анализа клеток.
5. Способ по любому из пп.1-3, где образец представляет собой иммуномагнитный образец, включающий биологический образец, смешанный с магнитными частицами, соединенными с лигандом, и дополнительно включающий стадию воздействия магнитного поля на иммуномагнитный образец, так что иммуномагнитный образец становится обогащенным суспензией опухолевых клеток.
6. Способ по п.5, где магнитные частицы являются коллоидными.
7. Способ по любому из пп.1-3, где терапия антагонистом ИФР-1Р включает антитело против ИФР-1Р.
8. Способ мониторинга эффективности терапии больного антагонистом ИФР-1Р, включающий стадии: а) получения первого биологического образца от больного; b) подготовки первого образца, где первый биологический образец смешивают с лигандом, который специфически взаимодействует с опухолевыми клетками, для существенного исключения других компонентов образца; с) контактирования первого образца, по меньшей мере, с одним реагентом, который специфически связывается с эпителиальными клетками; d) контактирования первого образца с агентом, обладающим связывающей аффинностью к рецепторам инсулиноподобного ростового фактора (ИФР-1Р) на клетках; е) анализа первого образца для определения присутствия и количества опухолевых клеток, экспрессирующих ИФР-1Р; f) введения больному в виде терапии антагониста ИФР-1Р; g) получения второго биологического образца от больного после введения в виде терапии антагониста ИФР-1Р; h) подготовки второй пробы из второго биологического образца, где второй биологический образец смешивают с лигандом, который специфически взаимодействует с опухолевыми клетками, и осуществления стадий с)-е) с вторым образцом; и i) сравнения количества опухолевых клеток, экспрессирующих ИФР-1Р, в первом образце с количеством опухолевых клеток, экспрессирующих ИФР-1Р, во втором образце, причем их меньшее количество во втором образце служит показателем эффективности терапии больного антагонистом ИФР-1Р, где лиганд представляет собой антитело, которое специфически связывается с молекулой адгезии эпителиальных клеток на опухолевой клетке, реагент представляет собой меченое FITC антитело, узнающее цитокератины, и где агент представляет собой меченое РЕ антитело.
9. Способ по п.8, где меченые опухолевые клетки анализируют с помощью, по меньшей мере, одного способа, выбранного из группы, состоящей из мультипараметрической проточной цитометрии, иммунофлуоресцентной микроскопии, лазерной сканирующей цитометрии, анализа изображений на основе яркого поля, капиллярной волюмометрии, спектрального анализа изображений, клеточного анализа вручную, CELLSPOTTER анализа и автоматического анализа клеток.
10. Способ по п.8, где образец представляет собой иммуномагнитный образец, включающий биологический образец, смешанный с магнитными частицами, соединенными с лигандом, и дополнительно включающий стадию воздействия магнитного поля на иммуномагнитный образец, так что иммуномагнитный образец становится обогащенным суспензией опухолевых клеток.
11. Способ по п.10, где магнитные частицы являются коллоидными.
12. Способ по любому из пп.8-11, где терапия антагонистом ИФР-1Р включает антитело против ИФР-1Р.
RU2008147415/15A 2006-06-02 2007-05-29 Анализ циркулирующих опухолевых клеток RU2429486C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US81081106P 2006-06-02 2006-06-02
US60/810,811 2006-06-02

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2008147415A RU2008147415A (ru) 2010-06-10
RU2429486C2 true RU2429486C2 (ru) 2011-09-20

Family

ID=38476880

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2008147415/15A RU2429486C2 (ru) 2006-06-02 2007-05-29 Анализ циркулирующих опухолевых клеток

Country Status (20)

Country Link
US (4) US8940493B2 (ru)
EP (1) EP2027470B1 (ru)
JP (1) JP4943504B2 (ru)
KR (3) KR20140052081A (ru)
CN (1) CN101600966B (ru)
AU (1) AU2007255110B8 (ru)
BR (1) BRPI0712225A8 (ru)
CA (1) CA2653745C (ru)
DK (1) DK2027470T3 (ru)
ES (1) ES2397971T3 (ru)
HK (1) HK1137509A1 (ru)
IL (1) IL195577A (ru)
MX (1) MX2008015425A (ru)
NZ (1) NZ573187A (ru)
PL (1) PL2027470T3 (ru)
PT (1) PT2027470E (ru)
RU (1) RU2429486C2 (ru)
SI (1) SI2027470T1 (ru)
WO (1) WO2007141626A1 (ru)
ZA (1) ZA200810203B (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2636352C2 (ru) * 2012-10-26 2017-11-22 Флуидигм Кэнада Инк. Способ и система для клеточного анализа с помощью массовой цитометрии
RU2678135C1 (ru) * 2014-02-05 2019-01-23 Фуджиребио Диагностикс Аб Композиция и способ для детектирования злокачественного неопластического заболевания

Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5055284B2 (ja) 2005-09-20 2012-10-24 オーエスアイ・フアーマシユーテイカルズ・エル・エル・シー インシュリン様成長因子−１受容体キナーゼ阻害剤に対する抗癌応答を予測する生物学的マーカー
BRPI0712225A8 (pt) 2006-06-02 2019-01-22 Pfizer Producs Inc métodos para prever e monitorar a eficácia da terapia antagonista de igf-1r
PE20090368A1 (es) 2007-06-19 2009-04-28 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpos anti-igf
AU2008307634A1 (en) 2007-10-03 2009-04-09 Osi Pharmaceuticals, Inc. Biological markers predictive of anti-cancer response to insulin-like growth factor-1 receptor kinase inhibitors
AU2008307579A1 (en) 2007-10-03 2009-04-09 Osi Pharmaceuticals, Inc. Biological markers predictive of anti-cancer response to insulin-like growth factor-1 receptor kinase inhibitors
US20090258365A1 (en) 2008-03-25 2009-10-15 Terstappen Leon W M M METHOD FOR DETECTING IGF1R/Chr 15 in CIRCULATING TUMOR CELLS USING FISH
HUE026374T2 (en) 2008-12-12 2016-05-30 Boehringer Ingelheim Int Anti-IGF antibody
CN102782498A (zh) * 2009-10-21 2012-11-14 斯克里普斯研究所 用非稀有细胞检测稀有细胞的方法
WO2011083391A2 (en) * 2010-01-05 2011-07-14 Pfizer Inc. Biomarkers for anti-igf-ir cancer therapy
BR112013009008A2 (pt) * 2010-10-14 2017-10-17 Veridex Llc métodos e kits para a detecção de células circulantes de tumor em pacientes pancreáticos com o uso de reagentes de detecção de captura e de coquetel poliespecíficos
AU2012209329A1 (en) * 2011-01-24 2013-09-12 Epic Sciences, Inc. Methods for obtaining single cells and applications of single cell omics
WO2012149014A1 (en) 2011-04-25 2012-11-01 OSI Pharmaceuticals, LLC Use of emt gene signatures in cancer drug discovery, diagnostics, and treatment
US9618515B2 (en) * 2011-07-21 2017-04-11 Janssen Diagnostics, Llc Assay to capture and detect circulating multiple myeloma cells from blood
WO2013036620A1 (en) * 2011-09-06 2013-03-14 Becton, Dickinson And Company Methods and compositions for cytometric detection of rare target cells in a sample
GB2519906B (en) 2012-08-13 2017-02-08 Univ California Methods for detecting target nucleic acids in sample lysate droplets
RU2015112024A (ru) * 2012-10-05 2016-11-27 Дженентек, Инк. Способы диагностики и лечения воспалительного заболевания кишечника
US9396532B2 (en) * 2012-11-15 2016-07-19 Siemens Healthcare Diagnostics, Inc. Cell feature-based automatic circulating tumor cell detection
GB2516196B (en) 2013-01-25 2015-09-09 Xcell Biosciences Inc Methods, compositions, kits, and systems for selective enrichment of target cells
US20150233932A1 (en) * 2013-02-19 2015-08-20 Ching-Ping Tseng Methods, Systems, and Compositions for Enrichment of Rare Cells
US20140255413A1 (en) 2013-03-07 2014-09-11 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy for neoplasia treatment
EP3967770B1 (en) * 2013-10-21 2023-12-06 The General Hospital Corporation Methods relating to circulating tumor cell clusters and the treatment of cancer
CN103630440A (zh) * 2013-11-28 2014-03-12 武汉大学 一种循环肿瘤细胞的富集方法
EA201691496A1 (ru) 2014-01-27 2016-12-30 Эпик Сайенсиз, Инк. Диагностика биомаркеров рака предстательной железы с помощью циркулирующих опухолевых клеток
EA201691682A1 (ru) 2014-02-21 2017-02-28 Эпик Сайенсиз, Инк. Способы анализирования редких циркулирующих в крови клеток
CN103940997B (zh) * 2014-03-21 2017-01-04 上海柏慧康生物科技有限公司 一种乳腺癌循环肿瘤细胞检测系统及试剂盒
KR101656037B1 (ko) * 2014-04-30 2016-09-08 울산과학기술원 희소 세포 분리장치, 희소 세포 분리 방법 및 이를 이용한 희소 세포 검출 방법
US10697007B2 (en) 2014-06-27 2020-06-30 The Regents Of The University Of California PCR-activated sorting (PAS)
CN104345052B (zh) * 2014-09-29 2017-10-20 南通市肿瘤医院 一种荧光负染法检测活细胞的方法
EP3209419A4 (en) 2014-10-22 2018-10-03 The Regents of The University of California High definition microdroplet printer
CN115011670A (zh) 2015-02-04 2022-09-06 加利福尼亚大学董事会 通过在离散实体中条形码化对核酸进行测序
JP6746845B2 (ja) * 2015-04-22 2020-08-26 イミューノメディクス、インコーポレイテッドＩｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ， Ｉｎｃ． 循環ｔｒｏｐ−２陽性癌細胞の単離、検出、診断及び／または特徴付け
KR101701618B1 (ko) 2015-06-23 2017-02-13 국립암센터 전도성 고분자를 이용한 세포 유리 ｄｎａ 검출용 구조체 및 이의 용도
RU2616532C1 (ru) * 2015-12-28 2017-04-17 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ оценки чувствительности опухоли к проводимой химиотерапии больных местно-распространенным раком молочной железы
KR102130872B1 (ko) 2016-04-27 2020-07-06 주식회사 엘지화학 고체 시료의 수분 측정 장치, 고체 시료 수분 함량 측정 방법 및 이미드화율 분석 방법
US11142791B2 (en) 2016-08-10 2021-10-12 The Regents Of The University Of California Combined multiple-displacement amplification and PCR in an emulsion microdroplet
AU2017382905A1 (en) 2016-12-21 2019-07-04 The Regents Of The University Of California Single cell genomic sequencing using hydrogel based droplets
CN110430769B (zh) 2017-04-05 2023-02-14 菲利普莫里斯生产公司 与电感加热式气溶胶生成装置或系统一起使用的感受器
US11576424B2 (en) 2017-04-05 2023-02-14 Altria Client Services Llc Susceptor for use with an inductively heated aerosol-generating device or system
US10501739B2 (en) 2017-10-18 2019-12-10 Mission Bio, Inc. Method, systems and apparatus for single cell analysis
EP3540631A1 (de) * 2018-03-15 2019-09-18 Siemens Healthcare GmbH In-vitro-verfahren zum markierungsfreien bestimmen eines zelltyps einer weissen blutzelle
CN109406245A (zh) * 2018-09-12 2019-03-01 中国辐射防护研究院 一种电子线照射对小鼠igf相关蛋白表达影响的检测方法
AU2020280104A1 (en) 2019-05-22 2022-01-20 Mission Bio, Inc. Method and apparatus for simultaneous targeted sequencing of DNA, RNA and protein
WO2021003255A1 (en) 2019-07-01 2021-01-07 Mission Bio Method and apparatus to normalize quantitative readouts in single-cell experiments

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006008639A1 (en) * 2004-07-16 2006-01-26 Pfizer Products Inc. Combination treatment for non-hematologic malignancies using an anti-igf-1r antibody

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4551435A (en) 1983-08-24 1985-11-05 Immunicon, Inc. Selective removal of immunospecifically recognizable substances from solution
US4795698A (en) 1985-10-04 1989-01-03 Immunicon Corporation Magnetic-polymer particles
US4925788A (en) 1986-10-24 1990-05-15 Immunicon Corporation Immunoassay system and procedure based on precipitin-like interaction between immune complex and Clq or other non-immunospecific factor
US5108933A (en) 1988-09-16 1992-04-28 Immunicon Corporation Manipulation of colloids for facilitating magnetic separations
US5200084A (en) 1990-09-26 1993-04-06 Immunicon Corporation Apparatus and methods for magnetic separation
CA2251186A1 (en) 1996-04-05 1997-10-16 The Johns Hopkins University A method of enriching rare cells
US20020172987A1 (en) 1998-02-12 2002-11-21 Terstappen Leon W.M.M. Methods and reagents for the rapid and efficient isolation of circulating cancer cells
US20010018192A1 (en) 1998-02-12 2001-08-30 Terstappen Leon W.M.M. Labeled cells for use as an internal functional control in rare cell detection assays
KR100399475B1 (ko) 1998-02-12 2003-09-29 보드 오브 리전츠, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 순환 중인 암세포의 신속하고 효과적인 분리 방법 및 이를위한 제제
GB2361996B (en) 1998-10-29 2004-05-12 Cell Works Inc Multiple marker characterization of single cells
WO2000047998A1 (en) 1999-02-10 2000-08-17 Cell Works Inc. Class characterization of circulating cancer cells isolated from body fluids and methods of use
JP2001041959A (ja) * 1999-05-24 2001-02-16 Toray Ind Inc 癌細胞検出システムおよび癌細胞検出キット
EP1210106A2 (en) 1999-08-18 2002-06-05 The General Hospital Corporation Methods, compositions and kits for promoting recovery from damage to the central nervous system
US7537938B2 (en) 2000-04-28 2009-05-26 Monogram Biosciences, Inc. Biomarker detection in circulating cells
CA2369183A1 (en) * 2001-01-23 2002-07-23 Amsterdam Support Diagnostics B.V. Means and methods for treatment evaluation
KR20030080002A (ko) * 2001-02-16 2003-10-10 이뮤니베스트 코포레이션 순환 암 세포를 신속하고 효과적으로 분리하기 위한 방법및 시약
ATE401574T1 (de) * 2001-08-23 2008-08-15 Immunivest Corp Analyse zirkulierender tumorzellen, fragmente und trümmer
US7863012B2 (en) 2004-02-17 2011-01-04 Veridex, Llc Analysis of circulating tumor cells, fragments, and debris
US6670142B2 (en) * 2001-10-26 2003-12-30 The Regents Of The University Of California Method for screening combinatorial bead library, capturing cells from body fluids, and ligands for cancer cells
DE60312639T2 (de) * 2002-01-18 2007-11-29 Pierre Fabre Médicament Antikörper gegen igf-ir und ihre verwendungen
US20040229294A1 (en) * 2002-05-21 2004-11-18 Po-Ying Chan-Hui ErbB surface receptor complexes as biomarkers
WO2005016967A2 (en) * 2003-08-13 2005-02-24 Pfizer Products Inc. Modified human igf-1r antibodies
US20060045881A1 (en) * 2004-08-26 2006-03-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-cancer vaccines
WO2006041453A1 (en) 2004-09-30 2006-04-20 Immunivest Corporation Circulating tumor cells (ctc’s): apoptotic assessment in prostate cancer patients
WO2006104474A2 (en) 2005-03-14 2006-10-05 Immunivest Corporation A method for predicting progression free and overall survival at each follow-up time point during therapy of metastatic breast cancer patients using circulating tumor cells
US20070037173A1 (en) 2005-08-12 2007-02-15 Allard Jeffrey W Circulating tumor cells (CTC's): early assessment of time to progression, survival and response to therapy in metastatic cancer patients
BRPI0712225A8 (pt) 2006-06-02 2019-01-22 Pfizer Producs Inc métodos para prever e monitorar a eficácia da terapia antagonista de igf-1r
US9121801B2 (en) * 2007-10-24 2015-09-01 Biomarker Strategies, Llc Methods and devices for cellular analysis

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006008639A1 (en) * 2004-07-16 2006-01-26 Pfizer Products Inc. Combination treatment for non-hematologic malignancies using an anti-igf-1r antibody

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MORENO J G ET AL: "Circulating tumor cells predict survival in patients with metastatic prostate cancer" UROLOGY, BELLE MEAD, NJ, US, vol. 65, no. 4, April 2005 (2005-04), pages 713-718. LARSON CHRISTOPHER J ET AL: "Apoptosis of circulating tumor cells in prostate cancer patients" CYTOMETRY, vol. 62A, no. 1, November 2004, pages 46-53. KAGAN M ET AL: "A SAMPLE PREPARATION AND ANALYSIS SYSTEM FOR IDENTIFICATION OF CIRCULATING TUMOR CELLS" JOURNAL OF CLINICAL LIGAND ASSAY, CLINICAL LIGAND ASSAY SOCIETY, WAYNE, MI, US, vol. 25, no. 1, 21 March 2002, pages 104-110. HAYES D F ET AL: "Monitoring expression of HER-2 on circulating epithelial cells in patients with advanced breast cancer." INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY NOV 2002, vol. 21, no. 5, November 2002 (2002-11), pages 1111-1117. RAO CHANDRA ET AL: "AUTOMATED SYSTEM TO ENUMERATE CIRCULATING TUMOR CELLS IN BLOOD" PROCEEDINGS OF THE ANNUAL MEETING OF THE AMERICAN ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH, NEW YORK, NY, US, vol. 45, 27 March 2004 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2636352C2 (ru) * 2012-10-26 2017-11-22 Флуидигм Кэнада Инк. Способ и система для клеточного анализа с помощью массовой цитометрии
RU2678135C1 (ru) * 2014-02-05 2019-01-23 Фуджиребио Диагностикс Аб Композиция и способ для детектирования злокачественного неопластического заболевания

Also Published As

Publication number Publication date
WO2007141626A8 (en) 2009-01-08
CN101600966B (zh) 2014-07-02
PT2027470E (pt) 2013-01-28
US8940493B2 (en) 2015-01-27
CN101600966A (zh) 2009-12-09
BRPI0712225A8 (pt) 2019-01-22
KR20140052081A (ko) 2014-05-02
US20100028915A1 (en) 2010-02-04
NZ573187A (en) 2011-11-25
ES2397971T3 (es) 2013-03-12
JP2009539097A (ja) 2009-11-12
WO2007141626A1 (en) 2007-12-13
US20150177252A1 (en) 2015-06-25
BRPI0712225A2 (pt) 2012-07-24
AU2007255110B8 (en) 2014-04-10
JP4943504B2 (ja) 2012-05-30
PL2027470T3 (pl) 2013-03-29
IL195577A (en) 2012-12-31
MX2008015425A (es) 2008-12-12
CA2653745A1 (en) 2007-12-13
US20200191793A1 (en) 2020-06-18
DK2027470T3 (da) 2013-02-04
AU2007255110A8 (en) 2014-04-10
IL195577A0 (en) 2009-09-01
US20180011103A1 (en) 2018-01-11
RU2008147415A (ru) 2010-06-10
EP2027470B1 (en) 2012-11-21
CA2653745C (en) 2013-11-19
SI2027470T1 (sl) 2013-01-31
HK1137509A1 (en) 2010-07-30
AU2007255110A1 (en) 2007-12-13
AU2007255110B2 (en) 2014-03-20
KR20130091788A (ko) 2013-08-19
KR101467136B1 (ko) 2014-12-01
ZA200810203B (en) 2020-05-27
KR20090023423A (ko) 2009-03-04
EP2027470A1 (en) 2009-02-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2429486C2 (ru) Анализ циркулирующих опухолевых клеток
JP4798801B2 (ja) 循環する癌細胞におけるＨｅｒ−２／ｎｅｕタンパク質のレベルの上昇の検出および処置
Ma et al. Enriched CD44+/CD24− population drives the aggressive phenotypes presented in triple-negative breast cancer (TNBC)
Cabioglu et al. Chemokine receptor CXCR4 expression in breast cancer as a potential predictive marker of isolated tumor cells in bone marrow
Carney et al. HER-2 therapy. HER-2/neu diagnostics in breast cancer
Mascaux et al. EGFR protein expression in non–small cell lung cancer predicts response to an EGFR tyrosine kinase inhibitor—A novel antibody for immunohistochemistry or AQUA technology
AU632469B2 (en) A method for early detection of lung cancer
US8377648B2 (en) Autoimmune regulation of prostate cancer by annexin A3
Potti et al. Immunohistochemical detection of HER-2/neu, c-kit (CD117) and vascular endothelial growth factor (VEGF) overexpression in soft tissue sarcomas
Ryu et al. Impact of serum HER2 levels on survival and its correlation with clinicopathological parameters in women with breast cancer
Słodkowska et al. Digital pathology in personalized cancer therapy
KR20240033068A (ko) 순환성 암 관련 대식세포 유사 세포(caml)의 변화를 이용한 암 치료 반응의 예측 및/또는 모니터링 방법
Lee et al. The predictive value of serum HER2/neu for response to anthracycline-based and trastuzumab-based neoadjuvant chemotherapy
Andergassen et al. Detection and characterisation of disseminated tumour cells in bone marrow of breast cancer patients by immunostaining of Her-2 and MUC-1 in combination with Thomsen-Friedenreich (CD176)
EP2259059A1 (en) Means and methods for ovarian cancer prognosis
JP2023177246A (ja) 乳がん患者の予後を予測する方法
WO2009081795A1 (ja) 肝細胞癌マーカー及び肝細胞癌の検査方法
JPWO2018123999A1 (ja) 免疫チェックポイント阻害剤の投与対象となる個体の選択方法

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20200530