JPH07113023B2 - ピロロキノリンキノンの精製方法 - Google Patents
ピロロキノリンキノンの精製方法Info
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- JPH07113023B2 JPH07113023B2 JP61087071A JP8707186A JPH07113023B2 JP H07113023 B2 JPH07113023 B2 JP H07113023B2 JP 61087071 A JP61087071 A JP 61087071A JP 8707186 A JP8707186 A JP 8707186A JP H07113023 B2 JPH07113023 B2 JP H07113023B2
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、ピロロキノリンキノンの精製方法に関し、さ
らに詳細にはイオン交換クロマトグラフイによる粗製ピ
ロロキノリンキノン水溶液からのピロロキノンの精製方
法に係わる。
らに詳細にはイオン交換クロマトグラフイによる粗製ピ
ロロキノリンキノン水溶液からのピロロキノンの精製方
法に係わる。
ピロロキノリンキノン（以下PQQと記す）は、別名、2,
7,9−トリカルボキシ−1H−ピロロ〔2,3−ｆ〕キノリン
−4,5−ジオンとも称され、1979年に、メタノール資化
性細菌のメタノール脱水素酵素の補酵素として、精製、
結晶化され、構造決定がなされた（S.A.Salisbury et a
l,Nature,第280巻、p.843（1979））。
7,9−トリカルボキシ−1H−ピロロ〔2,3−ｆ〕キノリン
−4,5−ジオンとも称され、1979年に、メタノール資化
性細菌のメタノール脱水素酵素の補酵素として、精製、
結晶化され、構造決定がなされた（S.A.Salisbury et a
l,Nature,第280巻、p.843（1979））。
さらに、近年、細菌にかぎらず、真核生物のかび、酵
母、さらには哺乳動物にも補酵素として働くPQQが存在
していることが明らかとなつた。このように、PQQは、
補酵素として酵素反応または物資代謝系を活性化するも
のであり、医薬品として重要な役割を果す物質と考えら
れている。
母、さらには哺乳動物にも補酵素として働くPQQが存在
していることが明らかとなつた。このように、PQQは、
補酵素として酵素反応または物資代謝系を活性化するも
のであり、医薬品として重要な役割を果す物質と考えら
れている。
従来、粗製PQQを含む水溶液からのPQQの精製方法として
はDEAE Sephadex（ジエチルアミノエチル系陰イオン交
換樹脂セフアデツクス以下同様）フアルマシア社、登録
商標）Ａ−25カラムに吸着後、ｏ−1M（モル／以下同
様）KCl溶液で溶出する方法（M.Ameyama et al.,Agric.
Biol.Chem.,第48巻、p.561−565（1984））が知られて
いる。しかしながら、この方法ではPQQはPQQ塩として得
られるが、このPQQ塩含有画分は、KClのほかにもたん
白、糖類および糖脂質のような多くの不純物を含んでお
り、これらの不純物を一層少なくする精製方法の開発が
望まれている。
はDEAE Sephadex（ジエチルアミノエチル系陰イオン交
換樹脂セフアデツクス以下同様）フアルマシア社、登録
商標）Ａ−25カラムに吸着後、ｏ−1M（モル／以下同
様）KCl溶液で溶出する方法（M.Ameyama et al.,Agric.
Biol.Chem.,第48巻、p.561−565（1984））が知られて
いる。しかしながら、この方法ではPQQはPQQ塩として得
られるが、このPQQ塩含有画分は、KClのほかにもたん
白、糖類および糖脂質のような多くの不純物を含んでお
り、これらの不純物を一層少なくする精製方法の開発が
望まれている。
本発明者らは、イオン交換クロマトグラフイによるPQQ
の精製方法について研究を重ねた結果、DEAE−Sephadex
Ａ−25などの陰イオン交換体へピロロキノリンキノン
を吸着させた後、塩を特別に加えない通常の緩衝液でカ
ラム内を洗浄したのち、NaClあるいはKClなどの塩を添
加した緩衝液で展開、溶出することにより得られるPQQ
塩含有画分中のPQQ塩ならびにKClおよびNaClのような塩
以外の不純物含量が大幅に低下することを見出し、本発
明を完成した。
の精製方法について研究を重ねた結果、DEAE−Sephadex
Ａ−25などの陰イオン交換体へピロロキノリンキノン
を吸着させた後、塩を特別に加えない通常の緩衝液でカ
ラム内を洗浄したのち、NaClあるいはKClなどの塩を添
加した緩衝液で展開、溶出することにより得られるPQQ
塩含有画分中のPQQ塩ならびにKClおよびNaClのような塩
以外の不純物含量が大幅に低下することを見出し、本発
明を完成した。
すなわち本発明は、粗製ピロロキノリンキノン水溶液を
イオン交換クロマトグラフイによつて精製するに際し、
塩を添加した緩衝液での展開、溶出に先立つて緩衝液で
カラム内を洗浄することを特徴とするピロロキノリンキ
ノンの精製方法である。
イオン交換クロマトグラフイによつて精製するに際し、
塩を添加した緩衝液での展開、溶出に先立つて緩衝液で
カラム内を洗浄することを特徴とするピロロキノリンキ
ノンの精製方法である。
本発明における緩衝液によるカラム内の洗浄は、粗製PQ
Q水溶液をカラム筒頂から流下させてイオン交換体にPQQ
を吸着させた後であり、かつ、吸着されたPQQを塩を添
加した緩衝液で展開、溶出させる前である。
Q水溶液をカラム筒頂から流下させてイオン交換体にPQQ
を吸着させた後であり、かつ、吸着されたPQQを塩を添
加した緩衝液で展開、溶出させる前である。
この洗浄に使用される緩衝液は、イオン交換クロマトグ
ラフイで使用される通常の緩衝液であればよく、特に制
限はないが、クラーク（Clark）、ラブ（Lubs）氏緩衝
液、ゼーレンゼン（Ｓrensen）氏緩衝液、コルソフ
（Kolthoff）氏緩衝液、ワールポール（Walpole）氏緩
衝液、マツキルヴアイン（McIlvaine）氏緩衝液、パリ
ツオツホ（Palizoch）氏硼砂塩混合液、ミハエリス（Mi
chaelis）氏ベロナール緩衝液、ミハエリス氏ジメチー
ルグリシン緩衝液、ブリツトン アンド ロビンソン
（Britton ＆ Robinson）氏ベロナール塩−塩酸混合
液、アトキンス アンド ポーチン（Atkins ＆ Pauti
n）氏炭酸ソーダー硼酸混合液、リンガー（Ringer）氏
緩衝液、メンツエル（Menzel）氏炭酸混合液、トリス−
塩酸緩衝液、ゼーレンゼン（Ｓφrensen）氏のりん酸緩
衝液、りん酸緩衝液、酢酸緩衝液およびグリシン−NaOH
緩衝液などが使用される。これらの中、実用上、りん酸
緩衝液およびトリス−塩酸緩衝液が好ましい。
ラフイで使用される通常の緩衝液であればよく、特に制
限はないが、クラーク（Clark）、ラブ（Lubs）氏緩衝
液、ゼーレンゼン（Ｓrensen）氏緩衝液、コルソフ
（Kolthoff）氏緩衝液、ワールポール（Walpole）氏緩
衝液、マツキルヴアイン（McIlvaine）氏緩衝液、パリ
ツオツホ（Palizoch）氏硼砂塩混合液、ミハエリス（Mi
chaelis）氏ベロナール緩衝液、ミハエリス氏ジメチー
ルグリシン緩衝液、ブリツトン アンド ロビンソン
（Britton ＆ Robinson）氏ベロナール塩−塩酸混合
液、アトキンス アンド ポーチン（Atkins ＆ Pauti
n）氏炭酸ソーダー硼酸混合液、リンガー（Ringer）氏
緩衝液、メンツエル（Menzel）氏炭酸混合液、トリス−
塩酸緩衝液、ゼーレンゼン（Ｓφrensen）氏のりん酸緩
衝液、りん酸緩衝液、酢酸緩衝液およびグリシン−NaOH
緩衝液などが使用される。これらの中、実用上、りん酸
緩衝液およびトリス−塩酸緩衝液が好ましい。
またpH2〜10を示す緩衝液が使用される。イオン交換ク
ロマトグラフイにおいて平衡化に使用される緩衝液と同
種で、かつほゞ等しいpHを有する緩衝液を使用すること
が最も好ましい。また、緩衝液の使用量および供給速度
にも特に制限はないが、実用上、使用量は充填イオン交
換体の見掛け容積の約５〜20倍程度とされ、また供給速
度は緩衝液がカラム内を自然流下すればよいが、カラム
頂部から加圧するかまたはカラム底部から吸引して加速
してもよく、実用上、通常は充填陰イオン交換体の見掛
け容積100ml当り200ml〜３/hrとされる。また、この
洗浄時の温度は特に制限はなく、実用上、常温乃至室温
でよく、特に冷却、加熱する必要はないが、カラム内で
PQQ塩が析出しない温度乃至陰イオン交換体が吸着能を
失なわない温度であれば、冷却、加熱することを妨げな
い。
ロマトグラフイにおいて平衡化に使用される緩衝液と同
種で、かつほゞ等しいpHを有する緩衝液を使用すること
が最も好ましい。また、緩衝液の使用量および供給速度
にも特に制限はないが、実用上、使用量は充填イオン交
換体の見掛け容積の約５〜20倍程度とされ、また供給速
度は緩衝液がカラム内を自然流下すればよいが、カラム
頂部から加圧するかまたはカラム底部から吸引して加速
してもよく、実用上、通常は充填陰イオン交換体の見掛
け容積100ml当り200ml〜３/hrとされる。また、この
洗浄時の温度は特に制限はなく、実用上、常温乃至室温
でよく、特に冷却、加熱する必要はないが、カラム内で
PQQ塩が析出しない温度乃至陰イオン交換体が吸着能を
失なわない温度であれば、冷却、加熱することを妨げな
い。
イオン交換クロマトグラフイにおける操作−緩衝液によ
る平衡化、PQQの吸着および塩を添加した緩衝液によるP
QQの展開、溶出−は従来の公知方法と実質的に異る処は
ない。
る平衡化、PQQの吸着および塩を添加した緩衝液によるP
QQの展開、溶出−は従来の公知方法と実質的に異る処は
ない。
すなわち、粗製PQQはその給源および製法ならびに抽出
法などに特に制限はない。また粗製PQQは水溶液にして
使用されるが、この水溶液中のPQQ濃度は特に制限はな
いが、実用上通常は2g/以下である。
法などに特に制限はない。また粗製PQQは水溶液にして
使用されるが、この水溶液中のPQQ濃度は特に制限はな
いが、実用上通常は2g/以下である。
イオン交換クロマトグラフイに使用されるイオン交換体
としては通常は陰イオン交換体が使用され、陰イオン交
換体としては通常は陰イオン交換樹脂が使用される。陰
イオン交換樹脂としてはたとえば解離基として、アミノ
エチル（AE−）、ジエチルアミノエチル（DEAE−）、も
しくはクオータナリアミノエチル（QAE−）を有する陰
イオン交換樹脂などが好ましい。
としては通常は陰イオン交換体が使用され、陰イオン交
換体としては通常は陰イオン交換樹脂が使用される。陰
イオン交換樹脂としてはたとえば解離基として、アミノ
エチル（AE−）、ジエチルアミノエチル（DEAE−）、も
しくはクオータナリアミノエチル（QAE−）を有する陰
イオン交換樹脂などが好ましい。
これらの陰イオン交換樹脂の代表的な市販品として、た
とえば、DEAE−セフアデツクスＡ−25、DEAE−セフアデ
ツクスＡ−50、DEAE−セフアセル（Sephacel）DEAE−セ
フアローズGL−6B、QAE−セフアデツクスＡ−25、QAE−
セフアデツクスＡ−50（以上、フアルマシア社の商
品）、DEAE−セロフアイン（チツソ（株）の商品）およ
びDEAE−トヨパール650（東洋曹達（株）の商品）など
がある。これらのうち、DEAE−セフアデツクスＡ−25、
DEAE−セロフアインおよびDEAE−トヨパールなどが好ま
しい。また、イオン交換体の形状は粒状、球状、多孔性
粒状および微粒状ならびに膜状のいずれであつてもよ
い。
とえば、DEAE−セフアデツクスＡ−25、DEAE−セフアデ
ツクスＡ−50、DEAE−セフアセル（Sephacel）DEAE−セ
フアローズGL−6B、QAE−セフアデツクスＡ−25、QAE−
セフアデツクスＡ−50（以上、フアルマシア社の商
品）、DEAE−セロフアイン（チツソ（株）の商品）およ
びDEAE−トヨパール650（東洋曹達（株）の商品）など
がある。これらのうち、DEAE−セフアデツクスＡ−25、
DEAE−セロフアインおよびDEAE−トヨパールなどが好ま
しい。また、イオン交換体の形状は粒状、球状、多孔性
粒状および微粒状ならびに膜状のいずれであつてもよ
い。
pH6〜８の緩衝液をカラム頂部から流下させて、これら
のイオン交換体が充填されているカラム内を平衡化させ
た後に粗製PQQ水溶液をカラム頂部から流下させてPQQを
吸着させる。次いで前記の如く緩衝液でカラムを洗浄す
る。洗浄の後にNaClあるいはKClなどの塩を添加した緩
衝液をカラム頂部から流下させてPQQを展開、溶出させ
る。この塩濃度としては0.1〜2.0Mの範囲であればいず
れでも良いが、展開液量を節減できる点では0.2〜1.5M
が好ましい。また緩衝液に塩を添加して塩の濃度を逐次
０−1Mに変化させる濃度勾配溶出法が、不純物との分離
性がすぐれ、しかも展開液量を節減しうるので好まし
い。このイオン交換クロマトグラフイに使用される緩衝
液は、前記のカラムの洗浄に使用されるような緩衝液が
使用される。また平衡化に使用される緩衝液とPQQの展
開、溶出に使用される緩衝液とは種類およびpHがそれぞ
れ互に等しいことが好ましい。
のイオン交換体が充填されているカラム内を平衡化させ
た後に粗製PQQ水溶液をカラム頂部から流下させてPQQを
吸着させる。次いで前記の如く緩衝液でカラムを洗浄す
る。洗浄の後にNaClあるいはKClなどの塩を添加した緩
衝液をカラム頂部から流下させてPQQを展開、溶出させ
る。この塩濃度としては0.1〜2.0Mの範囲であればいず
れでも良いが、展開液量を節減できる点では0.2〜1.5M
が好ましい。また緩衝液に塩を添加して塩の濃度を逐次
０−1Mに変化させる濃度勾配溶出法が、不純物との分離
性がすぐれ、しかも展開液量を節減しうるので好まし
い。このイオン交換クロマトグラフイに使用される緩衝
液は、前記のカラムの洗浄に使用されるような緩衝液が
使用される。また平衡化に使用される緩衝液とPQQの展
開、溶出に使用される緩衝液とは種類およびpHがそれぞ
れ互に等しいことが好ましい。
緩衝液でカラム内を洗浄しない従来のイオン交換カラム
クロマトグラフイで粗製PQQ水溶液を精製した場合に
は、PQQ塩含有画分に、溶出に用いた緩衝液に添加され
た塩類以外の不純物が、10〜50％と多量に含有されてい
る。しかし、本発明の方法を用いることにより、この不
純物を５〜20％と著しく減少させることができる。
クロマトグラフイで粗製PQQ水溶液を精製した場合に
は、PQQ塩含有画分に、溶出に用いた緩衝液に添加され
た塩類以外の不純物が、10〜50％と多量に含有されてい
る。しかし、本発明の方法を用いることにより、この不
純物を５〜20％と著しく減少させることができる。
なお、イオン交換クロマトグラフイおよび本発明によつ
て得られたそれぞれのPQQ塩含有画分に含まれるPQQ塩
は、緩衝液に添加された塩のアルカリ金属とPQQとの塩
である。このPQQ塩は薬効などにおいてPQQと同等であ
る。
て得られたそれぞれのPQQ塩含有画分に含まれるPQQ塩
は、緩衝液に添加された塩のアルカリ金属とPQQとの塩
である。このPQQ塩は薬効などにおいてPQQと同等であ
る。
以下の実施例によつて本発明をさらに具体的に説明す
る。なお、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はない。
る。なお、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はない。
実施例 １ キサントバクター オートトロフイカスDSM431を培養し
て得られた培養液を遠心分離して、菌体を除去し、培養
上澄液を得、この培養上澄液を精製した。
て得られた培養液を遠心分離して、菌体を除去し、培養
上澄液を得、この培養上澄液を精製した。
2mMりん酸カリウム緩衝液（pH7.0）をカラム頂部から流
下させて平衡化したDEAE−トヨパール650（東洋曹達
製）カラム（充填量2.6×10cm）を２本（Ａカラムおよ
びＢカラム）用意し、それぞれのカラムにこの培養上澄
液を８づつ20時間かゝつて流下させてPQQを吸着させ
た。
下させて平衡化したDEAE−トヨパール650（東洋曹達
製）カラム（充填量2.6×10cm）を２本（Ａカラムおよ
びＢカラム）用意し、それぞれのカラムにこの培養上澄
液を８づつ20時間かゝつて流下させてPQQを吸着させ
た。
Ａカラムは、2mMりん酸カリウム緩衝液にKClを添加して
KClの濃度を０−1M KClに逐次変化させた緩衝液1.2を
使用し、濃度勾配溶出法でPQQを展開溶出させ、PQQ塩
（PQQ−Ｋ塩）含有画分200mlを得た。この画分中のPQQ
量（分析においてPQQ塩はPQQとして表示される。以下同
様）は、29mg、KCl濃度は0.8Mであり、塩類を除くPQQ純
度は70％であつた。
KClの濃度を０−1M KClに逐次変化させた緩衝液1.2を
使用し、濃度勾配溶出法でPQQを展開溶出させ、PQQ塩
（PQQ−Ｋ塩）含有画分200mlを得た。この画分中のPQQ
量（分析においてPQQ塩はPQQとして表示される。以下同
様）は、29mg、KCl濃度は0.8Mであり、塩類を除くPQQ純
度は70％であつた。
一方、Ｂカラムは、2mMりん酸カリウム緩衝液（pH7.0）
900mlでカラム内を２時間にわたつて洗浄した後、2mMり
ん酸カリウム緩衝液にKClを添加してKClの濃度を０−1M
KClに逐次変化させた緩衝液1.2を使用し、濃度勾配
溶出法でPQQを展開、溶出させ、PQQ塩（PQQ−Ｋ塩）含
有画分200mlを得た。
900mlでカラム内を２時間にわたつて洗浄した後、2mMり
ん酸カリウム緩衝液にKClを添加してKClの濃度を０−1M
KClに逐次変化させた緩衝液1.2を使用し、濃度勾配
溶出法でPQQを展開、溶出させ、PQQ塩（PQQ−Ｋ塩）含
有画分200mlを得た。
この画分中のPQQ量は、30mg、KCl濃度は0.8Mであり、塩
類を除くPQQ純度は87％であつた。
類を除くPQQ純度は87％であつた。
なお、PQQ含量およびPQQ純度は、高速液体クロマトで求
めた（以下の実施例でも同様） 機器：島津製高速液体クロマトグラフ カラム：ニユクレオシル（Nucleosil）5C184.0×150mm 展開液:H3PO4（85wt％水溶液）/H2O/CH3OH＝0.4/72.6/2
7（容積比） 流速:0.7ml/min 検出器：島津SPD−6A UV分光々度計（259nm） 実施例 ２ アンシロバクター アクアテイクス ATCC25396を培養
して得られた培養液からの培養上澄液をイオン交換体お
よび緩衝液に添加する塩を代えたほかは実施例１と同様
にして精製した。
めた（以下の実施例でも同様） 機器：島津製高速液体クロマトグラフ カラム：ニユクレオシル（Nucleosil）5C184.0×150mm 展開液:H3PO4（85wt％水溶液）/H2O/CH3OH＝0.4/72.6/2
7（容積比） 流速:0.7ml/min 検出器：島津SPD−6A UV分光々度計（259nm） 実施例 ２ アンシロバクター アクアテイクス ATCC25396を培養
して得られた培養液からの培養上澄液をイオン交換体お
よび緩衝液に添加する塩を代えたほかは実施例１と同様
にして精製した。
すなわち、2mMりん酸カリウム緩衝液（pH7.0）をカラム
上部から流下させて平衡化したDEAE−セロフアインAL
（チツソ製）カラム（充填量2.6×10cm）を２本（Ｃカ
ラムおよびＤカラム）用意し、それぞれのカラムに培養
上澄液を８づつ吸着させた。
上部から流下させて平衡化したDEAE−セロフアインAL
（チツソ製）カラム（充填量2.6×10cm）を２本（Ｃカ
ラムおよびＤカラム）用意し、それぞれのカラムに培養
上澄液を８づつ吸着させた。
Ｃカラムは、2mMりん酸カリウム緩衝液にNaClを添加し
て０−1.0M NaCl（1.2）の濃度勾配で溶出し、PQQ塩
（PQQ−Na塩）含有画分300mlを得た。この画分中のPQQ
量は25mg、NaCl濃度は0.8M、PQQ純度は68％であつた。
て０−1.0M NaCl（1.2）の濃度勾配で溶出し、PQQ塩
（PQQ−Na塩）含有画分300mlを得た。この画分中のPQQ
量は25mg、NaCl濃度は0.8M、PQQ純度は68％であつた。
一方、Ｄカラムは、2mMりん酸カリウム緩衝液（pH7.0）
900mlで２時間にわたつてカラム内を洗浄した後、2mMり
ん酸カリウム緩衝液にNaClを添加して０−1.0M NaCl
（1.2）の濃度勾配で溶出し、PQQ塩（PQQ−Na塩）含
有画分300mlを得た。この画分中のPQQ量は24mg、NaCl濃
度は、0.8M、PQQ純度は87％であつた。
900mlで２時間にわたつてカラム内を洗浄した後、2mMり
ん酸カリウム緩衝液にNaClを添加して０−1.0M NaCl
（1.2）の濃度勾配で溶出し、PQQ塩（PQQ−Na塩）含
有画分300mlを得た。この画分中のPQQ量は24mg、NaCl濃
度は、0.8M、PQQ純度は87％であつた。
実施例 ３ ハイホミクロビウム エスピー DSM1869を培養して得
られた培養液からの培養上澄液をイオン交換体および緩
衝液に添加する塩を代えたほかは実施例１と同様にして
精製した。
られた培養液からの培養上澄液をイオン交換体および緩
衝液に添加する塩を代えたほかは実施例１と同様にして
精製した。
すなわち、2mMりん酸カリウム緩衝液（pH7.0）で平衡化
しておいたDEAE−Sepha−dexA−25（フアルマシア製）
カラム（充填量2.6×10cm）を２本（ＥカラムおよびＦ
カラム）用意し、それぞれのカラムに培養上澄液を８
づつ吸着させた。
しておいたDEAE−Sepha−dexA−25（フアルマシア製）
カラム（充填量2.6×10cm）を２本（ＥカラムおよびＦ
カラム）用意し、それぞれのカラムに培養上澄液を８
づつ吸着させた。
Ｅカラムは、2mMりん酸カリウム緩衝液にNaClを添加し
て０−1M NaCl（1.2）の濃度勾配で溶出し、PQQ塩（P
QQ−Na塩）含有画分300mlを得た。この画分中のPQQ量
は、46mgでありNaCl濃度は、0.8Mであつた。また、PQQ
純度は84％であつた。
て０−1M NaCl（1.2）の濃度勾配で溶出し、PQQ塩（P
QQ−Na塩）含有画分300mlを得た。この画分中のPQQ量
は、46mgでありNaCl濃度は、0.8Mであつた。また、PQQ
純度は84％であつた。
一方、Ｆカラムは、2mMりん酸カリウム緩衝液（pH7.0）
900mlでカラム内を２時間にわたつて洗浄した後、2mMり
ん酸カリウム緩衝液にNaClを添加して０−1M NaCl（1.2
）の濃度勾配で溶出し、PQQ塩（PQQ−Na塩）含有画分
300mlを得た。
900mlでカラム内を２時間にわたつて洗浄した後、2mMり
ん酸カリウム緩衝液にNaClを添加して０−1M NaCl（1.2
）の濃度勾配で溶出し、PQQ塩（PQQ−Na塩）含有画分
300mlを得た。
この画分中のPQQ量は、47mg、NaCl濃度は、0.8M、PQQ純
度は90％であつた。
度は90％であつた。
実施例 ４ 2mMりん酸カリウム緩衝液（pH7.0）のかわりに、5mMト
リス−塩酸緩衝液を用いたほかは、実施例３と同様にし
てPQQの精製を行なつた。
リス−塩酸緩衝液を用いたほかは、実施例３と同様にし
てPQQの精製を行なつた。
Ｅカラムでの精製は、PQQ塩含有画分を300ml得た。この
画分中のPQQ量は45mgであり、NaCl濃度は、0.8Mであつ
た。またPQQ純度は80％であつた。
画分中のPQQ量は45mgであり、NaCl濃度は、0.8Mであつ
た。またPQQ純度は80％であつた。
一方、Ｆカラムでの精製では、PQQ塩含有画分を300ml得
た。この画分中のPQQ量は46mgでありNaCl濃度は、0.8M
であつた。またPQQ純度は、89％であつた。
た。この画分中のPQQ量は46mgでありNaCl濃度は、0.8M
であつた。またPQQ純度は、89％であつた。
本発明においてイオン交換クロマトグラフイによつて得
られたPQQ塩含有画分中の無機塩以外の不純物−たとえ
ばたん白質、糖類および糖脂質などの水溶性の物質−の
含有量を容易に低下させることができる。
られたPQQ塩含有画分中の無機塩以外の不純物−たとえ
ばたん白質、糖類および糖脂質などの水溶性の物質−の
含有量を容易に低下させることができる。
Claims (1)
- 【請求項１】粗製ピロロキノリンキノン水溶液をイオン
交換クロマトグラフイによつて精製するに際し、塩を添
加した緩衝液での展開、溶出に先立つて緩衝液でカラム
内を洗浄することを特徴とするピロロキノリンキノンの
精製方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61087071A JPH07113023B2 (ja) | 1986-04-17 | 1986-04-17 | ピロロキノリンキノンの精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61087071A JPH07113023B2 (ja) | 1986-04-17 | 1986-04-17 | ピロロキノリンキノンの精製方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62246574A JPS62246574A (ja) | 1987-10-27 |
| JPH07113023B2 true JPH07113023B2 (ja) | 1995-12-06 |
Family
ID=13904710
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61087071A Expired - Fee Related JPH07113023B2 (ja) | 1986-04-17 | 1986-04-17 | ピロロキノリンキノンの精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07113023B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6217323B2 (ja) * | 2013-02-27 | 2017-10-25 | 三菱瓦斯化学株式会社 | ピロロキノリンキノンの製造方法 |
-
1986
- 1986-04-17 JP JP61087071A patent/JPH07113023B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62246574A (ja) | 1987-10-27 |
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