RU2009101969A

RU2009101969A - Синтез инсулинотропных пептидов

Info

Publication number: RU2009101969A
Application number: RU2009101969/10A
Authority: RU
Inventors: Линь ЧЭНЬ (US); Линь ЧЭНЬ; Йен-Квэй ХАН (US); Йен-Квэй ХАН; Кристофер Р. РОБЕРТС (US); Кристофер Р. Робертс
Original assignee: Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг (Ch); Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг
Priority date: 2006-06-23
Filing date: 2007-06-19
Publication date: 2010-07-27
Also published as: EP2035451B1; MA30530B1; CA2654610C; AU2007263043A1; TW200811195A; TWI331155B; NO20084863L; PT2035451E; IL195421A0; DK2035451T3; JP2009541257A; CN101563364A; RU2448978C2; DE602007006310D1; SI2035451T1; CY1110186T1; HRP20100302T1; KR20090023619A; ES2341588T3; ZA200810072B

Abstract

1. Способ получения инсулинотропного пептида, заключающийся в том, что ! з) получают первый пептидный фрагмент, включающий аминокислотную последовательность HX8EX10 (SEQ ID NO. 6), в которой X8 и X10 каждый обозначает остатки ахиральной аминокислоты, Н и Е каждый необязательно несет защитную группу боковой цепи; ! и) получают второй пептидный фрагмент, включающий аминокислотную последовательность TFTSDVX17-18YLEG (SEQ ID NO. 8), в которой остаток, обозначенный символом X17-18, представляет собой дипептидный остаток псевдопролина, где указанные аминокислотные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи; ! к) осуществляют сочетание первого фрагмента со вторым фрагментом с получением третьего пептидного фрагмента, который включает аминокислотную последовательность HX8EX10 TFTSDVX17-18YLEG (SEQ ID NO. 11), где указанные аминокислотные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи; ! л) получают четвертый пептидный фрагмент, включающий аминокислотную последовательность QAAKEFIAWLVKX35 (SEQ ID NO. 9), в которой X35 обозначает остаток ахиральной аминокислотной кислоты, где указанные аминокислотные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи; ! м) осуществляют сочетание четвертого пептидного фрагмента с аргинином с получением пятого пептидного фрагмента, включающего аминокислотную последовательность QAAKEFIAWLVKX35R (SEQ ID NO. 12), где указанные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи; и ! н) осуществляют сочетание пятого фрагмента с третьим фрагментом с получением инсулинотропного пептида, который включает аминокислотную последовательнос

Claims

1. Способ получения инсулинотропного пептида, заключающийся в том, что

з) получают первый пептидный фрагмент, включающий аминокислотную последовательность HX⁸EX¹⁰ (SEQ ID NO. 6), в которой X⁸ и X¹⁰ каждый обозначает остатки ахиральной аминокислоты, Н и Е каждый необязательно несет защитную группу боковой цепи;

и) получают второй пептидный фрагмент, включающий аминокислотную последовательность TFTSDVX^17-18YLEG (SEQ ID NO. 8), в которой остаток, обозначенный символом X^17-18, представляет собой дипептидный остаток псевдопролина, где указанные аминокислотные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи;

к) осуществляют сочетание первого фрагмента со вторым фрагментом с получением третьего пептидного фрагмента, который включает аминокислотную последовательность HX⁸EX¹⁰ TFTSDVX^17-18YLEG (SEQ ID NO. 11), где указанные аминокислотные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи;

л) получают четвертый пептидный фрагмент, включающий аминокислотную последовательность QAAKEFIAWLVKX³⁵ (SEQ ID NO. 9), в которой X³⁵ обозначает остаток ахиральной аминокислотной кислоты, где указанные аминокислотные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи;

м) осуществляют сочетание четвертого пептидного фрагмента с аргинином с получением пятого пептидного фрагмента, включающего аминокислотную последовательность QAAKEFIAWLVKX³⁵R (SEQ ID NO. 12), где указанные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи; и

н) осуществляют сочетание пятого фрагмента с третьим фрагментом с получением инсулинотропного пептида, который включает аминокислотную последовательность HX⁸EX¹⁰TFTSDVX^17-18YLEGQAAKEFIAWLVKX³⁵R (SEQ ID NO. 13), где указанные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи.

2. Способ по п.1, включающий стадии а)-е).

3. Способ по п.1 или 2, заключающийся в том, что дополнительно осуществляют стадию, на которой:

о) удаляют защитные группы боковых цепей с получением инсулинотропного пептида, включающего аминокислотную последовательность HX⁸X¹⁰TFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKX³⁵R (SEQ ID NO. 5), и его аналогов, где каждый из символов Х в положениях 8, 10 и 35 независимо друг от друга обозначает ахиральный, необязательно имеющий стерическую помеху аминокислотный остаток.

4. Способ получения инсулинотропного пептида по п.1, заключающийся в том, что

а) получают первый пептидный фрагмент, включающий аминокислотную последовательность НХ⁸ЕХ¹⁰ (SEQ ID NO. 6), в которой X⁸ обозначает аминокислотный остаток, соответствующий Aib, a X¹⁰ обозначает аминокислотный остаток, соответствующий глицину, Н и Е каждый необязательно несет защитную группу боковой цепи;

б) получают второй пептидный фрагмент, включающий аминокислотную последовательность TFTSDVX^17-18YLEG (SEQ ID NO. 8), в которой остаток, обозначенный символом X^17-18, представляет собой дипептидный остаток псевдопролина, где указанные аминокислотные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи;

в) осуществляют сочетание первого фрагмента со вторым фрагментом с получением третьего пептидного фрагмента, который включает аминокислотную последовательность НХ⁸Х¹⁰ TFTSDV X^17-18YLEG (SEQ ID NO. 11), где указанные аминокислотные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи;

г) получают четвертый пептидный фрагмент, включающий аминокислотную последовательность QAAKEFIAWLVKX³⁵ (SEQ ID NO. 9), в которой X³⁵ обозначает аминокислотный остаток, соответствующий Aib, где указанные аминокислотные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи;

д) осуществляют сочетание четвертого пептидного фрагмента с аргинином с получением пятого пептидного фрагмента, который включает аминокислотную последовательность QAAKEFIAWLVK X³⁵R (SEQ ID NO. 12), где указанные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи; и

е) осуществляют сочетание пятого фрагмента с третьим фрагментом с последующим удалением защитных групп боковых цепей с получением инсулинотропного пептида формулы HX⁸EX¹⁰TFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKX³⁵R (SEQ. ID No. 5) и его аналогов, где X⁸ и X³⁵ обозначают аминокислотные остатки, соответствующие Aib, a X¹⁰обозначает аминокислотный остаток, соответствующий глицину.

5. Способ получения инсулинотропного пептида по п.1, заключающийся в том, что осуществляют стадию, на которой

а) получают пептидный фрагмент, включающий аминокислотную последовательность НХ⁸EХ¹⁰ (SEQ. ID NO. 6), в которой X⁸ и X¹⁰ каждый обозначает остатки ахиральной аминокислоты, или фрагмент представляет собой его аналог, включающий остатки X⁸ и X¹⁰, где Н, Е, X⁸ и X¹⁰ каждый необязательно несет защитную группу боковой цепи; и встраивают пептидный фрагмент в инсулинотропный пептид.

6. Способ по п.1 или 5, в котором X⁸ обозначает аминокислотный остаток, соответствующий метилаланину.

7. Способ по п.1 или 5, в котором X¹⁰ обозначает аминокислотный остаток, соответствующий глицину.

8. Пептидный фрагмент, имеющий аминокислотную последовательность HX⁸EX¹⁰ (SEQ ID NO. 6), в которой X⁸ и X¹⁰ каждый обозначает остатки ахиральной аминокислоты, где Н, Е, X⁸ и X¹⁰ каждый необязательно несет защитную группу боковой цепи.

9. Пептидный фрагмент по п.8, в котором X⁸ обозначает аминокислотный остаток, соответствующий Aib, a X¹⁰ обозначает аминокислотный остаток, соответствующий глицину.

10. Способ по п.5, в котором инсулинотропный пептид включает аминокислотную последовательность (SEQ. ID No. 5)

HX⁸EX¹⁰TFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKX³⁵R,

и его аналоги, где каждый из символов Х в положениях 8, 10 и 35 независимо друг от друга обозначает ахиральный, необязательно имеющий стерическую помеху аминокислотный остаток; и где один или несколько аминокислотных остатков необязательно несут защитную группу боковой цепи.

11. Способ по п.10, в котором по меньшей мере один из символов Х⁸ и Х³⁵ обозначает остаток Aib.

12. Способ по п.10, в котором X¹⁰ обозначает остаток глицина.

13. Способ получения инсулинотропного пептида по п.1, заключающийся в том, что

б) получают пептидный фрагмент, включающий аминокислотную последовательность TFTSDVX^17-18YLEG (SEQ. ID No. 8), в которой остаток, обозначенный символом X^17-18, представляет собой дипептидный остаток псевдопролина; и

встраивают пептидный фрагмент в инсулинотропный пептид.

14. Способ по п.13, в котором инсулинотропный пептид включает аминокислотную последовательность HX⁸EX¹⁰TFTSDVX^17-18YLEG QAAKEFIAWLVKX³⁵R (SEQ ID NO. 13), и его аналоги, где символы X⁸, X¹⁰ и X³⁵ каждый независимо друг от друга обозначает ахиральный аминокислотный остаток, а X^17-18 обозначает остаток псевдопролин, указанные аминокислотные остатки необязательно несут защитную группу боковой цепи.

15. Способ по п.1 или 13, в котором X^17-18 имеет формулу

,

в которой Ф обозначает остаток любой аминокислоты, необязательно несущий защитную группу боковой цепи, и R¹ и R² каждый независимо друг от друга обозначает приемлемый двухвалентный связующий радикал.

16. Способ по п.15, в котором Ф обозначает остаток Ser, необязательно несущий защитную группу боковой цепи.

17. Способ по п.15, в котором R² обозначает -CH₂-.

18. Способ по п.15, в котором R¹ обозначает

где R³ и R⁴ каждый независимо друг от друга обозначает одновалентный радикал, выбранный из Н или (низш.)алкила; или R³ и R⁴ могут также быть членами кольцевой структуры.

19. Способ по п.18, в котором R³ и R⁴ каждый обозначает метил.

20. Пептид или его аналог, включающие аминокислотную последовательность TFTSDVX^17-18YLEG (SEQ. ID NO. 8), в которой остаток, обозначенный символом Х^17-18, представляет собой дипептидный остаток псевдопролина; где указанные аминокислотные остатки необязательно несут защитную группу боковой цепи.

21. Способ получения инсулинотропного пептида по п.1, заключающийся в том, что проводят стадию, на которой:

в) осуществляют сочетание первого пептидного фрагмента, включающего аминокислотную последовательность HX⁸EX¹⁰ (SEQ ID NO. 6), в которой X⁸ и Х¹⁰ каждый обозначает остатки ахиральной аминокислоты, Н и Е каждый необязательно несет защитную группу боковой цепи, со вторым пептидным фрагментом, включающим аминокислотную последовательность TFTSDVX^17-18YLEG (SEQ ID NO. 8), в которой остаток, обозначенный символом X^17-18, представляет собой дипептидный остаток псевдопролина; где указанные аминокислотные остатки необязательно несут защитную группу боковой цепи, с получением третьего пептидного фрагмента, включающего аминокислотную последовательность HX⁸EX¹⁰TFTSDVX^17-18YLEG (SEQ ID NO. 11), где указанные аминокислотные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи; и

22. Способ получения инсулинотропного пептида по п.1, заключающийся в том, что проводят стадию, на которой:

г) получают пептидный фрагмент или его аналог, которые включают аминокислотную последовательность QAAKEFIAWLVKX³⁵ (SEQ ID NO. 9), в которой X³⁵ обозначает остаток ахиральной аминокислоты, указанные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи; и встраивают пептидный фрагмент в инсулинотропный пептид.

23. Способ по п.22, в котором X³⁵ обозначает аминокислотный остаток метилаланина.

24. Способ по п.22, дополнительно включающий стадию, на которой:

д) осуществляют сочетание пептидного фрагмента или его аналога, которые включают аминокислотную последовательность QAAKEFIAWLVKX³⁵ (SEQ ID NO. 9), с аргинином с получением пептидного фрагмента, включающего аминокислотную последовательность QAAKEFIAWLVK X³⁵R (SEQ ID NO. 12), где указанные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи.

25. Способ по п.24, в котором R не имеет защитную группу боковой цепи.

26. Способ по п.22, в котором инсулинотропный пептид включает аминокислотную последовательность HX⁸EX¹⁰TFTSDVX^17-18YLEGQAAKEFIAWLVKX³⁵R (SEQ ID NO. 13), и его аналоги, где символы X⁸, Х¹⁰ и Х³⁵ каждый независимо друг от друга обозначает ахиральный аминокислотный остаток, где указанные аминокислотные остатки последовательности необязательно несут защитную группу боковой цепи; и где Х^17-18 обозначает остаток псевдопролина.

27. Способ по п.22, в котором инсулинотропный пептид включает аминокислотную последовательность (SEQ. ID No. 5)

HX⁸EX¹⁰TFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKX³⁵R,

и его аналоги, где каждый из символов Х в положениях 8, 10 и 35 независимо друг от друга обозначает ахиральный, необязательно имеющий стерическую помеху аминокислотный остаток; и где один или несколько аминокислотных остатков необязательно несут защитные группы боковых цепей.

28. Способ по пп.1-7, 13 или 21-25, в котором инсулинотропный пептид представляет собой пептид, имеющий аминокислотную последовательность (SEQ. ID No. 4)

HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibR,

или его аналог.

29. Способ по п.28, в котором инсулинотропный пептид представляет собой пептид, имеющий аминокислотную последовательность (SEQ. ID No. 4)

HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibR,

или его аналог, амидированный на С-конце.