JPS6023646B2 - 高純度カリクレインの精製方法 - Google Patents
高純度カリクレインの精製方法Info
- Publication number
- JPS6023646B2 JPS6023646B2 JP54074049A JP7404979A JPS6023646B2 JP S6023646 B2 JPS6023646 B2 JP S6023646B2 JP 54074049 A JP54074049 A JP 54074049A JP 7404979 A JP7404979 A JP 7404979A JP S6023646 B2 JPS6023646 B2 JP S6023646B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- kallikrein
- water
- insoluble carrier
- solution
- bound
- Prior art date
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、カリクレィンの高純度精製方法に関するもの
であり、更に詳細には、幅乳動物臓器より得られるカリ
クレィンを簡単に、大量に且つ収率良く、高純度に精製
する方法に関するものである。
であり、更に詳細には、幅乳動物臓器より得られるカリ
クレィンを簡単に、大量に且つ収率良く、高純度に精製
する方法に関するものである。
カリクレィンは、血酸中のキニノーゲンから活性べプチ
ド、キニンを特異的かつすみやかに遊離させるキニン遊
離酵素としての活性を有していて、循環器系疾患の治療
剤として有効であることが認められ、医薬としてのカリ
クレィンの需要は近年増加の一途をたどり、特に異種蛋
白質を含まない高純度カリクレィンの多量生産が切望さ
れるようになった。
ド、キニンを特異的かつすみやかに遊離させるキニン遊
離酵素としての活性を有していて、循環器系疾患の治療
剤として有効であることが認められ、医薬としてのカリ
クレィンの需要は近年増加の一途をたどり、特に異種蛋
白質を含まない高純度カリクレィンの多量生産が切望さ
れるようになった。
従来より、カリクレインを得る方法としては、硫安塩折
、溶媒沈澱、カチオン交換体あるいはァニオン交換体を
用いたイオン交換クロマト、ゲル炉過などの方法が種々
試みられてきたが、異種蛋白質を含まない高純度カリク
レインを得ることは困難であった。
、溶媒沈澱、カチオン交換体あるいはァニオン交換体を
用いたイオン交換クロマト、ゲル炉過などの方法が種々
試みられてきたが、異種蛋白質を含まない高純度カリク
レインを得ることは困難であった。
最近になって高純度カリクレィンを得る方法として、Ｄ
ＥＡＥーセルロース及びヒドロキシアパタイトを用いた
カラムクロマトグラフイー、セフアデックスＧ−１００
を用いたゲル炉週の組合せによる方法、又はカリクレイ
ン含有液を金属塩で処理した後にアニオン交換体及びカ
チオン交換体を用いたイオン交換クロマトにより精製す
る方法などが報告されているが、カリクレインの収率が
悪く、又、操作が繁雑であったりして工業的に大量生産
するのに通した方法とはいえない。更に又、アフィニテ
イクロマトグラフイーによる高純度カリクレィンの精製
法も開発されつつある（特公昭５３−２５０３０、特開
昭５０一３１０１７）。しかしながら、これに使用する
天然性トリプシン阻害剤、例えばオポムコィドトリプシ
ン阻害剤、大豆トリブシン阻害剤等が高価なものである
ためこれらを用いるアフイニテイクロマトグラフイーに
よる高純度カリクレィンの精製法も工業的に使用する手
段としては依然として不適当であった。そこで本発明者
らは、アフイニテイクロマトグラフィーを利用し、かつ
、工業的に可能なカリクレィンの精製方法を求めて鋭意
研究し、本発明に到達したものである。本発明では一般
式ＮＨ２（Ｃ比）ｎＮＨ２（ただしｎは２〜８を示す）
あるいはＣＨ３（Ｃ比）ｎＮＨ２（ただしｎは１〜９を
示す）で表わされる化合物を水不縁性担体に結合させた
ＮＱ（ＣＱ）ｎ一水不溶性担体結合物（ただしｎは２〜
８を示す）あるいはＣ比（Ｃ比）。
ＥＡＥーセルロース及びヒドロキシアパタイトを用いた
カラムクロマトグラフイー、セフアデックスＧ−１００
を用いたゲル炉週の組合せによる方法、又はカリクレイ
ン含有液を金属塩で処理した後にアニオン交換体及びカ
チオン交換体を用いたイオン交換クロマトにより精製す
る方法などが報告されているが、カリクレインの収率が
悪く、又、操作が繁雑であったりして工業的に大量生産
するのに通した方法とはいえない。更に又、アフィニテ
イクロマトグラフイーによる高純度カリクレィンの精製
法も開発されつつある（特公昭５３−２５０３０、特開
昭５０一３１０１７）。しかしながら、これに使用する
天然性トリプシン阻害剤、例えばオポムコィドトリプシ
ン阻害剤、大豆トリブシン阻害剤等が高価なものである
ためこれらを用いるアフイニテイクロマトグラフイーに
よる高純度カリクレィンの精製法も工業的に使用する手
段としては依然として不適当であった。そこで本発明者
らは、アフイニテイクロマトグラフィーを利用し、かつ
、工業的に可能なカリクレィンの精製方法を求めて鋭意
研究し、本発明に到達したものである。本発明では一般
式ＮＨ２（Ｃ比）ｎＮＨ２（ただしｎは２〜８を示す）
あるいはＣＨ３（Ｃ比）ｎＮＨ２（ただしｎは１〜９を
示す）で表わされる化合物を水不縁性担体に結合させた
ＮＱ（ＣＱ）ｎ一水不溶性担体結合物（ただしｎは２〜
８を示す）あるいはＣ比（Ｃ比）。
−水不溶性担体結合物（ただしｎは１〜９を示す）を用
い、アフイニテイクロマトグラフィーの一種類であるハ
イドロフオービツク・クロマトグラフィー担体として使
用したところ、これらいずれにもカリクレィンが特異的
に吸着し、この二つの担体結合物を順次組合せて使用す
れば、異種蛋白質を含まない高純度カリクレィンを得る
ことを認め、こうしてハイドロフオービック・クロマト
グラフィーによる安価にして簡単に高純度カリクレィン
を得ることに成功し、本発明を完成したものである。本
発明においては、まず一般式ＮＨ２ （ＣＨ２）ｎＮＨ２（ただしｎは２〜８を示す）あるい
はＣＨ３（ＣＨ２）ｎＮＨ２（ただしｎは１〜９を示す
）で表わされるＱ・のージアミノアルカンあるいはアル
キルアミンを水不溶性担体に結合させてＮＨ２（ＣＨ２
）ｎ−水不溶性担体結合物（ただしｎは２〜８を示す）
あるいはＣＨ３（ＣＨ２）ｎ−水不溶性担体結合物（た
だしｎは１〜９を示す）が調製される。
い、アフイニテイクロマトグラフィーの一種類であるハ
イドロフオービツク・クロマトグラフィー担体として使
用したところ、これらいずれにもカリクレィンが特異的
に吸着し、この二つの担体結合物を順次組合せて使用す
れば、異種蛋白質を含まない高純度カリクレィンを得る
ことを認め、こうしてハイドロフオービック・クロマト
グラフィーによる安価にして簡単に高純度カリクレィン
を得ることに成功し、本発明を完成したものである。本
発明においては、まず一般式ＮＨ２ （ＣＨ２）ｎＮＨ２（ただしｎは２〜８を示す）あるい
はＣＨ３（ＣＨ２）ｎＮＨ２（ただしｎは１〜９を示す
）で表わされるＱ・のージアミノアルカンあるいはアル
キルアミンを水不溶性担体に結合させてＮＨ２（ＣＨ２
）ｎ−水不溶性担体結合物（ただしｎは２〜８を示す）
あるいはＣＨ３（ＣＨ２）ｎ−水不溶性担体結合物（た
だしｎは１〜９を示す）が調製される。
ここに用いるＱ・のージアミノアルカンとしては、エチ
レンジアミン、１・３ージアミノプロパン、１．４−ジ
アミノブタン、１・５ージアミノベンタン、１・６ージ
アミノヘキサン、１・７ージアミノヘプタン、１・８−
ジアミノオクタンがあげられ、アルキルアミンとしては
、エチルアミン、プロピルアミン、ブチルアミン、ベン
チルアミン、ヘキシルアミン、ヘプチルアミン、オクチ
ルアミン、ノニルアミン「デシルアミンがあげられる。
レンジアミン、１・３ージアミノプロパン、１．４−ジ
アミノブタン、１・５ージアミノベンタン、１・６ージ
アミノヘキサン、１・７ージアミノヘプタン、１・８−
ジアミノオクタンがあげられ、アルキルアミンとしては
、エチルアミン、プロピルアミン、ブチルアミン、ベン
チルアミン、ヘキシルアミン、ヘプチルアミン、オクチ
ルアミン、ノニルアミン「デシルアミンがあげられる。
また、水不溶性担体としては、不活性で疎であり、不落
・性であり、しかも親水性であるような不濠性迫体、例
えば、アガロース（登録商標セフアロース：ファルマシ
ア・ファインケミカル社製）、デキストラン（登録商標
セフアデックス：ファルマシア１ファインケミカル社製
）、セルロースパウダー、ポリアクリルアマイドゲル（
登録商標：バイオゲル：バイオラド社製）などが用いら
れる。結合反応は、まず水不溶性担体をブロムシアン、
ェピクロルヒドリン、過ヨウ素酸ナトリウムなどで活性
化し、これにＱ・のージアミノアルカンあるいはアルキ
ルアミンを添加することによって達成され、こうしてＮ
Ｑ（ＣＨ２）ｎ−水不港性担体結合物（ｎは２〜８を示
す）あるいは、ＣＨ３（ＣＨ２）ｎ−水不綾性担体結合
物（ただしｎは１〜９を示す）が得られる。
・性であり、しかも親水性であるような不濠性迫体、例
えば、アガロース（登録商標セフアロース：ファルマシ
ア・ファインケミカル社製）、デキストラン（登録商標
セフアデックス：ファルマシア１ファインケミカル社製
）、セルロースパウダー、ポリアクリルアマイドゲル（
登録商標：バイオゲル：バイオラド社製）などが用いら
れる。結合反応は、まず水不溶性担体をブロムシアン、
ェピクロルヒドリン、過ヨウ素酸ナトリウムなどで活性
化し、これにＱ・のージアミノアルカンあるいはアルキ
ルアミンを添加することによって達成され、こうしてＮ
Ｑ（ＣＨ２）ｎ−水不港性担体結合物（ｎは２〜８を示
す）あるいは、ＣＨ３（ＣＨ２）ｎ−水不綾性担体結合
物（ただしｎは１〜９を示す）が得られる。
ここに得られるＮＨ２（ＣＨ２）ｎ−水不溶性担体結合
物に軸４．５〜８、好ましくは舟５〜６においてカリク
レィン含有液を接触させ、カリクレインを吸着させる。
物に軸４．５〜８、好ましくは舟５〜６においてカリク
レィン含有液を接触させ、カリクレインを吸着させる。
カリクレィンを吸着したＮＨ２（ＣＨ２）ｎ−水不溶性
担体結合物はｐＨ４．５〜８、好ましくはＰＨ５〜６で
０．１９Ｍ以上の食塩などの電解質を含む溶液にて処理
し、カリクレィンを溶離せしめる。溶離したカリクレィ
ン含有液は、透析、限外炉過による脱塩あるいは水で稀
釈することにより電解質濃度を０．１８Ｍ以下とする。
担体結合物はｐＨ４．５〜８、好ましくはＰＨ５〜６で
０．１９Ｍ以上の食塩などの電解質を含む溶液にて処理
し、カリクレィンを溶離せしめる。溶離したカリクレィ
ン含有液は、透析、限外炉過による脱塩あるいは水で稀
釈することにより電解質濃度を０．１８Ｍ以下とする。
ついで、このカリクレィン含有液をＣＨ３（ＣＨ２）ｎ
−水不溶性損体結合物（ただしｎは１〜９を示す）に任
意の解、好ましくはｐＨ４．５〜６において、接触せし
めカリクレィンを吸着せしめる。
−水不溶性損体結合物（ただしｎは１〜９を示す）に任
意の解、好ましくはｐＨ４．５〜６において、接触せし
めカリクレィンを吸着せしめる。
カリクレィン含有液に含まれる異種蛋白質は、このＣＨ
３（ＣＨ２）ｎ−水不溶性担体結合物に全く吸着されず
流下してしまう。カリクレィンを吸着した担体結合物は
、任意のｐＨ、好ましくはｐＨ４．５〜６で０．２Ｍ以
上の食塩などの電解質を含む溶液もしくは、ｎープロパ
ノールなどの疎水性化合物を含む溶液にてカリクレィン
を溶酸せしめ、純粋なカリクレィン溶液を得ることがで
きる。この純粋なカリクレィン溶液を限外炉過などによ
って濃縮し、飽和硫安溶液を、カリクレイン含有液がか
すかに白濁するまで加え、４℃〜室温に放置することに
より、カリクレィンの結晶が得られる。得られたカリク
レィンの結晶形は針状であり、この結晶カリクレィンを
用いて等蚤点電気泳動を行った結果を第１図に示す。第
１図に示すように結晶カリクレインは等霞点４．０及び
４．２の二種類のアィソザィムよりなることが認められ
る。これは従来より報告されているようにカリクレイン
が成分Ａ及びＢの混合物であることと一致する。このア
ィソザィムの差はカリクレィンが糠蛋白質であるために
その糠部分の差に基づいているものと考えられるが、生
理活性においては、二種類のアィソザィムの間に差は認
められない。なお、本発明の実施例において用いた活性
測定法は次の通りである。
３（ＣＨ２）ｎ−水不溶性担体結合物に全く吸着されず
流下してしまう。カリクレィンを吸着した担体結合物は
、任意のｐＨ、好ましくはｐＨ４．５〜６で０．２Ｍ以
上の食塩などの電解質を含む溶液もしくは、ｎープロパ
ノールなどの疎水性化合物を含む溶液にてカリクレィン
を溶酸せしめ、純粋なカリクレィン溶液を得ることがで
きる。この純粋なカリクレィン溶液を限外炉過などによ
って濃縮し、飽和硫安溶液を、カリクレイン含有液がか
すかに白濁するまで加え、４℃〜室温に放置することに
より、カリクレィンの結晶が得られる。得られたカリク
レィンの結晶形は針状であり、この結晶カリクレィンを
用いて等蚤点電気泳動を行った結果を第１図に示す。第
１図に示すように結晶カリクレインは等霞点４．０及び
４．２の二種類のアィソザィムよりなることが認められ
る。これは従来より報告されているようにカリクレイン
が成分Ａ及びＢの混合物であることと一致する。このア
ィソザィムの差はカリクレィンが糠蛋白質であるために
その糠部分の差に基づいているものと考えられるが、生
理活性においては、二種類のアィソザィムの間に差は認
められない。なお、本発明の実施例において用いた活性
測定法は次の通りである。
１ カリクレィンの生理活性
守屋等の方法〔ザ・ジャーナル・オブリゞィオケミスト
リー（ＪｏｕｍａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓ０ｙ）斑巻
、２０１頁（１９５６王）〕に従って行なった。
リー（ＪｏｕｍａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓ０ｙ）斑巻
、２０１頁（１９５６王）〕に従って行なった。
２ キニナーゼ活性
合成ブラジキニンを基質として３０ｑｏ、２３分反応し
、残存ブラジキニン量によるモルモット回腸の収縮から
分解されたプラジキニン量を求め、キニナーゼ活性とし
ｎタ ＢＫ ｄｅｃｏｍｐ／ｍｉｎ／ｋｕで値を表示た
。
、残存ブラジキニン量によるモルモット回腸の収縮から
分解されたプラジキニン量を求め、キニナーゼ活性とし
ｎタ ＢＫ ｄｅｃｏｍｐ／ｍｉｎ／ｋｕで値を表示た
。
次に本発明の実施例を示す。
・実施例 １
セフアロースをェピクロルヒドリンで活性化し、これに
１・６ーヘキシルジアミン又はへキシルアミンを共有結
合させてアミノヘキシルーセフアロース〔Ｎ比（Ｃ比）
６ーセフアロース〕又はへキシルーセフアロース〔Ｃ比
（Ｃ４）５−セフアロース〕を得、前者の５００叫及び
後者の２５０の‘をカラムに充填し、２０のＭの燐酸緩
衝液（ＦＨ６．０）で平衡化する。
１・６ーヘキシルジアミン又はへキシルアミンを共有結
合させてアミノヘキシルーセフアロース〔Ｎ比（Ｃ比）
６ーセフアロース〕又はへキシルーセフアロース〔Ｃ比
（Ｃ４）５−セフアロース〕を得、前者の５００叫及び
後者の２５０の‘をカラムに充填し、２０のＭの燐酸緩
衝液（ＦＨ６．０）で平衡化する。
一方、豚豚腕脱脂粉末２．５ｋ９を２５その水に懸濁さ
せ、４８ｏｏ、１時間熱水抽出後、アセトン３５〜５５
％の分画沈降を行ない得られる沈澱を水に溶解後、鮒‐
酢酸にてＰＨ５．０とし、生じる濁りを炉過し、柵−水
酸化ナトリウムでＰＨを６．０としカリクレィン含有液
４．０夕を得た。
せ、４８ｏｏ、１時間熱水抽出後、アセトン３５〜５５
％の分画沈降を行ない得られる沈澱を水に溶解後、鮒‐
酢酸にてＰＨ５．０とし、生じる濁りを炉過し、柵−水
酸化ナトリウムでＰＨを６．０としカリクレィン含有液
４．０夕を得た。
このカリクレィン含有液を上記アミノヘキシルーセフア
ロースに通液し、カリクレインを吸着させ、７０のＭの
ＮａＣＩを含む２０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ６．０）で洗
浄後、１８０ｍＭのＮａＣＩを含む２０ｍＭ燐酸緩衝液
（ｐＨ６．０）で該吸着体からカリクレィンを溶出し、
３０〆を得た。
ロースに通液し、カリクレインを吸着させ、７０のＭの
ＮａＣＩを含む２０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ６．０）で洗
浄後、１８０ｍＭのＮａＣＩを含む２０ｍＭ燐酸緩衝液
（ｐＨ６．０）で該吸着体からカリクレィンを溶出し、
３０〆を得た。
これに精製水７５０の‘を加える。このカリクレィン含
有溶出液を上記へキシルーセフアロースに通液し、カリ
クレインを吸着させ、１５０ｍＭのＮａＣＩを含む２０
ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ６．０）で洗浄後、４００ｍＭの
ＮａＣＩを含む２０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ６．０）でカ
リクレィンを溶出し、純粋カリクレィン溶液１．２〆を
得た。
有溶出液を上記へキシルーセフアロースに通液し、カリ
クレインを吸着させ、１５０ｍＭのＮａＣＩを含む２０
ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ６．０）で洗浄後、４００ｍＭの
ＮａＣＩを含む２０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ６．０）でカ
リクレィンを溶出し、純粋カリクレィン溶液１．２〆を
得た。
カリクレインの活性収率は５５％であった。この純粋カ
リクレィン溶液をＡ２８仇のが２００．Ｄ／の‘になる
ように濃縮・脱塩し、飽和硫安溶液をカリクレィン溶液
がかすかに白濁するまで加え、室温にて放置した。針状
のカリクレィンの結晶が得られ、この結晶化でのカリク
レインの活性収率は６５％であった。実施例 ２セルロ
ースパウダーを過沃素酸ナトリウムで活性化し、これに
１・６ーヘキサメチレンジアミンあるいはへキシルアミ
ンを共有結合させてアミノヘキシルーセルロース〔Ｎ比
（Ｃ比）６ーセルロース〕あるいはへキシルーセルロー
ス〔ＣＨ３（Ｃ弦）５ーセルロース〕を得、前者の５０
０の‘、および後者の２５０の【をそれぞれカラムに充
填し、２０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ６．０）で平衡化する
。
リクレィン溶液をＡ２８仇のが２００．Ｄ／の‘になる
ように濃縮・脱塩し、飽和硫安溶液をカリクレィン溶液
がかすかに白濁するまで加え、室温にて放置した。針状
のカリクレィンの結晶が得られ、この結晶化でのカリク
レインの活性収率は６５％であった。実施例 ２セルロ
ースパウダーを過沃素酸ナトリウムで活性化し、これに
１・６ーヘキサメチレンジアミンあるいはへキシルアミ
ンを共有結合させてアミノヘキシルーセルロース〔Ｎ比
（Ｃ比）６ーセルロース〕あるいはへキシルーセルロー
ス〔ＣＨ３（Ｃ弦）５ーセルロース〕を得、前者の５０
０の‘、および後者の２５０の【をそれぞれカラムに充
填し、２０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ６．０）で平衡化する
。
一方、豚生豚臓１０ｋｇをミンチ後、１０その水に懸濁
させ、４８ｑｏ、１時間抽出後、エチルアルコール２０
〜７０％にて分画沈降を行ない、得られる沈澱を水に溶
解後鮒−酢酸にてＰＨ５．０とし生じる濁りを炉遇し、
柵‐水酸化ナトリウムにてＰＨ６．０とし力リクレィン
含有液６Ｚを得た。カリクレイン含有液を上記アミノヘ
キシルセルロースに通液し７０ｍＭのＮａＣＩを含む２
０のＭ燐酸緩衝液で溶出し、溶出液３．２〆を得、これ
に精製水８００の‘を加えた。
させ、４８ｑｏ、１時間抽出後、エチルアルコール２０
〜７０％にて分画沈降を行ない、得られる沈澱を水に溶
解後鮒−酢酸にてＰＨ５．０とし生じる濁りを炉遇し、
柵‐水酸化ナトリウムにてＰＨ６．０とし力リクレィン
含有液６Ｚを得た。カリクレイン含有液を上記アミノヘ
キシルセルロースに通液し７０ｍＭのＮａＣＩを含む２
０のＭ燐酸緩衝液で溶出し、溶出液３．２〆を得、これ
に精製水８００の‘を加えた。
このカリクレィン溶出液を上記へキシルセルロースに通
液しカリクレインを吸着させ、１５０のＭのＮａＣＩを
含む２０肌Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ６．０）で洗浄後、４０
０ｍＭのＮａＣＩを含む２０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ６．
０）でカリクレィンを港出し、純粋カリクレィン溶液を
得た。このカリクレィン溶液を脱塩濃縮後凍結乾燥を行
ない１３００ｋｕ／雌の標品が得られ、活性収率は４８
％であった。
液しカリクレインを吸着させ、１５０のＭのＮａＣＩを
含む２０肌Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ６．０）で洗浄後、４０
０ｍＭのＮａＣＩを含む２０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ６．
０）でカリクレィンを港出し、純粋カリクレィン溶液を
得た。このカリクレィン溶液を脱塩濃縮後凍結乾燥を行
ない１３００ｋｕ／雌の標品が得られ、活性収率は４８
％であった。
第１図は結晶カリクレィンの等噂点電気泳動図を示すも
のである。 第↑図
のである。 第↑図
Claims (1)
- １ カリクレイン含有液を一般式ＮＨ＿２（ＣＨ＿２）
＿ｎＮＨ＿２（ただしｎは２〜８を示す）で表わされる
α・ω−ジアミノアルカンを水不溶性担体に結合させた
ＮＨ＿２（ＣＨ＿２）＿ｎ−水不溶性担体結合物（ただ
しｎは２〜８を示す）に接触せしめ、カリクレインを吸
着させ、該吸着体よりカリクレインを溶出してカリクレ
インを含む溶出液を得、ついで該溶液を一般式ＣＨ＿３
（ＣＨ＿２）＿ｎＮＨ＿２（ただしｎは１〜９を示す）
で表わされるアルキルアミンを水不溶性担体に結合させ
たＣＨ＿３（ＣＨ＿２）＿ｎ−水不溶性担体結合物（た
だしｎは１〜９を示す）に接触せしめ、カリクレインを
吸着させ、該吸着体よりカリクレインを溶出してカリク
レインの純粋な溶液を得ることを特徴とする高純度カリ
クレインの精製方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP54074049A JPS6023646B2 (ja) | 1979-06-14 | 1979-06-14 | 高純度カリクレインの精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP54074049A JPS6023646B2 (ja) | 1979-06-14 | 1979-06-14 | 高純度カリクレインの精製方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55167228A JPS55167228A (en) | 1980-12-26 |
| JPS6023646B2 true JPS6023646B2 (ja) | 1985-06-08 |
Family
ID=13535928
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP54074049A Expired JPS6023646B2 (ja) | 1979-06-14 | 1979-06-14 | 高純度カリクレインの精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6023646B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5973526A (ja) * | 1982-10-19 | 1984-04-25 | Amano Pharmaceut Co Ltd | 哺乳動物の脳に含まれる蛋白質の分別精製法 |
| AU8129894A (en) * | 1993-11-01 | 1995-05-23 | Alpha-Beta Technology, Inc. | Derivatized polysaccharide bile acid sequestrant for reducing cholesterol |
-
1979
- 1979-06-14 JP JP54074049A patent/JPS6023646B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS55167228A (en) | 1980-12-26 |
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