RS54903B1 - Inhibitor fosfoinozitid 3 kinaze sa delom koji vezuje cink - Google Patents

Inhibitor fosfoinozitid 3 kinaze sa delom koji vezuje cink

Info

Publication number
RS54903B1
RS54903B1 RS20160457A RSP20160457A RS54903B1 RS 54903 B1 RS54903 B1 RS 54903B1 RS 20160457 A RS20160457 A RS 20160457A RS P20160457 A RSP20160457 A RS P20160457A RS 54903 B1 RS54903 B1 RS 54903B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
compound
cancer
tumor
disease
compounds
Prior art date
Application number
RS20160457A
Other languages
English (en)
Inventor
Xiong Cai
Haixiao Zhai
Chengjung Lai
Changgeng Qian
Rudi Bao
Original Assignee
Curis Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Curis Inc filed Critical Curis Inc
Publication of RS54903B1 publication Critical patent/RS54903B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system having sulfur as a ring hetero atom, e.g. ticlopidine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A61K31/166—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide having the carbon of a carboxamide group directly attached to the aromatic ring, e.g. procainamide, procarbazine, metoclopramide, labetalol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/28—Radicals substituted by singly-bound oxygen or sulphur atoms
    • C07D213/30—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Jedinjenje prema Formuli I:i njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde R je vodonik ili acil grupa.Prijava sadrži još 14 patentnih zahteva.

Description

INHIBITOR FOSFOINOZITID 3
KINAZE SA DELOM KOJI VEZUJE CINK
PRETHODNO STANJE TEHNIKE
[0001] Fosfoinozitidi (Pls), koji su fosforifizovani derivati fosfatidilinozitola, su ključni u eukariotskim ćelijama, regulisanju nuklearnih procesa, dinamici citoskeleta, signaliziranju i komunikaciji membrane. Među drugim enzimima uključenim u Pl metabolizam, PI3 kinaze (PI3K) su privukle posebnu pažnju zbog svojih onkogenih svojstava i potencijala kao ciljevi za lekove PI3 kinaze fosforilat fosfatidilinozitoli ili Pls su na poziciji 3 inozitolnog prstena. (Lindmo et. al Journal of Cell Science 119, 605-614, 2006) 3 fosforilisani fosfolipidi su generisani pomoću 10 fosfonlisani fosfolipidi su generisani pomoću PI3K aktivnosti vezivanja za plekstrinski homologni (PH) domen protein kinaze B (PKB), što prouzrokuje translokaciju PKB u ćelijsku membranu i naknadnu fosforilaciju PKB. Fosforilisana PKB inhibira proteine inicijatore apoptoze kao što je FKHR, Bad, i kasparaze, i smatra se da igra važnu ulogu u napredovanju kancera. PI3K su podeljeni u klase l-lll. i klasa I se još podklasifikuje u klase la i lb Među ovim izoformama. smatra se da klasa la enzima igra najvažniju ulogu u proliferaciji ćelije kao odgovor na faktor rasta - aktivaciju putanje tirozin kinaze (Hayakawa et. al., Bioorganic & Medicinal Chemistiv 14 6847-6858, 2006) (Folkes et. al., Journal of Medicinal Chemistry, 14, 6847-6858. 2006). Tri česte mutacije kod karcinoma konstitutivno aktiviraju PI3Ka i, kada se izraze u ćelijama, oni pogone onkogensku transformaciju i hronićnu aktivaciju nizvodnog signaliziranja pomoću molekula kao što je PKB, S6K i 4E bp1 koji se čestvo vidi u ćelijama karcinoma (Stephens et al . Current Opinion m Pharmacologv, 5(4) 357-365, 2005) Kao takve, PI3 kinaze su atraktivni ciljevi za lećenje proliferativnih bolesti.
[0002]Ima nekoliko poznatih inhibitora PI3 kinaze uključujući VVortmannin i LY294O02-lako je vortmanin (wortmannin) jak PI3K inhibitor sa niskom nanomolarnom IC5Gvrednošću, ima nisku in vivo aktivnost protiv tumora. (Hayakawa et al., Bioorg. Med. Chem. 14(20) 6847-6858 (2006)) Nedavno, grupa morfolinom supstituisanog hinazolina. piridopirimidina i tienopinmidinskih jedinjenja je prikazana kao delotvcrna u sprečavanju PI3 kinaze p110a. (Hayakawa, 6847-6858). Oralna doza morfolina supstituisanog jedinjenjem tienopinmidina (GDC-0941) je pokazala suprestju tumora kod ksenografta glioblastomain vivo.(Folkes et al., JournalofMedicinal Chemistry, 51, 5522-5532, 2008). Sledeće publikacije otrkivaju seriju tienopinmidina, piridopirimidin i hinazolin na osnovu inhibitoraPI3 kinaze: VVO 2008/073785, WO 2008/070740; WO 2007/127183; Objava patenta u SAS ( U.S Patent Publication) 20080242665.
10003]Objava patenta U.S US20100222343;
[0004]Acetilacija histona je reverzibilna modifikacija, sa deacetilacijom koja se katališe pomoću familije enzima obuhvaćenom pojmom histonske deacetilaze (HDACs) HDAC se predstavlja pomoću 18 gena kod ljudi i podeljena je u četiri distinktvine klase (J Mol Biol, 2004. 338:1. 17-31) Kod sisara u klasi I (HDAC 1-3, i HDAC8) se odnose na kvasac RPD3 HDAC, klasa 2 (HDAC4-7, HDAC9 i HDAC 10) se odnose na kvasac HDA1, klasa 4 (HDAC11), i klasa 3 (distinktivna klasa obuhvata sirtuine koji se odnose na kvasac Sir2)
[0005]Csordas, Biochem. J , 1990, 286; 23-38 objašnjava da da histoni podležu posttranslacionoj acetilaciji, t:amino grupe ostataka lizina N terminala, reakcija koja se katališe histonskom acetil transferazom (HAT1) Acetilacija neutrališe pozitivno naelektrisanje lizinske strane lanca, i smatra se da utiče na strukturu hromatina Svakako, višak faktora transkripcije na obrasce hromatina se pojačava hiperacetilacijom histona, i obogaćivanjem u nedovljno acetilisanom histonu H4 je pronađen u transkripciono tihim regiomma genoma (Taunton et al,, Science, 1996, 272 408-411) U slučaju gena potiskivača tumora, transkripciono utišavanje usled modifikacije histona može da odvede do onkogene transformacije i kancera
[0006]Nekoliko klasa HDAC inhibitora se sada procenjuje u kliničkim ispitivanjima, Primeri obuhvataju derivate hidroksamsku kiseline, superoilanilid hidroksamijsku kiselinu (SAHA). PXD101 i LAG824. su za sada u fazi kliničkog razvoja. Kod benzamidne klase HDAC inhibitora. MS-275, MGCD0103 i CI-994 su dostigli klinička ispitivanja Mourneet ai(apstrakt #4725, AACR 2005). pokazuju da tiofenilne modifikacije benzamiđa značajno povećavaju inhibitorsku aktivnost HDAC protiv HDAC1.
[0007]Izvesni kanceri su deiotvomo lečeni takvim kombmovanim pristupom, međutim, režimi lečenja koji koriste koktel citotoksičnih lekova su često ograničeni toksičnostima koje ograničavaju doze i interakcijama 'lek-lek'. Skorašnji rezultati napretka sa lekovima koji su molekularno ciljani su dali nove pristupe kombinaciji lečenja za kancer, što omogućava da se višestruko ciljani agnesi koriste istovremeno, ili kombinovanjem ovih novih terapija sa standardnim hemoterapeuticima ili zračenje da se poboljša ishod bez dostizanja toksičnosti za granične vrednosti. Međutim, sposobnost da se koriste takve kombinacije je sada ograničena na lekove koj pokauju kompatibilna farmakološka i farmakodinamička svojstva Pored toga, zakonskih propisi da se pokaže bezbednost i efikasnost kombinovanih terapija može da bude skuplja i duža nego kod odgovarajućih kliničkih ispitivanja sa samo jednim agensom Pošto se odobre, strategije kombinacije mogu takođe da se dovedu u vezu sa povećanim troškovima za subjekte, kao i smanjenom usaglašenoću kod subjekta zbog složenosti potrebne paradigme doziranja.
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0008]Ovaj se pronalazak odnosi na jedinjenje prema Formuli I
i njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde R je vodonik ili acil grupa Acil grupa je preporučljivo R-|C(0)-gde R-j je supstituisan ili nesupstituisan C-j-C24-alkil. preporučljivo Ci-C-io-alkil. i još preporučljivije C-|-Cg-alkil: supstituisan ili nesupstituisan C2-C24-alkenil, preporučljivo C2-Cirj-alkenil, i još preporučljivije C2-Cs-alkenil; supstituisan ili nesupstituisan C2-C24-alkinil, preporučljivo C2-C1 rj-alkinil, i još preporučljivije C2-CQ-alkinil; supstituisan ih nesupstituisan aril, preporučljivo supstituisan ili nesupstituisan fenil; ili je supstituisan ili nesupstituisan heteroaril
[0009]Pronalazak se odnosi na farmaceutska jedinjenja koja obuhvataju jedinjenje prema Formuli I, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijentom ili
nosačem.
[0010]Jedinjenja prema Formuli I i, posebno, Jedinjenje 1, ima prednosti za upotrebu kao terapijski agensi, kao što je za lečenje kancera i drugih bolesti i poremećaja povezanih sa aktivnošću PI3 kinaze i/ili HDAC aktivnosti. Jedinjenje 1, na pnmer. ima jaku inhibitornu aktivnost protiv molekularnih ciljeva PI3K i HDAC i jaku antiproliferativnu aktivnost naspram velikog broja linija ćelija kancera in vitro Jedinjenje 1 ima značajnu oralnu biodostupnost kako je primećeno na životinjskim modelima Po bilo oralnom ili intravenskom doziranju na miševima koji nose ksenograf tumor, jedinjenje pokazuje značajan unos putem tumorom zahvaćenog tkiva i farmakodinamičku aktivnost u tkivu tumora Jedinjenje 1 takođe pokazuje značajnu antitumornu aktivnost na mišjim modelima kesnograft tumora posle bilo oralne ili intravenske primene. Jedinjenje takođe ima preporučljiv sigurnosni profil, kako je prikazano, na primer, putem ispitivanja genotoksičnosti korišćenjem Ames testa
[0011]Ovaj pronalazak se još odnosi na upotrebu jedinjenja prema ovom pronalasku u lečenju PI3K povezanih bolesti i poremećaja kao što je kancer. Ova jedinjenja još deluju kao HDAC inhibitor putem njihove sposobnosti da vežu jone cinka Ova jedinjenja aktivna na višestrukim terapijskim ciljevima i da su delotvorna za lečenje raznovrsnih bolesti Pored toga. u nekim slučajevima je utvrđeno da ova jedinjenja imaju pojačanu aktivnost kada se uporede sa aktivnostima kombinacija odvojenih molekula individualno i imaju aktivnost inibiranja PI3 kinaze i aktivnost inhibiranja HDAC Drugim rečima, kombinacija PI3 kinaza i inhibitorne aktivnosti HDAC inhibitora u jedan molekul može da obezbedi sinergijski efekat u poređenju sa odvojenim inhibitonma PI3 kinaze i HDAC
[0012]Štaviše, efikasnost inhibitora putanje jednog agensa PI3K je ograničena putem prisustva primarnih /usvojenih genetskih izmena i aktivacije višestrukih putanja koje idu u prilog opstanku i rastu (Engelman (2009) Nature Reviews Cancer, 9 550-562) Inhibicija PI3K putem inhibitora putanje jednog agensa P13K može zapravo da uzvodno reguliše signaliziranje RAF-MEK-ERK putanje otpuštanjem petlji negativne povratne informacije Jednjenja prema ovom pronalasku, putem njihovih integrisanih PI3K/HDAC inhibitornih aktivnosti, obezbeđuje potencijal da se prevaziđu ograničenja za lečenje kancera sa jednociljanim PI3K nhibitorima. Jedinjenja prema ovom pronalasku ometaju mreže kanceru u vivo i in vitro eksperimentima, što je kao rezultat nastalo iz trajne mhibicije PI3K-AKT-mTOR putanje, inhibicija RAF-MEK-ERK putanje, i regulaciju donjeg toka nivora proteina receptora tirozin kinaze (RTK) Pored toga, jedinjenja prema ovom pronalasku podstiču zatajenje ciklusa ćelije i apoptozu što nastaje kao rezultat iz regulacije gornjeg toka supresora tumora p53 i p21 u linijama ćelije tumorain vitro.Prema tome, jedinjenja prema ovom pronalasku imaju potencijaln da prevaziđu primarno stečenu otpornost na lek i mogu da budu efikasnija od mono-terapije sa inhibitorima putanje jednog agensa PI3K u kliničkim primenama.
[0013]Još jedno varijantno rešenje ovog poronalaska obezbeđuje jedinjenja za upotrebu u postupcima inhibiranja aktivnosti PI3 kinaze. dovođenjem u kontakt PI3 kinaze sa delotvornom inhibitornom količinom jedinjenja prema Formuli I, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli
KRATAK OPIS SLIKA
[0014]
Slika 1 je grafikon koncentracije Jedinjenja 1 naspram vremena u plazmi i tkivu tumora posle oralne primene na H2122 labortorijskom mišu koji nosi ksenograft tumor
Slika 2Aje grafički prikaz koncentracije plazme Jedinjenja 1 naspram vremena na Scid miševima koji nose Daudi ksenograft tumor posle oralne doze na 25. 50 i 100 mg/kg
Slika 2B je grafički prikaz koncentracije tumora Jedinjenja 1 naspram vremena na Scid miševima koji nose Daudi ksenograft tumor posle oralne doze na 25, 50 i 100 mg/kg
Slika 2C je grafički prikaz koncentracije Jedinjenja 1 naspram vremena u plazmi i tkiva tumora na
Scid miševima koji nose Daudi ksenograft tumor posle oralne doze na 100 mg/kg
Slika 3 predstavlja VVestern blots ekstrakata tkiva tumora iz kontrole i Jedinjenja 1 tretiranih (25, 50 and 100 mg/Kg) Scid miševima koji nose Daudi ksenografte tumora.
Slika 4 je grafikon Jedinjenja 1 koncentracije plazme naspram vremena na bigl-psima posle oralnog ili intravenskog doziranja
Slika 5Aje grafikon rasta tumora naspram vremena na H2122 laboratorijskim miševima koji nose ksenograft tumor tretiranim Jedinjenjem 1 ili pomoćnim sredstvom
Slika 5B je grafiikon rasta tumora naspram vremena na Daudi laboratorijskim miševima koji nose ksenograft tumor tretiranim Jedinjenjem 1 ili pomoćnim sredstvom
Slika 5C je grafikon rasta tumora naspram vremena na OPM2 laboratorijskim miševima koji nose ksenograft tumor tretiranim Jedinjenjem 1 ili pomoćnim sredstvom
Slika 6 je grafikon koji prikazuje nivoe cirkulišuće krvi T i B limfocita posle tretmana sa Jedinjenjem 1 ili pomoćnim sredstvom
Slike 7A do 7G predstavljaju VVestern blotove ekstrakata iz kontrole i Jedinjenja 1 tretiranih H460 (Kras, PI3K) ćelijama
GDC je GDC-0941; LBH je LBH-589.
Slike 8A do 8C predstavljaju VVestern blotove ekstrakata iz kontrole i Jedinjenja 1 tretiranih H1975 (EGFR, PI3K), BT474 (HER2, PI3K) H1975 (EGFR. PI3K). A375 (B-Raf) i RPMI-822 (p53") ćelijama.
Slika 9 je grafiikon rasta tumora naspram vremena na Scid miševima koji nose Daudi ksenograft tumor tretiranih oralno sa Jedinjenjem 1 ili pomoćnim sredstvom.
Slika 10 je grafiikon rasta tumora naspram vremena na Scid miševima koji nose Daudi ksenograft tumor tretiranih pomoćnim sredstvom, Jedinjenjem 1, SAH, GDC-0941 ili kombinacijom SAHA i GDC-0941.
Slika 11 je grafiikon rasta tumora naspram vremena na laboratorijskim miševima koji nose SU-DHL4 ksenograft tumor tretiranih oralno sa Jedinjenjem 1 ili pomoćnim sredstvom Slika 12 je grafikon rasta tumora naspram vremena na OPM2 laboratorijskim miševima koji nose ksenograft tumor tretiranim Jedinjenjem 1 ili pomoćnim sredstvom
Slika 13 je grafikon rasta tumora naspram vremena na MM1S SCID miševima koji nose ksenograft tumor tretiranim Jedinjenjem 1 ili pomoćnim sredstvom
Slika 14 je grafikon rasta tumora naspram vremena na MM1R SCID miševima koji nose ksenograft tumor tretiranim Jedinjenjem 1 ili pomoćnim sredstvom.
Slika 15 predstavlja VVestern blotove ekstrakata tumora iz Jedinjenja 1 tretiranih SCID miševa koji nose Daudi, SuDHL4. HS-Sultan, DOHH-2, OPM-2, MM1R ili MM IS ksenograft tumore Slika 16 je grafikon rasta tumora naspram vremena na SCID miševima koji nose Daudi tumor tretiranim Jedinjenjem 1, CAL-101 ili pomoćnim sredstvom.
Slika 17 je grafikon rasta tumora naspram vremena na SCID miševima koji nose Daudi tumor tretiranim Jedinjenjem 1, ciklofosfamidom, kombinacijom Jedinjenja 1 i ciklofosfamida ili pomoćnog sredstva.
Slika 18 je grafikon rasta tumora naspram vremena na SCID miševima koji nose MM1S tumor tretiranim Jedinjenjem 1, lenalidomidom, kombinacijom Jedinjenja 1 i lenalidomida ili pomoćnog sredstva.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0015]U preporučenom izvođenju, jedinjenje prema Formuli I je prikazano dalje u tekstu:
(ovde u daljem tekstu 'Jedinjenje 1", se takođe pominje kao N-hidroksi-2-({(2-(6-metoksipindin-3-il)-4-morfolinotieno[3,2-d]pirinnidin-6-il)metil)(metil}amino)pirimidin-5-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0016]Ovaj pronalazak još daje jedinjenja za upotrebu u postupcima za sprečavanje ili lečenje bolesti ili stanja koja obuhvataju neprirodnu proliferaciju, diferencijaciju ili opstanak ćelija. U jednom izvođenju, ovaj pronalazak još daje za upotrebu jedno ili više jedinjenja prema ovom pronalasku u proizvodnji leka za zadržavanje ili smanjenje bolesti koje obuhvataju neprirodnu proliferaciju, diferencijaciju, ili opstanak ćelija. U preporučenom izvođenju, bolest je kancer. Kod jednog izvođenja, ovaj se pronalazak odnosi na postupak za lečenje kancera kod subjekta kom je potrebno lečenje koje obuhvata primenu pomenutom subjektu terapijski delotvorne količine jedinjenja prema ovom pronalasku.
[0017]Pojam "kancer" se odnosi na bilo koji kancer koji prouzrokuje proliferacija malignih neoplastićnih ćelija kao što su tumori, neoplazme. karcinomi, sarkomi, leukemije, limfomi i slično. Na primer, kanceri obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, mezoteliome. leukemije i limfome kao što su kutani limfomi T ćelije (CTLC), limfomi nekutane periferne T ćelije, limfomi koji se povezuju sa ljudskim limfotropnim virusom T ćelije (HTLV) kao što je leukemija/limfom T ćelije kod odraslih (ATLL), limfom B ćelije, akutne nelimfocitne leukemije, hronična limfocitna leukemija, hronična mijelogena leukemija, akutna mijelogena leukemija, limfomi, i višestruki mijelom, neHodžkinov limfom, akutna limfatična leukemija (ALL). hronična limfatična leukemija (CLL), Hodžkinov limfom. Burkitov limfom, limfom leukemije T ćelije kod odraslih, akutna mijeloidna leukemija (AML), hronična mijeloidna leukemija (CML), ili hepatoćelijskt karcinom Dalji primeri obuhvataju mijelodisplastični sindrom, čvrste tumore u detinjstvu kao što su tumori mozga, neuroblastomi, retinoblastomi Vilmovi tumori, tumori kostiju i sarkomi mekog tkiva, česti tumori čvrstog tkiva kod odraslih kao što je kancer glave i vrata (npr oralni laringealni, nazofaringealni i ezofagealni), genitourinarni kanceri (npr. prostata, kancer bešike, bubrega, materice, jajnika, testisa), kancer pluća (npr.. sitnoćelijski i nesitnoćelijski kancer pluća) kancer dojke, kancer pankreasa, melanom i drugi kanceri kože, kancer želuca, tumori mozga, tumori koj ise povezuju sa Gorlinovim sindromom (npr meduloblastomi, menmgiomi. itd.) i kancer jetre Dodatni oblici koji se uzimaju kao primer kancera koji mogu da se leče jedinjenjima koja su predmet ovog pronalaska, obuhvataju ali se ne ograničavaju na kancer skeleta ili glatkog mišića, kancer želuca, kancer tankog creva, karcinom rektuma, kancer pljuvaćne žlezde, kancer endometrijuma, kancer nadbubrežne žlezde, kancer anusa, kancer rektuma, kancer paratiroidne žlezde i kancer hipofize
[0018]Dodatni kanceri za čije sprečavanje, lečenje i proučavanje ovde opisana jedinjenja mogu biti korisna su, na primer, karcinom debelog creva, familijarni adenomatozni polipozni karcinomi i nasledni nepolipozni kolorektalni kancer, ili melanom Pored toga, kanceri obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, labijalne karcinome, karcinom larinksa, karcinom hipofarinksa, karcinom jezika, karcinom pljuvačne žlezde, karcinom želuca, adenokarcinome, kancer tiroidne žlezde (medularni i papilarni karcinom štitaste žlezde), renalni karcinom bubrega, parenhimni karcinom bubrega, karcinom grlića materice, karcinom tela materice karcinom endometrijuma, gestacioni honokarcinom. karcinom testisa, urinarni karcinom, melanom, tumori mozga kao što je glioblastom, astrocitom. meningiom, meduloblastom i periferni neuroektodermalni tumori, karcinom žučnog mehura, bronhijalni karcinom, višestrki mijelom, bazaliom, teratom. retinoblastom. melanom horoidea, seminom, rabdomiosarkom, kraniofaringeom, osteosarkom, hondrosarkom, miosarkom, liposarkom. fibrosarkom, Evingov sarkom, i plazmocitom. U jednom varijantnom rešenju pronalaska, ovaj pronalazak predviđa upotrebu jednog ili više jedinjenja prema ovom pronalasku u proizvodnji leka za lečenje kancera,
[0019] U jednom izvođenjuu, jedinjenja prema ovom pronalasku se koriste za lečenje hematološkog stanja kancera ili hematološkog prekanceroznog stanja Hematološki kanceri obuhvataju leukemije, limfome i višestruke mijelome Primen obuhvataju limfocitne leukemije, kao što je akutna limfocitna leukemija, uključujući akutnu limfoblastnu leukemiju prekursora B, akutna limfoblastna leukemija prekursora T, Barkitova leukemija, i akutna bifenotipna leukemija; i hronična limfocitna leukemija, uključujući prolimfocitnu leukemiju B ćelije; i mijologenu leukemiju, kao što je akutna mijologena leukemija, uključujući akutnu promielocitnu leukemiju, akutnu mijeloblastnu leukemiju, i akutnu megakarioblastnu leukemiju i hronićnu mijolegonu leukemiju uključujući hroničnu monocitnu leukemiju; akutnu monocitnu leukemiju. Druge leukemije obuhvataju leukemiju dlakave ćelije, leukemiju prolimfocitne T-ćelije; velika granularna limfocitna leukemija; i leukemija odrasle T ćelije Limfomi obuhvataju Hodžkinsov limfom i ne-Hodžkinsov limfom. uključujući limfome B-ćelije, limfome T-ćelije, kao što su limfomi kutane T ćelije, i limfome NK ćelije. Hematološka prekancerna stanja obuvhataju mijelodisplastični sindrom i mijeloproliferativne poremećaje kao što je primarna mijelofibroza, policitemija vera, i osnovna trombocitemija
[0020] Za jedinjenja prema ovom pronalasku se pokazalo da podstiču reverzibilnu limfopeniju uklanjanje ili smanjenje nivoa cirkulacije ćelija kancera limfocitne linije Takva jedinjenja su takođe korisna za tretiranje autoimunih poremećaja ili za modulisanje odgovora imunog sistema.
[0021] Kod jednog izvođenja, ovaj se pronalazak odnosi na postupak za smanjenje broja cirkulišučeg iimfocita kod subjekta, i obuhvata primenu pomenutom subjektu terapijski delotvorne količine jedinjenja prema ovom pronalasku U preporučenom izvođenju, smanjeni broj cirkulišućih Iimfocita je reverzibilan, to jest, broj cirkulišućih Iimfocita se vraća u normalni ospeg posle doziranja sa jedinjenjem prema ovom pronalasku je zaustavljen. U jednom izvođenju, smanjeni broj cirkulišućih Iimfocita je ispod normalnog opsega i subjekat ima limfopeniju. Preporučljivo, subjekat oseća poboljšanje terapijsko ili profilaktičko iz smanjenog broja cirkulišućih Iimfocita. Takvi subjekti obuhvataju one koji boluju od hemaologne bolesti, kao što je hematologni kaner, oni koji boluju od pormećaja autoimunog sistema, i oni koji moraju dobiti modulaciju odgovora imunog sistema kao što su pacijenti koji boluju od dijabetesa ili primaoci transplantiranih organa.Kod subjekta koji je čovek, broj cirkulišućih Iimfocita, na primer. B-limfocita, T-limfocita ili oba, može da padne od normalnog ospega do limfopenijskog opsega. Kod izvesnih bolesti broj cirkulišućih Iimfocita je nenormalno visok Kod takvih bolesti, broj cirkulišućih Iimfocita može da se smanji na normalni opseg ili na limfopenijsko stanje.
[0022] U jednom izvođenju, ovaj pronalazak još obuhvata upotrebu jednog ili više jedinjenja prema ovom pronalasku za proizvodnju leka koji sprečava dalju neprirodnu proliferaciju. diferencijaciju ili opstanak ćelija. Na primer, jedinjenja prema ovom pronalasku mogu biti korisna za sprečavanje tumora iz povećanja veličine ili dostizanja stanja metastaze. Jedinjenja koja su predmet ovog pronalaska mogu da se daju da bi se zadržalo napredovanje ili unapređenje kancera ili da se izazove apoptoza tumora ili inhibira angiogeneza tumora. Pored toga, instant pronalazak obuhvata upotrebu jedinjenja koja su predmet ovog pronalaska da se spreči ponovna pojava kancera
[0023] Ovaj pronalazak još obuhvata lečenje ili sprečavanje proliferativnih poremećaja ćelije kao što je hiperplazija, displazija i prekancerne lezije Displazija je najraniji oblik prekancerne lezije koju patolog može prepoznati u biopsiji. Jedinjenja koja su predmet pronalaska mogu da se primenjuju u svrhu sprečavanja pomenute hiperplazije, displazije ili prekancernih tezija od toga da nastave širenje ili od toga da postanu kancerne. Primeri prekancernih lezija može nastati na koži, ezofagnom tkivu, grudima i tkivu unutrašnjeg epitela grlića materice
[0024] ""Kombinovana terapija" obuhvata primenu subjektu jedinjenja u daljoj kombinaciji sa drugim biološki aktivnim sastojcima (kao što je, ali bez ograničenja na, drugi i drugačiji antineoplastićni agens) i terapije koje nisu lek (kao što je. ali bez ograničenja na. hiruršku operaciju ili terapiju zračenjem). Na primer, jedinjenja prema ovom pronalasku moguće je koristiti u kombinaciji sa drugim farmaceutski aktivnim jedinjenjima, poželjno jedinjenjima koja mogu da pojačaju dejstvo jedinjenja prema ovom pronalasku. Jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da se primenjuju istovremeno (kao jedan preparat ili zaseba preparat) ili uzastopno (sekvencijalno) na drugu terapiju lekom Uopšteno, kombinovana terapija predviđa primenu dva ili više lekova tokom jednog ciklusa ili toka terapije
[0025]U jednom varijantnom rešenju ovog pronalaska, jedinjenja koja su predmet pronalaska mogu biti primenjena u kombinaciji sa jednim ili više odvojenih agenasa koji moduliraju protein kinaze obuhvaćene u različita stanja bolesti. Primeri takvih kinaza mogu da obuhvate, ali se ne ograničavaju na: serin/treonin specifične kinaze, kinaze specifične za receptor tirozina i kinaze specifične za nereceptor tirozina. Kinaze serina/treonina obuhvataju mitogenom-aktivirane proteinske kinaze (MAPK), kinaze specifične za mejozu (MEK), RAF i aurora kinaze Prtmen familija receptorne kinaze obuhvataju receptor faktora epidermalnog rasta (EGFR) (npr HER2/neu. HER3. HER4, ErbB, ErbB2, ErbB3, ErbB4, Xmrk, DER. Let23); receptor faktora rasta fibroblasta (FGF) (npr FGF-R1 .GFF-R2/BEK/CEK3, FGF-R3/CEK2, FGF-R4/TKF, KGF-R); receptor faktora rasta/rasejanja hepatocita (HGFR) (npr, MET, RONI, SEA, SEX); receptor insulina (npr. IGFI-R), Eph (npr CEK5, CEK8. EBK, ECK, EEK, EHK-1, EHK-2, ELK, EPH. ERK, HEK, MDK2 MDK5, SEK); Axl (npr Mer/Nyk, Rse): RET; receptor faktora rasta izveden iz pločica (PDGFR) (npr. PDGFa-R, PDGf)-R, CSF1-R/FMS, SCF-R/C-KIT VEGF-R/FLT. NEK/FLK1, FLT3/FLK2/STK-1) Familije tirozin kinaze nereceptora tirozina obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, BCR-ABL (npr p43<abl>ARG), BTK (npr ITK/EMT. TEC); CSK, FAK. FPS, JAK, SRC,
BMX, FER, CDK i SYK.
[0026]U drugom varijantnom rešenju ovog pronalaska, jedinjenja koja su predmet pronalaska mogu biti primenjena u kombinaciji sa jednim ili više odvojenih agenasa koji moduliraju ne-kinaze bioloških ciljeva ili procesa. Takvi ciljevi obuhvataju deacetilaze histona (HDAC), DNK metlltransferaze (DNMT), proteini toplotnog šoka (npr, HSP90), putanje proteina povezanih sa ježevima (npr SHH put (sonic hedgehog), sa flasterima, zakrpljen, gladak) i proteozoma.
[0027]U preporučenom izvođenju, jedinjenja koja su predmet pronalaska mogu da se kombinuju sa antineoplastičnim agensima (npr. malim molekuiima, monoklonim antitelima, antisensnim RNK, i proteine fuzije) koji inhibiraju jedan ili više bioloških ciljeva kao što je U preporučenom izvođenju, jedinjenja koja su predmet pronalaska mogu da se kombinuju sa antineoplastičnim agensima (npr. malim molekuiima, monoklonim antitelima, antisensnim RNK. i proteine fuzije) koji inhibiraju jedan ili više bioloških ciljeva kao što je Zolinza, Tarceva. Iressa Tykerb Gleevec, Sutent, Sprycel, Nexavar, Sorafinib, CNF2024, RG108, BMS387032, Affinitak. Avastin, Herceptin, Erbitux, AG24322. PD325901, ZD6474, PD184322, Obatodax, ABT737, GDC-0449, IPI-926, BMS833923, LDE225. PF-04449913 i AEE788. Talve kombinacije mogu da pojačaju terapijsku efikasnost nad efikasnošćću postignutom pomoću bilo kog agensa samog i mogu da spreče ili odlože izgled otpornih mutiranih varijanti
[0028]Kod nekih preporučenih izvođenja, jedinjenja prema ovom pronalasku se primenjuju u kombinaciji sa hemoterapijskim agensom. Hemoterapijski agensi obuhvataju širok opseg terapijskih načina primene leka u oblasti onkologije Ovi agensi se primenjuju na različitim stupnjevima bolesti za potrebe smanjenja tumora, uništavganja preostalih kancernth ćelija posle hirurške operacije izazivanje remisije, održavanje remisije i/ili ublažavanje simptoma koji se odnose na kancer ili njegovu terapiju. Primeri takvih agenasa obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, alkilirajuće agense kao što su kao što su derivati gasa slačice (Mehloretamin, cilofosfamid, hlorambucil, melfalan, ifosfamid), etilenimmi (thiotepa, heksametilmelanin), alkilsulfonati (Busulfan), Hidrazini i Triazim (Altretamin, Prokarbazin, Dakarbazin i Temozolomid), Nitrosoureas (Karmustin, Lomustin i Streptozocin), Ifosfamid i soli metala (Karboplatin, Cisplatin. i oksaliplatin); biljni alkaloidi kao što su Podofillotoksini (Etopozid i Tenizopid), Taksani (Paklitaksel i Docetaksel), Vinca alkaloidi (Vincristine, Vinblastine, Vindesine i Vinorelbine), i Kamptotekan analozi (Irinotekan i Topotekan); antitumorni antibiotici kao što su hromomicini
(Daktinomicin i Plikamicin), antraciklini (Doksorubicin. Daunorubicin, Epirubicin. IVIitoksantron, Valrubicin i Idarubicin), i razni antibiotici kao što je Mitomicin, Aktincmicin i Bleomicin; antimetaboliti kao što su antagonisti folne kiseline (Metotreksat, Pemetreksed. Raltitreksed, Aminopterin), antagonisti pirimidina (5-fluorouracil, floksuridine, citarabin, kapecitabin, i gemcitabin). antagonisti purina (6-merkaptopurin i 6-tioguanin) i inhibitori adenozin deaminaze (Kladribin, Fludarabin, Merkaptopunn, Klofarabin, Tioguanin. Nelarabin i Pentostatin); inhibitori topoizomeraz kao što su inhibitori topoizomeraze I (Ironotekan topotekan) i nhibitori topoizomeraze II (Amsakrm, etopozid, etopozid fosfat, tenipozid); monoklona antitela (Alemtuzumab, Gemtuzumab ozogamicin, Rituksimab, Trastuzumab. Ibritumomab Tioksetan, Cetuksimab. Panitumumab, Tositumomab. Bevacizumab), i razni antmeoplastici kao što su inhibitori reduktaze ribonukleotida (hidroksiurea), inhibitor adrenokortikainog steroida (Mitotan), enzimi (Asparaginaza i Pegaspargaza); agensi mikrocevčica (Estramustin). i retmoidi (Beksaroten, Izotretinoin, Tretinoin (ATRA) i Lenalidomid.
[0029]Kod nekih preporučenih izvođenja, jedinjenja prema ovom pronalasku se primenjuju u kombinaciji sa hemozaštitnim agensom. Hemozaštitni agensi deluju da se zaštiti telo ili svedu na minimum neželjena dejstva hemoterapije Primeri takvih agenasa obuhvataju. ali se ne ograničavaju na, amfostin, mesna i deksrazoksan
[0030]Kod jednog varijantnog rešenja ovog pronalaska, jedinjenja koja su predmet pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa terapijom zračenja Zračenje se često daje interno (implantacija radioaktivnog materijala u blizini mesta kancera) ili eksterno iz mašine koja koristi foton (rendgenski zrak ili gama zrak) ili zračenje čestice. Kada kombinovana terapija još sadrži i terapiju zračenjem, terapija zračenjem može da se sprovede u svakom trenutku pogodnom toliko dugo da se postigne korisno dejstvo od udružene aktivnosti kombinovanja terapijskih agenasa i terapije zračenjem Na primer, u odgovarajućim slučajevima, korisno dejstvo se ipak postiže kada se privremeno ukloni terapija zračenjem iz primene terapijskih agenasa, možda danima ili čak nedeljama.
[0031]Razumeće se da jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da se koriste u kombinaciji sa imunoterapijskim agenasom. Jedan oblik imunoterapije je genensanje aktivnog sistemskog za tumor specifičnog odgovora imunog sistema koji korene vuče iz domaćina administriranjem jedinjenja sadržanog u vakcini na mestu udaljenom od tumora Predloženi su različiti tipovi vakcina, uključujući izolovane tumor-antigen vakcine i antiidiotipne vakcine. Još jedan pristup je da se koriste ćelije tumora iz subjekta kog treba lećiti, ili derivata takvih ćelija (revidirao Schirrmacher et al., (1995) J Cancer Res. Clin. Oncol. 12 1:487). U američkom patentu (U.S Pat No. 5,484,596, Hanna Jr, et al traže priznanje patenta za lečenje karcinoma koji je moguće resekcirati da se spreči ponovna pojava ili metastaze, koje se sastoje od hirurškog uklanjanja tumora, širenja ćelija sa kolagenazom. ozračivanja ćelija, i vakcinacije subjekta sa najmanje tri uzastopne doze od oko 10' ćelija
[0032]Razumeće se da jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da se koriste pogodno u vezi sa jednim ili više pomoćnih terapijskih agenasa. Primeri pogodnih agenasa za pomoćnu terapiju obuhvata 5HT1 agonist, kao što je triptan (npr sumatriptan ili naratriptan); adenosin A1 agonist; EP ligand; NMDA modulator, kao što je glicinski antagonist, blokator natrijumskog kanala (np. lamotrigin). antagonist P jedinjenja (npr. NK1 antagonist); kanabinoid, acetaminofen ili fenacetin: inhibitor 5-lipoksigenaze; antagonist leukotrienskog receptora; DMARD (npr . metotreksat); gabapentin i sa njim povezana jedinjenja; triciklični antidepresiv (npr. amitriptilin); antiepileptički lek za stabilizaciju neurona; inhibitor mono-aminergijskog unosa (npr. venlafaksin): inhibitor matnks metaloproteinaze; inhibitor sintaze azotnog oksida (NOS), kao što je iNOS ili nNOS inhibitor, inhibitor otpuštanja, aktivnosti, faktora nekroze tumora.alfa.; terapije antitelom, kao što je terapija monoklonim antitelom: antivirusni agens, kao što je inhibitor nukleozida (npr lamivudin) ili modulator imunološkog sistema (npr. interferon); opioidni analgetik; lokalni anestetik, stimulant, uključujući kafein, H2 antagonist (npr ranitidin); inhibitor protonske pumpe (npr omeprazoi): antacid (npr alummijum ili magnezijum hidroksid; lek protiv nadimanja (npr. simetikon); sredstvo protiv zgrušavanja (npr. fenilefnn. fenilpropanolamm, pseudoefedrin, oksimetazolin. epinefrin, nafazolin, ksilometazolin, propilheksedrin, ili levo-dezoksiefedrin); lek protiv kašlja (npr. kodein, hidrokodon, karmifen, karbetapentan. ili dekstrametorfan); diuretik; sedativni ili nesedativni antihistamin.
[0033]Ova jedinjenja mogu takođe da se koriste u lečenju poremećaja koji obuhvataju, odnose se na ili, su povezani sa deregulacijom deacetilaze histona (HDAC). Postoji izvestan broj poremećaja koji su implicirani pomoću ili poznati da posreduju najmanje delimićno aktivnošću HDAC, pri čemu je aktivnost HDAC poznata da igra ulogu kao okidač početka bolesti, ili čiji su simptomi prikazani da se ublažavaju inhibitorima HDAC. Očekivalo bi se da bi poremećaji ovog tipa odgovorili na lečenje jedinjenjima prema ovom pronalasku uključujući ali ne ograničavajući se na: Antiproliferativni poremećaji (npr. karcinomi), neurodegenerativne bolesti uključujući Hantingtonovu bolest, poliglutaminsku bolest, Parkinsonovu bolest, Alchajmerovu bolest, epileptične napade, striatonigralnu degeneraciju, progresivnu supranuklearnu paralizu, torziona distonija. spazmodički tortikolis i diskineza. porodična drhtavica. Turetov sindrom, bolest difuznih Levijevih tela. progresivna supranuklearna paraliza, Pikova bolest, krvarenje u mozgu, primarna lateralna skleroza, atrofija kičmenih mišića, amiotropijska lateralna skleroza, hipertrofična intersticijalna polineuropatija. retinitis pigmentoza, nasledna optička atrofija, nasledna spastička paraplegija, progresivna ataksija i sindrom poznat kao Šaj-Drager (Shy-Drager); bolesti metabolizma uključujući dijabetes tip 2: degenerativne bolesti oka uključujući glaukom, degeneracija makule povezana sa godinama, rubeoza glaukoma, inflamacije i/ili poremećaji Imunog sistema uključujući reumatoidni artritis (RA), osteortntis, hroničn artritis kod mladih, bolest transplantiranog dela naspram bolesti domaćina, psorijaza, astma, spondiloatropatija. Kronova bolest, upala creva, kolitis ulceroza, alkoholni hepatitis, dijabetes, sjoegrenov smdorm, multipla skleroza, ankilozirajući spondilitis. membranska glomerulopatija. diskogeni bol, sistemski lupus eritematozus, bolest koja obuhvata angiogenezu uključujući karcinom, psorijazu, reumatoidni artritis; fiziološke poremećaje uključujući bipolarnu bolest, šizofreniju, maniju, depresiju i demenciju; kardiovaskularne bolesti uključujući sprečavanje i lečenje sa ishemijom povezanog ili sa reperfuzijom povezanomg vaskularnog i miokardijalnog oštećenja tkiva, zatajenje srca, restinoza i artenoskleroza, fibriotske bolesti uključujući fibriozu jetre, cistična fibrioza i agiofibrom, infektivne bolesti uključujući gljivične infekcije, kao što je kandidiaza ili kandida albikans, bakterijske infekcije, virusne infekcije, kao što je herpeks simpleks, poliovirus. rinovirusi i koksaki virus, protozoalne infekcije, kao što je malarija, lajšmanioza. (lajšmanijska infekcija) infekcija tripanozoma brucei, toksoplazmoza i kokidloza i hematopoetski poremećaji uključujući talasemiju, anemiju i srpastu anemiju
[0034]Jedinjenja prema ovom pronalasku mogu takođe da se koriste u lečenju poremećaja koji obuhvataju, odnose se na ili, su povezani sa deregulacijom PI3 kinaze PI3 aktivnost kinaze je implicirana u ili prikazana da je uključena u raznovrsne poremećaje. U izvesnim slučajevima, aktivnost PI3 kinaze je uključena u početnu pojavu bolesti, dok kod drugih, simptomi su poznati ili su prikazani tako da su ublaženi inhibitorima aktivnosti PI3 kinaze Poremećaje ovog tipa za koje bi se očekivalo da odgovaraju na lečenje jedinjenjima prema ovom pronalasku obuhvataju ali se ne ograničavaju na kancere, uključujući leukemiju, kancer kože. kancer bešike, kancer dojke, kancer materice, kancer jajnika, kancer prostate, kancer pluća, kancer debelog creva, kancer pankreasa, renalni kancer, kancer želuca i kancer mozga; restenoza, ateroskleroza, poremećaji kostiju, artritis, dijabetesna retinopatija, psorijaza. benigna hipertrofija prostate, ateroskleroza, zapaljenje, angiogeneza, poremećaji imunog sistema, panreatitis i bolest bubrega.
[0035]Kod jednog izvođenja, jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da se koriste da se izazove ili inhibira apoptoza, fiziološki proces smrti ćelije ključan za normalan razvoj i homeostazu. Izmene apoptotskih putanja doprinose patogenezi raznovrsnih bolesti kod ljudi Jedinjenja prema ovom pronalasku, kao modulaton apoptoze, će biti korisni u lečenje raznovrsnih bolesti ljudi sa aberacijama u apoptozi uključujući kancer (posebno, ali ne ograničavajući se na, follikularne limfome, karcinome sa p53 mutacijama, hormonski uslovljene tumore dojke, prostate i jajnika, i prekancerne lezije kao što je familijarna adenomatozna polipoza). virusne infekcije (uključujući, ali se ne ograničavajući na, virus herpesa, virus boginja, al infections (including. but not limited to, herpes virus, poxvirus, Epštajn-Barov virus, Sindbis virus i adenovirus). bolesti autoimunog sistema (uključujući, ali se ne ograničavajući na, sistemski lupus, eritematozu, glomerulonefritis posredovan imunim sistemom, reumatoidni artritis, psorijazu, zapaljenske bolesti creva, i dijabetes melitus izazvan autoimunim sistemom), neurodegenerativne poremećaje (uključujući, ali se ne ograničavajući na Alchajmerovu bolest, demeciju povezanu sa HIV virusom. Parkinsonovu bolest, amiotropijsku lateralnu sklerozu, retinitis pigmentozu, atrofiju mišića kičme, i cerebralnu degeneraciju), HIV. mijelodisplastične sindrome, aplastičnanemiju, ishemijsku povredu povezanu sa infarktima miokarda. moždanim udarom i reperfuzionom povredom, aritmijom, aterosklerozom, toksinom izazvanim ili alkoholom izazvanim bolestima jetre, hematološkim bolestima (uključujući, ali se ne ograničavajući na, hroničnu anemiju i aplastičnu anemiju), degenerativne bolesti mišićnoskeletnog sistema (uključujući, ali se ne ograničavajući na, osteoporozu i artritis), rinosauritis osetljiv na aspirin, cističnu fibrozu, multipla sklerozu, bolesti bubrega, i kancerni bol.
[0036] U jednom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja prema ovom pronalasku za lečenje il sprečavanje imunog odgovora ili imunim sistemom posredovanih odgovora i bolesti, kao što je sprečavanje ili lečenje odbijanja posle translatacije sintetičkih ili organskih materijala za izradu grafta, ćelije, organe ili tkivo da se zamene sve ili deo funkcija tkiva, kao što je srce, bubreg, jetra, koštana srž, koža, kornea, krvni sudovi, pluća, pankreas, creva, ekstremitet, mišić, nervno tkivo, dvanaestopalačno crevo, tanko crevo, ćeliju pankreasnog ostrvca, uključujući kseno transplante, itd.. da se leči ili spreči bolest koja nastane na graftu u odnosu na tkivo domaćina, bolesti autoimunog sistema, kao što je reumatoidni artritis sistemski lupus eritematozus, tiroiditis, Hašimotov tiroiditis. multipla sklerozu, miastenija gravis, diabetes uveitis tip I, mladalačku pojavu ili skorašnju pojavu diabetes melitusa, uveitis, Gravesova (Grejvsova) bolest, psorijaza, atopijski dermatitis, Kronova bolest, ulcerativni kolitis, vaskulitis, auto-antitelom posredovane bolesti, aplastična anemija. Evanov sindrom, autoimune hemolitička anemija, i slično; i dalje za lečenje infektivnih bolesti koje prouzrokuju neprirodni odgovor imunog sistema i/ili aktivaciju, kao što je traumatska ili patogenom izazvana deregulacija imunog sistema, uključujući na primer, onu koja je prouzrokovana infekcijama hepatitisa B i C. HIV, infekciju stafilokokus aureus, virusni encefalitis, sepsu, parazitima izazvane bolesti gde se oštećenje izaziva inflamatornim odgovorom (npr. lepra);i da se spreče ili leće bolesti krvnog sistema, kao stoje arterioskleroza, ateroskleroza, vaskulitis, poliarteritis nodoza i miokarditis. Pored toga, ovaj pronalazak može da se koristi da se spreči/potisne imuni odgovor povezan sa lečenjem genskom terapijom, kao što je uvođenje stranih gena u autoiogozne ćelije i ispoljavanje enkodiranog proizvoda. Kod jednog izvođenja, ovaj se pronalazak odnosi na jedinjenja za upotrebu u postupku lečenja bolesti ili poremećaja imunog sistema ili umunim sistemom posredovanog odgovora ili poremećaja kod subjekta kom je potrebno lečenje koje obuhvata davanje pomenutom subjektu terapijski delotvorne količine jedinjenja prema ovom pronalasku.
[0037] Kod jednog varijantnog rešenja, pronalazak obezbeđuje jedinjenja prema ovom pronalasku za upotrebu u lečenju raznovrsnih neurodegenerativnih bolesti, neiscrpna lista ovih bolesti obuhvata: I. Poremećaje koje karakteriše progresivna demencija u odsustvu njihovih jasnih neuroloških znakova, kao stoje Alchajmerova bolest, senilna demencija Alchajmerovog tipa i Pikova bolest (lobarna atrofija); II Sindromi koji kombinuju progresivnu demenciju sa drugim izraženim neurološkim anomalijama kao što su: A) sindromi koji se javljaju uglavnom kod odraslih (npr , Hantingtonova bolest, višestruka sistemska atrofija koja kombinuju progresivnu demenciju sa drugim izraženim neurološkim anomalijama kao što su kombinuje demeciju sa ataksijom i/ili manifestacije Parkinsonove bolesti, progresivnu supranuklearnu paraliza (Stil-Ričarson-OIževski), bolest difuznih Levijevih tela, i kortikodentatonigralna degeneracija); i B) sindromi se javljaju uglavnom kod dece ili mladih odraslih (npr, Halerforden-Špacova bolest i progresivna familijarna mioklona epilepsija); III Sindromi postepenog razvoja nepravilnosti poze i pomeranja kao što je paraliza agitans (Parkinsonova bolest), striatonigralna degeneracija, progresivna supranuklearna paraliza, torziona distonija (torzioni spazam, distonija muskulorum deformans), spazmodički tortikolis i drugi diskinezis, porodična drhtavica i Turetov sindrom IV. Sindromi progresivne ataksije kao što su cerebralne degeneracije (npr. cerebralna kortikalna degeneracija i olivopontocerebelarna atrofija (OPCA)), i spinocerebelarna degeneracija (Frajdrihova atazija i povezani poremećaji); V. sindrom zatajenja centralnog autonomnog nervnog sistema (Šaj-Dragerov sindorm), VI. Sindromi slabosti mišića i gubljenja bez senzornih pramena (motorneuronska bolest kao što je amiotrofna lateralna skleroza, atrofija mišića kičme (npr atrofija mišića kičme kod odojćadi (Verdnih-Hofman), mladalačka atrofija mišića kičme (Volfart-Kugelberg-Velander) i drugi oblici porodične atrofije mišića kičme), primarna lateralna skleroza, i nasledna spazična paraplegija; VII Sindromi koji kombinuju slabost mišića i gubljenje bez senzornih promena (progresivna neuronska atrofija mišića; hronične porodične polineurpatije) kao što je peronealna atrofija mišića (Čarkot-Mari-Tut), hipertrofična intersticijalna polineuropatija (Dežerin-Sotas), i razni oblici hronične progresivne neuropatije: VIII. Sindromi progresivnog gubitka vida kao što je pigmentarna degeneracija retine (retinitis pigmentoza), i nasledna optička atrofija (Leberova bolest). Pored toga, jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da budu implicirana u remođeliranju hromatina
[0038]Ovaj pronalazak obuhvata farmaceutske supstance koje sadrže farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja prema ovom pronalasku kao što su gore opisane Pronalazak takođe obuhvata solvate jedinjenja prema ovom pronalasku i farmaceutska jedinjenja koja obuhvataju takve solvate, kao što su hidrati, metanolati ili etanolati. Pojam "solvat" se odnosi na čvrst, preporučljivo kristalni oblik jedinjenja koji obuhvata prisustvo molekula rastvaraća unutar kristalne rešetke Solvat jedinjenja koji obuhvata dati rastvarač obično pripremljen putem kristalizacije jedinjenja iz tog rastvaraća. Solvat može da obuhvati raznovrsne rastvarače, uključujući vodu, metanol i etanol. Pojam "hidrat" se odnosi na solvat u kom je rastvarač voda. i obuhvata, ali se ne ograničava na. hemikidrat. monohidrat. dihidrat. trihidrat i slično Ovaj pronalazak još obuhvata farmaceutske supstance koje sadrže bilo koji čvrst ili tečni fizički oblik jedinjenja prema ovom pronalasku, uključujući kristalne i knsalno solvatne oblike Na primer, jedinjenja mogu da budu u kristalnom obliku, u amorfnom obliku i da imaju bilo koju veličinu čestice. Čestice mogu da se mikronizuju. ili mogu da se aglomerizuju. granule partikulata, prahovi, ulja, uljne suspenzije ili bilo koji drugi oblik čvrstog ili tečnog fizičkog oblika
[0039]Jedinjenja prema ovom pronalasku, i derivati, fragmenti, analozi, homolozi, njihove farmaceutske prihvatljive soli mogu da budu obuhvaćene u farmaceutske supstance pogodne za primenu, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačemi ili ekscipijentom. Takve supstance najčešće sadrže terapijski delotvornu količinu bilo kog jedinjenja gore, i farmaceutski prihvatljiv nosač Poželjno, delotvorna količina kada se leči kancer je u količini delotvornoj za selektivno izazivanje terminalne diferencijacije pogodnih neoplastičnih ćelia i manje nego jedna količina koja prouzrokuje toksičnost kod pacijenta
[0040]Jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da se primene bilo kojim pogodnim sredstvom uključujući, bez ograničavanja, parentealni, mtravenski. intramuskuiarni. potkožni, implantacioni, oralni, sublingvalni, bukalni, nazalni, plućni, transdermalni, topikalni, vaginalni, rektalni, i transmukozni oblik primene leka ili slično. Topikalni način primene može takođe da obuhvati uporebu transdermalne primene kao što su transdermalni flasteri ili jontoforezićki uređaji. Farmaceutski preparati obuhvataju čvrst, polučvrst ili tečni preparat (tabletu, pelet, troheu, kapsulu, supozitonju, kremu, mast, aerosol, prah, tečnost, emulziju, suspenziju, sirup, injekciju itd.) koja sadrži jedinjenje prema ovom pronalasku kao aktivni sastojak, koji je pogodan za izabran način primene U jednom izvođenju, farmaceutska jedinjenja se administriraju oralno, i zato su formulisana u obliku pogodnom za oralnu primenu, t.j kao čvrst ili tečni preparat. Pogodne čvrse supstance formulacija za oralnu primenu obuhvataju tablete, kapsule, pilule, granule, pelete, mirisne vrećice i efervescent, prahovi, i slično Pogodne tečne oralne formulacije obuhvataju rastvore, suspenzije, disperzije, emulzije, ulja i slično U jednom izvođenju ovog pronalaska, jedinjenje je formulisano u kapsuli. U skladu sa ovim izvođenjem, jedinjenja prema ovom pronalasku sadrže pored aktivnog jedinjenja i unutrašnji nosač ili rastvarač, tvrde želatinozne kaspule
[0041]Bilo koje pomoćno sredstvo koje se često koristi kao razblaživač može da se koristi u formulacijama ovog pronalaska, kao što je na primer, guma, škrob, šećer, celulozni materijal, akrilat, ili njihove mešavme. Preporučeni razblaživač je mikrokristalna celuloza Jedinjenja mogu još da sadrže sredstvo za razgradnju (npr. natrijum kroskarmeloza) i farmaceutsko mazivo (npr magnezijum stearat), i mogu još da sadrže jedan ili više dodataka koji se bijraju iz sredstava kao što je vezivno sredstvo, pufersko sredstvo, inhibitor proteaze, površinski aktivno sredstvo, agens za rastvaranje, plastifikator. emulzifikator, stabilizacioni agens, agens za povećanje viskoznosti. zasladivač, agens za formiranje filma, ili bilo koja njihova kombinacija. Pored toga, jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da budu u obliku formulacija za kontrolisano ili neposredno otpuštanje
[0042]Za tečne formulacije, farmaceutski prihvatljivi nosači mogu da budu vodeni ili nevodeni rastvori, suspenzije, emulzije ili ulja. Primeri nevodenih rastvaraća su propilen glikol, polietilen glikol, i organski estri koji se ubrizgavaju kao što je etil oleat Vodeni nosači obuhvataju vodu alkoholne/vodene rastvore, emulzije ili suspenzije, uključujući slarni rastvor i puferska podloga Primeri ulja su ona kao što je petrolejskog, životinjskog, biljnog, ili sintetičkog porekla, na primer. ulje kikirikija, ulje iz zrna soje. mineralno ulje, maslinovo ulje, suncokretovo ulje, sojino ulje, Rastvori ili suspenzije mogu takođe da obuhvate sledeće komponente: sterilni razblaživač kao što je voda za injekciju, slani rastvor, neisparljiva ulja, polietilen glikole, glicerin, propilen glikol ili druge sintetske rastvarače; antibakterijske agense kao što je benzil alkohol ili metil parabeni, antioksidansi kao što je askorbinska kiselina ili natrijum bisulfit. helirajuće agense kao što je etilenediamin tetrasirćetna kiselina (EDTA); puferska sredstva kao što su acetati cifrati ili fosfati, i agensi za prilagođavanje toničnosti kao što je natrijum hlond ili dekstroza pH se može podesiti sa kiselinama il bazama kao stoje hlorovodonična kiselina ili natrijum hidroksid
[0043]Pored toga, jedinjenja mogu još da sadrže vezivna sredstva (npr. akaciju, kukuruzni škrob, želatin, karbomer, etil celuloza, guara guma. hidroksipropil celuloza, hidroksipropil metil celuloza, povidon), razgrađujuće agense, (npr. kukuruzni škrob, krompir škrob, alginska kiselina, silicijum dioksid, natrijum kroskarmeloza, krospovidon, guar guma, natrijum škrob glikolat. Primogel), puferska sredstva (npr., tris-HCI., acetat, fosfat) različite pH i jonske jačine, aditive kao što je albumin ili želatin da se spreči apsorpcija površina, deterdženata (npr , Tween 20, Tween 80, Pluronic F68, kisele soli žuči), inhibitore proteaze, surfaktante {npr., natrijum launl sulfat), pospešivače prodora, agense rastvaranja (npr., glicerol, polietilen glicerol). klizni agens za praškaste materije kao glidant (npr , koloidni silicijum dioksid), antioksidanse (npr., askorbmsa kiselina, natrijum metabisuifit, butilisani hidroksianisol). stabilizatore (npr., hidroksipropil celuloza, hidroksipropilmetil celuloza), agense za povećanje viskoznosti (npr., karbomer, koloidni silicijum dioksid etil celuloza, guar guma), zaslađivače (npr.saharoza, aspartam, limunska kiselina), agensi za stvaranje ukusa (npr. pepermint, metil salicilat. ili aroma pomorandže), konzervansi (npr , Timerosal, benzil alkohol, parabeni), farmaceutska maziva (npr . stearinska kiselina, magnezijum stearat, polietilen glikol. natrijum lauril sulfat), pomagala protoka (npr koloidni silicijum dioksd), plastifikatori (npr., dietil ftalat, trietil cifrati), emulzifikatori (npr , karbomer. hidroksipropil celuloza, natrijum lauril sulfat), polimerne obloge (npr, poloksameri ili poloksamini), agensi za formiranje obloge i filma (npr, akrilati etil celuloze, polimetakrilati) i/ili ađuvansi
[0044]U jednom izvođenju, aktivna jedinjenja se pripremaju sa nosačima koja će da štite jedinjenje od brze eliminacije iz tela, kao što je kontrolisano otpuštanje formulacije, uključujući implante i sisteme isporuke u obliku mikro kapsula. Biorazgradivi, biokompatibilni polimeri mogu da se koriste, kao što je etilen vinil acetat, polianhidridi, poliglikolna kiselina, kolagen, poliortoestri, i polilaktinska kiselina Načini pripreme takvih formulacija će biti očigledni stučnjaku u ovoj oblasti nauke Ove materijale je takođe moguće dobiti komercijalno iz kompanije Alza Corporation i kompanije Nova Pharmaceuticals. Ine Lipozomne suspenzije (uključujući lipozome usmerene na inficirane ćelije sa monoklonim antitelima na virusne agense) i moguće ih je, takođe, koristiti kao farmaceutski prihvatljive nosače Ovi mogu da se pripreme prema postupcima poznatim stručnjaku u oblasti tehnike, na primer, kako je opiano u američkom patentu (U.S Pat No 4,522,811)
[0045]Posebna je prednost formulisanje oralnih jedinjenja u obliku dozne jedincice za lakoću primene i uniformnost doze Oblik jedinične doze kako se ovde koristi se odnosi na fizički diskretne jedinice pogodne za unitarne doze za subjekta kog treba lečiti, svaka jedinica sadrži unapred utvrđenu količinu aktivnog jedinjenja izračunatu da proizvodi željeno terapijsko dejstvo u vezi sa potrebnim farmaceutskim nosačem. Specifikacija za oblike jedinične doze prema ovom pronalasku se diktira putem i direktno zavisi od jedinstvenih karakteristika aktivnog jedinjenja i određenog terapijskog dejstva koje treba postići, i ograničenja koja su svojstvena u ovoj oblasti nauke jedinjenja kao što je aktivno jedinjenje za lečenje pojedinaca
[0046]Formulacije prema ovom pronalasku predviđene za oralnu primenu mogu da obuhvate jedan ili više pojačavača prodiranja, uključujući masne kiseline dugog lanca ili njihove soli, kao što je dekanoinska kiselina ili natrijum dekanoat.
[0047]U jednom preporučenom izvođenju, jedinjenja mogu da budu formulisana u vodenom rastvoru za intravensko ubrizgavanje. U jednom izvođenju, agensi rastvaranja mogu da budu pogodno iskorišćeni. Posebno preporučen rastvarajući agens obuhvata ciklodekstrine i modifikovane ciklodekstrine kao što je sulfonska kiselina supstituisana derivatom ili solju p-cikklodekstrina uključujući sulfcbutil derivatizovan-fi-ciklodekstrin, kao što je sulfobutiletar-7-j(<p->ciklodekstrin koji je prodala CyDex, Ine pod trgovačkim nazivom CAPTISOL®
[0048]Farmaceutska jedinjenja mogu da budu sadržana u posudi, pakovanju, ili zajedno sa instrukcijama za način primene leka.
[0049]Dnevna primena može biti ponovljena kontrinualno za period od nekoliko dana do nekoliko godina. Oralno tretiranje može da se nastavi na između jedne nedelje i do kraja života tog pacijenta. Poželjno, primena može da se odvija tokom pet uzastopnih dana posle čega subjekt može da se proceni da utvrdi da li je potrebna dalja primena leka Primena leka može biti kontinualna ili povremena, npr., lečene tokom nekoliko uzastopnih dana posle čega sledi period odmora Jedinjenja prema ovom pronalasku moguće je pnmenjivati intravenski prvog dana lečenja. sa oralnom primenom drugog dana i svih uzastopnih dana posle toga.
[0050]Priprema farmaceutskih jedinjenja koja sadrže aktivnu komponentu je sasvim jasna u tehnici, na primer, mešanje. granulisanje, ili procesi za formiranje tableta Aktivni sastojak terapije se često meša sa ekscipijentima koji su farmaceutski prihvatljivi i kompatibilni sa aktivnim sastojkom Za oralni način primene, aktivni sastojci se mešaju sa aditivima uobičajenim za ovu namenu, kao što suprenosna sredstva, stabilizatori, ili inertni razblaživači, i konvertovani su uobičajenim postupcima u odgovarajuće oblike za primenu, kao što su tablete, obložene tablete, tvrde ili meke želatinaste kapsule, vodene, alkoholne ili uljne rastvore i slično kao što je gore detaljno navedeno.
[0051]Količina jedinjenja koja se primenjuje pacijentu je manja od količine koja bi prouzrokovala toksičnost kod pacijenta Kod nekih izvođenja, količina jedinjenja koje se primenjuje pacijentu je manja od količine koja prouzrokuje koncentraciju jedinjenja u plazmi pacijenta da bude jednaka ili da premaši toksični nivo jedinjenja Poželjno, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta je održana na oko 10 nM Kod jednog izvođenja, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta se održava na oko 25 nM. U jednom izvođenju, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta je održana na oko 50 nM Kod jednog izvođenja, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta se održava na oko 100 nM. Kod jednog izvođenja, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta se održava na oko 500 nM. Kod jednog izvođenja, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta se održava na oko 1000 nM Kod jednog izvođenja, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta se održava na oko 2500 nM Kod jednog izvođenja, koncentracija jedinjenja u plazmi pacijenta je održana na oko 5000 nM Optimalna količina jedinjenja koje treba administrirati pacijentu tokom primene ovog pronalaska zavisiće od određenog jedinjenja korišćenog i od tipa kancera koji se leči
DEFINICIJE
[0052]U nastavku su navedene definicije različitih pojmova korišćenih da se opiše ovaj pronalazak Ove definicije se odnose na pojmove kako se oni koriste u ovom spisu i patentne zafiteve, osim ako nije drugačije ogrnaičeno u specifičnim primerima. bilo individualno ili kao deo veće grupe.
[0053]Pojam "acil" se odnosi na vodonik, alkil, delimično zasićeni ili potpuno zasićeni cikloalkil, delimično zasićeni ili potpuno zasićeni heterocikl, aril. i heteroaril supstituisane karbonil grupe. Na primer, acil obuhvata grupe kao što je (C1-C6) alkanoil (npr. formil. acetil, propionil, butiril, valeril. kaproil, t-butilacetil. itd.) (C3-C6) cikloalkilcarbonil (npr , ciklopropilkarboml, ciklobutilkarbonil, ciklopentilkarbonil, cikloheksilkarbonil, itd.), heterociklik karbonil (npr., pirolidinilkarbonil, pirolid-2-on-5-karbonil, piperidinilkarbonil, piperazinilkarbonil, tetrahidrofuranilkarbonil, itd.), aroil (npr., benzoii) i heteroaroil (npr., tiofenil-2-karbonil, tiofenil-3-karbonil, furanil-2-karbonil, furanil-3-karbonil, 1 H-piroil-2-karbonil. 1H-piroil-3-karbonil, benzo[b]tiofenil-2-karbonil, itd.) Pored toga, alkil, cikloalkil, heterocikl, aril i heteroaril deo acil grupe može da bude bilo koji deo iz grupa opisanih u odgovarajućim definicijama. Kada se navodi kao "opciono supstituisana", acil grupa može da bude nesupstituisana ili opciono supstituisana sa jednim ili više supstituenata (najčešće jednim do tri supstituenata) nezavisno izabranih iz grupe supstituenata navedenih u spisku dole u definiciji za "supstituisan" ili alkil, cikloalkil, heterocikl, aril i heteroaril deo acil grupa može da bude supstituisana kako je gore opisano u preporučenoj i preporučenijoj listi supstituenata, respektivno
[0054]Pojam "alkil" obuhvata linearne ili razgranate radikale koji imaju jedan do oko dvadeset atoma ugljenika ili poželjno, jedan do oko dvanaest atoma ugljenika. Preporučljiviji radikali alkila su "niži alkil" radikali sa jednim do oko deset atoma ugljenika Preporučljiviji radikali alkila su radikali alkila sa jednim do oko deset atoma ugljenika Primeri takvih radikala obuhvataju metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, sekbutil, tert-butil, pentil, izo-amil, heksil i slično
[0055]Pojam "alkenil" obuhvata linearne ili razgranate radikale koji imaju najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik-ugljenik od dve do oko dvadeset atoma ugljenika ili poželjno, dva do oko dvanaest atoma ugljenika. Preporučeni radikali alkenila su "niži alkenil" radikali koji imaju dva do oko deset atoma ugljenika i još poželjnije oko dva do oko osam atoma ugljenika. Primeri alkenil radikala obuhvataju etenil, alil, propenil, butenil i 4-metilbutenil Pojmovi "alkenil", i "niži alkenil", obuhvataju radikale koji imaju "cis" i "trans" orijentacije, ili alternativno, "E" i "Z" orijentacije.
[0056]Pojam "alkinil" obuhvata linearne ili razgranate radikale koji imaju najmanje jednu trostruku vezu ugljenik-ugljenik od dve do oko dvadeset atoma ugljenika ili, poželjno, dva do oko dvanaest atoma ugljenika. Poželjniji radikali alkinila su "niži alkinil" radikali koji imaju dva do oko deset atoma ugljenika i još poželjnije oko dva do oko osam atoma ugljenika. atoma. Primeri alkinil radikala obuhvataju propargil, 1-propinil, 2-propinil, 1-butin, 2-butinil i 1-pentinil
[0057]Pojam "aril", sam ili u kombinaciji, znači karbociklični aromatski sistem koji sadrži jedan, dva ili tri prstena pri čemu takvi prsteni mogu da se spoje kao privezak ili mogu da budu fuzionisani Pojam "aril" obuhvata aromatske radikale kao što je fenil. naftil, tetrahidronaftit. indan i bifenil.
[0058]Pojmovi "heterociklil", "heterocikl" "heterociklik" ili "heterociklo" obuhvataju zasićen, delimično nezasićen i nezasićen heteroatom-koji sadrži radikale u obliku prsena, koji. prema tome, mogu takođe da se zovu "heterociklil", "heterocikloalkenil" i "heteroaril", gde heteroatomi mogu da se izaberu iz azota, sumpora i kiseonika Primeri zasićenih heterociklil radikala obhvataju zasićenu 3 do 6-članu heteromonociklik grupu koja sadrži 1 do 4 atoma azota (npr. pirolidinil, imidazolidinil, piperidino, piperazinil, itd); zasićenu 3 do 6-članu heteromono-cikličnu grupu koja sadrži 1 do 2 atoma kiseonika i 1 do 3 atoma azota (npr. morfolinil, itd ); zasićenu 3 do 6-članu heteromonociklik grupu koja sadrži 1 do 2 atoma sumpora i 1 do 3 atoma ugljenika (npr , tiazolidinil itd ). Primeri delimično nezasićenih heterociklil radikala obuhvataju dihidrotiofen, dihidropiran, dihidrofuran i dihidrotiazol. Heterociklil radikali mogu da uključe pentavalentni azot, kao kod tetrazolijuma i piridinijum radikala. Pojam "heterocikl" takođe obuhvata radikale gde se heterociklil radikali fuzionišu sa aril i cikloalkil radikalima. Primeri tako fuzionisanih biciklićnih radikala obuhvataju benzofuran, benzotiofen. i slično
[0059]Pojam "heteroaril" obuhvata nezasićene heterociklil radikale Primeri heteroaril radikala obuhvataju nezasićenu 3 do 6-članu heteromonociklik grupu koja sadrži 1 do 4 atoma azota, na primer, pirolil, pirolinil, imidazolil, pirazolil, piridil, pinmidil. pirazinil, piridazinil, triazolil (npr.. 4H-1,2,4-triazolil. 1H-1.2.3- triazolil, 2H-1,2.3-triazolil. itd) tetrazolil (npr 1 H-tetrazolil, 2H-tetrazolil. itd), itd; nezasićenu kondenzovanu heterociklil grupu koja sadrži 1 do 5 atoma azota na primer. indolil, izoindolil, indolizinilbenzimidazolil, hinolil.izohinolil. indazolil, benzotriazolil, tetrazolopiridazinil (npr, tetrazolo[1,5-bjpiridazinil, itd.), itd.; nezasićenu 3 do 6-članu heteromonociklik grupu koja sadrži atom kiseonika, na primer, piranil, furil, itd , nezasićenu 3 do 6-članu heteromonocikličnu grupu koja sadrži atom sumpora, na primer, tienil, itd.; nezasićenu 3- to 6-članu heteromonociklik grupu koja sadrži 1 do 2 atoma kiseonika i 1 do 3 atoma azota, na primer, oksazolil. izoksazolil, oksadiazolil (npr., 1.2.4-oksadiazolil, 1.3.4- oksadiazolil, 1,2,5-oksadiazolil, itd.) itd ; nezasićenu kondenzovanu heterociklil grupu koja sadrži 1 do 2 atoma kiseonika M do 3 atoma azota, na primer, oksazolil, izoksazolil. oksadiazolil (npr., 1,2,4-oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, 1,2,5-oksadiazolil, itd.) itd.; nezasićenu kondenzovanu heterociklil grupu koja sadrži 1 do 2 atoma kiseonika i 1 do 3 atoma azota (npr benzoksazolil, benzoksadiazolil, itd.); nezasićenu 3 do 6-članu heteromonociklik grupu koja sadrži 1 do 2 atoma sumpora i 1 do 3 atoma azota, na primer, tiazolil, tiadiazolil (npr., 1,2,4-tiadiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, 1,2,5-tiadiazolil, itd ) itd ; nezasićenu kondenzovanu heterociklil grupu koja sadrži 1 do 2 atoma sumpora i 1 do 3 atoma azota (npr., benzotiazolil, benzotiadiazolil, itd.) i slično
[0060]Pojam "heterocikloalkil" obuhvata heterociklo supstituisane alkil radikale Poželjniji heterocikloalkil radikali su "niži heterocikloalkil" radikali koji imaju jedan do šest atoma ugljenika u heterociklo radikalima
[0061]Pojam "supstituisani" se odnosi na zamenu jednog ili više radikala vodonika u datoj konstrukciji sa radikalom navedenog supstituenta uključi, ali se ne ograničava na halo, alkil, alkenil, alkinil, aril, heterociklil, tiol, alkiltio, ariltio, alkiltioalkil, ariltioalkil, alkilsulfonil. alkilsulfonilalkil, arilsulfonilalkil, alkoksi, ariloksi, aralkoksi. aminokarbonil, alkilaminokarbonil, arilammokarbonil, alkoksikarbonil, ariloksikarbonil, haloalkil, amino, trifluorometil. cijano. nitro. alkilamino. arilamino, alkilaminoalkil. arilaminoalkil, aminoalkilamino, hidroksi, alkoksialkil, karboksialkil, alkoksikarbonilalkil. aminokarbonilalkil. acil, aralkoksikarbonil, karboksilna kiselina, sulfonska kiselina, sulfonil, fosfonska kiselina, aril, heteroaril, heterociklik, i alifatik. Razume se da supstituent može još da bude supstituisan. [0062jJednostavnosti radi, hemijski delovi su definisani i koji se u ćelom tekstu pominju mogu da budu jednovaientni hemijski delovi (npr alkil, aril, itd ) ili viševalentni delovi pod odgovarajućim strukturnim okolnostima jasnim stručnjaku u ovoj oblasti tehnike. Na primer, "alkil" deo može da se pomene kao monovalentni radikal (npr. CH3-CH2-), ili u drugim pnmenma. bivalentni povezujući deo može da bude "alkil," u tom slučaju stručnjak iz ove oblasti nauke i tehnike će razumeti da alkil da bude dvovalentni radikal (npr., -CH2-CH2-), koji je ekvivalent pojmu "alkilen." Slično, u okolnostima u kojima su divalentni delovi neophodni i u kojima se navode kao "alkoksi", "alkilamino", "ariloksi", "alkiltio", "aril", "heteroaril", "heterociklik", "alkil" "alkenil", "alkinil", "alifatik", ih "cikloalkil", stručnjacima u ovoj oblasti će biti jasno da su pojmovi alkoksi", "alkilamino", "ariloksi". "alkiltio", "aril". "heteroaril", "heterociklik", "alkil". "alkenil", "alkinil". "alifatik", ili "cikloalkil" se odnosi na odgovarajući dvovalentni deo.
[0063]Pojmovi "halogen" ili "halo" se ovde koriste, odnose se na atom izabran iz fluora, hlora. bromin i jodin.
[0064]Kako se ovde koristi, ovaj pojam "neprirodna proliferacija se odnosi na nenormalan rast ćelije.
[0065]Izraz "dodatna terapija" obuhvata lečenje subjekta sa agensima koji smanjuju ili izbegavaju prateća dejstva povezana sa kombinovanom terapijom prema ovom pronalasku uključujući, ali se ne ograničava na, one agense, na primer, koji smanjuju toksična dejstva antikancenih lekova, npr., inhibitore resorpcije kostiju, kardiozaštitne agense, spreči ili smanji pojavu mučnine i povraćanje povezano sa hemoterapijom, rađioterapijom ili operacijom ili smanji pojavu infekcije povezane sa načinom primene mijelosupresivnih antikancernih lekova.
[0066]Pojam "angiogeneza," se koristi ovde. se odnosi na formiranje krvnih sudova Specifično, angiogeneza je višestepeni proces gde se endotelijalne ćelije fokusno raspadaju i napadaju kroz sopstvenu membranu osnove, migriraju kroz intersticijalne strome prema angiogenskom stimulansu (draž) prema angiogenskom stimulusu, raste se blizu vrha migracije, organizuje u krvne sudove, i ponovo spaja na novo sintetizovanu membranu osnove (videti Folkman et al . Adv Cancer Res , Vol. 43, pp. 175-203 (1985)). Antiangiogenski agensi se meašju sa ovim procesom. Primeri agenasa koji se mešaju sa nekoliko ovih koraka obuhvataju trompospondinS, angiostatin, endostatin, mterferon alfa i jedinjenja kao što je matriks metaloproteinaza (MMP) inhibitore koji blokiraju aktivnosti enzimi koje čiste i kreiraju putanje za novo formirane krvne sudove koji kao nastavak slede; jedinjenja, kao inhibitori alfa naspram beta 3, koji se mešaju sa molekuiima koje ćelije krvnog suda koriste za premošćavanje između roditeljskog krvnog suda i tumora, agensa, kao što su COX-2 inhibitori. koji sprečavaju rast ćelija koje formiraju nove krvne sudove, i jedinjenja na bazi proteina koja se istovremeno mešaju sa nekoliko ovih ciljeva.
[0067]Pojam "apoptoza" kako se ovde koristi se odnosi na programiranu smrt ćelije kako je signalizirano putem nukleusa kod ljudskih i životinjskih ćelija koje normalno funkcionišu kada starostlili zdravstveno stanje ćelije i uslovi diktira "Agens koji izaziva apoptozu" okida postupak programirane smrti ćelije.
[0068]Pojam "kancer" kako se ovde koristi označava klasu bolesti ili poremećaja koje karaktenše nekontrolisana podela ćelija i sposobnost ovih ćelija da napadnu druga tkiva, bilo direktnim rastom u susedno tkivo ili kroz invaziju ili ugradnju u udaljena mesta metastazama.
[0069]Pojmovi "jedinjenje" i "jedinjenje prema ovom pronalasku", kako se ovde koristi, odnosi se na jedinjenja prema Formuli I i njihove farmaceutski prihvatljive soli Jedinjenja prema ovom pronalasku može da se dobije u različitim oblicima, uključujući kristalne i amorfne oblike Ova jedinjenja mogu takođe da se jave kao solvati, na primer, hidrati, ili solvati organskog rastvaraća, preporučljivo farmaceutski prihvatljiv rastvarač Jedinjenja mogu takođe da se jave u višestrukim kristalnim, ili polimorfnim, oblicima. Jedinjenja prema ovom pronalasku još obuhvataju farmaceutski prihvatljive prolekove i estre jedinjenja prema Formuli I
[0070]Pojam "uređaj" se odnosi na bilo koji uređaj, obično mehanički ili električni, namenjen da se izvodi određena funkcija
[0071]Kako se ovde koristi, pojam "displazija" se odnosi na nenormalan rast ćelije, i obično se odnosi na najraniji oblik prekancerne lezije koju u biopsiji prepoznaje patolog
[0072]Kako se ovde koristi, pojam "deiotvorna količina predmetnih jedinjenja," u vezi sa predmetnim načinom lečenja se odnosi na količinu predmetnog jedinjenja koja, kada se isporuči kao deo željenog režima doze, daje kao rezultat, npr. promenu u brzini rasta ćelije i/ili stanju diferencijacije i/ili brzini opstanka ćelije na klinički prihvatljivim standardima Ova količina može još da ublaži u izvesnoj meri jedan ili više simptoma poremećaja neoplazije, uključujući ali ne ograničavajući se na 1) smanjenje broja kancernih ćelija; 2) smanjenje veličine tumora: 3) inhibiranje (t.j. usporavanje u izvesnoj meri, poželjno zaustavljanje) infiltriranja kancerne ćelije u periferne organe; 4) inhibiciju (t.j., usporavanje u izvesnoj meri, poželjno zaustavljanje) metastaze tumora; 5) inhibiranje, u izvesnoj meri, rasta ćelije; 6) ublažavanje ili smanjenje u izvesnoj meri jednog ili više simptoma povezanih sa poremećajem: i/ili 7) ublažavanje ili smanjenje neželjenih dejstava povezanih sa administnranjem antikancernih agenasa
[0073]Pojam "hiperplazija," kako se ovde koristi, se odnosi na prekomernu podelu ćelije ili rast.
[0074]Fraza "imunoterapijski agens" se odnosi na agense konšćene za prenos imuniteta donatora imuniteta; npr., druge osobe ili životnje, na domaćina putem inokulacije Pojam obuhvata upotrebu seruma ili germa globulina koji sadrže izvedena antitela proizvedena pomoću druge individue ili životinje; nespecifičnu sistemsku stimulaciju; ađuvanse, aktivnu specifičnu imunoterapiju; i adoptivnu imunoterapiju. Adoptivna imunoterapija se odnosi na lečenje bolesti terapijom ili agensima koji obuhvataju vakcinaciju domaćina senzitizovanih Iimfocita. faktor transfera, imuni RNK. ili antitela u serumu ili gama globulinu
[0075]Pojam "inhibicija," u kontekstu neoplazije. rast tumora ili rast ćelije tumora, može da se proceni odloženom pojavom primarnih ili sekundarnih tumora, usporenim rastom primarnih ili sekundarnih tumora, smanjenom pojavom primarnih ili sekundarnih tumora, usporena ili smanjena ozbiljnost sekundarnih dejstava bolesti, zakočenog rasta tumora i regresije tumora, između ostalog. U ekstremnom slučaju, potpuna inhibicija koja se ovde pominje kao sprečavanje ili hemoprevencija.
[0076]Pojam "metastaza," kako se ovde koristi, se odnosi na migraciju ćelija kancera iz originalnog mesta tumora kroz krvne sudove i limfne sudove da se proizvedu kanceri u drugim tkivima. Metastaza je takođe pojam konšćen za sekundarni rast kancera na udaljenom mestu
[0077]Pojam "neoplazam." kako se ovde koristi, se odnosi na nenormalnu masu tkiva koja nastaje kao rezultat iz prekomerne podele ćelije. Neoplazmi mogu da budu benigni {ne kancerni). ili maligni (kancerni) i mogu da se zovu tumor. Pojam "neoplazija" je patološki proces koji kao rezultat daje formiranje tumora.
[0078]Kako se ovde koristi, pojam "prekancerm" se odnosi na stanje koje nije maligno, ali je verovatno da će postati maligno ako se ostavi netretirano
[0079]Pojam "proliferacija" se odnosi na ćelije koje prolaze mitozu
[0080]Fraza "PI3 bolesti povezane sa kinazom ili poremećaj se odnosi na bolest ili poremećaj koji karakteriše neodgovarajuća aktivnost fosfoinozitid-3-kinaze ili prekomerna aktivnost fosfoinozitid-3-kinaze. Neodgovarajuća aktivnost se odnosi na bilo; (i) ispoljavanje PI3 kinaze u ćelijama koje normalno ne ispoljavaju PI3 kinazu; (ii) povećano ispoljavanje PI3 kinaze dovodi do neželjenog rasta ćelije, diferencijacije i/ili rasta: ili. {iii) smanjenog ispoljavanja PI3 kinaze što dovodi do neželjenih smanjenja u proliferaciji ćelije, diferencijaciji i/ili rastu Prekomerna aktivnost PI3 kinaze se odnosi na bilo pojačavanje gena koji kodira određenu PI3 kinazu ili proizvodnju nivoa PI3 aktivnosti kinaze koja može da se dovodi u vezu sa rastom ćelije, diferencijacijom i/ili poremećajem rasta (to jest, kako se nivo PM kinaze povećava, ozbiljnost jednog ili više simptoma poremećaja ćelije se povećava).
[0081]Faza "radio terapijskog agensa" se odnosi na upotrebu elektromagnetnog zračenja ili zračenja čestice kod lečenja neoplazije.
[0082]Pojam "angiogeneza," kako se koristi ovde, se odnosi na vraćanje kancera posle perioda reemisije. Ovo može biti zbog nepotpunog uklanjanja ćelija iz početnog kancera i može nastati lokalno {isto mesto kao kod početnog kacera), regionalno {u blizini početnog kancera, moguće u limfnim čvorovima ili tkivu), i/ili distalno kao rezultat metastaza
[0083]Pojam "lečenje" se odnosi na bilo koji pproces, aktivnost, primenu, terapiju, ili slično, gde se sisar, uključujući ljudsko biće, izlaže medicinskoj pomoći u cilju poboljšanja stanja sisara, direktno ili indirektno.
[0084]Pojam "vakcina" obuhvata agense koji podstiču imuni sistem pacijenta da izgrad odgovor imunosistema protiv tumora napadom na ćeije koje ispoljavaju antigene povezane sa tumorom (Teas)
[0085]Kako se ovde koristi, pojam "farmaceutski prihvatljiva so" se odnosi na one soli koje su, u okviru obima nepristrasne medicinske procene, pogodne za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i njižim životinjama bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora i slično, i proporcionalne su razumnom odnosu korist/rizik Farmaceutski prihvatljive soli su dobro poznate u tehnici. Na primer, S. M. Berge, et al. opisuje farmaceutski prihvatljive soli detaljno u (J Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19
(1977))). Soli se mogu pripremitiin situtokom finalne izolacije i prečišćavanja jedinjenja prema ovom pronalasku, ili odvojeno dovođenje u reakciju funkcije slobodne baze sa odgovarajućom organskom kiselinom i neorganskom kiselinom Primeri farmaceutski prihvatljivih netoksičnih soli dodate kiseline obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, soli amino grupe formirane sa neorganskim kiselinama kao što je hlorovodonićna kiselina, bromvodonična kiselina, fosforna kiselina sumporna kiselina, perhlorna kiselina ili sa organskim kiselinama kao što je sirćetna kiselina, maleinska kiselina, tartarna kiselina, limunska kiselina, sukcinska kiselina, laktobionska kiselina ili malonska kiselina ili korišćenjem drugih postupaka koji se koriste u nauci kao što je jonska izmena Druge farmaceutski prihvatljive soli obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, adipat, alginat, askorbat, aspartat. benzensulfonat, benzoat, bisulfat, borat, butirat, kamforat, kamforsulfonat, citrat, ciklopentanpropionat, diglukonat dodecilsulfat, etansulfonat, format, fumarat, glukoheptanoat, glicerofosfat, glukonat, hemisulfat, heptanoat, heksanoat, hidrojodid, 2-hidroksi-etanesulfonat, laktobionat, laktat, laurat, lauril sulfat malat, maleat, malonat, metanesulfonat, 2-naftalensulfonat, nikotinat, nitrat, oleat, oksalat, palmitat, pamoat, pektinat.persulfat, 3-fenilpropionat, fosfat, pikrat, pivalat, propionat, stearat, sukcinat, sulfat, tartrat, tiocijanat, p-toluenesulfonat, undekanoat, soli valerata, i tome slično. Reprezentativni alkali ili alkalini soli zemnog metala obuhvataju natrijum. litijum, kalijum, kalcijum, magnezijum, i slično Druge farmaceutski prihvatljive soli obuhvataju, kada je pogodno, netoksični amonijak, kvartarni amonijak, i katjone amina formirane korišćenjem kontrajona kao što je halid, hidroksid. karboksiiat, sulfat, fosfat, nitrat, alkil sulfonat koji ima od 1 do 6 atoma ugljenika, sulfonat i aril sulfonat. Neke soli kao što je natrijum, kalijum i soli baze holina kao i kisele soli kao što je sulfat i metansulfonatne soli su pokazale da poboljšavaju rastvorljivost jedinjenja prema Formuli I u farmaceutski prihvatljivim vodenim podlogama. U jednom izvođenj. farmaceutski prihvatljiva so Jedinjenja 1 je so holina Preporučene soli Jedinjenja 1 obuhvataju natrijum so i kalijum so. Druge preporučene soli obuhvataju soli sulfata i metansulfonata
[0086]Kako se ovde koristi, pojam "farmaceutski prihvatljiv estar" se odnosi na estre koji se hidrolizuju in vivo i obuhvataju one koji su spremini za pucanje u ljudskom telu da ostave roditeljsko jedinjenje ili so ovog jedinjenja Odgovarajuće grupe estara obuhvataju, na primer, one koje su izvedene iz farmaceutski prihvatljivih alifatik karboksilnih kiselina, posebno alkanoičnih, alenoičnih, cikloalkanoičnih i alkanedoičnih kiselina, kod kojih svaki deo alkila ili alkenila kao prednost ima ne više od 6 atoma ugljenika. Primeri određenih estara obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, formate, acetate, propionate. butirate, akrilate i etilsukcinate.
[0087]Pojam "farmaceutski prihvatljivi prolekovi" kako se ovde koriste se odnosi na one prolekove jedinjenja prema ovom pronalasku koja su, u okviru obima nepristrasne medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i donjih životinja sa prekomernom toksičnošću, iritacijoproporcionalne odnosu razumne koristi/rizika, i delotvorne za njihovu predviđenu upotrebu, kao i dipolarne (cvtierjonske) oblike, gde je moguće, jedinjenja prema ovom pronalasku. "Prolek", kako se ovde koristi znači jedinjenje koje je konvertibilnoin vivometaboličkim sredstvima (npr putem hidrolize) za jedinjenje prema ovom pronalasku. Različiti oblici prolekova su poznati u nauci, na primer, kako je objašnjeneo u (Bundgaard. (ed.), Design of Prodrugs, Elsevier (1985); VVidder, et al (ed.), Methods in Enzymology, Vol 4, Academic Press (1985), Krogsgaard-Larsen. et al . (ed). "Design and Application of Prodrugs, Textbook of Drug Design and Development, Chapter 5. 113-191 (1991); Bundgaard, et al., JournalofDrug Deliver Revievvs, 8 1-38(1992); Bundgaard, J of Pharmaceutical Sciences, 77:285 et seq. (1986); Higuchi and Stella (eds.) Prodrugs as Novel Drug Delivery Systems, American Chemical Society (1975); and Bernard Testa & Joachim Mayer, "Hydrolysis In Drug And Prođrug Metabolism: Chemistry, Biochemistry And Enzymology John Wiley and Sons, Ltd (2002).
[0088]Kako se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljiv nosač" je namenjen da obuhvati bilo koji i sve rastvarače, disperzione podloge,obloge, antibakterijski i antimikrobni agensi, izotonični agensi i agensi za odlaganje apsorpcije, i slično, kompatibilni sa farmaceutskom pnmenom, kao što je sterilna voda bez pirogena.. Pogodni nosači su opisani u najnovijem izdanju Remmgton's Pharmaceutical Sciences, standardnom referentnom tekstu u ovoj oblasti, koji je ugrađen ovde u vidu reference. Preporučeni primeri takvih nosača ili rastvaraća obuhvataju, ali se ne ograničavaju na vodu, slani rastvor, Ringerovi rastvori, dekstrosni rastvor, i 5% ljudskog serumskog albumina. Lipzomi i nevodena prenosna sredstva kao što su neisparljiva ulja takođe je moguće koristiti Upotreba takvih medija i agenasa za farmaceutski aktivne supstance je dobro poznata u nauci. Osim ukoliko je kao bilo koja konvencionalna podloga ili agens nekompatibilan sa aktivnim jedinjenjem, njegova upotreba u jedinjenjima se razmatra Dopunska aktivna jedinjenja mogu takođe da budu ugrađena u ova jedinjenja
[0089]Kako se ovde koristi, pojam "prekancerni" se odnosi na stanje koje nije maligno, ali je verovatno da će postati maligno ako se ostavi netretirano
[0090]Pojam "subjekta," kako se ovde koristi, se odnosi životinju Poželjno je da je životinja sisar. Još poželjnije je da je sisar ljudsko biće Subjekat se takođe odnosi na, na primer. pse, mačke, konje, krave, svinje, gvinejske svinje, ribu. ptice i slično.
[0091]Jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da budu modifikovana dodavanjem odgovarajućih funkcionalnosti da se poboljšaju selektivna biološka svojstva Takve modifikacije su poznate u nauci i mogu da obuhvate one koje povećavaju biološki prodor u dati biološki sistem (npr krv, limfni sistem, centralni nervni sistem), povećanje oralne dostupnosti, povećanje rastvorljivosti da se omogući primena ubrizgavanjem, menja se metabolizam i menja se brzina izlučivanja
[0092]Sintetizovana jedinjenja mogu da se odvoje iz reakcione mešavine još prečiste postupkom kao što je hromatografija u koloni, tečna hromatografija pod visokim pritiskom, tli rekristalizacija. Kao što vešt stručnjak može da uvidi, dodatni postupci sintetizovanja jedinjenja ovih formula biće očigledni običnom stručnjaku u ovoj oblasti. Dodatno, različiti i koraci sinteze mogu da se izvedu u alternativnom nizu ili redosledu da bi se dobila željena jedinjenja. Sintetičke hemijske transformacije i metodologije zaštitne grupe (zaštita i uklanjanje zaštite) je korisno u sintetizovanju ovde opisanih jedinjenja su poznate u ovoj oblasti i obuhvataju, na primer, one koje su opisane kod (R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W Greene and P G IVI VVuts, Protective Groups in Organic Svnthesis, 2d. Ed., John Wiley and Sons (1991) L. Fieser and M Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis. John Wiley and Sons (1994); and L Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995), and subsequent editions thereof
Farmaceutska jedinjenja
[0093]Farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku sadrže terapijski delotvornu količinu jedinjenja prema ovom pronalasku formulisanu zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača ili ekscipijenata Preporučljivo, pojam "farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijent" znači netoksična, inertna čvrsta supstanca, polučvrsta supstanca ili tečni punilac, razblaživač, materijal za stavljanje u kapsulu ili pomoćnu formulaciju bilo kog tipa Neki primeri materijala koji služe kao farmaceutski prihvatljivi nosači su šećeri kao što je laktoza, glukoza i saharoza, ciklodekstrini kao što su alfa- (a), beta- (f3) i gama- (y) ciklodekstrini; škrobovi kao što je kukuruzni škrob i krompir škrob, celuloza i njeni derivati kao što je natrijum karboksimetil celuloza, etil celuloza i celulozni acetat; tragakant u prahu salt; želatin, talk, ekscipijenti kao što je kako puter i gelatin; tale; supozitorije u vosku; ulje kao što je ulje kikirikija, ulje semena pamuka, ulje šafrana, ulje sušama maslinovo ulje, kukuruzno ulje i ulje sojinog zrna, glikoli kao stoje propilen glikol; estri kao što je etil oleat i etil laureat, agar; puferski agensi kao što je magnezijum hidroksid i aluminijum hidroksid; alginijska kiselina, voda bez pirogena. izonični slani rastvor; Ringerov rastvor; etil alkohol, i fosfatni puferski rastvori, kao i druga netoksična kompatibilna maziva kao što je natrijum lauril sulfat i magnezijum stearat, kao i agensi za bojenje, agensi za otpuštanje, agensi za oblaganje, agensi za zaslađivanje. agensi za aromu i parfimisanje, konzervansi i antioksidansi mogu takođe da budu prisutni u ovom jedinjenju prema proceni formulatora.
[0095]Farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da se administriraju oralno, parenteralno, inhalacioni sprej, topikalno, rektalno. nazalno, bukalno, vagmalno ili preko ugrađenog rezervoara, poželjno oralnu primenu ili primenu ubrizgavanje Farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku mogu da sadrže bilo koje konvencionalne netoksične farmaceutski prihvatljive nosače, ađuvanse ili prenosna sredstva. U nekim slučajevima. pH formulacije može da se podesi sa farmaceutski prihvatljivim solima, bazama ili puferskim sredstvima da se pojača stabilnost formulisanog jedinjenja ili njegov oblik isporuke. Pojam parenteralni kako se ovde koristi obuhvata potkožno, intrakutano, intravensko. intramuskularno, intraartenjsko, intrasinovijalno. mtrasternalno, intratekalno, intralezono i intrakranijalno ubrizgavanje ili tehnike infuzije.
[0096]Tečni oblici doze za oralnu primenu obuhvataju farmaceutski prihvatljive emulzije, mikroemulzije, rastvore, suspenzije, sirupe i eliksire Pored aktivnih jedinjenja. oblici tečne doe mogu da sadrže inertne rastvarače koji se uobičajeno koriste u ovoj oblasti kao što je. na primer. voda ili drugi rastvarači, agensi za rastvaranje i emulzifikatori kao što je etil alkohol, tzopropil alkohol, etil karbonat, etil acetat, benzil alkohol, benzil benzoat, propilen glikol, 1.3-butilen glikol. dimetilformamid, ulja (posebno, iz semena pamuka, ulje iz oraha, kukuruza, klica, maslina, ncinusovo ulje, i susamovo ulje), glicirelo, tetrahidrofurfuril alkohol, glikoli polietilena i estri masne kiseline sorbitan, i njihove mešavine Pored inertnih razblaživača, jedinjenja za oralnu primenu mogu takođe da obuhvate ađuvanse kao što su agensi za vlaženje, agensi za emulzifikovanje i suspenziju, zaslađivanje, aromatizovanje, i parfimisanje.
[0097]Preparati za ubrizgavanje, na primer, sterilne injektibilne vodene ili uljne suspenzije, mogu da se formulišu u skladu sa poznatim u ovoj oblasti za upotrebu pogodnim agensima koji se raspršuju ili agense koji održavaju vlažnost i agense za suspenziju Sterilni injektibilni preparati mogu takođe da budu sterilni injektibilni rastvor, suspenzija ili emulzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer kao rastvor u 1,3-butandiolu. Među prihvatljivim prenosnim sredstvima i rastvaračima koji mogu da se koriste su voda, Ringerov rastvor. U S P i izotonični rastvor natrijum hlonda. Pored toga, sterilna, fiksna ulja su zgodno upotrebljena kao rastvarač ih medijum za suspenziju. U ovu svrhu svako neisparljivo ulje sa blagim ukusom može da se koristi uključujući sintetičke mono ili digliceride. Pored toga, masne kiseline kao što je oleinska kiselina se koriste u pripremi preparata za ubrizgavanje.
[0098]Formulacije koje se ubrizgavaju mogu da se sterihšu na primer, filtriranjem kroz filter koji sadrži bakterije, ili ugradnjom sterilizujućih agenasa kao sterilnih čvrstih jedinjenja u obliku čvrste supstance koji se mogu rastvoriti ili raspršiti u sterilnoj vodi ili drugoj podlozi koja se ubrizgava pre upotrebe.
[0099]Da bi se produžilo dejstvo leko, često je poželjno usporiti apsorpciju leka iz potkožnog Ni intramuskularnog ubrizgavanja. Ovo je moguće izvesi upotrebom tečne suspenzije kristalnog ili amorfnog materijala sa lošom rastvorljivošću u vodi Brzina apsorpcije leka zatim zavisi od brzine rastvaranja, koja, zauzvrat, može da zavisi od veličine kristala i kristalnog oblika Alternativno, odložena apsorpcija parenteralno primenjenog oblika leka se izvodi rastvaranjem ili držanjem u suspenziji leka ili prenosnog sredstva u vidu ulja. Depo oblici koji se ubrizgavaju se prave formiranjem matrica slavljenih u mikro kapsule leka u biodegradabilne polimere kao što je polilaktid-poliglikolid Zavisno od odnosa leka prema polimeru i prirode određenog polimera koji se koristi, brzinu otpuštanja leka je moguće kontrolisati. Primeri drugih biorazgradivih polimera obuhvataju poli(ortoestre) i poli(anhidnde). Depo formulacije koje se ubrizgavaju se takođe pripremaju tako što se lipozomi ili mikroemulzije koje su kompatibilne sa telesnim tkivima obuhvate lek
[0100]Jedinjenja za rektalnu ili vaginalnu primenu su poželjno supozitonje koji mogu da se pripreme mešanjem jedinjenja prema ovom pronalasku sa odgovarajućim neiritirajućim ekscipijentima ili nosačima kao što je kako puter, polietilen glikol ili supozitorije u obliku voska koje su čvrste na temperaturi okoline ali tečnost na telesnoj temperaturi i samim tim da se otopi u rektumu ili vaginalnoj šupljini i otpusti aktivno jedinjenje.
[0101] Čvrsti oblici doze za oralno administriranje obuhvataju kapsule, tablete, pilule, prahove, i granule. U takvim čvrstim oblicima doze, aktivno jedinjenje je pomešano sa najmanje jednim inertnim, farmaceutski prihvatljivom ekscipijentu ili nosaču kao što je natrijum citrat ili dikalcijum fosfat i/ili: a) punioci ili proširivaći kao što su škrobovi, laktoza, saharaoza. glukoza, manitol. i silicijumska kiselina, b) vezivna sredstva kao što je, na primer, karboksimetilceluloza, alginati, želatin, polivmilpirolidinon. saharoza, i akacija, c) humektanti kao što je glicerol, d) agensi razgradnje kao što je agar-agar, kalcijum karbonat, krompir ili tapioka škrob, alginijska kiselina, izvesni silikati, i natrijum karbonat, e) rastvor agenasa za zadržavanje kao što je parafin, f) pospešivači apsorpcije kao što su kvternarna jedinjenja amonijaka, g) agensi za vlaženje kao stoje, na primer, cetil alkohol i glicerol monostearat. h) apsorbenti kao što je kaolin i bentonit glina, i i) lubnkanti kao što je talk, kalcijum stearat. magnezijum stearat, čvrsti polietilenski glikoli, natrijum lauril sulfat, i njihove mešavine U slučaju kapsula, tablete i pilule, oblik doze može takođe da sadrži puferske agense
[0102]Čvrsta jedinjenja sličnog tipa može takođe da se koristi kao punioci u meko i tvrdo punjenim želatinastim kapsulama korišćenjem takvih ekscipijenata kao što je laktoza ili šećerno mleko kao glikoli polietilena visoke molekularne težine i slično
[0103]Čvrsti oblici doze tableta, dražeja, kapsula, pilula, i granule mogu da se pripreme sa oblogama i Ijuskice kao enterne obloge i druge obloge dobro poznate u oblasti farmaceutske formulacije- Oni mogu opciono da sadrže neprovidne agense i mogu takođe da budu supstanca koja otpušta samo aktivne sastojke, ili preferencijalno, u izvesnom delu intestinalni trakt, opciono, na zadržan način. Primeri jedinjenja za ugradnju koja mogu da se koriste obuhvataju polimerne supstance i voskove
[0104]Dozni oblici za topikalnu ili transdermalnu primenu jedinjenja ovog pronalaska obuhvataju masti, paste, kreme, lokacije, gelovi, prahovi, rastvori, sprejevi, inhalatori, inhalanti ili flasteri Aktivna komponenta se meša pod sterilinim uslovima sa farmaceutski prihvatljivim nosačem i bilo koji potrebni konzervansi ili puferska sredstva kao što mogu biti potrebni. Oftalmička formulacija, kapi za uho, masti za oko, prahovi i rastvori se takođe razumeju kao da su u okviru obima ovog pronalaska.
[0105]Masti, paste, kreme i gelovi mogu da sadrže, pored aktivnog jedinjenja prema ovom pronalasku, ekscipijenti kao što su životinjske i biljne masti, ulja, voskovi, parafini, škrobovi, tragakanti, derivati celuloze, polietilenski glikoli, glikoli polietilena, silikoni, bentoniti, silicijumska kiselina,, talk i cink oksid, ili njihove mešavine.
[0106]Prahovi i sprejevi mogu da sadrže, pored jedinjenja prema ovom pronalasku, ekscipijente kao što je laktoza, talk, silicijumska kiselina, aluminijum hidroksid, kalcijum silikati i poliamid prah, ili mešavine ovih supstanci. Sprejevi mogu dodatno da sadrže uobičajene propelente kao što su hlorofluorohidrougljenici
[0107]Ttransdermalni flasteri imaju su dodatnu prednost pružanja kontrolisanu isporuku jedinjenja u telo. Takvi oblici doze mogu se naprave rastvaranjem ili raspršivanjem jedinjenja u odgovarajućem medijumu. Pospešivači apsorpcije mogu takođe da se koriste da se poveća fluks jedinjenja preko kože. Brzina može da se kontroliše bilo obezbeđivanjem opne za kontrolisanje brzine ili raspršivanje jedinjenja u polimernu matricu ili gel.
[0108]Za isporuku u plućima, jedinjenje koje se koristi za terapiju prema ovom pronalasku se formuliše i administrira pacijentu u čvrstoj supstanci ili u obliku tečnog partikulata direktnom primenom npr , udisanjem u respiratorni sistem. Čvrsti ili tečni oblici partikulata aktivnog jedinjenja pripremljn za praktičnu primenu ovog jedinjenja obuhvataju čestice respirabilne veličine: to znači, čestice veličine dovoljno male da prođu kroz usta i grkljan po udisanju i u bronhijama i alveolama pluća. Isporuka aerosolizovanih lekovitih supstanci, posebno aerosolizovanih antibiotika, je poznata u nauci (videti, na primer američke patente (U.S. Pat. No. 5,767,068 to VanDevanter et at, U S. Pat. No. 5,508,269 to Smith et al., i WO 98/43650 by Montgomery, svi su ovde nalaze kao referenca) Diskusija o pulmornarnoj isporuci antibiotika se takođe nalazi u američkom patentu (U S Pat No 6,014,969), i ovde postoji kao referenca.
[0109]"Terapijski delotvornu količinu" jedinjenja prema pronalasku je namenjen količina jedinjenja koja će predati terapijsko dejstvo na subjekat koji se leći, u razumnoj koristi/odnos rizika koji se primenjuje na medicinsko lečenje. Terapijsko dejstvo može da bude cilj (t.j koji se meri nekim ispitivanjem ili markerom) ili sujektivno (t.j subjekat daje indikaciju ili osećaj efekta). Delotvorna količina opisanog jedinjenja gore predstavljeni mogu da se kreću od oko 0,1 mg/Kg do oko 500 mg/Kg, poželjno od oko 1 do oko 50 mg/Kg. Delotvorne doze će takođe da varira zavisno od rute primene, kao mogućnost zajedničke upotrebe sa drugim agensima. Jasno je. međutim, da će o ukupnoj dnevnoj dozi jedinjenja i jedinjenja prema ovom pronalasku odlučiti odgovorni lekar u okviru obima nepristrasnog medicinskog mišljenja Specifičan nivo terapijske delotvorne doze za bilo kog određenog subjekta će zavisiti od raznovrsnih faktora koji uključuju poremećaj koji se leći i ozbiljnost poremećaja, aktivnost specifičnog korišćenog jedinjenja, specifično korišćeno jedinjenje; starosno doba, telesna težina, generalno zdravlje, pol i način ishrane pacijenta, vreme primene. ruta primene, i brzina izlučivanja specifičnog korišćenog jedinjenja, trajanje terapije; lekovi korišćeni u kombinaciji ili istovremeno sa specifičnim korišćenim jedinjenjem; i slični faktori dobro poznati u medicini
[0110]Ukupna dnevna doza jedinjenja prema ovom pronalasku koja je data čoveku ili drugoj životinj u jednoj ili u podeljenim dozama može da bude u količinama, na primer, od 0,01 do 50 mg/kg telesne težine Ili više obično od 0,1 do 25 mg/kg telesne težine Jedinjenja pojedinačne doze mogu da sadrže takve količine ili njihove višestruke podkoličine da nadoknade dnevnu dozu Generalno, režimi lečenja prema ovom pronalasku sadrže primenu pacijentu kome je potrebno takve terapije od oko 10 mg do oko 1000 mg jedinjenja ovog pronalaska na dan u jednostrukoj dozi ili u višestrukim dozama.[0111]Jedinjenja prema ovde opisanim formulama mogu, na primer, da se administriraju ubrizgavanjem, intravenozno, mtraarterijski. potkožno, intraperitonealno, intramuslukarlno, ili potkožno; ili oralno, bukalno, nazalno, transmukozalno. topikalno. u oftalmološkom preparatu, ili inhaliranjem, doze koje se kreće od oko 0 1 do oko 500 mg/kg telesne težine, alternativno između 1 mg i 1000 mg/doze. svaka 4 do 120 sati, ili prema zahtevima određenog leka. Ove metode razmatraju davanje delotvorne količine leka jedinjenja ili supstance jedinjenja da se dostigne željeno li navedeno dejstvo. Obično, farmaceutska jedinjenja prema ovom pronalasku će se primeniti od oko 1 do oko 6 puta dnevno ili alternativno, kao kontrinualna infuzija Takva primena može da se koristi kao hronična ili akutna terapija. Količina aktivnog sastojka koja može da se kombinuje sa farmaceutskim ekscipijentima ili nosačima da se proizvede jedan oblik doze će se razlikovati zavisno od stanja koje se leči i određenog načina primene leka. Uobičajen preparat će sadržati od oko 5% do oko 95% aktivnog jedinjenja ((w/w)masenog procenta). Obično, takvi preparati mogu sadržati od oko 20% do oko 80% aktivnog jedinjenja.
[0112]Niže ili više doze od onih koje su gore navedene mogu biti potrebne. Specifični režimi doze i terapije za svakog specifičnog subjekta će zavisiti od raznovrsnih faktora, uključujući aktivnost specifičnog korišćenog jedinjenja, starosnu dob, telesnu težinu, opšte zdravstveno stanje, pol, dijetu, vreme primene, brzinu izlučivanja, kombinaciju leka, ozbiljnost i tok bolesti, stanje ili simptome, pacijentov odnos prema bolesti, stanju ili simptomima, i procenu nadležnog lekara.
[0113]Posle poboljšanja pacijentovog stanja, doza za održavanje jedinjenja, supstance jedinjenja ili kombinacije iz ovog pronalaska može da se primenjuje, ako je potrebno Shodno tome, doza ili frekvencija primene, ili oba, mogu da se smanje, kao funkcija simptoma, do nivoa na kom se poboljšano stanje zadržava kada su simptomi ublaženi do željenog nivoa Pacijent može. međutim, da zahteva lečenje sa prekidom na dugoročnoj bazi posle ponovne pojave simptoma bolesti
PRIMERI
[0114]Jedinjenja i postupci prema ovom pronalasku će se bolje razumeti u vezi sa sledećim primerima, koji su uzeti samo kao ilustracija a ne i za ograničenje obima ovog pronalaska Različite promene i izmene na opisanim izvođenjima će biti očigledne stručnjaku ovoj oblasti i takve promene i modifikacije uključujući, bez ograničenja, one koje se odnose na hemijske strukture, supstituente, derivate, formulacije, i/ili postupke prema ovom pronalasku mogu da se naprave bez udaljavanja od duha ovog pronalaska i obima pridodatih patentnih zahteva.
[0115]Sinteza Jedinjenja 1 i njihove soli metansulfonata. natrijuma, kalijuma i holina se tlustruje na šemama ispod
intermedijar 107-1 ili 107-2 može da se pripremi reagovanjem 106 sa bilo R-2-1 ili R-2-2, respektivno Šeme sinteze za sintezu u R-2-1 i R-2-2 su ilustrovane dole:
Ili alternativnim postupkom: tntermedijar 108-1 i 108-2 može da se prirpemi reakcijom spajanja 107-1 ili 107-2 sa bilo R-3-1 ili R-3-2, gde R-3-1 i R-3-2 može da se pripremi priprema u skladu sa sledećom šemom.
PRIMER 1: Priprema N-hidroksi-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-il)-4-morfolinotieno[3,2-d]pirimidin-6-
il)metil)(metil)amino)pirimidin-5-karboksamid (Jedinjenje 1)
Korak a: (Z)-etil-2-(etoksimetil)-3-metoksiakrilat (Jedinjenje 202)
[0116]Natrijum (40,9 g, 1.78 mol) je dodato u etanol (750 mL) u delovima pažljivo i rastvor je koncentrovan da da NaOEt prah pošto nestane sav natrijum metal. Tokom mešanja, heksan (1.0 L) je dodat i mešavina je ohlađena ledenom vodenom kupkom. Mešavina 201 (130 g, 0,89 mol) i etil format (131 g, 1 78 mol) je dodata ukapavanjem na 0-5°C. Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći Dimetil sulfat (224 g, 1,78 mol) je dodat ukapavanjem uz hlađenje kupkom od ledene vode. Dobijena mešavina je zagrejana na 50°C tokom 2 h U mešavinu je dodat tnetilamonijak hlorid (122 g) i natrijum hidroksid (20 g) Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata i filtrira. Filtrat je opran vodom i osušen iznad Na2SC>4. Koncentrovan je da se dobije jedinjenje navedeno u naslovu (140 g, 37%) kao bezbojno ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.Korak b:Etil 2-okso-1,2,3,4-tetrahidropirirnidin-5-karboksilat (Jedinjenje 203)
[0117]Mešavina jedinjenja 202 (140 g, 0 745 mol), uree (40,0 g, 0,697 mol), i koncentrovane hlorovodonične kiseline (34 mL) u etanolu (500 mL) je zagrejana na refluksu tokom noći. Posle isparavanja -50% zapremine reakcije, dobijena kao rezultat suspenzija je filtrirana, oprana malom količinom etanola, i osušena da da jedinjenje 203 (47 g, 37%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: 171 [M+1]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3):S 1,19 (t,J=7,2 Hz , 3H), 3 92 (s. 2H). 4.08 (q,J= 7,2 Hz, 2H), 7,0 (s, 1H), 7,08 (d, J = 6,0 Hz , 1H), 8,83 (d, br,J=4.8 Hz. 1H)
Korakc: Etil 2-okso-1,2-dihidropirimidin-5-karboksilat (Jedinjenje 204)
[0118]Rastvoru jedinjenja 203 (47 g, 280 mmol) u sircetnoj kiselini (500 mL) je dodat bromin (49,0 g, 307 mmol). Mešavina je zagrejana na refluksu tokom 2 h, ohlađena na sobnoj temperaturi, još ohlađena na 0-5°C i filtrirana da se dobije jedinjenje prema naslovu 204 kao žuta čvrsta supstanca (38 g. 54%) LCMS: 169 [M+1]+<i>H NMR (400 MHz, D20):8 1.28 (t,J =7,2 Hz , 3H). 4,32 (q,J= 7,2Hz , 2H), 9,00 (br, s, 2H).
Korak d:Etil 2-hloropirimidin-5-karboksilat (Jedinjenje R-2-1)
[0119]Mešavina jedinjenja 204 (38,0 g, 153 mmol) i fosforil tnhlorida (300 mL) i N.N-dimetilanilina (3 mL) je zagrejana na refluksu tokom 2 sata, ohlađena na sobnu temperaturu i koncentrovana. Ostatak je ugašen pažljivo ledenom vodom, podešena je pH vrednost na 7-8 sa natrijum karbonatom i ekstrahovana sa EtOAc Kombinovane organske materije su oprane ledenom vodom i slanim rastvorom, osušeni iznad Na2S04, ispareni, i prečišćeni hromatografijom u koloni (isprani sa EtOAc/heksanima, 10%) da se dobije jedinjenje R-2-1 (15 g, 52%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS; 187 [M+l]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCI3) 5 1 36 (t.J- 7.5 Hz , 3H), 4.39 <q,J= 7 5 Hz. 2H). 9.08 (s, 2H)
Korake: Natrijum (Z)-2-(dimetoksimetil)-3-metoksi-3-oksoprop-1-en-1-olat (Jedinjenje 206)
[0120]Mešavina NaH (27 g. 60% u mineralnom ulju, 0.675mol) i anhidrovanog 1,2-đimetoksietana (300 mL) je zagrejana na 40-50 °C i metil 3,3-dimetoksi propionat (205) (100 g, 0,675 mol) je dodat ukapavanjem. Dobijena mešavina je mešana tokom 0,5 h i anhidrovani metil format (81 g, 1,35 mol) je dodat ukapavanjem na 40-50 °C. Dobijena mešavina je mešana na 40-50 °C (unutrašnja temperatura) tokom 2 sata pre nego što je ohlađena na 0<D>C Reakciona mešavina je zatim ostavljena da se zagreje do 25 °C i mešana je tokom noći. Et20 (150 mL) je dodata i mešana tokom 30 min Dobijena suspenzija je filtrirana. Čvrsta supstanca je oprana Et20 (700 mL) i prikupljena i osušena da bi se dobilo jedinjenje prema naslovu 206 (82 g, 61%) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 130 8 [M+1j<+><1>HNMR (400 MHz, CD30D);o 3.36 (s, 6H), 3.60 (s, 3H), 5.34 (s, 1H), 8.92 (s, 1H).
Korakf: 2-amino-pirimidin-5-karboksilna kiselina metil estar (Jedinjenje 207)
[0121]Mešavina jedinjenja guanidin hidrohlorida (42,2 g, 0,44 mol) u DMF (300 mL) je dodata jedinjenju 206 (80 g, 0,40 mol) Dobijena mešavina je zagrejana na 100 °C tokom 1 sat Reakciona mešavina je filtrirana pre nego što je ohlađena Filtrirana pogača je oprana sa 50 mL DMF-a i kombinovani filtrat je koncentrovan da ostavi ostatak koji je držan u suspenziji u hladnom EtOH i opran hladnim EtOH (50 mL) da se dobije jedinjenje 207 (38 g, 61,5%) kao žuta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 154,2 [M+1]+. 195,1[M+42]+ 1|H NMR (400 MHz, CD30D):Ć 3,88 (s. 3H), 8.77 (s, 2H).
Korak g:Metil 2-hloropirimidin-5-karboksilat (Jedinjenje R-2-2)
[0122]Jedinjenje 207 (7 g. 0,046 mol) je dodato u mešavinu koncentrovane hlorovodonične kiseline (15,2 mL) i CH2CI2(60 mL). Posle hlađenja, ZnCl2(18,6 g. 0,138 mol) je dodat na 15-20 °C Mešavina je mešana na 15-20<D>C za 0,5 h i ohlađen do 5-10°C NaN02 (9,5 g, 0,138 mol) je dodat u delovima uz održavanje unutrašnje temperature 5-10 °C. Reakcija je nastavljenatokom - 2 sata, reakciona mešavina je sipana u ledeno hladnu vodu (50 mL). Organski sloj Organski sloj je odvojen, i vodena faza je ekstrahovana sa CH2CI2(30 mL*2) Kombinovani organski ekstrakti su koncentrovani da se dobije sirovi proizvod (4,2 g). Sirovo jedinjenje je držano u suspenziji heksana (20 mL), zagrejano na 60 °C tokom 30 minuta i filtrirano. Filtrat je koncentrovan da se dobije jedinjenje prema naslovu R-2-2 (3,5 g, 44,4 %) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 214.1[M+42]<+><1>HNMR (400 MHz, CDCl3):6 4.00 (s, 3H), 9.15 (s, 2H).
Korak h:5-bromo-2-metoksipiridin (Jedinjenje 303)
[0123]Rastvor 2-metoksi-piridina (100 g, 0,92 mol), NBS (180 g, 1,0 mol) u acetonitrilu (1,0 L) je mešan na refluksu tokom 21 h. TLC je pokazao da je reakcija bila završena. Reakciona mešavina je zatim ohlađena do sobne temperature i koncentrovana -900 ml rastvaraća je prikupljeno. Dobijena suspenzija je filtrirana i oprana sa n-heksanom (-400 mL) Filtrat je koncentrovan ponovo da se dobije sirovi proizvod Sirovi proizvod je destilovan pod smanjenim pritiskom (30"C/-0.3 mmHg) da se dobije jedinjenje prema naslovu kao bistro ulje (146 g, prinos 84%). LCMS (m/z): 190,0 [M+1]<+><1>H NMR (400
MHz, CDCl3):S3.90 (s, 3H), 6.65 (d,J= 8.8 Hz.1H), 7.62 (dd,J= 8 8 Hz. 2 4Hz,1H). 8.19 (s, 1H).
Koraki: 6-metoksipindin-3-ilboronska kiselina (R-3-1);
[0124]U rastvor jedinjenja 303 (20 g, 0,11 mol) u anhidrovanom THF (180 ml) je dodat ukapavanjem n-BuLi (59 mL, 2M u THF) na -78 "C, dobijena mešavina je mešana tokom 1 h Triizopropil borat (37mL) je dodat na -78 °C i rekaciona mešavina je zagrejana do sobne temperature i nastavljeno je mešanje tokom noći. TLC (heksani/etil acetat -5:1) je pokazao reakciju završenom Mešavini je podešena pH vrednost na 3-4 sa 4N HCI (90 ml). Talog je prikupljen filtriranjem da se dobije sirovo jedinjenje R-3-1 (21 g, 128%). Sirovo jedinjenje R-3-1 (21g) je rastovreno u vodi (200 ml) i rastvoru je podešena pH vrednost na 8-9 sa koncentrovanim rastvorom amonijaka, talog je prikupljen filtriranjem da se dobije jedinjenjae prema naslovu u čistom obliku R-3-1 kao bela čvrsta supstanca (11 g, 67%) LCMS (m/z) 154,1 [M+1]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-đe) 6 3 86 (s, 3H). 6 76 (d.J =8 4 Hz. 1H). 7 99 (dd,J = 8 4Hz, 2.0 Hz, 1H), 8 05 (br, 2H), 8.52 (d,J = 2 0 Hz,1H).
Korak j:2-metoksi-5-(4,4,5,5,-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pindin (Jedinjenje R-3-2)
[0125]Mešavina jedinjenja 303 (55 g, 0,29 mol) 4,4,4'.4',5,5,5',5'-oktametil -2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (90 g, 0.35 mol), kalijum acetat (57 g. 0,58 mol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(ll) filorid (2,2 g, 3 mmol) u anhidrovanom dioksanu (500 mL) je zagrejan na 108"C pod atmosferom N2 tokom noći Reakciona mešavina je koncentrovana i prečišćena hromatografijom u koloni eluiranom sa heksanim/etil acetatom da se dobije jedinjenje prema naslovu R-3-2 (58 g. 84 %)..<1>H NMR (400 MHz. DMSO-đe): 6 1.30 (s, 12H), 3.88 (s, 3H), 6,81 (d,J =8.0 Hz, 1H), 7 88 (dd,J =8 0 Hz. 2 0Hz, 1H), 8 41 (d,J= 2.0Hz, 1H)
Korakk: Tieno[3,2-d]pirimidin-2.4(1H,3H)-dion (Jedinjenje 102)
[0126] Postupak sa ureom:Mešavina metil 3-ammotiofen-2-karboksilata (101) (90,0 g, 573 mmol, 1,0 eq) i uree (277.6 g, 4,6 mol, 8,0 ekv ) je zagrejan na 190°C za 3-4 h i ohlađen na sobnoj temperaturi U reakcionu mešavinu je dodata voda NaOH (10%, 800 mL). Posle mešanja na temperaturi ambijenta tokom 1 sat, čvrsta supstanca je uklonjena filtriranjem. Filtrat je aciđifikovani sa HCI na pH 3-4, talogom stvorena čvrsta supstanca je prikupljena filtriranjem, oprana vodom i osušenain vacuoda se dobije proizvod željenog jedinjenja 102 kao beličasta čvrsta supstanca (87 g, 89%) m.p.:280-285<o>C. LCMS (m/z); 169,0 [M+1]+<1>H NMR (400 MHz,DMSO- đg) 6 6 92(d,J =5 2 Hz, 1H), 8.05 (d.J =5 2 Hz, 1H), 11.0-11 5 (br, 2H).
[0127] Postupak sa KOCN:U mešavinu 3-aminotiofen-2-karboksilata (101) (100,0 g, 636.9 mmol, 1,0 ekv ), sirćetne kiseline (705 mL) i vode (600 mL) je dodat rastvor kalijum cijanata (154,8 g. 1,91 mol, 3,0 eq) u vodi (326 mL) lagano tokom perioda od 1 h Dobijena mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 h, filtrirana i isprana vodom (500 mL). Pogačom je napunjen reaktor odgovarajuće veličine i 2 M vodenog rastvora natrijum hidroksida (1 65 L) je dodato, ova emulzija je mešana tokom 2 h i LCMS je potvrdio formiranje željenog proizvoda. Mešavina je ohlađena na 10°C i 3 M vodene hlorovodonične kiseline (1,29 L) je dodato sve dok pH = 5,0 - 6,0 Ova emulzija je filtrirana, isprana vodom (700 mL), i osušena u vakuumskoj rerni na 50°C tokom 24 h da se dobije jedinjenje 102 (100 g. 94%) kao beličasta čvrsta supstanca. LCMS (m/z): 169,1 [M+l]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-đr^.fi 6,92 (d,J" =5,2 Hz, 1H), 8,04 (d.J = 5,2 Hz, 1H), 11,14 (s, 1H), 11.51 (s, 1H).
Korak 1:2,4-dihlorotieno[3,2-d]pirimidin (Jedinjenje 103)
[0128]PFosforni oksihlorid {152 mL, 1,67 mol, 7,0 ekv) je dodat lagano u hladni rastvor jedinjenja 102 (40 g, 238 mmol, 1,0 ekv) i N.N-dimetilanilin (22,5 mL. 179 mmol. 0.75 ekv ) u acetonitrilu (250 mL) dok je temperatura održavana ispod 20"C. Mešavina je zagrejana na 85°C i mešana tokom 24 h Reakciona mešavina je ohlađena do 15°C. i zatim je sipana lagano na mešavinu leda i hladne vode (360 mL). Dobijena emulzija je filtrirana, isprana hladnom vodom (200 mL) Pogača je osušena u vakumskoj rerni na 40°C tokom 24 h da se dobije jedinjenje 103 (40,5 g, 83%) kao beličasta čvrsta supstanca. M.p.:245-250"C. LCMS (m/z): 205,0 [M+l]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6):S 7.75 (d,J =5.2 Hz, 1H), 8.71 (d,J= 5 2 Hz, 1H).
Korak m:(2-hloro-4-morfolinotieno[3,2-d]pirimidin (Jedinjenje 104)
[0129]U mešavinu jedinjenja 103 (34,2 g, 167 mmol, 1,0 ekv) i metanola (500 mL) je dodat morfolin (31,2 mL, 367 mmol, 2,2 ekv.) lagano Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Talog je prikupljen filtriranjem, opran metanolom i osušenin vacuoda se dobije jedinjenje željenog proizvoda 104 kao svetložuta čvrsta supstanca (39 g. 91%) M p.: 250-255°C LCMS (m/z): 256,0 [M+l]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-đe):6 3 76 (t.J= 5 2 Hz. 4H), 3 92(f. J=5 2 Hz 4H), 7 42 (d,J= 5.2 Hz, 1H), 8.32 (d,J=5.2 Hz, 1H).
Korak n:2-hloro-4-morfolinotieno[3,2-d]pirimidin-6-karbalđehid (Jedinjenje 105)
[0130]U suspenziju jedinjenja 104 (20 g, 78,4 mmol. 1,0 ekv) u THF (anhidrovani, 320 mL) na -78<X>je dodat n-BuLi (u heksanima, 2,4 M, 40,8 mL, 102 mmol, 1,3 ekv) lagano pod azotom. Dobijena emulzija je ostavljena da se zagreva do -60<C>C da se pretvori u bistar braon rastvor. Dobijena mešavina je ohlađena do -78°C i DMF (anhidrovanog, 9,1 mL, 118 mmol, 1,5 ekv.) je dodat polako Dobijeni rastvor je mešan na -78"C tokom 0,5 sati, zagrejan do 0°C tokom 1 h i sipan lagano u mešavinu vodenog HCI (0,25 M, 660 mL) i ledene vode (320 mL). Dobijena emulzija je mešana na 0-10°C tokom 0,5 h, filtrirana, isprana hladnom vodom i osušena uin vacuoda se dobije jedinjenje 105 kao žuta čvrsta supstanca (22 g, 98%). M p :260-265°C. LCMS (m/z): 284 0 [M+1]<+><1>H NMR (400 MHz, DMSO-de):6 3 77 (t,J=5.2 Hz, 4H), 3.96 (t,J=5.2 Hz, 4H), 8 30 (s, 1H), 10 21 (s. 1H)
Korak o:(2-hloro-4-morfolin-4-il-tieno[3.2-d]pirimidin-6-ilmetil)- metil-amin (Jedinjenje 106)
[0131]U rastvor jedinjenja105 (20,0 g, 70,4 mmol. 1,0 ekv) u metanolu (125 mL) je dodat rastvor metilamina u metanolu (27% v/v, 75 mL, 563.2 mmol ) pod atmosferom azota Reakciona mešavina je mešana na sobnoj sobnoj temperaturi tokom noći i rastvarač je uklonjenin vacuoda se dobije sirov proizvod u obliku čvrste supstance, koji je rastvoren u metanolu (550 mL) i THF (220 mL) pod nitrogenom. Natrijum borohidrid (8 g, 211, 2 mmol) je dodat u delovima i reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Reakciona mešavina je isparavanain vacuoi dodata je voda (300 mL). Vodena mešavina je ekstrahovana sa metilen hlorid i kombinovani ekstrakti su osušeni iznad Na2S04 i koncentrovani Ostatak je rastvoren u 6M HCI (230 mL) i mešan tokom 30 min Vodeni rastvor je opran sa metilen hloridom tokom nekoliko puta, i podešen na pH 9-10 sa NaOH (4N) Nataložena čvrsta supstanca je prikupljena filtriranjem i osušena (60"C, 6 h) sa se dobije svetio žuta čvrsta supstanca (18 g, 85%). M.p.: 240-245°C LCMS (m/z); 299 [M+l]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6):5 2.32 (s, 3H), 3.74 (t,J =5.2 Hz. 4H), 3.88 (t,J =5 2 Hz, 4H), 3 96 (s, 2H), 7.24 (s, 1H).
Korakp(a): 2-[(2-hloro-4-morfolin-4-il-tieno[3.2-d]pirimidin-6-ilmetil)-metil-amino]-pirimidin-5-karboksilna kiselina etil estar (Jedinjenje 107-1)
[0132]U mešavinu 105 (10 g, 33,6 mmol) i R-2-1 (6,8 g, 36,4 mmol) u CH3CN (400 mL) na sobnoj temperaturi je dodat diizopropiletilamm (220 mL, 1,26 mol). Dobijena mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Mešavina je zatim isparavana i posle toga je usledilo dodavanje metilen hlorida (300 mL). Organska faza je oprana vodom, osušena iznad Na2S04i koncentrovana u vakumu da ostavi ostatak U ostatak je dodat etil acetat i dobijena mešavina je mešana na temperaturi led/vodene kupke tokom 50 min. Dobijena čvrsta supstanca je prikupljena filtriranjem da bi dala proizvod prema naslovu 107-1 kao belu čvrstu supstancu (10,6 g. 70%) LCMS. 449 [M + 1]+.<1>H NMR(400 MHz, DMSO-đe):8 1.30 (t,J= 7.2 Hz, 3H), 3.25 (s. 3H), 3.71 (t,J= 5.2 Hz. 4H). 3.83(f. J=4.8 Hz. 4H), 4.29 (m, 2H), 5.21 (s, 2H), 7.39 (s, 1H), 8.87 (s, 2H).Korak p(b):2-[(2-hloro-4-morfolm-4-il-tieno[3,2-d]pirimidin-6-ilmetil)-metil-amino] -pirimidin-5-karboksilna kiselina metil estar (Jedinjenje 107-2)
[0133]Mešavina jedinjenja 106 (25 g, 84 mmol). CH3CN (500 mL) i R-2-2 (16 g, 92 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi Diizopropiletilamin (DIPEA) (500 mL. 2,9 mol) je dodat Rastvor je mešan tokom noći i isparavam Pošto je dodat metilen hlorid (500 mL). organska faza je oprana vodom, osušena sa Na2S04i koncentrovana in vacuo. U ostatak je dodat etil acetat (200 mL) i mešavina je mešana u ledu/vodenoj kupki tokom 50 min. Proizvod iz naslova je prikupljen kao bela čvrsta supstanca (29,4 g, 81%). LCMS (m/z): 435,2 [M+l]+<1>HNMR (400 MHz, DMSO-đe): 3.25 (s, 3H), 3 71 (t,J =5.2 Hz, 4H), 3.82-3.84 (m, 7H), 5.21 (s, 2H), 7.39 (s, 1H), 8.87 (s. 2H)
Korak q (a):Etil-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-il)-4-morfolinotieno [3,2-d]pirimidin- 6-il) metil)
(metil)ammo)pirimidin-5-karboksilat (Jedinjenje 108-1)
[0134]Metod A: Mešavina jedinjenja 107-1 (12 g, 26,7 mmol), R-3-1 (4,9 g, 32 mmol), NaHC03(6,7 g, 80.1 mmol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(ll) hlorida (188 mg, 0,267 mmol) u mešavini rastvorenog toluena (80 ml), etanola (50 ml) i voda (10 ml) je zagrejan na 108°C tokom 4,5 h pod atmosferom N2TLC pokazao je da je reakcija završena. Reakciona mešavina je zatim ohlađena do sobne temperature i dodata je voda (20 ml). Dobijena čvrsta supstanca je filtrirana i držana u suspenziji i etanolu (100 mL). Suspenzija je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 sata1filtrirana. Prikupljena čvrsta supstanca je oprana sa etanolom i osušenain vacuoda se dobije jedinjenje prema naslovu 108 -1 kao bela čvrsta supstanca (10g, 72%)
[0135]Metod B: Mešavina jedinjenja 107-1 (1.5 g, 3,34 mmol). R-3-2 (1.6 g. 6.68 mmol). NaHC03(0,84 g.10,0 mmol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(ll) hlorida (118 mg, 0,167 mmol) u mešavini rastvaraća toluena (24 ml), etanola (15 ml) i voda (3 ml) je zagrejan na 108"C tokom pod atmosferom N2. Reakciona mešavina je podeljena između dihlorometana i vode Organski sloj je odvojen, opran slanim rastvorom, osušen iznad Na2S04, filtriran i isparavanin vacuoda bi dao ostatak koji je prečišćen hromatografijom u stubu eluiran sa heksanima/etil acetatom da se dobije jedinjenje 108-1 kao bela čvrsta supstanca (1,7 g, 98 %). [0136Jm.p.198-202X. LCMS 522,30 [M+1]<+><1>H NMR(400MHz, DMSO-đe) 6 1 31( t, J=7.2 Hz, 3H). 3.28 (s, 3H), 3.76 (t,J=4.4 Hz, 4H), 3.93 (t,J=4 4 Hz. 4H), 3 94 (s, 3H), 4 30 (q,J= 7.2 Hz, 2H), 5.24 (s, 2H), 6.92 (d,J - 8.8Hz,
1H), 7.47 (s, 1H), 8.57 (dd,J= 8.8 Hz, 2.0Hz, 1H), 8.88 (s, 2H), 9.15 (d, J = 2.0 Hz. 1H)
Korak q(b):Metii-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-il)-4-morfolinotieno [3,2-d]pirimidin- -6-il) meti!)
(met]l)amino)pinmidin~5-karboksilat (Jedinjenje 108-2)
[0137]U mešavinu jedinjenja 107-2 (20 g, 46.0 mmol), B-3-1 (9,2 g, 60.2 mmol. 1,3 ekv ) u dioksanu (540 mL) na sobnoj temperaturi je dodata čvrsta supstanca NaHC03(11,6 g, 138,1 mmol, 3 ekv.) posle čega je usledilo dodavanje vode (40 mL) Ova dobijena mešavina je degasovana provlačenjem N2kroz površinu rastvora Bis(trifenilfosfin) paladijum(ll) hlorid (323 mg, 0,46 mmol, 0,01ekv) je zatim dodat i dobijena mešavina je zagrejana na 108<U>C tokom 15 h TLC i LCMS pokazao da je reakcija završena. Reakciona mešavina je filtrirana kroz Celite dok je i dalje bila vruća (>90°C) i isprana sa dioksanom (70 mL). Filtrat je ohlađen postepeno do sobne temperature i beli fini kristali su formirani tokom perioda hlađenja. Suspenzija je filtrirana i oprana dioksanom (80 mL) da se dobije jedinjenje prema naslovu 108-2 kao bela čvrsta supstanca (18g, 78%). LCMS (m/z): 508,3 [M+l]<+><1>H NMR (400 MHz, DMSO-đQ) :d3.28 (s, 3H), 3.76(f. J=4.8 Hz, 4H), 3 82 (s, 3H); 3.92 (m, 4H), 3.93 (s, 3H), 5 20 (s, 2H), 6.91 (d,J = 8.8Hz,1H), 7.47 (s, 1H), 8.57 (dd, J= 8 8Hz, 2 4Hz. 1H). 8 88 (s, 2H). 9 15 (d,J - 2.0Hz.1H).
Korakr: N-hidroksi-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-yl)-4-morfolinotieno[3.2-d] pirimidin-6-il)metil)(metil)amino)pirimidin-5-karboksamid (Jedinjenje 1) Priprema rastvora hidroksilamin metanola
[0138]Mešavina NH2OH.HCI (80 g, 1,12 mol) u MeOH (400 mL) je zagrejana na 60-65 "C tokom 1h da bi se formirao bistar rastvor Zatim je ohlađena u kupki ledene-vode U hladnu mešavinu je dodat rastvor KOH (96 g, 1,68 mol) u MeOH (240 mL) ukapavan dok je održavana reakciona temperatura na 0-10 °C Dobijena mešavina je mešana na 0 °C tokom 30 minuta i zatim je filtrirana kroz točir sa konstantnim pritiskom napunjena anhidrovanim Na2SO0 (700 g). Filtrat je prikupljen pod ledenom-kupkom i čuvan u frižideru za buduću upotrebu.
Priprema Jedinjenja 1 iz jedinjenja 108-1
[0139]Jedinjenje 108-1 (10 g, 19 mmol) je držano u suspenziji u gornjem sveže pripremljenom rastvoru hidroksilamin metanola (1.79M, 350 ml) U ovu mešavinu je dodat dihlorometan (100 mL). Reakciona laboratorijska boca okruglog dna je zaptivena i mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h pre nego što je pretvorena u bistar rastvor Reakcioni rastvor je mešan dodatnih 9 sati 1 filtriran da ukloni bilo kakvu nerastvorljivu čvrstu supstancu. Filtrat je podešen na pH 6-7 uz dodavanje sirćetne kiseline da se dobije čvrsti talog. Čvrsta supstanca je prikupljena filtriranjem i oprana vodom i minimalnom količinom metanola, osušenain vacuona 60"C tokom 5 h da se dobije jedinjenje 1 kao bela čvrsta supstanca (9,2 g, 96%). m.p. 177-180<P>C. LCMS 509,3 [M + 1]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-đe):8 3.24 (s, 3H), 3 76 (t,J= 5 Hz, 4H), 3.92 (t.J =5 Hz. 4H), 3 92 (s. 3H), 5.20 (s, 2H), 6 90 (d,J =8.8 Hz, 1H), 7 44 (s, 1H), 8.57 (dd,J =8.8 Hz, 2.4Hz, 1H), 8 75 (s, 2H), 9.01 (s. 1H), 9 14 (d,J = 2.0Hz,1H), 11.08 (s, 1H).
Priprema Jedinjenja 1 iz jedinjenja 108-2
[0140]U suspenziju jedinjenja 108-2 (31 g, 61,1 mmol) u dihlorometanu (310 mL) na sobnoj temperaturi je dodat gornji sveže pripremljen rastvor hidroksilamin metanola (1.79 M, 744 ml) Reakciona laboratorijska boca okruglog dna je zaptivena i reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Reakciona mešavina je pretvorena u bistar rastvor Reakcioni rastvor je filtriran da ukloni bilo kakvu nerastvorljivu čvrstu supstancu U ovaj filtrat je zatim dodata voda (310 mL) i zatim nije bilo nikakve čvrste supstance formirane tokom dodavanja. Sirćetna kiselina (18,5 mL) je dodata da podesi pH na 10.20 (neprestano nadziran pomoću merača pH vrednosti) uz istovremeno mešanje. Nije bilo promene unutrašnje temperature tokom dodavanja sirćetne kiseline Dobijena reakciona mešavina je i dalje mešana još 4 h Postepeno je formirana bela čvrst supstanca Suspenzija je filtrirana i oprana minimalnom količinom metanola (100 mL x3) Prikupljena bela čvrsta supstanca je ponovo stavljena u suspenziju u metanolu (620 mL) i vodu (124 mL) da se formira suspenzija. U gornju suspenziju je dodata dodatna sirćetna kiselina (11 g) da se podesi pH do 5-6. Primećena je promena čvrstog oblika. Suspenzija je dodatno mešana još 2 sata i filtrirana kroz filter papir i oprana sa minimalnom količinom metanola (100 mL x 3) Prikupljena bela čvrsta supstanca je sušena u rerni (50°C) tokom 12 h da se dobije jedinjenje 1 prema naslovu kao bela čvrsta supstanca {23,6g, 76,0 %) m p : 255-259°C LCMS (m/z): 509,3 [M+1J+<1>H NMR (400 MHz, DMSO-đ6) o 3,24 (s, 3H), 3.76 (t,J =5,2 Hz, 4H), 3 92 (t,J
= 5,2Hz, 4H), 3.92 (s, 3H), 5,20 (s, 2H), 6.91 (d, J = 8 4Hz, 1H), 7 45 (s. 1H), 8 57 (dd, J = 8.4Hz, 2.4Hz.
1H), 8.75 (s. 2H), 9.07 {s. 1H). 9 14 (d.J = 2 4Hz,1H), 11 14 (s. 1H)
PRIMER2:Priprema N-htdroksi-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-il)-4-morfolinotieno[3,2-d] pirimidin-6-
il)metil)(metil)amino)pirimidin-5-karboksamid metansulfonata (Jedinjenje 2)
[0141]Metod A: U mešavinu Jedinjenja 1 (300 mg, 0,59 mmol) i MeOH/Et20 (3/1, 40 mL) je dodat rastvor metanesulfonske kiseline (114 mg, 1,18 mmol) u MeOH (3 mL) na 0°C Dobijena mešavina je mešana na 0°C tokom 3 h. Talog je prikupljen filtriranjem i opran sa Et20 da se dobije Jedinjenje 2 kao bela čvrsta supstanca (260 mg, 73%).
[0142]Metod B: Suspenziji Jedinjenja 1 (1,5 g, 2 95 mmol) u dihlorometanu/MeOH (40 mL/10 mL) je dodata metansulfonska kiselina (341 mg, 3,55 mmol, u 2 mL MeOH) na sobnoj temperaturi (15°C) da se dobije bistar rastvor. Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći Reakciona mešavina je i dalje bila bistra. Etil acetat (40mL) je dodat u mešavinu i nastavljeno je mešanje tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Dobijeni talog je prikupljen filtriranjem filtriranjem da se dobije Jedinjenje 2 kao bela čvrsta supstanca (1,45g, 83%)
[0143]m.p.: 179-185<D>C. LCMS: 509.3 [M+1]+<1>H NMR (400 MHz, DMSO-đ6): 6 2.35 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 3.78 (t,J= 9.6 Hz, 4H), 3,95 (s, 3H), 4.03 (t,J= 9.2 Hz, 4H), 5 24 (s, 2H), 6.99 {d,J= 8.8 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H),8 54(dd,J =8 8Hz, 2 4 Hz, 1H),8.76(s. 2H), 9.12 (d,J = 2.4Hz, 1H), 11 11 (br, 1H).
PRIMER3:Priprema N-hidroksi-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-il)-4-morfolinotieno[3,2-d]pirimidin-6-
il)metil)(metil)amino)pirimidin-5-karboksamid natrijumso(Jedinjenje3)
[0144]Suspenziji Jedinjenja 1 (300 mg. 0,59 mmol) u metanolu (30 mL) na 0°C je dođatlagano t-BuONa (85 mg, 0.88 mmol). Dobijena mešavina je zagrejana na sobnu temperaturu i nstavljeno je mešanje tokom 2 h. Reakciona mešavina je koncentrovana i ostatak je triturisan i opran etanolom posle čega je usledilo filtriranje da se dobije Jedinjenje 3 kao bela čversta supstanca (230 mg, 73%) m.p.: 178-183 °C LCMS: 509,3 [M+1]<+><1>H NMR (400 MHz, DMSO-đe) 63.17 (s, 3H), 3 75 (s, 4H),3.92 (S,7H).5.16 (s, 2H), 6.90 (d, J = 8 4 Hz, 1H). 7.42 (s.1H).8.57 (d,J =8.0 Hz, 1H), 8.65 (s, 2H). 9.14 (s, 1H).
PRIMER 4: Priprema N-hidroksi-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-il)-4-morfolinotieno[3,2-d] pirimidin-6-
il)metil)(metil)amino)pirimidin-5-karboksamid kalijum soli (Jedinjenje 4)
[0145]Mešavini Jedinjenja 1 (400 mg, 0,78 mmol) u metanolu (50 mL) je dodat t-BuOK (132 mg, 1,17 mmol) na 0°C pod N2. Mešavina je mešana na 0"C tokom 1h i nastavljeno je mešanje na sobnoj temperaturi tokom 1,5 h. Nerastovrljiva čvrsta supstanca je uklonjena filtriranjem i filtrat je ohlađen do - 20°C. Et20 (100 mL) je dodat u filtrat. Dobijeni rastvor je mešan na -20°C tokom 1 sat. Heksani (70 mL) su dodati i mešavina je mešana neprestano na -20°C tokom 2 h Čvrsta supstanca je prikupljena filtriranjem i osušenain vacuoda se dobije Jedinjenje 4 kao bela čvrsta supstanca (150 mg, 35%). m.p.: 174-179°C. LCMS: 509 3[M+1]+<1>H NMR (400 MHz, DMSO-đ6): 6 3.16 (s, 3H), 3 74-3.76 (m. 4H), 3.90-3 93 (m, 7H), 5.15 (s, 2H), 6 90 (d,J= 8.4Hz, 1H), 7 43 (s, 1H), 8.39 (br, 1H), 8 58 (d.J= 8.8Hz, 1H), 8 62 (s, 2H), 9.15 (s, 1H).
PRIMER 5: Priprema N-hidroksi-2-({{2-(6-metoksipiridin-3-il)-4-morfolinotieno[3,2-d]pirimidin-6-
il)metil)(metil)amino)pirimidin-5-karboksamid holinso(Jedinjenje5)
[0146]Rastvoru jedinjenja 1 (200 mg. 0,39 mmol) u DCM/MeOH (60 mL/12 mL) je dodat holin hidroksid (106 mg, 0,39 mmol, 45% u MeOH) Mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata i zatim je koncentrovana da se ukoni~30 mL rastvaraća Etil acetat (60 mL) je dodat i mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Posle male količine formiranog taloga, mešavina je koncentrovana da se ukloni -~ 40 mL rastvaraća i dodatni etil acetat (60 mL) je dodat Mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h i filtrirana da se dobije Jedinjenje 5 kao bela čvrsta supstanca (180 mg, 76%). m.p.: 181-185°C. LCMS: 509,3[M+1]<+><1>H NMR (400MHz. DMSO-ćq).6 3 11 (s, 9H). 3.17 (s, 3H), 3.40 (t,J =4.8Hz, 2H), 3.75 (t,J= 4 8Hz. 4H), 3 84 (br, 2H), 3 90-3 93 (m, 7H), 5.15 (s, 2H), 6.89 (d,J =8.8Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 8.57 (dd,J = 8.8Hz,2 4Hz, 1H), 8.64 (s, 2H), 9,14 (d,J =2.0Hz, 1H).
PRIMER 6: Priprema N-hidroksi-2-(((2-(6-metoksipiridin-3-il)-4-morfolinotieno[3,2-d] pirimidin-6-
il)metil)(metil)amino)pirimidin-5-karboksamid sulfata (Jedinjenje 6)
[0147]Rastvoru jedinjenja 1 (200 mg. 0,39 mmol) u DCM/MeOH (30 mL/7,5 mL) je dodata sumporna kiselina (77 mg, 0,79 mmol, u 1 mL MeOH) da se formira bistar rastvor Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Formiran je talog i dodat je tert-butil metil etar (60 mL). Dobijena mešavina je i dalje mešana tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Talog je prikupljen filtriranjem da se dobije Jedinjenje 6 kao bela čvrsta supstanca (180 mg, 76%) M.p.: 243-246°C. LCMS: 509,3 [M+1]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 3.26 (s . 3H), 3.78 (t. J = 4 8 Hz, 4H), 3 96 (s, 3H), 4.03 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 5.24 (s, 3H), 6 98 (d, J = 8.4 Hz, 1H). 7.50 (s , 1H). 8 54 (dd, J = 8 8 Hz, 2 4 Hz, 1H), 8.76 (S. 2H), 9.12 (d, J - 2 0 Hz, 1H), 11.06 (br, 1H).
Primer 7: Ogledza aktivnostPI3kinaze
[0148]Sledeći ogledi su korišćeni da se odredi sposobnost Jedinjenja 1 da inhibira različite izoforme i mutante PI3K
PI3Krx
[0149]PI3Ka aktivnost je izmerena korišćenjem ogleda ADP-Glo lummescentne kinaze. P13Ka, kompleks N-terminalnog GST-om označenog rekombinantnog ćelom dužinom ljudskog p110ai neoznačenog rekombinantnog ćelom dužinom ljudskog p85o.su zajedno ispoljeni u baculovirusom inficiranom sistemu ispoljavanja Sf9 ćelije (GenBank pristupni br za p110a, U79143; za p85a, XM_043865). Proteini su prečišćeni afinitetnom hromatografijom iz jednog koraka korišćenjem glutation-agaroze. Konkurentni ogled je izveden da se izmeri količina ADP koja je generisana iz ATPu prisustvu prečišćenog rekombinantnog PI3K a,(p110a/p85u) i PIP2 PI3K« je inkubirana sa 20 uM P1P2 supstrata u puferskom sredstvu reakcije (50 mM HEPES, pH 7,4, 150 mM NaCI, 5 mM MgCI2, 3 uM Naortovanadat, 1 mM DTT, 10 uM ultra čist ATP i 0.5% DMSO) tokom 30 minuta na 30<:>,C ADP je generisan u reakciji i zatim je izmeren pomoću ADP-Glo ogleda Ogled je izveden u dva koraka, prvo jednaka zapremina ADP-GLO™ Reagensa (Promega) je dodat da se završi reakcija kinaze i da se isprazni preostali ATP U drugom koraku, dodat je reagens za detekciju kinaze, koji istovremeno pretvara ADP u ATP. Novo sintetisan ATP je izmeren korišćenjem spojene reakcije luciferaze/luciferina. IC50je određen za Jedinjenje 1 u ovom ogledu je bio manji od 100 nM Sposobnost Jedinjenja 1 da inhibira PI3K a mutante H1047R i E545K je takođe određena korišćenjem opšteg gore opisanog postupka. IC50određen za oba mutanta je bio manji od 100 nm
PI3KB
[0151]Aktivnost PI3Kpje izmerena korišćenjem ogleda sa tranferom energije pomoću vremenski rešene fluorescencije (TR-FRET) korišćenjem tehnologije homogene vremenski rešene fluorescencije. P13Kp kompleks N-terminalnog histidmom označenog rekombinantnog ćelom dužinom ljudskog p110[i i neoznačenog rekombinantnog ćelom dužinom ljudskog p85</ su zajedno ispoljeni u Sf21 sistemu ispoljavanja ćelije inficiranom Baculovirusom (GenBank pristupni br za p110|i, NM_006219, za p85u, XM_043865). Proteini su prečišćeni afinitetnom hromatografijom iz jednog koraka korišćenjem glutation-agaroze. Konkurentni ogled je izveden da se izmeri količina PIP3 koja je generisana iz PIP2 u prisustvu prečišćenog rekombinantnog PI3Kbeta(p110(ip85a. PI3Kf3je inkubiran sa 10 mM PIP2 supstrata u puferskom sredstvu reakcije (20 mM HEPES, pH 7,5, 10 mM NaCI 4 mM MgCl2, 2 mM DTT, 10 mM ATP i 1% DMSO) tokom 30 minuta na 30"C Proizvod reakcije je bio zatim pomešan sa PIP3 proteinskim detektorom, europijumom-označeno antitelo, biotinom-označena PIP3 proba i alofikocijaninom-označen Streptavidin. Kompleks senzora se formira da se generiše stabilan TR-FRET signal u reakcionoj mešavini. Intenzitet signala se smanjuje kako se biotinom označena sonda vezuje na PIP3 detektor je zamenjen sa PIP3 koji je proizveden enzimskom aktivnošću nevezane biotinom označene PIP3 sonde u mešavini se povećava. TR-FRET signal je određen korišćenjem čitača mikroploče sa pozadinskim oduzimanjem
[0152]IC50je određen za Jedinjenje 1 u ovom ogledu je bio između 100 i 1000 nM PI3K6
[0153]Aktivnost PI3KSje izmerena korišćenjem ogleda sa fluorescentnom polarizacijom. P13K8 kompleks N-terminalnog histidinom označenog rekombinantnog ćelom dužinom ljudskog p1106 r neoznačeni rekombinantni ćelom dužinom ljudski p85a su zajedno ispoljeni u Bacilovirusom inficiranog Sf9 sistem ispoljavanja ćelije. (GenBank pristupni br za p1106. NM_005026). Proteini su prečišćeni afinitetnom hromatografijom iz jednog koraka korišćenjem glutation-agaroze Konkurentni ogled je izveden da se izmeri količina PIP3 koja je generisana iz PIP2 u prisustvu prečišćenog rekombinantnog PI3K6(p1106p85a). PI3K5 je inkubiran sa 10 pM PIP2 podloga u reakcionom puferskom sredstvu (20 mM HEPES, (pH 7,5), 10 mM NaCI, 4 mM MgCI2, 2 mM DTT, 10 pM ATP i 1% DMSO) tokom 1 sat na 30°C. Reakcioni proizvod je zatim pomešan sa PIP3 detektorskim proteinom i fluorescentnom PIP3 sondom. Vrednosti polarizacije (mP) se smanjuju kako se fluorescentna sonda vezuje na PIP3 detektor je zamenjen sa PIP3, on koji proizvede enzimsku aktivnost i količinu nevezane fluorescentne sonde u mešavini se povećava. Vrednost stepenia polarizacije (mP) je određena korišćenjem čitača mikroploča sa pozadinskim oduzimanjem.
[0154]IC50je određen za Jedinjenje 1 u ovom ogledu je bio manji od 100 nM
PI3K<y>
[0155]Aktivnost PI3Kyje izmerena korišćenjem ogleda sa tranferom energije pomoću vremenski rešene fluorescencije (TR-FRET) korišćenjem tehnologije homogene vremenski rešene fluorescencije. N-terminalni histidinom označen ljudski P13K5je ispoljen u Baculovirusom inficiranog sistema ispoljavanja ćelije Sf9. (GenBank pristup AF327656) Proteini su prečišćeni afinitetnom hromatografijom iz jednog koraka korišćenjem glutation-agaroze. Konkurentni ogled je izveden da se izmeri količina PIP3 koja je generisana iz PIP2 u prisustvu prečišćenog rekombinantnog PI3Ky (p120y PI3Ky (2 nM) je inkubiran sa 10 pM PIP2 supstrata u puferskom sredstvu reakcije (20 mM HEPES, pH 7,5 10 mM DTT, 10 pM ATP i 1% DMSO) tokom 30 minuta va 30"C Proizvod reakcije je zatim pomešan sa PIP3 proteinskim detektorom, europijumom-označeno antitelo, biotinom-označena PIP3 proba i alofikocijaninom-označen Streptavidin. Kompleks senzora se formira da se generiše stabilan TR-FRET signal u reakcionoj mešavini. Intenzitet signala se smanjuje kako se biotinom označena sonda vezuje na PIP3 detektor je zamenjen sa PIP3 koji je proizveden enzimskom aktivnošću nevezane biotinom označene PIP3 sonde u mešavini se povećava TR-FRET signal je određen korišćenjem čitača mikroploče sa pozadinskim oduzimanjem
[0156]IC50je određen za Jedinjenje 1 u ovom ogledu je bio između 100 i 1000 nM.
Primer 8: Ogled za aktivnost histonske deacetilaze (HDAC)
[0157]HDAC inhibitorna aktivnost je procenjena korišćenjem Biomol Color de Lys sistemom (AK-500, Biomol, Plymouth Meetmg, PA). Kratko, nuklearni ekstrakt Hela ćelije su konšćeni kao izvor HDAC. Različite koncentracije oglednih jedinjenja su serijski razblažene u dimetilsulfoksida (DMSO) i dodati su na nuklearne ekstrakte HeLa ćelije u prisustvu kolorimetrijske veštačke podloge Krajnje stanje ogleda je sadržalo 50 mM Tris/Cl, pH 8,0, 137 mM NaCI, 2,7 mM KCI i 1 mM MgCI2. Reakcije su nošene u sobnoj temperaturi (25°C) za 1 sat pre dodavanja razvijača za kraj. Relativna aktivnost enzima je izmerena u VVALLAC Victor II 1420 čitača mikro ploče kao fluorescentnom intenzitetu (pobuđivanje: 350- 380 nm; emisija: 440-460 nm). Podaci su analizirani korišćenjem GraphPad Prism (v4.0a) sa sigmoidnim odgovorom na dozu podešavanje krivulje a IC50 kalkulacije IC50je određen za Jedinjenje 1 u ovom ogledu je bio manji od 100 nM.
[0158]Aktivnosti Jedinjenja 1 protiv HDAC izotipa su takođe određeni. Ogledi za specifičnosti histonske deacetilaze (HDAC) su izvedeni BPS Bioscience (San Diego, CA), pridržavanjem njihove standardne procedure rada. Ukratko, prečišćena oznaka- (ljudski HDAC-1), NCOR2- (ljudski HDAC3), GST- (ljudski HDAC4, 6. 7. 10 i 11) ili His- (ljudski HDAC 2, 5, 8 i 9) označeni enzimi su ispoljeni u Sf9 ćelijama insekta i prečišćeni pre upotrebe. Supstrat korišćen za HDAC1, 2, 3, 6, 7, 8. 9 i 11 je bio supstrat 3 histonske deacetilaze (HDAC) koji je razvila kompanija BPS Bioscience. Za druge enzime histonske deacetilaze (HDAC), korišćen je supstrat HDAC klase 2a Sve enzimske reakcije su sprovedene u duplikatu na 37°C tokom 30 minuta, izuzev ogleda enzima HDAC11, koji je sproveden na sobnoj temperaturi tokom 3 sata.
[0159]Tabela u nastavku iznosi rezultate za svaki HDACs 1-11, sa IC50 vrednostima datim kao u nastavku: I > 1000 nM, 100 nM < II < 1000 nM: 10 nM < III < 100 nM IV < 10 nM
Primer 9: Ogled sa proliferacijom ćelija
[0160]Linije ćelije kancera kod čoveka su kupljene od kompanije American Type Culture Collection (Manassas, VA) i raspoređene na ploče na 5.000 do 10.000 po pregrardi na pločama sa ravnim dnom sa 96 pregrada, kako je naveo davalac usluge Ćelije su zatim inkubirane sa jedinjenjima pri različitim koncentracijama tokom 72 sata u podlozi kulture dopunjene sa 0,5% (v/v) seruma goveđeg fetusa (FBS). Inhibiranje rasta je procenjeno u ogledu sa sadržajem adenozin trifosfata (ATP) korišćenjem Promega CellTiter-Glo kompleta Promega CellTiter-Glo komplet je ATP sistem nadzora koji se zasniva na luciferazi svitaca. Ukratko, 16 ul rastvora za lizu ćelija sisara i rastvor supstrata je dodato u 84 pl podloge kulture po pregradi da se uradi liza ćelija i stabilizuje ATP Ova mešavina je mešana i inkubirana tokom 30 minuta i posle toga je izmerena luminiscencija. IC50su izračunate korišćenja PRISM softvera (GraphPad Softvvare) sa sigmoidnim podešavanjem krivulje prema odgovoru na dozu.
[0161]Tabela 1 pokazuje antiproliferativnu aktivnost u ovim ogledima na bazi ćelija za Jedinjenje 1 i referentna jedinjenja SAHA, GDC-0941 i kombinaciju SAHA i GDC-0941. U ovim ogledima, konšćenoje siedeće gradiranje I > 10.000 nM, 10.000nM > II >1000 nM, 1000 nM >III> 100 nM, 100 nM > IV > 10 nM, i V < 10 nm za IC50.
Primer 10: Formulacije Jedinjenja 1
a Jedinjenje 1 u 30% Kaptisol (10 mg/ml):
[0162]U bočicu koja sadrži jedinjenje 1 (10 mg) je dodato 30% Kaptisola (0,937 ml) Ova mešavina je sonikatorom obrađena (pobuđena ultrazvučnim zvučnim talasima) tokom 2 min Ovoj mešavini je dodat natrijum hidroksid (1 N, 39,3 pl, 2 ekv.) je sonikovana/vrtložno mešana da bi dala bistar rastvor (pH =12). Rastvor je zatim podešen na pH = 10 sa hlorovodoničnom kiselinom (1 N,23,6ul, 1,2 ekv.)
b. Jedinjenje 1 u 30% Kaptisol (7.5 mg/mL):
[0163]U bočicu koja sadrži jedinjenje 1 (7,5 mg) je dodato 30% Kaptisola (0,941 ml) Ova mešavina je sonikatorom obrađena (pobuđivana ultrazvučnim zvučnim talasima) tokom 2 mm Ovoj mešavini je dodat natrijum hidroksid (1 N, 29,5 pl, 2 ekv.) je sonikovana/vrtložno mešana da bi dala bistar rastvor (pH =12). Rastvor je 2atim podešen na pH = 5 sa hlorovodoničnom kiselinom (1 N, 29.5 pl, 2 ekv.).
c Jedinjenje 1 u C10/PEG1450/PEG400 (5 mg/mL).
[0164]U bočicu koja sadrži jedinjenje 1 (5 mg), natrijum đekanoata (20 mg), PEG400 (40 pl), i PEG1450 (40 mg) je dodato H2O (0,88 ml) i NaOH (1 N, 24 6 pl. 2,5 ekv ). Mešavina je obrađena sonikatorom i vrtložno mešana da bi dala bistar rastvor koji je zatim podešen na pH = 10 sa HCI (1 N, 7,4 pl, 0,75 ekv.).
Primer 11: Farmakokinetičke i farmakodinamičke studije na miševima koji nose tumor
Laboratorijski miševi koji nose tumore H2122
[0165]Laboratorijski miševi koji nose H2122 (liniju ćelija nesitnoćelijskog kancera pluća kod čoveka) ksenograft tumore su korišćeni za farmakokinetičke studije Jedinjenje 1 je formuiisano u vodi sa natrijum dekanoatom i PEG400 (5 mg/ml) i primenjeno oralno (PO) putem gavaže svakoj životinji u dozi od 50 mg/kg U različitim vremenskim razmacima posle primene jedinjenja, tri miša po vremenskom trenutku su eutanizirana sa CO2, i prikupljeni su krv i tkiva tumora Krva je prikupljena u epruvete koje sadrže natrijum heparin. Plazma je odvojena putem centrifugiranja. Plazma i tkiva su skladišteni na - 80C za kasniju analizu. PE Sciex API-3000 LC-MS/MS sistem (Applied Biosvstems, Inc., Foster City, CA) je korišćen da analizira koncentracije jedinjenja u plazmi i tkviima koje je zahvatio tumor
[0166]Rezultati ove studije su pregledno prikazani na Slici 1 i Tabeli 2, dole Slika 1 je grafikon koncentracije jedinjenja 1 u plazmi i tkivu tumora naspram vremena posle oralne primene Rezultati pokazuju da se Jedinjenje 1 preferencijalno akumulira u tkivu tumora Ovo je podržano rezultatima iznetim u Tabeli 3, koji pokazuju značajno duži poluživot u Jedinjenju 1 u tkivu tumora nego u plazmi kao i značajno veću izloženost tkiva tumora na Jedinjenju 1 (AUC).
SCID Miševi koji nose Daudi Tumore
[0167]Daudi (neHodžkinova linija ćelije limfoma) ćelije su ugrađene u ženske (ozbiljan kompleks nedostatka imunog sistema) miševe. Posle uspostavljanja tumora, životinjama su date doze oralne gavaže sa 25, 50 ili 100 mg/kg o. Jedinjenja 1. formulisanog u 30% Kaptisol, pH 10, pri koncentraciji od 1,875, 3,75 ili 7.5 mg/mL, respektivn
[0168]U različitim vremenskim razmacima posle primene jedinjenja. tri miša po vremenskom trenutku su eutanizirana sa CO2, i prikupljeni su uzorci krvi i tkiva tumora Krv je prikupljena u epruvete koje sadrže natrijum heparin Plazma je odvojena centrifugiranjem. Plazma i tkiva su skladišteni na -80C za kasniju analizu. PE Sciex API-3000 LC-MS/MS sistem (Applied Biosvstems, Ine , Foster City, CA) je korišćen da se analiziraju koncentracije jedinjenja u plazmi.
[0169]Rezultati ove studije su pregledno prikazani na Slikama 2A, 28 i 2C i Tabeli 3, dole. Slika 2Aje grafikon koncentracije Jedinjenja 1 u plazmi naspram vremena posle oralne primene i pokazuje od doze zavisnu izloženost prema jedinjenju Slika 2B je grafikon koncentracije Jedinjenja 1 u plazmi i tkivu tumora naspram vremena posle oralne primene Rezultati pokazuju da se Jedinjenje 1 preferencijalno akumulira u tkivu tumora na način koji zavisi od primljene doze. Koncentracije plazme i tumora posle 100 mg/kg doze se porede na Slici 2C, koja pokazuje da tkivo tumora preferencijalno upija Jedinjenje 1. Ovo je podržano rezultatima iznetim u Tabeli 3, koji pokazuju značajno duži poluživot u Jedinjenju 1 u tkivu tumora nego u plazmi kao i značajno veću izloženost tkiva tumora Jedinjenju 1 (AUC)
Farmakodinamika
[0170]Tumori su prikupljeni za PD evaluaciju posle terapije jednom dozom Jedinjenja 1 na 25 mg/Kg, 50 mg/kg i 100mg/kg Protein je ekstrahovan iz tkiva tumora korišćenjem uređaja za lizu tkiva Tissuelyser (Qiagen, Valencia, CA) u skladu sa uputstvima proizvođača 30 ug proteina je rutinski korišćeno za WB analizu kako je gore opisano. Lizati ćelije su ponovo rastvoreni na NuPAGE Novex 4-12% Bis-Tris gelovima (Invitrogen) i preneti na nitrocelulosne membrane (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Dobijene mrlje su ispitivane sa različitim primarnim antitelima tokom noći na 4°C. GAPDH (gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaza, 1:30 000, Abcam, Cambndge, MA) je korišćen kao unutrašnja kontrola za svaki ogled Membrane su zatim inkubirane sa infracrveno označenim sekundarnim antitelima (1 10000) eonjugovanim-IR Dye800 (Rockland Immunochemicals, Inc. Gilbertsville, PA) očo konjugovanim-Alexa 680 (Invitrogen). Membrane su slikovno prikazane sa sistemom za infracrveno prikazivanje slikom Odyssey (Li-Cor Biotechnology, Lincoln, NE)
[0171]Rezultati ove studije su izneti na Slici 3, što predstavlja VVestern blotove ekstrakata tkiva tumora iz tri grupe doza Ovi rezultati pokazuju da Jedinjenje 1 inhibira PI3K-AKT-mTOR putanju, suzbija RAF-MEK-ERK puteve, reguliše nivoe RTK proteina u donjem toku i nivoe potiskivača tumora p53 i p21 u gornjem toku.
Primer 12: Farmakokinetička studija na psima
[0172]Farmakokinetička studija Jedinjenja 1 na bigl-psima je takođe sprovedena korišćenjem iv primene na 5 mg/kg u vodi sa natrijum dekanoatom/PEG400 (5 mg/ml) i oralnu primenu na 5 mg/kg sa natrijum dekanoatom/PEG4Q0Q/PEG1450 (pH 10) u entenčnim kapsulama. Plazma je prikupljena u različitim vremenskim razmacima i analizirana za koncentraciju Jedinjenjal pomoću LC-MS/MS. Rezultati ove studije su prikazani na Slici 4 i Tabeli 4, dole Slika 4 je grafikon plazma koncentracije naspram vremena za oralno i iv doziranje Značajni nivoi plazme Jedinjenja 1 su postignuti preko oralnog doziranja.
Primer13: Farmakokinetička studijanapacovima
[0173]Svrha ove studije je bila da odredi farmakokinetiku plazme Jedinjenja 1 kod mužjaka Sprague-Dawley pacova posle primene Jedinjenja 1
[0174]Jedinjenje 1 je rastvoreno u 30% Kaptisola u vodi da se dobiju nominalne koncentracije 10 mg/mL (pH=1Q) za oralnu primenu. Dobijeni bistar žuti rastvor je skladišten na sobnoj temperaturi sve dok nije preuzet za doziranje.[0175]U ovoj studiji su korišćena tri muška Sprague-Dawley pacova iz kompanije Charles River Laboratories Ishrana sa dosta masnoće (VHFD, D12492i) iz Research Diets Inc. je data adlibltumtokom dela studije kada se ispitivanja vrše na živim organizmima. Jedinjenje 1 je primenjeno preko jedne oralne (PO) doze gavažom od 20 mg/kg
[0176]Uzorci krvi (približna količina 150 pL) su uzeti iz vene iz repa na 0,25 0,5, 1, 3, 6, i 24 sati posle doze. Uzorci krvi su stavljeni u epruvete koje sadrže natrijum hepann i centrifugirane na 8.000 ob/min tokom 6 minuta na 4"C da se odvoji plazma od uzoraka. Posle centrifugiranja, dobijena plazma je preneta na čiste epruvete i čuvana zamrznuta na -80°C do predstojeće bioanalize.
[0177]Koncentracije Jedinjenja 1 i njegovog primarnog metabolita u uzorcima plazme su određeni korišćenjem PE Sciex API-3000 LC-MS/MS sistema (PE-Sciex., Foster City, CA)
[0178]Farmakokinetički parametri su određeni na osnovu podataka srednjeg vremena koncentracije kod testiranih subjekata. Da bi se izračunali parametri korišćenoje modeliranj sa pregradama i to VVINNONLIN® Professional 5.2. Bilo koje koncentracije koje su bile ispod granice kvantifikacije (donja granica kvantifikacije - 1 ng/mL) su izostavljene iz proračuna parametara kod pojedinačnih životinja
[0179]Posle oralne primene Jedinjenja 1, srednje vrednosti Cmaxi Tmax23Jedinjenje 1 su bile 39,5 ug/L i 0,1 hr, respektivno Srednja vrednost AUC(0-x) je bila 163,6 pg/l_*hr Vrednost vremena poluraspada (T©) je bila 11,7 hr.
Primer 14: Procena Jedinjenja 1 na modelima ksenograft tumora
[0180JA.SU-DHL4, H2122, Daudi i OPM2 modeli ksenograft tumora
[0181]SU-DHL4 (difuzna velika B ćelija linija limfoma ćelijee), H2122 (human NSCLC cell line), Daudi (neHodžkinova linija ćelije limfoma) i OPM2 (linija ćelija tumora višestrukih mijeloma) ćelije su ugrađene u u bilo laboratorijski ili Scid ženske miševe (sa ozbiljnim nedostatkom imunog kompleksa) Posle uspostavljanja tumora, životinje sa dovoljnom veličinom tumora su nasumično raspoređene u aktivnu grupu (Jedinjenje 1) i kontrolnu (pomoćno sredstvo) grupu Jedinjenje 1 je formulisano za oralnu primenu kao u Primeru 7(b), i isporučeno oralnom gavažom na osnovu telesne težine svake pojedinačne životinje. Kontrolne grupe su tretirane sa pomoćnim sredstvom korišćenjem istog rasporeda doziranja kao i odgovarajuća aktivna grupa.
[0182]H2122 tumor grupa (laboratorijski miševi) primila je Jedinjenje 1 u dozama od 75 mg/kg dvaput
dnevno na početku a zatim 0 mg/Kg dvaput dnevno od 11 dana tokom pet dana po nedelji zbog gubitka telesne težine u dozi od 75 mg/Kg. U jednoj studiji. Daudi tumor grupa (Scid mice) je primila Jedinjenje 1 u dozama od 25, 50 ili 100 mg/Kg pet dana nedeljno. U drugoj studiji. Daudi tumor grupa je dozirana na 50 mg/Kg dvaput dnevno tokom pet dana nedeljno. U drugoj studiji, efikasnost oralno pnmenjenog Jedinjenja 1 na modelu Daudi tumora je upoređena sa oralnim GDC-0941 i oralnim vorinostat, i pojedinačno i u kombinaciji. OPM2 tumor grupa je primila Jedinjenje 1 u dozama od 50 mg/kg dvaput dnevno tokom pet dana nedeljno. SU-DHL4 tumor grupa je dozirana na 100 mg/Kg oralno ili 50 mg/Kg intravenski.
[0183]Tumori su izmereni tokom perioda studije sa elektronskim kalibarskim šestarom, i telesne težine su izmerene dvaput nedeljno Sledeća formula je korišćena da se izračuna zapremina tumora:
Procenat promene zapremine tumora je korišćen da opiše aktivnost jedinjenja tokom perioda lečenja.
[0184]Rezultati ovih studija su sažeto prikazani na Slikama 5A do 5C i 9 do 12. koje pokazuju veličinu tumora naspram vremena za aktivnu grupu i kontrolnu grupu za svaki od tipova tumora. Slike 5A, 5B, 5C i 12 pokazuju daje Jedinjenje 1 efikasno za modele tumora H2122, Daudi i OPM2 Kao što je izneto na Slici 9, Jedinjenje 1 je inhibiralo rast Daudi tumora na od doze zavisan način Slika 10 poredi antitumornu aktivnost Jedinjenja 1 na 100 mg/Kg na Daudi modelu sa samo bilo GDC-0941 ili vorinostatom, ili u kombinaciji Indikovane doze su doze koje se maksimalno tolenšu (MTD) za svaku terapiju, i veličina tumora pre terapije je bila 157 + 65 mm3 (srednja ± SE) Podaci ukazuju na to da je Jedinjenje 1 efikasije od vorinostata, GDC-0941. ili kombinacije ova dva. Najzad, Jedinjenje 1 je jako inhibiralo rast tumora za SU-DHL4 difuznog modela ksenografta limfoma velike B ćelije posle intravenske (IV) primene od 50 mg/kg ili oralne (PO) od 100 mg/kg (Slika 11) Veličina tumora pre terapije je bila 147 ± 21 mm3.
MM1S ksenograft model
[0185]Ženski SCI D/Bež miševi stari 4 nedelje su smešteni u ventilirane kaveze sa mikroizolatorom (INNOCAGE®IVC, Innovive Inc., San Diego, CA) u kontroiisanim klimatskim uslovima, hranjeni sterilnim veoma masnim načinom ishrane (Problab-RMH 2000)ad libitumi obezbeđena im je sterilisana voda. Celo kućište i zalihe za SCID/bež miševe su sterilisani pomoću autoklava pre upotrebe Miševi su kontrolisani dnevno uključujući vikende/praznike od strane obučenog osoblja u objektu za životinje i istraživačima. Sve procedure sa životinjama su izvedene u sterilnim uslovima unutar biosigurnosnog kabineta (za injekcije) ili laminarne komore sa protokom vazduha (za stočarstvo i neinvazivne procedure).
[0186]MM1S ljudske MM ćelije (Goldman-Leikm RE, et al . J Lab Clm Invest 1980. 113:335-345) su originalno dobijeni iz periferne krvi pacijenta sa višestrukim mijelomom Knokonzervisane ćelije su otopljene na 37°C vodene kupke i kultivisane u RPMI podlozi plus 10% serum goveđeg fetusa (FBS) u inkubatoru kulture tkiva na 5% CO2Ćelije su poslate spoljnim prodavcima za skeniranje kontaminirajućih agenasa i glodarskih patogena u cilju eliminisanja kontaminacije pomoću mikoplazme (pomoću PCR) i/ili virusa (pomoću MAP testa, Mouse Antibodv Production (proizvodnja mišjeg antitela)). Kada su ćelije u kulturi dovoljne za implantaciju, one su oprane Hank-ovim izbalansiranim slanim rastvorom bez seruma (HBSS) Najzad su ćelije razblažene u HBSS tokom implantacije . Samo su suspenzije sa jednom ćelijom održivosti veće od 90% (isključivanjem pomoću soja poznatog kao tripansko plavo) su korišćeni za ubrizgavanje i 20 miliona ćelija po životinji držanih u suspenziji u 0,2 ml HBSS su ubrizgane potkožno u desnu zadnji bočni region miša posle minimalno 7 dana perioda privikavanja, korišćenjem 1CC šprica sa 26G hipodermične igle. uzimajući u obzir da se izbegnu krvni sudovi. Uspešna implantacija je naznačena formiranjem okrugle, izdignute mase ispod kože. Implantirani miševi su nadzirani za opšte zadravlje i razvoj tumora na dnevnoj bazi
[0187]Tumori su detektibilnji oko dve nedelje posle ugradnje Veličina tumora je izmerena kalibarskim šestarom Sledeća formula je korišćena da se izračuna zapremina tumora:
[0188]Tri nedelje posle implantacije tumora, tumor je dostigao prošek od 194,6 ± 32 mm3. Životinje sa prihvatljivom veličinom tumora i oblika su nasumično raspoređene u dve grupe od osam životinja svaka, korišćenjem softvera za razvrstavanje, jedno kontrolno pomoćno sredstvo i jedna grupa terapije.
[0189]Jedinjenje 1 je formulisano i dozirano na sledeći način: 7,5 mg/ml je rastvoren u 30% Kaptisola sa 2 molarna ekvivalenta NaOH i HCI svaki i dozirani oralnom gavažom svakog dana pet puta nedeljno na osnovu telesne težine svakog miša. Kontrolna grupa je dozirana sa pomoćnim sredstvom (30% Kaptisola) korišćenje iste paradigme za doziranje
[0190]Tokom studije svake životinje, tumori su izmereni kalibarskim šestarima, veličina tumora je određena korišćenjem gode pomenute formule, i veličina tumora se menja u proračunatim procentima. Veličine tela miša su izmerene sa skaom dva puta nedeljno. Studije su nastavljene sve do: a) unapred određenog krajnjeg datuma koji je naznačen u projekciji studije, ili b) pojave zdravstvenih problema, šta god da se pojavilo prvo. Pored toga, prema sa tumorom povezanim parametarima garantovanog davanja eutanazije: davanje eutanazije (1) opterećenje tumorom je prekoračena 2500 mm^ i/ili (2) nedostataka >20% početne telesne težine. Pored određivanja promena veličine tumora, poslednje merenje tumora je korišćeno da se generiše odnos promene težine tumora (T/C vrednosti). standardni metrički razvoj pomoću Nacionalnog instituta za rak (National Cancer Institute (NCI)) za procenu ksenograft tumora T/C vrednosti su izračunate korišćenjem sledeće formule: % T/c - 100 x®T/®C if ®T > 0 U slučajevima kada se regresija tumora pojavi .korišćena je sledeća formula: % T/To - 100 x AT/TO if ®T < 0.
[0191]Period terapije je bio 15 dana Veličine tumora i telesne težine su ponovo izmerene poslednjeg dana ove studije.
[0192]Kako je prikazano na Slici 13, Jedinjenje 1 jedan agens je inhibirao rast tumora za model potkožnog tumora MMIS. T/C vrednosti su izračunate da jesu 27,37% (p<0,0001, ANOVA) na osnovu 14. Nema gubitka telesne težine ili drugih pratećih efekata primećenih za Jedinjenje 1 terapijsku grupu sa jednim agensom
MM1R ksenograft model
[0193]Ženski SCID/Bež miševi stari 4 nedelje su smešteni u ventilirane kaveze sa mikroizolatorom (INNOCAGE®IVC, Innovive Inc., San Diego, CA) u kontrolisanim klimatskim uslovima, hranjeni sterilnim veoma masnim načinom ishrane (Problab-RMH 2000) ad libitum i obezbeđena im je sterilisana voda Celo kućište i zalihe za SClD/bež miševe su sterilisani pomoću autoklava pre upotrebe. Miševi su kontrolisani dnevno uključujući vikende/praznike od strane obučenog osoblja u objektu za životinje i istraživačima. Sve procedure sa životinjama su izvedene u sterilnim uslovima unutar biosigurnosnog kabineta (za injekcije) ili laminarne komore sa protokom vazduha (za stočarstvo i neinvazivne procedure).
[0194]MM1R human MM ljudske MM ćelije su originalno dobijene iz periferne krvi pacijenta sa višestrukim mijelomom (Goldman- Leikm RE, et al.. J Lab Clin Invest. 1980, 113:335-345). Kriokonzervisane ćelije su otopljene na 37°C vodene kupke i kultivisane u RPMI podlozi plus 10% serum goveđeg fetusa (FBS) u inkubatoru kulture tkiva na 5% CO2Ćelije su poslate spoljnim prodavcima za skeniranje kontaminirajućih agenasa i glodarskih patogena u cilju elimmisanja kontaminacije pomoću mikoplazme (pomoću PCR) i/ili virusa (pomoću MAP testa, Mouse Antibodv Production (proizvodnja mišjeg antitela )). Kada su ćelije u kulturi dovoljne za implantaciju, one su oprane Hank-ovim izbalansiranim slanim rastvorom bez seruma (HBSS). Najzad su ćelije razblažene u HBSS tokom implantacije. Samo su suspenzije sa jednom ćelijom održivosti veće od 90%
(isključivanjem pomoću soja poznatog kao tripansko plavo) su korišćeni za ubrizgavanje i 15 miliona ćelija po životinji držanih u suspenziji u 0,1 ml HBSS su ubrizgane potkožno u desnu zadnji bočni region miša posle minimalno 7 dana perioda privikavanja, korišćenjem šprica od 1 CC (kubnih centimetara) i hipodermičke igle 26G, uzimajući u obzir da se izbegnu krvni sudovi Uspešna implantacija je naznačena formiranjem okrugle, izdignute mase ispod kože Implantirani miševi su nadzirani za opšte zadravlje i razvoj tumora na dnevnoj bazi
[0195]Tumori su detektibilnji oko dve nedelje posle ugradnje. Veličina tumora je izmerena kalibarskim šestarom. Ova sledeća formula je korišćena da se izračuna zapremina tumora:
[0196]Tri nedelje posle implantacije tumora, tumor je dostigao prošek od 131,7 + 28,7 mm3. Životinje sa prihvatljivom veličinom tumora1oblika su nasumično raspoređene u dve grupe od osam životinja svaka, korišćenjem softvera za razvrstavanje, jedno kontrolno pomoćno sredstvo i jedna grupa terapije.
[0197]jedinjenje 1 je formulisano i dozirano na sledeći način: 7,5 mg/ml je rastvoren u 30% Kaptisola sa 2 molarna ekvivalenta NaOH i HCI svaki i dozirani oralnom gavažom svakog dana pet puta nedeljno na osnovu telesne težine svakog miša. Kontrolna grupa je dozirana sa pomoćnim sredstvom (30% Kaptisola) korišćenje iste paradigme za doziranje.
[0198]Tokom studije svake životinje, tumori su izmereni kalibarskim šestarima, veličina tumora je određena korišćenjem gode pomenute formule, i veličina tumora se menja u proračunatim procentima Veličine tela miša su izmerene sa skaom dva puta nedeljno. Studije su nastavljene sve do: a) unapred određenog krajnjeg datuma koji je naznačen u projekciji studije, ili b) pojave zdravstvenih problema, šta god da se pojavilo prvo. Pored toga, prema sa tumorom povezanih parametara garantovanog davanja eutanazije: davanje eutanazije: (1) opterećenje tumorom je prekoračeno 2500 mm<3>i/ili (2) nedostataka
>20% početne telesne težine Pored određivanja promena veličine tumora, poslednje merenje tumora je korišćeno da se generiše odnos promene težine tumora (T/C vrednosti), standardni metrički razvoj pomoću Nacionalnog instituta za rak (National Cancer Institute (NCI)) za procenu ksenograft tumora T/C vrednosti su izračunate korišćenjem sledeće formule: % T/C = 100 x AT/AC if AT > 0. U slučajevima kada se pojavi regresija tumora, međutim, korišćena je sledeća formula: % T/Trj - 100 x AT/TO ifAT <
0.
[0199]Period terapije je bio 18 dana Veličine tumora i telesne težine su ponovo izmerene poslednjeg dana ove studije.
[0200]Kako je prikazano na Slici 14, Jedinjenje 1 jedan agens je inhibirao rast tumora za MIVI1R model potkožnog tumora. T/C vrednosti su izračunate da jesu 21,15% {p<0,0001, ANOVA) na osnovu podataka za dan 17. Nema gubitka telesne težine ili drugih pratećih efekata primećenih za Jedinjenje 1 terapijsku grupu sa jednim agensom
Primer 15: Dejstvo Jedinjenja 1 na cirkulišuće limfocite
[0201]Studija koja ispituje dejstvo Jedinjenja 1 na cirkulišuće T i B limfocite je sprovedena na CD1 miševima divljeg tipa. Pet miševa je lečeno jedinjenjem Jedan formulisanim kao u Primeru 8(b) (5 mg/mL) od 100 mg/kg oralno tokom pet uzastopnih dana Još 5 miševa je lečeno pomoćnim sredstvom. Uzeta je krv u različitim vremenskim trenucima (uključujući pre davanja doze, tokom davanja doze i posle doziranja) iz mandibularne vene. Krv je analizirana sa citometrom protoka za kvantifikacijom T i B ćelije.
[0202]Dejstvo Jedinjenja 1 na T i B nivoe Iimfocita u limfoidnim organima, jetri i limfnim čvorovima, je takođe procenjena. Miševi su tretirani sa Jedinjenjem 1 oralno na 100 mg/kg tokom pet uzastopnih dana. Životinje su žrtvovane, i limfoidni organi su prikupljeni. Ćelije su bile fizički razdružene od tkiva i analizirane uređajem za anlizu na bazi protočne citometrije. Anti-CD3 i -CD19 antitela su korišćena za bojenje T i B ćelija, respektivno
[0203]Rezultati ovih studija su prikazani na Slici 6, grafikon prkazuje nivoe Iimfocita u krvi tokom vremena. Jedinjenje 1 pokazuje značajno reverzibilno smanjenje nivoa krvi i T i B Iimfocita u poređenju sa kontrolom. Slično dejstvo se vidi za nivoe Iimfocita u jetri i limfnim čvorovima. Oba ova organa pokazuju značajno smanjeje i T i B Iimfocita posle doziranja sa Jedinjenjem 1 u poređenju sa kontrolama.
Primer 16: Dejstvo Jedinjenja 1 na hematopoietičnećeije ukoštanoj srži
[0204]Koštana srž je takođe uklonjena iz miševa koji su žrtvovani u Primeru 12 Sadržaj koštane srži je uzet iz dugih kostiju miševa i analiziran sa uređajem za anlizu na bazi protočne citometrije. Različiti markeri za limfocite progenitora ili zrele limfocite su konšćeni. Rezultati su pokazali da je terapija Jedinjenjem 1, dok prouzrokuje smanjenje u broju perifernih T i B Iimfocita. izazvala kompenzatorno povećanje za ćelije progenitora Iimfocita koštane srži u poređenju sa kontrolama.
Primer 17: Ogled sa reverznom mutacijom mini-Sa/mone//a/Mikrozoma sisara
[0205]OvaStudija je sprovedena da proceni sposobnost Jedinjenja 1 da izazove reverzne mutacije bilo u prisustvu ili odsustvu mikrosomalnih enzima koji potiču od sisara (S9 miks) na lokusu histidina u genomu 2 sojaSaimonella typhtmurium(TA98 i TA100)
[0206]Ispitivač sojeva korišćeni u ogledu za mutagenost su biliSaimonella typhimunumispitivač sojeva TA98 (za detektovanje reverzne mutacije pomeranja okvira čitanja) i TA100 (za detektovanje reverzne mutacije samo jednog baznog para DNK) Ogled je sproveden i u prisustvu i u odsustvu S9 mešavine zajedno sa istovremenim pomoćnim sredstvom (DMSO, 20 l/pregradi) i pozitivnim kontrolama u duplikatu korišćenjem ploča sa 6 pregrada Pet koncentracija sa 2X sukcesivnih razblaženjima koji se kreću u opsegu od 1000 do 62.5 pg/pregradi (ekvivalentno 5000 do 312 5 pg/ploči u standardnom ogledu Ames) su ispitivane za svako od ovih jedinjenja. Posle inkubacije na 37"C tokom 48-72 sata, ploče su posmatane za nerastvorljivost i citotoksičnost jedinjenja, i skenirane da se prebroje kolonije revertanata (mutanata đobijenih ponovnom mutacijom) Dvostruko povećanje koje bilo izvodljivo (>2x kontrolnog pomoćnog sredstva) revertantnih kolonija tokom dnevne prosečne kontrolne vrednosti je razmatrano kao pozitivan odgovor mutacije gena za svaki soj
[0207]Jedinjenje 1 je rastvoreno u dimetil sulfoksidu (DMSO), koji je takođe služio kao negativno (pomoćno sredstvo) kontrola. 2-nitrofluoren i natrijum azid su služili kao pozitivne kontrole u odsustvu S9 za TA98 i TA100 respektivno. 2-aminoantracen je služio kao pozitivne kontrole u prisustvu S9 za TA98 i TA100.
Rezultati
[0208]Jedinjenje 1 formiralo je crveno-kestenjast rastvor kada je rastvoreno u DMSO pri koncentraciji od 50 mg/ml, što je bilo najkoncentrovanija zaliha rastvora. Testirani artikal je ostao svetio crveno-kestenjastu boju rastvora sve do bezbojnog rastvora u svih 2X sukcesivnih rastvora sve do 3,125 mg/ml, Talog testirani artikal je praćen kada su testirani artikal i meki agar mešani zajedno pri koncentracijama od 250pg/pregradi i više Posle inkubacije od 48-72 sata, talog testiranog artikla je viđen kao nešto drugačije veličine pod stereo mikroskopom pri 250 pg/pregradi sa TA98 i TA100 samo u odsustvu S9 mešavine. taloži testiranog artikla i manje smanjenje pozadinske podloge su viđeni kao nešto drugačije do umerene veličine na 500 i 1000 pg/pregradi sa TA98 i TA100 u prisustvu i odsustvu S9 mešavine. Nije bilo nikakvog dokaza o značajnom povećanju srednjeg broja revertantnih kolonija u poređenju sa prosečnom kontrolom kada je rađeno ispitivanje u prisustvu i odsustvu S9 mešavine sa sojevima TA98 i TA100 (Tabela 5)
[0209]Rezultati iz trenutne studije su pokazali da Jedinjenje 1 nije izazvalo pozitivan mutageni odgovor sa sojevima TA98 i TA100 u prisustvu i odsustvu mikrosomnih enzima kada su tstirani artikli testirani sve do maksimalne koncentracije od 1000 g/pregradi (ekvivalentno sa 5000 g/ploči u standardnom ogledu Ames).
Primer 18: Farmakodinamička studija u linijama ćelija tumora
[0210]Linije ćelija tumora H460 (Kras, PI3K), BT474 (HER2, PI3K), A375 (B-Raf) i H1975 (EGFR, PI3K) su kultivisane i tretirane samo sa DMSO (kontrolno pomoćno sredstvo) ili 0,1 pmol/L Jedinjenja 1 ili referentnim jedinjenjem tokom 16 sati. Ekstrakti ćelija su pripremljeni u prisustvu SDS i 2-merkaptoetanola i ponovo rastvoreni u poliakrilamidnim gelovima. Proteini su preneti na nitrocelulozni filter i bloting (tehnika mrljanja) je urađena korišćenjem standardnih procedura sa rešenjima za blokiranje (Li-Cor Bioscience) koja sadrži navedeno primarno antitelo Primarna antitela naspram p-EGFR, EGFR, p-HER2, HER2, p-HER3, HER3, p-MET, MET. p-bRaf, p-cRaf pMEK. MEK, p-ERK ERK i tubulin su kupljena iz Cell Signaling Technologv Sekundarno antitelo konjugovano sa IRdye (infracrvenim fluorescentnim bojama) 680, 800CVV su koriščene i signal je detektovan sa Li-Cor Odyssey Imager.
[0211]ICitohemija imunocita je izvedena na ćelijama poraslim u kulturi monosloja koje su tretirane kako je navedeno na legendama slike i zatim fiksirano u 4% (w/v) paraformaldehida Posle ispiranja u 1* PBS, izvedeno je imunobojenje u Li-Cor rastvoru za blokiranje koji sadrži navedena primarna antitela i sa IRDye 680- ili 800CVV konjugovana sekundarna antitela Za in-cell-western probu, za detekciju i kvantifikaciju rezultata je korišćen infracrveni skener Li-Cor Odyssey.
[0212]Za histološko ispitivanje farmakodinamičkih markera, ksenografti tumora su prikupljeni i umetnuti u parafin, i zatim su pripremljeni 4-5-mm odeljci. Odeljci su montirani na slajdovima i reagovali su sa primamim antitelima posle čega je usledilo sekundarno antitelo konjugovano renom (Envision polymer-HRP, Dako, Glostrup, Denmark) Boja reakcije je zatim izvedena korišćenjem diaminobenzidina (DAB) kako je preporučio dobavljač. Kontrabojenje deloa je rađeno sa hematoksilinom
[0213]Rezultati ove studije su pregledno prikazani na Slikama 7A-7g i 8A-8C. Jedinjenje 1 inhibira HDAC aktivnost i PI3K signalni put kod KRAS- i PI3KCA-mutanta H460 ćelija nesitnoćelijskog kancera pluća (NSCLC). Ćelije su tretirane samo sa DMSO (kontrolno pomoćno sredstvo) ili tako što su sadržale testirana jedinjenja tokom 1 h pre nego što je izveden ogled analize tipa VVestern blot ili in-cell-western blot. Slika 7A pokazuje da Jedinjenje 1 pri 1 pmol/L povećava nivoe acetilisanog histona 3 (Ac-H3), tubulin (Ac-Tub), i p53 (Ac-p53) Jedinjenje takođe povećava regulaciju ukupnog p53 i p21 sadržaja. Izneti podaci na Slikama 7B-7E pokazuju da Jedinjenje 1 povećava nivoe acetilisanog tubulina (Slika 7B), acetilisanog histona 3 (Slika 7C), acetilisanog p53 (Figure 7D), i acetilisanog p21 (Slika 7E) na od doze zavisan način Dobijene IC50 vrednosti nagoveštavaju da Jedinjenje 1 ima uporedivu HDAC inhibitornu jačinu prema LBH 589 u ispitanim ćelijama kancera. Pri 1 pmol/L. Jedinjenje 1 inhibira aktivaciju AKT i nizvodne signalne proteine 4EBP-1 i p70S6 (Slika 7F). Jedinjenje 1 takođe uporno i snažno inhibira fosforilaciju Akt-a na od doze zavisan način (Slika 7G)[0214]Jedno veće ograničenje PI3K inhibitora kod lečenja kancera je aktivacija RAF-MEK-ERK putanje, HDAC inhibitori su sposobni da inhibiraju nivoe kinaze u ovoj signalnoj putanje u ćelijama kancera preko epigenetske modifikacije. U ćelijama tumora sa različitim mutacijama, kao što je KRAS i PI3K mutacije u H460 ćelijama, B-Raf mutacije u A375 ćelijama, HER2 i PI3K mutacije u BT-474 ćelijama, i EGFR mutacije u H1975 ćelijama, 100 nM Jedinjenje 1 je potislo aktivaciju Raf, MEK, i ERK. Jaki HDAC inhibitor LBH 589 je pokazao slične aktivnosti kod nekih od ovih VVestern blot ogleda (Slika 8A)
[0215]Pored inhibicije PI3K i MEK pueva, terapija RPMI-8226 ćelija mijeloma sa 1 pM Jedinjenjem 1 tokom 16 h je inhibirala p-STAT3 (Y-705) i p-Src (Slika 8B)
[0216]Kod EGFR-L858R-T790M dvostruko-mutiranih H1975 NSCLC ćelija i HER2 sa prekomermm ispoljavanjem BT-474 ćelija kancera dojke, Jedinjenje 1 je pokazalo da se smanjuju nivoi fosforilisane kinaze i ukupne tirozin kinaze receptora EGFR, HER2. HER3, i MET posle inkubacije tokom 16 h. Slična regulacija donjeg toka istih kinaza je primećena posle terapije ovih ćelija sa LBH 589 (Slika 8C).
Primer 19. Ispoljavanje P13K110a, B, yi5na modelima hematološkog ksenograf tumora
[0217]Ženski miševi sa nedostatkom imunog sistema (Bež/SCID) stari 6-8 neđelja su smešteni u ventilirane kaveze sa mikroizolatorom u kontrolisanim klimatskim uslovima, hranjeni sterilnim veoma masnim načinom ishrane (Problab-RMH 2000)ad libiturni obezbeđena im je stenlisana voda Celo kućište i zalihe za SCID bež miševe su bili na raspolaganju, i kupljeni su ozračeni od kompanije Innovive pre upotrebe. Miševi su kontrolisani dnevno uključujući vikende/praznike od strane obučenog osoblja u objektu za životinje i istraživačima. Sve procedure sa životinjama su izvedene u sterilnim uslovima unutar biosigurnosnog kabineta (za injekcije) ili laminarne komore sa protokom vazduha (za stočarstvo i neinvazivne procedure).
[0218]Ljudske hematološke linije ćelije kancera su originalno dobijene od ljudi kao pacijenata sa kancerom. Kriokonzervisane ćelije su otopljene na 37<C>C vodene kupke i kultivisane u podlozi RPMI medium plus -15% serum goveđeg fetusa (FBS) u inkubatoru kulture tkiva na 5% CO2Ćelije su poslate spoljnim prodavcima za skeniranje kontaminirajućih agenasa i glodarskih patogena u cilju eliminisanja kontaminacije pomoću mikoplazme (pomoću PCR) i/ili virusa (pomoću MAP testa, proizvodnja mišjeg antitela).
[0219]Mada su ćelije u kulturi dostigle željeni broj, one su prikupljene i oprane Dulbecco-ovim fosfatnopuferskim slanim rastvorom bezh seruma (DPBS) Najzad su ćelije razblažene u DPBS tokom implantacije. Samo jednoćelijske suspenzije veće od 90% održivosti (isključivanjem tnpansko plavog) su korišćene za ubrizgavanje Posle nekoliko dana perioda aklimatizacije, 10 do 20 miliona ćelija po životinji je držano u suspenziji u 0,1 ml DPBS je ubrizgano potkožno (SC) u region desnog zadnjeg boka životinje korišćenjem 0,5 CC šprica sa 26 G hipodermičnom iglom, vodeći računa da se izbegnu krvni sudovi Uspešna implantacija je naznačena formiranjem okrugle, izdignute mase ispod kože, Implantirani miševi su nadzirani za opšte zadravlje i razvoj tumora na dnevnoj bazi
[0220]Tumori su bili detektibilnji oko dve nedelje posle ugradnje. Veličina tumora je izmerena kalibarskim šestarom. Sledeća formula je korišćena da se izračuna zapremina tumora:
[0221]Kada su veličine tumora dostigle oko 150-300 mm3, miševi su odvojeni u četiri grupe uključujući tri terapijske grupe (25 mg/kg, 50 mg/kg i 100 mg/kg) i jednu kontrolnu grupu Posle doziranja sa Jedinjenjem 1, tumori su prikupljeni na 15 minuta. 1, 3. 6, 24 sata (3 miša za svaku vremensku vremensku tačku). Tumori su prikupljeni u skladu sa vremenskim tačkama navedenim iznad pošto su miševi dobili eutanaziju sa CO2. Uzorci sustavljeni u suvi led sve do prenosa u zamrzivač od -80°C za VVestern blot analizu
[0222]Protein je ekstrahovan iz tkiva tumora korišćenjem homogenizatora (Tissuefvser (OJagen. Valencia, CA) u skladu sa uputstvima proizvođača. Adapten za držanje epruveta sa tkivima su zamrznute na -20°C, i pufersko sredstvo lize i perlice su ohlađene na 4"C pre upotrebe.
[0223]100-200 pg tkivo homogenizovano u 300 pl T-PER reagens za ekstrakciju proteina tkiva sisara (Pierce, Rockford, IL) dopunjen sa inhibitorima fosfataze (1:100 v/v, Tyr i Ser/Thr kokteli inhibitora fosfataze, Upstate). Uzorci su provereni vizuelno posle svakog ciklusa (vreme: 0.15 minuta; frekvencija: 30Hz) sve dok tkiva nisu bila potpuno homogenizovana. Približno četiri ciklusa je bilo potrebno u većini slučajeva Lizati tkiva su centrifugirani na 14.000 ob/min na 4" C tokom 10 minuta 200 pl supernatant je prikupljen i zadržan na -80°C. Koncentracija proteina je izmeren korišćenjem BCA komplet za ogled za proteine (Pierce, Rockford. IL) u skladu sa uputstvima proizvođača.
[0224]30 pg ukupnog ekstrakta proteina je otopljeno na NuPAGE Novex 4-12% Bis-Tris gelove (Invitrogen) i prenet na mikrocelulozne membrane (Bio-Rad) korišćenjem mašine za polusuvi prenos Bio-Rad (Semi-Dry Transfer Machine). Blotovi su inkubirani sa 10 ml blokirajućeg puferskog sredstva (Odyssey Infrared Imaging System) tokom 1 sat i zatim su ispitivani sa primarnim antitelom tokom noći na 4°C na uređaju za mešanje (šejkeru). Blotovi su ispitivani sa primarnim antitelom tokom noći na 4°C. Primarna antitela su obuhvatila PI3 kinazu p110</ (#4249, 1 1000, ćelijsko signaliziranje). PI3 kinazu p110 B(#3011, 1:1000, ćelijsko signaliziranje). PI3 kinazu p110y(#5405, 1:1000, ćelijsko signaliziranje), PI3 kinazu p110 6 (SC-7176 (1:1000, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). GAPDH (gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaza, 1/30,000, Abcam, Cambridge, MA) je korišćen kao unutrašnja kontrola za svaki ogled.
[0225]Membrana je isprana četiri puta sa Tris-puferskim slanim rastvorom Tween-20 (TBST;DAKO) i inkubirana tokom 1 sat na sobnoj temperaturi sa infracrvenim konjugovanim sekundarnim antitelima (1:10000): anti-začjim konjugovanom-IR bojom 800(Rockland), ili anti-mišjim konjugovanim-Alexa 680(Molecular Probes). Membrana je oprana u sistemu za infracrveno prikazivanje slikom Odyssey (Odyssey Infrared Imaging System) za prikazivanje slikom i analizu.
[0226]Rezultati su izneti na Slici 15, koja pokazuje VVestern blotove PI3K p110 izoforme, AKT i pAKT iz nekoliko ksenografta neHodžkinovog limfoma i višestrukog mijeloma. Rezultati pokazuju da je aktivacija AKT vođena višestrukim PI3K P110 izoformama
Primer 20: Poređenje Jedinjenja1 iCAL-101 na modelu Daudi ksenograft Tumora
[0227]Ženski miševi sa nedostatkom imunog sistema (Bež/SCID) stan 6-8 nedelja su smešteni u ventilirane kaveze sa mikroizolatorom u kontrolisanim klimatskim uslovima. hranjeni sterilnim veoma masnim načinom ishrane (Problab-RMH 2000) ad libitum i obezbeđena im je stenlisana voda. Celo kućište i zalihe za SCID bež miševe su na raspolaganju, i kupljeni su ozračeni od kompanije Innovive pre upotrebe. Miševi su kontrolisani dnevno uključujući vikende/praznike od strane obučenog osoblja u objektu za životinje i istraživačima. Sve procedure sa životinjama su izvedene u sterilnim uslovima u biosigurnosnom kabinetu (za injekcije) ili laminarnoj komori sa protokom vazduha (za stočarstvo i neinvazivne procedure).
[0228]Daudi ćelije Burkitovog limfoma kod kljudi su originalno dobijene od čoveka-pacijenta bolesnog od Burkitovog limfoma. Kriokonzervisane ćelije su otopljene na 37<D>C vodene kupke i kultivisane u RPMI-1640 medium plus 15% serum goveđeg fetusa (FBS), 1% Glutamaksa u inkubatoru kulture tkiva na 5% CO2Ćelije su poslate spoljnim prodavcima za skeniranje patogena u cilju eliminisanja kontaminacije pomoću mikoplazme (pomoću PCR) i/ili virusa (pomoću MAP testa, Mouse Antibođy Production).. Kada su elije u kulturi dostigle željene brojeve, one su pokupljene centrifugiranjem. Posle prikupljanja,
ćelije su oprane sa Dulbekoovim fosfatnopuferskim slanim rastvorom bez seruma (DPBS). Najzad su ćelije razblažene u DPBS tokom implantacije. Samo su suspenzije sa jednom ćelijom održivosti veće od 90% (isključivanjem pomoću soja poznatog kao tripansko plavo) su korišćeni za ubrizgavanje i 20 miliona ćelija po životinji držanih u suspenziji u 0,1 ml DPBS su ubrizgane potkožno u desnu zadnji bočni region miša posle minimalno 7 dana perioda privikavanja, korišćenjem šprica od 0,5 CC (kubnih centimetara) i hipodermičke igle 26G. uzimajući u obzir da se izbegnu krvni sudovi. Uspešna implantacija je naznačena formiranjem okrugle, izdignute mase ispod kože, Implantirani miševi su nadzirani za opšte zadravlje i razvoj tumora na dnevnoj bazi
[0229]Tumori su detektibilnji oko dve nedelje posle ugradnje. Veličina tumora je izmerena kalibarskim šestarom. Sledeća formula je korišćena da se izračuna zapremina tumora:
[0230]Tri nedelje posle implantacije tumora, tumor je dostigao prošek od 300 ± 32 mm3. Životinje sa prihvatljivom veličinom tumora i oblika su nasumično raspoređene u tri grupe od osam životinja svaka, korišćenjem softvera za razvrstavanje, jedna grupa sa kontrolnim pomoćnim sredstvom i dve terapijske grupe.
[0231]Jedinjenje 1 je formulisano i dozirano na sledeći način: Jedinjenje 1 (7.5 mg/ml) je rastvoreno u 30% Kaptisola sa 2 molarnim ekvivalentima od NaOH, izbalansiranim sa 2 molarna ekvialenta HCI, i dozirani preko oralne gavaže dnevno od ponedeljka do petka Kontrolna grupa je dozirana sa pomoćnim sredstvom (30% Kaptisola) korišćenjem iste paradigme za doziranje kao 100 mg/kg zapremine (6,67 ui/g).
[0232]Tokom studije svake životinje, tumori su izmereni kalibarskim šestarima, veličina tumora je određena korišćenjem gore pomenute pomenute formule, i veličina tumora se menja u proračunatim procentima. Veličine tela miša su izmerene sa skaom dva puta nedeljno. Studije su nastavljene sve do: a) unapred određenog krajnjeg datuma koji je naznačen u projekciji studije, ili b) pojave zdravstvenih problema, šta god da se pojavilo prvo Pored toga, sledeći parametri koji se odnose na tumore su
garantovali obezbeđivanje eutanazije: opterećenost tumorom koja prekoračuje 2 500 mm^ i/ili manje od
>20% početne telesne težine. Pored određivanja pramena veličine tumora, poslednje merenje tumora je korišćeno da se generiše odnos promene težine tumora (T/C vrednosti), standardni metrički razvoj pomoću Nacionalnog instituta za rak (National Cancer Institute (NCI)) za procenu ksenograft tumora T/C vrednosti su izračunate korišćenjem sledeće formule; % T/C = 100 x \T/ \C ako je AT > 0 U slučajevima kada se javi regresija tumora, međutim, korišćena je sledeća formula: % T/To - 100 x AT/TO ako je aT < 0
[0233]Period lečenja je bio 15 dana za pomoćno sredstvo i CAL-101 grupe, što je zahtevalo raniji završetak usled veličine tumora koja je premašivala 10% telesne težine, i 18 dana za grupu sa Jedinjenjem 1. Veličine tumora i telesne težine su ponovo izmerene poslednjeg dana ove studije
[0234]Rezultati studije su predstavljeni na Slici 16, koja pokazuje rast tumora za aktivnu grupu i kontrolnu grupu kao funkciju vremena terapije Grupa sa Jedinjenjem 1 grupa je pokazala značajno smanjen rast tumora u poređenju sa CAL-101 i kontrolnim grupama
Primer 21. Kombinacija Jedinjenja1 iciklofosfamida na modelu Daudi ksenograft tumora
[0235]SCID ŽCID ] belDmilD ] Kombinacija Jedinjenja 1 i ciklofosfamida na modelu Daudi ksenograft tumora i kontrolnu grupu kao funk u kontrolisanim klimatskim uslovima, hranjeni sterilnim veoma masnim načinom ishrane (Problab-RMH 2000) ad libitum i obezbeđena im je sterilisana voda. Celo kućište i zalihe za SCID bež miševe su na raspolaganju, i kupljeni su ozračeni od kompanije Innovive pre upotrebe. Miševi su kontrolisani dnevno uključujući vikende/praznike od strane obučenog osoblja u objektu za životinje i istraživačima. Sve procedure sa životinjama su izvedene u sterilnim uslovima u biosigurnosnom kabinetu (za injekcije) ili laminarnoj komori sa protokom vazduha (za stočarstvo i neinvazivne procedure)
[0236]Daudi ćelije Burkitovog limfoma kod kljudi su originalno dobijene od čoveka-pacijenta bolesnog od Burkitovog limfoma Kriokonzervisane ćelije su otopljene na 37°C vodene kupke i kultivisane u RPMI-1640 medium plus 15% serum goveđeg fetusa (FBS), 1% Glutamaksa u inkubatoru kulture tkiva na 5% CO2. Ćelije su poslate spoljnim prodavcima za skeniranje patogena u cilju eliminisanja kontaminacije pomoću mikoplazme (pomoću PCR) i/ili virusa (pomoću MAP testa, proizvodnja mišjeg antitela) Kada su elije u kulturi dostigle željene brojeve, one su pokupljene centrifugiranjem Posle prikupljanja, ćelije su oprane sa Dulbekoovim fosfatnopuferskim slanim rastvorom bez seruma (DPBS). Naj2ad su ćelije razblažene u DPBS tokom implantacije. Samo su suspenzije sa jednom ćelijom održivosti veće od 90%
(isključivanjem pomoću soja poznatog kao tripansko plavo) su korišćeni za ubrizgavanje i 20 miliona ćelija po životinji držanih u suspenziji u 0,1 ml DPBS su ubrizgane potkožno u desnu zadnji bočni region miša posle minimalno 7 dana perioda privikavanja, korišćenjem šprica od 0.5 CC (kubnih centimetara) i hipodermičke igle 26G, uzimajući u obzir da se izbegnu krvni sudovi. Uspešna implantacija je naznačena formiranjem okrugle, izdignute mase ispod kože Implantirani miševi su nadzirani za opšte zadravlje i razvoj tumora na dnevnoj bazi
[0237]Tumori su detektibilnji oko dve nedelje posle ugradnje. Veličina tumora je izmerena kalibarskim šestarom. Sledeća formula je korišćena da se izračuna zapremina tumora:
[0238]Četiri nedelje posle implantacije tumora, tumor je dostigao prošek od 189 ± 47 mm3 Životinje sa prihvatljivom veličinom tumora i oblika su nasumično raspoređene u četiri grupe od osam životinja svaka, korišćenjem softvera za razvrstavanje, jedna sa kontrolnim pomoćnim sredstvom i tri gerapijske grupe.
[0239]Jedinjenje 1 je formulisano i dozirano na sledeći način: Jedinjenje 1 (7.5 mg/ml) je rastvoreno u 30% Kaptisola sa 2 molarna ekvivalenta od NaOH, izbalansiranim sa 2 molarna ekvialenta HCI, i dozirana preko oralne gavaže dnevno od ponedeljka od petka kao 75 mg/kg. Ciklofosfamid ("CTX") je rastvoren u 0,9% MS na 5 mg/ml, i dozian je iv (injekcija u repnu venu) životinjama na 50 mg/kg na dan-0 Grupa koja je primala kombinaciju je dozirana i sa Jedinjenjem 1 i CTX korišćenjem istog rasporeda doziranja. Kontrolna grupa je dozirana sa pomoćnim sredstvom (30% Kaptisol) i 0,9% NS korišćenjem iste paradigme kao za kombinaciju
[0240]Tokom studije svake životinje, tumori su izmereni kalibarskim šestarima, veličina tumora je određena korišćenjem gore pomenute formule, i veličina tumora se menja u proračunatim procentima. Veličine tela miša su izmerene sa skaom dva puta nedeljno Studije su nastavljene sve do: a) unapred određenog krajnjeg datuma koji je naznačen u projekciji studije, ili b) pojave zdravstvenih problema, šta god da se pojavilo prvo. Pored toga, sledeći parametri koji se odnose na tumore su garantovali obezbeđivanje eutanazije: opterećenost tumorom koja prekoračuje 2.500 mm<3>i/ili manje od >20% početne telesne težine. Pored određivanja promena veličine tumora, posleđnje merenje tumora je korišćeno da se generiše odnos promene težine tumora (T/C vrednosti), standardni metrički razvoj pomoću Nacionalnog instituta za rak (National Cancer Institute (NCI)) za procenu ksenograft tumora T/C vrednosti su izračunate korišćenjem sledeće formule: % T/C = 100 x\17\C ako je :\T > 0. U slučajevima kada se pojavi regresija tumora, međutim, korišćena je sledeća formula: % T/Trj = 100 x AT/TO ako je AT < 0
[0241]Period terapije je bio 2 nedelje. Veličine tumora i telesne težine su ponovo izmerene poslednjeg dana ove studije. .[0242] Rezultati ove studije su izneti na Slici 17, koja pokazuje rast tumora kao funkciju perioda terapije za kontrolnu grupu i grupe za tretiranje. Kao samostalni agensi, Jedinjenje 1 i ciklofosfamid sa sličnom aktivnošću na ovom modelu. Kombinacija Jedinjenja 1 i ciklofosfamida je pokazala pretežno veću efikasnost nego bilo koji drugi agens sam,
Primer 22. Jedinjenje1 ukombinaciji sa Lenalidomidom za MMIS ksenograft model
Ženski SCID/Bež miševi stari 4 nedelje su smešteni u ventilirane kaveze sa mikroizolatorom (INNOCAGE®IVC, Innovive Inc., San Diego, CA) u kontrolisanim klimatskim uslovima, hranjeni sterilnim veoma masnim načinom ishrane (Problab-RMH 2000)ad iibitumi obezbeđena im je sterilisana voda. Celo kućište i zalihe za SCID/bež miševe su sterilisani pomoću autoklava pre upotrebe Miševi su kontrolisani dnevno uključujući vikende/praznike od strane obučenog osoblja u objektu za životinje i istraživačima. Sve procedure sa životinjama su izvedene u sterilnim uslovima unutar biosigurnosnog kabineta (za injekcije) ili laminarne komore sa protokom vazduha (za stočarstvo i neinvazivne procedure)
[0244]Kriokonzervisane MM1S Ijudkse MM ćelije su otopljene na 37"C vodene kupke i kultivisane u podlozi RPMI medium plus 10% serum goveđeg fetusa (FBS) u inkubatoru kulture tkiva na 5% CO2. Ćelije su poslate spoljnim prodavcima za skeniranje kontaminirajućih agenasa i glodarskih patogena u cilju eliminisanja kontaminacije pomoću mikoplazme (pomoću PCR) i/ili virusa (pomoću MAP testa, Mouse Antibodv Prođuction). Kada su ćelije u kulturi dovoljne za implantaciju. one su oprane Hank-ovim izbalansiranim slanim rastvorom bez seruma (HBSS) Najzad su ćelije razblažene u HBSS tokom implantacije. Samo su suspenzije sa jednom ćelijom održivosti veće od 90% (isključivanjem pomoću soja poznatog kao tripansko plavo) su korišćeni za ubrizgavanje i 20 miliona ćelija po životinji držanih u suspenziji u 0,2 ml HBSS su ubrizgane potkožno u desnu zadnji bočni region miša posle minimalno 7 dana perioda privikavanja, korišćenjem šprica od 1 CC (kubnih centimetara) i hipodermičke igle 26G, uzimajući u obzir da se izbegnu krvni sudovi Uspešna implantacija je naznačena formiranjem okrugle, izdignute mase ispod kože Implantirani miševi su nadzirani za opšte zadravlje i razvoj tumora na dnevnoj bazi.
[0245]Tumori su detektibilnji oko dve nedelje posle ugradnje Veličina tumora je izmerena kalibarskim šestarom. Ovi sledeća formula je korišćena da se izračuna zapremina tumora:
[0246]Tri nedelje posle implantacije tumora, tumor je dostigao prošek od 192 ± 32 mm3 Životinje sa prihvatljivom veličinom tumora i oblika su nasumično raspoređene u 6 grupa od 7 životinja svaka, korišćenjem softvera za razvrstavanje, jedna sa kontrolnim pomoćnim sredstvom i šest gerapijske grupe.
[0247]Jedinjenje 1 je formulisano i dozirano na sledeći način: Jedinjenje 1 (7,5 mg/ml) je rastvoreno u 30% Kaptisola sa 2 molarna ekvivalenta od NaOH, izbalansiranim sa 2 molarna ekvialenta HCI, i dozirana preko oralne gavaže dnevno od ponedeljka od petka kao 75 mg/kg. Lenalidomid (Selleck, 2,5 mg/ml) je formulisan u MCT (0,5% metil celuloze i 0,2% Tween 80), i doziran kao 12,5 mg/kg ili 25 mg/kg Dve kombinovane grupe su dozirane sa Jedinjenjem 1 kao 75 mg/kg plus nivo jedne doze od lenalidomida (bilo 12,5 ili 25 mg/kg). Kontrolna grupa je dozirana sa pomoćnim sredstvom (30% Kaptisol) i MCT korišćenjem iste paradigme kao za kombinaciju
[0248]Tokom studije svake životinje, tumori su izmereni kalibarskim šestarima, veličina tumora je određena korišćenjem gode pomenute formule, i veličina tumora se menja u proračunatim procentima Veličine tela miša su izmerene sa skaom dva puta nedeljno. Studije su nastavljene sve do: a) unapred određenog krajnjeg datuma koji je naznačen u projekciji studije, ili b) pojave zdravstvenih problema, šta god da se pojavilo prvo. Pored toga. posle sa tumorom povezanih parametara garantovanog davanja eutanazije: (1) opterećenje tumorom je prekoračeno 2500 mm<3>i/ili (2) nedostataka >20% početne telesne težine. Pored određivanja promena veličine tumora, poslednje merenje tumora je korišćeno da se generiše odnos promene težine tumora (T/C vrednosti), standardni metrički razvoj pomoću Nacionalnog instituta za rak (National Cancer Institute (NCI)) za procenu ksenograft tumora T/C vrednosti su izračunate korišćenjem sledeće formule: % T/C - 100 xAT/aC ako jeAT > 0. U slučajevima kada se pojavi regresija tumora, međutim, korišćena je sledeća formula: % T/To - 100 x AT/TO ako je AT <0.
[0249]Period terapije je bio 17 dana. Veličine tumora i telesne težine su ponovo izmerene poslednjeg dana ove studije.
[0250]Rezultati ove studije su predstavljeni na Slici 18, koja pokazuje rast tumora kao funkciju vremena terapije. Rezultati pokazuju da je Jedinjenje 1 pri 75 mg/Kg PO delotvornije od Lenalidomida pri bilo 12,5 ili 25 mg/Kg PO kao zasebnog agenasa Rezultati takođe pokazuju da je kombinacija Jedinjenja 1 i lenalidomide značajno delotvornija nego bilo koje od ova dva jedinjenja kada se koristi zasebno.
[0251]Ovde se upućuje na literaturu o patentu i naučnu literaturu koja utvrđuje znanje koje je dostupno stučnjacima u ovoj oblasti nauke. Svi ovde citirani patenti iz SAD i objavljene ili neobjavljene prijave patenata iz SAD su obuhvaćeni u vidu reference. Svi objavljeni strani patenti i patentne prijave su ovde citirane i ovde obuhvaćene u vidu reference. Sve druge objavljene reference, dokumenti, rukopisi i naučna literatura ovde citirana je ovde obuhvaćena u vidu reference lako je ovaj pronalazak posebno prikazan i opisan sa pozivom na njegova preporučena izvođenja, i prosečan stručnjak u ovoj oblasti će razumeti da različite promene u obliku i detaljima mogu da se inaprave na njima bez udaljavanja od obima pronalaska kako definišu priloženi patentnih zahtevi.

Claims (15)

1.Jedinjenje prema Formuli I: i njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde R je vodonik ili acil grupa.
2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 gde je R je R-|C(0)-, pri čemu R-) je supstituisani ili nesupstituisani C-|-C24-alkil; supstituisani ili nesupstituisani C2-C24-alkenil; supstituisani ili ncsupstituisani C2-C24-alkinil; supstituisani ili nesupstituisani aril: Ni supstituisani ili nesupstituisani heteroaril.
3 Jedinjenje prema patentnom zahtevu 2 gde R1 jeste supstituisani ili nesupstituisani C2-C6 alkenil.
4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde R jeste H ili acetil.
5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 predstavljeno formulom ili njen farmaceutski prihvatljiva so
6. Farmaceutsko jedinjenje koja sadrži kao aktivni sastojak jedinjenje prema patentnom zahteva 1 i farmaceutski prihvatljiv nosač.
7. Farmaceutsko jedinjenje za oralnu primenu koja sadrži kao aktivni sastojak jedinjenje prema patentnom zahteva 1 i farmaceutski prihvatljiv nosač.
8. Farmaceutsko jedinjenje koja sadrži kao aktivni sastojak jedinjenje prema patentnom zahteva 5 i farmaceutski prihvatljiv nosač.
9. Farmaceutsko jedinjenje za oralnu primenu koja sadrži kao aktivni sastojak jedinjenje prema patentnom zahteva 5 i farmaceutski prihvatljiv nosač
10. Farmaceutsko jedinjenje prema patentnom zahtevu 6, za upotrebu u lečenju sa PI3K povezanom bolešću ili poremećajem kod subjekta kom je potrebno
11 Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 10, gde pomenuta bolest ili poremećaj povezani sa PI3K jeste proliterativni poremećaj ćelije, preporučljivo gde se proliferativni poremećaj ćelije kancer, kao što je papilom, blastogliom, Kapošijev sarkom, melanom, melanom, nemikrocelularni karcinom pluća, karinom jajnika, karcinom prostate, karcinom skvamoznih ćelija, astrocitom karcinoma glave, karcinom vrata, karcinom bešike, karcinom dojke, karcinom pluća, kolorektalni kanrcinom, tiroidni karcinom, karcinom pankreasa, karcinom želuca, hepatoćelijski karcinom, leukemija, limfom, Hodžkinsova bolest i Burkitova bolest.
12 Farmaceutsko jedinjenje prema patentnom zahtevu 6 za upotrebu za lečenje HDAC posredovane bolesti, ili za upotrebu za lečenje bolesti posredovane pomoću PI3K i HDAC
13. Farmaceutsko jedinjenje prema patentnom zahtevu 8, za upotrebu u lečenju sa P13K povezanom bolešću ili poremećajem kod subjekta kom je potrebno.
14. Postupak prema patentnom zahtevu 13, pri čemu pomenuta bolest ili poremećaj srodan PI3K jeste proliferativni poremećaj ćelije, poremećaj, preporučljivo gde se proliferativni poremećaj ćelije kancer, kao što je papilom, blastogliom, Kapošijev sarkom, melanom, melanom. nemikrocelularni karcinom pluća, karinom jajnika, karcinom prostate, karcinom skvamoznih ćelija, astrocitom, karcinoma glave, karcinom vrata, karcinom bešike, karcinom dojke, karcinom pluća, kolorektalni kanrcinom, tiroidni karcinom, karcinom pankreasa, karcinom želuca, hepatoćelijski karcinom, leukemija, limfom, Hodžkinsova bolest i Burkitova bolest.
15. Farmaceutsko jedinjenje prema patentnom zahtevu 8 za upotrbu za lečenje HDAC posredovane bolesti, ili za upotrebu za lečenje bolesti posredovane pomoću PI3K i HDAC.
RS20160457A 2011-04-01 2012-03-30 Inhibitor fosfoinozitid 3 kinaze sa delom koji vezuje cink RS54903B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161470849P 2011-04-01 2011-04-01
US201161559489P 2011-11-14 2011-11-14
EP12764605.7A EP2694075B1 (en) 2011-04-01 2012-03-30 Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
PCT/US2012/031361 WO2012135571A1 (en) 2011-04-01 2012-03-30 Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS54903B1 true RS54903B1 (sr) 2016-10-31

Family

ID=46931927

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20160457A RS54903B1 (sr) 2011-04-01 2012-03-30 Inhibitor fosfoinozitid 3 kinaze sa delom koji vezuje cink
RSP20190842 RS59219B1 (sr) 2011-04-01 2012-03-30 Inhibitor fosfoinozitid 3 kinaze sa delom koji vezuje cink

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RSP20190842 RS59219B1 (sr) 2011-04-01 2012-03-30 Inhibitor fosfoinozitid 3 kinaze sa delom koji vezuje cink

Country Status (29)

Country Link
US (7) US8710219B2 (sr)
EP (2) EP3111938B1 (sr)
JP (3) JP6242331B2 (sr)
KR (2) KR20180108848A (sr)
CN (2) CN103582483B (sr)
AU (1) AU2012236367B2 (sr)
BR (1) BR112013025340B1 (sr)
CA (1) CA2830822C (sr)
CL (1) CL2013002823A1 (sr)
CY (2) CY1117785T1 (sr)
DK (2) DK3111938T3 (sr)
EA (1) EA022434B9 (sr)
ES (2) ES2733128T3 (sr)
HR (2) HRP20160545T1 (sr)
HU (2) HUE045041T2 (sr)
IL (2) IL228588A (sr)
LT (1) LT3111938T (sr)
ME (2) ME03523B (sr)
MX (1) MX340577B (sr)
PE (1) PE20141382A1 (sr)
PL (2) PL3111938T3 (sr)
PT (2) PT2694075T (sr)
RS (2) RS54903B1 (sr)
SG (2) SG193563A1 (sr)
SI (2) SI2694075T1 (sr)
SM (2) SMT201900435T1 (sr)
TW (1) TWI571469B (sr)
WO (1) WO2012135571A1 (sr)
ZA (2) ZA201307082B (sr)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2385832T3 (en) * 2009-01-08 2015-09-21 Curis Inc Phosphoinositid-3-kinase-inhibitorer med en zink-bindingsdel
PL3111938T3 (pl) * 2011-04-01 2019-09-30 Curis, Inc. Inhibitor 3-kinazy fosfoinozytydowej z grupą wiążącą cynk
AU2012339640B2 (en) 2011-11-14 2017-01-05 Ignyta, Inc. Uracil derivatives as AXL and c-MET kinase inhibitors
CN104725301A (zh) * 2013-12-20 2015-06-24 北京蓝贝望生物医药科技股份有限公司 一种1,2-二氢吡啶-2-酮衍生物的制备方法
CA2983042C (en) * 2015-04-21 2020-01-07 Lijuan Chen Purinyl-n-hydroxyl pyrimidine formamide derivative, preparation methods and uses thereof
US11142552B2 (en) * 2016-07-19 2021-10-12 National Institute Of Plant Genome Research Protein against fungal pathogens
MX2019004842A (es) * 2016-11-02 2019-06-20 Curis Inc Terapia de combinación con un inhibidor fosfoinositida 3-cinasa con un resto de unión a cinc.
WO2019090331A1 (en) * 2017-11-06 2019-05-09 Cold Spring Harbor Laboratory Method and compositions for forming a copper-containing complex and uses thereof
CN113164466B (zh) 2018-09-11 2025-07-08 柯瑞斯公司 使用具有锌结合部分的磷酸肌醇3-激酶抑制剂的联合治疗
EP3968215A1 (en) 2020-09-09 2022-03-16 Koninklijke Philips N.V. Determining target object type and position
WO2023212574A1 (en) * 2022-04-26 2023-11-02 Olivia Szu Hsieh Lee Nakaya Compositions and methods for modulating rhythmic activity of pacemaker cardiomyocytes

Family Cites Families (64)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4828991A (en) 1984-01-31 1989-05-09 Akzo N.V. Tumor specific monoclonal antibodies
US5369108A (en) 1991-10-04 1994-11-29 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Potent inducers of terminal differentiation and methods of use thereof
US5502187A (en) 1992-04-03 1996-03-26 The Upjohn Company Pharmaceutically active bicyclic-heterocyclic amines
US5497763A (en) 1993-05-21 1996-03-12 Aradigm Corporation Disposable package for intrapulmonary delivery of aerosolized formulations
US5508269A (en) 1994-10-19 1996-04-16 Pathogenesis Corporation Aminoglycoside formulation for aerosolization
US6777217B1 (en) 1996-03-26 2004-08-17 President And Fellows Of Harvard College Histone deacetylases, and uses related thereto
US6083922A (en) 1996-04-02 2000-07-04 Pathogenesis, Corp. Method and a tobramycin aerosol formulation for treatment prevention and containment of tuberculosis
US5767068A (en) 1997-02-13 1998-06-16 Pathogenesis Corporation Pure biologically active colistin, its components and a colistin formulation for treatment of pulmonary infections
US6608053B2 (en) 2000-04-27 2003-08-19 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Fused heteroaryl derivatives
CN100345830C (zh) 2000-04-27 2007-10-31 安斯泰来制药有限公司 稠合杂芳基衍生物
US7446109B2 (en) 2002-03-13 2008-11-04 Janssen Pharmaceutica N.V. Carbonylamino-derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
MXPA04007775A (es) 2002-03-13 2004-10-15 Janssen Pharmaceutica Nv Derivados de sulfonilo como novedosos inhibidores de la histona desacetilasa.
JP4725945B2 (ja) 2002-03-13 2011-07-13 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ ヒストンデアセチラーゼの新規な阻害剤としてのスルホニルアミノ誘導体
KR20040090979A (ko) 2002-03-13 2004-10-27 얀센 파마슈티카 엔.브이. 히스톤 데아세틸레이즈의 신규한 억제제
WO2004017950A2 (en) 2002-08-22 2004-03-04 Piramed Limited Phosphadidylinositol 3,5-biphosphate inhibitors as anti-viral agents
ZA200506611B (en) 2003-01-29 2006-12-27 Takeda Pharmaceutical Thienopyrimidine compounds and use thereof
CA2561617A1 (en) 2004-04-05 2005-10-20 Aton Pharma, Inc. Histone deacetylase inhibitor prodrugs
JP5213229B2 (ja) 2004-04-23 2013-06-19 エグゼリクシス， インコーポレイテッド キナーゼ調節因子および使用方法
EP1806347A4 (en) 2004-10-08 2009-07-01 Astellas Pharma Inc PYRIMIDINE DERIVATIVES FUSED WITH AN AROMATIC RING
GB0423653D0 (en) 2004-10-25 2004-11-24 Piramed Ltd Pharmaceutical compounds
EP2502649A1 (en) 2005-02-03 2012-09-26 TopoTarget UK Limited Combination therapy using HDAC inhibitors and erlotinib for treating cancer
CA2605272C (en) 2005-05-18 2013-12-10 Janssen Pharmaceutica N.V. Substituted aminopropenyl piperidine or morpholine derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
JP5247470B2 (ja) 2006-01-19 2013-07-24 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ ヒストンデアセチラーゼのインヒビターとしてのピリジン及びピリミジン誘導体
CN101370791B (zh) 2006-01-19 2012-05-02 詹森药业有限公司 作为组蛋白脱乙酰基酶抑制剂的吡啶和嘧啶衍生物
US7834011B2 (en) 2006-01-19 2010-11-16 Janssen Pharmaceutica N.V. Heterocyclylalkyl derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
PL2041139T3 (pl) * 2006-04-26 2012-05-31 Hoffmann La Roche Związki farmaceutyczne
KR101533461B1 (ko) 2006-04-26 2015-07-02 에프. 호프만-라 로슈 아게 Ｐｉ３ｋ저해제로 유용한 티에노［3,2-ｄ］피리미딘 유도체
MX2008013583A (es) 2006-04-26 2008-10-31 Genentech Inc Compuestos del inhibidor de fosfoinositido 3-cinasa y composiciones farmaceuticas que los contienen.
WO2007131364A1 (en) 2006-05-16 2007-11-22 Mcgill University Hybrid molecules having mixed vitamin d receptor agonism and histone deacetylase inhibitory properties
JP5580592B2 (ja) 2006-09-11 2014-08-27 キュリス，インコーポレイテッド 亜鉛結合部分を含むキナゾリン系ｅｇｆｒインヒビター
CA2662937A1 (en) 2006-09-11 2008-03-20 Curis, Inc. Multi-functional small molecules as anti-proliferative agents
US20080161320A1 (en) 2006-09-11 2008-07-03 Xiong Cai Fused bicyclic pyrimidines as ptk inhibitors containing a zinc binding moiety
CN101534831B (zh) 2006-09-11 2013-07-17 柯瑞斯公司 包含锌结合基团的取代的酪氨酸抑制剂
US7547781B2 (en) 2006-09-11 2009-06-16 Curis, Inc. Quinazoline based EGFR inhibitors containing a zinc binding moiety
AU2007296740B2 (en) 2006-09-11 2012-09-27 Curis, Inc. Substituted 2-indolinone as PTK inhibitors containing a zinc binding moiety
DK2343286T3 (en) 2006-10-28 2015-04-13 Methylgene Inc Dibenzo [b, f] [1,4] oxazepine derivatives as inhibitors of histone deacetylase
AR064154A1 (es) 2006-12-07 2009-03-18 Piramed Ltd Compuestos inhibidores de fodfoinostida 3- quinasas y composiciones farmaceuticas
PE20081679A1 (es) 2006-12-07 2008-12-18 Hoffmann La Roche Compuestos del inhibidor de fosfoinositida 3-cinasa y metodos de uso
US20100069458A1 (en) 2007-02-15 2010-03-18 Peter Wisdom Atadja Combination of lbh589 with other therapeutic agents for treating cancer
CN101674833A (zh) 2007-03-20 2010-03-17 柯瑞斯公司 含有锌结合半族的Raf激酶抑制剂
WO2009036057A1 (en) 2007-09-10 2009-03-19 Curis, Inc. Antiproliferative agents containing a zinc binding moiety
TW200922564A (en) 2007-09-10 2009-06-01 Curis Inc CDK inhibitors containing a zinc binding moiety
WO2009036066A1 (en) 2007-09-10 2009-03-19 Curis, Inc. Vegfr inhibitors containing a zinc binding moiety
TW200922590A (en) 2007-09-10 2009-06-01 Curis Inc VEGFR inhibitors containing a zinc binding moiety
WO2009036020A1 (en) 2007-09-10 2009-03-19 Curis, Inc. Mek inhibitors containing a zinc binding moiety
CA2699202C (en) 2007-09-12 2016-09-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Combinations of phosphoinositide 3-kinase inhibitor compounds and chemotherapeutic agents, and methods of use
WO2009042646A1 (en) 2007-09-24 2009-04-02 Curis, Inc. Anti-proliferative agents
EP2214675B1 (en) 2007-10-25 2013-11-20 Genentech, Inc. Process for making thienopyrimidine compounds
US20090149511A1 (en) 2007-10-30 2009-06-11 Syndax Pharmaceuticals, Inc. Administration of an Inhibitor of HDAC and an mTOR Inhibitor
WO2009086012A1 (en) 2007-12-20 2009-07-09 Curis, Inc. Aurora inhibitors containing a zinc binding moiety
EP2311842A3 (en) 2008-06-24 2011-07-13 Takeda Pharmaceutical Company Limited PI3K/M TOR inhibitors
WO2009155659A1 (en) 2008-06-27 2009-12-30 The University Of Queensland Combination therapy
US8196911B2 (en) 2008-10-27 2012-06-12 Honda Motor Co., Ltd. Adjustable rate subframe mount
DK2385832T3 (en) 2009-01-08 2015-09-21 Curis Inc Phosphoinositid-3-kinase-inhibitorer med en zink-bindingsdel
ES2629337T3 (es) 2009-02-09 2017-08-08 Inserm - Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale Anticuerpos contra PD-1 y anticuerpos contra PD-L1 y usos de los mismos
BRPI1006189A2 (pt) 2009-03-12 2020-08-18 Genentech Inc uso de uma combinação terapêutica, formulação farmacêutica, artigo de manufatura, produto, método para determinar compostos a serem utilizados em combinação para o tratamento de uma malignidade hematopoiética e método para selecionar compostos a serem utilizados em combinação para o tratamento de câncer
US20110086837A1 (en) 2009-10-12 2011-04-14 Genentech, Inc. Combinations of a pi3k inhibitor and a mek inhibitor
WO2011130628A1 (en) * 2010-04-16 2011-10-20 Curis, Inc. Treatment of cancers having k-ras mutations
PL3111938T3 (pl) * 2011-04-01 2019-09-30 Curis, Inc. Inhibitor 3-kinazy fosfoinozytydowej z grupą wiążącą cynk
US20130102595A1 (en) 2011-04-15 2013-04-25 Curis, Inc. Treatment of cancers having k-ras mutations
EA026924B1 (ru) 2011-08-01 2017-05-31 Дженентек, Инк. Способы лечения рака с использованием антагонистов, связывающихся с осью pd-1, и ингибиторов mek
JP6980980B2 (ja) 2015-06-25 2021-12-15 イミューノメディクス、インコーポレイテッドImmunomedics, Inc. 抗ｈｌａ‐ｄｒまたは抗ｔｒｏｐ‐２抗体と微小管阻害剤、ｐａｒｐ阻害剤、ブルトンキナーゼ阻害剤またはホスホイノシチド３‐キナーゼ阻害剤との併用は癌の治療効果を有意に改善する
MX2019004842A (es) * 2016-11-02 2019-06-20 Curis Inc Terapia de combinación con un inhibidor fosfoinositida 3-cinasa con un resto de unión a cinc.

Also Published As

Publication number Publication date
PT2694075T (pt) 2016-07-11
RS59219B1 (sr) 2019-10-31
US20170304279A1 (en) 2017-10-26
MX340577B (es) 2016-07-13
US20190091211A1 (en) 2019-03-28
SI2694075T1 (sl) 2016-07-29
US20140243330A1 (en) 2014-08-28
JP6242331B2 (ja) 2017-12-06
US9657032B2 (en) 2017-05-23
IL228588A (en) 2016-11-30
EP2694075A4 (en) 2014-10-01
JP2014509653A (ja) 2014-04-21
CA2830822A1 (en) 2012-10-04
HRP20160545T1 (hr) 2016-06-17
TWI571469B (zh) 2017-02-21
BR112013025340A2 (pt) 2016-12-13
DK2694075T3 (en) 2016-08-01
CY1117785T1 (el) 2017-05-17
WO2012135571A1 (en) 2012-10-04
SMT201600179B (it) 2016-08-31
KR20180108848A (ko) 2018-10-04
SG10201602569RA (en) 2016-05-30
ZA201406167B (en) 2015-03-25
TW201247678A (en) 2012-12-01
AU2012236367B2 (en) 2014-10-09
CN103582483A (zh) 2014-02-12
CN105461736A (zh) 2016-04-06
IL248597A0 (en) 2016-12-29
LT3111938T (lt) 2019-06-25
CN105461736B (zh) 2018-06-12
BR112013025340B1 (pt) 2021-12-21
US10111864B2 (en) 2018-10-30
KR101902325B1 (ko) 2018-09-28
US20200215039A1 (en) 2020-07-09
HK1194969A1 (zh) 2014-10-31
ZA201307082B (en) 2015-04-29
PL2694075T3 (pl) 2016-09-30
EP3111938A1 (en) 2017-01-04
ME02451B (me) 2016-09-20
ME03523B (me) 2020-04-20
AU2012236367A1 (en) 2013-04-18
ES2733128T3 (es) 2019-11-27
KR20140023333A (ko) 2014-02-26
US11654136B2 (en) 2023-05-23
US20130090335A1 (en) 2013-04-11
US9249156B2 (en) 2016-02-02
US10543197B2 (en) 2020-01-28
NZ615586A (en) 2015-02-27
NZ705039A (en) 2016-03-31
DK3111938T3 (da) 2019-07-01
SMT201900435T1 (it) 2019-09-09
IL228588A0 (en) 2013-12-31
CL2013002823A1 (es) 2014-04-11
EA022434B9 (ru) 2016-02-29
IL248597B (en) 2018-04-30
US20160185796A1 (en) 2016-06-30
ES2577982T3 (es) 2016-07-19
US20220168284A1 (en) 2022-06-02
PE20141382A1 (es) 2014-11-04
MX2013011132A (es) 2014-03-12
JP2016188255A (ja) 2016-11-04
HUE028910T2 (en) 2017-01-30
HUE045041T2 (hu) 2019-12-30
US11135205B2 (en) 2021-10-05
EP2694075B1 (en) 2016-04-27
EP3111938B1 (en) 2019-05-08
JP2018052987A (ja) 2018-04-05
PT3111938T (pt) 2019-07-10
EP2694075A1 (en) 2014-02-12
CN103582483B (zh) 2016-02-17
CA2830822C (en) 2018-10-02
JP6275784B2 (ja) 2018-02-07
SG193563A1 (en) 2013-11-29
US8710219B2 (en) 2014-04-29
PL3111938T3 (pl) 2019-09-30
SI3111938T1 (sl) 2019-08-30
EA022434B1 (ru) 2015-12-30
CY1121825T1 (el) 2020-07-31
HRP20191091T1 (hr) 2019-09-20
EA201301114A1 (ru) 2014-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11654136B2 (en) Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
RS54230B1 (sr) Inhibitori fosfoinozitid 3-kinaze sa delom koji vezuje cink
HK1232775A1 (en) Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
HK1232775B (en) Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
HK1194969B (en) Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
AU2014280913A1 (en) Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
NZ615586B2 (en) Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
NZ705039B2 (en) Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety