JPS5838150B2 - カリクレインの精製法 - Google Patents
カリクレインの精製法Info
- Publication number
- JPS5838150B2 JPS5838150B2 JP53154201A JP15420178A JPS5838150B2 JP S5838150 B2 JPS5838150 B2 JP S5838150B2 JP 53154201 A JP53154201 A JP 53154201A JP 15420178 A JP15420178 A JP 15420178A JP S5838150 B2 JPS5838150 B2 JP S5838150B2
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- JP
- Japan
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- kallikrein
- water
- acetate buffer
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、カリクレインの精製方法に関するものである
。
。
更に詳細には、本発明は、哨乳動物臓器より得られるカ
リクレインを簡単に且つ大量に高純度に精製する方法に
関するものである。
リクレインを簡単に且つ大量に高純度に精製する方法に
関するものである。
一般に、カリクレインは動物生体内各所で生産される一
種の蛋白分解酵素として知られている。
種の蛋白分解酵素として知られている。
カリクレインは血漿中のキニノーゲンから活性ペプチド
、キニンを特異的かつ、すみやかに遊離させるキニン遊
離酵素としての活性を有しているが、循環器系疾患の治
療剤として有効であることが分って注目されるに至って
いる。
、キニンを特異的かつ、すみやかに遊離させるキニン遊
離酵素としての活性を有しているが、循環器系疾患の治
療剤として有効であることが分って注目されるに至って
いる。
そして、医薬としてのカリクレインの需要は、近年増加
の一途をたどり、特に高純度カリクレインの安価にして
多量生産が切望されるようになった。
の一途をたどり、特に高純度カリクレインの安価にして
多量生産が切望されるようになった。
しかしながら、カリクレインは、給源として動物臓器を
原料とするため、共存する異種蛋白質が非常に多く、高
純度カリクレインを得るのはきわめて困難である。
原料とするため、共存する異種蛋白質が非常に多く、高
純度カリクレインを得るのはきわめて困難である。
従来のカリクレインの精製方法としては、硫安塩析、溶
媒沈澱、カチオン及びアニオン交換体を用いたイオン交
換クロマト、ケル済過等の組合せを行う方法、高価な試
薬であるインヒビターを用いるアフイニテイークロマト
を行う方法等があるが、これらいづれの方法においても
、精製されたカリクレインを安価にして、かつ、多量生
産する工業的方法としては確立されていないＯ 本発明者らは、より簡単な方法で効率的なカリクレイン
の精製方法を求めて研究したところ、一般式ＣＨｓ （
ＣＨ２ ） ｎ ＮＨ２ （ただし、ｎ＝ｉ〜９）で
表わされる化合物を水不溶性担体に結合させたＣＨｓ
（ ＣＨ２ ） ｎ−水不溶性担体結合物（アルキルー
水不溶性担体）に、カリクレインが特異的に吸着し、か
つ容易に溶離されることを認め、安価にして高純度なカ
リクレインを得ることに成功し、本発明を完成したもの
である。
媒沈澱、カチオン及びアニオン交換体を用いたイオン交
換クロマト、ケル済過等の組合せを行う方法、高価な試
薬であるインヒビターを用いるアフイニテイークロマト
を行う方法等があるが、これらいづれの方法においても
、精製されたカリクレインを安価にして、かつ、多量生
産する工業的方法としては確立されていないＯ 本発明者らは、より簡単な方法で効率的なカリクレイン
の精製方法を求めて研究したところ、一般式ＣＨｓ （
ＣＨ２ ） ｎ ＮＨ２ （ただし、ｎ＝ｉ〜９）で
表わされる化合物を水不溶性担体に結合させたＣＨｓ
（ ＣＨ２ ） ｎ−水不溶性担体結合物（アルキルー
水不溶性担体）に、カリクレインが特異的に吸着し、か
つ容易に溶離されることを認め、安価にして高純度なカ
リクレインを得ることに成功し、本発明を完成したもの
である。
本発明においては、まず、一般式ＣＨ３（ＣＨ２）ｎＮ
Ｈ２（ただし、ｎは１〜９を示す）で表わされるアルキ
ルアミンを水不溶性担体に結合させて ＣＨ３（ＣＨ２）ｎ一水不溶性担体結合物（ただし、ｎ
は１〜９を示す）が調製される。
Ｈ２（ただし、ｎは１〜９を示す）で表わされるアルキ
ルアミンを水不溶性担体に結合させて ＣＨ３（ＣＨ２）ｎ一水不溶性担体結合物（ただし、ｎ
は１〜９を示す）が調製される。
ここに用いるアルキルアミンとしては、メチルアミン、
エチルアミン、プロビルアミン、ブチルアミン、ペンチ
ルアミン、ヘキシルアミン、ヘプチルアミン、オクチル
アミン、ノニルアミンがあげられる。
エチルアミン、プロビルアミン、ブチルアミン、ペンチ
ルアミン、ヘキシルアミン、ヘプチルアミン、オクチル
アミン、ノニルアミンがあげられる。
また、水不溶性担体としては、不活性で疎であり、不溶
性であり、しかも親水性であるような不溶性担体でなけ
ればならず、例えば、アガロース（登録商標セファロー
ス：ファルマシアファインケミカル社製）、デキストラ
ン（登録商標セファデツクス：ファルマシア・ファイン
ケミカル社製）、セルロース・パウダー、ポリアクリル
アマイドゲル（登録商標バイオゲル：バイオラド社製）
などが用いられる。
性であり、しかも親水性であるような不溶性担体でなけ
ればならず、例えば、アガロース（登録商標セファロー
ス：ファルマシアファインケミカル社製）、デキストラ
ン（登録商標セファデツクス：ファルマシア・ファイン
ケミカル社製）、セルロース・パウダー、ポリアクリル
アマイドゲル（登録商標バイオゲル：バイオラド社製）
などが用いられる。
結合反応は、まず、水不溶性担体をプロムシアン、過ヨ
ウ素酸ナトｌ）ウムなどで活性化し、これにアルキルア
ミンを添カロした緩衝液を添カ目することによって達威
される。
ウ素酸ナトｌ）ウムなどで活性化し、これにアルキルア
ミンを添カロした緩衝液を添カ目することによって達威
される。
ここにＣＨ３（ＣＨ２）ｎ水不溶性担体結合物（ただし
、ｎは１〜９を示す）が得られる。
、ｎは１〜９を示す）が得られる。
ここに得られるＣＨ３（ ＣＨ２ ） ｎ 一水不溶
性担体結合物に任意のｐＨ１好ましくはｐＨ ４． ５
〜６においてカリクレイン含有液を接触させ、カリクレ
インを吸着させる。
性担体結合物に任意のｐＨ１好ましくはｐＨ ４． ５
〜６においてカリクレイン含有液を接触させ、カリクレ
インを吸着させる。
ここで、カリクレインのみがＣＨ３（ＣＨ２）ｎ −
水不溶性担体結合物に吸着され、カリクレイン含有液に
は普通含まれているキニナーゼは全く吸着されずに流下
してしまうので、一回の吸着操作だけでキニナーゼを含
まない高純度カリクレインを得ることができるものであ
る。
水不溶性担体結合物に吸着され、カリクレイン含有液に
は普通含まれているキニナーゼは全く吸着されずに流下
してしまうので、一回の吸着操作だけでキニナーゼを含
まない高純度カリクレインを得ることができるものであ
る。
カリクレインを吸着した担体結合物は、任意のｐＨ１好
ましくはｐＨ ４． ５〜６で０． ２ Ｍ以上の食塩
などの電解質を含む溶液もしくは、ｎ−プロパノールな
どの疎水性化合物を含む溶液にてカリクレインを溶離せ
しめることができる。
ましくはｐＨ ４． ５〜６で０． ２ Ｍ以上の食塩
などの電解質を含む溶液もしくは、ｎ−プロパノールな
どの疎水性化合物を含む溶液にてカリクレインを溶離せ
しめることができる。
カリクレイン含有液に含まれるキニナーゼは、この吸着
担体に全く吸着されず、この精製方法によれば１回の操
作でキニナーゼを含まない高純度カリクレインを得るこ
とが出来る。
担体に全く吸着されず、この精製方法によれば１回の操
作でキニナーゼを含まない高純度カリクレインを得るこ
とが出来る。
なお本発明の試験例及び実施例において用いた活性測定
法は次の通りである。
法は次の通りである。
１，カリクレインの生理活性
守屋等の方法〔ザ・ジャーナル・オブ・バイオケミスト
リ−（Ｊ，Ｂｉｏｃｈｅｍ，），５８巻、２０１頁（１
９５６年）〕に従って行った。
リ−（Ｊ，Ｂｉｏｃｈｅｍ，），５８巻、２０１頁（１
９５６年）〕に従って行った。
２．プロテアーゼ活性
クニツツ（Ｋｕｎｉｔｚ）の方法〔ザ・ジャーナル・オ
ブ・ゼネラル・フイジオロジ−（Ｊ．Ｇｅｎ ．Ｐｈｙ
ｓ ｉｏｌ ， ）、３０巻、２９１頁（１９４７年）
〕に準じてカゼイン分解活性をプロテアーゼ活性とした
。
ブ・ゼネラル・フイジオロジ−（Ｊ．Ｇｅｎ ．Ｐｈｙ
ｓ ｉｏｌ ， ）、３０巻、２９１頁（１９４７年）
〕に準じてカゼイン分解活性をプロテアーゼ活性とした
。
３．キニナーゼ活性
合成ブラジキニンを基質として、３０′Ｃ１２５分反応
し残存ブラジキニン量によるモルモット回腸の収縮から
分解されたブラジキニン量を求め、キニナーゼ活性とし
ｎｇ ＢＫ ｄｅｃｏｍｐ．ｍｉｎ／ＫＵで値を表示し
た。
し残存ブラジキニン量によるモルモット回腸の収縮から
分解されたブラジキニン量を求め、キニナーゼ活性とし
ｎｇ ＢＫ ｄｅｃｏｍｐ．ｍｉｎ／ＫＵで値を表示し
た。
次に本発明の試験例及び実施例を示す。
試験例 ｌ
パンクレアチンを水に懸濁させ、４８℃、１時間水抽出
後、アセトン分画を行い、これを水に溶解し、ｐＨを５
．０に調整し、生じた沈澱を除いてカリクレイン含有液
を得た。
後、アセトン分画を行い、これを水に溶解し、ｐＨを５
．０に調整し、生じた沈澱を除いてカリクレイン含有液
を得た。
一方、セファロース４Ｂをプロムシアンで活性化し、こ
れに ＣＨ３（ＣＨ２）ｎＮＨ２ （ｎ＝１〜９）のそれぞれ
を共有結合させてアルキルーセファロース〔ＣＨ３（Ｃ
Ｈ２）ｎ−セファロース（ｎ＝１〜９）〕を得、これを
カラムに充填し、ｐＨ５．０の２０ｍ■詐酸緩衝液で平
衡化する。
れに ＣＨ３（ＣＨ２）ｎＮＨ２ （ｎ＝１〜９）のそれぞれ
を共有結合させてアルキルーセファロース〔ＣＨ３（Ｃ
Ｈ２）ｎ−セファロース（ｎ＝１〜９）〕を得、これを
カラムに充填し、ｐＨ５．０の２０ｍ■詐酸緩衝液で平
衡化する。
これに、上記カリクレイン含有液を通液し、ｐＨ５．０
の２０ｍＭ酢酸緩衝液で洗浄後、０．２ＭＮａＣｌを含
む同緩衝液および０． ５ Ｍ ＮａＣｌｌを含む同緩
衝液で溶出を行った。
の２０ｍＭ酢酸緩衝液で洗浄後、０．２ＭＮａＣｌを含
む同緩衝液および０． ５ Ｍ ＮａＣｌｌを含む同緩
衝液で溶出を行った。
この結果を表１に示す。表１から明らかなように、いず
れの吸着担体にもカリクレインは吸着され、塩濃度を変
化させることによって溶出されることが認められる。
れの吸着担体にもカリクレインは吸着され、塩濃度を変
化させることによって溶出されることが認められる。
同様な結果がｐＨ４．０ ， ８．０などいづれのｐＨ
においても得られるが、ｐＨ８．０付近は、共存するプ
ロテアーゼであるトリプシンなどの作用最適ｐＨであり
、カリクレインが、これらプロテアーゼにより分解・失
活してしまうので、あまり好ましいｐＨではない。
においても得られるが、ｐＨ８．０付近は、共存するプ
ロテアーゼであるトリプシンなどの作用最適ｐＨであり
、カリクレインが、これらプロテアーゼにより分解・失
活してしまうので、あまり好ましいｐＨではない。
又、ｐＨ４．０付近においては、カリクレインの安定性
が悪く徐々に失活してゆく。
が悪く徐々に失活してゆく。
従って、プロテアーゼが作用し難く、又、カリクレイン
の安定性も良いｐＨ ５． ０付近で行うのが最も好ま
しい。
の安定性も良いｐＨ ５． ０付近で行うのが最も好ま
しい。
試験例 ２
試験例１と同様にしてセファロースにヘキシルアミン〔
ＣＨ３（ＣＨ２），ＮＨ２〕を共有結合させ、ヘキシル
ーセファロース〔ＣＨ３（ＣＨ２），−セファロース〕
を得、これをカラムに充填し、ｐＨ５．０の２０ｍＭ酢
酸緩衝液で平衡化する。
ＣＨ３（ＣＨ２），ＮＨ２〕を共有結合させ、ヘキシル
ーセファロース〔ＣＨ３（ＣＨ２），−セファロース〕
を得、これをカラムに充填し、ｐＨ５．０の２０ｍＭ酢
酸緩衝液で平衡化する。
これに試験例１と同様にして得たカリクレイン含有液を
通液し、５０ｍＭＮａＣｌを含むｐＨ５．０の２０ｒｎ
Ｍ酢酸緩衝液で洗浄後２０％エタノールあるいはｎ−プ
ロパノールを含む同緩衝液、４０％エタノールあるいは
ｎ−プロパノールを含む同緩衝液、ついで、０．２ＭＮ
ａＣｌｊを含み、４０％エタノールあるいはｎ−プロパ
ノールを含んだｐＨ ５． ０の２０ｍＭ酢酸緩衝液で
溶出を行った。
通液し、５０ｍＭＮａＣｌを含むｐＨ５．０の２０ｒｎ
Ｍ酢酸緩衝液で洗浄後２０％エタノールあるいはｎ−プ
ロパノールを含む同緩衝液、４０％エタノールあるいは
ｎ−プロパノールを含む同緩衝液、ついで、０．２ＭＮ
ａＣｌｊを含み、４０％エタノールあるいはｎ−プロパ
ノールを含んだｐＨ ５． ０の２０ｍＭ酢酸緩衝液で
溶出を行った。
この結果を表２に示す。表２に示す如く、カリクレイン
は、エタノールでは溶出されないが、ｎ−プロパノール
により溶出されることが認められる。
は、エタノールでは溶出されないが、ｎ−プロパノール
により溶出されることが認められる。
又、試験例ｌと異なりｎ−プロパノーノレを添刀目する
ことにより、ＮａＣｌ濃度が０． ２ Ｍでカリクレイ
ンが溶出されてくる。
ことにより、ＮａＣｌ濃度が０． ２ Ｍでカリクレイ
ンが溶出されてくる。
これは添加したｎ−プロパノールによりカリクレインと
吸着担体との間の疎水結合力が弱められたために、カリ
クレインが溶出され易くなったものと考えられ、エタノ
ールで溶出されないのは炭素鎖がｎ−プロパノールに比
較して短かいために、そのような作用が弱いためと考え
られる。
吸着担体との間の疎水結合力が弱められたために、カリ
クレインが溶出され易くなったものと考えられ、エタノ
ールで溶出されないのは炭素鎖がｎ−プロパノールに比
較して短かいために、そのような作用が弱いためと考え
られる。
このように食塩などにより塩濃度を高めるだけでなく、
ｎ−プロパノールのような疎水性化合物を緩衝液に添加
することによってもカリクレインを溶出することが出来
ることがわかる。
ｎ−プロパノールのような疎水性化合物を緩衝液に添加
することによってもカリクレインを溶出することが出来
ることがわかる。
実施例 １
セルロース・パウダーを過ヨウ素ナトリウムで活性化し
、これにヘキシルアミン〔ＣＨ３（ＣＨ２）５ＮＨ２〕
を共有結合させてヘキシルーセルロース（ＣＨａ （Ｃ
Ｈ２）５ーセルロース〕を得、５００ｍｌをカラムに充
填し、ｐＨ ５． ０の２０ｍＭ酢酸緩衝液で平衡化す
る。
、これにヘキシルアミン〔ＣＨ３（ＣＨ２）５ＮＨ２〕
を共有結合させてヘキシルーセルロース（ＣＨａ （Ｃ
Ｈ２）５ーセルロース〕を得、５００ｍｌをカラムに充
填し、ｐＨ ５． ０の２０ｍＭ酢酸緩衝液で平衡化す
る。
一方、豚膵臓脱脂粉末２．５ｋｇを２５１！の水に懸濁
させ、４８℃、１時間熱水抽出後、アセトン３５〜５５
％の分画沈降を行い、得られる沈澱を水に溶解後、６Ｎ
−酢酸にてｐＨ ５． ０とし生じる濁りを口過してカ
リクレイン含有液４．１を得た。
させ、４８℃、１時間熱水抽出後、アセトン３５〜５５
％の分画沈降を行い、得られる沈澱を水に溶解後、６Ｎ
−酢酸にてｐＨ ５． ０とし生じる濁りを口過してカ
リクレイン含有液４．１を得た。
このカリクレイン含有液を上記へキシルーセルロースに
通液し、カリクレインを吸着させ、２００ｍＭのＮ ａ
Ｃ ｌｊを含ｍＨ ５． ０の２０ｍＭ酢酸緩衝液で
洗浄後、５００ｍＭのＮａＣｌを含むｐＨ ５．０の２
０ｍＭ酢酸緩衝液で該吸着体からカリクレインを溶出し
、溶出液２．５ｌを得た。
通液し、カリクレインを吸着させ、２００ｍＭのＮ ａ
Ｃ ｌｊを含ｍＨ ５． ０の２０ｍＭ酢酸緩衝液で
洗浄後、５００ｍＭのＮａＣｌを含むｐＨ ５．０の２
０ｍＭ酢酸緩衝液で該吸着体からカリクレインを溶出し
、溶出液２．５ｌを得た。
この溶出液を脱塩・濃縮後、凍結乾燥を行い、精製カリ
クレイン２．３ｇを得た。
クレイン２．３ｇを得た。
精製カリクレインの生理活性を測定したところ８０Ｋｕ
，勾であり、キニナーゼ活性は、７．０ｎｇＢＫｄｅｃ
ｏｍｐ． ／ｍｉ ｎ／Ｋｕであった。
，勾であり、キニナーゼ活性は、７．０ｎｇＢＫｄｅｃ
ｏｍｐ． ／ｍｉ ｎ／Ｋｕであった。
実施例 ２
豚生膵臓１０ｋｇをミンチ後１０ｌの水に懸濁させ４８
℃、１時間抽出後、エチルアルコール２０〜７０％にて
分画沈降を行い、得られる沈澱を水に溶解後６Ｎ一酢酸
にてｐＨ ５． ０とし生じる濁りを口過しカリクレイ
ン含有液６ｌを得た。
℃、１時間抽出後、エチルアルコール２０〜７０％にて
分画沈降を行い、得られる沈澱を水に溶解後６Ｎ一酢酸
にてｐＨ ５． ０とし生じる濁りを口過しカリクレイ
ン含有液６ｌを得た。
一方試験例１と同様にしてプチルーセファロース〔ＣＨ
３（ＣＨ２）３−セファロース〕を得、５００Ｍをカラ
ムに充填し、ｐＨ５．０の２０ｍＭ酢酸緩衝液で平衡化
する。
３（ＣＨ２）３−セファロース〕を得、５００Ｍをカラ
ムに充填し、ｐＨ５．０の２０ｍＭ酢酸緩衝液で平衡化
する。
上記カリクレイン含有液を該カラムに通液し、２００ｍ
ＭＮａＣｌｊを含むｐＨ ５．０の２０ｍＭ酢酸緩衝液
で洗浄後、５ ０ ０ｍＭ ＮａＣ／ｌを含むｐＨ ５
． ０の２０ｍＭ酢酸緩衝液でカリクレインを溶出し、
溶出液２．５ｌを得た。
ＭＮａＣｌｊを含むｐＨ ５．０の２０ｍＭ酢酸緩衝液
で洗浄後、５ ０ ０ｍＭ ＮａＣ／ｌを含むｐＨ ５
． ０の２０ｍＭ酢酸緩衝液でカリクレインを溶出し、
溶出液２．５ｌを得た。
溶出液を脱塩濃縮後、凍結乾燥を行い精製カリクレイン
２．１．９を得た。
２．１．９を得た。
精製カリクレインの生理活性を測定したところ８５Ｋｕ
／１ｎ？であり、キニナーゼ活性は１ ０ｎｇ ＢＫ
ｄｅｃｏｍｐ．／ｍｉｎ／］Ｋｕであった。
／１ｎ？であり、キニナーゼ活性は１ ０ｎｇ ＢＫ
ｄｅｃｏｍｐ．／ｍｉｎ／］Ｋｕであった。
実施例 ３
豚膵臓脱脂粉末１ｋｇを１０ｌの水に懸濁させ、６Ｎ−
酢酸でｐＨ ５． ０とし４℃、３時間抽出した後、抽
出残渣を口過によって除き、抽出液１０７を得た。
酢酸でｐＨ ５． ０とし４℃、３時間抽出した後、抽
出残渣を口過によって除き、抽出液１０７を得た。
一方セルロース・パウダーを過ヨウ素酸ナトリウムで活
性化し、オクチルアミン〔ＣＨ３（ＣＨ２）７ＮＨ２〕
を共有結合させオクチルーセルロース（ＣＨ３（ Ｃ
Ｈ２）？セルロース〕を得、４００ｍ！！をカラムに充
填し、ｐＨ ５． ０の２０ｍＭ酢酸緩衝液で平衡化す
る。
性化し、オクチルアミン〔ＣＨ３（ＣＨ２）７ＮＨ２〕
を共有結合させオクチルーセルロース（ＣＨ３（ Ｃ
Ｈ２）？セルロース〕を得、４００ｍ！！をカラムに充
填し、ｐＨ ５． ０の２０ｍＭ酢酸緩衝液で平衡化す
る。
該カラムに上記カリクレイン含有液を通液し、−カリク
レインを吸着させるｏ２００ｍＭのＮａ Ｃｌｌを含む
ｐＨ５．０の２０ｍＭ酢酸緩衝液で洗浄後、５００ｍＭ
のＮａＣｉｌを含むｐＨ ５． ０の２０ｒｒＭ！＃−
酸緩衝液で溶出し、溶出液２ｌを得た。
レインを吸着させるｏ２００ｍＭのＮａ Ｃｌｌを含む
ｐＨ５．０の２０ｍＭ酢酸緩衝液で洗浄後、５００ｍＭ
のＮａＣｉｌを含むｐＨ ５． ０の２０ｒｒＭ！＃−
酸緩衝液で溶出し、溶出液２ｌを得た。
溶出液を脱塩濃縮後、凍結乾燥を行い、精製カリクレイ
ン１．０ｇを得た。
ン１．０ｇを得た。
精製カリクレインの生理活性は８０ＫＬＩ／■であり、
キニナーゼ活性は６．５ｎｇ ＢＫ ｄｅｃｏｍｐ，／
ｍｉｎ／Ｋｕであった。
キニナーゼ活性は６．５ｎｇ ＢＫ ｄｅｃｏｍｐ，／
ｍｉｎ／Ｋｕであった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 一般式 ＣＨ３（ＣＨ２）ｎＮＨ２（ただし、ｎ
は１〜９を示す） で表わされるアルキルアミンを水不溶性担体に結合させ
た ＣＨ３（ＣＨ２）ｎ−水不溶性担体結合物（ただし、ｎ
は１〜９を示す） に、カリクレイン含有液を接触せしめ、カリクレインを
特異的に吸着せしめ、しかる後、吸着したカリクレイン
を溶離せしめることを特徴とするカリクレインの精製法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP53154201A JPS5838150B2 (ja) | 1978-12-15 | 1978-12-15 | カリクレインの精製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP53154201A JPS5838150B2 (ja) | 1978-12-15 | 1978-12-15 | カリクレインの精製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5581587A JPS5581587A (en) | 1980-06-19 |
| JPS5838150B2 true JPS5838150B2 (ja) | 1983-08-20 |
Family
ID=15579043
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP53154201A Expired JPS5838150B2 (ja) | 1978-12-15 | 1978-12-15 | カリクレインの精製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5838150B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6257254U (ja) * | 1985-09-26 | 1987-04-09 |
-
1978
- 1978-12-15 JP JP53154201A patent/JPS5838150B2/ja not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6257254U (ja) * | 1985-09-26 | 1987-04-09 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5581587A (en) | 1980-06-19 |
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