JP3315158B2 - グルタチオンの精製法 - Google Patents
グルタチオンの精製法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はグルタチオンの精製法に
関するものである。一般にグルタチオンは酵母及び動物
の肝臓などに広く分布しており、生体内の酸化還元系に
関与しているトリペプタイドで、肝機能回復作用や解毒
作用などの重要な役割を果たす医薬上極めて有用な物質
である。
関するものである。一般にグルタチオンは酵母及び動物
の肝臓などに広く分布しており、生体内の酸化還元系に
関与しているトリペプタイドで、肝機能回復作用や解毒
作用などの重要な役割を果たす医薬上極めて有用な物質
である。
【０００２】
【従来の技術】従来、グルタチオンの精製法としては以
下の方法が知られている。 １）硫酸酸性下亜酸化銅と銅塩を形成させる方法。 ２）強酸性陽イオン交換樹脂に吸着させ、酸または塩に
より溶離する方法（特公昭４４−２３９号、特公昭４５
−４７５５号、特公昭４６−２８３８号）。 ３）弱塩基性陰イオン交換樹脂を通過させる方法（特公
昭４５−２７７９７号） ４）スチレン−ジビニルベンゼン共重合体よりなる多孔
性非極性樹脂を使用する方法（特開昭４９−１２６８８
９号、特開昭５２−１００４２１号）。 ５）弱塩基性陰イオン交換樹脂に吸着後、酢酸で溶離す
る方法（特開昭６１−２８２３９７号）。
下の方法が知られている。 １）硫酸酸性下亜酸化銅と銅塩を形成させる方法。 ２）強酸性陽イオン交換樹脂に吸着させ、酸または塩に
より溶離する方法（特公昭４４−２３９号、特公昭４５
−４７５５号、特公昭４６−２８３８号）。 ３）弱塩基性陰イオン交換樹脂を通過させる方法（特公
昭４５−２７７９７号） ４）スチレン−ジビニルベンゼン共重合体よりなる多孔
性非極性樹脂を使用する方法（特開昭４９−１２６８８
９号、特開昭５２−１００４２１号）。 ５）弱塩基性陰イオン交換樹脂に吸着後、酢酸で溶離す
る方法（特開昭６１−２８２３９７号）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来提
案された上記１）〜４）の方法によるグルタチオンの精
製は、不純物であるシステインやγ−グルタミルシステ
インを除去できないという欠点があり、一方、５）の方
法は精製は十分に行えるものの、溶離液として酢酸水溶
液を使用するため、結晶化時に酢酸が大量に含有される
という欠点があった。
案された上記１）〜４）の方法によるグルタチオンの精
製は、不純物であるシステインやγ−グルタミルシステ
インを除去できないという欠点があり、一方、５）の方
法は精製は十分に行えるものの、溶離液として酢酸水溶
液を使用するため、結晶化時に酢酸が大量に含有される
という欠点があった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは酢酸を含有
しない高純度のグルタチオンを工業的に製造する方法に
おいて鋭意研究を行った結果、ポリアミンをイオン交換
基とする弱塩基性陰イオン交換樹脂にグルタチオンを含
む液を通すことにより、酢酸を含有しない高純度のグル
タチオンを取得することが可能であることを見出し、本
発明を完成するに至ったものである。即ち、本発明は酢
酸を含有しないか、もしくは酢酸含量が極めて低い、高
純度のグルタチオンの精製法を提供するものである。
しない高純度のグルタチオンを工業的に製造する方法に
おいて鋭意研究を行った結果、ポリアミンをイオン交換
基とする弱塩基性陰イオン交換樹脂にグルタチオンを含
む液を通すことにより、酢酸を含有しない高純度のグル
タチオンを取得することが可能であることを見出し、本
発明を完成するに至ったものである。即ち、本発明は酢
酸を含有しないか、もしくは酢酸含量が極めて低い、高
純度のグルタチオンの精製法を提供するものである。
【０００５】以下本発明について詳しく述べる。本発明
に使用されるグルタチオン含有液は、酵母などの微生物
よりの抽出液、サルベージ合成により得られる反応液ま
たはそれらの部分精製液等生化学的反応により得られる
グルタチオン含有液であればいずれにも用いられる。本
発明に用いられる一段目の弱塩基性陰イオン交換樹脂
は、イオン交換基が３級アミンを有するものが好まし
く、更に、弱塩基性陰イオン交換樹脂のイオン形は酢酸
形、ギ酸形、遊離形またはそれらの混合形が用いられ
る。中でも酢酸形または酢酸形と遊離形との混合形が特
に好ましい。硫酸形及び塩酸形の場合はグルタチオンを
殆ど吸着せず好ましくない。酢酸を除くための二段目の
弱塩基性陰イオン交換樹脂は、イオン交換基がポリアミ
ンであり、そのイオン形は遊離形である。使用されるイ
オン交換樹脂の例としては、ダウエックスＷＧＲ−２
（ダウケミカル社製）、アンバーライトＩＲＡ−６０Ｅ
（ロームアンドハース社製）等を挙げることが出来る。
に使用されるグルタチオン含有液は、酵母などの微生物
よりの抽出液、サルベージ合成により得られる反応液ま
たはそれらの部分精製液等生化学的反応により得られる
グルタチオン含有液であればいずれにも用いられる。本
発明に用いられる一段目の弱塩基性陰イオン交換樹脂
は、イオン交換基が３級アミンを有するものが好まし
く、更に、弱塩基性陰イオン交換樹脂のイオン形は酢酸
形、ギ酸形、遊離形またはそれらの混合形が用いられ
る。中でも酢酸形または酢酸形と遊離形との混合形が特
に好ましい。硫酸形及び塩酸形の場合はグルタチオンを
殆ど吸着せず好ましくない。酢酸を除くための二段目の
弱塩基性陰イオン交換樹脂は、イオン交換基がポリアミ
ンであり、そのイオン形は遊離形である。使用されるイ
オン交換樹脂の例としては、ダウエックスＷＧＲ−２
（ダウケミカル社製）、アンバーライトＩＲＡ−６０Ｅ
（ロームアンドハース社製）等を挙げることが出来る。
【０００６】上記グルタチオン含有液を酢酸形または酢
酸形と遊離形の弱塩基性陰イオン交換樹脂を詰めたカラ
ムに、通液速度（ＳＶ）０．５〜３で通液してグルタチ
オンを吸着させる。適当量の水で洗浄した後、酢酸溶
液、続いて水を通液してグルタチオンを溶出させる。こ
の時一段目の弱塩基性陰イオン交換樹脂カラムの下端よ
りグルタチオンの溶出が認められると同時に、溶出液を
二段目のポリアミンを交換基とする陰イオン交換樹脂を
詰めたカラムに導く。二段目のカラムよりの溶出液中の
グルタチオン及び酢酸の濃度推移を、高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）またはその他の適当な方法で測
定する事によって、最初にグルタチオンが溶出し、続い
て酢酸が溶出する事がわかる。溶出液の適当な分画部を
集めることによって、酢酸を全く含まないか、もしくは
酢酸濃度が非常に低いグルタチオン溶液を得ることがで
きる。得られたグルタチオン溶液を濃縮し、次いで結晶
化や凍結乾燥することにより高純度のグルタチオンを製
造することができる。
酸形と遊離形の弱塩基性陰イオン交換樹脂を詰めたカラ
ムに、通液速度（ＳＶ）０．５〜３で通液してグルタチ
オンを吸着させる。適当量の水で洗浄した後、酢酸溶
液、続いて水を通液してグルタチオンを溶出させる。こ
の時一段目の弱塩基性陰イオン交換樹脂カラムの下端よ
りグルタチオンの溶出が認められると同時に、溶出液を
二段目のポリアミンを交換基とする陰イオン交換樹脂を
詰めたカラムに導く。二段目のカラムよりの溶出液中の
グルタチオン及び酢酸の濃度推移を、高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）またはその他の適当な方法で測
定する事によって、最初にグルタチオンが溶出し、続い
て酢酸が溶出する事がわかる。溶出液の適当な分画部を
集めることによって、酢酸を全く含まないか、もしくは
酢酸濃度が非常に低いグルタチオン溶液を得ることがで
きる。得られたグルタチオン溶液を濃縮し、次いで結晶
化や凍結乾燥することにより高純度のグルタチオンを製
造することができる。
【０００７】
【実施例】次に実施例により具体的に本発明を説明する
が、これによって本発明が制限されるものではない。な
お、本実施例中グルタチオンの定量法はヨード法及びグ
リオキサラーゼ法（「メソッド・イン・エンザイモロジ
ー」第１巻５４０頁、アカデミックプレス社、１９５５
年版）で行った。またＨＰＬＣの測定条件は以下の通り
である。 １．カラム：ＴＳＫ ｇｅｌ ＯＤＳ−８０−ＴＭ、長
さ：１５ｃｍ、内径：４．６ｍｍ ２．緩衝液：０．６８６％リン酸二水素カリウム及び
０．０２５％１−ヘプタンスルホン酸ナトリウムを含む
３％メタノール水溶液、ＰＨ３．０ ３．流 速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ． ４．検出器：ＵＶ検出器（波長２１０ｎｍ）
が、これによって本発明が制限されるものではない。な
お、本実施例中グルタチオンの定量法はヨード法及びグ
リオキサラーゼ法（「メソッド・イン・エンザイモロジ
ー」第１巻５４０頁、アカデミックプレス社、１９５５
年版）で行った。またＨＰＬＣの測定条件は以下の通り
である。 １．カラム：ＴＳＫ ｇｅｌ ＯＤＳ−８０−ＴＭ、長
さ：１５ｃｍ、内径：４．６ｍｍ ２．緩衝液：０．６８６％リン酸二水素カリウム及び
０．０２５％１−ヘプタンスルホン酸ナトリウムを含む
３％メタノール水溶液、ＰＨ３．０ ３．流 速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ． ４．検出器：ＵＶ検出器（波長２１０ｎｍ）
【０００８】実施例１ キャンディダ・ウチルス ＫＪＳ−０５８２株（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−７３９６株）の培養菌体７００ｇ（乾燥時換
算）を熱水抽出し、除菌後常法により銅塩を形成させ、
硫化水素で脱銅することにより、グルタチオン３０．５
ｇ（グリオキサラーゼ法）を含む溶液５００ｍｌを得
た。該グルタチオン含有液を酢酸形とした弱塩基性陰イ
オン交換樹脂ダイヤイオンＷＡ３０（三菱化成工業製）
を詰めたカラム（内径４５ｍｍ、高さ１８０ｍｍ）に、
ＳＶ＝１で通液し、５００ｍｌの水で洗浄した。次いで
６．０％の酢酸水溶液２６０ｍｌを用いＳＶ＝１で溶離
した。さらに水で溶離を続けた。カラムよりグルタチオ
ンの溶出が始まると同時に、直列に接続した弱塩基性陰
イオン交換樹脂ダウエックスＷＧＲ−２（ダウケミカル
社製）を詰めたカラム（内径３０ｍｍ、高さ１７０ｍ
ｍ）に通液する。本カラムクロマトグラフィーにおける
グルタチオン及び酢酸の溶離の様子を図１に示す。得ら
れたグルタチオン画分を減圧濃縮することにより結晶グ
ルタチオン２２．０ｇを得た。得られた結晶グルタチオ
ンをＨＰＬＣで分析した結果、γ−グルタミルシステイ
ンや酢酸を殆ど含んでいなかった。その測定結果を表１
に示す。また、得られた結晶グルタチオンのＨＰＬＣチ
ャートを図２に示す。 比較例 実施例１と同様にして得られたカラム処理前の液を、酢
酸形とした弱塩基性陰イオン交換樹脂ダイヤイオンＷＡ
３０を詰めたカラム（内径４５ｍｍ、高さ１８０ｍｍ）
に、ＳＶ＝１で通液し、５００ｍｌの水で洗浄した。次
いで６．０％の酢酸水溶液２６０ｍｌ更に水を用いＳＶ
＝１で溶離しグルタチオン画分４００ｍｌを得た。グル
タチオンを含む画分をそのまま減圧濃縮し、結晶化する
ことにより、結晶グルタチオン２４．４ｇを得た。得ら
れた結晶グルタチオンをＨＰＬＣで分析した結果、γ−
グルタミルシステイン及びシステインは含まないものの
多量の酢酸の混入が認められた。この様にして得られた
結晶グルタチオン及び実施例１で得られた結晶グルタチ
オンについて、ＨＰＬＣで測定したグルタチオンの純度
及びグルタチオン中に含まれる酢酸の濃度を表１に示
す。
Ｍ Ｐ−７３９６株）の培養菌体７００ｇ（乾燥時換
算）を熱水抽出し、除菌後常法により銅塩を形成させ、
硫化水素で脱銅することにより、グルタチオン３０．５
ｇ（グリオキサラーゼ法）を含む溶液５００ｍｌを得
た。該グルタチオン含有液を酢酸形とした弱塩基性陰イ
オン交換樹脂ダイヤイオンＷＡ３０（三菱化成工業製）
を詰めたカラム（内径４５ｍｍ、高さ１８０ｍｍ）に、
ＳＶ＝１で通液し、５００ｍｌの水で洗浄した。次いで
６．０％の酢酸水溶液２６０ｍｌを用いＳＶ＝１で溶離
した。さらに水で溶離を続けた。カラムよりグルタチオ
ンの溶出が始まると同時に、直列に接続した弱塩基性陰
イオン交換樹脂ダウエックスＷＧＲ−２（ダウケミカル
社製）を詰めたカラム（内径３０ｍｍ、高さ１７０ｍ
ｍ）に通液する。本カラムクロマトグラフィーにおける
グルタチオン及び酢酸の溶離の様子を図１に示す。得ら
れたグルタチオン画分を減圧濃縮することにより結晶グ
ルタチオン２２．０ｇを得た。得られた結晶グルタチオ
ンをＨＰＬＣで分析した結果、γ−グルタミルシステイ
ンや酢酸を殆ど含んでいなかった。その測定結果を表１
に示す。また、得られた結晶グルタチオンのＨＰＬＣチ
ャートを図２に示す。 比較例 実施例１と同様にして得られたカラム処理前の液を、酢
酸形とした弱塩基性陰イオン交換樹脂ダイヤイオンＷＡ
３０を詰めたカラム（内径４５ｍｍ、高さ１８０ｍｍ）
に、ＳＶ＝１で通液し、５００ｍｌの水で洗浄した。次
いで６．０％の酢酸水溶液２６０ｍｌ更に水を用いＳＶ
＝１で溶離しグルタチオン画分４００ｍｌを得た。グル
タチオンを含む画分をそのまま減圧濃縮し、結晶化する
ことにより、結晶グルタチオン２４．４ｇを得た。得ら
れた結晶グルタチオンをＨＰＬＣで分析した結果、γ−
グルタミルシステイン及びシステインは含まないものの
多量の酢酸の混入が認められた。この様にして得られた
結晶グルタチオン及び実施例１で得られた結晶グルタチ
オンについて、ＨＰＬＣで測定したグルタチオンの純度
及びグルタチオン中に含まれる酢酸の濃度を表１に示
す。
【０００９】
【表１】 ──────────────────────────────────── 試 料 ＨＰＬＣ純度 酢酸濃度 （％） （ＰＰＭ） ──────────────────────────────────── 本発明による結晶グルタチオン ９８．５ １０ ──────────────────────────────────── 比較例で得られた結晶グルタチオン ９８．１ ４５０ ────────────────────────────────────
【００１０】
【図１】
【００１１】
【図２】
【００１２】
【発明の効果】以上説明してきたように、本発明の精製
法によればグルタミルシステイン等の不純物を含まず、
且つ酢酸をほとんど含有しないグルタチオンを工業的に
有利に取得することが出来る。
法によればグルタミルシステイン等の不純物を含まず、
且つ酢酸をほとんど含有しないグルタチオンを工業的に
有利に取得することが出来る。
【図１】弱塩基性陰イオン交換樹脂ダウエックスＷＧＲ
−２によるグルタチオン含有液の分画の様子を示したも
のである。
−２によるグルタチオン含有液の分画の様子を示したも
のである。
【図２】弱塩基性陰イオン交換樹脂ダウエックスＷＧＲ
−２により分画したグルタチオン画分を減圧濃縮するこ
とにより得られた結晶グルタチオンのＨＰＬＣ測定チャ
ートを示したものである。
−２により分画したグルタチオン画分を減圧濃縮するこ
とにより得られた結晶グルタチオンのＨＰＬＣ測定チャ
ートを示したものである。
フロントページの続き 審査官 鈴木 恵理子 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 1/14 - 1/22 C07K 5/02
Claims (1)
- 【請求項１】 グルタチオンを含む液を弱塩基性陰イオ
ン交換樹脂に通した後、酢酸水溶液でグルタチオンを溶
離し、次いで溶離液を別の弱塩基性陰イオン交換樹脂に
通液することにより酢酸を除くこと、並びに酢酸を除く
ための弱塩基性陰イオン交換樹脂のイオン交換基がポリ
アミンであることを特徴とするグルタチオンの精製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23262792A JP3315158B2 (ja) | 1992-08-10 | 1992-08-10 | グルタチオンの精製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23262792A JP3315158B2 (ja) | 1992-08-10 | 1992-08-10 | グルタチオンの精製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0656884A JPH0656884A (ja) | 1994-03-01 |
| JP3315158B2 true JP3315158B2 (ja) | 2002-08-19 |
Family
ID=16942288
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23262792A Expired - Fee Related JP3315158B2 (ja) | 1992-08-10 | 1992-08-10 | グルタチオンの精製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3315158B2 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4401775B2 (ja) | 2001-10-25 | 2010-01-20 | 協和発酵バイオ株式会社 | 酸化型グルタチオンの結晶およびその製造方法 |
| CN100455592C (zh) * | 2006-05-19 | 2009-01-28 | 江南大学 | 一种从谷胱甘肽发酵液中提取谷胱甘肽的方法 |
| WO2008001837A1 (en) * | 2006-06-28 | 2008-01-03 | Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. | Method for purification of oligopeptide |
| MY160524A (en) | 2010-04-21 | 2017-03-15 | Kyowa Hakko Bio Co Ltd | Crystalline oxidized glutathione and production method therefor |
| EP3949735A4 (en) * | 2019-03-29 | 2023-01-04 | Kaneka Corporation | COMPOSITION CONTAINING GLUTATHIONE FOR USE ON PLANT LEAFS |
-
1992
- 1992-08-10 JP JP23262792A patent/JP3315158B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0656884A (ja) | 1994-03-01 |
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