JPH0723397B2 - 人尿トリプシンインヒビターおよび人尿カリクレインの濃縮分離方法 - Google Patents
人尿トリプシンインヒビターおよび人尿カリクレインの濃縮分離方法Info
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- JPH0723397B2 JPH0723397B2 JP59116861A JP11686184A JPH0723397B2 JP H0723397 B2 JPH0723397 B2 JP H0723397B2 JP 59116861 A JP59116861 A JP 59116861A JP 11686184 A JP11686184 A JP 11686184A JP H0723397 B2 JPH0723397 B2 JP H0723397B2
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- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6445—Kallikreins (3.4.21.34; 3.4.21.35)
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- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
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- C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
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- C07K14/8114—Kunitz type inhibitors
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は尿中の人尿トリプシンインヒビター（以下HUTI
と略称する）および人尿カリクレイン（以下HUKNと略称
する）を一つの吸着体により同時にしかも工業的規模で
収率よく取得する方法に関するものである。
と略称する）および人尿カリクレイン（以下HUKNと略称
する）を一つの吸着体により同時にしかも工業的規模で
収率よく取得する方法に関するものである。
（従来の技術） 尿中トリプシンインヒビターは哺乳動物の尿中に存在す
る１種の酵素であり、由来する動物の種類によってその
性質が若干異なることが知られている（Carlson:Enzyme
18,176（1974））。HUTIは分子量68000、等電点pH2−３
の糖蛋白質であり特にトリプシン、キモトリプシン、プ
ラスミン（須見ら：日本生理誌39,53（1977））、人エ
ラスターゼ（ジョンソンら:Hoppe Seyler′s Z.physio
l.chem.363,1167（1982））などを阻害することから抗
炎症性薬剤となる可能性があり、またインフルエンザウ
イルスの増殖を抑制するともいわれている（特公昭57−
140728）。
る１種の酵素であり、由来する動物の種類によってその
性質が若干異なることが知られている（Carlson:Enzyme
18,176（1974））。HUTIは分子量68000、等電点pH2−３
の糖蛋白質であり特にトリプシン、キモトリプシン、プ
ラスミン（須見ら：日本生理誌39,53（1977））、人エ
ラスターゼ（ジョンソンら:Hoppe Seyler′s Z.physio
l.chem.363,1167（1982））などを阻害することから抗
炎症性薬剤となる可能性があり、またインフルエンザウ
イルスの増殖を抑制するともいわれている（特公昭57−
140728）。
一方カリクレインは動物の生体内各部で生産される蛋白
質分解酵素で血清中のキニノーゲンを分解してキニンを
生成させ、それを介して血圧降下、血流量増加などの作
用を有する物質である。両者とも従来異種動物を起源と
して分離され医薬品としての利用が試みられている。特
にカリクレインは豚のすい臓及び尿を原料として製造さ
れて来た。しかしこれらは異種蛋白であるので抗原性を
有し 臨床に使用した場合、頻回投与によりしばしばアナフイ
ラキシーを生じ安全性に問題があった。人尿を減量とす
るHUTI及びHUKNは同種蛋白であるため、上記の人体に対
する副作用は生じないと考えられる。
質分解酵素で血清中のキニノーゲンを分解してキニンを
生成させ、それを介して血圧降下、血流量増加などの作
用を有する物質である。両者とも従来異種動物を起源と
して分離され医薬品としての利用が試みられている。特
にカリクレインは豚のすい臓及び尿を原料として製造さ
れて来た。しかしこれらは異種蛋白であるので抗原性を
有し 臨床に使用した場合、頻回投与によりしばしばアナフイ
ラキシーを生じ安全性に問題があった。人尿を減量とす
るHUTI及びHUKNは同種蛋白であるため、上記の人体に対
する副作用は生じないと考えられる。
HUTIの従来からの濃縮精製法としては、トリクロロ酢
酸、硫酸アンモン、メタノールを組合せた沈澱法（N.R.
Shulman:J.B.C.213,655（1955））、ベントナイトを用
いる方法（T.A.Astrup:Scan.J.Clin.Lab.Invest.11,181
（1959））、DEAE−セルローズを用いる方法（G.J.Prok
sch:J.Lab＆Clin.Med.79,491（1972））、固定化トリプ
シンを用いる方法（特開昭51−123810）などの方法があ
る。またHUKNの従来からの濃縮精製法にはシリカゲルを
用いる方法（特公昭46−19067）、アルギニン−セファ
ロースを用いる方法（特開昭55−99151）、WA−30など
のマクロポーラス型イオン交換樹脂を用いる方法（特開
昭50−5515）などが知られ、また本発明者らによるキト
サンを吸着剤として使用するHUKNの濃縮精製法（特開59
−6883）が知られている。さらにHUTIとHUKNの両者を同
時に濃縮する方法としてはアルギニン−セファロースを
用いる須見らの方法（須見洋行ら：医学と生物学vol.10
0（１）（1980））が知られている。
酸、硫酸アンモン、メタノールを組合せた沈澱法（N.R.
Shulman:J.B.C.213,655（1955））、ベントナイトを用
いる方法（T.A.Astrup:Scan.J.Clin.Lab.Invest.11,181
（1959））、DEAE−セルローズを用いる方法（G.J.Prok
sch:J.Lab＆Clin.Med.79,491（1972））、固定化トリプ
シンを用いる方法（特開昭51−123810）などの方法があ
る。またHUKNの従来からの濃縮精製法にはシリカゲルを
用いる方法（特公昭46−19067）、アルギニン−セファ
ロースを用いる方法（特開昭55−99151）、WA−30など
のマクロポーラス型イオン交換樹脂を用いる方法（特開
昭50−5515）などが知られ、また本発明者らによるキト
サンを吸着剤として使用するHUKNの濃縮精製法（特開59
−6883）が知られている。さらにHUTIとHUKNの両者を同
時に濃縮する方法としてはアルギニン−セファロースを
用いる須見らの方法（須見洋行ら：医学と生物学vol.10
0（１）（1980））が知られている。
（発明が解決しようとする問題点） 上記の方法中、単独にHUTIまたはHUKNを精製するものは
経費および操作上の綿で必ずしも満足できるものではな
く、両者を同時に濃縮する方法も工業的規模で実施する
には吸着剤が高価であり、操作も煩雑である。
経費および操作上の綿で必ずしも満足できるものではな
く、両者を同時に濃縮する方法も工業的規模で実施する
には吸着剤が高価であり、操作も煩雑である。
（問題を解決するための手段） そこで本発明者らは尿中の有効成分であるHUTIとHUKNを
１つの吸着剤で同時にしかも工業的規模で採取した後、
両者をアフイニテイクロマトグラフィーを応用して分離
精製するという発想で以下の研究を行なった。
１つの吸着剤で同時にしかも工業的規模で採取した後、
両者をアフイニテイクロマトグラフィーを応用して分離
精製するという発想で以下の研究を行なった。
本発明者らは各種無機吸着剤、イオン交換体、たん白凝
集剤などの材料についてHUTIおよびHUKNの吸着率、精製
度をつぎのように比較検討した。なお各材料で尿を処理
するに当り、（１）２つの有効成分を同時に吸着させる
ことを考慮して原尿量の２％の材料を添加した、（２）
尿のpHは4.5以下にすると尿中のウロペプシノーゲンが
活性化され、HUTIが低分子化されるため、pH5.0以上のp
Hで行なった。同一正常人尿を１ずつに分割して試料
とし（アンモニアアルカリ性の場合は中和後）、各材料
20gずつを用いて吸着、ついで溶出して水で十分透析し
た溶出液中のHUTI、HUKNおよびたん白質量を測定して回
収率と比活性を算出して表−１の結果を得た。
集剤などの材料についてHUTIおよびHUKNの吸着率、精製
度をつぎのように比較検討した。なお各材料で尿を処理
するに当り、（１）２つの有効成分を同時に吸着させる
ことを考慮して原尿量の２％の材料を添加した、（２）
尿のpHは4.5以下にすると尿中のウロペプシノーゲンが
活性化され、HUTIが低分子化されるため、pH5.0以上のp
Hで行なった。同一正常人尿を１ずつに分割して試料
とし（アンモニアアルカリ性の場合は中和後）、各材料
20gずつを用いて吸着、ついで溶出して水で十分透析し
た溶出液中のHUTI、HUKNおよびたん白質量を測定して回
収率と比活性を算出して表−１の結果を得た。
上記の結果からHUTIおよびHUKNを同時に50％以上の収率
で回収する吸着剤はNO.8のキトサンとNO.15のアルギニ
ン−セファロースであることを見出した。吸着剤キトサ
ンについては本発明者らがHUKNについて特許出願したが
（特開59−6883）、さらにこの結果により（１）尿に添
加するキトサンの量を２％以上にする。（２）溶出液の
アンモニアの濃度を３％にすることによりHUKN以外にHU
TIをも収量よく抽出され得ることを見出した。しかしそ
の代償としてHUKNの比活性は約1/4程度に低下する。こ
れは逆に尿中に多量に存在するHUTIがキトサンに同時に
吸着溶出されたことを意味する。本発明は上記の発見に
もとずくもので、人尿にキトサンをpH4.5〜6.5で接触さ
せ、尿中のHUTIおよびHUKNを選択的にキトサンに吸着さ
せついで吸着体からアルカリ性水溶液で両成分を溶出
し、所望により溶出液から両成分を分離することを特徴
とするHUTIおよびHUKNの濃縮分離方法である。
で回収する吸着剤はNO.8のキトサンとNO.15のアルギニ
ン−セファロースであることを見出した。吸着剤キトサ
ンについては本発明者らがHUKNについて特許出願したが
（特開59−6883）、さらにこの結果により（１）尿に添
加するキトサンの量を２％以上にする。（２）溶出液の
アンモニアの濃度を３％にすることによりHUKN以外にHU
TIをも収量よく抽出され得ることを見出した。しかしそ
の代償としてHUKNの比活性は約1/4程度に低下する。こ
れは逆に尿中に多量に存在するHUTIがキトサンに同時に
吸着溶出されたことを意味する。本発明は上記の発見に
もとずくもので、人尿にキトサンをpH4.5〜6.5で接触さ
せ、尿中のHUTIおよびHUKNを選択的にキトサンに吸着さ
せついで吸着体からアルカリ性水溶液で両成分を溶出
し、所望により溶出液から両成分を分離することを特徴
とするHUTIおよびHUKNの濃縮分離方法である。
キトサンと接触させる人尿のpHは4.5〜6.5好ましくはpH
5.5に調製するのがよい。本法の減量として使用する人
尿は原尿そのままでもよいが、望ましくは、あらかじめ
水酸化ナトリウムなどのアルカリ液でpH8.5に調整し夾
雑ムコ多糖類などの不純物を沈澱除去した尿または原尿
中の他の有効成分、例えばウロキナーゼなどを採取した
後のHUTIおよびHUKN含有の尿を前記のpHに調整してキト
サンと接触させる。
5.5に調製するのがよい。本法の減量として使用する人
尿は原尿そのままでもよいが、望ましくは、あらかじめ
水酸化ナトリウムなどのアルカリ液でpH8.5に調整し夾
雑ムコ多糖類などの不純物を沈澱除去した尿または原尿
中の他の有効成分、例えばウロキナーゼなどを採取した
後のHUTIおよびHUKN含有の尿を前記のpHに調整してキト
サンと接触させる。
キトサンの使用量は尿１当り20〜30gすなわち２〜３
％（W/V）、好ましくは約25gすなわち約2.5％（W/V）程
度がよい。上記の％（W/V）はキトサンの重量（ｇ）／
尿の体積（cm3）の比率を示す。人尿中のHUTIおよびHUK
Nはキトサンに接触させることにより選択的にキトサン
に吸着される。
％（W/V）、好ましくは約25gすなわち約2.5％（W/V）程
度がよい。上記の％（W/V）はキトサンの重量（ｇ）／
尿の体積（cm3）の比率を示す。人尿中のHUTIおよびHUK
Nはキトサンに接触させることにより選択的にキトサン
に吸着される。
吸着体を取し、必要に応じて水洗後、アルカリ性水溶
液で溶出する。アルカリ性水溶液は10.5〜12.0の範囲の
pHを持つのが望ましく、例えば２〜3Nアンモニア水を用
いてもよい。
液で溶出する。アルカリ性水溶液は10.5〜12.0の範囲の
pHを持つのが望ましく、例えば２〜3Nアンモニア水を用
いてもよい。
吸着体からHUTIおよびHUKNはアルカリ性水溶液により同
時に脱着、溶出される。
時に脱着、溶出される。
溶出液中に移行したHUTIおよびHUKNは、所望により、ア
プロチニン−アフイニテイクロマトグラフィーやトリプ
シン−アフイニテイクロマトグラフィーのようなアフイ
ニテイクロマトグラフィーによって互に分離採取するこ
とができる。
プロチニン−アフイニテイクロマトグラフィーやトリプ
シン−アフイニテイクロマトグラフィーのようなアフイ
ニテイクロマトグラフィーによって互に分離採取するこ
とができる。
（作用） 本発明においてキトサンは所定のpHにおいて人尿中のHU
TIおよびHUKNを同時に選択的に吸着する吸着剤として、
アルカリ性水溶液は両成分を同時に脱着する溶出剤とし
て作用し、これらの作用が相まって人尿中から両成分を
簡単に濃縮分離することを可能にするものである。
TIおよびHUKNを同時に選択的に吸着する吸着剤として、
アルカリ性水溶液は両成分を同時に脱着する溶出剤とし
て作用し、これらの作用が相まって人尿中から両成分を
簡単に濃縮分離することを可能にするものである。
以下の実施例により本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１ 健康な成人男子尿10lに攪拌しながら2N−塩酸を加えてp
H5.5に調整した。これにキトサン250gを加え、１時間攪
拌してHUTI及びHUKNを吸着したキトサンを過して採集
し、水で洗浄した後、3N−アンモニア水で吸着分を溶出
し、溶出液400mlを得た。得られたHUTIの総活性は47200
阻害単位（回収率65％）純度は310阻害単位/mg（たん白
質）であった。
H5.5に調整した。これにキトサン250gを加え、１時間攪
拌してHUTI及びHUKNを吸着したキトサンを過して採集
し、水で洗浄した後、3N−アンモニア水で吸着分を溶出
し、溶出液400mlを得た。得られたHUTIの総活性は47200
阻害単位（回収率65％）純度は310阻害単位/mg（たん白
質）であった。
実施例２ 健康な成人男子尿10lに攪拌しながら2.5N−水酸化ナト
リウム液を滴下しpH8.5とし生じた沈澱を過して除去
した後2.5N−塩酸を攪拌しながら加え、pH5.0に調整し
た。これにキトサン300gを加え１時間攪拌しHUTI及びHU
KNを吸着させた後、過して吸着体を得た。2.5N−アン
モニア水でHUTI及びHUKNを溶出して抽出液382mlを得
た。得られたHUTIの総活性は48300阻害単位（回収率67
％）純度は322阻害単位/mg（たん白質）であった。一方
HUKNの総活性は1345単位（回収率78％）純度は90単位/m
g（たん白質）であった。
リウム液を滴下しpH8.5とし生じた沈澱を過して除去
した後2.5N−塩酸を攪拌しながら加え、pH5.0に調整し
た。これにキトサン300gを加え１時間攪拌しHUTI及びHU
KNを吸着させた後、過して吸着体を得た。2.5N−アン
モニア水でHUTI及びHUKNを溶出して抽出液382mlを得
た。得られたHUTIの総活性は48300阻害単位（回収率67
％）純度は322阻害単位/mg（たん白質）であった。一方
HUKNの総活性は1345単位（回収率78％）純度は90単位/m
g（たん白質）であった。
実施例３ 健康成人男子尿20lに攪拌しながら2.5N−水酸化ナトリ
ウム液を滴下しpH8.5とし生じた沈澱を過して除去し
た後2.5N−塩酸を攪拌しながら加えpH5.5に調整し、こ
れにキトサン500gを加え１時間攪拌してHUTIおよびHUKN
を吸着させた。つぎにその吸着体から3N−アンモニア水
で溶出を行なって抽出液700mlを得た。得られたHUTIの
総活性は95200阻害単位（回収率66％）、純度は302阻害
単位/mg（たん白質）であった。またHUKNの総活性は278
9単位（回収率79％）純度は8.9単位であった。
ウム液を滴下しpH8.5とし生じた沈澱を過して除去し
た後2.5N−塩酸を攪拌しながら加えpH5.5に調整し、こ
れにキトサン500gを加え１時間攪拌してHUTIおよびHUKN
を吸着させた。つぎにその吸着体から3N−アンモニア水
で溶出を行なって抽出液700mlを得た。得られたHUTIの
総活性は95200阻害単位（回収率66％）、純度は302阻害
単位/mg（たん白質）であった。またHUKNの総活性は278
9単位（回収率79％）純度は8.9単位であった。
実施例４ 実施例３の抽出液を0.5M塩化ナトリウム、0.1M炭酸水素
ナトリウム緩衝液pH8.0に対して透析し、同じ緩衝液で
平衡化したアプロチニン−セファロース（註）カラム
（直径3.0cm、高さ15cm）にトリプシン−セファロース
（註）カラム（直径30cm、高さ15cm）を連結させたカラ
ムを通過させた。アプロチニン−セファロースは0.5M塩
化ナトリウムを含む0.1M酢酸緩衝液（pH3.5）で溶出
し、HUKN−溶出液41mlを得た。トリプシン−セファロー
スカラムは0.5M塩化ナトリウムを含むグリシン塩酸緩衝
液pH2.6で溶出しHUTI−溶出液48mlを得た。得られたHUT
Iの総活性は69980阻害単位（回収率49％）純度は1320阻
害単位/mg（たん白質）であり、HUKNは全く含有されて
いなかった。HUKNの総活性は2084単位（回収率59％）純
度は825単位/mg（たん白質）であり、HUTIは全く含有さ
れていなかった。
ナトリウム緩衝液pH8.0に対して透析し、同じ緩衝液で
平衡化したアプロチニン−セファロース（註）カラム
（直径3.0cm、高さ15cm）にトリプシン−セファロース
（註）カラム（直径30cm、高さ15cm）を連結させたカラ
ムを通過させた。アプロチニン−セファロースは0.5M塩
化ナトリウムを含む0.1M酢酸緩衝液（pH3.5）で溶出
し、HUKN−溶出液41mlを得た。トリプシン−セファロー
スカラムは0.5M塩化ナトリウムを含むグリシン塩酸緩衝
液pH2.6で溶出しHUTI−溶出液48mlを得た。得られたHUT
Iの総活性は69980阻害単位（回収率49％）純度は1320阻
害単位/mg（たん白質）であり、HUKNは全く含有されて
いなかった。HUKNの総活性は2084単位（回収率59％）純
度は825単位/mg（たん白質）であり、HUTIは全く含有さ
れていなかった。
なお実施例１〜４におけるHUTIの阻害単位は田中らの方
法（Blochimica et.Biophysica Acta705,192（1982））
を用いて測定した。ただし使用したトリプシンはシグマ
社製牛トリプシン タイプＩを用いた。
法（Blochimica et.Biophysica Acta705,192（1982））
を用いて測定した。ただし使用したトリプシンはシグマ
社製牛トリプシン タイプＩを用いた。
またHUKNは本発明者らが人尿から抽出精製したHUKNを血
管拡張測定法（J.Biochemistry58,201（1965））により
単位を決定しこれを標準品として螢光合成基質法（J.Bi
ochemistry82,1495（1977））により測定した。
管拡張測定法（J.Biochemistry58,201（1965））により
単位を決定しこれを標準品として螢光合成基質法（J.Bi
ochemistry82,1495（1977））により測定した。
単白質量はLowry−Folin法を用いて牛血清アルブミンを
標準にして測定した。
標準にして測定した。
（註）トリプシン−セファロースおよびアプロチン−セ
ファロースの調製 トリプシン−セファロースおよびアプロチニン−セファ
ロースはトリプシンtype I（シグマ社（米））、アプロ
チニン（シヨーエ社（仏））、CNBR活性化セファロース
4B（フアルマシア，ジャパン社）を用いてP.Cuatrecasa
sの方法（J.Biol.Chem.245,3059（1970））で調製し
た。
ファロースの調製 トリプシン−セファロースおよびアプロチニン−セファ
ロースはトリプシンtype I（シグマ社（米））、アプロ
チニン（シヨーエ社（仏））、CNBR活性化セファロース
4B（フアルマシア，ジャパン社）を用いてP.Cuatrecasa
sの方法（J.Biol.Chem.245,3059（1970））で調製し
た。
実施例５ 実施例３と同様にしてアンモニア水抽出液720mlを得
た。抽出液中のHUTIの総活性は93100阻害単位（回収率6
4％）、純度は311阻害単位/mg（たん白質）であり、HUK
Nの総活性は2698単位（回収率77％）、純度は9.0単位/m
g（たん白質）であった。この抽出液を0.5M塩化ナトリ
ウム、0.05Mリン酸緩衝液pH8.5に対して透析し、実施例
４で用いたアプロチニン−セファロースカラム、および
トリプシン−セファロースカラムを十分上記緩衝液で平
衝化したものに透析内液をアプロチニン−セファロース
ついてトリプシン−セファロースカラムの順序で通過さ
せた。アプロチニン−セファロースカラムは0.5M塩化ナ
トリウムを含む0.1M酢酸緩衝液（pH3.5）で溶出し、HUK
N溶出液46mlを得た。トリプシン−セファロースカラム
は0.5M塩化ナトリウムを含むグリシン塩酸緩衝液（pH2.
3）で溶出し、HUTI溶出液52mlを得た。得られたHUKN溶
液の総活性は2009単位（回収率57％）、純度は831単位/
mg（たん白質）であり、HUTIは全く含有されていない。
またHUTI溶液の総活性69520阻止単位（回収率48％）、
純度は1290阻害単位/mg（たんぱく質）で、HUKNは全く
含有されていない。
た。抽出液中のHUTIの総活性は93100阻害単位（回収率6
4％）、純度は311阻害単位/mg（たん白質）であり、HUK
Nの総活性は2698単位（回収率77％）、純度は9.0単位/m
g（たん白質）であった。この抽出液を0.5M塩化ナトリ
ウム、0.05Mリン酸緩衝液pH8.5に対して透析し、実施例
４で用いたアプロチニン−セファロースカラム、および
トリプシン−セファロースカラムを十分上記緩衝液で平
衝化したものに透析内液をアプロチニン−セファロース
ついてトリプシン−セファロースカラムの順序で通過さ
せた。アプロチニン−セファロースカラムは0.5M塩化ナ
トリウムを含む0.1M酢酸緩衝液（pH3.5）で溶出し、HUK
N溶出液46mlを得た。トリプシン−セファロースカラム
は0.5M塩化ナトリウムを含むグリシン塩酸緩衝液（pH2.
3）で溶出し、HUTI溶出液52mlを得た。得られたHUKN溶
液の総活性は2009単位（回収率57％）、純度は831単位/
mg（たん白質）であり、HUTIは全く含有されていない。
またHUTI溶液の総活性69520阻止単位（回収率48％）、
純度は1290阻害単位/mg（たんぱく質）で、HUKNは全く
含有されていない。
試験例 プールされた正常男子新鮮尿を塩酸でpH5.5に設定して
６等分し、キトサンをそれぞれ0.5、1.0、1.5、2.0、2.
5、3.0％（W/W）加え１時間攪はんした後３％アンモニ
ア水で溶出し、溶出液を中和後トリプシンインヒビター
及びカリクレインの活性を測定した。その結果を表−２
に示す。
６等分し、キトサンをそれぞれ0.5、1.0、1.5、2.0、2.
5、3.0％（W/W）加え１時間攪はんした後３％アンモニ
ア水で溶出し、溶出液を中和後トリプシンインヒビター
及びカリクレインの活性を測定した。その結果を表−２
に示す。
（発明の効果） 本発明によれば、キトサンを吸着体として用いることに
よりHUTIおよびHUKNを選択的に吸着させることができる
ばかりでなく吸着体の分離，洗浄，溶出を従来の方法に
おけるよりも短時間に行うことができ大量の尿を処理す
る場合に極めて有利である。
よりHUTIおよびHUKNを選択的に吸着させることができる
ばかりでなく吸着体の分離，洗浄，溶出を従来の方法に
おけるよりも短時間に行うことができ大量の尿を処理す
る場合に極めて有利である。
また使用したキトサンは溶出後、水洗するだけで再使用
することができる。
することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭59−6883（ＪＰ，Ａ) 「医学と生物学」第100巻第１号37−39 頁（1980年１月10日)
Claims (5)
- 【請求項１】人尿に２％（W/Ｖ）以上、好ましくは２〜
３％（W/Ｖ）のキトサンをpH4.5〜6.5で接触させて尿中
のトリプシンインヒビターとカリクレインを同時にキト
サンに吸着させ、次いで吸着体からアルカリ性水溶液で
トリプシンインヒビターとカリクレインを同時に溶出
し、所望により、溶出液から上記両成分を分離すること
を特徴とする人尿トリプシンインヒビターおよび人尿カ
リクレインの濃縮分離方法。 - 【請求項２】アルカリ性水溶液のpHが10.5〜12.0である
特許請求の範囲第１項記載の方法。 - 【請求項３】人尿にキトサンを２％（W/V）以上、好ま
しくは２〜３％（W/V）接触させ、次いで吸着体から溶
出をpH10.5〜12.0のアルカリ性水溶液で行う特許請求の
範囲第１項記載の方法。 - 【請求項４】アルカリ性水溶液がアンモニア水である特
許請求の範囲第１項，第２項または第３項記載の方法。 - 【請求項５】両成分の分離をアフイニテイクロマトグラ
フィーによって行う特許請求の範囲第１項記載の方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59116861A JPH0723397B2 (ja) | 1984-06-06 | 1984-06-06 | 人尿トリプシンインヒビターおよび人尿カリクレインの濃縮分離方法 |
| EP86304066A EP0247258B1 (en) | 1984-06-06 | 1986-05-28 | Process for concentrating and separating trypsin inhibitor and kallidinogenase in human urine |
| US07/104,634 US4780209A (en) | 1984-06-06 | 1987-10-02 | Process for concentrating and separating trypsin inhibitor and kallidinogenase in human urine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59116861A JPH0723397B2 (ja) | 1984-06-06 | 1984-06-06 | 人尿トリプシンインヒビターおよび人尿カリクレインの濃縮分離方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60260518A JPS60260518A (ja) | 1985-12-23 |
| JPH0723397B2 true JPH0723397B2 (ja) | 1995-03-15 |
Family
ID=14697441
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59116861A Expired - Fee Related JPH0723397B2 (ja) | 1984-06-06 | 1984-06-06 | 人尿トリプシンインヒビターおよび人尿カリクレインの濃縮分離方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0247258B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0723397B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4780209A (en) * | 1984-06-06 | 1988-10-25 | Japan Chemical Research Co., Ltd. | Process for concentrating and separating trypsin inhibitor and kallidinogenase in human urine |
| CN102787111A (zh) * | 2012-07-24 | 2012-11-21 | 济南维尔康生化制药有限公司 | 一种高纯度胰激肽原酶的制备工艺 |
-
1984
- 1984-06-06 JP JP59116861A patent/JPH0723397B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1986
- 1986-05-28 EP EP86304066A patent/EP0247258B1/en not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 「医学と生物学」第１００巻第１号３７−３９頁（１９８０年１月１０日） |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0247258A1 (en) | 1987-12-02 |
| JPS60260518A (ja) | 1985-12-23 |
| EP0247258B1 (en) | 1991-03-06 |
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