JPS62292797A - グルタチオンの精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 （産業上の利用分野） 本発明は、グルタチオンの精製方法に関する。

更に詳しくはアミノ酸票、無機塩類が共存するグルタチ
オン含有液ヲ、スチレンとジビニルベンセンとの共重曾
体で、その一部がハロダン化されている多孔性かつ非イ
オン性の吸着４１脂に吸着せしめ、ついで水または含水
性有機溶媒で溶離しグルタチオンを単離、精製する方法
に関する。

（従来の技術） 従来、酵母抽出液等のグルタチオン含有版から、グルタ
チオンを単離・精製する方法としては硫酸酸性下、亜酸
化鋼（ＣｕｚＯ）を添加して、グルタチオンの銅塩を形
成させ、ついでこの銅塩を硫化水素で分解する、いわゆ
る銅塩法が広く知られている。また、銅塩法を経由せず
に行うグルタチオンの精製法としては、多孔性吸着樹脂
による精製法も存在する。（特公昭５７−２６５８９）
（発明が解決しようとする問題点） しかしながら、銅塩法によるグルタチオンの精製法では
グルタチオンの回収率が低く、工程もα雑であり、かつ
猛毎の硫化水素を使用するため、作業環境上の問題も存
在している。一方銅塩法を経由せずに行う多孔性吸着樹
脂によるｆｓ製法では不純物を含有するグルタチオンを
該樹脂に吸肩せしめ、ついでグルタチオンを俗離分別す
るに囁して、グルタチオンと不純物との分離が完全でな
く、グルタチオンの純度および収率の面で難点’ｃ　Ｍ
している。

（問題点を解決するだめの手段） 本発明者らは、アミノ酸類、無機塩類等の不純液 物を含むグルタチオン含有率からグルタチオンを高収率
で、かつ簡単な操作で単離・精製する方法について鋭意
研究を行った結果、不純物を含むグｋｊ’　ｆｙ！−ン
含有ｉｉスチレンとジビニルベンゼンとの共重合体でそ
の一部がハロゲン化されている多孔性で、かつ非イオン
性の吸着樹脂を充填したカラムに流してグルタチオンを
吸着せしめ、ついで水又は含水性有機溶媒で溶離するこ
とにより、容易に高純度のグルタチオンが高収率で得ら
れることを見出し本発明を完成するに到った。

以下、本発明について詳細に説明する。

本発明に使用されるグルタチオン含有液は、酵母など微
生物からの抽出液や、合成反応液等が用いられる。

本発明に言うスチレンとジビニルベンゼンを主成分とす
る共重合体で一部がハロゲン化されている多孔性でかつ
非イオン性の吸着樹脂とは、向えはセパビーズ５Ｐ−２
０６，５Ｐ−２０７（三菱化成工業■製）、デュオライ
）ＥＳ−８６１０（ダイアモンドジャムロック社（米国
）製）があげられる。

これらの吸着樹脂を水と共にカラムに充填し、ついで不
純物を含むグルタチオン含有液のｐＨを０．５乃至７の
範囲（好ましくは１乃至３）に調整したものを該カラム
に通液することによってグルタチオンを吸着樹脂に吸着
させる。但、この際にグルタチオン官有液中の不純物の
一部も同時に吸着される。次いでグルタチオンが吸着さ
れた吸着樹脂を適量の蒸留水又は純水で洗浄したのち、
水又は含水性有機溶媒例えば、１０％エタノール全通液
すると、不純物の溶出区分が先ず浴出し、ついで不純＊
’にほとんど含まない、グルタチオンの溶出区分が溶離
される。溶離終了後の吸着樹脂は水洗するだけでくり返
し吸着−浴ａｔ続けることができる。

（発明の効果〕 本発明の方法により得られるグルタチオン含有液は不純
物が極めて少なく、濃縮したのち、直接通常の晶析操作
により、高純度のグルタチオン金取得することができる
。又、本方法によれば操作は簡単であり、かつ、グルタ
チオンの回収率は極めて高く、従来方法では６０％以下
であったのに以下に実施列をあげて本発明を具体的に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

実施例１ グルタミン酸、システィン、グリシンを主成分として合
成されたグルタチオン合成反応液４００ゴ（グルタチオ
ン２．５１を含む）を硫酸を用いてｐＨ１，５に調整し
、別にあらかじめ再生されている吸着樹脂５Ｐ２０７　
（三菱化成工業製）２００ｍＩ！を充填したカラムに５
Ｖ＝２．０で通液し、ついで同流速で純水を通液してグ
ルタチオンの＠離・分画を行ったところ、図１のように
不純物とグルタチオンが完全に分離して溶出された。

比較ｔ１１ 七ノ！ビーズ５Ｐ２０７全セパビーズＨＰ−２０（三羨
化成工粟製）に代えて用いた以外は実施ダ１１と同様の
操作を行ったところ、図２に示すように不純物とグルタ
チオンが重なって溶出され、完全に分離することができ
なかった。

実施列２ グルタミン酸、システィン、グリシンを主原料成分とし
て合成されたグルタチオン合成反応液２０００ｍ（グル
タチオン１２．０＆（純分換算）を含む）を硫酸を用い
てｐＨ１，５にｙｓａｍし、あらかじめ再生されている
セパピーズ５ｐ２０７　（三菱化成工業製）、８００ｍ
Ａ’を充填したカラムに、Ｓ■＝２．０で通液し、つい
で同流速で純水４００　Ｑｍ　ｉ　通液したのち、１０
％（Ｖ／Ｖ）メタノール水４０００ｍ１を用いて、溶離
し、グルクチ１フ４度がｌＩｎ９ム以上の両分８００ｄ
を得た。この液２２５麻になるまで濃縮し、エタノール
２１１ｎｌを添加し１０℃の冷室に放置したところ、白
色結晶が得られ之。

この結晶を分離・乾燥して得られたグルタチオンは９．
９６Ｎ、純度は９９．２チであった。

実施列３ Ｉｇ母キャンディダ、ユティリス培養菌体からの熱水抽
出液１０００１ｄ（グルタチオン３．２９を含む）を硫
酸を用いてｐＨ２，０とし、あらかじめ再生しておいた
セパピーズ２０６（三菱化成工業製）５００ゴを充填し
たカラムに、５Ｖ＝２．０で通液し、グルタチオンを吸
着し、純水３００　Ｑｍ／を５Ｖ＝２．０で通液洗浄し
たのち、１ｏ％（ｖ／ｖ）メタノール水ついで６チ酢酸
５００′ＩＬｌでグルタチオンを溶離したのち１０１１
ＬｌＫ濃縮した。この濃縮液に活性炭０、ＩＩを添加し
て室温でｌ　ｈｒ攪拌したのち、濾過して活性炭を除い
た液に、エタノール５ｄを添加して１０℃の冷室に放置
したところ、白色結晶が得られた。この結晶を分離Φ乾
燥して得られたグルタチオンは２．４０．Ｆ、純度は９
９．Ｏチであった。

【図面の簡単な説明】

図１及び図２はそれぞれ実施列１及び比較列１における
図１は５Ｐ−２０７の、図２はＨＰ−２０の、純水によ
るグルタチオンと不純物（アミノ酸類、無機塩類）の分
離パターンを示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. アミノ酸類および／または無機塩類が共存するグルタチ
   オン含有液を、スチレンとジビニルベンゼンとの共重合
   体で、その一部がハロゲン化されている多孔性でかつ非
   イオン性の吸着樹脂に吸着せしめ、ついで水または含水
   性有機溶媒で溶離することを特徴とするグルタチオンの
   精製法。