RU2004119818A - Хроматографическая очистка рекомбинантного человеческого эритропоэтина - Google Patents
Хроматографическая очистка рекомбинантного человеческого эритропоэтина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2004119818A RU2004119818A RU2004119818/04A RU2004119818A RU2004119818A RU 2004119818 A RU2004119818 A RU 2004119818A RU 2004119818/04 A RU2004119818/04 A RU 2004119818/04A RU 2004119818 A RU2004119818 A RU 2004119818A RU 2004119818 A RU2004119818 A RU 2004119818A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- stage
- rhepo
- fractions
- eluted
- column
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/20—Partition-, reverse-phase or hydrophobic interaction chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/505—Erythropoietin [EPO]
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Claims (24)
1. Способ выделения и очистки рекомбинантного человеческого эритропоэтина (rhEpo) из среды для культуры клеток, которая содержит клетки-хозяева, заключающийся в том, что
(а) удаляют клетки-хозяева, части клеток и дебрис из среды для культивирования клеток с помощью процедуры, выбранной из ряда, включающего (I) стадию центрифугирования с последующей объемной фильтрацией, (II) стадию объемной фильтрации и (III) стадию центрифугирования, для получения осветленного супернатанта среды для культивирования;
(б) доводят проводимость супернатанта до 5 мСм/см или менее и значения рН примерно до 7,0-8,0;
(в) вносят супернатант, полученный на стадии (б), в колонку, которая содержит анионообменную хроматографическую среду, промывают колонку, элюируют rhEpo из колонки и собирают пиковую(ые) фракцию(ии), которая(ые) содержит(ат) rhEpo;
(г) подвергают объединенные пиковые фракции, полученные на стадии (в), хроматографии с обращенной фазой с использованием смолы, которая может течь при среднем давлении (<10 бар) и обладает устойчивостью к высоким концентрациям NaOH, при этом rhEpo элюируют с использованием линейного градиента органического растворителя;
(д) вносят одну или несколько элюированных на стадии (г) содержащих rhEpo фракций в колонку, заполненную анионообменными хроматографическими средами, промывают колонку и элюируют rhEpo с помощью линейного солевого градиента;
(е) выбирают одну или несколько элюированных на стадии (д) содержащих rhEpo фракций на основе степени сиалилирования rhEpo и
(ж) подвергают одну или несколько элюированных на стадии (е) содержащих rhEpo фракций одной или нескольким стадиями гель-фильтрации с использованием среды для гель-фильтрации для удаления возможных димеров и более крупных агрегатов и собирают элюат, содержащий rhEpo.
2. Способ по п.1, в котором центрифугирование на стадии (а) осуществляют с помощью сепаратора с набором дисков.
3. Способ по п.1, в котором между стадией (г) и стадией (д), присутствует также дополнительная стадия отбора на основе степени сиалилирования rhEpo одной или нескольких содержащих rhEpo фракций, элюированных на стадии (г).
4. Способ по п.1, в котором перед стадией (г) пиковые фракции, полученные на стадии (в), подвергают стадии осаждения сульфатом аммония для осаждения загрязняющих продукт протеинов клетки-хозяина, затем концентрацию сульфата аммония в супернатанте доводят до концентрации, сопоставимой с концентрацией, используемой на стадии (г).
5. Способ по п.4, в котором концентрация сульфата аммония составляет менее 0,24 М.
6. Способ по п.1, в котором значение рН на стадии (б) составляет примерно 7,5.
7. Способ по п.1, в котором элюирование на стадии (в) осуществляют с использованием буфера, в котором концентрация соли превышает 125 мМ.
8. Способ по п.1, в котором органический растворитель, применяемый на стадии (г), выбирают из ряда, включающего ацетонитрил, этанол и гексиленгликоль.
9. Способ по п.1, в котором полипептид Еро на стадии (г) элюируют, применяя линейный градиент органического растворителя от примерно 10 до примерно 100%.
10. Способ по п.8, в котором органический растворитель, применяемый на стадии (г), представляет собой ацетонитрил, и полипептид Еро элюируют с использованием градиента от примерно 25 до примерно 50%.
11. Способ по п.1, в котором перед стадией (д) фракции, элюированные на стадии (г), разбавляют соответствующим водным буфером.
12. Способ по п.11, в котором перед стадией (д) разбавленные фракции выдерживают в течение периода времени, достаточного для инктивации вирусных загрязнителей.
13. Способ по п.1, в котором на стадии (ж) фракции подвергают стадии ультрафильтрации перед стадией гель-фильтрации.
14. Способ по п.1 или 4, в котором на стадии (ж) фракции подвергают стадии ультрафильтрации перед стадией хроматографии с обращенной фазой.
15. Способ по п.4, в котором обединенные пиковые фракции, полученные на стадии (в), подвергают стадии ультрафильтрации перед стадией осаждения сульфатом аммония.
16. Способ по п.1, в котором дополнительно до или после стадии (ж) осуществляют конечную стадию нанофильтрации для удаления вирусов.
17. Способ по п.1, в котором на стадии (а) после любых процессов, описанных в (I), (II) или (III), осуществляют стадию фильтрации через фильтр с размером отверстий 0,2 мкм.
18. Способ по п.1 или 3, в котором один или несколько процессов на стадии (е) или между стадией (г) и стадией (д) осуществляют с помощью капиллярного зонального электрофореза.
19. Способ выделения и очистки рекомбинантного человеческого эритропоэтина (rhEpo) из среды для культуры клеток, которая содержит клетки-хозяева, заключающийся в том, что
(а) удаляют клетки-хозяева, части клеток и дебрис из среды для культивирования клеток с помощью процедуры, выбранной из ряда, включающего (I) стадию центрифугирования с последующей объемной фильтрацией (II), стадию объемной фильтрации и (III) стадию центрифугирования, где центрифугирование осуществляют с помощью сепаратора с набором дисков, для получения осветленного супернатанта среды для культивирования;
(б) доводят проводимость супернатанта до 5 мСм/см или менее и значения рН примерно до 7,0-8,0;
(в) вносят супернатант, полученный на стадии (б), в колонку, заполненную средами для анионообменной хроматографии Q-HyperD F (фирма BioSepra), промывают колонку, элюируют rhEpo из колонки и собирают пиковую(ые) фракцию(ии), которая(ые) содержит(ат) rhEpo;
(г) подвергают объединенные пиковые фракции, полученные на стадии (в), хроматографии с обращенной фазой с использованием полистирола, который может течь при среднем давлении (<10 бар) и обладает устойчивостью к высоким концентрациям NaOH, такого как Source 30RPC (фирма Amersham Biosciences), при этом rhEpo элюируют с помощью линейного градиента ацетонитрила;
(д) отбирают одну или несколько элюированных на стадии (г) содержащих rhEpo фракций на основе степени сиалилирования rhEpo, вносят эти фракции в колонку, заполненную средами для анионообменной хроматографиии Q-Seph HP (фирма Amersham Biosciences), промывают колонку и элюируют rhEpo с помощью линейного солевого градиента и
(е) выбирают одну или несколько элюированных на стадии (д) содержащих rhEpo фракций на основе степени сиалилирования rhEpo, подвергают эти фракции гель-фильтрации на среде Superdex 75 prep grade (фирма Amersham Biosciences) для удаления возможных димеров и более крупных агрегатов и собирают элюат, содержащий rhEpo.
20. Способ по п.19, в котором одну или несколько фракций выбирают на стадии (д) и/или стадии (е) с помощью капиллярного зонального электрофореза.
21. Способ по п.20, в котором перед осуществлением стадии (г) объединенные пиковые фракции, полученные на стадии (в), подвергают стадии осаждения сульфатом аммония для осаждения загрязняющих продукт протеинов клетки-хозяина, затем концентрацию сульфата аммония в супернатанте доводят до концентрации, сопоставимой с концентрацией, используемой на стадии (г).
22. Способ по п.21, в котором концентрация сульфата аммония составляет менее 0,24 М.
23. Способ по п.19, в котором дополнительно до или после стадии (е) осуществляют конечную стадию нанофильтрации для удаления вирусов.
24. Способ по п.19, в котором культуральная среда представляет собой бессывороточную среду и клетки-хозяева культивируют с помощью процесса ферментации с периодической подпиткой.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US33383901P | 2001-11-28 | 2001-11-28 | |
| US60/333,839 | 2001-11-28 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2004119818A true RU2004119818A (ru) | 2006-01-10 |
Family
ID=23304479
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004119818/04A RU2004119818A (ru) | 2001-11-28 | 2002-11-26 | Хроматографическая очистка рекомбинантного человеческого эритропоэтина |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20060099674A1 (ru) |
| EP (1) | EP1453857B1 (ru) |
| JP (1) | JP4293908B2 (ru) |
| KR (1) | KR20040065567A (ru) |
| CN (1) | CN1596268A (ru) |
| AU (1) | AU2002356733A1 (ru) |
| BR (1) | BR0214568A (ru) |
| CA (1) | CA2466627A1 (ru) |
| ES (1) | ES2525945T3 (ru) |
| HR (1) | HRP20040476A2 (ru) |
| HU (1) | HUP0500061A2 (ru) |
| IL (1) | IL161855A0 (ru) |
| MX (1) | MXPA04005189A (ru) |
| NO (1) | NO20042185L (ru) |
| NZ (1) | NZ533083A (ru) |
| PL (1) | PL368755A1 (ru) |
| RU (1) | RU2004119818A (ru) |
| SI (1) | SI1453857T1 (ru) |
| WO (1) | WO2003045996A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA200403461B (ru) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE363541T1 (de) * | 2002-03-26 | 2007-06-15 | Lek Tovarna Farmacevtskih | Verfahren für die herstellung eines gewünschten profils von erythropoietin glyko-isoformen |
| DK1428878T3 (da) * | 2002-12-13 | 2008-12-08 | Bioceuticals Arzneimittel Ag | Fremgangsmåde til produktion og oprensning af erythropoietin |
| US7157276B2 (en) | 2003-06-20 | 2007-01-02 | Biogen Idec Inc. | Use of depth filtration in series with continuous centrifugation to clarify mammalian cell cultures |
| KR100567448B1 (ko) * | 2003-11-05 | 2006-04-04 | 주식회사 인투젠 | 형질전환 동물의 유즙 전처리방법 및 이를 통한 인체단백질의 정제방법 |
| DE102004027816A1 (de) * | 2004-06-08 | 2006-01-05 | Bioceuticals Arzneimittel Ag | Verfahren zur Reinigung von Erythropoietin |
| WO2006003926A1 (ja) * | 2004-06-30 | 2006-01-12 | Terumo Kabushiki Kaisha | ウィルス不活化ヘモグロビンおよびその製造方法 |
| US7531632B2 (en) * | 2006-02-16 | 2009-05-12 | Gtc Biotherapeutics, Inc. | Clarification of transgenic milk using depth filtration |
| KR100988706B1 (ko) * | 2007-03-07 | 2010-10-18 | 한미홀딩스 주식회사 | 재조합 에리트로포이에틴의 신규한 정제방법 |
| KR100900033B1 (ko) * | 2007-11-21 | 2009-06-01 | 한국생명공학연구원 | 인간 에리스로포이에틴의 정제방법 |
| DE102008002209A1 (de) | 2008-06-04 | 2009-12-10 | Evonik Degussa Gmbh | Verfahren zur Aufreinigung von Erythropoietin |
| MX2010014180A (es) | 2008-06-24 | 2011-02-15 | Reddys Lab Inc Dr | Purificacion de citocinas modificadas. |
| CA2739392A1 (en) * | 2008-10-17 | 2010-04-22 | Percivia Llc | Clarification process |
| DE102008054716A1 (de) * | 2008-12-16 | 2010-06-17 | Evonik Degussa Gmbh | Inprozesskontrolle in einem Verfahren zur Herstellung von EPO |
| CN102712688B (zh) * | 2009-09-23 | 2015-06-24 | 通益制药有限公司 | 重组人红细胞生成素(epo)的纯化方法、由此纯化的epo以及包含纯化的epo的药物组合物 |
| WO2011063195A2 (en) * | 2009-11-20 | 2011-05-26 | Dr. Reddy's Laboratories Ltd. | Purification of modified cytokines |
| CN102453087B (zh) * | 2010-10-22 | 2013-12-25 | 广东赛保尔生物医药技术有限公司 | 一种单取代peg-epo的纯化及制备方法 |
| US20130331554A1 (en) * | 2010-11-15 | 2013-12-12 | Biogen Idec Inc. | Enrichment and concentration of select product isoforms by overloaded bind and elute chromatography |
| WO2012069474A2 (en) * | 2010-11-24 | 2012-05-31 | H. Lundbeck A/S | A method for reducing potential virus burden in a sample by cyanate treatment |
| KR101443257B1 (ko) | 2011-10-18 | 2014-09-19 | 주식회사 종근당 | 낮은 등전점을 갖는 에리스로포이에틴 유사체의 정제방법 |
| EP2970420A4 (en) * | 2013-03-15 | 2016-08-17 | Apotex Inc | STABILITY OF THE ENHANCED LIQUID FORMULATION OF ERYTHROPOIETIN ALPHA VIA A PURIFICATION TREATMENT |
| PL3016729T3 (pl) | 2013-07-05 | 2020-09-07 | Laboratoire Français Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Société Anonyme | Matryca do chromatografii powinowactwa |
| KR101414897B1 (ko) | 2013-11-29 | 2014-07-04 | 씨제이헬스케어 주식회사 | 다베포에틴 알파의 정제 방법 |
| WO2015134640A1 (en) * | 2014-03-05 | 2015-09-11 | GlycoScientific LLC | Isotopically labeled glycans and methods for producing the same |
| CN107001411B (zh) | 2014-12-15 | 2021-07-23 | 默克专利股份公司 | 从粗溶液捕获靶分子 |
| EP3153522A1 (en) | 2015-10-09 | 2017-04-12 | Hetero Drugs Limited | Process for the purification of erythropoietin and darbepoetin alfa |
| CN106770597A (zh) * | 2017-03-01 | 2017-05-31 | 上海博威生物医药有限公司 | 用于检测组合物中促红细胞生成素电荷异质体的cze检测方法 |
| CN112940101A (zh) * | 2019-12-11 | 2021-06-11 | 深圳赛保尔生物药业有限公司 | 重组人促红细胞生成素的纯化方法 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4677195A (en) * | 1985-01-11 | 1987-06-30 | Genetics Institute, Inc. | Method for the purification of erythropoietin and erythropoietin compositions |
| US5856298A (en) * | 1989-10-13 | 1999-01-05 | Amgen Inc. | Erythropoietin isoforms |
| ES2131504T3 (es) | 1990-02-20 | 1999-08-01 | Baxter Int | Trombina humana purificada viricamente segura. |
| DE19504211A1 (de) | 1995-02-09 | 1996-08-14 | Behringwerke Ag | Entfernen von Viren durch Ultrafiltration aus Proteinlösungen |
| TW442492B (en) | 1995-07-26 | 2001-06-23 | Novartis Ag | Process for the enrichment of interferon |
| JP4318751B2 (ja) * | 1996-03-13 | 2009-08-26 | ノボザイムス、 バイオファーマ、 ユーケー、 リミテッド | 発酵制御 |
| BR9917606A (pt) | 1998-11-06 | 2002-12-31 | Bio Sidus S A | Procedimento para a purificação de eritropoetina humana recombinante a partir de sobrenadantes de cultivo de células e eritropoetina humana recombinante obtida com tal procedimento |
-
2002
- 2002-11-26 HU HU0500061A patent/HUP0500061A2/hu unknown
- 2002-11-26 SI SI200231050T patent/SI1453857T1/sl unknown
- 2002-11-26 ES ES02803796.8T patent/ES2525945T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-26 AU AU2002356733A patent/AU2002356733A1/en not_active Abandoned
- 2002-11-26 IL IL16185502A patent/IL161855A0/xx unknown
- 2002-11-26 KR KR10-2004-7008088A patent/KR20040065567A/ko not_active Application Discontinuation
- 2002-11-26 JP JP2003547445A patent/JP4293908B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-26 MX MXPA04005189A patent/MXPA04005189A/es not_active Application Discontinuation
- 2002-11-26 NZ NZ533083A patent/NZ533083A/en unknown
- 2002-11-26 RU RU2004119818/04A patent/RU2004119818A/ru not_active Application Discontinuation
- 2002-11-26 CN CNA028236017A patent/CN1596268A/zh active Pending
- 2002-11-26 EP EP02803796.8A patent/EP1453857B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-26 BR BR0214568-5A patent/BR0214568A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-11-26 CA CA002466627A patent/CA2466627A1/en not_active Abandoned
- 2002-11-26 WO PCT/EP2002/013299 patent/WO2003045996A1/en active Application Filing
- 2002-11-26 PL PL02368755A patent/PL368755A1/xx unknown
- 2002-11-26 US US10/494,558 patent/US20060099674A1/en not_active Abandoned
-
2004
- 2004-05-06 ZA ZA200403461A patent/ZA200403461B/en unknown
- 2004-05-26 NO NO20042185A patent/NO20042185L/no not_active Application Discontinuation
- 2004-05-27 HR HR20040476A patent/HRP20040476A2/xx not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NZ533083A (en) | 2006-09-29 |
| KR20040065567A (ko) | 2004-07-22 |
| JP4293908B2 (ja) | 2009-07-08 |
| EP1453857A1 (en) | 2004-09-08 |
| WO2003045996A1 (en) | 2003-06-05 |
| BR0214568A (pt) | 2004-11-03 |
| MXPA04005189A (es) | 2005-02-17 |
| HRP20040476A2 (en) | 2005-10-31 |
| US20060099674A1 (en) | 2006-05-11 |
| AU2002356733A1 (en) | 2003-06-10 |
| IL161855A0 (en) | 2005-11-20 |
| CA2466627A1 (en) | 2003-06-05 |
| CN1596268A (zh) | 2005-03-16 |
| ES2525945T3 (es) | 2015-01-02 |
| HUP0500061A2 (hu) | 2005-04-28 |
| JP2005518196A (ja) | 2005-06-23 |
| EP1453857B1 (en) | 2014-08-13 |
| PL368755A1 (en) | 2005-04-04 |
| NO20042185L (no) | 2004-08-23 |
| ZA200403461B (en) | 2006-05-31 |
| SI1453857T1 (sl) | 2015-01-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2004119818A (ru) | Хроматографическая очистка рекомбинантного человеческого эритропоэтина | |
| US20200283472A1 (en) | A process for purification of fc-fusion proteins | |
| RU2013120948A (ru) | Способ очистки белков | |
| CN102574911A (zh) | 从样品的一或多种杂质中纯化靶蛋白的方法 | |
| Giese et al. | Purification of antibodies by precipitating impurities using Polyethylene Glycol to enable a two chromatography step process | |
| RU2012154652A (ru) | Устройство для очистки белка и способ применения указанного устройства | |
| Connell et al. | The purification of haptoglobin | |
| RU2769767C1 (ru) | Способ поэтапного удерживания и производственный модуль для получения биомакромолекул и их применение | |
| KR880000464A (ko) | 단백질의 정제 방법 | |
| US20060024689A1 (en) | Process for the purification of recombinant proteins from complex media and purified proteins obtained thereby | |
| KR20160131113A (ko) | 고나도트로핀의 신규한 정제 방법 | |
| Kaltenbrunner et al. | Isoprotein analysis by ion-exchange chromatography using a linear pH gradient combined with a salt gradient | |
| WO2002036245A1 (en) | Integrated separation methods | |
| JPH0533239B2 (ru) | ||
| CN114181300A (zh) | 一种高纯度单克隆抗体的制备方法 | |
| Ameskamp et al. | Pilot scale recovery of monoclonal antibodies by expanded bed ion exchange adsorption | |
| CN111153993A (zh) | 抗TNF-α单克隆抗体的制备方法 | |
| CN106366200B (zh) | 制备重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的方法 | |
| CN115925890A (zh) | 一种抗新冠病毒中和抗体纯化方法 | |
| US10377812B2 (en) | Method for efficient purification of human serum albumin | |
| Kenney et al. | Automated production scale affinity purification of monoclonal antibodies | |
| CN116262774A (zh) | 一种重组蛋白纯化方法 | |
| US5378816A (en) | Methods for high purity chromatographic separation of proteins having EGF-like binding domains | |
| AU603609B2 (en) | Protein purification | |
| Beck et al. | Direct coupling of expanded bed adsorption with a downstream purification step |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FA94 | Acknowledgement of application withdrawn (non-payment of fees) |
Effective date: 20071116 |