JPH02286093A

JPH02286093A - ビタミンｂ↓１↓２及びその誘導体の分離回収方法

Info

Publication number: JPH02286093A
Application number: JP10826589A
Authority: JP
Inventors: Koji Yamanaka; 弘次山中; Sumiko Hikami; 氷上　澄子
Original assignee: BIO IND KYOKAI; Bioindustry Development Centre BIDEC
Current assignee: BIO IND KYOKAI; Bioindustry Development Centre BIDEC
Priority date: 1989-04-27
Filing date: 1989-04-27
Publication date: 1990-11-26

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は、メタン発酵で発生する微生物群１例えばメタ
ン発酵廃水処理汚泥から、ビタミンＢＩ２及びその誘導
体（以下ＶＢ、、と略記する）を分離精製して回収する
方法に関する。

［従来の技術］ＶＢ１２は、核酸代謝、蛋白質代謝、脂質代謝及び糖質
の代謝などにおいて必須の因子であることかよく知られ
ており、　ＶＢ、２欠乏症のほかにも造血機能障害、肝
機能障害、神経疾患などの治療薬として、医薬品あるい
は飼料添加物として広く実用に供され、利用が増大して
いる。

従来、ＶＢ１２の生産は、ｖＢｍ２を生産する特定の微
生物をＶＢ□２の生産を目的として培養し、得られる発
酵液からＶＢ、、を分離回収して行なわれていた。

上記のＶＢ、２生産を目的として特定の微生物を培養す
ることにより得られる発酵液からＶＢ、□を分離精製す
る方法としては１例えば、シアンイオンを加えて煮佛し
たり、８０％エタノール、−５０％アセトン、２０％と
リジン等でＶＩｌ１２を抽出し、抽出液を中性ｐＨ下で
吸着樹脂に接触させてＶＢ１２を吸着させ、洗浄により
非吸着性の夾雑物質を除去した後、低級アルコール類、
低級ケトン類、低級エステル類あるいは低級エーテル類
でＶＢ、□を溶離して回収する方法（特開昭５９−９５
２９９号公報）等を挙げることができる。

また、一般にＶＢ１２はその起源となる微生物種や培養
時の環境により、種々の誘導体として共存しているが、
これらの誘導体を分離する方法としては、例えば逆相カ
ラムを用いた高速液体クロマトグラフィーによる方法（
アナリティカル・バイオケミストリー（Ａｎａｌｉｔｙ
ｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）１５５，３６５（
１９８６））や電気泳動法が、小規模に、主として分析
を目的として実施されている。

メタン発酵法廃水処理は、嫌気性微生物の代謝作用を利
用して、廃水中の有機物をメタンガスと炭酸ガスに分解
して処理する廃水処理技術であり、活性汚泥法のように
空気で曝気して酸素を供給する必要がないことから運転
経費が安く、また発生するメタンガスをエネルギー源と
して利用できる等の利点を有し、現在、し尿処理場、下
水処理場、及び各種産業廃水処理装置で実用化されてい
る。これらのメタン発酵法廃水処理装置で微生物の増殖
により発生する余剰汚泥は、現在のところ脱水処理後焼
却する等の方法で廃棄物として処分されている。

一方、メタン菌がＶＬｔを生産蓄積することからメタン
発酵法廃水処理装置で発生する汚泥には多量のＶＢ、□
が含有されていることが指摘されており（ビタミン、Ｂ
、ａ？０６（１９５６））　、このような余剰汚泥から
ＶｌｌＩ２を分離精製する技術の確立が望まれていた。

［発明が解決しようとする課題］しかしながら、メタン発酵汚泥はＶＢ、を生産を目的と
して培養された特定の微生物の発酵液に比べて、汚泥中
に棲息する種々の微生物や、廃水そのものに由来する夾
雑物質を極めて多量に含有しており、従来のＶＢ１２回
収法をそのまま適用しただけではＶＢ、２の精製品を得
ることは困難である。すなわち、ＶＢ１２精製品を得る
には、吸着樹脂による精製で分離が不可能な疎水性の夾
雑物質を、更に別の原理に基づいて排除する工程が必要
である。

また、吸着樹脂による精製においても、中性ｐＨ下で抽
出液と吸着樹脂を接触させる従来の方法はメタン発酵汚
泥を原料とした場合には問題がある。すなわち、メタン
発酵汚泥中に含有されるＶＢ、□は１代表的ＶＢ、□で
あるジアノコバラミンにおけるテトラビロール環の外側
に位置するアミド基かカルボキシル基で置換された誘導
体（コピリン酸等）を多量に含んでおり、中性１）Ｉｔ
下で吸着樹脂に接触させた場合、カルボキシル基が解離
して。

他の疎水性の夾雑物質に比較してより親水性となり、吸
着樹脂への吸着効率が低下して不利となる。

更に、吸着樹脂による精製だけでは、メタン発酵汚泥が
含有する複数のＶＢ、□誘導体を分割して回収すること
はできない。現在、ＶＢ、□誘導体を分離するために、
逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラフィーや電気
泳動法が主として分析を目的として実施されているが、
これらの技術は経費及び操作の煩雑さの点で工業規模の
分取に適用することは困難である。

従って１本発明は、メタン発酵で発生する汚泥から、有
価物であるＶＢＩ２を分離回収することによりメタン発
酵法に新たな付加価値を与えることを目的とするもので
ある。

また１本発明はメタン発酵汚泥からＶＵ、　、を回収す
るに当たり、メタン発酵汚泥が含有する複数のＶＢ、、
誘導体を安価に効率良く分離する手段を提供することを
目的とするものである。

［課題を解決するための手段］本発明者らは、メタン発酵汚泥からＶＬ２を回収する方
法について鋭意研究を重ねた結果、メタン発酵汚泥に含
有されるＶＢ、２がｐＨ５以下で非常に効率良く吸着樹
脂に吸着されること、及び吸着樹脂による吸着分離（精
製）の後、！Ｑ水性母体の陰イオン交換樹脂を用いて、
アルカリｐｌｆ下で塩濃度勾配をかけるイオン交換クロ
マトグラフィーを実施することにより、安価で且つ工業
規模への適用が容易な手法で夾雑物質を更に排除すると
同時にＶＢ、ａを誘導体に分離して回収し得ることを見
出し、本発明に到達したものである。

即ち１本発明によれば、メタン発酵で発生する汚泥から
、ビタミンＢ１２及びその誘導体を回収するにあたり、
該汚泥からビタミンＢ１２及びその誘導体を抽出した抽
出液を、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体よりなる
イオン交換能を有しない吸着樹脂にｐＨ５以下で接触さ
せてビタミン８１２及びその誘導体を吸着させた後、該
吸着樹脂からビタミンＢＩ２及びその誘導体を有機溶媒
を用いて溶離し、次いで該溶離液中の有機溶媒を除いた
後、有機溶媒を除いた溶離液をアルカリ性とし、あらか
じめアルカリ性の溶液を接触させた親水性母体の陰イオ
ン交換樹脂に接触させてビタミン８１２及びその誘導体
を吸着させ、次いでアルカリ性条件下で塩溶液の塩濃度
を順次上昇させながら、当該塩溶液を前記陰イオン交換
樹脂に接触させることにより、ビタミンＢ１２及びその
誘導体を分離脱着することを特徴とするビタミンＢ１２
及びその誘導体の分離回収方法、が提供される。

［作用］メタン発酵汚泥からのＶＬ、の抽出は公知の方法で行な
えるが、例えば以下のように行なうことかできる。すな
わち、シアンイオンを含む塩類、例えばシアン化カリウ
ムを最終濃度０．０１〜１．０重量％、好ましくは０．
１〜０．５重量％となるようにメタン発酵汚泥に添加し
た後、塩酸等の酸溶液でｐｌｌを５．０〜７．０、好ま
しくはｐＨを６．０〜６．５に調整し、８０〜１００℃
、好ましくは９５〜１００℃に加熱するか、あるいは加
圧下で１００〜ｌ　２１　”Ｃに加熱して、１５〜６０
分間、好ましくは２０〜４０分間ＶＢ、、を抽出する。

ＶＢ１ｇ抽出後、遠心分離等の操作で固液分離を行ない
、ＶＢｌ２を含んだ上澄液を得る。

以上の操作において、シアンイオンは、ＶＢ、□分子中
に存在するコバルト原子の上方配位子を水酸基からシア
ノ基に置換し、　ＶＢ、２抽出以降の操作中にＶＢｔｚ
が光により分解されることを防ぐ目的で添加されている
が、この濃度があまり低いと、　ＶＢ、。

分子中のコバルト原子の上方配位子が水酸基であるＶＢ
、□が残存し、光による分解を受けて収量の著しい低下
をきたす。また、あまりに多量のシアンイオンを使用す
ることは、シアンイオンが強い毒性を有することから好
ましくない。また抽出温度は、あまりに低い温度では菌
体の破壊が不十分でＶＢｌ２が十分に抽出液側へ移行せ
ず、一方あまりに高い温度ではＶＢ１２抽出率は変わら
ず、却って他の夾雑物質を多量に抽出し、後段の分離精
製に於いて不利である。抽出時間についても、抽出温度
と同様のことが云える。またｐＨについては、あまりに
低いｐＨやアルカリ性下で加熱した場合、　ＶＢｌ。

は分解されてしまうので好ましくない。

以上の抽出操作に加えて更にＶＢ＋＊Ｂ＋率を上げるに
は、例えば以下のような操作により行なうことができる
。すなわち、前記した固液分離操作で得られた沈殿を適
量の水で懸濁した後、上記と同様の抽出操作を２〜３回
繰り返し行なうか、あるいは沈殿を０．０１〜１．０重
量％、好ましくは０．１〜０．５重量％のシアン化カリ
ウムを含有する８０％メタノール、８０％エタノール。

５０％アセトン、２０％とリジン等で懸濁させた後、塩
酸等の酸溶液でｐＨを５．０〜７．０．好ましくはｐＨ
６，０〜６．５に調整した後、１５〜６０分間、好まし
くは１５〜４０分間、温浴上で煮沸して抽出しても良い
。有機溶媒を用いて抽出を行なった場合には、ロータリ
ーエバポレーター等を用いて減圧下に加熱し抽出液の有
機溶媒を除去した後、前記の抽出液に合わせてｖｎ、２
抽出液とする。

以上のようにして得られたＶＢ１□Ｂ１法が蛋白質や核
酸等の高分子電解質よりなる夾雑物質を多量に含む場合
には１例えば、吸着樹脂による精製に先立ち、以下のよ
うな操作を行うことによりこれらを除去することができ
る。すなわち、ＶＢ□２抽出液に塩類、例えば硫酸アン
モニウムを１００％飽和となるように添加するか、また
はＶＢ□２抽出液を濃縮後、エタノールを最終濃度が８
０％以上となるように添加して、冷暗所に２時間〜−昼
夜放置して高分子電解質を析出させた後、遠心分離等の
固液分離操作により沈殿を除去して上澄液を得る。

更に、上記の高分子電解質を除去したＶＢ、＊抽出液が
未だ比較的低分子量の夾雑物質を含有する場合は、以下
のようにしてこれらを除去することができる。すなわち
、ＶＢ１２抽出液を塩酸等の酸溶液でｐｉを３．０〜５
．０、好ましくは９Ｂ約４に調整した後、水と混合しな
い少量の有機溶媒、例えばｎ−ブタノール等を加えて振
とうし、ＶＢ１２を有機相へ抽出する。次に、このよう
にして得られたＶＢ１２を含有する有機溶媒に、ｐｔ＋
ａ、　０〜１０．０２好ましくはｐＨ約９のアルカリ水
溶液、例えば希薄アンモニア水等を少量添加して振とう
し、ＶＢ、□を再び水相へ抽出する０以上の操作により
、ｐＨによる水及び有機溶媒に対する溶解度の違いから
、比較的低分子の夾雑物質を概ね除去することができる
。

以上のようにして得られたＶＢ、、抽出液を吸着樹脂に
よる吸着性ＩＩ（精製）処理に供する。

ここで使用する吸着樹脂としては、スチレン−ジビニル
ベンゼン共重合体よりなるイオン交換能を有しない吸着
樹脂で、例えばアンバーライトＸＡＤ−２、同ＸＡＤ−
４、同ＸＡＤ−２０００（ｏ−Ａ　　７ン）ハース社製
）等、あるいはこれらの同等物を使用することができる
。

ＶＢ＋２抽出液との接触に先立って、あらかじめ吸着樹
脂をメタノール、エタノール等で膨潤させた後、脱気純
水で置換し、更にｐＨ３，０〜５．０、好ましくはｐＨ
約４の脱気した緩衝液で置換しておく、＊樹液としては
１例えば０．０３〜０．５モル濃度（Ｍ）、好ましくは
０．０５〜０．２Ｍの酢酸緩衝液等が好適である。

ＶＢ、、抽出液は酢酸等の酸溶液でｐ）１５．０以下、
好ましくはｐＨ３，０〜５．０、更に好ましくはｐＨ約
４に調整した後、吸着樹脂と接触させＶＢ、、を吸着さ
せる。

ＶＢ、、抽出液と吸着樹脂の接触方法は、吸着樹脂なカ
ラムに詰めてこれにＶＢ、２抽出液を下向流、又は上昇
流で通液するカラム法によっても良いし。

ＶＢ、２を適当な容器に取り、適量の吸着樹脂を添加し
て撹拌することにより接触させるバッチ法によっても良
い。

ＶＢ＋ｚの吸着が完了した後、当該湿潤樹脂に対し５〜
３０見／ｌ−湿潤樹脂、好ましくはｌＯ〜２０１／ｌ−
湿潤樹脂の量の前記緩衝液で洗浄し、非吸着性の夾雑物
質を除去する。

吸着樹脂よりＶＢＩ２を脱着させるには、１〜５文／文
−湿潤樹脂のメタノール等の低級アルコール類や、アセ
トン等の低級ケトン類、酢酸エチル等の低級エステル類
、またはジエチルエーテル等の低級エーテル類の有機溶
媒を吸着樹脂に接触させ、ＶＢ、２を吸着樹脂より溶離
させる。

得られたＶＢｔｔ粗精製液を１例えばロータリーエバポ
レーターを用いて減圧下に加熱する等の操作によって前
記有機溶媒を除き、ＶＢ１２粗精製品を得る。メタン発
酵汚泥を原料とするこのＶＢ、□粗精製品は、なおＶＢ
ｉｔ以外の補酵素類等の夾雑物質を含んでおり、またｖ
ｎ、、そのものについても、この段階では複数の誘導体
が混在する混合物として得られている。

このＶＢ＋を粗精製品に対し、下記のようにイオン交換
クロマトグラフィーを実施することにより、残存する夾
雑物質を排除すると同時に、　ＶＢ、２を複数の各誘導
体に分離して回収することが可能となる。

イオン交換クロマトグラフィーで使用する陰イオン交換
樹脂としては、デキストラン、アガロース、セルロース
等の親水性高分子を母体とし、第４級アンモニウム基、
あるいは第３級アミン基等の塩基性基をイオン交換基と
する樹脂、例えばＱ＾Ｅ−３ｅｐｈａｄｅｘ　Ａ−２５
、同Ａ−５０、ＤＥＡＥ−３ｅｐｈａｄｅｘ　Ａ−２５
、同Ａ−５０、Ｑ−３ｅｐｌ＋ａｒｏｓｅ、　ＤＥＡＥ
−８ｅｐｌ＋ａｒｏｇｅ、　ＤＥＡＥ−３ｅｐｈａｃｅ
ｌ　（ファルマシア社製）等や、あるいはこれらの同等
物を使用することができる。

イオン交換クロマトグラフィーに先立って、陰イオン交
換樹脂を常法に従って、あらかじめｐＨａ、Ｏ〜１２．
０、好ましくはｐＨ８，５〜１０゜０のアルカリ性の溶
液、例えば緩衝溶液で平衡化させておく。！ｌ衝溶液と
しては０．０３〜０．５Ｍ、好ましくは０．０５〜Ｏ，
ＬＭのグリシン緩衝液、あるいは同濃度のトリス（ヒド
ロキシメチル）アミノメタン緩衝液等で、中性塩として
例えば塩化ナトリウム等をｏ、ｏｏｓ〜０．０５Ｍ、好
ましくは０．０１〜０．０３Ｍ有する物を使用すること
ができる。

ＶＢｌ、を陰イオン交換樹脂へ吸着させるには、前記の
ＶＢｓｚ粗精製品を、例えば、前記の陰イオン交換樹脂
を平衡化させたのと同一の緩衝液で溶解してアルカリ性
とし、陰イオン交換樹脂カラムに流速５〜４０　ｃｍ／
ｈ、好ましくは１５〜２５ｃｍ／ｈで通液して吸着させ
る。

吸着後、引き続いて当該緩衝液を同一の流速で通液し、
非吸着性の物質を溶出する。

更に、アルカリ性条件下、例えばｐＢ８〜１２、好まし
くはｐＨ８，５〜１Ｏ１０の緩衝液中の塩濃度を初期濃
度から２．０Ｍまで直線的（線形）、あるいは段階的に
上昇させることにより、夾雑物質とＶＢｌｇを分離する
とともに、ＶＢｊａを各誘導体に分離して回収する。

尚、上記のイオン交換クロマトグラフィーに於いて、メ
タン発酵菌の補酵素であるメタノプテリン、Ｆ４２゜、
Ｆ４３゜も同一操作中に分離回収することができる。

またＶＢｔｉの結晶粉末は、イオン交換クロマトグラフ
ィーのＶＢ、２画分を常法に従ってゲル濾過等の方法で
脱塩した後、真空凍結乾燥等の方法で乾燥することによ
り得ることができる。

［発明の効果］以上説明したように１本発明のビタミン８１２□及びそ
の誘導体の分離回収方法によれば、メタン発酵汚泥から
安価で、且つ工業規模に適用可能な手法により、ＶＢｌ
□を各誘導体に分離して回収することができる。

［実施例］以下、本発明を実施例に基づき更に具体的に説明するが
、本発明はこれらの実施例に限られるものではない。

（実施例１）紙バルブ廃水処理装置のメタン発酵汚泥５００ｔａｆＬ
を原料として用いた。

この原料汚泥にシアン化カリウムを最終濃度が０．３重
量％となるように添加し、塩酸でｐＨな６．０に調整し
た後、ｌ　２１　’Ｃで２０分間オートクレーブにより
加熱し、遠心分離して上澄液約４２０ｍＪ１を得た。次
いで沈殿を適量の水で懸濁させ、上記と同様の抽出操作
を再度行ない上澄液合計的７５０ｍ１を得た。更に、得
られた沈殿を０．１重量％のシアン化カリウムを含有す
る８０％メタノールで懸濁し、　ｐＨを６．０に調整し
た後、湯浴上で２０分間煮沸して遠心分離し、メタノー
ル抽出液約３００１見を得た。次に、メタノール抽出液
をロータリーエバポレーターを用いて減圧下に加熱（４
０’Ｃ）Ｌ／てメタノールを除去し、前記の抽出液と合
わせて合計約８００■見の抽出液を得た。

この抽出液に硫酸アンモニウム６２０ｇを加えて１００
％飽和溶液とし、塩酸でｐｌ（４，０に調整した後、冷
暗所に一晩放置した。

析出した蛋白質や核酸等を遠心分離で除去した後、上澄
液を分液漏斗に取り、ｎ−ブタノールを少量を加えて振
とうしＶＢ、２を抽出した。ｎ−ブタノールが着色しな
くなるまで抽出を繰り返し、ｎ−ブタノール抽出法的１
５０−文を得た。

次に、ｎ−ブタノール抽出液に少量の希薄アンモニア水
（ｐＨ９，ｏ）を加えて振とうし、ＶＢｔａを再び水相
へ抽出した。この抽出は水相のｐｉを確認しながら行い
、必要に応じてアンモニア水でｐＨ９，０に調整しなが
ら実施し、水相が着色しなくなる迄抽出を繰り返し、ア
ンモニア水抽出液約１００ｍ１を得た。

次に、あらかじめ１００％メタノール中で一晩浸漬して
おいた吸着樹脂アンバーライトＸＡＤ−２（ローム　ア
ント　ハース社製）１００ｍＪｌをカラム（内径２ｃｍ
φ、高さ３２ｃｍ）に充填し、脱気純水で置換した後、
脱気したＯ、１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４，０）で更に置換
し、吸着樹脂の前処理を完了した。

次いて、前記のアンモニア水抽出液を脱気して、酢酸溶
液でｐＨを４．０に調整した後、アンバーライトＸＡＤ
−２カラムに通液し、ｖｎ、２を吸着させた。抽出液を
全量通液した後、脱気した０、１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４
，０）Ｂを通液して、吸着されない夾雑物質を排除し、
続いて１００％メタノール５００■交を通液してＶＢｌ
、を溶離した。このＶＢ＋２溶離液をロータリーエバポ
レーター（４０℃）によって蒸発乾固させ、ＶＢ、、粗
精製品を得た。

次に、このＶａ、２粗精製品を０．０５Ｍグリシン−０
，０１Ｍ塩化ナトリウム緩衝液（ｐＨ９，５）５　ａｎ
で溶解し、その内の２　ａｎをあらかじめ同一の緩衝液
で常法に従７て平衡化させであるＱＡＥ−３ｅｐｈａｄ
ｅｘ　Ａ−２５（ファルマシア社製）のカラム（内径１
ｃｍ＋φ、高さ１２ｃｍ）に流速０．３　ｍＪＬ／５ｉ
ｎ（２３ｃ＋ｓ／ｈ）で通液して吸着させた。引き続い
て当該ＩＮ＃液を吸着時と同一流速で１時間（１８ｍ文
）通液した後、４時間をかけて緩衝液中の塩化ナトリウ
ム濃度を０．０１Ｍから１．０Ｍとする線形濃度勾配を
与え、ＶＢｌ２を各々の誘導体に分離して溶出させた。

尚、更に引き続いて同一流速て０．０５Ｍグリシン−１
，０Ｍ塩化ナトリウム緩衝液（ｐＨ９，５）を２．５時
間（４５Ｂ）通液した後、４時間をかけて塩化ナトリウ
ム濃度を１．ＯＭから２゜０Ｍに上昇させる線形濃度勾
配をかけることにより、メタン菌の補酵素であるメタノ
プテリン、Ｆ４２Ｂ．　Ｆ４：ＩＧも分離することがて
きた。

第１図は本実施例１におけるイオン交換クロマトグラフ
ィーのクロマトグラムを示しており、第１図において横
軸はフラクションＮｏ、を示し、ｌフラクション当りの
液量は３．０厳ｌである。左側の縦軸は波長３６０ｎｓ
及び４２０ｎｍの吸光度を示し、右側の縦軸は塩化ナト
リウムの濃度を示している。なお図中、実線の曲線は波
長３６０　ｎａの吸光度の推移であり、破線は波長４２
０ｎｓの吸光度の推移である。また、図の上部に記入し
たｖｓ質名は各々の物質の溶出した位置を示している。

第１図に示すフラクションＮｏ、３へ６及びＮｏ。

９〜２２を各々集め、常法に従って５ｅｐｈａｄｅｘＧ
−１５（ファルマシア社製）で脱塩し、ＶＢ１２精製品
を得た。

得られたＶＢ、２精製品について電気泳動と高速液体ク
ロマトクラフィーにより、誘導体の同定を行なったとこ
ろ、第１図におけるＮｏ、　３〜６の画分かＶＢＩ２７
７クター■であり、　Ｎｏ、　９〜２２（７）画分が、
コピリン酸であることが分かった。

各々の誘導体の収量はＶＢ、□ファクター［０，１３Ｊ
Ｌｍｏｌ／Ｊｌ−原料汚泥、コピリン酸　０．ｅｅ＝ｍ
ｏｌ／ｉ−原料汚泥であった。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１におけるイオン交換クロマトクラフィ
ーのクロマトグラムを示す。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）メタン発酵で発生する微生物群汚泥から、ビタミ
ンＢ＿１＿２及びその誘導体を回収するにあたり、該微
生物群汚泥からビタミンＢ＿１＿２及びその誘導体を抽
出した抽出液を、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体
よりなるイオン交換能を有しない吸着樹脂にｐＨ５以下
で接触させてビタミンＢ＿１＿２及びその誘導体を吸着
させた後、該吸着樹脂からビタミンＢ＿１＿２及びその
誘導体を有機溶媒を用いて溶離し、次いで該溶離液中の
有機溶媒を除いた後、有機溶媒を除いた溶離液をアルカ
リ性とし、あらかじめアルカリ性の溶液を接触させた親
水性母体の陰イオン交換樹脂に接触させてビタミンＢ＿
１＿２及びその誘導体を吸着させ、次いでアルカリ性条
件下で塩溶液の塩濃度を順次上昇させながら、当該塩溶
液を前記陰イオン交換樹脂に接触させることにより、ビ
タミンＢ＿１＿２及びその誘導体を分離脱着することを
特徴とするビタミンＢ＿１＿２及びその誘導体の分離回
収方法。