PT995755E - Pro.farmacos de inibidores de trombina - Google Patents

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David Gustafsson
Henrik Sorensen
Mikael Sellen
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Description

V
1 DESCRIÇÃO íj "PRO-FARMACOS DE INIBIDORES DE TROMBINA" Área da Invenção
Esta invenção relaciona-se com pró-fármacos farmaceuticamente úteis de compostos farmaceuticamente activos, compostos activos esses que, em particular, são inibidores competitivos de serino proteases semelhantes a tripsina, especialmente trombina, com a utilização dos pró-fármacos como medicamentos, com composições farmacêuticas que os contêm e com vias sintéticas para a sua produção.
Antecedentes A coagulação do sangue é um processo chave envolvido na hemostase (i.e. a prevenção da perda de sangue de um vaso lesionado) e na trombose (i.e. a formação de um coágulo sanguíneo num vaso sanguíneo, levando por vezes à obstrução do vaso). A coagulação é o resultado de uma série complexa de reacções enzimáticas. Um dos passos finais nesta série de reacções é a conversão da pró-enzima pró-trombina na enzima activa trombina.
Sabe-se que a trombina desempenha um papel central na coagulação. Activa as plaquetas, conduzindo à agregação de plaquetas, converte o fibrinogénio em monómeros de fibrina, que polimerizam espontaneamente em polímeros de fibrina, e activa o factor XIII, que por sua vez reticula os polímeros para formar fibrina insolúvel. Além disso, a trombina activa o factor V e o - 2 factor VIII conduzindo a uma produção de '"regeneração positiva'' de trombina a partir de pró-trombina.
Inibindo a agregação de plaquetas e a formação e , 5 a reticulação de fibrina, seria portanto de esperar que os inibidores de trombina eficazes apresentassem actividade antitrombótica. Além disso, seria de esperar que a actividade antitrombótica fosse acentuada pela inibição eficaz do mecanismo de regeneração positivo. 10
Estado da Técnica O desenvolvimento de inibidores de trombina de baixo peso molecular foi descrito por Claesson em Blood 15 Coagul. Fihrin. (1994) 5, 411.
Blomback et al. (em J. Clin. Lab. Invest. 24, suppl. 107, 59 (1969)), descreveram inibidores de trombina baseados na sequência de amino ácidos situada 20 em torno do sítio de clivagem para a cadeia Aa do fibrinogénio. Das sequências de amino ácidos discutidas, estes autores sugerem que a sequência tripeptídica Phe-Val-Arg seria o inibidor mais eficaz. 25 Subsequentemente foram descritos inibidores de trombina com base em péptidos de baixo peso molecular, por exemplo, na Patente US N° 4.346.078; Pedidos de Patente internacional WO 93/11152, WO 94/29336, WO 93/18060 e WO 95/01168; e Pedidos de Patente Europeia 30 648 780, 468 231, 559 046, 641 779, 185 390, 526 877, 542 525, 195 212, 362 002, 364 344, 530 167, 293 881, 686 642 e 601 459.
Mais recentemente, foram descritos inibidores de 35 trombina baseados em derivados peptídicos no Pedido de Patente Europeia 0 669 317 e Pedidos de Patente
Internacional WO 95/23609, WO 95/35309, WO 96/25426 e WO 94/29336. - 3 - I * ϊ )
Em particular, o último pedido descreve derivados peptídicos RaOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-H, em que Ra representa H, benzilo ou Ci-g alquilo. 5 Embora se saiba que estes compostos activos apresentam actividade antitrombina significativa, seria vantajoso melhorar as suas propriedades farmacoci-néticas tanto após administração oral como parentérica. Exemplos de propriedades farmacocinéticas que é desejá-10 vel melhorar incluem:
(a) proporcionar uma absorção melhorada a partir do tracto gastrointestinal, com o objectivo de reduzir a variabilidade intra- e/ou inter-individual em relação à biodisponibilidade dos compostos activos; (b) fazer baixar o perfil da concentração no plasma vs. tempo (i.e. reduzindo a proporção mãxi-mo/mínimo da concentração no plasma ao longo do inter-20 valo de administração), com o objectivo de reduzir o risco de cair fora do intervalo terapêutico e os efeitos secundários provocados por um pico de concentração que é excessivamente elevado (e.g. hemorragia), e os provocados por um que ê excessivamente baixo (e.g. 25 formação de trombos); e (c) activos. aumentar a duração de acção dos compostos 30
Além disso, a administração oral e parentérica de inibidores de trombina activos pode levar a hemorragia local indesejada (e.g. no lúmen intestinal ou subcuta-neamente) como resultado de uma concentração local elevada. se
Finalmente, os inibidores de trombina activos administrados oralmente que também inibem tripsina e outras serino proteases no tracto gastrointestinal podem apresentar efeitos secundários adicionais, incluindo indigestão (e.g. se a tripsina for inibida no lúmen intestinal). 35 - 4
Embora certos derivados de N-benziloxicarbonilo dos compostos activos anteriormcnte referidos também estejam descritos como inibidores de trombina no Pedido de Patente Internacional WO 94/29336, não é referido que estes derivados podem ser úteis como pró-fármacos. De facto, o WO 94/29336 não faz referência a pró-fãrmacos adequados dos compostos activos.
Verificou-se que os problemas acima referidos podem ser solucionados por administração dos compostos de acordo com a presente invenção que, embora inactivos per se, por administração oral e/ou parentérica são metabolisados no organismo para formar inibidores de trombina activa, incluindo os referidos acima.
Descrição da Invenção
De acordo com a invenção é proporcionado um composto de fórmula I,
R10(0)C-CH2- (i?) Cgl-Aze-Pab-R2 I em que R·*· representa -R3 ou -A^-C (0)N (R^) R^ ou -A^C(0)0R^; representa C1-5 alcileno; R2 (que substitui um dos átomos de hidrogénio na unidade amidino de Pab-H) representa OH, OC(0)R6, C (O) OR7 ou C(0)OCH(R8)OC(O)R9; R3 representa H, Ci-io alquilo, ou C1-3 alquilfenilo (em que este último grupo é opcionalmente substituído por Ci_6 alquilo, Ci-6 alcoxi, nitro ou halogéneo) ,-
\ί VI R4 e R5 representam independentemente H, Ci_6 alquilo, fenilo, 2-naftilo ou, quando R1 representa -A^C(O)N(R4)R5, conjuntamente com o átomo de azoto ao qual estão ligados representam pirrolidinilo ou piperidinilo; R^ representa Ci-17 alquilo, fenilo ou 2-naftilo (de que todos são opcionalmente substituídos por c±~q alquilo ou halogéneo); R7 representa 2-naftilo, fenilo, C1-3 alquilfenilo (em que estes três últimos grupos são opcionalmente substituídos por Ci_6 alquilo, C±-s alcoxi, nitro ou halogéneo), ou Ci_i2 alquilo (em que este último grupo é opcionalmente substituído por Ci-6 alcoxi, C1-6 aciloxi ou halogéneo); R® representa H ou C1-4 alquilo; e R9 representa 2-naftilo, fenilo, C1-6 alcoxi ou C1-8 alquilo (em que este último grupo é opcionalmente substituído por halogéneo, C1-6 alcoxi ou C±-s aciloxi); desde que quando R1 representa R3, R3 represente benzilo, metilo, etilo, n-butilo ou π-hexilo e R2 representa C(0)0R7, então R7 não representa benzilo,· ou um seu sal farmaceuticamente aceitável (daqui em diante designados como "os compostos da invenção1').
Os compostos da invenção podem apresentar tautomeria. Todas as formas tautoméricas e suas misturas estão incluídas no âmbito da invenção.
Os compostos da invenção também podem conter um ou mais átomos de carbono assimétricos e podem portanto apresentar isomeria óptica ou diastereoisomeria. Todos os diastereoisómeros podem ser separados utilizando técnicas convencionais, e.g. cromatografia ou cristalização fraccionada. Os vários
estereoisómeros podem ser isolados por separação de uma mistura racémica ou outra dos compostos utilizando técnicas convencionais, e.g. cristalização fraccionada ou HPLC. Alternativamente os isómeros ópticos desejados podem ser feitos por reacção dos materiais de partida opticamente activos apropriados em condições que não provoquem racemização ou epimerização, ou por deriva-tização, por exemplo com um ácido homoquiral seguida por separação dos derivados diastereoméricos por meios convencionais (e.g. HPLC, cromatografia em sílica). Todos os estereoisómeros estão incluídos no âmbito da invenção.
De acordo com um aspecto adicional da invenção é proporcionada a utilização de um composto de fórmula I, tal como aqui definido anteriormente mas sem o condicionalismo, como um pró-fármaco.
Os grupos alquilo que R3, R4, R5, R®, R7 e R^ podem representar podem ser lineares ou, quando existe um número suficiente de átomos de carbono, ser ramificados, ser cíclicos ou parcialmente cíclicos, ser saturados ou insaturados, ser interrompidos por oxigénio e/ou ser substituídos ou terminados por OH, desde que o grupo OH não esteja ligado a um átomo de carbono sp^ ou a um átomo de carbono que está adjacente a um átomo de oxigénio. '"Grupos alquilo parcialmente cíclicos" significa grupos tais como CH2CI1.
Os grupos alquilo que R8 pode representar, e R3, r6 e R7 podem ser substituídos por, podem ser lineares ou, quando existe um número suficiente de átomos de carbono, ser ramificados, ser saturados ou insaturados e/ou ser interrompidos por oxigénio. A porção alquilo de grupos alquilfenilo que R3 e R7 podem representar pode ser linear ou, quando existe um número suficiente de átomos de carbono, ser ramificada e/ou ser saturada ou insaturada.
Os grupos alcileno que A1 podem representar podem ser lineares ou, quando existe um número suficiente de átomos de carbono, ser ramificados e/ou ser saturados ou insaturados.
Os grupos alcoxi que R9 pode representar, e R^, R7 e R9 podem ser substituídos por, podem ser lineares ou, quando existe um número suficiente de átomos de carbono, ser ramificados e/ou ser saturados ou insaturados. Os grupos aciloxi que R7 e R9 podem representar podem ser substituídos por , podem ser lineares ou, quando existe um número suficiente de átomos de carbono, ser ramificados e/ou ser saturados ou insaturados.
As abreviaturas estão listadas no final desta especificação.
De acordo com um aspecto adicional da invenção é proporcionado um composto de fórmula I, tal como aqui definido anteriormente, com as condições adicionais de que: (a) R1 não representa -A^C(0)OR4; (b) R4 e R5 independentemente não representam H; (c) r6 não representa Ci-17 alquilo, quando R2 representa 0C(0)r6.
De acordo com um aspecto adicional da invenção é proporcionado um composto de fórmula I, em que: (a) R1 representa -A1C(0)0R4; 8 8 l· u t \1 (b) R4 e R5 independentemente representam H; (c) R^ representa C1-17 alquilo, quando R2 5 representa OC(0)R6.
Quando R1 representa -A^-C (0) N(R4) R5, compostos preteridos da invenção Incluem aqueles em que: 10 A1 representa C1-3 alcileno; R4 representa H ou Ci_6 alquilo; 15 R5 representa C±-ç alquilo ou C4-6 cicloalquilo; ou aqueles em que R4 e r5 conjuntamente representam pirrolidinilo.
Quando R1 representa -A^-C(0)OR4, compostos 20 preferidos da invenção incluem aqueles em que: A1 representa C1-5 alcileno; R4 representa C1-6 alquilo. 25 30
Quando R1 representa R^, compostos preferidos da invenção incluem aqueles em que R3 representa H, Ci-10 alquilo (em que este último grupo pode ser linear ou, quando existe um número significativo de átomos de carbono, pode ser ramificado e/ou ser parcialmente cíclico ou cíclico) , ou C1-3 alquilfenilo (em que este último grupo é opcionalmente substituído, pode ser linear ou, quando existe um número suficiente de átomos de carbono, ser ramificado).
Compostos preferidos da invenção incluem aqueles em que R2 representa OH, 0C(0)R^ (em que, neste último caso, R^ representa fenilo opcionalmente substituído ou C1-17 alquilo (em que este 35 ]- Ll --£* il ’
- 9 - 'J último grupo pode ser linear ou, quando existe um numero suficiente de átomos de carl)ono, pode ser ramificado, ser cíclico ou parcialmente cíclico, e/ou ser saturado ou insaturado), C(0)0R7 (em que, no último caso, R7 representa fenilo opcionalmente substituído, Ci-12 alquilo (em que este último grupo é opcionalmente substituído, pode ser linear ou, quando existe um número suficiente de átomos de carbono, pode ser ramificado, ser cíclico ou parcialmente cíclico, e/ou ser saturado ou insaturado), ou c3 alquilfenilo (em que este último grupo é opcionalmente substituído, pode ser lineár ou, quando existe um número suficiente de átomos de carbono, pode ser ramificado) ) , ou C(O)OCH(R8)OC(0)R^ (em que, neste último caso, R8 representa H ou metilo, e R^ representa fenilo, ou Ci-8 alquilo (em que este último grupo é opcionalmente substituído, pode ser linear ou, quando existe um número suficiente de átomos de carbono, pode ser ramificado e/ou cíclico ou parcialmente cíclico)).
Compostos mais preferidos da invenção incluem aqueles em que:
Rl representa H, Ci_io alquilo linear, C3-10 alquilo ramificado, C4-10 alquilo parcialmente cíclico, C4-10 cicloalquilo, C1-3 alquilfenilo linear opcionalmente substituído, C3 alquilfenilo ramificado opcionalmente substituído, -A^-C (O) N (R4) R^ (em que, no último caso, A 4 representa C1-3 alcileno, e R4 representa H ou C1-3 alquilo e R5 representa C2-6 alquilo ou Cs_6 cicloalquilo, ou R4 e R5 conjuntamente representam pirro-lidinilo) , ou -A^CÍOÍOR4 (em que, no último caso, A1 representa C1-5 alcileno e R4 representa C1-4 alquilo); R^ representa OH, 0C(0)r6 (em que, no último caso, R6 representa fenilo opcionalmente substituído, C1-4 alquilo linear, C3-4 alquilo ramificado ou cis-oleílo), C(0)OR7 (em que, no último caso, R7 representa opcionalmente C1-4 alquilo opcionalmente substituído e/ou opcionalmente insaturado ou C3-4 alquilo
- 10 - opcionalmente substituído e/ou opcionalmente insatura-do, fenilo opcionalmente substituído, ou C1-3 alquilfe-nilo linear opcionalmente substituído ou C3 alquilfenilo ramificado opcionalmente substituído) ou C(0)0CH-5 (R8)0C(0)R9 (em que, no último caso, R8 representa H ou metilo e R® representa fenilo, C5-7 cicloalquilo, Ci-g alquilo linear, C3-6 alquilo ramificado ou C7-8 alquilo parcialmente cíclico). 10 Compostos particularmente preferidos da invenção incluem aqueles em que: R1 representa C1-6 alquilo linear, C6-10 cicloalquilo, ou C1-3 alquilfenilo linear opcionalmente substituído; 15 20 25 30 35 r2 representa OH, 0C(0)R6 (em que, no último caso, R6 representa C1-3 alquilo linear ou C3 alquilo ramificado) , C(0)0R7 (em que, no último caso, R7 representa Ci-4 alquilo linear opcionalmente substituído ou C3-4 alquilo ramificado opcionalmente substituído, C1-3 alquilfenilo linear opcionalmente substituído ou C3 alquilfenilo ramificado) ou C (O) OCH (R8) OC (O) R9 (em que, no último caso, R8 representa H e R^ representa fenilo, C5-7 cicloalquilo, Ci_g alquilo linear ou C7-8 alquilo parcialmente cíclico). Quando R1 representa R3 e R3 representa Cp-3 alquilfenilo opcionalmente substituído, substituintes opcionais preferidos incluem C1-6 alquilo (especialmente metilo). Quando R2 representa C(O)OR7 e R7 representa Cl-12 alquilo opcionalmente substituído, substituintes opcionais preferidos incluem halogéneo (especialmente cloro) e Ci-6 alcoxi (especialmente metoxi). Quando R2 representa C(0)0R7 e R7 representa fenilo opcionalmente substituído, substituintes opcionais preferidos incluem Ci-β alquilo (especialmente metilo), Ci-6 alcoxi (especialmente metoxi) e halogéneo (especialmente cloro). 40 11 r"
Quando R2 representa C(0)OR7 e R7 representa C1-3 alquilfenilo opcionalmente substituído, substituintes opcionais preferidos inoluem nitro. 5 Os compostos preferidos da invenção incluem os compostos dos Exemplos 1 a 68. 10 20 25 30
Os compostos mais preferidos da invenção incluem: Et00CCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2CH=CH2; nPrOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-C00CH2CH=CH2; tBuOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2CH=CH2;
EtOOCCH2- (R) Cgl -Aze - Pab - COOEt ;
EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu;
PrlC(O)CH2 CH2 CH2 OOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z;
ChNHC(O)CH2OOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z; (nPr)2NC(O)CH2OOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2OOCC (CH3)3; EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2OOCC(CH3)3;
EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH3)OOCCH3;
MeOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh;
MeOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;
EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;
BnOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH; nPrOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z; nPrOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH; iPrOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH; tBuOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH; (nPr)2NCOCH2OOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;
ChNHCOCH2OOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;
EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OAc; HOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH; HOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-O-cis-Oleílo;
Ciclooctil-OOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z; tBuCH2OOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z; (2-Me)BnOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z;
ChCH2 OOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z;
ChOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z; 35 12
PhC(Me)2OOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z; (Me) 2CHC(Me)2OOCCH2-{R)Cgl-Aze-Pab-Z;
BnOOCCH2- (i?) Cgl-Aze-Pab-COOPh (4-OMe) ;
ChCH200CCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe); (2-Me)BnOOCCH2- (R) Cgl-Aze-Pab-COOPh (4-OMe) ;
EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me);
BnOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me);
BnOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu iPrOOCCH2-{R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2CH=CH2;
EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-iBu; B11OOCCH2- (R) Cgl-Aze-Pab-COO-nPr;
EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2 OOCCh;
EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2OOCCH2 Ch;
EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(Me)OOCPh;
EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2OOCPh;
BnOOCCH2-(£)Cgl-Aze-Pab-COOCH(Me)OAc;
EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2 OAc; tBuOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-C00CH20Ac;
MeOOC-C (=CHEt) CH2 -OOCCH2 - (i?) Cgl - Aze-Pab-Z ;
Men-OOCCH2- (J?) Cgl-Aze-Pab-COOPh (4-OMe) ; e EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2CCl3.
Compostos particularmente preferidos da invenção incluem:
EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2CCl3;
BnOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOnBu; nPrOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z;
Ciclooctil-OOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z;
EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2 OOCCh;
MeOOCCH2-{R)Cgl-Aze-Pab-OH;
EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH; nPrOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH; íPrOOCCH2-{R)Cgl-Aze-Pab-OH;
BnOOCCH2_(R)Cgl-Aze-Pab-OH; e EtOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OAc. 13
Preparação
De acordo com a invenção também é proporcionado um processo para a preparação de compostos de fórmula I 5 que compreende: (a) Preparação de um composto de fórmula I em que representa OH por reacção de um correspondente composto de fórmula I, em que R2 representa 0C(0)R6 e 10 R6 é como aqui definido anteriormente, com uma base alcóxido (e.g. um alcóxido de um metal alcalino), por exemplo à temperatura ambiente na presença de um solvente orgânico apropriado (e.g. THF). 15 (b) Preparação de um composto de fórmula I em que R2 representa OH por reacção de um correspondente composto de fórmula I, em que R2 representa C(O)OR7 e R7 é como aqui definido anteriormente, com hidroxilamina, ou com um seu sal de adição de ácido, 20 por exemplo à temperatura ambiente na presença de uma base adequada (e.g. carbonato de potássio ou trietilamina) e um solvente orgânico apropriado (e.g. THF ou EtOH). 25 (c) Preparação de um composto de fórmula I por
reacção de um correspondente composto de fórmula II
II H- (R) Cgl-Aze-Pab-R2
30 em que R2 é como aqui definido anteriormente com um composto de fórmula III
III R-^-O (O) C-CH2 -L1 35 em que L1 representa um grupo de saída, por exemplo halogeneto (e.g. brometo) ou alquilsulfonato (e.g. trif luorometilsulfonato) e R^- é como aqui definido anteriormente, por exemplo entre a temperatura ambiente e temperatura elevada (e.g. 40°C) na presença de uma base adequada (e.g. carbonato de potássio) e de um solvente orgânico apropriado (e.g. THF, DMF ou acetonitrilo). (d) Preparação de um composto de fórmula I em que R1 representa H e R2 representa OH ou C (O) OR7 e R7 é como aqui definido anteriormente, por reacção com um correspondente composto de fórmula I em que rA representa Οχ_ιο alquilo ou C1-3 alquilfenilo, e R2 representa OH ou C(0)0R7, com uma base adequada (e.g. um alcóxido ou hidróxido de um metal alcalino), por exemplo à temperatura ambiente na presença de um solvente orgânico apropriado (e.g. água ou MeOH). (e) Preparação de um composto de fórmula I em que R2 representa 0C(0)R^ e é como aqui definido anteriormente, por reacção de um correspondente composto de fórmula I em que R2 representa OH, com um composto de fórmula IV, R6C(0)-0-C(0)R6 IV ou com um composto de fórmula V,
R6C(0)Hal V em que Hal representa Cl ou Br e, em ambos os casos, R6 é como aqui definido anteriormente, por exemplo à temperatura ambiente na presença de uma base adequada (e.g. trietilamina, piridina ou DMAP) e de um solvente orgânico apropriado (e.g. cloreto de metileno ou THF).
(f) Preparação de um composto de fórmula I em que R1 representa H e R2 representa 0C(0)R6, e R6 é como aqui definido anteriormente, por reacção de um correspondente composto de fórmula VI
VI P^-CKO) C-CH2- (R) Cgl-Aze-Pab-R2 15 15 t Γ~ ^^ \Ι em que Ρ1 representa um grupo protector éster lábil a ácidos (e.g. tBu ou Bn) , e R2 representa 0C(0)R6, em qiip é como aqui definido anteriormente, com um ácido adequado (e.g. TFA), por exemplo à temperatura ambiente na presença de um solvente orgânico apropriado (e.g. cloreto de metileno). (g) Preparação de um composto de fórmula I em que R1 representa R2, R2 representa Ci_io alquilo ou C1-3 alquilfenilo, R2 representa OH ou C(0)0R7, e R7 é como aqui definido anteriormente, por uma transesterificação de um correspondente composto de fórmula VII,
Rla0(0)C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-R2 VII em que R^a representa um grupo Ci-io alquilo ou C1-3 alquilfenilo diferente do que o que está a ser formado e R2 é como aqui definido anteriormente ou um substituinte alquilo lábil alternativo, em condições que são bem conhecidas pelos especialistas na matéria.
Os compostos de fórmula II podem ser preparados por desprotecção de um composto de fórmula VIII,
VIII
Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-R2 em que R2 é como aqui definido anteriormente, em condições bem conhecidas pelos especialistas na matéria.
Os compostos de fórmula VI e VII podem ser preparados analogamente aos métodos aqui descritos anteriormente para a preparação de compostos de fórmula I, em que R1 representa R3 e R3 representa C1-10 alquilo ou C1-3 alquilfenilo.
Os compostos de fórmula VIII podem ser preparados por reacção de um composto de fórmula IX,
IX H-Pab-R2 em que R2 ê como aqui definido anteriormente com Boo-Cgl-Aze-OH, por exemplo à temperatura ambiente na presença de um sistema de acoplamento adequado (e.g. EDC) , uma base apropriada (e.g. DMAP) e um solvente orgânico adequado (e.g. diclorometano ou acetonitrilo.
Os compostos de fórmula VIII, em que R2 representa OH podem ser preparados por reacção de um correspondente composto de fórmula VIII, em que R2 representa C(0)0R7 ou C(0)OCH(R8)OC(O)R9, como hidroxi-lamina, ou com um seu sal de adição de ácido, por exemplo à temperatura ambiente na presença de uma base adequada (e.g. carbonato de potássio ou trietilamina) e de um solvente orgânico apropriado (e.g. THF ou EtOH).
Os compostos de fórmula VIII, em que R2 representa C(O)0R7 ou C(0)OCH(R8)OC(O)R9, podem ser preparados por reacção de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H com um composto de fórmula X,
L2C(0)OR2a X em que L2 representa um grupo de saída (e.g. halogéneo ou fenolato) e R2a representa R7 ou -CH (R8) OC (O) R9 e R7, R8 e R9 são como aqui definidos anteriormente, por exemplo à ou abaixo da temperatura ambiente na presença de uma base adequada (e.g. NaOH) e de um solvente orgânico apropriado (e.g. THF).
Os compostos de fórmula VIII, em que R2 uma representa OC(O)R6 podem ser preparados alternativamente por reacção de um correspondente composto de fórmula VIII, em que R2 representa OH com um composto de fórmula IV tal como aqui definido anteriormente ou com um composto de fórmula V tal como aqui definido anteriormente, por exemplo à temperatura ambiente na presença de base adequada (e.g. trietilamina, piridina ou 17 p u ^^ DMAP) e de um solvente orgânico apropriado (e.g. cloreto de metileno ou THF).
VIII, em que R2 ser preparados Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H
Os compostos de fórmula representa 0C(0)R8 podem alternativamente por reacção de
com um composto de fórmula XI
R6C(0)-0-0-C(0)R6 XI em que R6 é como aqui definido anteriormente, por exemplo à temperatura ambiente na presença de um solvente orgânico apropriado (e.g. THF).
Os compostos de fórmula VIII em que R2 representa OH podem ser preparados por reacção de um correspondente composto de fórmula VIII, em que R2 representa 0C(0)R^ e R*> é como aqui definido anteriormente com uma base adequada (e.g. um alcóxido de um metal alcalino), por exemplo à temperatura ambiente na presença de um solvente orgânico apropriado (e.g. THF).
Os compostos de fórmula IX são bem conhecidos na literatura ou podem ser preparados utilizando métodos análogos aos aqui descritos anteriormente. Por exemplo, os compostos de fórmula IX em que R2 representa C(0)0R7 ou C(0)0CH(R8)OC(O)R9 e R7, R8 e R9 são como aqui definidos anteriormente podem ser preparados por reacção de H-Pab-H, ou um seu derivado protegido, com um composto de fórmula X, tal como aqui definido anteriormente, por exemplo à ou abaixo da temperatura ambiente na presença de uma base adequada (e.g. NaOH) e de um solvente orgânico apropriado (e.g. THF) . 0 Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H pode ser preparado por reacção de H-Pab-H, ou de um seu derivado protegido, com Boc-Cgl-Aze-OH, por exemplo tal como aqui descrito anteriormente para compostos de fórmula VIII. . 5 V - 18
Vi
0 Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H pode ser preparado alternativamente por desproteoção de um mmposto de fórmula XII,
Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-P2 XII em que P2 representa um grupo protector ortogonal a Boc, em condições que são bem conhecidas pelos 10 especialistas na matéria.
Os compostos de fórmula III, IV, V, X, XI e XII estão disponíveis comercialmente, são conhecidos da literatura, ou estão disponíveis utilizando técnicas 15 conhecidas (e.g. tal como aqui descritas adiante).
Os compostos da invenção podem ser isolados das suas misturas reaccionais utilizando técnicas convencionais. 20
Será entendido pelos especialistas na matéria que no processo descrito acima os grupos funcionais de compostos intermediários podem necessitar de ser protegidos por grupos protectores. 25
Grupos funcionais que ê desejável proteger incluem hidroxilo, amino, amidino e ácido carboxílico. Grupos protectores adequados para hidroxilo incluem grupos trialquilsililo e diarilsililo (e.g. t-butil-30 dimetilsililo, t-butildifenilsililo ou trimetilsililo) e tetrahidropiranilo. Grupos protectores adequados para ácido carboxílico incluem ésteres Ci-6 alquílicos ou benzilicos. Grupos protectores adequados para amino e amidino incluem t-butiloxicarbonilo ou benziloxi carbo- 35 nilo. Os azotos de amidino podem ser mono ou diprote-gidos.
Os grupos protectores podem ser removidos de acordo com técnicas que são bem conhecidas pelos 40 especialistas na matéria, tais como as aqui descritas adiante. Γ-' L· ^ - 19 - A utilização de grupos protectores está completamente descrita em "Protective Groups in Organic Che-mistry'1, editado por J. W. F. McOmie, Plenum Press (1973), e "Protective Groups in Organic Synthesis", 2a edição, T. W. Greene & P. G. M. Wutz, Wiley-Interscie-nce (1991).
Utilização médica e farmacêutica
Os compostos da invenção são úteis porque são metabolisados no organismo para formar compostos que possuem actividade farmacológica. Estão portanto indicados como fármacos e em particular como pró-fármacos.
Em particular, os compostos da invenção, embora per se sejam inactivos à trombina, são metabolisados no organismo para formar inibidores potentes de trombina, por exemplo tal como demonstrado no ensaio descrito adiante.
Por '"os compostos da invenção per se são
inactivos para a trombina11 significa-se que apresentam um valor de ICsoTT, tal como determinado no Ensaio A adiante, superior a 1 μΜ.
Prevê-se assim que os compostos da invenção sejam úteis em condições em que é necessária a inibição de trombina.
Os compostos da invenção estão pois indicados no tratamento profilático e/ou terapêutico de trombose e hipercoagulabilidade em sangue e tecidos de animais incluindo o homem.
Sabe-se que a hipercoagulabilidade pode conduzir a doenças trombo-embólicas. As doenças trombo-embólicas que podem ser referidas incluem resistência a proteína C activada, tal como a mutação do factor V (factor V Leiden), e deficiências hereditárias ou adquiridas em antitrombina III, proteína c, proteína S, cofactor II de heparina. Outras patologias rr - 20 - li ! .
t conhecidas como estando associadas à hipercoagulabi-lidade e doenças trombo-embólicas incluem anticorpos antifosfolípidos circulantes (Lupus anticoagulante), homocisteínemia, tromocitopenia induzida por heparina e deficiências na fibrinólise. Os compostos da invenção estão por isso indicados para o tratamento terapêutico e/ou profilático destas patologias.
Os compostos da invenção estão adicionalmente indicados no tratamento de patologias em que existe um excesso indesejado de trombina sem sinais de hipercoagulabilidade, por exemplo em doenças neurodegenerativas tais como a doença de Alzheimer.
Estados patológicos particulares que podem ser referidos incluem o tratamento terapêutico e/ou profilático da trombose venosa e embolia pulmonar, trombose arterial (e.g. no enfarte do miocárdio, angina instável, derrame com base em trombose e trombose arterial periférica) e embolia sistémica geralmente do átrio durante a fibrilação arterial ou do ventrículo esquerdo após enfarte do miocárdio transmural.
Além disso, prevê-se que os compostos da invenção tenham utilidade na profilaxia da re-oclusão {i.e. trombose) após trombólise, angioplastia trans-luminal percutânea (PTA) e operações de '"by-pass§ coronário; na prevenção da re-trombose após microcirurgia e na cirurgia vascular em geral.
Indicações adicionais incluem o tratamento terapêutico e/ou profilático da coagulação intravascular disseminada provocada por bactérias, politraumatís-mo, intoxicação ou quaisquer outros mecanismos; o tratamento anticoagulante quando o cangue está em contacto com superfícies estranhas no corpo tais como enxertos vasculares, "stents" vasculares, cateteres vasculares, válvulas prostéticas mecânicas e biológicas ou qualquer outro dispositivo médico; e o tratamento anticoagulante quando o sangue está em contacto com dispositivos médicos no - 21 - 21 t Γ“ ^ li exterior do corpo tal como durante a cirurgia vascular utilizando uma máquina coração-pulmão ou na hemodiálise. ' 5 Para além dos seus efeitos sobre o processo de coagulação, sabe-se que a trombina activa um grande número de células (tais como neutrofilos, fibroblastos, células endoteliais e células dos músculos lisos). consequentemente, os compostos da invenção também podem 10 ser úteis para o tratamento terapêutico e/ou profilático da síndrome de esforço respiratório no adulto e idiopático, fibrose pulmonar na sequência de tratamento com radição ou quimioterapia, choque séptico, septicemia, respostas inflamatórias, que incluem, mas não 15 estão limitadas a, edema, aterosclerose aguda ou crónica tal como doença arterial coronária, doença arterial cerebral, doença arterial periférica, lesão de reperfu-são, e restenose após angioplastia trans-luminal percu-tânea (PTA). 20
Os compostos da invenção que inibem tripsina e/ou trombina também podem ser úteis no tratamento da pancreatite. 25 De acordo com um aspecto adicional da presente invenção, é proporcionado um método de tratamento de uma patologia em que é necessária a inibição de trombina, método esse que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de 30 fórmula I tal como definido acima, ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, a uma pessoa que sofre de, ou é susceptível a, essa patologia.
Os compostos da invenção serão normalmente admi-35 nistrados oralmente, bucalmente, rectalmente, dermicamente, nasalmente, traquealmente, bronquialmente, por qualquer outra via parentérica ou através de inalação, na forma de preparações farmacêuticas compreendendo o pró-fármaco como base 4 0 livre, ou como um sal de adição de um ácido orgânico ou inorgânico não-tóxico farmaceuticamente aceitável, numa forma de dosagem farmaceuticamente aceitável. Dependendo da doença e do doente a ' ·~ ser tratado e da via de administração, as composições podem ser adminitradas em doses variadas.
Os compostos da invenção também podem ser combinados e/ou co-administrados com qualquer agente antitrombótico com um mecanismo de acção diferente, tal como os agentes antiplaquetas ácido acetilsalicílico, ticlopidina, clopidogrel, inibídores de receptores de tromboxano e/ou sintetase, antagonistas de receptores de fibrinogénio, miméticos de prostaciclinas e inibi-dores de fosfodiesterases e antagonistas de receptores de ADP (P2T).
Os compostos da invenção podem ser adicionalmente combinados e/ou co-administrados com trombolíticos tais como activador de plasminogénio dos tecidos (natural ou recombinante), estreptoquinase, uroquinase, prouroqui-nase, complexo activador de plasminogénio e estreptoquinase anisolada (ASPAC), activadores de plasminogénio das glândulas salivares de animais, e outros semelhantes, no tratamento de doenças trombóticas, em particular enfarte do miocárdio.
De acordo com um aspecto adicional da invenção é assim proporcionada uma formulação farmacêutica incluindo um composto de fórmula I tal como aqui definido anteriormente, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em combinação com um adjuvante, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
As doses diárias adequadas dos compostos da invenção no tratamento terapêutico de seres humanos são de cerca de 0,001-100 mg/kg de peso corporal na administração perorai e 0,001-50 mg/kg de peso corporal na administração parentérica.
Os compostos da invenção têm a vantagem de poderem ter propriedades farmacocinéticas melhoradas, tais como as aqui identificadas anteriormente, tanto após administração oral como parentérica, em comparação com compostos de fórmula:
RaO(O)C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-H cm que Ra é como aqui definido anteriormfinte, e em particular o composto em que Ra representa H.
Os compostos da invenção são inactivos para a trombina, tripsina e outras serino proteases. Os compostos permanecem por isso inactivos no tracto gastrointestinal e podem assim ser evitadas as complicações potenciais experimentadas com anticoagulantes administrados oralmente que são activos per se, tais como hemorragia e indigestão resultantes da inibição de tripsina.
Além disso, a hemorragia local associada à e depois da administração parentérica de um inibidor de trombina activo pode ser evitada por utilização dos compostos da invenção.
Os compostos da invenção também podem ter a vantagem de serem mais eficazes, serem menos tóxicos, terem uma actuação mais prolongada, terem uma gama de actividade mais larga, produzirem menos efeitos secundários, serem mais facilmente absorvidos, ou poderem ter outras propriedades farmacológicas úteis em relação a compostos conhecidos do estado da técnica.
Ensaios Biológicos
Ensaio A
Determinação do Tempo de Coagulação de Trombina (TT)
Incubou-se trombina humana (T 6769, Sigma Chem. Co., concentração final de 1,4 unidades NHl/tnL) em solução tampão, pH 7,4, 100 μΐι, e solução de inibidor, 100 μΐι, durante um minuto. Adicionou-se então plasma humano normal combinado tratado com citrato, 100 μΐι, e mediu-se o tempo de coagulação num dispositivo automático (KC 10, Amelung).
Traçou-se um gráfico do tempo de coagulação em segundos em função da concentração de inibidor, e determinou-se a ICrqTT por interpolação. A IC50TT é a concentração de inibidor que duplica o tempo de coagulação da trombina para o plasma humano.
Ensaio B
Determinação do tempo de trombina em plasma ex vivo A inibição de trombina após administração oral ou parentérica dos compostos da invenção foi examinada em ratos conscientes que, um ou dois dias antes da experiência, foram equipados com um cateter para recolha de sangue da artéria carótida. No dia da experiência, administrou-se o composto, dissolvido em etanol:Solutol8:água (5:5:90), e retirou-se amostras de sangue a intervalos fixos para tubos de plástico contendo 1 parte de solução de citrato de sódio (0,13 mol por L) e 9 partes de sangue. Os tubos foram centrifugados para se obter plasma pobre em plaquetas. O plasma foi utilizado para a determinação dos tempos de trombina tal como descrito adiante. 0 plasma de rato tratado com citrato, 100 juL, foi diluído com uma solução de soro fisiológico a 0,9%, 100 /íL, e a coagulação do plasma foi iniciada pela adição de trombina humana (T 6769, Sigma Chem. Co.) em solução tampão, pH 7,4, 100 /xL. Mediu-se o tempo de coagulação num dispositivo automático (KC 10, Amelung, Alemanha).
As concentrações do inibidor de trombina activo HO (0) C-CH2 (i?) Cgl-Aze-Pab-H (ver Pedido de Patente
Internacional WO 94/2 933 6) no plasma de rato foram calculadas por utilização de curvas padrão relacionando o tempo de trombina no plasma combinado de rato tratado com citrato com concentrações 5 5
- 25 - ί conhecidas do inibidor de trombina activo anteriormente referido dissolvido em soro fisiológico.
Com base nas concentrações de plasma calculadas para o inibidor de trombina activo HO(0)C-CH2(R)Cgl-
Aze-Pab-H (considerando que o prolongamento do tempo de trombina é provocado pelo composto anteriormente referido) no rato, calculou-se a área sob a curva após administração oral e/ou parentérica do pró-fármaco 10 (AUCpf) utilizando a regra trapezoidal e extrapolando os dados para infinito.
A biodisponibilidade do inibidor de trombina activo HO (0) C-CH2 (.R) Cgl-Aze-Pab-H após administração oral ou parentérica do pró-fármaco foi calculada como se segue: [(AUCpf/dose)/(AUCactivo,iv/dose] x 100 20 em que AUCactivo, iv representa a AUC obtida após administração intravenosa de inibidor de trombina activo HO(0)C-CH2(R)Cgl-Aze-Pab-H a ratos conscientes tal como descrito acima.
25 Ensaio C
Determinação do tempo de trombina em urina ex vivo
A quantidade de inibidor de trombina activo 30 HO(O)C-CH2(R)Cgl-Aze-Pab-H que foi excretada na urina após administração oral ou parentérica dos compostos da invenção, dissolvidos em etanol:SolutolS:água (5:5:90), foi calculada por determinação do tempo de trombina em urina ex vivo (considerando que o prolongamento do tem- 35 po de trombina é provocado pelo composto anteriormente referido).
Os ratos conscientes foram colocados em gaiolas metabólicas, permitindo a recolha separada de 40 urina e fezes, durante 24 horas após a administração oral dos compostos da
invenção. 0 tempo de trombina foi determinado na urina recolhida tal como descrito a seguir.
Incubou-se plasma humano normal combinado tratado com citrato (100 μίΛ com a urina de rato concentrada, ou com diluições desta em soro fisiológico, durante um minuto. A coagulação do plasma foi então iniciada pela administração de trombiua humana (T 6769, Sigma Chem. Company) em solução tampão (pH 7,4; 100 μΐχ) . Mediu-se o tempo de coagulação num dispositivo automático (KC 10; Amelung).
As concentrações do inibidor de trombina activo HO(O)C-CH2(R)Cgl-Aze-Pab-H na urina de rato foram calculadas por utilização de curvas padrão relacionando o tempo de trombina no plasma humano combinado tratado com citrato com concentrações conhecidas do inibidor de trombina activo anteriormente referido dissolvido em urina de rato concentrada (ou diluições desta em soro fisiológico). Por multiplicação da produção de urina de rato total ao longo do período de 24 horas pela concentração média calculada do inibidor de trombina activo anteriormente referido na urina, pode calcular-se a quantidade de inibidor de trombina activo (QUANTIDADEpf). A biodisponibilidade do inibidor de trombina activo HO(0)C-CH2(R)Cgl-Aze-Pab-H após administração oral ou parentérica do pró-fármaco foi calculada como a seguir: [(QUANTIDADEpf/dose)/(QUANTIDADEact ivo,iv/dose] x 100 em que QUANTIDADEactivo, iv representa a quantidade excretada na urina após administração intravenosa de HO(O)C-CH2(R)Cgl-Aze-Pab-H a ratos conscientes tal como descrito acima. 1
Ensaio D
Determinação de HO (O) C-CH? (£) Cctl-Aze-Pab-H em urina por
LC/MS 5 A quantidade de inibidor de trombina activo HO(0)C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-H que foi excretada na urina após administração oral ou parentérica dos compostos da invenção, dissolvidos em etanol:Solutol8:água (5:5:90), 10 foi determinada por análise por LC-MS tal como descrito a seguir.
Os estudos em animais foram realizados tal como descrito no Método C acima. As amostras de urina foram recolhidas e congeladas a -20°C antes de serem analisadas.
As amostras de urina foram analisadas quanto ao seu teor de HO (0) C-CH2-(i?) Cgl-Aze-Pab-H de acordo com o 20 método seguinte: 25 30 35
As amostras de urina descongeladas foram misturadas e, se necessário, centrifugadas. Activou-se tubos de extracção em fase sólida (Analytichem Bond Elut. N° 1210-2059) com 1,0 mL de metanol e acondicionou-se com 1,0 mL de acetonitrilo:água (50:50), seguido por 1,0 mL de ácido fórmico a 0,1%. Adicionou-se 50 μί> do padrão interno de trabalho (20 μτηοΙ/L) a cada tubo de extracção. Para padrões de urina, adicionou-se 50 μL de solução padrão. Adicionou-se a cada tubo 200 μL de uma amostra ou, para padrões de urina, branco de urina e em seguida procedeu-se à adsorção por gravidade ou por aplicação de vácuo suave. A urina residual foi removida por lavagem com 1,0 mL de acetato de amónio (2 mmol/L), antes da eluição com 1,0 mL de acetonitrilo:acetato de amónio (2 mmol/L) (35:65). 0 eluído recolhido foi transferido para frascos de amostrados automático. In-jectou-se 30 μL do extracto numa coluna de LC (Hypersil BDS-C18; 3 μιη; 75 mm X 4,0 mm d.i.; Hewlett-Packard N° 79926 03-354), eluída com tampão de acetato de amónio (1,3 mmol/L) com 40% de acetonitrilo e 0,1% de ácido fórmico a 0,75 mL/min. 0 eluente foi separado de tal mod que 30 μΕ/πύη entraram na fonte 40 28 U ^ iões por electropulverização de um espectrómetro de massa P-E Sciex API-3. HO(0)C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-H e HO (0)C-CH2(R)Cgl-Pro-Pab-H (padrão interno) ambos têm tempos de retenção próximos de 1,5 minutos. Os seus 5 iões moleculares ((M+H)+) foram monitorizados a m/z 430,2 e 444,2 respectivamente, à resolução de unidades de massa. Utlizou-se padrões de urina a duas concentrações, sendo uma no limite de quantificação, para calibraçáo com base nas proporções das áreas dos 10 picos de HO(O)C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-H em relação ao padrão interno. A linearidade do método foi verificada na gama de 0,050-20 μτηοΙ/L. O coeficiente de variação era de 1-2% a 1-20 μτηοΙ/L e de 7% a 0,50 μΓηοΙ/L. O limite de quantificação era de 0,050 μπιοΙ/L. 15
Por multiplicação da produção de urina total de rato ao longo do período de 24 horas pela concentração de HO(O)C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-H medida na urina, pode calcular-se a quantidade de inibidor activo (QUANTIDA-20 DEpf) excretada na urina. A biodisponibilidade do inibidor de trombina activo foi então calculada como no Método C acima. A invenção é ilustrada por meios dos exemplos 25 seguintes.
Exemplos
Procedimentos Experimentais Gerais 30
Os espectros de massa foram registados num espectrómetro de massa de triplo quadrupolo Finnigan MAT TSQ 700 equipado com uma interface de electropulverização. 35 As determinações de ÍH RMN e -^C RMN foram realizadas em espectrómetros BRUKER ACP 300 e Varian UNITY plus 400 e 500, operando para a frequências de 300,13, 399,96 e 499,82 MHz respectivamente e para a frequências de 75,46, 100,58 e 125,69 MHz 4U respectivamente. Os desvios químicos estão expressos em unidades δ. 29
Preparação dos materiais de partida
Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H , Boc-(R)Cgl-Aze-Pab x HC1, H-(R)Aze-Pab-Z, H-(R)Aze-Pab-Z x HC1, Bn-OOCCH2-P)Cgl-Aze-Pab-Z, Boc-(R) Cgl-Aze-Pab-Z, Boc-(R)Cgl-Aze-OH e Pab-Z x HCl foram preparados de acordo com os métodos descritos no Pedido de Patente Internacional WO 94/29336.
Exemplo 1
EtQOCCHg-(R)Cql-Aze-Pab-COOCH2CH=CHZ (i) Boc-(R)Cql-Aze-Pab-COOCHgCH^CHo A uma solução de Boc- (R) Cgl-Aze-Pab-H (6,1 g; 13 mmol) em THF (125 mL) e NaOH 2 M (70 mL, 140 mmol) a 0°C adicionou-se gota a gota cloroformato de alilo (1,7 g; 14 mmol). Após agitação a 0°C durante 1 h, a mistura reaccional foi concentrada, adicionou-se água (100 mL·) e a fase aquosa resultante foi extraída com cloreto de metileno (3 x 100 mL) . As fases orgânicas combinadas foram concentradas para dar 6,4 g de produto em bruto que foi purificado por cromatograf ia "flash"
utilizando EtOAc:THF:Et3N (68:29:3) como eluente. A concentração deu 5,8 g (81%) do composto em epígrafe como um sólido branco. iH-RMN (500 MHz, CDCI3) : δ 8,19 (bt, 1H) , 7,78 (d, 2H), 7,26 (d, 2H), 6,02-5,92 (m, 1H), 5,32 (d, J=17 Hz, 1H), 5,18 (d, J=10 Hz, 1H), 5,06 (d, J=7 Hz, 1H), 4,82 (bs, 1H), 4,61 (d, J=6 Hz, 2H), 4,58-4,48 (m, 1H) , 4,38-4,27 (m, 2H) , 4,14-4,03 (m, 1H) , 3,77-3,68 (m, 1H) , 2,60- 0,90 (m, 24H). 13C-RMN (125 MHz, CDCl3) sinais de carbonilo e amidina: δ 172,70, 170,74, 168,02, 164,54, 155,98.
(ii) H-(R)Cql-Aze-Pab-C00CH2CH=CH7 x 2TFA A uma solução de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2CH=CH2 (2,03 g; 3,65 mmol; do pasoo (i) acima) em cloreto de metileno (15 mL) a - 30 - 0°C adicionou-se TFA (15 mL) . A mistura11 reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h seguida por concentração para dar 2,8 g do composto em epígrafe como um sólido branco. 1H-RMN (500 MHz, MeOH(d4)): δ 7,80 (d, 2H) , 7,57 (d, 2H), 6,02 (m, 1H), 5,45 (d, J=17 Hz, 1H), 5,33 (d, J=10 Hz, 1H), 5,91-4,80 (m, 3H), 4,56 (s, 2H), 4,38 (bq, J=8 Hz, 1H) , 3,71 (d, J=7 Hz, 1H), 2,76-2,60 (m, 1H), 2,35-2,20 (m, 1H), 1,9-1,0 (m, 11H). (iii) EtOOCCH?-(R) Cal-Aze-Pab-COOCH?CH^CH^ A uma solução de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2CH=CH2 x 2TFA (649 mg,· 0,95 mmol; do passo (ii) acima), K2CO3 (656 mg, 4,8 mmol), água (0,1 mL) , e THF (10 mL) foi agitada a 40°C durante 2 h seguida pela adição de bromoacetato de etilo (190 mg; 1,14 mmol) em THF (1 mL) . Após agitação a 40°C durante 4 h e à temperatura ambiente durante 14 h a mistura reaccional foi filtrada, concentrada, e purificada por cromatografia "'flash'' utilizando EtOAc:THF:Et3N (68:29:3) como eluente para dar 244 mg (47%) do composto em epígrafe como um sólido branco. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3) : δ 8,46 (bt, 1H) , 7, 81 (d, 2H) , 7,35 (d, 2H), 6, 08-5,94 (m, 1H) , 5,35 (d, J= 18 Hz, 1H) , 5,23 (d, J=ll Hz , 1H) , 4,93 (dd, J=6 e 9 Hz / ÍH) , 4,66 (d, 2H), 4,62-4,38 (parte AB de um espectro ABX), 4,16-4,04 (m, 4H), 3,20 (d, 2H), 2,86 (d, 1H), 2,64-2,45 (m, 2H), 2,0-1,0 (m, 17H). 13c-RMN (100 MHz, CDCI3) sinais de carbonilo e amidina: δ 175,33, 172,24, 170,72, 168,19, 164,35.
Exemplo 2 nPrOOCCH?-IR)Col-Aze-Pab-COOCH?CH^CHo 0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-COOCH2CH=CH2 x 2TFA (503 mg; 0,74 mmol; ver Exemplo
1 (ii) acima) e bromòacetato de n-propilo (160 mg, 0,88 mmol) para dar 277 mg (68%) como um sólido branco. J-H-RMN (400 MHz, CDCI3) : δ 8,48 (bt, 1H) , 7,83 (d, 2H) , 7,35 (d, 2H), 6,76 (largo, 1H), 6,02 (m,1H) , 5,37 (dd, 1H) , 5,24 (dd, 1H) , 4,94 (t, 1H) , 4,67 (dd, 2H) , 4,49 (parte AB de um espectro ABX, 2H) , 4,12 (m, 2H) , 3,98 (t, 2H) , 3,24 (sistema AB, 2H) , 2,87 (d, 1H), 2,52 (m, 2H) , 1,99 (bd, 2H) , 1,80-1,50 (m, 7H) , 1,61 (q, 2H) , 1,30-1,10 (m, 2H), 1,00 (qd, 2H), 0,90 (t, 3H) . l-^C-RMN (100 MHz, CDCI3) sinais de carbonilo e amidina: δ 175,4, 172,3, 170,7, 167,9, 164,5.
Exemplo 3 tBuOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH^CH-CH? O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H-(J?)Cgl-Aze-Pab-COOCH2CH=CH2 X 2TFA (285 mg; 0,42 mmol; ver Exemplo l(ii) acima) e bromoacetato de t-butilo (96 mg, 0,50 mmol) para dar 93 mg (39%) como um sólido branco. iH-RMN (500 MHz, CDCI3): δ 8,50 (bt, 1H), 7,81 (d, 2H), 7,36 (d, 2H), 6,07-5,97 (m, 1H), 5,36 (d, J=16 Hz, 1H), 5,22 (d, J=10 Hz, 1H) , 4,93 (dd, J=9 e 6 Hz, 1H), 4,76 (d, J=6 Hz, 2H) , 4,57-4,46 (m, 2H) , 4,18-4,04 (m, 2H) , 3,19-3,08 (espectro AB, Jab=20 Hz, 2H) , 2,86 (d, J=8
Hz, 1H), 2,72-2,53 (m, 2H), 2,0-0,9 (m, 23H). l^c-RMN (100 MHz, CDCI3) sinais de carbonilo e amidina.· δ 175,28, 171,53, 170,76, 167,81, 164,1.
Exemplo 4
EtOOCCH?-(R)Cal-Aze-Pab-COPEt (i) Boc-(R) Çql-Aze-Pab-COOEt O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo l(i) a partir de Boc-(J?)Cgl-
Aze-Pab-H (SOO mg; 1,3 mmol) e cloroformato de etilo (150 mg; 1,4 mmol) dando 240 mg (34%) como um sólido branco. 3-H-RMN (300 MHz, CDCI3) : Ò 9,37 (bs, 1H) , 8,16 (bs, 1H), 7,72 (d, 2H), 7,18 (d, 2H), 5,17 (d, 1H), 4,73 (t, 1H) , 4,47 (dd, 1H) , 4,27 (m, 2H) , 4,06 (q, 2H) , 3,66 (C, 1H) , 2,48 (m, 1H) , 2,37 (m, 1H) , 1,4-1,8 (m, 7H) , 1,22 (s, 9H) , 1,30-0,8 (m, 7H) . 13c-RMN (75 MHz, CDCI3) sinais de carbonilo e amidina: δ 172,6, 170,7, 167,9, 164,8, 156,0. (ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt x 2HC1 A uma solução de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt (240 mg; 0,44 mmol; do passo (i) acima) em EtOAc (2 0 mL) adicionou-se cloreto de hidrogénio a 0°C ao longo de 5 minutos. A mistura reaccional foi agitada a 0°C durante 1 h seguida por concentração para dar 225 mg (100%) como um sólido branco. iH-RMN (300 MHz, D20) : δ 7,85 (d, 2H) , 7,61 (d, 2H) , 4,98 (dd, 1H) , 4,60 (s, 1H) , 4,44 (p, 5H) , 3,90 (d, 1H), 2,73 (m, 1H), 2,37 (m, 1H), 2,0-1,65 (m, 9H), 1,39 (t, 3H), 1,4-1,1 (m, 7H), 0,98 (m, 1H). 13C-RMN (75 MHz, ϋ20) sinais de carbonilo e amidina: δ 172,7, 169,4, 166,8, 154,3. (iii) EtOOCCH^-(R)Cal-Aze-Pab-COOEt O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-COOEt x 2HC1 (160 mg; 0,31 mmol; do passo (ii) acima) e bromoacetato de etilo (52,5 mg; 0,31 mmol). Rendimento: 100 mg (61%) como um pó amarelo claro. 3-H-RMN (300 MHz, CDCI3) : δ 8,48 (bt, 1H) , 7,81 (d, 2H) , 7,38 (d, 2H) , 4,51 (parte AB de um espectro ABX, 2H), 4,21 (q, 2H), 4,15-4,05 (m, 4H), 3,21 (espectro AB, 2H), 2,86 (d, 1H), 2,68 (m,
- 33 - Ί 1H) , 2,53 (m, 1H) , 1,96 (bd, 2H) , 1,90-1,70 (m, 12H) , 1,35 (t, 3H), 1,22 (t, 6H) , 1,30-0,95 (m, 2H) . 13c-rmn (75 MHz, CDCI3) sinais de carbonilo e amidina: δ 175,5, 172,2, 170,7, 167,6, 164,9.
Exemplo 5
EtOOCCH?- (R) Cql-Aze-Pab-COO-nPr (i) Boc-(R)Cql-Aze-Pab-COO-nPr O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo l(i) a partir de Boc- (R) Cgl-Aze-Pab-H (6,0 g; 13 mmol) e cloroformato de n-propilo (1,57 mL; 14 mmol) . Rendimento: 5,4 g (76%) . 1H-RMN (400 MHz, CDCI3) : δ 8,25 (bt, 1H), 7,82 (d, 2H) , 7,31 (d, 2H) , 5,09 (bd, 1H) , 4,87 (dd, 1H) , 4,58 (dd, 1H) , 4,39 (dd, 2H) , 4,14 (q, 1H) , 4,10 (t, 2H) , 3,79 (t, 1H) , 2,54 (dm, 2H) , 2,21 (s, 1H) , 1,87-1,55 (m, 8H), 1,33 (s, 9H), 1,45-1,0 (m, 4H), 0,99 (t, 3H). 13C-RMN (100 MHz, CDCI3) sinais de carbonilo e amidina: δ 172,7, 170,6, 167,8, 165,0, 155,9.
(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr x 2TFA O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1(ii) utilizando 2,lg(3,7 mmol) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr (do passo (i) acima). Rendimento: 3,7 g. l-H-RMN (400 MHz, MeOH-d4) : Ô 7,77 (d, 2H) , 7,60 (d, 1H), 4,86 (dd, 1H) , 4,56 (parte AB de um espectro ABX, 2H), 4,33 (m, 4H) , 3,72 (d, 1H), 3,30 (m, 1H), 2,68 (m, 1H) , 2,28 (m, 1H) , 1,9-1,7 (m, 9H) , 1,4-1,1 (m, 6H) , 1,02 (t, 3H). 13C-RMN (100 MHz, MeOH-d4) sinais de carbonilo e amidina: δ 172,7, 169,3, 168,0, 161,4. 34
I i ff"" U, ^ y x (iii) EtOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (i?)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr x 2TFA (472 mg; 0,69 mmol; do passo (ii) acima) e bromoacetato de etilo (138 mg; 0,83 mmol) para dar 0,22 mg (58%) como um sólido branco. !h-RMN (400 MHz, CDCI3) : δ 8,46 (bt, 1H) , 7,82 (d, 2H) , 7.32 (d, 2H) , 4,92 (dd, 1H) , 4,49 (parte AB de um espectro ABX, 2H) , 4,10 (m, 6H) , 3,23 (espectro AB, 2H) , 2,80 (dm, 2H) , 1,98 (bd, 2H) , 1,74 (q, 2H) , 1,63 (dd, 2H), 1,52 (m, 1), 1,21 (t, 3H) , 1,20-1,10 (m, 2H) , 0,98 (t, 3H) . 13C-RMN (100 MHz, CDCI3) sinais de carbonilo e amidina: δ 175,3, 172,2, 170,7, 167,6, 164,8.
Exemplo 6
MeOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr 0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo l(iii) acima a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-COO-nPr x 2TFA (365 mg; 0,53 mmol; ver Exemplo 5(ii) acima) e bromoacetato de metilo (98 mg, 0,64 mmol) para dar 114 mg (41%) como um sólido branco. 1H-RMN (500 MHZ, CDCI3) : δ 8,44 (bt, 1H) , 7,82 (d, 2H) , 7.32 (d, 2H) , 7,04 (largo, 1H) , 4,92 (dd, 1H) , 4,49 (parte AB de um espectro ABX), 4,12 (m, 2H) , 4,10 (t, 2H), 3,63 (s, 3H), 3,24 (s, 2H), 2,87 (d, 1H), 2,65 (m, 1H) , 2,52 (m, 1H) , 2,01 (largo, 1H) , 1,96 (bd, 2H) , 1,75 (q, 4H), 1,63 (bdd, 1H), 1,53 (m, 1H), 1,3-1,1 (m, 5H) , 0,99 (t, 3H) . 13C-RMN (100 MHz, CDCI3) sinais de carbonilo e amidina: 8 175,3, 172,5, 170,7, 167,7, 165,0. - 35 - ,L )==3¾.—,—a.
Exemplo 7
EtOOCCHo-(R)Cal-Aze-Pab-COOCHoCHoOMe (i) Boc-(R)Cgl-A2e-Pab-C00CH?CH90Me O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo l(i) acima utilizando Boc- (R) Cgl-Aze-Pab-H (6,0 g,- 13 mmol) e cloroformato de 2-metoxietilo (1,94 g; 14 mmol). Rendimento: 3,9 g (52%). iH-RMN (400 MHz, CDCI3) : δ 8,24 (bt, 1H) , 7,83 (d, 2H) , 7,31 (d, 2H) , 5,08 (bd, 1H) , 4,87 (dd, 1H) , 4,58 (dd, 1H) , 4,39 (dd, 1H) , 4,30 (t, 2H) , 4,15 (m, 1H) , 3,79 (bt, 1H) , 3,68 (t, 2H) , 3,40 (s, 3H) , 2,65-2,45 (m, 2H), 2,20 (largo, 1H), 1,9-1,55 (m, 6H), 1,34 (s, 9H) , 1,3-0,95 (m, 6H) . 13C-RMN (100 MHz, CDCI3) sinais de carbonilo e amidina: δ 172,7, 170,7, 167,8, 164,6, 155,9.
(ii) H-(R)Cql-Aze-Pab-COOCHoCH^OMe x 2TFA O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1 (ii) acima utilizando 1,71 g de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-C00CH2CH20Me (do passo (i) acima). Rendimento: 1,89 g (88%). iH-RMN (400 MHz, MeOH-d4) : δ 7,77 (d, 2H) , 7,59 (d, 2H) , 4,85 (dd, 1H) , 4,56 (d, 2H) , 4,49 (m, 2H) , 4,37 (m, 1H), 4,28 (m, 1H), 3,70 (m, 3H), 3,37 (s, 3H), 2,68 (m, 1H) , 2,28 (m, 1H) , 1,9-1,7 (m, 7H) , 1,4-1,1 (m, 6H) . l-^c-RMN (100 MHz, MeOH-d4) sinais de carbonilo e amidina: δ 172,7, 169,3, 168,0, 154,6. (iii) EtOOCCHo-(R)Cql-Aze-Pab-COOCHoCHoOMe O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo l(iii) acima a partir de H- 36 r— rj (R) Cgl-Aze-Pab-C00CH2CH20Me x 2TFA (487 mg; 0,69 mmol; do passo (ii) acima) e bromoacetato de etilo (138 mg; 0,83 mmol) para dar um produto em bruto que foi purificado por cromatograf ia "''flash" utilizando THF:cloreto de metileno (3:1) como eluente. 0 rendimento foi de 0,13 mg (34%) como um sólido branco. !h-RMN (400 MHz, CDCI3) : δ 8,46 (bt, 1H) , 7,83 (d, 2H) , 7,32 (d, 2H) , 7,21 (largo, 1H) , 4,92 (dd, 1H) , 4,49 (parte AB de um espectro ABX, 2H) , 4,30 (t, 2H) , 4,12 (q, 2H), 4,07 (q, 2H) , 3,68 (t, 1H) , 3,40 (s, 3H), 3,24 (s, 2H) , 2,62 (m, 1H) , 2,52 (m, 1H) , 2,07 (largo, 1H) , 1,97 (bd, 1H) , 1,8-1,5 (m, 5H) , 1,3-1,1 (m, 6H) , 1,05- 0,95 (m, 2H). i3c-RMN (100 MHz, CDCI3) sinais de carbonilo e amidina: δ 175,3, 172,2, 170,7, 167,8, 164,6.
Exemplo 8
MeOOCCH?-(R)Cal-Aze-Pab-COOCH^CHTOMe 0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o método descrito no Exemplo l(iii) acima a partir de H-(J?)Cgl-Aze-Pab-C00CH2CH20Me x 2TFA (490 mg; 0,7 mmol; ver Exemplo 7(ii) acima) e bromoacetato de metilo (128 mg, 0,84 mmol) para dar um produto em bruto que foi purificado por cromatografia '"'flash" utilizando THF:cloreto de metileno (3:1) como eluente. O rendimento foi de 155 mg (41%) como um sólido branco. iH-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8,44 (t, 1H), 7,83 (d, 2H), 7,31 (d, 2H) , 4,92 (dd, 1H) , 4,49 (parte AB de um espectro ABX, 2H), 4,30 (t, 2H), 4,13 (m, 2H), 3,68 (t, 2H), 3,63 (s, 3H), 3,39 (s, 3H), 3,25 (s, 2H), 2,87 (d, 1H), 2,62 (m, 1H), 2,52 (m, 1H), 1,96 (bd, 1H), 1,8-1,5 (m, 6H) , 1,3-1,1 (m, 5H), 1,00 (q, 2H) . l^C-RMN (100 MHz, CDCI3) sinais de carbonilo e amidina: δ 175,2, 172,6, 170,7, 167,8, 164,5.
- 37 - Exemplo 9 EtOOCCH?-(R)Çgl-Aze-Pab-COO-nBu \l (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu 0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 1(i) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (1,01 g; 2,1 mmol) e cloroformato de n-butilo (0,32 g; 2,4 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 1,5 h a mistura reaccional foi concentrada e extraída com três porções de cloreto de metileno. A fase orgânica combinada foi então lavada com água, seca sobre Na2SC>4, e concentrada para dar l,o g (83%) do composto em epígrafe como um sólido branco. 1-H-RMN (300 MHz, CDCI3) : : δ 9,81-9, 31 (bs, 1H) , 8,36- 8,20 (m, 1H) , 7,35 (d, 2H) , 7,84 (d, 2H) , 6,78-6,43 (bs, 1H) , 5,05 -4,82 (m, 2H) , 4,69-- 1,15 (m, 3H), 4,15- 4,08 (m, 3H) , 3,86- 3,70 (m, 1H) , 2,68-2,42 (m, 2H) , 1,92-0,88 (m, 25H). l^C-RMN (125 MHz, CDCI3) sinais de amidina e carbonilo: δ 172,5, 170,7, 167,9, 164,9, 156,0. FAB-MS: (m+1) = 572 (m/z) (ii) H-(R)Cql-Aze-Pab-COO-nBu x 2HC1 O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 4(ii) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu (2,5 g; 4,4 mmol; do passo (i) acima) para dar 2,4 g (100%) como um sólido branco. 1H-RMN (300 MHz, MeOH-d4) : δ 7,78-7,60 (m, 2H) , 4,66- 4,49 (m, 2H), 0,98 (t, 2 H), 4,49-4,35 (m, 3H) , 4,35- 4,22 (m, 1H) , 3,75 (d, 1H) , 1,92-1,67 (m, 8H) , 1,56- 1,07 (m, 8H). 0 sinal de um dos protões está parcialmente obscurecido pelo sinal de CD3OH. 13C-RMN (100 MHz, MeOH-d4) sinais de amidina e carbonilo: δ 172,7, 169,3, 167,9, 154,7. MS (m+1) = 472 (m/z) 38 f~ Lc, ^^ i (iii) EtOOCCHo-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-COO-nBu x 2HC1 (400 mg; 0,74 mmol) e bromoacetato de etilo (147 mg; 0,88 mmol). O produto foi purificado por cromatografia "flash" utilizando um gradiente de cloreto de metileno e EtOH de 0,1% => 1,28% como eluente para dar 290 mg (70%) como um sólido branco. iH-RMN (300 MHz, CDCI3) : δ 9,70-9,36 (bs, 1H) , 8,47 (t, 1H) , 7,81 (d, 2H) , 7,32 (d, 2H) , 7,07-6,73 (bs, 1H) , 4,97-4,87 (dd, 1H) , 4,62-4,35 (m, 2H) , 4,20-3,98 (m, 6H) , 3,27-3,12 (m, 2H) , 2,84 (s, 1H) , 2,70-2,40 (m, 2H), 2,03-0,85 (m, 22H). 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) sinais de amidina e carbonilo: δ 175,3, 172,3, 170,8, 167,9, 165,0. FAB-MS: (m+1) = 558 (m/z)
Exemplo 10
PrlC (O) CHgCHgCH2OOCCHg^- (R) Cgl-Aze-Pab-Z
(i) PrlC(O)CHgCHsCH? OH
Uma mistura de γ-butirolactona (4,0 g,- 46,5 mmol) e pirrolidina (6,6 g; 92,8 mmol) foi agitada à temperatura ambiente durante 2,5 h. O produto foi concentrado sob vácuo para dar 14,5 g (100%) do produto como um óleo amarelo. iH-RMN (300 MHz, MeOH-d4) : δ 3,58 (t, 2H) , 3,50 (t, 2H), 3,40 (t, 2H), 2,42 (t, 2H), 2,06-1,75 (m, 6H) (ii) PrlC (0) CH^CHoCHoOOCCH2.Br A uma mistura de PrlC (O) CH2CH2CH2OH (7,2 g; 45,8 mmol; do passo (i) acima) e DMAP (5,6 g; 45,8 mmol) em cloreto de metileno a o°c adicionou-se gota a gota brometo de bromoacetilo - 39 t (4,0 mL; 45,8 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 1,5 h adicionou-se outra porção de brometo de bromoacetilo (1,0 mL, 11,4 mmol) e DMAP (1,4 g, 11,4 mmol) e a reacção foi aquecida a refluxo durante 1,5 h. Adicionou-se água e o cloreto de metileno foi extraído 3 vezes. A fase orgânica foi seca com Na2S04 e concentrada para dar 10,3 g (81%) do produto como um óleo amarelo. iH-RMN (400 MHz, CDCI3) : δ 4,15 (t, 2H) , 3,75 (s, 2H) , 3,40-3,31 (m, 4H) , 2,30 (t, 2H) , 1,98-1,83 (m, 4H) , 1,81-1,73 (m, 2H) (iii) PrlC (O) CH^CH^CH^OOCCH?.- (R) Cdl-Aze-Pab(Z) O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (6 g; 10,4 mmol) e PrlC(O)CH2CH2CH200CCH2Br (3,5 g; 12,4 mmol; do passo (ii) acima). 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia '^flash11 utilizando heptano:EtOAc: isopropanol (1:2:2) como eluente para dar 4,2 g que foram então purificados por RPLC preparativa utilizando 44% de acetonitrilo em NH4OAC 0,1 M como eluente para dar 2,64 g (36%) do produto como um sólido branco. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3): 8 9,80-9,22 (bs, 1H), 8,36 (t, 1H) , 7,96-7,58 (m, 3H) , 7,45 (d, 2H) , 7,37-7,22 (m, 5H) , 5,20 (s, 2H) , 4,95-4,88 (dd, 1H) , 4,72-4,29 (m, 2H) , 4,15-4,04 (m, 2H) , 4,04- 3,88 (m, 2H) , 3,40 (t, 2H) , 3,34 (t, 2H) , 3,28-3,17 (m, 2H) , 2,85 (d, 1H) , 2,67-2,48 (m, 1H), 2,23 (t, 2H) , 2,14-0,93 (m, 18H) . -*-^C-RMN (125 MHz, CDCI3) sinais de amidina e carbonilo: δ 175,3, 172,4, 170,9, 170,4, 168,2, 164,6. FAB-MS: (m+1) = 703 (m/z)
Γ U
Exemplo 11
ChNHC(O)CHoOOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-Z
(i) ChNHC(O)CH9OH
Uma mistura de ciclohexilamina (9,9 g; 99,8 mmol) e 2,5-dioxo-l,4-dioxano (3,0 g, 25,9 mmol) foi agitada a 100°Ç durante 2,5 h. O produto foi concentrado para dar 8,1 g (100%) do produto como um óleo castanho.. iH-RMN (500 MHz, MeOH-d4) : δ 3,92 (s, 2H) , 3,75-3,65 (m, 1H) , 1,90-1,58 (m, 5H) , 1,43-1,07 (m, 5H) . 0 sinal de dois dos protões está obscurecido pelo sinal de CD3OH. 13C-RMN (125 MHz, MeOH-d4) sinais de amidina e
carbonilo: δ 174,0, 62,5, 33,7, 26,5, 26,1, 26,0. O sinal de um dos carbonos está obscurecido pelo sinal de CD3OD. (ii) ChNHC(0)CHoOOCCH^Br A uma mistura de ChNHC (O) CH2OH (8,0 g; 50,9 mmol; do passo (i) acima) e DMAP (6,2 g; 50,9 mmol) em cloreto de metileno (80 mL) a 0°C adicionou-se gota a gota brometo de bromoacetilo (4,0 mL; 45,8 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 1,5 h adicionou-se mais porções de brometo de bromoacetilo (1,0 mL, 11,4 mmol) e DMAP (1,4 g, 11,4 mmol) e a mistura reaccional foi aquecida a refluxo durante 1,5 h. Adicionou-se água e a fase aquosa foi extraída com três porções de cloreto de metileno. A fase orgânica foi lavada com água, seca com Na2SC>4, e concentrada para dar 10,3 g (73%) do produto como um óleo castanho. iH-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 6,12-6,00 (bs, 1H), 4,62 (s, 2H) , 3,90 (S, 2H) , 3,84-3,76 (m, 1H) , 1,95-1,86 (m, 2H) , 1,75-1,65 (m, 2H), 1,65-1,56 (m, 1H) , 1,43-1,29 (m, 2H) , 1,24-1,10 (m, 3H). 41 t
(iii) ChNHC (O) CHsOOCCH·?- (R) Cql-Aze-Pab-Z
O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de .5 H- (R) Cgl-Aze-Pab-Z (6 g; 10,4 mmol) e ChNHC(O) CH200CCH2Br (3,5 g; 12,4 mmol; do passo (ii) acima) . 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia "'flash1' utilizando heptano:EtOAc risopropanol (5:2:2) como eluente seguida por concentração e depois por RPLC 10 preparativa utilizando 50% de acetonitrilo em NH4OAC 0,1 M como eluente. A concentração e liofilização deu 2,6 g (36%) do produto como um sólido branco. l-H-RMN (500 MHz, CDCI3) : δ 9,78-9,25 (bs, 1H) , 7,90 (t, 15 1H) , 7,78 (d, 2H) , 7,44 (d, 2H) , 7,38-7,24 (m, 5H) , 6,66 (t, 1H) , 5,20 (s, 2H) , 4,90-4,83 (dd, 1H) , 4,60- 4,45 (m, 2H), 4,18-3,93 (m, 4H), 3,73-3,62 (m, 1H), (d, 1H) , 3,23, 3,44 (AB, 2H) , 2,87, 2,65-2,08 (m, 3H) , 1,98-0,93 (m, 22H). 20 13C-RMN (125 MHz, CDCI3) sinais de amidina e carbonilo: 5 175,1, 171,7, 170,7, 168,8, 166,1, 164,4. FAB-MS: (m+1) = 703 (m/z)
Exemplo 12
25 (nPr^NC (O) CH^QOCCHj?- (R) Cql-Aze-Pab-COOCHoOOCC (CH^W
(i) (nPr)?NC(0)CH2OH
Uma mistura de 2,5-dioxo-l,4-dioxano (2,02 g; 30 17,4 mmol) e di-n-propilamina (5 mL, 36,5 mmol) foi aquecida a 50°C durante 1 h e a 90°C durante 66 h.
Adicionou-se tolueno e subsequentemente removido sob vácuo com o excesso de di-n-propilamina. 0 resíduo foi purificado por cromatograf ia "flash M utilizando 10% de 35 metanol em cloreto de metileno como eluente para dar 4,18 g (66%) do composto desejado. iH-RMN (300 MHz, CDCI3) : δ 4,1 (d, 2H) , 3,65 (t, 1H) , 3,25-3,35 (m, 2H) , 2,9-3,0 (m, 2H) , 1,45-1,6 (111, 4H) , 40 0,8-0,95 (m, 6H) 42
(ii) (nPr)?NC(O)CH^OOCCHoBr A uma mistura de (nPr) 2NC (O) CHp.OH (0,743 g; 4,7 mmol; do passo (i) acima), DCC (0,951 g; 4,6 mmol) , e ácido bromoacético (0,704 g; 5,1 mmol) em cloreto de metileno (15 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h. O precipitado foi removido por filtração e o solvente foi removido do filtrado sob vácuo. A destilação em forno de bolas do resíduo deu 0,66 g (50%) do composto desejado. -l-H-RMN (300 MHz, CDCI3) : δ 4,8 (s, 2H) , 4,0 (s, 2H) , 3,2-3,3 (m, 2H) , 3,05-3,15 (m, 2H) , 1,5-1,7 (m, 4H) , 0,8-1,0 (dt, 6H). (iii) 4-Nitrofenil carbonato de pivaloiloximetilo
Uma mistura de pivalato de prata (7,5 g; 25 mmol) e 4-nitrofenil carbonato de iodometilo (Alexander et al.f J. Med. Chem. (1988) 31, 318; 7,99 g; 25 mmol) foi aquecida a refluxo em benzeno (50 mL) durante 2 h. O benzeno foi removido sob vácuo e resíduo foi dissolvido em tolueno. A filtração através de Hyflo e a purificação por cromatografia "flash" utilizando tolueno como eluente deu 4,00 g (54%) do composto em epígrafe. 1H-RMN (300 MHz, CDCI3): δ 8,25 (d, 2H), 7,40 (d, 2H), 5,85 (S, 2H), 1,2 (s, 2H). 13c-rmn (75 MHz, CDCI3) sinais de amidina e carbonilo: Ô 176,77, 155,06 (iv) Boc-(R)Cql-Aze-Pab-COOCH^OOCC(CH^) 2
Uma solução de 4-iiiLro£euil carbouaLo de pivaloí-loximetilo (1,18 g; 4 mmol; do passo (iii) acima) em cloreto de metileno (20 mL) foi adicionada à temperatura ambiente a uma solução de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (1,88 g; 4 mmol) e trietilamina (0,66 mL; 4,75 mmol) em cloreto de metileno (20 mL) . Após lho cloreto de metileno foi substituído por EtOAc e a mistura foi - 43
purificada por cromatografia "'flash" utilizando EtOAc como eluente para dar 1,27 g (50%) do composto em epígrafe. lH- RMN (300 MHz, CDCI3) : δ 9,5 (bs, 1H) , 8,25 (t, 1H) , 7,8 (d, 2H), 7,3 (d, 2H) , 7,0 (bs, 1H) , 5,0 -4,8 (m, 2H) , 4, 65-4,5 (m, 1H) , 4,5 -4,3 (m, 2H) , 4,2- 4,05 (m, 1H) , 3, 75 (t, 1H) , 2,7 -2,4 (m, 2H) , 1,9 1,45 (m, 5H) , 1,45-0,8 (m, 24H). (v) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCHoOOCC(CH^)2
Dissolveu-se Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-C00CH200CC(CH3)3 (327 mg; 0,52 mmol; do paso (iv) acima) numa mistura de cloreto de metileno (5 mL) e TFA (1,2 mL) . Após 2 h a mistura reaccional foi concentrada sob vácuo, adicionou-se acetonitrilo, e o solvente foi novamente removido sob vácuo para dar o produto em epígrafe em bruto que foi utilizado sem purificação adicional no passo seguinte. (vi) (nPr)oNC(0)CH9OOCCH9-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCEbOOCC(CH^)τ O resíduo do passo (v) acima foi misturado com (nPr) 2NC(0)CH200CCH2Br (150 mg; 0,53 mmol; do paso (ii) acima) e K2CO3 (480 mg; 3,5 mmol) em THF (5 mL) e aquecido durante 3 h a 40°C. A mistura reaccional foi filtrada e concentrada até um produto em bruto que foi purificado por RPLC preparativa para dar 78 mg (21%) do composto em epígrafe. iH-RMN (300 MHz, CDCI3) : 6 9,3-9,6 (bs, 1H) , 8,5 (m, 1H) , 7,95-8,15 (bS, 1H) , 7,85-7,95 (d, 2H) , 7,2-7,3 (d, 2H) , 5,8 (s, 2H) , 4,8-4,9 (dd, 1H) , 4,5-4,7 (m, 3H) , 4,0-4,4 (m, 3H) , 2,8-3,4 (m, 5H) , 2,2-2,7 (m, 3H) , 1,75-1,3 (m, 9H), 1,3-1,0 (m, 14H), 1,0-0,7 (m, 7H) . 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) sinais de amidina e carbonilo: δ 177,24, 175,30, 171,8b, 170,79, 168,78, 165,82, 163,14. 44 t
Exemplo 13
EtOOCCHo-(R)Cql-Aze-Pab-COOCH^OOCCtCH?)? O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 12(vi) acima a partir de Boc-{R)Cgl-Aze-Pab-C00CH200CC(CH3)3 (0,41 g; 0,65 mmol; ver Exemplo 12(iv) acima) utilizando aceto-nitrilo (10 mL) como solvente. Após agitação de um dia para o outro à temperatura ambiente, o solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi partilhado entre EtOAc e água. A fase aquosa foi extraída tris vezes com EtOAc e as fases orgânicas combinadas foram secas (Na2SC>4) e o solvente foi removido sob vácuo. O resíduo foi submetido a cromatografia "flash1' utilizando cloreto de metileno/metanol como eluente. A liofilização de ácido acético glacial deu 84 mg (21%) do composto em epígrafe. 1H-RMN (300 MHz, CDCI3) : Ô 9,9 (bs, 1H) , 8,5 (t, 1H) , 7,35 (d, 2H), 5,85 (s, 2H), 5,90 (dd, 2H), 4,6-4,35 (m, 2H) , 4,15-4,0 (m, 4), 3,2 (s, 2H) , 2,85 (d, 1H) , 2,7-2,45 (m, 2), 2,0-1,9 (m, 2H) , 1,8-1,45 (m, 5H) , 1,3-0,9 (m, 18H). 13C-RMN (75 MHz, CDCI3) sinais de amidina e carbonilo: Ô 177,23, 175,48, 172,29, 170,80, 168,85, 163,14.
Exemplo 14
EtOOCCH?-(R)Col-Aze-Pab-COOCHÍCHi)OOCCH^ (i) Boc-(£)Cgl-Aze-Pab-COOCHÍCH^)OOCCH^
Uma solução de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (6,38 g; 13,5 mmol), 4-nitrofenil carbonato de 1-acetoxietilo (Ale-xander et al., «J. Med. Chem. (1988) 31, 318) (3,05 g; 12 mmol), e trietilamina (1,95 mL; 14 mmol) em cloreto de metileno (40 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h seguida por adição de EtOAc. A solução resultante foi ligeiramente concentrada e lavada com Na2C03 aquoso (10%) , concentrada até um produto em bruto, que foi purificado por cromatografia '"flash'' utilizando EtOAc como eluente, para dar 5,59 g (77%) do composto em epígrafe. 45
1H-RMN (300 MHz, CDCI3) : δ 9,5 (bs, 1H), 8,25 (t, 1H) , 7,85 (d, 2H), 7,35 (d, 2H) , 6,95 (q, 1H), 6,7 (bs, 1H) , 5,0-4,85 (m, 2H) , 4,65-4,5 (m, 1H) , 4,5-4,25 (m, 2H) , 4,2-4,05 (m, 1H), 3,75 (t, 1H), 2,65-2,45 (m, 2H), 2,05 (s, 3H), 1,9-1,45 (m, 11H), 1,45-0,8 (m, 12H) . !3c-rmn (75 MHz, CDCI3) sinais de amidina e carbonilo: Ô 172,61, 170,80, 169,54, 168,91, 162,50, 156,02. (ii) H-(R)Cql-Aze-Pab-COOCH(CH^)OOCCH^ O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 12(v) a partir de Boc- (J?) Cgl-Aze-Pab-COOCH (CH3) OOCCH3 (2,21 g; 3,68 mmol; do passo (i) acima). (iii) EtOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH^)OOCCH^ O H- (#) Cgl-Aze-Pab-COOCH (CH3) OOCCH3 em bruto do passo (ii) acima foi dissolvido em cloreto de metileno (150 mL) . A mistura foi lavada com uma solução de Na2C03 a 10% e a fase orgânica foi seca com K2CO3 e filtrada. À solução resultante adicionou-se K2CO3 (756 mg, 5,5 mmol) e (O-trifluorometanossulfonil)-glicolato de etilo (790 mg; 3,3 mmol) em cloreto de metileno (5 mL). A mistura reaccional foi agitada durante 5-10 minutos à temperatura ambiente e então concentrada sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em EtOAc e a mistura resultante foi filtrada através de Celite. 0 filtrado foi submetido a cromatografia ‘"'flash11 utilizando EtOAc como eluente seguida por HPLC para dar 475 mg (22%) do composto em epígrafe. iH-RMN (300 MHZ, CDCI3) : δ 9,5 (bs, 1H) , 8,3 (t, 1H) , 7,7 (d, 2H) , 7,2 (d, 2H) , 6,85 (q, 1H) , 4,8 (t, 1H) , 4,45-4,25 (m, 2H), 4,1-3,85 (m, 4H) , 3,1 (s, 2H), 2,75 (s, 1H) , 2,5-2,3 (m, 2H) , 1,95 (β, 3H) , 1,9-1,8 (m, 1H) , 1,7-1,25 (m, 8H) , 1,25-1,75 (m, 8H) . (p tz ^ sinais de amidina e 170,81, 169,49, 168,80, 46 13C-RMN (75,5 MHz, CDCI3) carbonilo: δ 175,26, 172,34, 162,43 .
Exemplo 15
MeOOCCHo-(R)Cql-Aze-Pab-OOCPh (i) Bou-(R) Cql-Aze-Pab-OOCPh A uma solução de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (1,0 g; 2,1 mmol) e Na2HPC>4 (18,7 g; 105 mmol) em THF (45 mL) a 20°C adicionou-se gota a gota peróxido de benzoílo (556 mg; 2,3 mmol) dissolvido em THF (10 mL) ao longo de 45 minutos. Após agitação a 20°C durante 24 h, a mistura reaccional foi concentrada e o produto em bruto resultante foi submetido a RPLC preparativa. Esta deu 124 mg (10%) do composto em epígrafe como um sólido branco. l-H-RMN (500 MHz, CDCI3) : δ 8,26 (m. 1H) , 8,09 (m, 2H) , 7,72 (m, 2H) , 7,59 (m, 1H) , 7, 48 (m , 2H) , , 7,36 (d, 2H) , 5,13 (s, 2H) , r 4,87-4,98 (m, 2H) , 4,54- -4,61 (m, 1H) , 4,33 -4,47 (m, 2H) , 4,13-4,19 (m, 1H) , 3,81 (t, 1H) , 2,53 -2,63 (m, 2H) , 1,73-1,86 (m, 3H) , 1,66- 1,72 (m, 2H) , 1,36 (s. 9H) , 0,968-1,28 (m, 6H) . 13C-RMN (100 MHz, CDCI3) sinais de amidina e carbonilo: δ 172,7, 170,6, 163,9, 157,0, 155,9. LC-MS: m/z 592 (M+H+); m/z 614 (M+Na+). (ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh A uma solução de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh (600 mg; 1,01 mmol; do passo (i) acima) em cloreto de metileno (18 mL) adicionou-se TFA (6 mL) a 2 0°C. Após agitação durante 14 h, a mistura reaccional foi concentrada e o produto em bruto resultante foi partilhado entre EtOAcrNaOH 0,1 M. As fases foram separadas e a camada orgânica foi seca (Na2SC>4) e evaporada. Rendimento: 480 mg (96%) como um sólido branco. 47 iH-RMN (400 MHz, MeOH-d4) : δ 8,18 (m, 2H) , 7,77 (m, 2H) , 7,64 (m, 1H) , 7,52 (m, 2H) , 7,43 (d, 2H) , 4,75- 4,81 (m, 1H), 4,50 (s, 2H), 4,18-4,34 (m, 2H), 3,12 (d, 1H) , 2,57-2,68 (m, 1H) , 2,23-2,33 (m, 1H) , 1,88-1,96 (m, 1H) , 1,73-1,84 (m, 2H) , 1,59-1,71 (m, 2H) , 1,45- 1,57 (m, 1H), 0,80-1,34 (m, 5H) . LC-MS: m/z 492 (M+H+) ; m/z 514 (M+Na+) . (iii) MeOOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-OOCPh A uma solução de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCPh (480 mg; 0,97 mmol; do passo (ii) acima), K2CO3 (270 mg; 2 mmol) em acetonitrilo (5 mL) a 20°C adicionou-se bromoacetato de metilo (177 mg; 1,16 mmol). A reacção foi agitada a 20°C durante 14 h. A mistura reaccional foi filtrada e concentrada para dar um produto em bruto que foi purificado por RPLC preparativa para dar 269 mg (49%) do composto em epígrafe como um sólido branco. iH-RMN (500 MHz, CDCI3) : δ 8,43 (m, 1H, NH) , 8,09 (m, 2H) , 7,69 (m, 2H) , 7,59 (m, 1H), 7,47 (m. 2H) , 7, 34 (m. 2H) , 5,27 (s, 2H) , 4,93 (dd / 1H) , 4,59 (dd, 1H) , 4,40 (dd, 1H) , 4,12 (m, , 2H), 3, 65 (s, 3H), 2,87 (d , 1H) , 2,72- -2,63 (m, 1H) , 2,55-2,48 (m, 1H) , 1,96 (m; , 1H) , 1,74 (m, 2H) , 1,67 (d, 1H), 1, 59 (d, 1H), 1,56 -1, 50 (m, 1H) , 1,29 -1,08 (m, 4H), 1,04 -0 ,94 (m, 1H) l^c-RMN (100 MHz, CDCI3) sinais de amidina e carbonilo: δ 175,1, 172,5, 170,6, 164,0, 157,1. LC-MS: m/z 564 (M+H+)
Exemplo 16
MeOOCCH·?-(R)Cql-Aze-Pab-OH A uma solução de MeOOCCH2-(E)Cgl-Aze-Pab-OC(0)Ph (260 mg; 0,46 mmol; ver Exemplo 15 (iii) acima) em THF (4,6 mL) adicionou-se KOMe (1,6 mL; 0,29 M; 0,46 mmol) a 20°C. Após 15 minutos de agitação a mistura foi concentrada e submetida a RPLC preparativa. Esta deu 109 mg (52%) do composto em epígrafe como um sólido branco. 48 I--' [,________ \ ^-H-RMN (500 MHz, MeOH-d4) : δ 7,59 (d, 2H) , 7,34 (d, 2H) , 4,83 (s, 2H) , 4,82-4,76 (m, 1H) , 4,48 (d, 1H) , 4,33 (d, 1H) , 4,15-4,30 (m, 2H) , 3,54 (s, 3H) , 3,04 (d, 1H), 2,57 (m, 1H), 2,26 (m, 1H), 1,95 (m, 1H), 1,75 (m, 2H) , 1,58-1,70 (m, 2H) , 1,53 (m, 1H) , 1,31-1,10 (m, 4H), 1,04 (m, 1H) í3C-RMN (100 MHz, MeOH-d4) sinais de amidina e carbonilo: δ 175,9, 174,3, 172,7, 155,2. LC-MS: m/z 460 (M+H+), m/z 482 (M+Na+)
Exemplo 17
EtOOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-OH A uma solução de cloridrato de hidroxilamina (120 mg; 1,72 mmol) e trietilamina (0,8 mL, 5,7 ramol) em EtOH (95%; 4,0 mL) adicionou-se EtOOCCH2-(R) Cgl-Aze-
Pab-C (0) OCH (CH3) OOCCH3 (184 mg; 0,31 mmol; ver Exemplo 14 (iii) acima), e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 dias. A mistura reaccional foi concentrada e o produto em bruto submetido a RPLC preparativa. Esta deu 85 mg (58%) do composto em epígrafe. iH-RMN (300 MHz, CD3OD) : δ 7,6 (d, 2H) , 7,35 (d, 2H) , 4,75-4,85 (m, 1H), 4,4-4,55 (m, 2H), 4,0-4,35 (m, 4H) , 3,35 (d, 2H), 3,05 (d, 1H), 2,5-2,65 (m, 1H), 2,2-2,35 (m, 1H) , 1,9-2,05 (m, 1H), 1,41-1,85 (m, 5H) , 0,85-1,35 (m, 8H) . 13C-RMN (75,5 MHz, CD3OD) sinais de carbonilo e amidina: δ 175,97, 173,91, 172,72, 155,23. LC-MS: (m+1) = 474 (m/z)
Exemplo 18
Bn00CCH9-(R)Cql-Aze-Pab-OH A uma solução de cloridrato de hidroxilamina (320 mg; 4,59 mmol) e trietilamina (1,7 mL, 12,24 mmol) em EtOH, adicionou-se BnOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (1,0 g;
1,52 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 40 horas e depois concentrada. O produto em bruto foi purificado por RPLC
L-L - 49 - preparativa utilizando 50% de acetonitrilo em NH4OAC 0,1 M como eluente para dar 0,34 g (42%) do composto em epígrafe. 5 LC-MS: (m+1) = 536 (m/z)
Exemplo 19
nPrOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-Z 10 15 O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-Z x 2HC1 (700 mg; 1,2 mmol) e bromoacetato de n-propilo (268 mg; 1,45 mmol). Rendimento: 259 mg (35%). FAB-MS: (m+1) = 606 (m/z)
Exemplo 20 nPrOOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-OH 20 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 18 a partir de nPrOOCCH2-(i?) Cgl-Aze-Pab-Z (182 mg; 0,3 mmol; ver
Exemplo 19 acima). O produto em bruto foi purificado por RPLC preparativa utilizando 40% de acetonitrilo em NH4OAC 0,1 M como eluente para dar 74 mg (51%) do composto em epígrafe. LC-MS: (m+1) = 488 (m/z) 30
Exemplo 21
iPrOOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-OH O composto em epígrafe foi preparado analogamente 35 ao procedimento descrito no Exemplo 18 a partir de iPrOOCCH2~ (i?) Cgl-Aze-Pab-Z (590 mg,· 0,7 mmol; ver
Exemplo 39 adiante). Rendimento: 110 mg (32%). LC-MS: (m+1) = 488 (m/z) 50
Exemplo 22
tBuOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-OH O composto em epígrafe foi preparado analogamente 5 ao procedimento descrito no Exemplo 18 a partir de tBuOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (738 mg; 1,2 mmol; ver
Exemplo 37 adiante). Rendimento: 290 mg (48%). LC-MS: (m+1) = 502 (m/z) 10
Exemplo 23 (nPr)^NCOCH^OOCCH?-(R)Cal-Aze-Pab(OH) (i) HOOCCH?-(R)Cal(Boc)-Aze-Pab-O-Boc 15
Uma solução de HOOCCH2-(R) Cgl-Aze-Pab-OH (670 mg; 1,5 mmol; ver Exemplo 28 adiante), (Boc)20 (654 mg; 3 mmol) e DMAP (92 mg; 0,75 mmol) em THFtágua (10:1) foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura 20 reaccional foi concentrada e purificada por RPLC. A liofilização deu 112 mg (12%) do composto em epígrafe como um sólido branco. LC-MS: (m-1) = 643 (m/z)
(ii) (nPr)oNCOCH^OOCCH?-(R)Cal(Boc)-Aze-Pab-O-Boc
Uma solução de HOOCCH2-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-O-Boc (100 mg, 0,15 mmol; do passo (i) acima), (nPr)2NCOCH2OH 30 (27 mg; 0,17 mmol; ver Exemplo 12 (i) acima), EDC (40 mg; 0,21 mmol) e DMAP (10 mg; 0,075 mmol) em acetonitrilo (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 4 dias. A mistura reaccional foi concentrada, purificada por RPLC preparativa e liofilizada para dar 35 21 mg (18%) do composto em epígrafe. LC-MS: (m-1) = 787 (m/z) 51
(iii) (nPr) 9NCOCH9OOCCH2- (R) Cql-Aze-Pab-OH TIma solução de (nPr) 2NCOCH2 - (R) Cgl (Boc) -Aze-Pab-O-Boc (20 mg; 0,025 mmol) em TFA.-cloreto de metileno (1:1) foi agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos. A mistura reaccional foi concentrada e liofilizada de acetonitrilo e água para dar 5 mg (34%) do composto em epígrafe. LC-MS: (m+1) = 587 (m/z)
Exemplo 24
ChNHCOCH^OOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-OH O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 18 a partir de ChNHC0CH200CCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (118 mg; 0,17 mmol; ver Exemplo 11 (iii) acima). Rendimento: 1,8 mg. LC-MS: (m+1) = 585 (m/z)
Exemplo 25
MeNHCOCHgOOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-OH O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 18 a partir de MeNHCOCH2~(R)Cgl-Aze-Pab-Z (81 mg; 0,12 mmol; ver
Exemplo 36 adiante). Rendimento: 10 mg (16%). LC-MS: (m+1) = 517 (m/z)
Exemplo 26
EtOOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-OAc (i) H-(R)Cql-Aze-Pab-OAc - 52 5 1 Γ u
t 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao método descrito no Exemplo 27 adiante (passos (i) , (ii) e (iii)) utilizando anidrido do árido acético am vez de anidrido do ácido propanóico. LC-MS: (m+1) = 430 (m/z) (ii) EtOOCCH?-(R)CqI-Aze-Pab-QAc 10 O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao método descrito no Exemplo l(iii) acima a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-OAc (370 mg; 0,6 mmol) e bromoacetato de etilo (105 mg; 0,63 mmol) . Rendimento: 67 mg (22%) . 15 LC-MS: (m+1) = 516 (m/z)
Exemplo 27
EtOOCCHo-(R)Cql-Aze-Pab-OC(O)Et 20 (i) Boc-(R)Çql-Aze-Pab-OH
A uma solução de cloridrato de hidroxilamina e trietilamina em EtOH, adicionou-se Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-Z
(1,0 g; 1,52 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 40 horas e depois concentrada. 0 produto em bruto foi purificado por RPLC preparativa. LC-MS: (m+1) = 488 (m/z) 30 (ii) Boc- (R) Ccrl-Aze-Pab-OC (O) Et
Uma solução de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (500 mg; 0,91 mmol; do passo (i) acima) e anidrido do ácido propanóico (3,5 mL) foi agitada à temperatura ambiente 35 durante 45 minutos e depois concentrada. O produto em bruto foi purificado por RPLC
i I
[ I ' U, )=¾¾— - 53 - preparativa utilizando 50% de acetonitrilo em NH4OAC 0,1 M como eluente para dar 266 mg (54%) do composto em epígrafe. LC-MS: (m+1) = 544 (m/z) (iii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-OC(O)Et O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao método descrito no Exemplo 1 (ii) a partir de Boc-(R) Cgl-Aze-Pab-OC(O)Et (238 mg; 0,44 mmol; do paso (ii) acima). Rendimento: 290 mg (100%). LC-MS: (m+1) = 444 (m/z) (iv) EtOOCCH?-(R)Çql-Aze-Pab-OC(O)Et A uma solução de H-(R) Cgl-Aze-Pab-OOCEt (300 mg; 0,45 mmol; do paso (iii) acima) e K2CO3 (308 mg; 2,23 mmol) em cloreto de metileno (6 mL) a 0°C adicionou-se gota a gota Et00CCH20S02CF3 (105 mg; 0,45 mmol, preparado a partir de anidrido tríflico e glicolato de etilo). Depois de a mistura reaccional ter sido agitada a temperatura ambiente durante lha mistura reaccional foi lavada com água, ácido cítrico e água, seca (Na2SC>4) e concentrada. O produto em bruto foi purificado por RPLC preparativa utilizando 45% de acetonitrilo em NH4OAC 0,1 M como eluente para dar 63 mg (27%) do composto em epígrafe. LC-MS: (m+1) = 530 (m/z)
Exemplo 28
HOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (i) fcBuOOCCH^-(R)Cal-Aze-Pab-OOCPh 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao método descrito no
Exemplo l(iii) acima a partir de H-(R)Cgl- 54 r U. ver Exemplo 15(ii) (119 mg; 0,6 mmol).
Aze-Pab-OOCPh (250 mg; 0,5 mmol; acima) e bromoacetato de t-butilo Rendimentos 211 mg (69%). LC-MS: (m+1) = 606 (m/z) (ii) HOOCCHo- (-R)Cql-Aze-Pab-OOCPh O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao método descrito no Exemplo l(ii) acima a partir de tBuOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh (233 mg; 0,3 mmol; do passo (i) acima). Rendimento: 65 mg (37%). LC-MS: (m+1) = 550 (m/z)
(iii) HOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-OH
Uma solução de HOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh (60 mg; 0,1 mmol; do passo (ii) acima) e KOMe (0,2 M; 0,2 mmol) em THF (10 mL) e metanol (1,5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos. A mistura reaccional foi concentrada e liofilizada de água e acetonitrilo para dar 28 mg (63%) do composto em epígrafe. LC-MS: (m+1) = 446 (m/z)
Exemplo 29
HOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-O-cis-Oleílo (i) tBuOOCCH^-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-Z
Uma solução de tBuOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (1,7 g; 2.8 mmol; ver Exemplo 37 adiante), (Boc)20 (672 mg; 3.08 mmol) e DMAP (68 mg; 0,56 mmol) em THF (30 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. Adicionou-se mais (Boc) 2O (305 mg; 1,4 mmol) a 5°C.
Após mais 24 h a mistura reaccional foi concentrada (30%) 55 (30%) 55
u e purificada por RPLC preparativa para dar 587 mg do composto desejado. EC-MS: (m+1) = 720 (m/z)
(ii) tBuOOCCH?-(R)CqI(Boc)-Aze-Pab-OH O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 18 a partir de tBuOOCCH2-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-Z (580 mg; 0,8 mmol; do passo (i) acima). Rendimento: 341 mg (71%). EC-MS: (m+1) = 602 (m/z) (i i i) tBuOOCCH^-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-O-cis-Oleílo
Uma solução de tBuOOCCH2-(R) Cgl (Boc)-Aze-Pab-OH (340 mg; 0,56 mmol; do passo (ii) acima), cloreto de cis-oleílo (170 mg; 0,56 mmol) e trietilamina (62 mg; 0,61 mmol) em cloreto de metileno foi agitada durante 5 minutos. A mistura reaccional foi concentrada e purificada por RPLC preparativa para dar 326 mg (67%) do composto em epígrafe. EC-MS: (m+1) = 867 (m/z) (iii) HOOCCHç?- (R) Cgl-Aze-Pab-O-cis-Oleilo O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao método descrito no Exemplo l(ii) a partir de tBuOOCCH2-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-O-cis-Oleílo (223 mg; 0,25 mmol; do passo (iii) acima). LC-MS: (m+1) = 710 (m/z) 56 fli
U F~
Exemplo 30
Ciclooctil-OOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-Z (i) Bromoacetato de ciclooctilo 5
Dissolveu-se ciclooctanol (1,3 g; 10 mmol) e DMAP (0,3 g) em cloreto de metileno seguido pela adição de cloreto de bromoacetilo (1 mL; 12 iiimul) . Após agitação durante 18 h a mistura reaccional foi lavada com Na2CC>3 10 aquoso (2 M) e HC1 (1 M) , seca, concentrada e purificada por cromatografia "flash1' utilizando éter de petróleo: cloreto de metileno (50:50) para dar 1,8 g (72%) do composto em epígrafe.
15 (ii) Ciclooctil-OOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-Z O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-Z x 2HC1 (703 mg; 1,2 mmol) e 20 bromoacetato de ciclooctilo (363 mg; 1,46 mmol; do passo (i) acima). Rendimento: 379 mg (46%). FAB-MS: (m+1) = 674 (m/z) 25 Exemplo 31
tBuCH^OOCCH^-(R)Cql-Aze-Pab-Z O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de 30 H- (R) Cgl-Aze-Pab-Z x 2HC1 (2,5 g; 4,3 mmol) e bromoacetato de terc-butilmetilo (1,08 g,- 5,2 mmol).
Rendimento: 1,87 g (69%). FAB-MS: (m+1) = 634 (m/z) 35 57 (--' L-Zj 7=-**" Γ1 Γ Γ
Exemplo 32 (2-Me)BnOOCCH9- (R) Cgl-Aze-Pab-Z (i) Bromoacetato de metilbenzilo O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 3 0 (i) a partir de álcool 2-metilbenzílico (5 g; 41 mraol) e cloreto de bromoacetilo (12,6 g; 80 mmol). Rendimento: 8,2 g (82%) .
(ii) (2-Me)Bn00CCH2-(R)Cal-Aze-Pab-Z O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-Z x 2HC1 (580 mg; 1 mmol) e bromoacetato de 2-metilbenzilo (290 mg; 1,2 mmol; do passo (i) acima). Rendimento: 30 mg (4,5%). LC-MS: (m+1) = 668 (m/z)
Exemplo 33
ChCH^OOCCH?-(R)Çql-Aze-Pab-Z
Uma solução de BnOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (1,41 g; 1,7 mmol) e álcool ciclohexil metílico (6 mL) em trietilamina (474 μΐ,) e cloreto de metileno (3 mL) foi aquecida a refluxo durante 4 dias. A mistura reaccional foi processada para dar um produto em bruto que foi purificado por cromatografia "flash" utilizando cloreto de metileno:metanol (95:5) como eluente para dar 801 mg (71%) do composto em epígrafe. FAB-MS: (m+1) = 660 (m/z)
- 58 Exemplo 34 ChOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-Z l L-C; t (i) Bromoacetato de ciclohexilo O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 32 (i) acima a partir de ciclohexanol (1 g; 10 mmol) e cloreto de bromoacetilo (1 mL; 12 mmol).
(ii) ChOOCCH?-ÍR)Cql-Aze-Pab-Z O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z x 2HC1 (2,5 g; 14,32 mmol) e bromoacetato de ciclohexilo (1,5 g; 5,2 mmol). Rendimento: 1,7 g (60%). FAB-MS: (m+1) = 646 (m/z)
Exemplo 35
PhC(Me)^OOCCH?-(R)Cal-Aze-Pab-Z (i) Bromoacetato de 2-fenil-2-propilo 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 30 (i) a partir de 2-fenil-2-propanol (3 g; 22 mmol) e cloreto de bromoacetilo (4,16 g; 26 mmol). Rendimento: 1,2 g (44%) .
(ii) PhC (Me)^OOCCH?.- (R) Cql-Aze-Pab-Z O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-Z x 2HC1 (1,2 g; 2,2 mmol) e bromoacetato de 2-fenil-2-propilo (640 mg; 2,5 mmol; do passo (i) acima). Rendimento: 1,3 g (86%). - 59 - - 59 - L·, r~ 8,35 (t, (m, 10H ou (parte AB 1H), 3,27-(q, 2H) , 1,54 (d, (q, 1H) . 1H-RMN (500 MHz, CDCI3) : δ 9,3 (br s, 1H) , 1H) , 7,75 (d, 2H) , 7,45 (d, 2H) , 7,30-7,05 11H) , 5,15 (s, 2H) , 4,78 (t, 1H) , 4,40-4,30 de espectro ABX, 2H) , 3,95 (q, 1H) , 3,74 (q, 3,19 (espectro AB, 2H) , 2,72 (d, 1H) , 2,43 1,93 (br d, 1H) , 1,75-1,60 (m, 9H ou 10H) , 1H) , 1,49-1,40 (m, 1H),1,25-1,0 (m, 4H), 0,92
Exemplo 36
MeNHCOCH^OOCCH?-(R)Cal-Aze-Pab-Z O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-Z x 2HC1 (1,0 g; 1,7 mmol) e MeNHC0CH2 OOCCH2 Br (440 mg; 2 mmol; preparado analogamente aos procedimentos descritos no Exemplo 11 acima (passos (i) , (ii) e (iii)) utilizando metilamina em vez de ciclohexilamina). Rendimento: 380 mg (35%). FAB-MS: (m+1) = 635 (m/z)
Exemplo 37
tBuOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-Z O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 1 (iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z x 2HC1 (500 mg; 1,0 mmol) e brorao-acetato de t-butilo (231 mg; 1,2 mmol). Rendimento: 420 mg (69%). LC-MS: (m+1) = 620 (m/z)
Exemplo 38
(Me)tCHC(Me)7OOCCH9-(R)Cal-Aze-Pab-Z 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H-(R) Cgl-Aze-Pab-Z (787 mg; 1,4 mmol) e bromoacetato de 2,3-dimetil-2-butilo (364 mg; 1,63 mmol). Rendimento: 590 mg (67%). (1 ^ - 60 - y FAB-MS: (m+1) = 648 (m/z)
Ryemril o 8 9
iPrOOCCH?- (R) Cql-Aze-Pab-Z • 5 O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-Z (700 mg,- 1,2 mmol) e bromoacetato de isopropilo (262 mg; 1,5 mmol). Rendimento: 225 mg 10 (31%) . FAB-MS: (m+1) = 606 (m/z)
Exemplo 40 15 BnOOCCHo-(R)Cal-Aze-Pab-C00Ph(4-0Me) (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-C00Ph(4-0Me) 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente 20 ao procedimento descrito no Exemplo l(i) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H e cloroformato de 4-metoxifenilo. FAB-MS: (m+1) = 622 ' (m/z) 25 (ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) x 2HC1 O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 4 (ii) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) (do passo (i) acima). 30 (iii) BnOOCCHo-(R)Cal-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de 35 H- (R) Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) x 2HC1 (85 mg; 0,16 mmol; do passo (iii) acima) e bromoacetato de benzilo (90 mg; 0,2 mmol). Rendimento: 60 mg (56%). 61 FAB-MS: (m+1) = 670 (m/z)
Fxemnl n 41
ChCHoOOCCHo-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) (554 mg; 0,G4 mmol; ver Exemplo 40 (ii) acima) e bromoacetato de ciclohexilmetilo (165 mg; 0,7 mmol). Rendimento: 34 mg (8%) . FAB-MS: (m+1) = 676 (m/z)
Exemplo 42 (2-Me)BnOOCCH^-(R)Cql-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 1 (iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-COOPh (4-OMe) (522 mg; 1 mmol; ver
Exemplo 40 (ii) acima) e bromoacetato de 2-(metil)benzilo (365 mg; 1,5 mmol). Rendimento: 158 mg (23%). LC-MS: (m+1) = 684 (m/z)
Exemplo 43
EtOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me) (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 1 (i) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab (1,96 g; 4,56 mmol) e cloroformato de 4-tolilo (850 mg; 4,99 mmol). Rendimento: 1,39 g (55%). FAB-MS: (m+1) = 606 (m/z) 62 62 I . i-w
(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me) O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 4(ii) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me) (388 mg; 0,64 mmol; do passo (i) acima). Rendimento: 293 mg (91%). FAB-MS: (m+1) = 506 (m/z) (iii) EtOOCCH^-(R)Cql-Aze-Pab-COOPh(4-Me) 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H-(R) Cgl-Aze-Pab-COOPh (4-Me) (288 mg; 0,6 mmol; do passo (ii) acima) e bromoacetato de etilo (114 mg; 0,7 mmol) . Rendimento: 81 mg (24%) . FAB-MS: (m+1) = 592 (m/z)
Exemplo 44
BnOOCCHg-(R) Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me) O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me) (272 mg; 0,54 mmol; ver
Exemplo 43 (ii) acima) e bromoacetato de benzilo (147 mg; 0,6 mmol). Rendimento: 107 mg (31%). FAB-MS: (m+1) = 654 (m/z)
Exemplo 45
BnOOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-COO-nBu O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu x 2HC1 (400 mg; 0,74 mmol; ver Exemplo 9(ii) - 63 -
acima) e bromoacetato de benzilo (210 mg; 0,88 mmol) . Rendimento: 220 mg (48%). FAB-MS: (m+1) = 620 (m/z)
Exemplo 46 iPrOOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-COOCH9CH=CH2 O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R)Cgl-Aze-Pab-C00CH2CH=CH2 x 2TFA (456 mg; 0,67 mmol; ver Exemplo l(ii) acima) e bromoacetato de isopropilo (145 mg; 0,8 mmol). Rendimento: 294 mg (79%). FAB-MS: (m+1) = 556 (m/z)
Exemplo 47
EtOOCCH?-(R)Çql-Aze-Pab-COO-iBu (i) Boc-Pab-COO-iBu A uma solução de Boc-Pab-H (500 mg; 2,0 mmol; preparado a partir de Pab-Z e (Boc)20 (formando Boc-
Pab-Z), seguido por hidrogenação sobre Pd/C) e trietilamina (400 mg; 4,0 mmol) em cloreto de metileno (10 mL) adicionou-se cloroformato de i-butilo (270 mg; 2,2 mmol) a 0°C. Após agitação durante 5 h, adicionou-se água. A fase orgânica foi seca (Na2SC>4) e concentrada para dar 530 mg (76%) do composto em epígrafe. ÍH-RMN (500 MHz, CDCI3) : δ 9,5 (bs, 1H) , 7,82 (d, 2H), 7,31 (d, 2H), 6,6 (bs, 1H),5,0 (bs, 1H), 4,33 (bd, 2H), 3,93 (d, 2H), 2,04 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 0,97 (d, 6H). j - 64 (ii) H-Pab-COO-iBu x 2HC1 4
O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 4 (ii) a partir de Boc-Pab-COO-iBu (520 mg; 1,5 mmol; do passo (i) acima).
Rendimento: 430 mg .(88%) . ^•H-RMN (500 MHZ, MeOD) : Ô 7,89 (d, 2H) , 7,75 (d, 2H) , 4,30 (s, 2H), 4,17 (d, 2H), 2,11-2,05 (m, 1H), 1,02 (d, 6H) . (iii) Boc- (R) Ccfl-Aze-Pab-COO-iBu A uma solução de Boc-(R) Cgl-Aze-OH (480 mg; 1,4 mmol), H-Pab-COO-iBu x 2HC1 (430 mg; 1,3 mmol; do passo (ii) acima) e DMAP (650 mg; 5,3 mmol) em acetonitrilo (20 mL) adicionou-se EDC (270 mg; 1,4 mmol) . Após agitação durante 3 dias à temperatura ambiente a mistura reaccional foi concentrada e depois dissolvida com água e EtOAc. A fase orgânica foi lavada com NaHCC>3 (aq) e seca (Na2SC>4) , concentrada e purificada por cromatograf ia ‘"'flash'1 utilizando EtOAc como eluente para dar 510 mg (52%) do composto em epígrafe. (iv) H-(R) Cgl-Aze-Pab-COO-iBu x 2HC1 O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 4(ii) a partir de Boc-(R) Cgl-Aze-Pab-COO-iBu (500 mg; 0,88 mmol; do passo (iii) acima). Rendimento: 360 mg (87%). (v) EtOOCCHh-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-iBu 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H-(R) Cgl-Aze-Pab-COO-iBu x 2HC1 (290 mg; 0,53 mmol; do passo (iv) acima) e bromoacetato de benzilo (110 mg; 0,64 mmol). Rendimento: 140 mg (47%).
FAB-MS: (m+1) = 558 (m/z)
Exemplo 48
BnOOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-COO-nPr O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-COO-nPr x 2TFA (902 mg; 1,3 mmol; ver
Exemplo 5 (ii) acima) e bromoacetato de benzilo (362 mg; 1,6 mmol). Rendimento: 199 mg (25%). ÍH-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8,43 (bs, 1H) , 7,78 (d, 2H) , 7,38-7,27 (m, 7H) , 5,05 (s, 2H) , 4,90 (dd, 1H) , 4,56- 4,39 (parte AB de espectro ABX, 2H), 4,12-4,03 (m, 3H) , 3,98-3,91 (q, 1H) , 3,33-3,22 (espectro AB, 2H) , 2,85 (d, 1H), 2,65-0,94 (m, 19H).
Exemplo 49
EtOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH^OOCCh (i) EtSCOOCHjOOCCh A uma solução de hidrogenossulfato de tetrabutilamónio (15,6 g, 45,6 mmol) e ácido ciclohexano carboxílico (5,85 g, 46 mmol) em cloreto de metileno adicionou-se NaOH (9,1 mL, 10 M; 68 mmol) a 0 °C. Após agitação durante 5 minutos a mistura reaccional foi filtrada, lavada com cloreto de metileno, dissolvida em tolueno, concentrada e dissolvida em THF para dar [BU4N]+[OOCCh]'. Adicionou-se EtSCOOCH2Cl (4 g; 25,9 mmol; ver Folkmann e Lund, J. Synthesis (1990) 1159) à solução de [BU4N]+[OOCCh]" em THF à temperatura ambiente. Após agitação à temperatura ambiente durante 12 h a mistura reaccional foi concentrada e purificada por cromatografia "'flash'' para dar 2,57 g (40%) do composto em epígrafe. ^H-RMN (400 MHz, CDCI3) picos de diagnóstico δ 5,80 (s, 2H, O-CH2-O), 2,85 (q, 2H, CH2-S) 66 f| I— t (ii) ClCOOCH?OOCCh A EtSC00CH200CCh (2,9 g; 11,8 mmol; do passo (i) acima) adicionou-se gota a gota SO2CI2 (3,18 g; 23,6 mmol) a 0°C. Após agitação durante 30 minutos a mistura reaccional foi concentrada para dar 1,82 g (70%) do composto desejado. 1H-RMN (500 MHz, CDCI3) picos de diagnóstico δ 5,82 (s, 2H, O-CH2-O) (iii) Boc-(R)Cal-Aze-Pab-COOCHsOOCCh O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(i) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (750 mg; 1,59 mmol) e ClC00CH200CCh (460 mg; 2,1 mmol; do passo (ii) acima). O produto em bruto foi purificado por RPLC. Rendimento: 355 mg (9%). FAB-MS: (m+1) = 656 (m/z)
(iv) H-(R)Cql-Aze-Pab-COOCH?OOCCh X 2TFA 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(ii) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-C00CH200CCh (do passo (iii) acima). (v) EtOOCCH9-(R)Cql-Aze-Pab-C00CH9Q0CCh O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-C00CH200CCh x 2TFA (193 mg; 0,35 mmol; do paso (iv) acima) e trifluoroacetato de etilo (83 mg; 0,35 mmol). Rendimento: 87 mg (39%). iH-RMN (400 MHz, CDCI3) : δ 8,48 (t br, 1H) , 7,83 (d, 2H) , 7,37 (d, 2H) , 5,86 (s, 2H), 4,95 (dd, 1H), 4,15-4,39 (parte AB de ι
espectro ABX, 2H) , 4,18-4,05 (m, 5H) , 3,26-3,17 (espectro AB, 2H), 2,87 (d, 1H), 2,75-0,95 (m, 29H) .
Exemplo 50
EtOOCCH?-(R)CqI-Aze-Pab-CQOCHgOOCCHoCh O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 49 partindo de ácido ciclohexil acético em vez de ácido ciclohexano carboxílico. Rendimento: 74 mg (17%). FAB-MS: (m+1) = 656 (m/z)
Exemplo 51
EtOOCCH?-(R)Çql-Aze-Pab-COOCH(Me)OOCPh O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 49 acima partindo de EtSCOOCH(CH3)Cl (preparado a partir de C1C0CH(CH3)Cl e EtSH utilizando o procedimento descrito por Folkmann et al., J- Synthesis (1990) 1159) em vez de
EtSCOOCH2Cl. Rendimento: 70 mg (23%). FAB-MS: (m+1) = 650 (m/z)
Exemplo 52
EtOOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-COOCTgOOCPh 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 49 utilizando ácido benzóico em vez de ácido ciclohexano carboxílico. Rendimento: 50 mg (39%). iH-RMN (300 MHz, CDCI3) : δ 9,73-9,25 (s br, 1H) , 8,45 (t, 1H), 8,05 (d, 2H), 7,83 (d, 2H), 7,60-7,10 (m, 6H), 6,10 (s, 2H), 4,96-4,84 (dd, 1H), 4,62-4,30 (ABX, 2H), 4,20-3,93 (m, 4H) , 3,25 (s, 2H) , 2,84 (d, 1H) , 2,73- 2,41 (m, 2H), 2,41-0,87 (m, 15H). 68 !
13c-rmn (300 MHz, CDCI3) carbonos de amidina e carbonilo: δ 163,1, 165,3, 169,0, 170,8, 172,3, 175,5.
Exemplo 53
BnOOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-COOCH(Me)OAc O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH3)OC (O) CH3 (108 mg; 0,21 mmol; ver Exemplo 14 (ii) acima) e bromoacetato de benzilo (36 μΐι; 0,23 mmol). Rendimento: 41 mg (30%). FAB-MS: (m+1) = 650 (m/z)
Exemplo 54
EtOOCCHo - (-R) Cql -Aze-Pab-CQQCHgOAc
(i) H-(R)Cql-Aze-Pab-COOCHTOAc x 2TFA O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 14 (passos (i) e (ii) ) acima utilizando 4-nitrofenilcarbonato de acetoximetilo (preparado analogamente ao método descrito no Exemplo 12(iii) utilizando acetato de prata em vez de pivalato de prata) . O processamento deu o composto em epígrafe que foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. (ii) EtOOCCH^-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH?OAc O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) acima a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-C00CH20Ac x 2TFA (0,83 mmol; do passo (i) acima) e bromoacetato de etilo (2,2 mmol). Rendimento: 286 mg. FAB-MS: (m+1) - 574 (m/z) 69 t
Exemplo 55 tBuOOCCHo-(R)Cal-Aze-Pab-COOCHtOAc O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) acima a partir de H- (R)Cgl-Aze-Pab-COOCH20Ac x 2TFA (0,313 mmol; ver Exemplo 54 (i) acima) e bromoacetato de t-butilo (73 mg; 0,376 mmol). Rendimento: 156 mg (83%). FAB-MS: (m+1) = 602 (m/z)
Exemplo 56
BnOOCCH?-(R)Cal-Aze-Pab-COOCH^OOC-tBu O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-C00CH200C-tBu x 2TFA (379 mg; 0,71 mmol; ver Exemplo 12(v) acima) e bromoacetato de benzilo (135 μΐι; 0,85 mmol). Rendimento: 146 mg (30%). FAB-MS: (m+1) = 678 (m/z)
Exemplo 57
EtOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCHvCCl^ (i) Boc-(R)Cal-Aze-Pab-COOCHbCCl^ 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 1 (i) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (1,0 g; 2,12 mmol), NaOH 2 M (11,7 mL) e cloroformato de tricloroetilo (494 mg; 2,33 mmol). Rendimento: 1,08 g (79%).
(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCHoCCfU O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no
Exemplo l(ii) a partir de Boc-(R)Cgl- 70
Aze-Pab-COOCH2CCl3 (1,04 g; 1,607 tnmol; do passo (i) acima). Rendimento: 1,43 g (99%). !h RMN (500 MHz, CD3OD) : δ 7,79 (d, 2H) , 7,61 (d, 2H) , 5,10 (s, 2H) , 4,87-4,81 (m, 2H) , 4,63-4,52 (q* 2H) , 5 4,41-4,34 (m, 1H) , 4,30-4,24 (m, 1H) , 3,72 (d. 1H) , 2,72-2,63 (m, 1H) , 2,32-2,25 (m, 1H) , 1,88- 1,10 (m, 14H) . (iii) EtOOCCH?- (R) Cgl-Aze-Pab-COOCHoCClT. 10 O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH2CCl3 (400 mg; 0,52 mmol; do passo (ii) acima) e bromoacetato de etilo (95 mg; 0,57 15 mmol). Rendimento: 8 mg (23%). iH-RMN (500 MHz, CDCI3) : δ 8,47 (bt, 1H), 7,83 (d, 2H) , 7,48 (bs, 1H) , 7,31 (d, 2H) , 4,92 (dd, 1H) , 4,85 (s, 2H) , 4,58-4,39 (parte AB de espectro ABX, 2H) , 4,16- 20 4,06 (m, 4H), 3,24 (s, 2H), 4,87 (d, 1H), 2,65-2,59 (m, 1H) , 2,56-2,48 (m, 1H) , 2,10-0,95 (m, 16H) .
Exemplo 58
MeOOC-C(=CEt)CH9OOCCH9-(R)Cgl-Aze-Pab-Z 25 (i) MeOOC-C(=CH)C(OH)Et
Adicionou-se propionaldeído (10,1 g,- 0,174 mol) gota a gota a uma solução de acrilato de metilo (10 g; 30 0,116 mol) e 1,4-diazabiciclo [2,2,2]octano (1,3 g; 0,0116 mol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 14 dias. Adicionou-se acetato de etilo (150 mL) . A fase orgânica foi lavada com água e solução saturada de cloreto de sódio, seca 35 (Na2S04), filtrada e concentrada para dar o composto desejado. Rendimento: 15,5 g (93%). 3-H-RMN (400 MHz, CDC13) : δ 6,24 (s, 1H) , 5,81 (s, 1H) , 4,34 (t, 1H) , 3,78 (s, 3H) , 2,82 (bs, 1H) , 1,69 (m, 2H), 0,95 (t, 3H) (ii) MeOOC-C(=CET)CH?Br
Adicionou-se HBr (6,5 mL, ~48%) gota a gota a MeOOC-C (-CII) C (ΟΙΙ) Et (3 g; 20,8 mmol; do passo (i) acima) a 0°C. Após 5 minutos adicionou-se gota a gota H2S04 (conc.; 6 mL) . A mistura reaccional foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. Separou-se duas fases e a fase superior foi diluída com éter. A fase etérea foi lavada com água e NaHC03 aquoso, seca (Na2SC>4 e carvão activado) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia ‘"flash". Rendimento: 1,7 g (40%) . iH-RMN (400 MHz, CDCI3) : δ 6,97 (t, 3H) , 4,23 (s, 2H) , 3,8 (s, 3H), 2,32 (m, 2H), 1,13 (t, 3H)
(iii) tBuOOCCH?-(R)Cal-Aze-Pab-Z 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (2,1 g; 3,6 mmol) e bromoacetato de t-butilo (780 mg; 4,0 mmol) . Rendimento: 1,73 g (78%) .
(iv) HOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-Z
Uma solução de tBuOOCCHg-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (do passo (iii) acima) e TFA em cloreto de metileno foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. A mistura reaccional foi concentrada e liofilizada de água e HCl (conc.; 10 eq.).
(v) MeOOC-C(=CEt)CH^OOCCH?-(R)Col-Aze-Pab-Z
Uma solução de HOOCCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (263 mg; 0,41 mmol; do passo (iv) acima), NaOH (1M; 1,239 mL; 1,239 mmol) e água (4 mL) foi liofilizada. Adicionou-se DMF (5 mL), seguida - 72 -
I t pela adição gota a gota de Me-OOC-C(=CET)CH2Br (103 mg; 0,496 mmol; do passo (ii) acima) a 0°C. A mistura reaccional foi agitada durante 24 horao à. temperatura ambiente, diluída com tolueno (5 mL) , lavada com água, seca (Na2SC>4) e concentrada. 0 resíduo foi purificado por cromatografia ‘"flash1' utilizando EtOAc:metanol (95:5) como eluente. Rendimento: 95 mg (33%). FAB-MS: (m+1) = 690 (m/z)
Exemplo 59
MenOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) (i) MenOOCCH?Br O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 30 (i) acima a partir de MenOH (10 mmol) e cloreto de bromoacetilo (12 mmol). Rendimento: 1,5 g (54%). (ii) MenOOCCH?- (R) Ccrl-Aze-Pab-COOPh (4-OMe) O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H-(R) Cgl-Aze-Pab-COO-Ph(4-OMe) (521 mg; 1 mmol; ver
Exemplo 40 (ii) acima) e MenOOCCH2Br (416 mg; 1,5 mmol; do passo (i) acima). Rendimento: 36 mg (5%). FAB-MS: (m+1) = 718 (m/z)
Exemplo 60 tBuOOCCH?-(R)Cgl-Aze-Pab-COOnPr 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr (575 mg; 0,837 mmol; ver Exemplo 5(ii) acima) e 1 - 73 - 1,01 mmol) mg; bromoacetato de t-butilo (196 Rendimento: 110 mg (23%). LC-MS: (m+1) = 572 (m/z)
Exemplo 61
MenOOCCHs-(R)Cql-Aze-Pab-Z O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (0,7 g; 1,21 mmol) e MenOOCH2Br (0,4 g; 1,45 mmol; ver Exemplo 59 (i) acima). Rendimento: 0,33 g (38%). FAB-MS: (m+1) = 702 (m/z)
Exemplo 62
BnOQCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO?) (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-C00-Bn(4-N09) O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(i) a partir de Boc- (R) Cgl-Aze-Pab-H (1,03 g; 2,18 mmol), NaOH 2 M (24 mL) e cloroformato de 4-N02-benzilo (518 mg; 2,4 mmol). Rendimento: 1,32 g (93%). FAB-MS: (m+1) = 651 (m/z) (ii) H-(R)Cql-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO?) O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo 4(ii) a partir de Boc-(R) Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NC>2) (1,32 mg; 2,03 mmol; do passo (i) acima). Rendimento: 1,0 g (79%). FAB-MS: (m+1) = 551 (m/z) 74 r L-^ —-ç- (iii) BnOOCCH? - (R) Col-Aze-Pab-COO-Bn (4-NO?) O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-N02) (0,5 g; 0,80 mmol; do passo (ii) acima) e bromoacetato de benzilo (220 mg; 0,90 mmol). FAB-MS: (m+1) = 699 (m/z)
Exemplo 63
EtOOCCH?-(R)Cql-Aze-Pab-Bn(4-NO?) O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (R) Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NC>2) (211 mg; 0,38 mmol; ver
Exemplo 62 (ii) acima) e bromoacetato de etilo (47 μΐ>; 0,42 mmol). Rendimento: 44 mg (18%). 1-H-RMN (300 MHz, CDCI3) : δ 9,55 (bs, 1H) , 8,50 (bt, 1H) , 8,20 (d, 2H) , 7,80 (d, 2H) , 7,60 (d, 2H) , 7,35 (d, 2H) , 6,87 (bs, 1H) , 4,95 (dd, 1H) , 4,65-4,40 (parte AB de espectro ABX, 2H), 4,18-4,04 (m, 5H) , 3,27-3,15 (espectro AB, 2H) , 2,87 (d, 1H) , 2,75-2,60 (m, 1H) , 2,57-2,45 (m, 1H), 2,00-0,95 (m, 16H).
Exemplo 64
PrlC(O)CH£OOCCH£-(R)Col-Aze-Pab-Z (i) PrlC(O)CH3OH
Uma mistura de 2,5-dioxo-l,4-dioxano (2,0 g; 17 mmol) e pirrolidina (8 mL; 97 mmol) foi aquecida a refluxo durante 1 h. 0 excesso de pirrolidina foi removido por evaporação. Rendimento: 4,4 g (99%). FAB-MS: (m+1) = 130 (m/z) 75 ρ- Ι'
U (ίί) PrlC(O)CH?OOCCH?Br A uma solução de PrlC(O)CH20H (0,4 g; 1,1 mmol ; do passo (i) acima) em DMF (15 mL) adicionou-se gota a gota brometo de bromoacetilo (0,63 g; 3,1 mmol) a 0°C. A mistura reaccional foi agitada durante 1,5 h a 0°C e 3 h à temperatura ambiente. Adicionou-se mais brometo de bromoacetilo (0,63 g; 3,1 mmol) e a mistura reaccional foi aquecida a 80°C, agitada à temperatura ambiente durante 12 h e concentrada. Rendimento: 320 mg (41%) . FAB-MS: (m+1) = 252 (m/z)
(iii) PrlC(0)CHoOOCCHo-(R)Cgl-Aze-Pab-Z 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (580 mg; 1 mmol) e PrlC(0)CH200CCH2Br (300 mg; 1,2 mmol; do passo (ii) acima). Rendimento: 400 mg (60%) . FAB-MS: (m+1) = 675 (m/z) lB -RMN (500 MHz, CDCI3): δ 9,66- 9,42 (bs, 1H) , 00 σ\ 4* 1 8, 56 (m, 1H) , 8, 03-7,93 (d, 2H) , 00 K£) -7,66 (bs, 1H) , 7, 45 (d, 2H) , 7, 45-7,25 (m, 5H) , 5,20 (s. 2H) , VO CD 1 4, 92 (dd, 1H) , 4, ,82-4,74 (m, 1H) , 4,62, 4,58 (espectro AB, 2H) , 4,26-4,05 (m, 3H) , 3,47-3,16 (m, 6H), 2,95 (d, 1H) , 2,78-2,68 (m, 1H) , 2,54-2,42 (m, 1H) , 2,03-1,95 (m, 16H) .
Exemplo 65 (2-Me)BnOOCCH2- (R) Ccfl-Aze-Pab-C00-Bn(4-N09) 0 composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO2) (500 mg; 0,80 mmol; ver
Exemplo 62(ii) acima) e bromoacetato de 2-(metil) benzilo (234 mg; 0,96 mmol; ver Exemplo 32 (i) acima). Rendimento: 528 mg (92%). t 76 l-H-RMN (400 MHz, CDCI3): δ 9,34 (bs, 1H) , 8,38 (t, 1H) , 8,09 (d, 2H) , 7, 72 (d. 2H) , 7,48 (d. 2H) , 7,3 7 (bs. 1H) , 7,23 (d, 2H) , 7,17 -7,05 (m, 4H) , 5,18 (S, 2H) , 5,00 (s, 2H) , 4,81 (dd, 1H) , 4,45 -4,34 (parte AB de espectro ABX, 2H) , 4,04 -3,97 (q, 1H) , 3,93-3,86 (q, 1H) , 3,27 -3,17 (espectro AB, 2H) , : 2,79 (d, 1H) , 2 ,54- 2,35 (m, 2H) , 2,22 (S, 3H) , . L,91-1 ,84 (bd, 1H), 1 ,71- 1,39 (m, 5Η), 1,19-0,84 (m, 4Η).
Exemplo 66
MeOOCCH?-(R)Cal-Aze-Pab-COOEt O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt (305 mg; 0,69 mmol; ver Exemplo 4 (ii} ) e bromoacetato de metilo (126 mg; 0,83 mmol). Rendimento: 188 mg (53%). LC-MS: (m+1) = 516 (m/z)
Exemplo 67 (nPr) £NC (O) CH9OOCCH9- (R) Cgl-Aze-Pab-COO-BnM-NO?)
(i) (nPr)oNC(0)CH2OOCCH9CI
Uma mistura de (nPr) 2NC (O) CH2OH (244 mg; 1,53 mmol; ver Exemplo 12 (i) acima) e cloreto de bromoacetilo (270 mg; 1,72 mmol) foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas. A mistura foi vertida em NaHC03 aquoso e extraída com cloreto de metileno. A fase orgânica foi lavada com KHSO4 aquoso (0,2 M) e solução saturada de cloreto de sódio, seca e concentrada. FAB-MS: (m+1) = 237 (m/z) iH-RMN (400 MHz, CDCI3) : δ 4,82 (s, 2H) , 4,22 (s, 2H) , 3,31-3,26 (t, 2H) , 3,10-3,15 (t, 2H) , 1,68-1, 52 (m, 2H), 1,97-0,86 (m, 6H). 77 (ii) (nPr)?NC(0)CH?00CCH9-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO?) O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (i?) Cgl-Aze-Pab-COOBn(4-NO2) (343 mg; 0,62 mmol; ver Exemplo 62 (ii) acima) e (nPr)2NC(0)CH2OOCCH2CI (160 mg; 0,68 mmol; do passo (i) acima). Rendimento: 89 mg (19%) . FAB-MS: (m+1) = 750 (m/z)
Exemplo 68 (2 -Me)BnOOCCH?-(R)Cal -Aze-Pab-COOCHgOOC tBu O composto em epígrafe foi preparado analogamente ao procedimento descrito no Exemplo l(iii) a partir de H- (J?)Cgl-Aze-Pab-C00CH200CtBu (380 mg; 0,71 mmol; ver
Exemplo 12(v) acima) e bromoacetato de 2-(metil)benzilo (215 mg; 0,88 mmol; ver Exemplo 32 (i) acima). Rendimento: 37 mg (7,5%). FAB-MS: (m+1) = 692 (m/z)
Exemplo 69
Os compostos dos Exemplos 1 a 68 foram todos testados no Ensaio A referido acima e verificou-se que todos apresentavam um valor de IC50TT superior a 1,0 μΜ (i.e. eram inactivos para a trombina per se; cf. com o inibidor activo HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-H que apresenta uma IC50TT de 0,01 μΜ).
Exemplo 70
Os compostos dos Exemplos 1 a 68 foram testados em um, dois ou todos dos Ensaios B, C e/ou D referidos acima, e verificou-se que todos apresentavam biodisponibilidade oral e/ou parentérica no rato como o inibidor activo HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-
Pab-H, quer como o ácido livre e/ou como um ou mais dos seus ésteres. Com base no pressuposto de que HOOC-CH2-(f?) Cgl-Aze-Pab-H é formado no rato, a biodisponibilid-ade foi calculada de acordo com as fórmulas descritas no Ensaio B e/ou no Ensaio C consoante apropriado.
Abreviaturas
Ac = acetilo aq = Aze = aquoso ácido S-azetidino-2-carboxílico Boc -(Boc)20 = t-but i1oxi carboni10 dicarbonato de di-t-butilo Bn = benzilo Bu = butilo Cgl = ciclohexilglicina Ch = ciclohexilo DCC = diciclohexil carbodiimida DMAP = Ν,Ν-dimetil amino piridina EDC = cloridrato de 1-(3-dimetilamino- propil)-3-etilcarbodiimida
Et = etilo EtOH = etanol EtOAc = acetato de etilo h = horas HC1 = ácido clorídrico H-Pab-H = l-amidino-4-aminometil benzeno H-Pab-Z = amidino) benzeno 4-aminometil-l- (N-benziloxicarbonil- HPLC = K2CO3 = cromatografia líquida de alta pressão carbonato de potássio anidro Me = Men = metilo (IR,2S,SR)-mentilo
Pab-OH = 4-aminometil-benzamidoxima (4-amino- metil-1- (amino-hidroxiiminometil) benzeno Piv(aloílo) = 2,2-dimetilacetilo 79 propilo N-pirrolidinilo cromatografia líquida de alta pressão reversa ácido trifluoroacético tetrahidrofurano benziloxi carbonilo
Pr = Prl = RPLC = em fase 5 TFA = THF = Z =
Os prefixos n, s, i e t têm os seus significados 10 habituais: normal, iso, secundário e terciário. Ps prefixos nos espectros de RMN s, d, t, q, e b significam singuleto, dupleto, tripleto, quarteto, e largo, respectivamente. A estereoquímica para os amino ácidos é por defeito (S) se não for indicado o 15 contrário.

Claims (5)

  1. 5 5 1. 10 15 2. 20 3 . 25 4 . 30 5 REIVINDICAÇÕES Composto de fórmula I, R10(0)C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-R2 I em que R^ representa H, Ci_io alquilo, ou C1-3 alquilfenilo (em que este último grupo é opcionalmente substituído por C1-6 alquilo, C1-6 alcoxi, nitro ou halogéneo); R2 (que substitui um dos átomos de hidrogénio na unidade amidino de Pab-H) representa OH; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Composto de fórmula I de acordo com a reivindicação 1, em que R1 representa H ou Cq-io alquilo (em que este último grupo pode ser linear ou, quando existe um número suficiente de átomos de carbono, pode ser ramificado e/ou ser parcialmente cíclico ou cíclico). Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R1 representa H, Ci-io alquilo linear, C3_io alquilo ramificado, C4-10 alquilo parcialmente cíclico, C4 _10 cicloalquilo, C1-3 alquilfenilo linear opcionalmente substituído, C3 alquilfenilo ramificado opcionalmente substituído. Composto de de acordo com a reivindicação 3, em que R1 representa C1-6 alquilo, C6-10 cicloalquilo, ou C1-3 alquilfenilo linear opcionalmente substituído. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1, 3 ou 4, em que R1 representa C1-3 alquilfenilo opcionalmente substituído, sendo o substituinte opcional C±~s alquilo. 35 Composto de acordo com a reivindicação 5 em que o substituinte é metilo. Composto de acordo com a reivindicação 1 que é Me00CCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH; Et00CCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH; Bn00CCH2-{R)Cgl-Aze-Pab-OH; xiPrOOCCH2- (K) Cgl-Aze-Pab-OH,-iPr00CCH2- (i?) Cgl-Aze-Pab-OH; tBu00CCH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH; ou HOOCCH2-{R)Cgl-Aze-Pab-OH. Formulação farmacêutica incluindo um composto de fórmula I de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 7, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em combinação com um adjuvante, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. Composto de fórmula I, de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 7, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização como fármaco. Composto de fórmula I de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 7, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização no tratamento de uma patologia em que é necessária a inibição de trombina. Composto de fórmula I de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 7, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização no tratamento da trombose. Composto de fórmula I de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 7, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização como um anticoagulante. - 3 5 13. L-C, Utilização de ura composto de fórmula I de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 7, ou de um seu sal f armaceuti camente aceitável como princípio activo no fabrico de um medicamento para o tratamento de uma patologia em que é necessária a inibição de trombina.
  2. 14. Utilização de acordo com a reivindicação 13, em que a patologia é trombose. 10
  3. 15. Utilização de acordo com a reivindicação 13, em que a patologia é hipercoagulabilidade em sangue e tecidos.
  4. 16. Utilização de um composto de fórmula I de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 7, ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, como princípio activo no fabrico de um anticoagulante.
  5. 17. Utilização de um composto de fórmula I de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 7, como um pró-fármaco. 18 25 Processo para a preparação de compostos de fórmula I que compreende: (a) reacção de um composto de fórmula IA R10 (0) C-CH2 - (R) Cgl-Aze-Pab-OC (O) R6 IA 30 em que R6 representa Ci-17 alquilo, fenilo ou 2- naftilo (de que todos são opcionalmente substituídos por Ci_g alquilo ou halogéneo); e R1 é como definido em relação a um composto de fórmula I, com uma base alcóxido; IB (b) reacção de um composto de fórmula IB Rx0(0)C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-C(0)OR7 35 - 4 - em que R7 representa 2-naftilo, fenilo, Ci_3 alquilfenilo (em que estes três últimos grupos eão opcionalmente substituídos por Cx_g alquilo, Ci-6 alcoxi, nitro ou halogéneo), ou Ci_i2 alquilo (em que este último grupo é opcionalmente substituído por Ci_6 alcoxi, Ci-6 aciloxi ou halogéneo) , e R^ é como definido em relação a um composto de fórmula I, com hidroxilamina, ou com um seu sal de adição de ácido; (c) reacção de um correspondente composto de fórmula II H-(R)Cgl-Aze-Pab-R2 II em que R2 é como definido na reivindicação 1 com um composto de fórmula III R10(0)C-CH2-L1 III em que L1 representa um grupo de saída e R1 é como definido na reivindicação 1; (d) para compostos de fórmula I em que R1 representa H, reacção de um correspondente composto de fórmula I em que R1 representa Ci-io alquilo ou C1-3 alquilfenilo com uma base; (e) para compostos de fórmula I em que R1 representa Ci-10 alquilo ou C1-3 alquilfenilo, transesterificaçao de um correspondente composto de fórmula VII Rla0(0)C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-R2 vil em que Rla representa um grupo Ci_10 alquilo ou Ci-3 alquilfenilo diferente do que o que está a ser formado e R2 é como definido na reivindicação 1. Lisboa, 12 de Novembro de 2001 ^AGUNTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6984627B1 (en) * 1993-06-03 2006-01-10 Astrazeneca Ab Peptide derivatives
SE9301916D0 (sv) * 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra New peptides derivatives
TWI238827B (en) * 1995-12-21 2005-09-01 Astrazeneca Ab Prodrugs of thrombin inhibitors
SE9602263D0 (sv) 1996-06-07 1996-06-07 Astra Ab New amino acid derivatives
SE9602646D0 (sv) 1996-07-04 1996-07-04 Astra Ab Pharmaceutically-useful compounds
AR013084A1 (es) 1997-06-19 2000-12-13 Astrazeneca Ab Derivados de amidino utiles como inhibidores de la trombina, composicion farmaceutica, utilizacion de dichos compuestos para la preparacion demedicamentos y proceso para la preparacion de los compuestos mencionados
SE9704543D0 (sv) 1997-12-05 1997-12-05 Astra Ab New compounds
US6417161B1 (en) 1998-04-24 2002-07-09 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. Amino acid amidinohydrazones, alkoxyguanidines and aminoguanidines as protease inhibitors
US6274090B1 (en) * 1998-08-05 2001-08-14 Thermogenesis Corp. Apparatus and method of preparation of stable, long term thrombin from plasma and thrombin formed thereby
SE9802938D0 (sv) * 1998-09-01 1998-09-01 Astra Ab Improved stability for injection solutions
SE9802973D0 (sv) 1998-09-03 1998-09-03 Astra Ab Immediate release tablet
SE9802974D0 (sv) 1998-09-03 1998-09-03 Astra Ab New crystalline forms
SE9804313D0 (sv) 1998-12-14 1998-12-14 Astra Ab New compounds
DE60037183T2 (de) 1999-01-13 2008-10-09 Astrazeneca Ab Neue amidinbenzylamin-derivate und ihre verwendung als thrombin-inhibitoren
SE9900070D0 (sv) * 1999-01-13 1999-01-13 Astra Ab New use
AU765244B2 (en) 1999-04-09 2003-09-11 Abbott Gmbh & Co. Kg Prodrugs of thrombin inhibitors
DE50008510D1 (de) * 1999-04-09 2004-12-09 Abbott Gmbh & Co Kg Niedermolekulare inhibitoren von komplementproteasen
AR023510A1 (es) * 1999-04-21 2002-09-04 Astrazeneca Ab Un equipo de partes, formulacion farmaceutica y uso de un inhibidor de trombina.
SE9902550D0 (sv) * 1999-07-02 1999-07-02 Astra Ab New crystalline forms
DE60034063T2 (de) * 1999-07-08 2007-07-26 University Of North Carolina At Chapel Hill Neue prodrugs für antimicrobielle amidine
SE0001803D0 (sv) 2000-05-16 2000-05-16 Astrazeneca Ab New compounds i
US6433186B1 (en) 2000-08-16 2002-08-13 Astrazeneca Ab Amidino derivatives and their use as thormbin inhibitors
US6462021B1 (en) 2000-11-06 2002-10-08 Astrazeneca Ab Use of low molecular weight thrombin inhibitor
AR035216A1 (es) * 2000-12-01 2004-05-05 Astrazeneca Ab Derivados de acido mandelico ,derivados farmaceuticamente aceptables, uso de estos derivados para la fabricacion de medicamentos, metodos de tratamiento ,procesos para la preparacion de estos derivados, y compuestos intermediarios
US7129233B2 (en) 2000-12-01 2006-10-31 Astrazeneca Ab Mandelic acid derivatives and their use as thrombin inhibitors
DE10064797A1 (de) * 2000-12-22 2002-06-27 Knoll Ag Orale und parenterale pharmazeutische Formulierung, umfassend eine niedermolekulare Thrombininhibitor-Pro-Pharmakon
SE0101762D0 (sv) * 2001-05-18 2001-05-18 Astrazeneca Ab New use
SE0101932D0 (sv) * 2001-05-31 2001-05-31 Astrazeneca Ab Pharmaceutical combinations
US7186855B2 (en) 2001-06-11 2007-03-06 Xenoport, Inc. Prodrugs of GABA analogs, compositions and uses thereof
US8048917B2 (en) 2005-04-06 2011-11-01 Xenoport, Inc. Prodrugs of GABA analogs, compositions and uses thereof
US6818787B2 (en) 2001-06-11 2004-11-16 Xenoport, Inc. Prodrugs of GABA analogs, compositions and uses thereof
AR034517A1 (es) * 2001-06-21 2004-02-25 Astrazeneca Ab Formulacion farmaceutica
GB0123851D0 (en) * 2001-10-04 2001-11-28 Pankhurst Design & Development Dispersing fragrances
SE0103369D0 (sv) * 2001-10-09 2001-10-09 Astrazeneca Ab Pharmaceutical formulation
SE0103590D0 (sv) 2001-10-26 2001-10-26 Astrazeneca Ab New Combination
SE0200198D0 (sv) 2002-01-23 2002-01-23 Astrazeneca Ab New use
JP4898091B2 (ja) 2002-03-11 2012-03-14 ザ メディシンズ カンパニー （ライプツィヒ） ゲーエムベーハー ウロキナーゼの阻害剤、それらの製造および使用
EP1495034A2 (en) * 2002-04-10 2005-01-12 Esperion Therapeutics, Inc. Mimics of acyl coenzyme-a comprising pantolactone and pantothenic acid derivatives, compositions thereof, and methods of cholesterol management and related uses
SE0201661D0 (sv) 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab New salts
SE0201659D0 (sv) * 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
CN100513398C (zh) 2002-12-03 2009-07-15 Axys药物公司 作为因子viia抑制剂的2-(2-羟基联苯-3-基)-1h-苯并咪唑-5-甲脒衍生物
DE10301300B4 (de) 2003-01-15 2009-07-16 Curacyte Chemistry Gmbh Verwendung von acylierten 4-Amidino- und 4-Guanidinobenzylaminen zur Inhibierung von Plasmakallikrein
US7781424B2 (en) * 2003-05-27 2010-08-24 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
SE0301879D0 (sv) * 2003-06-25 2003-06-25 Astrazeneca Ab New process
US20050137174A1 (en) * 2003-07-09 2005-06-23 Paratek Pharmaceuticals, Inc. Prodrugs of 9-aminomethyl tetracycline compounds
DE10342108A1 (de) * 2003-09-11 2005-04-14 Curacyte Chemistry Gmbh Basisch-substituierte Benzylaminanaloga als Inhibitoren des Gerinnungsfaktors Xa, ihre Herstellung und Verwendung
AR050631A1 (es) * 2004-09-09 2006-11-08 Novartis Ag Combinacion de compuestos organicos
US7524354B2 (en) * 2005-07-07 2009-04-28 Research Foundation Of State University Of New York Controlled synthesis of highly monodispersed gold nanoparticles
DE102006050672A1 (de) 2006-10-24 2008-04-30 Curacyte Discovery Gmbh Hemmstoffe des Plasmins und des Plasmakallikreins
TW200827336A (en) 2006-12-06 2008-07-01 Astrazeneca Ab New crystalline forms
US20090061000A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-05 Astrazeneca Ab Pharmaceutical formulation use 030
DE102009004204A1 (de) * 2009-01-09 2010-07-15 Christian-Albrechts-Universität Zu Kiel Verfahren zur verbesserten Bioaktivierung von Arzneistoffen
DE102009008256A1 (de) 2009-02-10 2010-08-12 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Prodrugs vom Typ N-hydroxylierter Amidine, Guanidine und/oder Aminohydrazone zur Applikation über die Haut
DE102014108210A1 (de) * 2014-06-11 2015-12-17 Dietrich Gulba Rodentizid
EP4070658A1 (de) 2021-04-06 2022-10-12 BIORoxx GmbH Verwendung von blutgerinnungshemmenden verbindungen als rodentizide

Family Cites Families (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU178398B (en) * 1979-06-12 1982-04-28 Gyogyszerkutato Intezet Process for producing new agmatine derivatives of activity against haemagglutination
US4568636A (en) * 1981-03-25 1986-02-04 Pentapharm Ag Tripeptide derivatives
US4395401A (en) * 1981-09-09 1983-07-26 Smithkline Beckman Corporation Renally active dipeptides
HU192646B (en) * 1984-12-21 1987-06-29 Gyogyszerkutato Intezet Process for preparing new n-alkyl-peptide aldehydes
AU600226B2 (en) * 1985-02-04 1990-08-09 Merrell Pharmaceuticals Inc. Novel peptidase inhibitors
DE3505555A1 (de) * 1985-02-18 1986-09-11 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Neue oligopeptidylargininolderivate und deren homologe, verfahren zu deren herstellung, deren verwendung und diese enthaltende mittel
PT84170B (pt) * 1986-01-24 1989-03-30 Sanofi Sa Processo para a preparacao de derivados n alfa-substituidos das n alfa-aril-sulfonilaminoacil d-amidinofenil-alaninamidas
DE3606480A1 (de) * 1986-02-28 1987-09-03 Behringwerke Ag Oligopeptidylnitrilderivate, diese enthaltende mittel, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
US5187157A (en) * 1987-06-05 1993-02-16 Du Pont Merck Pharmaceutical Company Peptide boronic acid inhibitors of trypsin-like proteases
EP0362002B1 (en) * 1988-09-01 1995-07-26 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. HIV protease inhibitors
ZA897515B (en) * 1988-10-07 1990-06-27 Merrell Dow Pharma Novel peptidase inhibitors
US5273982A (en) * 1990-03-09 1993-12-28 Hoffmann-La Roche Inc. Acetic acid derivatives
US5037819A (en) * 1990-06-04 1991-08-06 Bristol-Myers Squibb Company Azetidin-2-one derivatives as serine protease inhibitors
US5110812A (en) * 1990-06-04 1992-05-05 Bristol-Myers Squibb Co. Azetidin-2-one derivatives as serine protease inhibitors
TW201303B (pt) * 1990-07-05 1993-03-01 Hoffmann La Roche
GB9017694D0 (en) * 1990-08-13 1990-09-26 Sandoz Ltd Improvements in or relating to organic chemistry
GB9019558D0 (en) * 1990-09-07 1990-10-24 Szelke Michael Enzyme inhibitors
IL99527A (en) * 1990-09-28 1997-08-14 Lilly Co Eli Tripeptide antithrombotic agents
GB9024129D0 (en) * 1990-11-06 1990-12-19 Thrombosis Research Trust Inhibitors and substrates of thrombin
US5518735A (en) * 1990-11-15 1996-05-21 Pentapharm Ag Meta-substituted phenylalanine derivatives
DE4115468A1 (de) * 1991-05-11 1992-11-12 Behringwerke Ag Amidinophenylalaninderivate, verfahren zu deren herstellung, deren verwendung und diese enthaltende mittel als antikoagulantien
CA2075154A1 (en) * 1991-08-06 1993-02-07 Neelakantan Balasubramanian Peptide aldehydes as antithrombotic agents
SE9102462D0 (sv) * 1991-08-28 1991-08-28 Astra Ab New isosteric peptides
CZ333492A3 (en) * 1991-11-12 1993-09-15 Lilly Co Eli Dipeptide of l-azetidine-2-carboxylic acids and l-argininaldehyde, process of its preparation and pharmaceutical preparation in which said dipeptide is comprised
SE9103612D0 (sv) * 1991-12-04 1991-12-04 Astra Ab New peptide derivatives
EP0629212B1 (en) * 1992-03-04 1997-10-08 Gyogyszerkutato Intezet Kft. New anticoagulant peptide derivatives and pharmaceutical compositions containing the same as well as a process for the preparation thereof
TW223629B (pt) * 1992-03-06 1994-05-11 Hoffmann La Roche
AU675981B2 (en) * 1992-12-02 1997-02-27 Bristol-Myers Squibb Company Guanidinyl-substituted heterocyclic thrombin inhibitors
US5583146A (en) * 1992-12-02 1996-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclic thrombin inhibitors
SE9301916D0 (sv) * 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra New peptides derivatives
DE4321444A1 (de) * 1993-06-28 1995-01-05 Bernd Prof Dr Clement Pharmazeutische Zubereitung
EP0648780A1 (en) * 1993-08-26 1995-04-19 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclic thrombin inhibitors
TW394760B (en) * 1993-09-07 2000-06-21 Hoffmann La Roche Novel Carboxamides, process for their preparation and pharmaceutical composition containing the same
AU1025795A (en) * 1994-01-27 1995-08-03 Mitsubishi Chemical Corporation Prolineamide derivatives
US5705487A (en) * 1994-03-04 1998-01-06 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
IL112795A (en) * 1994-03-04 2001-01-28 Astrazeneca Ab Derivatives of peptides as antithrombotic drugs, their preparation, and pharmaceutical preparations containing them
US5707966A (en) * 1994-03-04 1998-01-13 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5726159A (en) * 1994-03-04 1998-03-10 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5561146A (en) * 1994-06-10 1996-10-01 Bristol-Myers Squibb Company Modified guanidino and amidino thrombin inhibitors
DE4421052A1 (de) * 1994-06-17 1995-12-21 Basf Ag Neue Thrombininhibitoren, ihre Herstellung und Verwendung
SE504185C2 (sv) * 1994-11-08 1996-12-02 Astra Ab Lagringsstabil vattenlösning för infusion av trombininhibitorer
SE9404196D0 (sv) * 1994-12-02 1994-12-02 Astra Ab New antithrombotic formulation
JPH11500120A (ja) * 1995-02-17 1999-01-06 ビーエーエスエフ アクチェンゲゼルシャフト 新規なトロンビンインヒビター
US5710130A (en) * 1995-02-27 1998-01-20 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
AU698911B2 (en) * 1995-04-04 1998-11-12 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
US5629324A (en) * 1995-04-10 1997-05-13 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
TWI238827B (en) 1995-12-21 2005-09-01 Astrazeneca Ab Prodrugs of thrombin inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
MY121222A (en) 2006-01-28
EP0995755A1 (en) 2000-04-26
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US6262028B1 (en) 2001-07-17
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DE122004000046I1 (de) 2005-04-21
ES2128283T3 (es) 2005-09-01
EE9800187A (et) 1998-12-15
KR100458545B1 (ko) 2005-01-15
HUP9900115A2 (hu) 1999-05-28
PL327569A1 (en) 1998-12-21
US7354905B2 (en) 2008-04-08
SK82198A3 (en) 1998-12-02
HUP9900115A3 (en) 1999-11-29
SI0995755T1 (en) 2002-02-28
DE122004000046I2 (de) 2011-06-16
NO982809L (no) 1998-08-20
NL300179I2 (nl) 2005-06-01
EE04022B1 (et) 2003-04-15
ATE204292T1 (de) 2001-09-15
US20020142968A1 (en) 2002-10-03
DE69614579D1 (de) 2001-09-20
CA2238737A1 (en) 1997-07-03
NZ324902A (en) 2000-06-23
IL124857A0 (en) 1999-01-26
TR199801151T2 (xx) 1998-08-21
EP0869966B1 (en) 2005-03-16
EP1533318A1 (en) 2005-05-25
MX9804623A (es) 1998-10-31
IS1836B (is) 2002-11-25
NL300179I1 (nl) 2005-05-02
ATE291031T1 (de) 2005-04-15
NO982809D0 (no) 1998-06-18
IS4756A (is) 1998-05-26
HK1016610A1 (en) 1999-11-05
DE69634492D1 (de) 2005-04-21
ES2163916T3 (es) 2002-02-01
AU706350B2 (en) 1999-06-17
WO1997023499A1 (en) 1997-07-03
EP0995755B1 (en) 2001-08-16
SI0869966T1 (en) 2005-08-31
TWI238827B (en) 2005-09-01
EP0869966A1 (en) 1998-10-14
US20040162410A1 (en) 2004-08-19
DK0869966T3 (da) 2005-06-20
TW541316B (en) 2003-07-11
PL187468B1 (pl) 2004-07-30
RU2176644C2 (ru) 2001-12-10
ES2128283T1 (es) 1999-05-16
BR9612148A (pt) 1999-07-13
DK0995755T3 (da) 2001-11-12
KR19990076624A (ko) 1999-10-15
LU91172I2 (fr) 2005-07-11

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