JPS62246573A - ピロロキノリンキノンの精製方法 - Google Patents
ピロロキノリンキノンの精製方法Info
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- JPS62246573A JPS62246573A JP61087070A JP8707086A JPS62246573A JP S62246573 A JPS62246573 A JP S62246573A JP 61087070 A JP61087070 A JP 61087070A JP 8707086 A JP8707086 A JP 8707086A JP S62246573 A JPS62246573 A JP S62246573A
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Landscapes
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、ピロロキノリンキノンの精製方法に関し、さ
らに詳細には、イオン交換クロマトグラフィによる粗製
ピロロキノリンキノン水溶液からのピロロキノリンキノ
ンの精製方法に係わる。
らに詳細には、イオン交換クロマトグラフィによる粗製
ピロロキノリンキノン水溶液からのピロロキノリンキノ
ンの精製方法に係わる。
ピロロキノリンキノン（以下ＰＱＱと記す）は、別名２
，７．９−）リカルポキシーＩＨ−ピロロ［２，５−ｆ
］キノリン−４，５−ジオンとも称され、１９７９年に
メタノール資化性細菌のメタノール脱水素酵素の補酵素
として、精製、結晶化され、構造決定がなされた（８゜
Ａ、 ８ａｌｉｍｂｕｒｙ ａｔ ａｌ、＊ Ｎａｔｕ
ｒ＠ｓ第２８０巻。
，７．９−）リカルポキシーＩＨ−ピロロ［２，５−ｆ
］キノリン−４，５−ジオンとも称され、１９７９年に
メタノール資化性細菌のメタノール脱水素酵素の補酵素
として、精製、結晶化され、構造決定がなされた（８゜
Ａ、 ８ａｌｉｍｂｕｒｙ ａｔ ａｌ、＊ Ｎａｔｕ
ｒ＠ｓ第２８０巻。
ｐ、８４３（１９７９））。
さらに、近年、細菌ｋかぎらず、真核生物のった。この
ように、ＰＱＱは、補酵素として酵素反応または、物質
代謝系を活性化するものであり、医薬品として重要な役
割を果す物質と考えられている。
ように、ＰＱＱは、補酵素として酵素反応または、物質
代謝系を活性化するものであり、医薬品として重要な役
割を果す物質と考えられている。
〔従来技術、発明が解決しようとする問題点〕従来、粗
製ＰＱＱ水＊＊からのＰＱＱの精製方法としては、Ｄ
Ｉ Ａ Ｉ−８ｅｐｈａｄｅｘ （ジエチルアミノエチ
ル系陰イオン交換樹脂−セファデックス 以下同様）（
ファルマシア社、登録商標）Ａ−２５カラムに吸着後、
Ｏ−ＩＭ（モル／ｌ 以下同様）ＫＣＩ 溶液で溶出
する方法（Ｍ 、 Ａｍｅｙａｍａ ｅｔ ａｌ、＋
Ａｇｒｉｃ、Ｂｏｌ、Ｃｈｅｍ、、第４８巻、ｐ、ｓ６
１〜５６５（１９８４）＞のみが知られており、その他
の精製方法は、まったく知られていない。しかしながら
、この方法ではＰＱＱはＰＱＱ塩として得られるが、こ
のＰＱＱ塩含有面分はＫＣｌ などの塩のほかにもたん
白質、糖類および糖脂質のような多くの不純物を含んで
おり、これらの不純物とＫ（Ｊ のような塩をも除去
できる精製方法の開発が望まれている。
製ＰＱＱ水＊＊からのＰＱＱの精製方法としては、Ｄ
Ｉ Ａ Ｉ−８ｅｐｈａｄｅｘ （ジエチルアミノエチ
ル系陰イオン交換樹脂−セファデックス 以下同様）（
ファルマシア社、登録商標）Ａ−２５カラムに吸着後、
Ｏ−ＩＭ（モル／ｌ 以下同様）ＫＣＩ 溶液で溶出
する方法（Ｍ 、 Ａｍｅｙａｍａ ｅｔ ａｌ、＋
Ａｇｒｉｃ、Ｂｏｌ、Ｃｈｅｍ、、第４８巻、ｐ、ｓ６
１〜５６５（１９８４）＞のみが知られており、その他
の精製方法は、まったく知られていない。しかしながら
、この方法ではＰＱＱはＰＱＱ塩として得られるが、こ
のＰＱＱ塩含有面分はＫＣｌ などの塩のほかにもたん
白質、糖類および糖脂質のような多くの不純物を含んで
おり、これらの不純物とＫ（Ｊ のような塩をも除去
できる精製方法の開発が望まれている。
本発明者らは、ＰＱＱの精製方法の研究を重ねた結果、
Ｄ Ｂ Ａ Ｂ −５ｅｐｈａｄｅｘ人−２５などの陰
イオン交換体を用いたイオン交換クロマトグラフィによ
って得られたＮａＣ１あるいはＫＣＩなどの塩を含むＰ
ＱＱ塩含有面分を、特定のビーズ状ゲルで処理すること
により、有機質の不純物とともに、ＮａＣ１あるいはＫ
Ｃｌ などの塩類も除去され、ＰＱＱ塩含有面分が濃
縮されＰＱＱ塩の純度が著しく向上することを見出し本
発明を完成した。
Ｄ Ｂ Ａ Ｂ −５ｅｐｈａｄｅｘ人−２５などの陰
イオン交換体を用いたイオン交換クロマトグラフィによ
って得られたＮａＣ１あるいはＫＣＩなどの塩を含むＰ
ＱＱ塩含有面分を、特定のビーズ状ゲルで処理すること
により、有機質の不純物とともに、ＮａＣ１あるいはＫ
Ｃｌ などの塩類も除去され、ＰＱＱ塩含有面分が濃
縮されＰＱＱ塩の純度が著しく向上することを見出し本
発明を完成した。
すなわち、本発明は、粗製ＰＱＱ水溶液をイオン交換ク
ロマトグラフィによって精製するに際し、イオン交換ク
ロマトグラフィにより得られたＰＱＱ塩含有面分を、デ
キストランをエピクロロヒドリンで三次元的に架橋させ
て得られ２〜５−のビーズ状ゲルを充填したカラムを通
過させてＰＱＱをＰＱＱ塩として回収することを特徴と
するＰＱＱの精製方法である。
ロマトグラフィによって精製するに際し、イオン交換ク
ロマトグラフィにより得られたＰＱＱ塩含有面分を、デ
キストランをエピクロロヒドリンで三次元的に架橋させ
て得られ２〜５−のビーズ状ゲルを充填したカラムを通
過させてＰＱＱをＰＱＱ塩として回収することを特徴と
するＰＱＱの精製方法である。
本発明で使用されるデキスト をエビクロロヒドリン
で三次元的１こ架橋させて得られ乾燥品１．ｇ当りのベ
ッド体積が２〜３１Ｌｌのビーズ状ゲルの市販品の代表
例としてセファデックスＧ−１０がある。
で三次元的１こ架橋させて得られ乾燥品１．ｇ当りのベ
ッド体積が２〜３１Ｌｌのビーズ状ゲルの市販品の代表
例としてセファデックスＧ−１０がある。
このビーズ状ゲルとして、たとえば、セファデックスＧ
−１０を充填したカラム中を、水を通過させてカラム内
を平衡化させ、次いで粗製ＰＱＱ水溶液からイオン交換
クロマトグラフィによって得られたＰＱＱ塩含有面分（
以下 前段ＰＱＱ塩含有面分と記す）を通過させ、つい
でこのカラム中を水を通過させてＰＱＱ塩含有両分を溶
出させることによりＰＱＱ塩の濃度がさらに向上せしめ
られたＰＱＱ塩含有面分（以下 後段ＰＱＱ塩含有面分
と記す）が得られる。
−１０を充填したカラム中を、水を通過させてカラム内
を平衡化させ、次いで粗製ＰＱＱ水溶液からイオン交換
クロマトグラフィによって得られたＰＱＱ塩含有面分（
以下 前段ＰＱＱ塩含有面分と記す）を通過させ、つい
でこのカラム中を水を通過させてＰＱＱ塩含有両分を溶
出させることによりＰＱＱ塩の濃度がさらに向上せしめ
られたＰＱＱ塩含有面分（以下 後段ＰＱＱ塩含有面分
と記す）が得られる。
なお、前記のＰＱＱ塩含有面分に含まれるＰＱＱ塩は、
緩衝液に添加された塩のアルカリ金属とＰＱＱとの塩で
ある。この処理は１回または２回以上繰り返えしてもよ
く、２回以上繰り返えすことが好ましい。なお、２回以
上繰り返えす場合には、カラムを通過させるＰＱＱ塩含
有面分中のＫＣＩ およびＮａＣ１などの塩濃度は。
緩衝液に添加された塩のアルカリ金属とＰＱＱとの塩で
ある。この処理は１回または２回以上繰り返えしてもよ
く、２回以上繰り返えすことが好ましい。なお、２回以
上繰り返えす場合には、カラムを通過させるＰＱＱ塩含
有面分中のＫＣＩ およびＮａＣ１などの塩濃度は。
。
０２Ｍ以上でなければならない。前の回のＰＱ「
Ｑ塩含有面分の塩濃度が０ 、０２Ｍ未満のときには、
このＰＱＱ塩含有面分は濃縮して使用に供する必要があ
る。
このＰＱＱ塩含有面分は濃縮して使用に供する必要があ
る。
前段ＰＱＱ塩含有面分および前の回のＰＱＱ塩含有面分
ならびに水の、このカラム内での流速およびカラム温度
などの諸条件には特に制限はない。たとえば、流速は通
常はこのカラム内を自然流下させればよいが、入口から
加圧するかおよび／または出口から減圧にして増速する
ことを妨げない。
ならびに水の、このカラム内での流速およびカラム温度
などの諸条件には特に制限はない。たとえば、流速は通
常はこのカラム内を自然流下させればよいが、入口から
加圧するかおよび／または出口から減圧にして増速する
ことを妨げない。
また、カラム温度は、通常は常温乃至室温とされるが、
ＰＱＱ塩や不純物が析出せず、一方、使用されたビーズ
状ゲルが破壊されないような温度であれば、冷却または
加熱することも妨げない。
ＰＱＱ塩や不純物が析出せず、一方、使用されたビーズ
状ゲルが破壊されないような温度であれば、冷却または
加熱することも妨げない。
本発明を適用しうる前段ＰＱＱ塩含有面分には特に制限
はなく、それ自体公知のイオン交換クロマトグラフィに
よって得られたＰＱＱ塩含有面分でよい。
はなく、それ自体公知のイオン交換クロマトグラフィに
よって得られたＰＱＱ塩含有面分でよい。
すなわち粗製ＰＱＱはその給源および製法ならびに抽出
法などに特に制限はない。また、粗製ＰＱＱは水溶液に
して使用されるが、この水溶液中のＰＱＱ濃度は特に制
限はないが、実用上、通常は０．１〜１０ダ／−である
。このイオン交換体・ロマトグラフイに使用されるイオ
ン交換体としては、通常は陰イオン交換体が使用され、
陰イオン交換体としては、通常は、たとえば、解離基と
してアミノエチル（ＡＥ−）、ジエチルアミノエチル（
ＤＥＡＲ−）もしくはクオータナリ アミノエチル（Ｑ
ＡＥ−）を有する陰イオン交換樹脂などが好ましい。こ
れらの陰イオン交換樹脂の代表的な市販品として、たと
えば、ＤＩ！１ＡＥ−セファデックス Ａ−２５、ＤＥ
ＡＲ−セファデックス 人−５０、ＤＢＡＩ１３−セフ
ァセル（８ｅｐｈａｃｅｌ ）、ＤＢＡＩ−セファロー
ス（８ｅｐｈａｒｏｓｅ） Ｇ Ｌ −６８％ＱＡＥ−
セファデックス Ａ−２５、ＱＡｇ−セファデックス
Ａ−５０（以上、ファルマシア社の商品）、ＤＥＡＥ−
セロファイン（チッソ■の商品）詔よびｎＢ’＊ｇ−）
ヨパール６５０（東洋曹達■の商品）などがある。これ
らのうち、Ｉ）ＢＡＥ−セファデックス 人−２５、Ｄ
ＢＡ］ｍ−セロファインおよびＤＥＡＲ−トヨパールな
どが好ましい。また、イオン交換樹脂の形状は粒状、球
状、多孔性粒状および微粒状ならびに膜状のいずれであ
ってもよい。
法などに特に制限はない。また、粗製ＰＱＱは水溶液に
して使用されるが、この水溶液中のＰＱＱ濃度は特に制
限はないが、実用上、通常は０．１〜１０ダ／−である
。このイオン交換体・ロマトグラフイに使用されるイオ
ン交換体としては、通常は陰イオン交換体が使用され、
陰イオン交換体としては、通常は、たとえば、解離基と
してアミノエチル（ＡＥ−）、ジエチルアミノエチル（
ＤＥＡＲ−）もしくはクオータナリ アミノエチル（Ｑ
ＡＥ−）を有する陰イオン交換樹脂などが好ましい。こ
れらの陰イオン交換樹脂の代表的な市販品として、たと
えば、ＤＩ！１ＡＥ−セファデックス Ａ−２５、ＤＥ
ＡＲ−セファデックス 人−５０、ＤＢＡＩ１３−セフ
ァセル（８ｅｐｈａｃｅｌ ）、ＤＢＡＩ−セファロー
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セファデックス Ａ−２５、ＱＡｇ−セファデックス
Ａ−５０（以上、ファルマシア社の商品）、ＤＥＡＥ−
セロファイン（チッソ■の商品）詔よびｎＢ’＊ｇ−）
ヨパール６５０（東洋曹達■の商品）などがある。これ
らのうち、Ｉ）ＢＡＥ−セファデックス 人−２５、Ｄ
ＢＡ］ｍ−セロファインおよびＤＥＡＲ−トヨパールな
どが好ましい。また、イオン交換樹脂の形状は粒状、球
状、多孔性粒状および微粒状ならびに膜状のいずれであ
ってもよい。
ｐＨ６〜８の緩衝液をカラム頂部から流下さ
“せて、これらのイオン交換体が充填されているカラム
内を平衡化させた後に、粗製ＰＱＱ水溶液をカラム頂部
から流下させてＰＱＱを吸着させる。次いで、ＮａＣ１
あるいはＫＣＩなどの塩を添加した緩衝液をカラム頂部
から流下させてＰＱＱを展開、溶出させる。この塩濃度
としては、０．１〜２Ｍの範囲であればいずれでも良い
が、展開液量を節減できる点では、０．２〜１．５Ｍが
好ましい。また、緩衝液に塩を添加して塩の濃度を逐次
０−ＩＭに変化させる濃度勾配溶出法が、不純物との分
離性がすぐれ、しかも展開液量が節減しつるので好まし
い。このイオン交換クロマトグラフィに使用される緩衝
液には１．１Ｆ＃に制限はないが、通常はたとえばりん
酸緩衝液およびトリス−塩酸緩衝液などが使用される。
“せて、これらのイオン交換体が充填されているカラム
内を平衡化させた後に、粗製ＰＱＱ水溶液をカラム頂部
から流下させてＰＱＱを吸着させる。次いで、ＮａＣ１
あるいはＫＣＩなどの塩を添加した緩衝液をカラム頂部
から流下させてＰＱＱを展開、溶出させる。この塩濃度
としては、０．１〜２Ｍの範囲であればいずれでも良い
が、展開液量を節減できる点では、０．２〜１．５Ｍが
好ましい。また、緩衝液に塩を添加して塩の濃度を逐次
０−ＩＭに変化させる濃度勾配溶出法が、不純物との分
離性がすぐれ、しかも展開液量が節減しつるので好まし
い。このイオン交換クロマトグラフィに使用される緩衝
液には１．１Ｆ＃に制限はないが、通常はたとえばりん
酸緩衝液およびトリス−塩酸緩衝液などが使用される。
また、平衡化に使用される緩衝液とＰＱＱの展開、溶出
に使用される緩衝液とは種類およびｐＨが互に等しいこ
とが好ましい。
に使用される緩衝液とは種類およびｐＨが互に等しいこ
とが好ましい。
このようにして得られたＰＱＱ塩両分には塩類とともに
有機質の不純物が多量に含有されている。この多量の不
純物を除去するために本発明者らが案出した方法を適用
することが好ましい。すなわち、粗製ＰＱＱ水溶液をカ
ラム内を通過させてイオン交換体にＰＱＱを吸着させた
後であり、かつ、吸着されたＰＱＱを塩を添加した緩衝
液で展開、溶出させる前に、カラム内を緩衝液で予め洗
浄するという方法である。この洗浄に使用される緩衝液
はイオン交換クロマトグラフィで使用される通常の緩衝
液のうち比２〜１０の緩衝液であればよいが、平衡化に
使用された緩衝液と同じ緩衝液を使用することが好まし
い。
有機質の不純物が多量に含有されている。この多量の不
純物を除去するために本発明者らが案出した方法を適用
することが好ましい。すなわち、粗製ＰＱＱ水溶液をカ
ラム内を通過させてイオン交換体にＰＱＱを吸着させた
後であり、かつ、吸着されたＰＱＱを塩を添加した緩衝
液で展開、溶出させる前に、カラム内を緩衝液で予め洗
浄するという方法である。この洗浄に使用される緩衝液
はイオン交換クロマトグラフィで使用される通常の緩衝
液のうち比２〜１０の緩衝液であればよいが、平衡化に
使用された緩衝液と同じ緩衝液を使用することが好まし
い。
この洗浄における緩衝液としては通常は前記と同様に、
たとえばりん酸緩衝液およびトリス−塩酸緩衝液などが
使用される。また、緩衝液の使用量および供給速度にも
特に制限はないが、実用上、使用量は充填陰イオン交換
体の見掛は容積の約５〜２０焙程度とされ、また供給速
度は、緩衝液をカラム内で自然流下させればよいが、カ
ラム頂部から加圧するかまたはカラム底部より吸引して
加速してもよく、実用上、通常は充填陰イオン交換体の
見掛は容積１０〇−当り２００ ｄ〜５１ ／ ｈｒ
とされる。また、この洗浄時の温度は特に制限はなく
、実用上、常温乃至室温でよく、特に冷却、加熱する必
要はないが、カラム内でＰＱＱ塩が析出しない温度乃至
陰イオン交換体が吸着能を失なわない温度であれば、冷
却、加熱することを妨げない。
たとえばりん酸緩衝液およびトリス−塩酸緩衝液などが
使用される。また、緩衝液の使用量および供給速度にも
特に制限はないが、実用上、使用量は充填陰イオン交換
体の見掛は容積の約５〜２０焙程度とされ、また供給速
度は、緩衝液をカラム内で自然流下させればよいが、カ
ラム頂部から加圧するかまたはカラム底部より吸引して
加速してもよく、実用上、通常は充填陰イオン交換体の
見掛は容積１０〇−当り２００ ｄ〜５１ ／ ｈｒ
とされる。また、この洗浄時の温度は特に制限はなく
、実用上、常温乃至室温でよく、特に冷却、加熱する必
要はないが、カラム内でＰＱＱ塩が析出しない温度乃至
陰イオン交換体が吸着能を失なわない温度であれば、冷
却、加熱することを妨げない。
以下の実施例によって本発明をさらに具体的Ｃζ説明す
る。な彰、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はない。
る。な彰、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はない。
実施例 １
キサントバクタ−オートトロフイカス ９８Ｍ４３１を
培養して得られた培養液を遠心分離し、菌体を除去し、
培養上澄液を得、この培養土澄液を精製した。２ｍＭり
ん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，０）で予め平衡化してお
いたＤＥＡＥ−）ヨパール６５０（東洋曹達１１）を充
填したカラム（充填ｔ ２．６Ｘ１０ｃｒｒＬ）に培
養上澄液１０／を吸着させた。その後、２ｍＭりん酸カ
リウム緩衝液にＭＣＩ を添加して〇−１ＭＫ（Ｊ（
１，２／）の濃度勾配で溶出して、前段ＰＱＱ塩（ＰＱ
Ｑ−に塩）含有面分２０〇−を得た。この前段ＰＱＱ塩
含有面分中のＰＱＱ量（分析においてＰＱＱ塩はＰＱＱ
として表示される 以下同様）は３６ダ、ＫＣＩ 濃
度は０．８Ｍであり、塩類を除いたＰＱＱ純度は、６Ｂ
４であった。
培養して得られた培養液を遠心分離し、菌体を除去し、
培養上澄液を得、この培養土澄液を精製した。２ｍＭり
ん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，０）で予め平衡化してお
いたＤＥＡＥ−）ヨパール６５０（東洋曹達１１）を充
填したカラム（充填ｔ ２．６Ｘ１０ｃｒｒＬ）に培
養上澄液１０／を吸着させた。その後、２ｍＭりん酸カ
リウム緩衝液にＭＣＩ を添加して〇−１ＭＫ（Ｊ（
１，２／）の濃度勾配で溶出して、前段ＰＱＱ塩（ＰＱ
Ｑ−に塩）含有面分２０〇−を得た。この前段ＰＱＱ塩
含有面分中のＰＱＱ量（分析においてＰＱＱ塩はＰＱＱ
として表示される 以下同様）は３６ダ、ＫＣＩ 濃
度は０．８Ｍであり、塩類を除いたＰＱＱ純度は、６Ｂ
４であった。
ＰＱＱ含量およびＰＱＱ純度は、高速液体クロマトグラ
フィで求めた（他の粗製ＰＱＱ水溶液、他のＰＱＱ塩含
有面分および他の実施例でも同様）。
フィで求めた（他の粗製ＰＱＱ水溶液、他のＰＱＱ塩含
有面分および他の実施例でも同様）。
機 器：高滓製高速液体クロマトグラフカラム：ニュー
クレオシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ ）５Ｃ１８，４−４
−０Ｘ１５０ｔ ／２７ （容積比） 流速： ０ 、７１１／／ ｍｉｎ 検出器：高滓５ＰＤ−６Ａ ＵＶ分分光震度計２５９
−ｍ） 純水で予め平衡化しておいた５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１
０カラム（充填量 ２．６Ｘ１００ｃＩＩＬ）に、前記
の前段ＰＱＱ塩含有面分２００−を吸着させ、純水で溶
出させ、後段ＰＱＱ塩含有面分５２１Ｌｌを得た。この
後段ＰＱＱ塩含有面分中のＰＱＱ量は、３７８９てあり
、ＫＣｌ 濃度は０．０７Ｍであった。また、ＰＱＱ純
度は９６チであった。
クレオシル（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ ）５Ｃ１８，４−４
−０Ｘ１５０ｔ ／２７ （容積比） 流速： ０ 、７１１／／ ｍｉｎ 検出器：高滓５ＰＤ−６Ａ ＵＶ分分光震度計２５９
−ｍ） 純水で予め平衡化しておいた５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１
０カラム（充填量 ２．６Ｘ１００ｃＩＩＬ）に、前記
の前段ＰＱＱ塩含有面分２００−を吸着させ、純水で溶
出させ、後段ＰＱＱ塩含有面分５２１Ｌｌを得た。この
後段ＰＱＱ塩含有面分中のＰＱＱ量は、３７８９てあり
、ＫＣｌ 濃度は０．０７Ｍであった。また、ＰＱＱ純
度は９６チであった。
さらに、純水で平衡化しておいた５ｅｐｈａｄｅｘＧ−
１０（ファルマシア製）カラム（２，ＩＳＸ有する面分
２５ｄを得た。この両分中のＰＱＱ量は３７１９であり
、ＫＣＩ 濃度は０ 、０２Ｍであった。またＰＱＱ
純度は９９．０％であった。
１０（ファルマシア製）カラム（２，ＩＳＸ有する面分
２５ｄを得た。この両分中のＰＱＱ量は３７１９であり
、ＫＣＩ 濃度は０ 、０２Ｍであった。またＰＱＱ
純度は９９．０％であった。
実施例 ２
アンシロバクター アクアティクス ＡＴＣＣ２５５９
６を培養して得られた培養液からの培養上澄液を精製し
た。２ ｍ Ｍりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，０）で
平衡化しておいたＤＥＡＲ−セロファイン 人Ｌ（チッ
ソ製）カラム（充填量 ２．６Ｘ１０ｃＩＲ）に培養上
澄液１０７を吸着させた。その後、２ｍＭりん酸カリウ
ム緩衝液にＮａＣ１を添加してＯ−０，５Ｍ゛ＮａＣ１
（１，２１）の濃度勾配で溶出し、前段ＰＱＱ塩（Ｐ
Ｑ Ｑ −Ｎａ塩）含有面分３００ｄを得た。この前段
ＰＱＱ塩含有面分中のＰＱＱ量は５２Ｑであり、ＮａＣ
ｊ濃度は０．４Ｍであり、ＰＱＱ純度は６６チであった
。
６を培養して得られた培養液からの培養上澄液を精製し
た。２ ｍ Ｍりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，０）で
平衡化しておいたＤＥＡＲ−セロファイン 人Ｌ（チッ
ソ製）カラム（充填量 ２．６Ｘ１０ｃＩＲ）に培養上
澄液１０７を吸着させた。その後、２ｍＭりん酸カリウ
ム緩衝液にＮａＣ１を添加してＯ−０，５Ｍ゛ＮａＣ１
（１，２１）の濃度勾配で溶出し、前段ＰＱＱ塩（Ｐ
Ｑ Ｑ −Ｎａ塩）含有面分３００ｄを得た。この前段
ＰＱＱ塩含有面分中のＰＱＱ量は５２Ｑであり、ＮａＣ
ｊ濃度は０．４Ｍであり、ＰＱＱ純度は６６チであった
。
純水で平衡化しておいた８ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ −１０
（ファルマシア製）カラム（充填量 ２．６×１００１
）に、前記の前段ＰＱＱ塩含有面分３００−を吸着させ
、純水で溶出させ後段ＰＱＱ塩含有面分４０ＷＬｌを得
た。この後段ＰＱＱ塩含有面分中のＰＱＱ量は３１ＷＩ
？であり、ＮａＣ１濃度は０ 、０４Ｍであった。また
、ＰＱＱ純度はは９７％であった。
（ファルマシア製）カラム（充填量 ２．６×１００１
）に、前記の前段ＰＱＱ塩含有面分３００−を吸着させ
、純水で溶出させ後段ＰＱＱ塩含有面分４０ＷＬｌを得
た。この後段ＰＱＱ塩含有面分中のＰＱＱ量は３１ＷＩ
？であり、ＮａＣ１濃度は０ 、０４Ｍであった。また
、ＰＱＱ純度はは９７％であった。
実施例 ３
ハイホミクロビウム エスピー Ｄ８Ｍ１８６９を培養
して得られた培養液からの培養上澄液を精製した。２ｍ
Ｍりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，０）で平衡化してお
いたＤｇＡＥ−８ｅｐｈａｄｅｘ Ａ −２５（ファ
ルマシア製）カラム（充填量 ２．６×１０ｃＩｆｔ）
に、培養上澄液１０１を吸着させた。
して得られた培養液からの培養上澄液を精製した。２ｍ
Ｍりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，０）で平衡化してお
いたＤｇＡＥ−８ｅｐｈａｄｅｘ Ａ −２５（ファ
ルマシア製）カラム（充填量 ２．６×１０ｃＩｆｔ）
に、培養上澄液１０１を吸着させた。
その後、２ｍＭりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，０）６
００−をカラムに流し、カラム内を洗浄した後、２ｍＭ
りん酸カリウム緩衝液にＫＣＩを添加してｏ ＩＭＫ
Ｃｊ（１，２１）の濃度勾配で溶出し、前段ＰＱＱ塩（
ＰＱＱ−に塩）含有面分３００−を得た。この前段ＰＱ
Ｑ塩含有面分中のＰＱＱ量は５８ｍ１Ｐであり、ＫＣｌ
濃度は０．８Ｍであり、ＰＱＱ純度は９１チであった
。
００−をカラムに流し、カラム内を洗浄した後、２ｍＭ
りん酸カリウム緩衝液にＫＣＩを添加してｏ ＩＭＫ
Ｃｊ（１，２１）の濃度勾配で溶出し、前段ＰＱＱ塩（
ＰＱＱ−に塩）含有面分３００−を得た。この前段ＰＱ
Ｑ塩含有面分中のＰＱＱ量は５８ｍ１Ｐであり、ＫＣｌ
濃度は０．８Ｍであり、ＰＱＱ純度は９１チであった
。
純水で平衡化しておいた８ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１０
（ファルマシア製）カラム（充填量 ２．６ｘ１００ｃ
ｍ）に、前記の前段ＰＱＱ塩含有面分３００−を吸着さ
せ、純水で溶出させ後段ＰＱＱ面分４２１１１１を得た
。この両分中のＰＱＱ量は５７即であり、ＫＣＩ 濃
度は０．０５６Ｍであり、ＰＱＱ純度は９９１てあった
。
（ファルマシア製）カラム（充填量 ２．６ｘ１００ｃ
ｍ）に、前記の前段ＰＱＱ塩含有面分３００−を吸着さ
せ、純水で溶出させ後段ＰＱＱ面分４２１１１１を得た
。この両分中のＰＱＱ量は５７即であり、ＫＣＩ 濃
度は０．０５６Ｍであり、ＰＱＱ純度は９９１てあった
。
さらに、純水で平衡化しておいた８ｅｐｈａｄｅｘＱ−
１０（ファルマシア製）カラム（充填量２、ｄｘｌｏｏ
ｃｍ）に前回の後段ＰＱＱ塩含有面分４２−を吸着させ
純水で溶出させ、ＰＱＱ面分３５−を得た。この両分中
のＰＱＱ量は。
１０（ファルマシア製）カラム（充填量２、ｄｘｌｏｏ
ｃｍ）に前回の後段ＰＱＱ塩含有面分４２−を吸着させ
純水で溶出させ、ＰＱＱ面分３５−を得た。この両分中
のＰＱＱ量は。
５７ダであり、ＫＣｊ 濃度は０ 、０２Ｍであった
。また、ＰＱＱ純度は９９．５％であった。
。また、ＰＱＱ純度は９９．５％であった。
本発明により、有機質の不純物だけではなくＮａＣ１お
よびＫＣｊ のような塩類も陳去され、有機質の不純
物詔よび塩類の両者の濃度がともに低いＰＱＱ塩を含有
する面分が得られ、後の精製の負荷が著しく軽減される
。
よびＫＣｊ のような塩類も陳去され、有機質の不純
物詔よび塩類の両者の濃度がともに低いＰＱＱ塩を含有
する面分が得られ、後の精製の負荷が著しく軽減される
。
しかしてこのＰＱＱ塩は薬効などはＰＱＱと同等である
。
。
特許出願人 三菱瓦斯化学株式会社
代表者 長野 和合
Claims (1)
- 粗製ピロロキノリンキノン水溶液をイオン交換クロマト
グラフィによつて精製するに際し、イオン交換クロマト
グラフィにより得られたピロロキノリンキノン塩含有面
分を、デキストランをエピクロロヒドリンで三次元的に
架橋させて得られ、乾燥品１ｇ当りのベッド体積が２〜
３ｍｌのビーズ状ゲルを充填したカラムを通過させて、
ピロロキノリンキノンをピロロキノリンキノン塩として
回収することを特徴とするピロロキノリンキノンの精製
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61087070A JPH07113022B2 (ja) | 1986-04-17 | 1986-04-17 | ピロロキノリンキノンの精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61087070A JPH07113022B2 (ja) | 1986-04-17 | 1986-04-17 | ピロロキノリンキノンの精製方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62246573A true JPS62246573A (ja) | 1987-10-27 |
| JPH07113022B2 JPH07113022B2 (ja) | 1995-12-06 |
Family
ID=13904681
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61087070A Expired - Fee Related JPH07113022B2 (ja) | 1986-04-17 | 1986-04-17 | ピロロキノリンキノンの精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07113022B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006102642A1 (en) * | 2005-03-24 | 2006-09-28 | Clf Medical Technology Acceleration Program, Inc. | Synthesis of pyrroloquinoline quinone (pqq) |
| JP2014005259A (ja) * | 2012-06-27 | 2014-01-16 | Mitsubishi Gas Chemical Co Inc | 高品質ピロロキノリンキノンの製造方法 |
| JP2016196442A (ja) * | 2015-04-06 | 2016-11-24 | 株式会社メニコン | 重合性不飽和モノマーの精製方法及び精製装置 |
-
1986
- 1986-04-17 JP JP61087070A patent/JPH07113022B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006102642A1 (en) * | 2005-03-24 | 2006-09-28 | Clf Medical Technology Acceleration Program, Inc. | Synthesis of pyrroloquinoline quinone (pqq) |
| JP2014005259A (ja) * | 2012-06-27 | 2014-01-16 | Mitsubishi Gas Chemical Co Inc | 高品質ピロロキノリンキノンの製造方法 |
| JP2016196442A (ja) * | 2015-04-06 | 2016-11-24 | 株式会社メニコン | 重合性不飽和モノマーの精製方法及び精製装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH07113022B2 (ja) | 1995-12-06 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |