JPH0826020B2 - ジデオキシイノシンの精製方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、合成法により生産され、又はそれ由来の
２′,3′−ジデオキシイノシン（以下,DDIと略す。）の
新規精製方法に関するものである。DDIは抗ウイルス剤
等医薬品として使用されるものである。

〔従来の技術〕

従来のDDIの製造方法としては、ヌクレオシド類の
２′位または３′位の脱酸素反応が行われている（Chem
Pharm Bull,22,128（1974））が以下の理由により、報
告例は少ない。

反応に先立ち保護基を導入しなければならない。

２′位、３′位は立体障害が大きく、反応が起きに
くい。

また、別法として２′,3′−ジデオキシアデノシン
（以下、DDAと略す。）を原料にして酵素を利用したデ
アミネーションによる方法も報告されている（Biochim
Biophs Acta566（２）259（1979））。しかし、原料と
なるDDAも上記理由により製造が難しくデアミネーショ
ンによる方法も報告は少ない。

この為、単離精製についても液体又は薄層クロマトグ
ラフィーによる分取が実施されている程度で工業的に利
用できる精製技術は未だ確立していなかった。

Moffattらの方法（J.Amer.Chem.Soc.,95,4025（197
3））に従い、イノシンを原料とし、２′位、３′位の
脱酵素反応を行った場合、反応液中には、不純物とし
て、副生物である２′−デオキシイノシン（以下、２′
−DIと略す。）３′−デオキシイノシン（以下、３′−
DIと略す。）の他、未反応原料のイノシン（以下、Ino
と略す。）、分解生成物であるヒポキサンチン（以下、
Hypと略す。）が含まれる。

この反応液からDDIを取得する際、晶析法では上記不
純物の溶解度が低い為にDDI結晶中に不純物が混入して
しまう。また、DDI自身が酸性域で分解し易い為イオン
交換樹脂による分離方法も困難であった。

〔発明が解決しようとする問題点〕

上記の欠点を解消するような工業的に優れたDDIの精
製方法の開発が望まれている。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、前記問題点を解決すべく、鋭意検討し
た結果、合成反応終了後のDDIまたはそれ由来の未精製D
DIを例えば水溶液として非極性多孔質樹脂処理すること
により、DDIをHyp,Ino,2′−DI,3′−DI等の不純物と分
離できることを見出し、これらの発見に基づいて本発明
を完成するに至った。

即ち、本発明は合成法により生産された、またはそれ
由来の未精製DDIの精製に際し、DDIを非極性多孔質樹脂
に吸着せしめることを特徴とするDDIの精製方法であ
る。

本発明の出発物質に用いるDDIは、合成法由来のもの
で不純物として少なくともHyp,Ino,2′−DI,3′−DIや
若干の副生成する核酸類のうち，いずれかを含有するも
のである。また、水溶液として使用する場合の溶液のDD
I濃度は、DDIの溶解度以下であれば制限されるものでは
ない。

次に、ここで用いる非極性多孔質樹脂は、例えばその
母体が、スチレン−ジビニルベンゼン系の共重合体又
は、その誘導体例えばこれにハロゲン化し高比重化した
ポリマーである物質であれ、いずれも使用可能である。
例えば、ダイヤイオンHPシリーズ,SPシリーズ（以上、
三菱化成工業）,XAD−４（ローム・アンド・ハース
社）、OC1031（バイエル社）等が利用できるが、その他
の非極性多孔質樹脂であっても同等の性質を有するもの
であればいずれであっても良い。特に高比重化したSP20
7（三菱化成工業）がDDI溶液をフィードした時に樹脂が
浮上したりすることなく、操作性が良い点で適してい
る。

非極性多孔質樹脂とDDI溶液との接液方法は、パッチ
式とカラム式があるが、カラム式の方が操作上簡便で好
ましい。

カラムへの通液速度は、特に制限はなく、通常SV＝0.
5〜4.0、好ましくはSV＝１〜２程度がよい。

カラムにフィードするDDI溶液の体積負荷量はDDI溶液
の濃度によって異なり，同時にDDIの樹脂負荷量（g/l−
Ｒ）は５〜30g/l−Ｒ、好ましくは1O〜20g/l−Ｒが分離
性及び経済性の点で適している。

カラムへの接液温度については、10〜50℃であれば特
に制限されない。この温度ではDDIと濃縮液中の不純物H
yp,Ino,2′−DI,3′−DIとの分離性の相違は殆んどな
い。

次に、カラムからのDDI溶離方法に関して記述する。
溶離剤は、低級脂肪族アルコール水溶液が適している。
例えば、メチルアルコール、エチルアルコール、イソプ
ロピルアルコール等の水溶液である。溶離速度は、通常
のSV＝１〜２程度が良い。

実際の非極性多孔質樹脂を用いた精製操作は次のよう
にすると良い。すなわち、当該樹脂を充填したカラムに
pH調整を行ったDDI反応液を一定量フィード後、直ちに
低濃度アルコール水溶液を用いてHyp,Ino,2′−DI,3′
−DIを溶離し、次にアルコール水溶液の濃度を上げるこ
とにより、DDIを溶離する。

このDDI画分をpH調整後濃縮し、晶析後、冷却するこ
とにより高純度のDDIを分取することができる。

〔実施例〕

以下、実施例により本発明を詳細に説明する。

実施例１ Moffattらの方法（J.Amer.Chem.Soc.,95、4025（197
3））に従い、Ino30.0gを出発原料として、反応せし
め、DDI2.9gを含む混合溶液を得た。

このDDI含有溶液を300ml迄濃縮後、非極性多孔質吸着
樹脂SP207（三菱化成工業（株）製）290ml（カラムφ×
Ｌ＝30mm×410mm）にSV＝２でフィード後、５％エチル
アルコール水溶液5800mlで溶離した（SV＝２），（画分
−１とする）。次に、20％エチルアルコール水溶液1100
mlで溶離を行った（SV＝２），（画分−２とする）。以
上の樹脂操作は液温30℃で行った。

各画分を液体クロマトグラフィー分析により、測定し
た結果、画分−１には３′−DI,2′−DI,Hyp等の不純物
が検出され（各回収率:95％,95％,99％）、画分−２に
はDDIが検出された（回収率65％）。

画分−２をIN NaoHでpH＝8.0で調整後濃縮しDDIを晶
析後、10℃迄冷却し、高純度（99.8％）のDDI結晶1.1g
を取した。

実施例２ 実施例１と同様の方法で取得したDDI含有溶液300mlを
非極性多孔質吸着樹脂SP207（三菱化成工業（株）製）2
90ml（カラムφ×Ｌ＝30mm×410mm）にSV＝２でフィー
ド後、３％イソプロピルアルコール水溶液5200mlで溶離
した（SV＝２），（画分−１とする）。次に、20％イソ
プロピルアルコール水溶液840mlで溶離を行った（SV＝
２），（画分−２とする）。すべての樹脂処理は液温30
℃で行った。

各画分を液体クロマトグラフィー分析により、測定し
た結果、画分−１には３′−DI,2′−DI,Hyp等の不純物
が検出され（各回収率:95％,96％,99％）、画分−２に
は、DDIが検出された。（回収率60％）。

画分−２をINNa0HでpH＝8.0で調整後濃縮しDDIを晶析
後、10℃迄冷却し高純度（99.9％）のDDI結晶1.0gを
取した。

〔発明の効果〕

以上述べた如く、本発明によれば非極性多孔質樹脂を
用いることにより、合成法で生成された、又はそれ由来
のDDIを効率的に分離精製でき、工業化への道が大いに
期待されるものである。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】合成法により生産された、ヒポキサンチ
   ン、イノシン、２′−ジデオキシイノシン及び３′−ジ
   デオキシイノシンの少なくとも一種を不純物として含有
   する２′,3′−ジデオキシイノシンを精製するに際し、
   ２′,3′−ジデオキシイノシンを非極性多孔質樹脂に吸
   着せしめることを特徴とする２′,3′−ジデオキシイノ
   シンの精製方法。
2. 【請求項２】非極性多孔質樹脂が、スチレン−ジビニル
   ベンゼン系の共重合体又は、その誘導体を含有すること
   を特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載の方法。