RU2009134940A

RU2009134940A - Снижение содержания эндотоксина в полисиаловых кислотах

Info

Publication number: RU2009134940A
Application number: RU2009134940/13A
Authority: RU
Inventors: Санжай ДЖАЙН (GB); Санжай ДЖАЙН; Питер ЛАЙНГ (GB); Питер ЛАЙНГ; Грегори ГРЕГОРИАДИС (GB); Грегори ГРЕГОРИАДИС
Original assignee: Липоксен Текнолоджиз Лимитед (Gb); Липоксен Текнолоджиз Лимитед
Priority date: 2007-02-28
Filing date: 2008-02-28
Publication date: 2011-04-10
Also published as: US20160096905A1; WO2008104811A1; EP2115010A1; US20130172537A1; EP2409994A2; DK2115010T3; EP2409994A3; PL2115010T3; JP2013216900A; US9212232B2; EP2409995A2; PT2115010E; JP2010520320A; CN101646693A; ES2375314T3; US10301396B2; JP5677512B2; EP2115010B1; US20110159130A1; CN101646693B

Abstract

1. Способ снижения содержания эндотоксина в образце, содержащем полисиаловую кислоту и эндотоксин, включающий следующие стадии: ! (i) добавление к образцу основания, имеющего pКа по меньшей мере 12, чтобы получить основный раствор, имеющий рН по меньшей мере 12; инкубацию раствора в течение предварительно определенного времени при предварительно определенной температуре; и ! (ii) извлечение полисиаловой кислоты, имеющей сниженное содержание эндотоксина. ! 2. Способ по п.1, где основание имеет pКа по меньшей мере 13, предпочтительно по меньшей мере 14. ! 3. Способ по п.1 или 2, где pH указанного основного раствора составляет по меньшей мере 13. ! 4. Способ по п.1, где основанием является NaOH, КОН, Са(ОН)2 или LiOH. ! 5. Способ по п.4, где основанием является 2н. NaOH. ! 6. Способ по п.1, где указанное предварительно определенное время находится в пределах от 5 мин до 24 ч, предпочтительно от 30 мин до 6 ч, и где предварительно определенная температура находится в пределах от 0 до 60°C, предпочтительно от 2 до 40°C. ! 7. Способ по п.1, в котором стадия (ii) включает нижеуказанные последовательные подстадии: ! (iii) пропускание образца через анионообменную колонку, в ходе чего полисиаловая кислота абсорбируется на ионообменной смоле; ! (iv) промывание колонки с помощью одного промывочного буфера, в результате чего полисиаловая кислота остается абсорбированной на ионообменной смоле; и ! (v) элюирование полисиаловой кислоты с колонки с помощью элюирующего буфера с тем, чтобы получить конечный раствор полисиаловой кислоты, имеющий сниженное содержание эндотоксина. ! 8. Способ по п.7, где образец после стадии (i) нейтрализуют перед началом стадии (ii). ! 9. Способ по п.7 или 8,

Claims

1. Способ снижения содержания эндотоксина в образце, содержащем полисиаловую кислоту и эндотоксин, включающий следующие стадии:

(i) добавление к образцу основания, имеющего pКа по меньшей мере 12, чтобы получить основный раствор, имеющий рН по меньшей мере 12; инкубацию раствора в течение предварительно определенного времени при предварительно определенной температуре; и

(ii) извлечение полисиаловой кислоты, имеющей сниженное содержание эндотоксина.

2. Способ по п.1, где основание имеет pКа по меньшей мере 13, предпочтительно по меньшей мере 14.

3. Способ по п.1 или 2, где pH указанного основного раствора составляет по меньшей мере 13.

4. Способ по п.1, где основанием является NaOH, КОН, Са(ОН)₂ или LiOH.

5. Способ по п.4, где основанием является 2н. NaOH.

6. Способ по п.1, где указанное предварительно определенное время находится в пределах от 5 мин до 24 ч, предпочтительно от 30 мин до 6 ч, и где предварительно определенная температура находится в пределах от 0 до 60°C, предпочтительно от 2 до 40°C.

7. Способ по п.1, в котором стадия (ii) включает нижеуказанные последовательные подстадии:

(iii) пропускание образца через анионообменную колонку, в ходе чего полисиаловая кислота абсорбируется на ионообменной смоле;

(iv) промывание колонки с помощью одного промывочного буфера, в результате чего полисиаловая кислота остается абсорбированной на ионообменной смоле; и

(v) элюирование полисиаловой кислоты с колонки с помощью элюирующего буфера с тем, чтобы получить конечный раствор полисиаловой кислоты, имеющий сниженное содержание эндотоксина.

8. Способ по п.7, где образец после стадии (i) нейтрализуют перед началом стадии (ii).

9. Способ по п.7 или 8, где на стадии (iv) колонку промывают на первой стадии с помощью первого промывочного буфера с низкой ионной силой с тем, чтобы элюировать с колонки эндотоксин, и где элюирующий буфер, используемый на стадии (iv), имеет относительно более высокую ионную силу.

10. Способ по п.9, где указанный промывочный буфер и/или указанный элюирующий буфер содержит летучее основание, предпочтительно триэтаноламин.

11. Способ по п.8, где второй промывочный буфер включает NaCl в концентрации по меньшей мере 0,2 М.

12. Способ по п.7, где на стадии (iv) колонку промывают более чем один раз.

13. Способ по п.7, где стадии (i) и от (iii) до (v) повторяют над конечным раствором.

14. Способ по п.1, включающий по меньшей мере одну дополнительную стадию, в которой уровень эндотоксина в полисиаловой кислоте снижается в ходе очистки, которую проводят перед стадией (i), или между стадиями (i) и (ii), или после стадии (ii), и которая представляет собой ионообменную хроматографию, или хроматографию гидрофобных взаимодействий, или аффинную хроматографию, или эксклюзионную хроматографию или их комбинации.

15. Способ по п.14, где перед стадией (i) проводят хроматографию гидрофобных взаимодействий.

16. Способ по п.1, где образец PSA перед стадией (i), или между стадиями (i) и (ii), или после стадии (ii) инкубируют с поверхностно-активным веществом, хелатирующим реагентом, органическим растворителем, окислителем или пероксидазой.

17. Способ по п.1, включающий предварительную стадию, в ходе которой культивируют E.coli с получением культурального бульона, содержащего PSA и эндотоксин, возможно включающий промежуточные стадии по удалению белка, липидов, нуклеиновых кислот и/или питательных веществ, для получения указанного образца.

18. Способ по п.1, где содержание эндотоксина в PSA в конечном растворе не превышает 25 ЭЕ/мг PSA согласно измерениям с помощью теста LAL.

19. Образец культурального бульона, имеющий сниженное содержание эндотоксина, которое можно достичь способом любому из пп.1-18.

20. Образец полисиаловой кислоты (PSA), имеющий содержание эндотоксина, приемлемое для введения человеку или животным, предпочтительно не более чем 25 ЭЕ/мг PSA, согласно измерениям с помощью теста LAL.

21. Образец по п.20, имеющий содержание эндотоксина не более чем 5 ЭЕ/мг PSA или менее.

22. Образец по п.20 или 21, в котором PSA представляет собой поли(2,8-связанную сиаловую кислоту), поли(2,9-связанную сиаловую кислоту) или чередующуюся 2,8-2,9-связанную полисиаловую кислоту, предпочтительно поли(2,8-связанную сиаловую кислоту).

23. Образец по п.22, где PSA представляет собой коломиновую кислоту (СА) или окисленное, восстановленное, аминированное и/или гидразидное ее производное.