JPH06245786A - コロミン酸の精製方法 - Google Patents
コロミン酸の精製方法Info
- Publication number
- JPH06245786A JPH06245786A JP5032901A JP3290193A JPH06245786A JP H06245786 A JPH06245786 A JP H06245786A JP 5032901 A JP5032901 A JP 5032901A JP 3290193 A JP3290193 A JP 3290193A JP H06245786 A JPH06245786 A JP H06245786A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- colominic acid
- acid
- lectin
- colominic
- solution containing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 大腸菌を利用して得られたコロミン酸を含有
する原料液中から、高い収率で、かつ短時間でコロミン
酸を精製する方法を提供すること。 【構成】 大腸菌により生産されたコロミン酸を含有す
る原料液を、レクチンを固定相とするアフィニティカラ
ムに通液し、コロミン酸を分離精製する。レクチンはコ
ロミン酸に対して大きい結合能を持ち、実施例では純度
95％のコロミン酸が得られた。
する原料液中から、高い収率で、かつ短時間でコロミン
酸を精製する方法を提供すること。 【構成】 大腸菌により生産されたコロミン酸を含有す
る原料液を、レクチンを固定相とするアフィニティカラ
ムに通液し、コロミン酸を分離精製する。レクチンはコ
ロミン酸に対して大きい結合能を持ち、実施例では純度
95％のコロミン酸が得られた。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はコロミン酸の精製方法に
関するものである。
関するものである。
【０００２】
【従来の技術】コロミン酸は１９５７年にバリー等によ
り発見された物質で、シアル酸（Ｎ−アセチルノイラミ
ン酸）を構成単位とした分子量１万程度の高分子ホモポ
リマーである。このコロミン酸は多くの生理的機能を有
するため、医薬品や化粧品の原料として重要である。
り発見された物質で、シアル酸（Ｎ−アセチルノイラミ
ン酸）を構成単位とした分子量１万程度の高分子ホモポ
リマーである。このコロミン酸は多くの生理的機能を有
するため、医薬品や化粧品の原料として重要である。
【０００３】一般に、シアル酸は動物界に広く存在する
物質であり、生体液中に多く含まれて生理的に機能して
いる。この化合物の供給源として従来は牛の初乳が用い
られてきたが、供給が不安定であるという難点がある。
そこで最近では大腸菌等の微生物を利用してコロミン酸
を得る方法が研究されており、例えば特開平1-144989号
公報などにより生産に適した菌種が提案されている。
物質であり、生体液中に多く含まれて生理的に機能して
いる。この化合物の供給源として従来は牛の初乳が用い
られてきたが、供給が不安定であるという難点がある。
そこで最近では大腸菌等の微生物を利用してコロミン酸
を得る方法が研究されており、例えば特開平1-144989号
公報などにより生産に適した菌種が提案されている。
【０００４】このように微生物を利用してコロミン酸を
得る場合には、イオン交換樹脂を用いて精製するのが普
通である。ところがそのためにはコロミン酸をイオン交
換樹脂に吸着させ、水洗後ギ酸ソーダで段階的に溶出さ
せる工程を２回以上繰り返す必要があり、膨大な精製時
間がかかるうえ、コロミン酸の精製収率が40〜50％程度
と低くなる欠点があった。
得る場合には、イオン交換樹脂を用いて精製するのが普
通である。ところがそのためにはコロミン酸をイオン交
換樹脂に吸着させ、水洗後ギ酸ソーダで段階的に溶出さ
せる工程を２回以上繰り返す必要があり、膨大な精製時
間がかかるうえ、コロミン酸の精製収率が40〜50％程度
と低くなる欠点があった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明はこのような従
来の問題点を解決して、大腸菌を利用して得られたコロ
ミン酸を含有する原料液中から、短時間でかつ高い収率
でコロミン酸を精製することができるコロミン酸の精製
方法を提供するために完成されたものである。
来の問題点を解決して、大腸菌を利用して得られたコロ
ミン酸を含有する原料液中から、短時間でかつ高い収率
でコロミン酸を精製することができるコロミン酸の精製
方法を提供するために完成されたものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するた
めになされた本発明は、大腸菌により生産されたコロミ
ン酸を含有する原料液を、レクチンを固定相とするアフ
ィニティ分離により精製処理してコロミン酸を得ること
を特徴とするものである。
めになされた本発明は、大腸菌により生産されたコロミ
ン酸を含有する原料液を、レクチンを固定相とするアフ
ィニティ分離により精製処理してコロミン酸を得ること
を特徴とするものである。
【０００７】本発明においては、まず従来と同様に大腸
菌を利用してコロミン酸を含有する培養液を製造し、こ
れをレクチンを固定相とするアフィニティカラムを利用
して分離する。レクチンは動植物あるいは微生物中に見
いだされる糖結合性の蛋白質であり、小麦胚芽レクチ
ン、ニホンニワトコレクチン等のシアル酸に親和性を有
するレクチンを固定相とする。小麦胚芽レクチンは小麦
胚芽より調製した連鎖を持たない蛋白質であり、シアル
酸が密になっている構造を認識する。その分子量は約36
000 で、分子量約18000 のサブユニット２個からなり、
３個のＮ−アセチルグルコサミン結合部位を有してい
る。そしてシアル酸（Ｎ−アセチルノイラミン酸）はこ
のレクチンへの結合能が高いものである。また、ニホン
ニワトコレクチンはニホンニワトの小枝より調製された
糖蛋白質であり、１分子当り２つの糖結合部位を持ち、
やはりシアル酸に対して高い結合能を持っている。これ
らシアル酸結合性を有するレクチンを固定相としたアフ
ィニティカラムによる精製は、シアル酸ポリマーである
コロミン酸の精製にも有効であった。
菌を利用してコロミン酸を含有する培養液を製造し、こ
れをレクチンを固定相とするアフィニティカラムを利用
して分離する。レクチンは動植物あるいは微生物中に見
いだされる糖結合性の蛋白質であり、小麦胚芽レクチ
ン、ニホンニワトコレクチン等のシアル酸に親和性を有
するレクチンを固定相とする。小麦胚芽レクチンは小麦
胚芽より調製した連鎖を持たない蛋白質であり、シアル
酸が密になっている構造を認識する。その分子量は約36
000 で、分子量約18000 のサブユニット２個からなり、
３個のＮ−アセチルグルコサミン結合部位を有してい
る。そしてシアル酸（Ｎ−アセチルノイラミン酸）はこ
のレクチンへの結合能が高いものである。また、ニホン
ニワトコレクチンはニホンニワトの小枝より調製された
糖蛋白質であり、１分子当り２つの糖結合部位を持ち、
やはりシアル酸に対して高い結合能を持っている。これ
らシアル酸結合性を有するレクチンを固定相としたアフ
ィニティカラムによる精製は、シアル酸ポリマーである
コロミン酸の精製にも有効であった。
【０００８】このため、これらのレクチンを固定相とす
るアフィニティカラムにコロミン酸を含有する原料液を
通液すると、アフィニティカラムのレクチンにコロミン
酸のみが選択的に吸着され、原料液中の夾雑物は吸着さ
れない。次に洗浄液を通液すると夾雑物等はアフィニテ
ィカラムから流出し、コロミン酸のみが残る。そこで解
離液をアフィニティカラムに通液すれば、コロミン酸は
レクチンから解離し、純度の高いコロミン酸を得ること
ができる。
るアフィニティカラムにコロミン酸を含有する原料液を
通液すると、アフィニティカラムのレクチンにコロミン
酸のみが選択的に吸着され、原料液中の夾雑物は吸着さ
れない。次に洗浄液を通液すると夾雑物等はアフィニテ
ィカラムから流出し、コロミン酸のみが残る。そこで解
離液をアフィニティカラムに通液すれば、コロミン酸は
レクチンから解離し、純度の高いコロミン酸を得ること
ができる。
【０００９】
【作用】本発明においては上記したように、大腸菌を利
用して得られたコロミン酸を含有する培養液を、レクチ
ンを固定相とするアフィニティカラムに通液して分離す
るので、従来のコロミン酸をイオン交換樹脂に吸着さ
せ、水洗後ギ酸ソーダで段階的に溶出させる工程を２回
以上繰り返す方法に比較し、精製時間を極めて短くする
ことができる。また次の実施例に示すように、従来法に
よる場合よりもはるかに高い収率でコロミン酸を得るこ
とができる。
用して得られたコロミン酸を含有する培養液を、レクチ
ンを固定相とするアフィニティカラムに通液して分離す
るので、従来のコロミン酸をイオン交換樹脂に吸着さ
せ、水洗後ギ酸ソーダで段階的に溶出させる工程を２回
以上繰り返す方法に比較し、精製時間を極めて短くする
ことができる。また次の実施例に示すように、従来法に
よる場合よりもはるかに高い収率でコロミン酸を得るこ
とができる。
【００１０】
【実施例】以下に本発明の実施例を示す。大腸菌の培養
液から菌体を濾過により除去し、コロミン酸を含有する
培養液を得た。一方、米国クロマトケム社製のシリカゲ
ルを基材とする高速アフィニティカラムを準備し、小麦
胚芽レクチンをその固定相とした。固定化反応は以下の
ように行った。小麦胚芽レクチンを固定化用緩衝液であ
る0.2Mクエン酸ナトリウム(pH5.5) で溶解し、10mg/mL
の濃度に調整した。次にアルデヒド活性化担体を入れて
混合した後、水素化シアノホウ酸ナトリウムを最終濃度
10mg/mL で入れ、１時間反応させてゲルへの固定化を終
了し、カラム内に充填した。上記のコロミン酸を1g〜L
の濃度で含有する培養液1Lをこのアフィニティカラムに
通液し、20mMリン酸緩衝液(pH7.6) で洗浄した後、0.1M
酢酸ナトリウム(pH4.5) を通液することによりコロミン
酸を溶出させ、回収した。これをエタノールで再結し、
結晶コロミン酸を得た。得られたコロミン酸量を過ヨウ
素酸レソルシール法で測定した結果、0.83g のコロミン
酸を回収でき、収率は83％であり、従来法による収率が
40〜50％であるのに対して優れた結果を示した。また得
られたコロミン酸の純度は95％であった。なお、小麦胚
芽レクチンと糖蛋白との結合阻止剤としては一般にＮ−
アセチル−Ｄ−グルコサミンが用いられるが、これを用
いて解離させると溶出後にＮ−アセチル−Ｄ−グルコサ
ミンの除去が必要となるので、実施例では酢酸ナトリウ
ムを解離液として使用した。
液から菌体を濾過により除去し、コロミン酸を含有する
培養液を得た。一方、米国クロマトケム社製のシリカゲ
ルを基材とする高速アフィニティカラムを準備し、小麦
胚芽レクチンをその固定相とした。固定化反応は以下の
ように行った。小麦胚芽レクチンを固定化用緩衝液であ
る0.2Mクエン酸ナトリウム(pH5.5) で溶解し、10mg/mL
の濃度に調整した。次にアルデヒド活性化担体を入れて
混合した後、水素化シアノホウ酸ナトリウムを最終濃度
10mg/mL で入れ、１時間反応させてゲルへの固定化を終
了し、カラム内に充填した。上記のコロミン酸を1g〜L
の濃度で含有する培養液1Lをこのアフィニティカラムに
通液し、20mMリン酸緩衝液(pH7.6) で洗浄した後、0.1M
酢酸ナトリウム(pH4.5) を通液することによりコロミン
酸を溶出させ、回収した。これをエタノールで再結し、
結晶コロミン酸を得た。得られたコロミン酸量を過ヨウ
素酸レソルシール法で測定した結果、0.83g のコロミン
酸を回収でき、収率は83％であり、従来法による収率が
40〜50％であるのに対して優れた結果を示した。また得
られたコロミン酸の純度は95％であった。なお、小麦胚
芽レクチンと糖蛋白との結合阻止剤としては一般にＮ−
アセチル−Ｄ−グルコサミンが用いられるが、これを用
いて解離させると溶出後にＮ−アセチル−Ｄ−グルコサ
ミンの除去が必要となるので、実施例では酢酸ナトリウ
ムを解離液として使用した。
【００１１】
【発明の効果】以上に説明したように、本発明のコロミ
ン酸の精製方法によれば、大腸菌を利用して得られたコ
ロミン酸を含有する原料液中から、高い収率でコロミン
酸を精製することができ、また精製に要する時間もごく
短いものである。よって本発明は従来の問題点を解消し
たコロミン酸の精製方法として、産業の発展に寄与する
ところはきわめて大きいものである。
ン酸の精製方法によれば、大腸菌を利用して得られたコ
ロミン酸を含有する原料液中から、高い収率でコロミン
酸を精製することができ、また精製に要する時間もごく
短いものである。よって本発明は従来の問題点を解消し
たコロミン酸の精製方法として、産業の発展に寄与する
ところはきわめて大きいものである。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年２月２３日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００７】本発明においては、まず従来と同様に大腸
菌を利用してコロミン酸を含有する培養液を製造し、こ
れをレクチンを固定相とするアフィニティカラムを利用
して分離する。レクチンは動植物あるいは微生物中に見
いだされる糖結合性の蛋白質であり、小麦胚芽レクチ
ン、ニホンニワトコレクチン等のシアル酸に親和性を有
するレクチンを固定相とする。小麦胚芽レクチンは小麦
胚芽より調製した連鎖を持たない蛋白質であり、シアル
酸が密になっている構造を認識する。その分子量は約36
000 で、分子量約18000 のサブユニット２個からなり、
３個のＮ−アセチルグルコサミン結合部位を有してい
る。そしてシアル酸（Ｎ−アセチルノイラミン酸）はこ
のレクチンへの結合能が高いものである。また、ニホン
ニワトコレクチンはニホンニワトコの小枝より調製され
た糖蛋白質であり、１分子当り２つの糖結合部位を持
ち、やはりシアル酸に対して高い結合能を持っている。
これらシアル酸結合性を有するレクチンを固定相とした
アフィニティカラムによる精製は、シアル酸ポリマーで
あるコロミン酸の精製にも有効であった。
菌を利用してコロミン酸を含有する培養液を製造し、こ
れをレクチンを固定相とするアフィニティカラムを利用
して分離する。レクチンは動植物あるいは微生物中に見
いだされる糖結合性の蛋白質であり、小麦胚芽レクチ
ン、ニホンニワトコレクチン等のシアル酸に親和性を有
するレクチンを固定相とする。小麦胚芽レクチンは小麦
胚芽より調製した連鎖を持たない蛋白質であり、シアル
酸が密になっている構造を認識する。その分子量は約36
000 で、分子量約18000 のサブユニット２個からなり、
３個のＮ−アセチルグルコサミン結合部位を有してい
る。そしてシアル酸（Ｎ−アセチルノイラミン酸）はこ
のレクチンへの結合能が高いものである。また、ニホン
ニワトコレクチンはニホンニワトコの小枝より調製され
た糖蛋白質であり、１分子当り２つの糖結合部位を持
ち、やはりシアル酸に対して高い結合能を持っている。
これらシアル酸結合性を有するレクチンを固定相とした
アフィニティカラムによる精製は、シアル酸ポリマーで
あるコロミン酸の精製にも有効であった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 板倉 美奈 愛知県半田市柊町１丁目217−５ ハイツ 竹長３Ｃ
Claims (1)
- 【請求項１】 大腸菌により生産されたコロミン酸を含
有する原料液を、レクチンを固定相とするアフィニティ
分離により精製処理してコロミン酸を得ることを特徴と
するコロミン酸の精製方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5032901A JPH06245786A (ja) | 1993-02-23 | 1993-02-23 | コロミン酸の精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5032901A JPH06245786A (ja) | 1993-02-23 | 1993-02-23 | コロミン酸の精製方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06245786A true JPH06245786A (ja) | 1994-09-06 |
Family
ID=12371803
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5032901A Pending JPH06245786A (ja) | 1993-02-23 | 1993-02-23 | コロミン酸の精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06245786A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008104811A1 (en) * | 2007-02-28 | 2008-09-04 | Lipoxen Technologies Limited | Reduction of endotoxin in polysialic acids |
| JP2012082436A (ja) * | 2004-08-12 | 2012-04-26 | Lipoxen Technologies Ltd | 電荷を有する多糖の分別 |
-
1993
- 1993-02-23 JP JP5032901A patent/JPH06245786A/ja active Pending
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012082436A (ja) * | 2004-08-12 | 2012-04-26 | Lipoxen Technologies Ltd | 電荷を有する多糖の分別 |
| JP2014169451A (ja) * | 2004-08-12 | 2014-09-18 | Lipoxen Technologies Ltd | 電荷を有する多糖の分別 |
| US9200052B2 (en) | 2004-08-12 | 2015-12-01 | Lipoxen Technologies Limited | Fractionation of charged polysaccharide |
| US9790288B2 (en) | 2004-08-12 | 2017-10-17 | Lipoxen Technologies Limited | Fractionation of charged polysaccharide |
| US9828443B2 (en) | 2004-08-12 | 2017-11-28 | Lipoxen Technologies Limited | Fractionation of charged polysaccharide |
| WO2008104811A1 (en) * | 2007-02-28 | 2008-09-04 | Lipoxen Technologies Limited | Reduction of endotoxin in polysialic acids |
| EP2409995A3 (en) * | 2007-02-28 | 2012-08-15 | Lipoxen Technologies Limited | Reduction of endotoxin in polysialic acids |
| KR101523111B1 (ko) * | 2007-02-28 | 2015-06-25 | 리폭센 테크놀로지즈 리미티드 | 폴리시알산의 내독소 감소 |
| US9212232B2 (en) | 2007-02-28 | 2015-12-15 | Lipoxen Technologies Limited | Reduction of endotoxin in polysialic acids |
| US10301396B2 (en) | 2007-02-28 | 2019-05-28 | Lipoxen Technologies Limited | Reduction of endotoxin in polysialic acids |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4519646B2 (ja) | プレプロインスリンの精製方法 | |
| JP2005225889A (ja) | 精製血清アルブミン | |
| JP3438735B2 (ja) | 上清ｉｖ、特にｉｖ−４またはコーンフラクションｖまたはそれと類似の上清または画分からヒトアルブミンを単離する方法 | |
| US5849874A (en) | Process for the purification of serum albumin | |
| JPH06245786A (ja) | コロミン酸の精製方法 | |
| US3959249A (en) | Method for isolating transferrines from biological materials | |
| JP3508149B2 (ja) | ヒト血清アルブミンおよびその製造方法 | |
| JPH0147997B2 (ja) | ||
| JP2739232B2 (ja) | 生物学的親和性を有するセルロースゲルの使用方法 | |
| JPH01250331A (ja) | グリセリンの精製法 | |
| JPS61224996A (ja) | マウスインタ−フエロンの精製法 | |
| JPH0459796A (ja) | アフィニティークロマトグラフィー用担体およびアンチトロンビン３の精製方法 | |
| JPH01165393A (ja) | 組換えヒトエリスロポエチンの精製方法 | |
| JPH06245785A (ja) | シアル酸の精製方法 | |
| JP2778975B2 (ja) | マルトシル―サイクロデキストリンの製造方法 | |
| CN116410295A (zh) | 一种大肠杆菌表达物的纯化方法 | |
| JPH06245788A (ja) | ヒト血清アルブミンおよびその製造方法 | |
| JPS6023646B2 (ja) | 高純度カリクレインの精製方法 | |
| JP2004002449A (ja) | ヒト血清アルブミンおよびその製造方法 | |
| JPS5848159B2 (ja) | ウロキナ−ゼの精製方法 | |
| JP2004002450A (ja) | ヒト血清アルブミン | |
| JPH084503B2 (ja) | ウロキナーゼの回収方法及びそれにより得られるウロキナーゼ含有画分 | |
| JPS63502718A (ja) | エルウィニア カロトヴォラからのｌ−アスパラギナ−ゼの製造方法 | |
| JPH0213372A (ja) | スーパーオキサイド・ジスムターゼの精製法 | |
| JPS5834179B2 (ja) | 蛋白吸着体及び該蛋白吸着体を用いるウロキナ−ゼの精製方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20010216 |