JPH0774233B2 - グルタチオンの精製法 - Google Patents
グルタチオンの精製法Info
- Publication number
- JPH0774233B2 JPH0774233B2 JP13374986A JP13374986A JPH0774233B2 JP H0774233 B2 JPH0774233 B2 JP H0774233B2 JP 13374986 A JP13374986 A JP 13374986A JP 13374986 A JP13374986 A JP 13374986A JP H0774233 B2 JPH0774233 B2 JP H0774233B2
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- Japan
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- glutathione
- water
- impurities
- eluted
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、グルタチオンの精製方法に関する。更に詳し
くはアミノ酸類、無機塩類が共存するグルタチオン含有
液を、スチレンとジビニルベンゼンとの共重合体で、そ
の一部がハロゲン化されている多孔性かつ非イオン性の
吸着樹脂に吸着せしめ、ついで水または含水性有機溶媒
で溶離しグルタチオンを単離、精製する方法に関する。
くはアミノ酸類、無機塩類が共存するグルタチオン含有
液を、スチレンとジビニルベンゼンとの共重合体で、そ
の一部がハロゲン化されている多孔性かつ非イオン性の
吸着樹脂に吸着せしめ、ついで水または含水性有機溶媒
で溶離しグルタチオンを単離、精製する方法に関する。
（従来の技術） 従来、酵母抽出液等のグルタチオン含有液から、グルタ
チオンを単離・精製する方法としては硫酸酸性下、亜酸
化銅（Cu2O）を添加して、グルタチオンの銅塩を形成さ
せ、ついでこの銅塩を硫化水素で分解する、いわゆる銅
塩法が広く知られている。また、銅塩法を経由せずに行
うグルタチオンの精製法としては、多孔性吸着樹脂によ
る精製法も存在する。（特公昭57-26589） （発明が解決しようとする問題点） しかしながら、銅塩法によるグルタチオンの精製法では
グルタチオンの回収率が低く、工程も複雑であり、かつ
猛毒の硫化水素を使用するため、作業環境上の問題も存
在している。一方銅塩法を経由せずに行う多孔性吸着樹
脂による精製法では不純物を含有するグルタチオンを該
樹脂に吸着せしめ、ついでグラタチオンを溶離分別する
に際して、グルタチオンと不純物との分離が完全でな
く、グルタチオンの純度および収率の面で難点を有して
いる。
チオンを単離・精製する方法としては硫酸酸性下、亜酸
化銅（Cu2O）を添加して、グルタチオンの銅塩を形成さ
せ、ついでこの銅塩を硫化水素で分解する、いわゆる銅
塩法が広く知られている。また、銅塩法を経由せずに行
うグルタチオンの精製法としては、多孔性吸着樹脂によ
る精製法も存在する。（特公昭57-26589） （発明が解決しようとする問題点） しかしながら、銅塩法によるグルタチオンの精製法では
グルタチオンの回収率が低く、工程も複雑であり、かつ
猛毒の硫化水素を使用するため、作業環境上の問題も存
在している。一方銅塩法を経由せずに行う多孔性吸着樹
脂による精製法では不純物を含有するグルタチオンを該
樹脂に吸着せしめ、ついでグラタチオンを溶離分別する
に際して、グルタチオンと不純物との分離が完全でな
く、グルタチオンの純度および収率の面で難点を有して
いる。
（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、アミノ酸類、無機塩類等の不純物を含む
グルタチオン含有液からグルタチオンを高収率で、かつ
簡単な操作で単離・精製する方法について鋭意研究を行
った結果、不純物を含むグルタチオン含有液をスチレン
とジビニルベンゼンとの共重合体でその一部がハロゲン
化されている多孔性で、かつ非イオン性の吸着樹脂を充
填したカラムに流してグルタチオンを吸着せしめ、つい
で水又は含水性有機溶媒で溶離することにより、容易に
高純度のグルタチオンが高収率で得られることを見出し
本発明を完成するに到った。
グルタチオン含有液からグルタチオンを高収率で、かつ
簡単な操作で単離・精製する方法について鋭意研究を行
った結果、不純物を含むグルタチオン含有液をスチレン
とジビニルベンゼンとの共重合体でその一部がハロゲン
化されている多孔性で、かつ非イオン性の吸着樹脂を充
填したカラムに流してグルタチオンを吸着せしめ、つい
で水又は含水性有機溶媒で溶離することにより、容易に
高純度のグルタチオンが高収率で得られることを見出し
本発明を完成するに到った。
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明に使用されるグルタチオン含有液は、酵母など微
生物からの抽出液や、合成反応液等が用いられる。
生物からの抽出液や、合成反応液等が用いられる。
本発明に言うスチレンとジビニルベンゼンを主成分とす
る共重合体で一部がハロゲン化されている多孔性でかつ
非イオン性の吸着樹脂とは、例えばセパビーズSP-206、
SP-207（三菱化成工業（株）製）、デュオライトES-861
0（ダイアモンドシャムロック社（米国）製）があげら
れる。
る共重合体で一部がハロゲン化されている多孔性でかつ
非イオン性の吸着樹脂とは、例えばセパビーズSP-206、
SP-207（三菱化成工業（株）製）、デュオライトES-861
0（ダイアモンドシャムロック社（米国）製）があげら
れる。
これらの吸着樹脂を水と共にカラムに充填し、ついで不
純物を含むグルタチオン含有液のpHを0.5乃至７の範囲
（好ましくは１乃至３）に調整したものを該カラムに通
液することによってグルタチオンを吸着樹脂に吸着させ
る。但、この際にグルタチオン含有液中に不純物の一部
も同時に吸着される。次いでグルタチオンが吸着された
吸着樹脂を適量の蒸留水又は純水で洗浄したのち、水又
は含水性有機溶媒例えば、10％エタノールを通液する
と、不純物の溶出区分が先ず溶出し、ついで不純物をほ
とんど含まない、グルタチオンの溶出区分が溶離され
る。溶離終了後の吸着樹脂は水洗するだけでくり返し吸
着−溶離を続けることができる。
純物を含むグルタチオン含有液のpHを0.5乃至７の範囲
（好ましくは１乃至３）に調整したものを該カラムに通
液することによってグルタチオンを吸着樹脂に吸着させ
る。但、この際にグルタチオン含有液中に不純物の一部
も同時に吸着される。次いでグルタチオンが吸着された
吸着樹脂を適量の蒸留水又は純水で洗浄したのち、水又
は含水性有機溶媒例えば、10％エタノールを通液する
と、不純物の溶出区分が先ず溶出し、ついで不純物をほ
とんど含まない、グルタチオンの溶出区分が溶離され
る。溶離終了後の吸着樹脂は水洗するだけでくり返し吸
着−溶離を続けることができる。
（発明の効果） 本発明の方法により得られるグルタチオン含有液は不純
物が極めて少なく、濃縮したのち、直接通常の晶析操作
により、高純度のグルタチオンを取得することができ
る。又、本方法によれば操作は簡単であり、かつ、グル
タチオンの回収率は極めて高く、従来方法では60％以下
であったのに対し、70％以上であった。
物が極めて少なく、濃縮したのち、直接通常の晶析操作
により、高純度のグルタチオンを取得することができ
る。又、本方法によれば操作は簡単であり、かつ、グル
タチオンの回収率は極めて高く、従来方法では60％以下
であったのに対し、70％以上であった。
（実施例） 以下に実施例をあげて本発明を具体的に説明するが、本
発明はこれらに限定されるものではない。
発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１ グルタミン酸，システィン，グリシンを主成分として合
成されたグルタチオン合成反応液400ml（グルタチオン
2.5gを含む）を硫酸を用いてpH1.5に調整し、別にあら
かじめ再生されている吸着樹脂SP207（三菱化成工業
製）200mlを充填したカラムにSV＝2.0で通液し、ついで
同流速で純水を通液してグルタチオンの溶離・分画を行
ったところ、図１のように不純物とグルタチオンが完全
に分離して溶出された。
成されたグルタチオン合成反応液400ml（グルタチオン
2.5gを含む）を硫酸を用いてpH1.5に調整し、別にあら
かじめ再生されている吸着樹脂SP207（三菱化成工業
製）200mlを充填したカラムにSV＝2.0で通液し、ついで
同流速で純水を通液してグルタチオンの溶離・分画を行
ったところ、図１のように不純物とグルタチオンが完全
に分離して溶出された。
比較例１ セパピーズSP207をセパピーズHP-20（三菱化成工業製）
に代えて用いた以外は実施例１と同様の操作を行ったと
ころ、図２に示すように不純物とグルタチオンが重なっ
て溶出され、完全に分離することができなかった。
に代えて用いた以外は実施例１と同様の操作を行ったと
ころ、図２に示すように不純物とグルタチオンが重なっ
て溶出され、完全に分離することができなかった。
実施例２ グルタミン酸、システイン、グリシンを主原料成分とし
て合成されたグルタチオン合成反応液2000ml（グルタチ
オン12.0g（純分換算）を含む）を硫酸を用いてpH1.5に
調整し、あらかじめ再生されているセパビーズSP207
（三菱化成工業製）、800mlを充填したカラムに、SV＝
2.0で通液し、ついで同流速で純水4000mlを通液したの
ち、10％（V/V）メタノール水4000mlを用いて、溶離
し、グルタチオン濃度が1mg/ml以上の画分800mlを得
た。この液を25mlになるまで濃縮し、エタノール21mlを
添加し10℃の冷室に放置したところ、白色結晶が得られ
た。この結晶を分離・乾燥して得られたグルタチオンは
9.96g、純度は99.2％であった。
て合成されたグルタチオン合成反応液2000ml（グルタチ
オン12.0g（純分換算）を含む）を硫酸を用いてpH1.5に
調整し、あらかじめ再生されているセパビーズSP207
（三菱化成工業製）、800mlを充填したカラムに、SV＝
2.0で通液し、ついで同流速で純水4000mlを通液したの
ち、10％（V/V）メタノール水4000mlを用いて、溶離
し、グルタチオン濃度が1mg/ml以上の画分800mlを得
た。この液を25mlになるまで濃縮し、エタノール21mlを
添加し10℃の冷室に放置したところ、白色結晶が得られ
た。この結晶を分離・乾燥して得られたグルタチオンは
9.96g、純度は99.2％であった。
実施例３ 酵母キャンディダ、ユティリス培養菌体からの熱水抽出
液1000ml（グルタチオン3.2gを含む）を硫酸を用いてpH
2.0とし、あらかじめ再生しておいたセパビーズ206（三
菱化成工業製）500mlを充填したカラムに、SV＝2.0で通
液し、グルタチオンを吸着し、純水3000mlをSV＝2.0で
通液洗浄したのち、10％（V/V）メタノール水3000mlで
グルタチオンを溶離し、その溶離液全量をイオン交換樹
脂に通しグルタチオンを吸着させ、ついで６％酢酸500m
lでグルタチオンを溶離したのち10mlに濃縮した。この
濃縮液に活性炭0.1gを添加して室温で1hr攪拌したの
ち、濾過して活性炭を除いた液に、エタノール5mlを添
加して10℃の冷室に放置したところ、白色結晶が得られ
た。この結晶を分離・乾燥して得られたグルタチオンは
2.40g、純度は99.0％であった。
液1000ml（グルタチオン3.2gを含む）を硫酸を用いてpH
2.0とし、あらかじめ再生しておいたセパビーズ206（三
菱化成工業製）500mlを充填したカラムに、SV＝2.0で通
液し、グルタチオンを吸着し、純水3000mlをSV＝2.0で
通液洗浄したのち、10％（V/V）メタノール水3000mlで
グルタチオンを溶離し、その溶離液全量をイオン交換樹
脂に通しグルタチオンを吸着させ、ついで６％酢酸500m
lでグルタチオンを溶離したのち10mlに濃縮した。この
濃縮液に活性炭0.1gを添加して室温で1hr攪拌したの
ち、濾過して活性炭を除いた液に、エタノール5mlを添
加して10℃の冷室に放置したところ、白色結晶が得られ
た。この結晶を分離・乾燥して得られたグルタチオンは
2.40g、純度は99.0％であった。
図１及び図２はそれぞれ実施例１及び比較例１における
図１はSP-207の、図２はHP-20の、純水によるグルタチ
オンと不純物（アミノ酸類、無機塩類）の分離パターン
を示す。 １フラクション:1RV,SV＝2.0
図１はSP-207の、図２はHP-20の、純水によるグルタチ
オンと不純物（アミノ酸類、無機塩類）の分離パターン
を示す。 １フラクション:1RV,SV＝2.0
Claims (1)
- 【請求項１】アミノ酸類および／または無機塩類が共存
するグルタチオン含有液を、スチレンとジビニルベンゼ
ンとの共重合体で、その一部がハロゲン化されている多
孔性でかつ非イオン性の吸着樹脂に吸着せしめ、ついで
水または含水性有機溶媒で溶離することを特徴とするグ
ルタチオンの精製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13374986A JPH0774233B2 (ja) | 1986-06-11 | 1986-06-11 | グルタチオンの精製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13374986A JPH0774233B2 (ja) | 1986-06-11 | 1986-06-11 | グルタチオンの精製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62292797A JPS62292797A (ja) | 1987-12-19 |
| JPH0774233B2 true JPH0774233B2 (ja) | 1995-08-09 |
Family
ID=15112034
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13374986A Expired - Fee Related JPH0774233B2 (ja) | 1986-06-11 | 1986-06-11 | グルタチオンの精製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0774233B2 (ja) |
-
1986
- 1986-06-11 JP JP13374986A patent/JPH0774233B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62292797A (ja) | 1987-12-19 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |