JPS62246574A - ピロロキノリンキノンの精製方法 - Google Patents
ピロロキノリンキノンの精製方法Info
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- JPS62246574A JPS62246574A JP61087071A JP8707186A JPS62246574A JP S62246574 A JPS62246574 A JP S62246574A JP 61087071 A JP61087071 A JP 61087071A JP 8707186 A JP8707186 A JP 8707186A JP S62246574 A JPS62246574 A JP S62246574A
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Landscapes
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、ピロロキノリンキノンの精製方法に関し、さ
らに詳細にはイオン交換クロマトグラフィによる粗製ピ
ロロキノリンキノン水溶液からのピロロキノンの精製方
法に係わる。
らに詳細にはイオン交換クロマトグラフィによる粗製ピ
ロロキノリンキノン水溶液からのピロロキノンの精製方
法に係わる。
ピロロキノリンキノン（以下ＰＱＱと記す）は、別名、
２，７．９−）リカルポキシー１Ｈ−ピロロ（２，３−
ｆ）キノリン−４，５−ジオンとも称され、１９７９年
に、メタノール資化性ｍ＃ｉのメタノール脱水素酵素の
補Ｐｓ素として、精製、結晶化され、構造決定がなされ
た（Ｓ、 Ａ、 ５ａｌｉａｂｕｒｙ ｅｔ ａｌ、
Ｎａｔｕｒｅ、第２８０巻、ｐ、８４３（１９７９））
。
２，７．９−）リカルポキシー１Ｈ−ピロロ（２，３−
ｆ）キノリン−４，５−ジオンとも称され、１９７９年
に、メタノール資化性ｍ＃ｉのメタノール脱水素酵素の
補Ｐｓ素として、精製、結晶化され、構造決定がなされ
た（Ｓ、 Ａ、 ５ａｌｉａｂｕｒｙ ｅｔ ａｌ、
Ｎａｔｕｒｅ、第２８０巻、ｐ、８４３（１９７９））
。
さらに１近年、細菌Ｋかぎらず、真核生物のかび、酵母
、さらには哺乳動物にも補酵素として働＜ＰＱＱが存在
していることが明らかとなった。このように、ＰＱＱは
、補酵素として酵素反応または物質代謝系を活性化する
ものであり、医薬品として重要な役割を果す物質と考え
られている。
、さらには哺乳動物にも補酵素として働＜ＰＱＱが存在
していることが明らかとなった。このように、ＰＱＱは
、補酵素として酵素反応または物質代謝系を活性化する
ものであり、医薬品として重要な役割を果す物質と考え
られている。
（従来技術、発明が解決しようとする問題点〕従来、粗
製ＰＱＱを含む水溶液からのＰＱＱの精製方法としては
ＤＥＡＥ ５ｅｐｈａｄｅｘ （ジエチルアミノエチ
ル系陰イオン交換樹脂セファデックス以下同様）（ファ
ルマシア社、登録商標）Ａ−２５カラムに吸着後、ｏ
−Ｉ Ｍ （モル／！以下同様） ＫＣ１溶液で溶出す
る方法（Ｍ。
製ＰＱＱを含む水溶液からのＰＱＱの精製方法としては
ＤＥＡＥ ５ｅｐｈａｄｅｘ （ジエチルアミノエチ
ル系陰イオン交換樹脂セファデックス以下同様）（ファ
ルマシア社、登録商標）Ａ−２５カラムに吸着後、ｏ
−Ｉ Ｍ （モル／！以下同様） ＫＣ１溶液で溶出す
る方法（Ｍ。
Ａｍｅｙａｍａ ｅｔ ａＬ、 Ａｇｒｉｃ、 Ｂｉｏ
ｌ、 Ｃｈｅｒｒｂ 、第４８巻、ｐ、５６１−５６５
（１９８４））が知られている。しかしながら、この方
法ではＰＱＱはＰＱＱ塩として得られるが、このＰＱＱ
塩含有画分は、ＫＣｌのほかにもたん白、糖類および糖
脂質のような多くの不純物を含んでおり、これらの不純
物を一層少なくする精製方法の開発が望まれている。
ｌ、 Ｃｈｅｒｒｂ 、第４８巻、ｐ、５６１−５６５
（１９８４））が知られている。しかしながら、この方
法ではＰＱＱはＰＱＱ塩として得られるが、このＰＱＱ
塩含有画分は、ＫＣｌのほかにもたん白、糖類および糖
脂質のような多くの不純物を含んでおり、これらの不純
物を一層少なくする精製方法の開発が望まれている。
本発明者らは、イオン交換クロマトグラフィによるＰＱ
Ｑの精製方法について研究を重ねた結果、ＤＥＡＥ−３
ｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５ｆｘどの陰イオン交換体ヘ
ビロロキノリンキノンを吸着させた後、塩を特別に加え
ない通常の緩衝液でカラム内を洗浄したのち、ＮａＣｔ
あるいはＫＣｌなどの塩を添加した緩衝液で展開、溶出
することにより得られるＰＱＱ塩含有画分中のＰＱＱ塩
ならびにＫＣｌおよびＮａＣ１のような塩以外の不純物
含量が大幅に低下することを見出し、本発明を完成した
。
Ｑの精製方法について研究を重ねた結果、ＤＥＡＥ−３
ｅｐｈａｄｅｘ Ａ−２５ｆｘどの陰イオン交換体ヘ
ビロロキノリンキノンを吸着させた後、塩を特別に加え
ない通常の緩衝液でカラム内を洗浄したのち、ＮａＣｔ
あるいはＫＣｌなどの塩を添加した緩衝液で展開、溶出
することにより得られるＰＱＱ塩含有画分中のＰＱＱ塩
ならびにＫＣｌおよびＮａＣ１のような塩以外の不純物
含量が大幅に低下することを見出し、本発明を完成した
。
すなわち本発明は、粗製ピロロキノリンキノン水溶液を
イオン交換クロマトグラフィによって精製するに際し塩
を添加した緩衝液での展開、溶出に先立って緩衝液でカ
ラム内を洗浄することを特徴とするピロロキノリンキノ
ンの精製方法である。
イオン交換クロマトグラフィによって精製するに際し塩
を添加した緩衝液での展開、溶出に先立って緩衝液でカ
ラム内を洗浄することを特徴とするピロロキノリンキノ
ンの精製方法である。
本発明における緩衝液によるカラム内の洗浄は、粗製Ｐ
ＱＱ水溶液をカラム筒頂から流下させてイオン交換体に
ＰＱＱを吸着させた後であシ、かつ、吸着されたＰＱＱ
を塩を添加した緩衝液で展開、溶出させる前である。
ＱＱ水溶液をカラム筒頂から流下させてイオン交換体に
ＰＱＱを吸着させた後であシ、かつ、吸着されたＰＱＱ
を塩を添加した緩衝液で展開、溶出させる前である。
この洗浄に使用される緩衝液は、イオン交換クロマトグ
ラフィで使用される通常の緩衝液であればよく、特に制
限はないが、クラーク（Ｃ１ａｒｋ）、ラブ（Ｌｕｂｓ
）氏緩衝液、ゼーレンゼン（５ｏｒｅｎｓｅｎ）氏緩衝
液、コルソフ（Ｋｏｌｔｈｏｆｆ）氏緩衝液、ワールポ
ー／Ｌ／ （Ｗａ １ｐｏｌｅ）氏緩衝液、マツキルヴ
アイン（Ｍｃ１４ｖａｉｎｅ）氏緩衝液、パリツオッホ
（Ｐａｌｉｚｏｃｈ）氏硼砂塩混合液、ミバエリス（Ｍ
ｉｃｈａｅｌｉｓ）氏ベロナール緩衝液、ミバエリス氏
ジメチールグリシン緩衝液、ブリットン アンド ロビ
７７７ （Ｂｒ１ｔｔｏｎ ＆ Ｒｏｂｉｎｓｏｎ）氏
ベロナール塩−塩酸混合液、アドキンス アンド ポー
チ７（Ａｔｋｉｎｓ ＆ Ｐａｕｔｉｎ）氏炭酸ソーダ
ー硼酸混合液、リンガ−（Ｒｉｎｇｅｔ）氏緩衝液、メ
ンツエル（Ｍｅｎｚｅｌ）氏炭酸混合液、トリス−塩酸
緩衝液、ゼーレンゼン（Ｓｍｒｅｎｓｅｎ ）氏のり
ん酸緩衝液、りん酸緩衝液、酢酸緩衝液およびグリシン
−ＮａＯＨ緩衝液などが使用される。これらの中、実用
上、りん酸緩衝液およびトリス−塩酸緩衝液が好ましい
。
ラフィで使用される通常の緩衝液であればよく、特に制
限はないが、クラーク（Ｃ１ａｒｋ）、ラブ（Ｌｕｂｓ
）氏緩衝液、ゼーレンゼン（５ｏｒｅｎｓｅｎ）氏緩衝
液、コルソフ（Ｋｏｌｔｈｏｆｆ）氏緩衝液、ワールポ
ー／Ｌ／ （Ｗａ １ｐｏｌｅ）氏緩衝液、マツキルヴ
アイン（Ｍｃ１４ｖａｉｎｅ）氏緩衝液、パリツオッホ
（Ｐａｌｉｚｏｃｈ）氏硼砂塩混合液、ミバエリス（Ｍ
ｉｃｈａｅｌｉｓ）氏ベロナール緩衝液、ミバエリス氏
ジメチールグリシン緩衝液、ブリットン アンド ロビ
７７７ （Ｂｒ１ｔｔｏｎ ＆ Ｒｏｂｉｎｓｏｎ）氏
ベロナール塩−塩酸混合液、アドキンス アンド ポー
チ７（Ａｔｋｉｎｓ ＆ Ｐａｕｔｉｎ）氏炭酸ソーダ
ー硼酸混合液、リンガ−（Ｒｉｎｇｅｔ）氏緩衝液、メ
ンツエル（Ｍｅｎｚｅｌ）氏炭酸混合液、トリス−塩酸
緩衝液、ゼーレンゼン（Ｓｍｒｅｎｓｅｎ ）氏のり
ん酸緩衝液、りん酸緩衝液、酢酸緩衝液およびグリシン
−ＮａＯＨ緩衝液などが使用される。これらの中、実用
上、りん酸緩衝液およびトリス−塩酸緩衝液が好ましい
。
またｐＨ２〜１０を示す緩衝液が使用される。
イオン交換クロマトグラフィにおいて平衡化に使用され
る緩衝液と同種で、かつほり等しいｐＨを有する緩衝液
を使用することが最も好ましい。また、緩衝液の使用量
および供給速度にも特に制限はないが、実用上、使用量
は充填イオン交換体の見掛は容積の約５〜２０倍径度と
され、また供給速度は緩衝液がカラム内を自然流下すれ
ばよいが、カラム頂部から加圧するかまたはカラム底部
から吸引して加速してもよく、実用上、通常は充填陰イ
オン交換体の見掛は容！１１００−当ｆｉ ２００ｉｕ
−５ｔ／ｈｒ とされる。
る緩衝液と同種で、かつほり等しいｐＨを有する緩衝液
を使用することが最も好ましい。また、緩衝液の使用量
および供給速度にも特に制限はないが、実用上、使用量
は充填イオン交換体の見掛は容積の約５〜２０倍径度と
され、また供給速度は緩衝液がカラム内を自然流下すれ
ばよいが、カラム頂部から加圧するかまたはカラム底部
から吸引して加速してもよく、実用上、通常は充填陰イ
オン交換体の見掛は容！１１００−当ｆｉ ２００ｉｕ
−５ｔ／ｈｒ とされる。
また、この洗浄時の温度は％に制限はなく、実用上、常
温乃至室温でよく、特に冷却、加熱する必要はないが、
カラム内でＰＱＱ塩が析出しない温度乃至陰イオン交換
体が吸着能を失なわない温度であれば、冷却、加熱する
ことを妨けない。
温乃至室温でよく、特に冷却、加熱する必要はないが、
カラム内でＰＱＱ塩が析出しない温度乃至陰イオン交換
体が吸着能を失なわない温度であれば、冷却、加熱する
ことを妨けない。
イオン交換クロマトグラフィにおける操作−緩衝液によ
る平衡化、ＰＱＱの吸着および塩を添加した緩衝液によ
るＰＱＱの展開、溶出−は従来の公知方法と実質的に異
る処はない。
る平衡化、ＰＱＱの吸着および塩を添加した緩衝液によ
るＰＱＱの展開、溶出−は従来の公知方法と実質的に異
る処はない。
すなわち、粗製ＰＱＱはその給源および製法ならびに抽
出法などに特に制限はない。また粗製ＰＱＱは水溶液に
して使用されるが、この水溶液中のＰＱＱ濃度は特に制
限はないが、実用上通常は２９／を以下である。
出法などに特に制限はない。また粗製ＰＱＱは水溶液に
して使用されるが、この水溶液中のＰＱＱ濃度は特に制
限はないが、実用上通常は２９／を以下である。
イオン交換クロマトグラフィに使用されるイオン交換体
としては通常は陰イオン交換体が使用され、陰イオン交
換体としては通常は陰イオン交換樹脂が使用される。陰
イオン交換樹脂としてはたとえば解離基として、アミノ
エチル（ＡＥ−）、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ−
）、もしくはフォータナリアミノエチル（ＱＡＥ−）を
有する陰イオン交換樹脂などが好ましい。
としては通常は陰イオン交換体が使用され、陰イオン交
換体としては通常は陰イオン交換樹脂が使用される。陰
イオン交換樹脂としてはたとえば解離基として、アミノ
エチル（ＡＥ−）、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ−
）、もしくはフォータナリアミノエチル（ＱＡＥ−）を
有する陰イオン交換樹脂などが好ましい。
これらの陰イオン交換樹脂の代表的な市販品として、た
とえば、ＤＥＡＥ−セファデックスＡ−２５、ＤＥＡＥ
−セファデックスＡ−５０゜ＤＥＡＥ−セフアセｔｖ
（５ｅｐｈａｃｅｌ） Ｄ Ｅ ＡＥ−セファローズ
ＧＬ−６８．ＱＡＥ−セファデックスＡ−２５、ＱＡＥ
−セファデックスＡ−ＳＯ（以上、ファルマシア社の商
品）、ＤＥＡＥ−セロファイン（チッソ四の商品）およ
びＤＥＡＥ−トヨパール６５０（東洋１達■の商品）な
どがある。これらのうち、ＤＥＡＥ−セファデックスＡ
−２５、ＤＥＡＥ−セロファインおよびＤＥＡＥ−トヨ
パールなどが奸才しい。
とえば、ＤＥＡＥ−セファデックスＡ−２５、ＤＥＡＥ
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（５ｅｐｈａｃｅｌ） Ｄ Ｅ ＡＥ−セファローズ
ＧＬ−６８．ＱＡＥ−セファデックスＡ−２５、ＱＡＥ
−セファデックスＡ−ＳＯ（以上、ファルマシア社の商
品）、ＤＥＡＥ−セロファイン（チッソ四の商品）およ
びＤＥＡＥ−トヨパール６５０（東洋１達■の商品）な
どがある。これらのうち、ＤＥＡＥ−セファデックスＡ
−２５、ＤＥＡＥ−セロファインおよびＤＥＡＥ−トヨ
パールなどが奸才しい。
また、イオン交換体の形状は粒状、球状、多孔性粒状お
よび微粒状ならびに膜状のいずれであってもよい。
よび微粒状ならびに膜状のいずれであってもよい。
ｐＨ６−８の緩衝液をカラム頂部から流下させて、これ
らのイオン交換体が充填されているカラム内を平衡化さ
せた後に粗製ＰＱＱ水溶液をカラム頂部から流下させて
ＰＱＱを吸着させる。次いで前記の如く緩衝液でカラム
を洗浄する。洗浄の後ｉｃ ＮａＣｔあるいはＫＣｌな
どの塩を添加した緩衝液をカラム頂部から流下させてＰ
ＱＱを展開、溶出させる。この塩濃度としては０．１〜
２．０Ｍの範囲であればいずれでも良いが、展開液量を
節減できる点では０．２〜１゜５Ｍが好ましい。また緩
衝液に塩を添加して塩の濃度を逐次０−１Ｍに変化させ
る濃度勾配溶出法が、不純物との分離性がすぐれ、しか
も展を 開液量φ節減しうるので好ましい。このイオン交換クロ
マトグラフィに使用される緩衝液は、前記のカラムの洗
浄に使用されるような緩衝液が使用される。また平衡化
に使用される緩衝液とＰＱＱの展開、溶出に使用される
緩衝液とは種ａおよびｐＨがそれぞれ互に等しいことが
好ましい。
らのイオン交換体が充填されているカラム内を平衡化さ
せた後に粗製ＰＱＱ水溶液をカラム頂部から流下させて
ＰＱＱを吸着させる。次いで前記の如く緩衝液でカラム
を洗浄する。洗浄の後ｉｃ ＮａＣｔあるいはＫＣｌな
どの塩を添加した緩衝液をカラム頂部から流下させてＰ
ＱＱを展開、溶出させる。この塩濃度としては０．１〜
２．０Ｍの範囲であればいずれでも良いが、展開液量を
節減できる点では０．２〜１゜５Ｍが好ましい。また緩
衝液に塩を添加して塩の濃度を逐次０−１Ｍに変化させ
る濃度勾配溶出法が、不純物との分離性がすぐれ、しか
も展を 開液量φ節減しうるので好ましい。このイオン交換クロ
マトグラフィに使用される緩衝液は、前記のカラムの洗
浄に使用されるような緩衝液が使用される。また平衡化
に使用される緩衝液とＰＱＱの展開、溶出に使用される
緩衝液とは種ａおよびｐＨがそれぞれ互に等しいことが
好ましい。
いた緩衝液に添加された塩類以外の不純物が、１０〜５
０％と多爺に含有されている。しかし、本発明の方法を
用いることにより、この不純物を５〜２ａ９６と著しく
減少させることができる。
０％と多爺に含有されている。しかし、本発明の方法を
用いることにより、この不純物を５〜２ａ９６と著しく
減少させることができる。
なお、イオン交換クロマトグラフィおよび本発明によっ
て得られたそれぞれのＰＱＱ塩含有画分く含まれるＰＱ
Ｑ塩は、級衝液Ｋｍ加された塩のアルカリ金属とＰＱＱ
との塩である。こりＰＱＱ塩は薬効などにおいてＰＱＱ
と同等である。
て得られたそれぞれのＰＱＱ塩含有画分く含まれるＰＱ
Ｑ塩は、級衝液Ｋｍ加された塩のアルカリ金属とＰＱＱ
との塩である。こりＰＱＱ塩は薬効などにおいてＰＱＱ
と同等である。
以下の実施例によって本発明をさらに具体的に説明する
。なお、本発明はこれらの実施例に限定されるものでは
ない。
。なお、本発明はこれらの実施例に限定されるものでは
ない。
１１！施例 １
キサントバクタ−オートトロフイカス
ＤＳＭ４３１を培養して得られた培養液を遠心分離して
、画体を除去し、培養上澄液を得、この培養上澄液を精
製した。
、画体を除去し、培養上澄液を得、この培養上澄液を精
製した。
２ｍＭ夛ん醗カリウム緩衝液（ｐＨ７，０）をカラム頂
部から流下させて平衡化したＤＥＡＥ−トヨパール６５
０（［洋曹達製）カラム（充填量２．６Ｘ１０ｍ）を２
本（ＡカラムおよびＢカラム）用意し、それぞれのカラ
ムにこの培養上澄液を８ｔづつ２０時間か−って流下さ
せてＰＱＱを吸着させた。
部から流下させて平衡化したＤＥＡＥ−トヨパール６５
０（［洋曹達製）カラム（充填量２．６Ｘ１０ｍ）を２
本（ＡカラムおよびＢカラム）用意し、それぞれのカラ
ムにこの培養上澄液を８ｔづつ２０時間か−って流下さ
せてＰＱＱを吸着させた。
Ａカラムは、２ｍＭりん酸カリウム緩衝液にＫＣｌ
を添加してＫＣｌ の濃度を０− Ｉ Ｍ ＫＣｌに
逐次変化させた緩衝液 １．２ｔを使用し、濃度勾配溶
出法でＰＱＱを展開溶出させ、ＰＱＱ塩（ＰＱＱ−に塩
）含有画分 ２ｏＯｄを得た。この両分中のＰＱＱ量（
分析においてＰＱＱ塩はＰＱＱとして表示される。以下
同様）は１．２９Ｑ、ＫＣ１濃度は０．８Ｍであり、塩
類を除＜ＰＱＱ純度は７０９６であった。
を添加してＫＣｌ の濃度を０− Ｉ Ｍ ＫＣｌに
逐次変化させた緩衝液 １．２ｔを使用し、濃度勾配溶
出法でＰＱＱを展開溶出させ、ＰＱＱ塩（ＰＱＱ−に塩
）含有画分 ２ｏＯｄを得た。この両分中のＰＱＱ量（
分析においてＰＱＱ塩はＰＱＱとして表示される。以下
同様）は１．２９Ｑ、ＫＣ１濃度は０．８Ｍであり、塩
類を除＜ＰＱＱ純度は７０９６であった。
一方、Ｂカラムはｓ ２ ｍ Ｍりん酸カリウム緩封液
（ｐＨ７，０） ９０ａｍｌｃカラム内を２時間にわ
たって洗浄した後、２ｍＭりん酸カリウム緩衝液Ｋ Ｋ
Ｃｌを添加してＫＣｌの６度を〇−１ＭＫＣｔに逐次変
化させた緩衝液 １．２ｔを使用し、一度勾配溶出法で
ＰＱＱを展開、溶出させ、ＰＱＱ塩（ＰＱＱ−に塩）含
有画分 ２００１を得た。
（ｐＨ７，０） ９０ａｍｌｃカラム内を２時間にわ
たって洗浄した後、２ｍＭりん酸カリウム緩衝液Ｋ Ｋ
Ｃｌを添加してＫＣｌの６度を〇−１ＭＫＣｔに逐次変
化させた緩衝液 １．２ｔを使用し、一度勾配溶出法で
ＰＱＱを展開、溶出させ、ＰＱＱ塩（ＰＱＱ−に塩）含
有画分 ２００１を得た。
この画分中のＰＱＱｆｆｉは、３０ｍ９、ＫＣｌｍ度は
０．８Ｍであり、塩類を除＜ＰＱＱ純度は８７％であっ
た。
０．８Ｍであり、塩類を除＜ＰＱＱ純度は８７％であっ
た。
なお、ＰＱＱ含量およびＰＱＱ純度は、高速液体クロマ
トで求めた（以下の実施例でも同様）機器：高滓製高速
液体クロマトグラフ カラム：ニュクレオシｉｖ （Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ）
５ Ｃ＋ｓ／２７ （容積比） 流速： ０．７Ｍ＋／／ｍｉｎ 検出器：高滓５ＰＤ−６Ａ ＵＶ分分光４計計２５９
ｎｍ） 実施例 ２ アンシロバクター アクアティクス ＡＴＣＣ２５３９
６を培養して得られた培養液からの培養上澄液をイオン
交換体および緩衝液に添加する塩を代えたほかは実施例
１と同様にして精製した。
トで求めた（以下の実施例でも同様）機器：高滓製高速
液体クロマトグラフ カラム：ニュクレオシｉｖ （Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ）
５ Ｃ＋ｓ／２７ （容積比） 流速： ０．７Ｍ＋／／ｍｉｎ 検出器：高滓５ＰＤ−６Ａ ＵＶ分分光４計計２５９
ｎｍ） 実施例 ２ アンシロバクター アクアティクス ＡＴＣＣ２５３９
６を培養して得られた培養液からの培養上澄液をイオン
交換体および緩衝液に添加する塩を代えたほかは実施例
１と同様にして精製した。
すなわち、２ｍＭりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，０）
をカラム上部から流下させて平衡化したＤＥＡＥ−セロ
ファインＡＬ（チッソ製）カラム（充填量２．６×１０
１）を２本（ＣカラムおよびＤカラム）用意し、それぞ
れのカラムに培養上澄液を８ｔづつ吸着させた。
をカラム上部から流下させて平衡化したＤＥＡＥ−セロ
ファインＡＬ（チッソ製）カラム（充填量２．６×１０
１）を２本（ＣカラムおよびＤカラム）用意し、それぞ
れのカラムに培養上澄液を８ｔづつ吸着させた。
Ｃカラムは、２ ｍ Ｍ ’）ん酸カリウム緩衝液にＮ
ａＣ１を添加して０−１．０ＭＮａＣ１（１，２ｔ）の
濃度勾配で溶出し、ＰＱＱ塩（ＰＱＱ−Ｎａ塩）含有画
分 ３００ｄを得た。この両分中のＰＱＱ量は２５調グ
、ＮａＣ１濃度は０．８Ｍ。
ａＣ１を添加して０−１．０ＭＮａＣ１（１，２ｔ）の
濃度勾配で溶出し、ＰＱＱ塩（ＰＱＱ−Ｎａ塩）含有画
分 ３００ｄを得た。この両分中のＰＱＱ量は２５調グ
、ＮａＣ１濃度は０．８Ｍ。
ＰＱＱ純度は６８９６であった。
一方、Ｄカラムは、２ｍＭ！ｌん酸カリウム緩衝液（ｐ
Ｈ７，０） ９００ｍ／で２時間にわたつてカラム内
を洗浄した後、２ｍＭりん酸カリウム緩衝液Ｋ ＮａＣ
１を添加してＯ−１，０ＭＮａＣ１（１，２ｔ）の濃度
勾配で溶出し、ＰＱＱ塩（ＰＱＱ−Ｎａ塩）含有画分
３００−を得た。この画分中のＰＱＱ量は２４ ｍｇ、
ＮａＣ１濃度は、０．８Ｍ％ＰＱＱ純度は８７％であっ
た。
Ｈ７，０） ９００ｍ／で２時間にわたつてカラム内
を洗浄した後、２ｍＭりん酸カリウム緩衝液Ｋ ＮａＣ
１を添加してＯ−１，０ＭＮａＣ１（１，２ｔ）の濃度
勾配で溶出し、ＰＱＱ塩（ＰＱＱ−Ｎａ塩）含有画分
３００−を得た。この画分中のＰＱＱ量は２４ ｍｇ、
ＮａＣ１濃度は、０．８Ｍ％ＰＱＱ純度は８７％であっ
た。
実施例 ３
ハイホミクロビウム エスピー ＤＳＭ１８６９を培養
して得られた培養液からの培養上澄液をイオン交換体お
よび緩衝液に絡加する塩を代えたほかは実施例１と同様
にしてｆｋ製した。
して得られた培養液からの培養上澄液をイオン交換体お
よび緩衝液に絡加する塩を代えたほかは実施例１と同様
にしてｆｋ製した。
すなわち、２ｍＭりん酸カリウムｍｓ液（ｐＨ７，０）
で平衡化しておいたＤ Ｅ Ａ Ｅ −５ｅｐｈａ −
ｄｅｘＡ−２５（ファルマシア製）カラム（充填１１２
．６Ｘ１０儂）を２本（ＥカラムおよびＦカラム）用意
し、それぞれのカラムに培養上澄液を８ｔづつ吸着させ
た。
で平衡化しておいたＤ Ｅ Ａ Ｅ −５ｅｐｈａ −
ｄｅｘＡ−２５（ファルマシア製）カラム（充填１１２
．６Ｘ１０儂）を２本（ＥカラムおよびＦカラム）用意
し、それぞれのカラムに培養上澄液を８ｔづつ吸着させ
た。
Ｅカラムは、２ｍＭりん酸カリウム緩衝液にＮａＣ１を
添加して０−ＩＭ ＮａＣｔ（１，２７！、）の濃度勾
配で溶出し、ＰＱＱ塩（ＰＱＱ−Ｎａ塩）含有画分 ３
００ｄを得た。この両分中のＰＱＱｊ＆は、４６ｍ９で
あＭ ＮａＣ１濃度は、０゜８Ｍであった。また、ＰＱ
Ｑ純度は８４％であった。
添加して０−ＩＭ ＮａＣｔ（１，２７！、）の濃度勾
配で溶出し、ＰＱＱ塩（ＰＱＱ−Ｎａ塩）含有画分 ３
００ｄを得た。この両分中のＰＱＱｊ＆は、４６ｍ９で
あＭ ＮａＣ１濃度は、０゜８Ｍであった。また、ＰＱ
Ｑ純度は８４％であった。
一方、゛ＦＥカラム、２ｍＭりん酸カリウム緩衝液（ｐ
Ｈ７，０） ９ｏＱａ／でカラム内を２時間にわたっ
て洗浄した後％ ２ ｍ Ｍ りん酸カリウム緩衝液に
ＮａＣ１を添加してＯ−Ｉ Ｍ ＮａＣ１（１２ｔ）の
濃度勾配で溶出し、ＰＱＱ塩（Ｐ Ｑ Ｑ −Ｎａ塩）
含有画分 ５００ｄを得た。
Ｈ７，０） ９ｏＱａ／でカラム内を２時間にわたっ
て洗浄した後％ ２ ｍ Ｍ りん酸カリウム緩衝液に
ＮａＣ１を添加してＯ−Ｉ Ｍ ＮａＣ１（１２ｔ）の
濃度勾配で溶出し、ＰＱＱ塩（Ｐ Ｑ Ｑ −Ｎａ塩）
含有画分 ５００ｄを得た。
この画分中のＰＱＱ量は、４７麿９、ＮａＣ１６度は、
０．８Ｍ、ＰＱＱ純度は９０％であった。。
０．８Ｍ、ＰＱＱ純度は９０％であった。。
実施例 ４
２ｍＭりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，０）のかわりに
、５ｍＭ）’Ｊスス−酸緩衝液を用いたほかは、実施例
３と同様にしてＰＱＱの精製を行なった。
、５ｍＭ）’Ｊスス−酸緩衝液を用いたほかは、実施例
３と同様にしてＰＱＱの精製を行なった。
Ｅカラムでの精製では、ＰＱＱ塩含有画分を５００ｄ得
た。この両分中のＰＱＱ益は４５１１９であり、ＮａＣ
１濃度は、０．８Ｍであった。またＰＱＱ純度は８０％
であった。
た。この両分中のＰＱＱ益は４５１１９であり、ＮａＣ
１濃度は、０．８Ｍであった。またＰＱＱ純度は８０％
であった。
一方、Ｆカラムでの精製では、ＰＱＱ塩含有画分を３０
０ｄ得た。この両分中のＰＱＱ量は４６ｍｇでありＮａ
Ｃ４１１４度は、０．８Ｍであった。
０ｄ得た。この両分中のＰＱＱ量は４６ｍｇでありＮａ
Ｃ４１１４度は、０．８Ｍであった。
またＰＱＱ純度は、８９％であった。
物−たとえばたん白質、糖類および糖脂質などの水溶性
の物質−の含有量を容易に低下させることができる。
の物質−の含有量を容易に低下させることができる。
特許出願人 三菱瓦斯化学株式会社
代表者 長野和書
Claims (1)
- 粗製ピロロキノリンキノン水溶液をイオン交換クロマト
グラフィによつて精製するに際し、塩を添加した緩衝液
での展開、溶出に先立つて緩衝液でカラム内を洗浄する
ことを特徴とするピロロキノリンキノンの精製方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61087071A JPH07113023B2 (ja) | 1986-04-17 | 1986-04-17 | ピロロキノリンキノンの精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61087071A JPH07113023B2 (ja) | 1986-04-17 | 1986-04-17 | ピロロキノリンキノンの精製方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62246574A true JPS62246574A (ja) | 1987-10-27 |
| JPH07113023B2 JPH07113023B2 (ja) | 1995-12-06 |
Family
ID=13904710
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61087071A Expired - Fee Related JPH07113023B2 (ja) | 1986-04-17 | 1986-04-17 | ピロロキノリンキノンの精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07113023B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014193838A (ja) * | 2013-02-27 | 2014-10-09 | Mitsubishi Gas Chemical Co Inc | ピロロキノリンキノンの製造方法 |
-
1986
- 1986-04-17 JP JP61087071A patent/JPH07113023B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014193838A (ja) * | 2013-02-27 | 2014-10-09 | Mitsubishi Gas Chemical Co Inc | ピロロキノリンキノンの製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH07113023B2 (ja) | 1995-12-06 |
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |