JPS5889184A - 人尿中のカリクレインの精製法 - Google Patents
人尿中のカリクレインの精製法Info
- Publication number
- JPS5889184A JPS5889184A JP56188744A JP18874481A JPS5889184A JP S5889184 A JPS5889184 A JP S5889184A JP 56188744 A JP56188744 A JP 56188744A JP 18874481 A JP18874481 A JP 18874481A JP S5889184 A JPS5889184 A JP S5889184A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- kallikrein
- human urine
- water
- agmatine
- benzamidine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は人尿からカリクレインを収率よくかつ低経費で
高純度に精製する方法に関するものである。
高純度に精製する方法に関するものである。
カリクレインは血漿中のキニノーゲンに作用してキニン
を特異的に遊離させる酵素であり、種々の組織や体液す
な朴ち顎下腺、汗腺、唾液腺、肝瞼、小腸、血清、尿な
どに分布していることが知られている。その薬理作用と
して平滑筋収縮作用、毛細血管透過性亢進作用、血管拡
張作用、血圧降下作用、白血球凝集作用、−疼痛誌発作
用、カテコールア之ン分泌作用等を示す。カリクレイン
製剤は各領域にわたって広く使用されている有用な医薬
品であり、内科領域では脳血管障害、冠動脈性心臓疾患
及び高血圧症等の治療に使用され、外科領域では種々の
原因に依る四肢木棺血行障害の治療に使用され、眼科領
域では網膜末梢血管拡張及び眼底血圧降下等に使用され
、さらに耳鼻科領域ではメニエル症候群や神経性耳鳴等
の治療に使用されている。
を特異的に遊離させる酵素であり、種々の組織や体液す
な朴ち顎下腺、汗腺、唾液腺、肝瞼、小腸、血清、尿な
どに分布していることが知られている。その薬理作用と
して平滑筋収縮作用、毛細血管透過性亢進作用、血管拡
張作用、血圧降下作用、白血球凝集作用、−疼痛誌発作
用、カテコールア之ン分泌作用等を示す。カリクレイン
製剤は各領域にわたって広く使用されている有用な医薬
品であり、内科領域では脳血管障害、冠動脈性心臓疾患
及び高血圧症等の治療に使用され、外科領域では種々の
原因に依る四肢木棺血行障害の治療に使用され、眼科領
域では網膜末梢血管拡張及び眼底血圧降下等に使用され
、さらに耳鼻科領域ではメニエル症候群や神経性耳鳴等
の治療に使用されている。
カリクレインの回収法は従来からきわめて多数の方法が
提案されてきたが、従来の方法は操作がＷＭであり、収
率や経費において必ずしも十分ではなかった。このため
人尿からのカリクレイン製剤は比較的高価であり、従来
の方法はカリクレイン製剤の工業的−法として満足でき
るものではなかった。
提案されてきたが、従来の方法は操作がＷＭであり、収
率や経費において必ずしも十分ではなかった。このため
人尿からのカリクレイン製剤は比較的高価であり、従来
の方法はカリクレイン製剤の工業的−法として満足でき
るものではなかった。
うとするものである。
人尿中には通常カリクレインと共にカリクレイン以外の
蛋白質分解酵素、例えばつ田キナーゼ、トリプシン、プ
ラスミン、キニン分解酵素等が存在する。また、発熱性
物質、血液型物質、血液凝固に影響を及ぼす物質などの
生理活性物質、並びにアルブミン、グミプリン等の血漿
由来蛋白質も存在する。
蛋白質分解酵素、例えばつ田キナーゼ、トリプシン、プ
ラスミン、キニン分解酵素等が存在する。また、発熱性
物質、血液型物質、血液凝固に影響を及ぼす物質などの
生理活性物質、並びにアルブミン、グミプリン等の血漿
由来蛋白質も存在する。
本発明は人尿とコロイド性含水ケイ酸アルにウムヲｐ
Ｈ４，０〜６．０にて接触させ、コーイド性 −含水ケ
イ酸アルミニウムにカリクレイン以外の蛋白質分解酵素
を完全に吸着させて上清を分離し、この上清に水不溶性
担体に結合させたアルギニン、アグマチン、リジン又は
ベンズアミジン等ｔｐＨ６，５〜９．５に接触させてカ
リクレインを特異的に吸着させ、濾過および洗浄により
カリクレイン以外の生理活性物質や血漿由来蛋白質を除
去したののである。
Ｈ４，０〜６．０にて接触させ、コーイド性 −含水ケ
イ酸アルミニウムにカリクレイン以外の蛋白質分解酵素
を完全に吸着させて上清を分離し、この上清に水不溶性
担体に結合させたアルギニン、アグマチン、リジン又は
ベンズアミジン等ｔｐＨ６，５〜９．５に接触させてカ
リクレインを特異的に吸着させ、濾過および洗浄により
カリクレイン以外の生理活性物質や血漿由来蛋白質を除
去したののである。
本発明は腐敗していない新鮮な人尿を原料とし、人尿は
そのｐＨが５．５〜９であれはそのま一使用してもよい
が、ｐＨを４． ＯＬ ６．０に調整しておくのが好ま
しい。また尿中の浮遊物およびｐＨの調整時に生ずる沈
殿物は常法例えは廊心分漸、濾過、透析などの処理で除
去しておく。本発明に用いるコロイド性含水ケイ酸アル
ミニウムは人尿がら、カリクレイン以外の蛋白質分解酵
素を選択的にｙｋｍする機能を有し、ｐ Ｈ４，０〜６
．０において人尿中のカリクレイン以外の蛋白質分解酵
素は約９６〜１００％か吸着される。このコロイド性含
水ケイ酸アルミニウムとは５１０ｇとＡ／２０３を主と
し、ＳｉＯ！ ／ Ａ／！０３の比が４．４〜７．７（
平均５．９）からなる化合物である。使用量は原料酸の
１１に対して５０〜ｓ ｏ ｏ ｔ、−ｒｑで十分であ
るが、数置の問題を別にすればこれ以上多く使用しても
よい。
そのｐＨが５．５〜９であれはそのま一使用してもよい
が、ｐＨを４． ＯＬ ６．０に調整しておくのが好ま
しい。また尿中の浮遊物およびｐＨの調整時に生ずる沈
殿物は常法例えは廊心分漸、濾過、透析などの処理で除
去しておく。本発明に用いるコロイド性含水ケイ酸アル
ミニウムは人尿がら、カリクレイン以外の蛋白質分解酵
素を選択的にｙｋｍする機能を有し、ｐ Ｈ４，０〜６
．０において人尿中のカリクレイン以外の蛋白質分解酵
素は約９６〜１００％か吸着される。このコロイド性含
水ケイ酸アルミニウムとは５１０ｇとＡ／２０３を主と
し、ＳｉＯ！ ／ Ａ／！０３の比が４．４〜７．７（
平均５．９）からなる化合物である。使用量は原料酸の
１１に対して５０〜ｓ ｏ ｏ ｔ、−ｒｑで十分であ
るが、数置の問題を別にすればこれ以上多く使用しても
よい。
コロイド性含水ケイ酸アルミニウムは前処理として十分
に洗浄したのち必ａｍを人尿中に添加し、を中に含まれ
ているカリクレイン以外の蛋白質分解酵素を吸着させる
。接触時間は約３０分から５時間であり、処理法はカラ
ムク田マド法でもよいがバッチ法で十分であり、バッチ
法の場合は撹拌する。処理温度は室温でよいが、より好
ましくは５〜３０℃である。吸着が十分に行われたのち
、傾斜法又は遠心分離により吸着剤と上清を分離する。
に洗浄したのち必ａｍを人尿中に添加し、を中に含まれ
ているカリクレイン以外の蛋白質分解酵素を吸着させる
。接触時間は約３０分から５時間であり、処理法はカラ
ムク田マド法でもよいがバッチ法で十分であり、バッチ
法の場合は撹拌する。処理温度は室温でよいが、より好
ましくは５〜３０℃である。吸着が十分に行われたのち
、傾斜法又は遠心分離により吸着剤と上清を分離する。
分離されたコロイド性含水ケイ酸アルミニウムは洗浄し
たのち再使用する。
たのち再使用する。
吸着剤を分離した上清はカリクレインを精製する原料と
して使用される。この上清はそのまま又は遠心分離を行
なったのち、ｐＨを６．５〜９．５好ましくはｐＨ８〜
９．５に調整する。この上清に水不溶性担体に結合させ
たアルギニン、アグマチン、リジン又はベンズアミジン
等を接触させる。ここに水不溶性担体はアガロース特に
メチレン鎖をスペーサとして有するアガｐ−スが好まし
いが、奈知の他の水不溶性担体でもよい。このカリクレ
イン親和性水不溶性担体は洗浄してｐ Ｈ６，５〜９．
５に調製し、好ましくはこの範囲のｐＨを有する緩働液
で平衡化したのち、パッチ法又はカラムクロマトグラフ
ィー法によってカリクレインを含有する前記上清に接触
させる。接触条件として時間は約３０分から２０時間、
温度は室温でよいが好ましくは５〜３０℃である。使用
量はカリクレインを含む上清１０／に対して約０．５〜
１０ｗｔ１であり、カリクレインを吸着したのち、パッ
チ法の場合は傾斜法又は遠心分離により吸着体を回収し
、カラムクｐ！Ｆ法の場合はカラムを洗浄したのち、溶
離用緩被液で吸着体からカリクレインを溶出させる。
して使用される。この上清はそのまま又は遠心分離を行
なったのち、ｐＨを６．５〜９．５好ましくはｐＨ８〜
９．５に調整する。この上清に水不溶性担体に結合させ
たアルギニン、アグマチン、リジン又はベンズアミジン
等を接触させる。ここに水不溶性担体はアガロース特に
メチレン鎖をスペーサとして有するアガｐ−スが好まし
いが、奈知の他の水不溶性担体でもよい。このカリクレ
イン親和性水不溶性担体は洗浄してｐ Ｈ６，５〜９．
５に調製し、好ましくはこの範囲のｐＨを有する緩働液
で平衡化したのち、パッチ法又はカラムクロマトグラフ
ィー法によってカリクレインを含有する前記上清に接触
させる。接触条件として時間は約３０分から２０時間、
温度は室温でよいが好ましくは５〜３０℃である。使用
量はカリクレインを含む上清１０／に対して約０．５〜
１０ｗｔ１であり、カリクレインを吸着したのち、パッ
チ法の場合は傾斜法又は遠心分離により吸着体を回収し
、カラムクｐ！Ｆ法の場合はカラムを洗浄したのち、溶
離用緩被液で吸着体からカリクレインを溶出させる。
浴出はアルギニン、アグマチン、リジンをリガンドとす
る水不溶性担体を用いる場合は、０．３〜０．６Ｍ塩化
す） ＩＪウムを含有する中性付近の水溶液で行なうの
が良好であり、ベンズアミジンをリガンドとする水不溶
性担体を用いる場合は、０．３〜０，６Ｍ塩化ナトリウ
ムを含有する酸性水溶液で行なうのが良好である。中性
付近の水溶液としては例えばｐＨ７〜９のリン酸［８Ｗ
ｔ液又はトリス−塩＃Ｉ緩衝液等が用いられ、酸性水溶
液としてはｐＨ３．５〜５のグリシン−塩酸緩衝液又は
酢酸緩衝液等が用いら−れる。このようにして得た溶出
液は純度の高いカリクレインを多量に含有しており、こ
“の溶出液を脱塩して目的とするカリクレインを回収す
る。なお人尿中に混入しているかも知れない肝炎ウィル
スを不活化するための加熱処理を精製工程に加えてもよ
い。
る水不溶性担体を用いる場合は、０．３〜０．６Ｍ塩化
す） ＩＪウムを含有する中性付近の水溶液で行なうの
が良好であり、ベンズアミジンをリガンドとする水不溶
性担体を用いる場合は、０．３〜０，６Ｍ塩化ナトリウ
ムを含有する酸性水溶液で行なうのが良好である。中性
付近の水溶液としては例えばｐＨ７〜９のリン酸［８Ｗ
ｔ液又はトリス−塩＃Ｉ緩衝液等が用いられ、酸性水溶
液としてはｐＨ３．５〜５のグリシン−塩酸緩衝液又は
酢酸緩衝液等が用いら−れる。このようにして得た溶出
液は純度の高いカリクレインを多量に含有しており、こ
“の溶出液を脱塩して目的とするカリクレインを回収す
る。なお人尿中に混入しているかも知れない肝炎ウィル
スを不活化するための加熱処理を精製工程に加えてもよ
い。
本発明により人尿に含有されるカリクレインを収率よく
かつ高純度に回収することができ、かつ安価なリガンド
を水不溶性担体に結合して繰返し使用するからカリクレ
インの精製に要する鮭費を大巾に節約でき、人尿中のカ
リ−・フレインの工業的製法として満足しうるものであ
る。また回収したカリクレインは他の蛋白質分解酵素や
生理活性物質を全く含有しておらず、医療分野における
価値は極めて高い。
かつ高純度に回収することができ、かつ安価なリガンド
を水不溶性担体に結合して繰返し使用するからカリクレ
インの精製に要する鮭費を大巾に節約でき、人尿中のカ
リ−・フレインの工業的製法として満足しうるものであ
る。また回収したカリクレインは他の蛋白質分解酵素や
生理活性物質を全く含有しておらず、医療分野における
価値は極めて高い。
本発明による人尿からのカリクレインの回収率は５０〜
７５％であり、得られたカリクレインの比活性は６００
〜７３０ ＫＵ／Ａ２８Ｇ （ＫＵ ： カリクレイン
単位、Ｆｒｅｙ、Ｂ、に、 、Ｋｒａｕｔ、Ｈ，、ａｎ
ｄ Ｗｅｒｌｅ、ＩＣ，、１９５０、’ ＫａｌｌＩＫ
ｒｅｉｎ 、 Ｐａｄｔｉｎ ’ 、 ＥｎＫｅ Ｖｅ
ｒｌｍｇ。
７５％であり、得られたカリクレインの比活性は６００
〜７３０ ＫＵ／Ａ２８Ｇ （ＫＵ ： カリクレイン
単位、Ｆｒｅｙ、Ｂ、に、 、Ｋｒａｕｔ、Ｈ，、ａｎ
ｄ Ｗｅｒｌｅ、ＩＣ，、１９５０、’ ＫａｌｌＩＫ
ｒｅｉｎ 、 Ｐａｄｔｉｎ ’ 、 ＥｎＫｅ Ｖｅ
ｒｌｍｇ。
Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ ）で１゛その純度はポリアクリル
アミドゲルのディスク電気泳動（Ｄａｖｉｇ、０．．１
９６４． Ａｎｎ、Ｎ、Ｙ、Ａｃａｄ、ＳｃＩ １１
１１２１ 、 Ａｒｔ 、２．３０５）により８５〜１
００−％であった。
アミドゲルのディスク電気泳動（Ｄａｖｉｇ、０．．１
９６４． Ａｎｎ、Ｎ、Ｙ、Ａｃａｄ、ＳｃＩ １１
１１２１ 、 Ａｒｔ 、２．３０５）により８５〜１
００−％であった。
なおりリフレイン活性の測定はＨ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｌ−Ｌ
ｅｕ −Ｌ −Ａｒｇ−Ｐ−ｎｉｔｒｏｍｎｉｌｉｄｅ
（Ｔｅｓｔｚｙｍｅ Ｓ−２２６６、Ｋｍｂｉ ＤＩ
ａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｗｅｄｅｎ）を基質として行なっ
た。この基質は人尿由来のカリクレインに特異性の高い
基質であることが知られている。
ｅｕ −Ｌ −Ａｒｇ−Ｐ−ｎｉｔｒｏｍｎｉｌｉｄｅ
（Ｔｅｓｔｚｙｍｅ Ｓ−２２６６、Ｋｍｂｉ ＤＩ
ａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｗｅｄｅｎ）を基質として行なっ
た。この基質は人尿由来のカリクレインに特異性の高い
基質であることが知られている。
しかじ人尿中のカリクレイン以外の蛋白質分解酵素によ
っても分解を受けるため、正確にカリクレインのみを定
量するとはいえない。そこで反応系にＳ Ｂ Ｔ Ｉ
（５ｏｙｂｅａｎ ｔｒｙｐｓｌｎ １ｎｈｉｂｉ
ｔｏｒ）及びアプロチニンを添加してこれらをコントロ
ールとした。すなわちカリクレインは５ＢＴＩに阻害さ
れないが、アプロチニンには阻害される。これに対して
人尿中に存在することが知られているウロキナーゼは５
ＢＴＩとアプロチニンの両方に阻害を受けず、又トリプ
シン等の多くの蛋白質分解量は５ＢＴＩにより阻害され
る。このようにカリクレインに特異性の高い基質を用い
るのに加えて、カリタレインを特異的に定量する測定条
件を用しすることにより、カリクレインを正確に定量す
ると共にカリクレイン以外の蛋白質分解酵素につし）て
も正確に定量した。
っても分解を受けるため、正確にカリクレインのみを定
量するとはいえない。そこで反応系にＳ Ｂ Ｔ Ｉ
（５ｏｙｂｅａｎ ｔｒｙｐｓｌｎ １ｎｈｉｂｉ
ｔｏｒ）及びアプロチニンを添加してこれらをコントロ
ールとした。すなわちカリクレインは５ＢＴＩに阻害さ
れないが、アプロチニンには阻害される。これに対して
人尿中に存在することが知られているウロキナーゼは５
ＢＴＩとアプロチニンの両方に阻害を受けず、又トリプ
シン等の多くの蛋白質分解量は５ＢＴＩにより阻害され
る。このようにカリクレインに特異性の高い基質を用い
るのに加えて、カリタレインを特異的に定量する測定条
件を用しすることにより、カリクレインを正確に定量す
ると共にカリクレイン以外の蛋白質分解酵素につし）て
も正確に定量した。
次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。
実施例１
成人男子より採集した新鮮尿約ｘｓｏｔｔｐＨ５，０に
調整し、蒸留水で洗浄したコロイド性含水ケイ酸アルミ
ニウム（乾燥重量５０Ｆ）と接触させる。室温で約１時
間撹拌して十分に接触させたのち、遠心分離により上清
を採取する。上清１３０１にトリス（ヒドロキシメチル
）アミノメタン７８７Ｆを加えて溶かし、３Ｎ−ＨＣ／
にてｐＨ８，５に調部する。
調整し、蒸留水で洗浄したコロイド性含水ケイ酸アルミ
ニウム（乾燥重量５０Ｆ）と接触させる。室温で約１時
間撹拌して十分に接触させたのち、遠心分離により上清
を採取する。上清１３０１にトリス（ヒドロキシメチル
）アミノメタン７８７Ｆを加えて溶かし、３Ｎ−ＨＣ／
にてｐＨ８，５に調部する。
次に０．０５Ｍの） Ｑス塩酸緩衝液でｐ Ｈ８，５に
平衡化した１３Ｇ−のアルギニン・ヘキサメチレンセフ
ァローズ４Ｂを加え、室温で２０時間撹拌して吸着反応
を行なう。反応液を濾過してゲルをカラムに充填したの
ち、ｐ ｉｆ ８．５の０．０５Ｍ）リスー塩酸緩徴液
でカラムを洗浄し、ｐＨ８，５の０．５Ｍ塩化す） １
３ウム添加０．０５ Ｍ ） ｌｊスス−酸緩衝液によ
りカリクレインを溶出さセる。このようにして純度９２
％の人尿由来のカリクレインを７０％の収率で回収し、
その比活性は約７００ ＫＵ／Ａ２８０であった。
平衡化した１３Ｇ−のアルギニン・ヘキサメチレンセフ
ァローズ４Ｂを加え、室温で２０時間撹拌して吸着反応
を行なう。反応液を濾過してゲルをカラムに充填したの
ち、ｐ ｉｆ ８．５の０．０５Ｍ）リスー塩酸緩徴液
でカラムを洗浄し、ｐＨ８，５の０．５Ｍ塩化す） １
３ウム添加０．０５ Ｍ ） ｌｊスス−酸緩衝液によ
りカリクレインを溶出さセる。このようにして純度９２
％の人尿由来のカリクレインを７０％の収率で回収し、
その比活性は約７００ ＫＵ／Ａ２８０であった。
実施例２
実施例１と同じコロイド性含水ケイ酸アルミニウム処理
を行なったのち、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメ
タン７８７ｆおよび塩化ナト９ウム３，０４０Ｆを加え
て溶かし、３Ｎ−ＩＣ／にてｐＨ９，０に調整する。次
に、ｏ、４ｙｔ墳化ナトリウム添加０．０５Ｍ）リス−
塩酸緩衝液でｐ −Ｈ９，０に平衡化した１’００ＷＴ
！のベンズアミジン・ヘキサメチレンセファロ−ズ４Ｂ
をＪＪ［Ｉえ、室温で８時間撹拌して吸着反応を行なう
。反応液をｔＰ戯してゲルをカラムに充填したのち、ｐ
Ｈ９，０の０．４Ｍ塩化すＦリウム添加０．０５Ｍ）リ
スー塩ｔｎ＊＠液でカラムを洗浄し、ｐＨ４，０の０゜
５Ｍ＃Ａ化ナトリウム添加０．１Ｍダリシンー塩酸緩゛
衡液によりカリクレインを溶出させる。この上りにして
純度９５％の人尿由゛来のカリタレインを７５憾の収率
で回収し、その比活性は約７５０ＫＵ／Ａ！８０であっ
た。
を行なったのち、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメ
タン７８７ｆおよび塩化ナト９ウム３，０４０Ｆを加え
て溶かし、３Ｎ−ＩＣ／にてｐＨ９，０に調整する。次
に、ｏ、４ｙｔ墳化ナトリウム添加０．０５Ｍ）リス−
塩酸緩衝液でｐ −Ｈ９，０に平衡化した１’００ＷＴ
！のベンズアミジン・ヘキサメチレンセファロ−ズ４Ｂ
をＪＪ［Ｉえ、室温で８時間撹拌して吸着反応を行なう
。反応液をｔＰ戯してゲルをカラムに充填したのち、ｐ
Ｈ９，０の０．４Ｍ塩化すＦリウム添加０．０５Ｍ）リ
スー塩ｔｎ＊＠液でカラムを洗浄し、ｐＨ４，０の０゜
５Ｍ＃Ａ化ナトリウム添加０．１Ｍダリシンー塩酸緩゛
衡液によりカリクレインを溶出させる。この上りにして
純度９５％の人尿由゛来のカリタレインを７５憾の収率
で回収し、その比活性は約７５０ＫＵ／Ａ！８０であっ
た。
実施例３
実施例１と同じコロイド性含水ケイ酸アルミニウム処理
を行なったのち、カリタレインの有効画分をｐ Ｈ７，
８に調整し、このものを限外分子量１０．０００の水田
−フアイバーを用いて１００倍に濃縮し、６０℃で１０
時間の加熱処理を行なう。
を行なったのち、カリタレインの有効画分をｐ Ｈ７，
８に調整し、このものを限外分子量１０．０００の水田
−フアイバーを用いて１００倍に濃縮し、６０℃で１０
時間の加熱処理を行なう。
次にトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−７，９
Ｆを加えて溶解し、以下実施例１と同じアルギニン・ヘ
キサメチレンセファロース４Ｂ処ｊｌｔ行なう。得られ
たカリクレインの収率は６５襲、比活性は７００ ＫＵ
／Ａ ２ｇＧであった。
Ｆを加えて溶解し、以下実施例１と同じアルギニン・ヘ
キサメチレンセファロース４Ｂ処ｊｌｔ行なう。得られ
たカリクレインの収率は６５襲、比活性は７００ ＫＵ
／Ａ ２ｇＧであった。
出願人 株式会社ミドリ十字
１、事件の表示 待顧昭５６−１８８７４４ｖ２、発明
の名称 人１減中のカリクレインの精製法３、補正す
る者 事件との関係 出 願 人 株式会社ミドリ十字 ４代理人 ５、指令又は通知の日付臼 発 昭和 年 月
日６、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ７、補正の内容
の名称 人１減中のカリクレインの精製法３、補正す
る者 事件との関係 出 願 人 株式会社ミドリ十字 ４代理人 ５、指令又は通知の日付臼 発 昭和 年 月
日６、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ７、補正の内容
Claims (1)
- 人尿とコロイド性含水ケイ酸アルミニウムをｐＨ４，０
〜６．０にて接触させ、カリクレイン以外の蛋白質分解
酵素を含水性ケイ酸アルミニウムに吸着させて上清を分
離し、この上清に水不溶性担体に結合させたアルギニン
、アグマチン、リジン又はベンズアミジン等をｐ Ｈ６
，５〜９．５にて接触させてカリクレインを特異的に吸
着させ、吸着されたカリクレインを親和性担体から溶出
させて回収することを特徴とする人尿中のカリクレイン
の精製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56188744A JPS5889184A (ja) | 1981-11-24 | 1981-11-24 | 人尿中のカリクレインの精製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56188744A JPS5889184A (ja) | 1981-11-24 | 1981-11-24 | 人尿中のカリクレインの精製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5889184A true JPS5889184A (ja) | 1983-05-27 |
Family
ID=16229007
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56188744A Pending JPS5889184A (ja) | 1981-11-24 | 1981-11-24 | 人尿中のカリクレインの精製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5889184A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62201827A (ja) * | 1986-02-28 | 1987-09-05 | Green Cross Corp:The | 免疫グロブリンの製造方法 |
| US9856459B2 (en) | 2006-07-14 | 2018-01-02 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Adsorptive membranes for trapping viruses |
-
1981
- 1981-11-24 JP JP56188744A patent/JPS5889184A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62201827A (ja) * | 1986-02-28 | 1987-09-05 | Green Cross Corp:The | 免疫グロブリンの製造方法 |
| US9856459B2 (en) | 2006-07-14 | 2018-01-02 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Adsorptive membranes for trapping viruses |
| US10316296B2 (en) | 2006-07-14 | 2019-06-11 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Adsorptive membranes for trapping viruses |
| US10604742B2 (en) | 2006-07-14 | 2020-03-31 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Adsorptive membranes for trapping viruses |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Proksch et al. | The purification of the trypsin inhibitor from human pregnancy urine | |
| JPH04211372A (ja) | 改良されたトロンビンの製造方法およびそれにより得られた高純度トロンビン調製物 | |
| JPS6262153B2 (ja) | ||
| JP2651307B2 (ja) | 血液凝固ｉｘ因子を含有する複合体 | |
| US5097019A (en) | Pharmaceutical containing tissue protein pp4, a process for the preparation of pp4 and for the pasteurization thereof, and the use of pp4 | |
| US4442213A (en) | Process for the preparation of plasminogen and plasminogen thus prepared | |
| JP2507339B2 (ja) | 粗ｔＰＡの精製方法 | |
| CA2105282C (en) | Preparation of factor ix | |
| JPH05279396A (ja) | 第ｖｉｉｉ因子の精製法と、それによって得られた調製品 | |
| JPH053480B2 (ja) | ||
| JP3471379B2 (ja) | ヒトアンチトロンビン−ｉｉｉの調製方法 | |
| US5831025A (en) | Human activated protein C and process for preparing same | |
| Wang et al. | Purification of human lysozyme from milk and pancreatic juice | |
| JPS5889184A (ja) | 人尿中のカリクレインの精製法 | |
| US4780209A (en) | Process for concentrating and separating trypsin inhibitor and kallidinogenase in human urine | |
| US4510248A (en) | Process for concentrating and purifying human urinary kallikrein | |
| JPS6337088B2 (ja) | ||
| EP0247258B1 (en) | Process for concentrating and separating trypsin inhibitor and kallidinogenase in human urine | |
| JPH0141310B2 (ja) | ||
| JPH0725696B2 (ja) | プラスミノ−ゲンの安定化方法 | |
| CA1335186C (en) | Method for purifying tissue plasminogen activator | |
| US3542646A (en) | Process for fractionally obtaining urokinase and blood coagulation accelerator in human urine | |
| JP4105249B2 (ja) | α２プラスミンインヒビターの製造方法 | |
| JPS6140392B2 (ja) | ||
| RU2221578C1 (ru) | Способ получения очищенного активированного фактора x свертывания крови |