ES2128283T3

ES2128283T3 - Profarmacos de inhibidores de trombina.

Info

Publication number: ES2128283T3
Application number: ES96943446T
Authority: ES
Inventors: Thomas Antonsson; David Gustafsson; Kurt-Jurgen Hoffmann; Jan-Erik Nystrom; Henrik Sorensen; Mikael Sellen
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 1995-12-21
Filing date: 1996-12-17
Publication date: 2005-09-01
Anticipated expiration: 2016-12-17
Also published as: DE69614579T2; PT995755E; EP0869966B1; TW541316B; US6262028B1; NO982809D0; KR19990076624A; AR005245A1; US7354905B2; PL327569A1; AU1217897A; DE69634492T2; HK1016610A1; EE04022B1; US5965692A; IS1836B; AU706350B2; KR100458545B1; MY121222A; IS4756A

Abstract

SE DESCRIBEN UNOS COMPUESTOS CON LA FORMULA (I): R 1 O(O)C CH 2 (R)CGL AZE PAB R 2 , EN LA QUE R 1 Y R 2 POSEEN LOS SIGNIFICADOS CONTENIDOS EN LA DESCRIPCION, QUE SON UTILES COMO PROFARMACOS DE LOS INHIBIDORES DE LAS PROTEASAS PARECIDAS A LA TRIPSINA, COMO LA TROMBINA, Y, EN PARTICULAR, EN EL TRATAMIENTO DE AQUELLAS CONDICIONES DONDE SE REQUIERA LA INHIBICION DE LA TROMBINA (P.EJ. TROMBOSIS) O COMO ANTICOAGULANTES.

Description

Profármacos de inhibidores de trombina.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a profármacos farmacéuticamente útiles de compuestos farmacéuticamente activos, compuestos activos que son, en particular, inhibidores competitivos de serina-proteasas afines a la tripsina, especialmente trombina, al uso de los profármacos como medicamentos, composiciones farmacéuticas que contienen los mismos y vías de síntesis para su producción.

Antecedentes

La coagulación de la sangre es el proceso fundamental implicado tanto en la hemostasia (es decir la prevención de la pérdida de sangre por un vaso sanguíneo lesionado) como en la trombosis (es decir la formación de un coágulo de sangre en un vaso sanguíneo, que conduce a veces a la obstrucción del vaso).

La coagulación es el resultado de una serie compleja de reacciones enzimáticas. Uno de los últimos pasos en esta serie de reacciones es la conversión de la proenzima protrombina en la enzima activa trombina.

Es sabido que la trombina desempeña un papel fundamental en la coagulación. La misma activa las plaquetas, conduciendo a la agregación plaquetaria, convierte el fibrinógeno en monómeros de fibrina, que se polimerizan espontáneamente para dar polímeros de fibrina, y activa el factor XIII, que reticula a su vez los polímeros para formar fibrina insoluble. Adicionalmente, la trombina activa el factor V y el factor VIII conduciendo a una generación "de retroalimentación positiva" de trombina a partir de la protrombina.

Por inhibición de la agregación plaquetaria y la formación y reticulación de la fibrina, sería de esperar por consiguiente que los inhibidores eficaces de la trombina exhiban actividad antitrombótica. Adicionalmente, sería de esperar que la actividad antitrombótica se aumente por la inhibición eficaz del mecanismo de retroalimentación positiva.

Técnica anterior

El desarrollo de inhibidores de peso molecular bajo de la trombina ha sido descrito por Claesson en Blood Coagul. Fibrin. (1994) 5, 411.

Blombäck et al. (en J. Clin. Lab. Invest. 24, suppl. 107, 59, (1969)) han informado de inhibidores de trombina basados en la secuencia de aminoácidos situada alrededor del sitio de escisión de la cadena A\alpha del fibrinógeno. De las secuencias de aminoácidos expuestas, estos autores sugirieron que la secuencia del tripéptido Phe-Val-Arg sería el inhibidor más eficaz.

Inhibidores de trombina basados en péptidos de peso molecular bajo han sido descritos posteriormente, por ejemplo, en los documentos siguientes: Patente US Nº 4.346.078; Solicitudes de Patente Internacional WO 93/11152, WO 94/29336, WO 93/18060 y WO 95/01168; y las Solicitudes de Patente Europea 648 780, 468 231, 559 046, 641 779, 185 390, 526 877, 542 525, 195 212, 362 002, 364 344, 530 167, 293 881, 686 642 y 601 459.

En fecha más reciente, inhibidores de trombina basados en derivados de péptidos han sido descritos en la Solicitud de Patente Europea 0 669 317 y las Solicitudes de Patente Internacional WO 95/23609, WO 95/35309, WO 96/25426 y WO 94/29336.

En particular, la última solicitud describe los derivados de péptidos R^{a}OOC-CH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-H, en los cuales R^{a} representa H, bencilo o alquilo C_{1-6}.

Aunque se sabe que estos compuestos activos exhiben actividad antitrombina significativa, sería ventajoso mejorar sus propiedades farmacocinéticas después de su administración tanto oral como parenteral. Ejemplos de propiedades farmacocinéticas que es deseable mejorar incluyen:

(a): proporcionar una absorción mejorada a partir del tracto gastro-intestinal, con vistas a reducir la variabilidad intra- y/o inter-individual en relación con la biodisponibilidad de los compuestos activos;

(b): suavizar el perfil de la concentración en plasma con el tiempo (es decir, reducir la relación máximo/mínimo de la concentración en plasma a lo largo del intervalo de dosificación), con vistas a reducir el riesgo de caída fuera del intervalo terapéutico y los efectos secundarios causados por un pico de concentración que es demasiado alto (v.g. hemorragia), y los causados por uno que es demasiado bajo (v.g. formación de trombo); y

(c): aumentar la duración de acción de los compuestos activos.

\newpage

Además, la administración oral y parenteral de inhibidores activos de la trombina puede conducir a hemorragia local indeseable (v.g. en el lumen intestinal o subcutáneamente) como resultado de una concentración local elevada.

Por último, los inhibidores activos de trombina administrados por vía oral que inhiben también la tripsina y otras serina-proteasas en el tracto gastrointestinal pueden exhibir efectos secundarios adicionales, con inclusión de indigestión (v.g. si la tripsina es inhibida en el lumen intestinal).

Aunque ciertos derivados de N-benciloxicarbonilo de los compuestos activos mencionados anteriormente se describen también como inhibidores de trombina en la Solicitud de Patente Internacional WO 94/29336, no se menciona que estos derivados puedan ser útiles como profármacos. De hecho, el documento WO 94/29336 no hace mención alguna de profármacos adecuados de los compuestos activos.

Se ha encontrado que los problemas anteriores pueden resolverse por administración de compuestos de acuerdo con la presente invención que, si bien son inactivos per se, después de su administración oral y/o parenteral son metabolizados en el cuerpo para formar inhibidores activos de trombina, con inclusión de los mencionados anteriormente.

Descripción de la invención

De acuerdo con la invención, se proporciona un compuesto de fórmula I,

IR^{1}O(O)C-CH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-R^{2}

en la cual

R^{1} representa -R^{3} o -A^{1}C(O)N(R^{4})R^{5} o -A^{1}C(O)OR^{4};

A^{1} representa alquileno C_{1-5};

R^{2} (que reemplaza uno de los átomos de hidrógeno en la unidad amidino de Pab-H) representa OH o OC(O)R^{6};

R^{3} representa H, alquilo C_{1-10}, o alquil C_{1-3}-fenilo (estando dicho último grupo sustituido opcionalmente con alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, nitro o halógeno);

R^{4} y R^{5} representan independientemente H, alquilo C_{1-6}, fenilo, 2-naftilo o, cuando R^{1} representa -A^{1}C(O)N(R^{4})R^{5}, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, representan pirrolidinilo o piperidinilo; y

R^{6} representa alquilo C_{1-17}, fenilo o 2-nafitlo (todos los cuales están sustituidos opcionalmente con alquilo C_{1-6} o halógeno);

o una de sus sales farmacéuticamente aceptables (a los que se hace referencia en lo sucesivo como "los compuestos de la invención").

Los compuestos de la invención pueden exhibir tautomería. Todas las formas tautómeras y sus mezclas están incluidas dentro del alcance de la invención.

Los compuestos de la invención pueden contener también uno o más átomos de carbono asimétricos y por consiguiente pueden exhibir isomería óptica y/o diastereoisomería. Todos los diastereoisómeros pueden separarse utilizando técnicas convencionales, v.g. cromatografía o cristalización fraccionada. Los diversos estereoisómeros pueden aislarse por separación de una mezcla racémica o de otro tipo de los compuestos utilizando técnicas convencionales, v.g. cristalización fraccionada o HPLC. Alternativamente, los isómeros ópticos deseados pueden producirse por reacción de los materiales de partida ópticamente activos apropiados en condiciones que no causen racemización o epimerización, o por derivatización, por ejemplo con un ácido homoquiral seguida por separación de los derivados diastereoisómeros por medios convencionales (v.g. HPLC, cromatografía sobre sílice). Todos los estereoisómeros están incluidos dentro del alcance de la invención.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula I, como se define anteriormente en esta memoria, como profármaco.

Los grupos alquilo que pueden representar R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} pueden ser lineales o, cuando hay un número suficiente de átomos de carbono, ser ramificados, cíclicos o parcialmente cíclicos, saturados o insaturados, estar interrumpidos por oxígeno y/o estar sustituidos o terminados con OH, con la condición de que el grupo OH no está unido a un átomo de carbono sp^{2} o un átomo de carbono que es adyacente a un átomo de oxígeno.

Por "grupos alquilo parcialmente cíclicos" se dan a entender grupos tales como CH_{2}Ch.

Los grupos alquilo que R^{3} y R^{6} pueden estar sustituidos con, pueden ser lineales o, cuando hay un número suficiente de átomos de carbono, ser ramificados, ser saturados o insaturados y/o estar interrumpidos por oxígeno.

La porción alquilo de los grupos alquilfenilo que puede representar R^{3} puede ser lineal o, cuando hay un número suficiente de átomos de carbono, ser ramificada y/o ser saturada o insaturada.

Los grupos alquileno que puede representar A^{1} pueden ser lineales o, cuando hay un número suficiente de átomos de carbono, ser ramificados y/o ser saturados o insaturados.

Los grupos alcoxi que R^{3} puede estar sustituido con, pueden ser lineales o, cuando hay un número suficiente de átomos de carbono, ser ramificados y/o ser saturados o insaturados.

Al final de esta memoria descriptiva se enumeran abreviaturas.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un compuesto de fórmula I, como se define anteriormente en esta memoria, con las condiciones adicionales de que:

(a): R^{1} no representa -A^{1}C(O)OR^{4};

(b): R^{4} y R^{5} no representan independientemente H;

(c): R^{6} no representa alquilo C_{1-17}, cuando R^{2} representa OC(O)R^{6}.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un compuesto de fórmula I, en la cual:

(a): R^{1} representa -A^{1}C(O)OR^{4};

(b): R^{4} y R^{5} representan independientemente H;

(c): R^{6} representa alquilo C_{1-17}, cuando R^{2} representa OC(O)R^{6}.

Cuando R^{1} representa -A^{1}C(O)N(R^{4})R^{5}, compuestos preferidos de la invención incluyen aquéllos en los cuales:

A^{1} representa alquileno C_{1-3};

R^{4} representa H o alquilo C_{1-6};

R^{5} representa alquilo C_{1-6} o cicloalquilo C_{4-6}; o aquéllos en los cuales

R^{4} y R^{5} representan juntos pirrolidinilo.

Cuando R^{1} representa -A^{1}C(O)OR^{4}, compuestos preferidos de la invención incluyen aquéllos en los cuales:

A^{1} representa alquileno C_{1-5};

R^{4} representa alquilo C_{1-6}.

Cuando R^{1} representa R^{3}, compuestos preferidos de la invención incluyen aquéllos en los cuales R^{3} representa H, alquilo C_{1-10} (pudiendo ser dicho último grupo lineal o, cuando hay un número suficiente de átomos de carbono, ser ramificado y/o ser parcialmente cíclico o cíclico), o alquil C_{1-3}-fenilo (estando dicho último grupo sustituido opcionalmente, pudiendo ser lineal o, cuando hay un número suficiente de átomos de carbono, ser ramificado).

Compuestos preferidos de la invención incluyen aquéllos en los cuales R^{2} representa OH, OC(O)R^{6} (en cuya fórmula, en el último caso, R^{6} representa fenilo o alquilo C_{1-17} opcionalmente sustituido (pudiendo ser dicho último grupo lineal o, cuando hay un número suficiente de átomos de carbono, ser ramificado, ser cíclico o parcialmente cíclico, y/o ser saturado o insaturado)).

Compuestos más preferidos de la invención incluyen aquéllos en los cuales:

R^{1} representa H, alquilo C_{1-10} lineal, alquilo C_{3-10} ramificado, alquilo C_{4-10} parcialmente cíclico, cicloalquilo C_{4-10}, alquil C_{1-3}-fenilo lineal opcionalmente sustituido, alquil C_{3}-fenilo ramificado opcionalmente sustituido, -A^{1}C(O)N(R^{4})R^{5} (en cuya fórmula, en el último caso, A^{1} representa alquileno C_{1-3}, representando R^{4} H o alquilo C_{1-3} y representando R^{5} alquilo C_{2-6} o cicloalquilo C_{5-6}, o representando R^{4} y R^{5} juntos pirrolidinilo), o -A^{1}C(O)OR^{4} (en cuya fórmula, en el último caso, A^{1} representa alquileno C_{1-5} y R^{4} representa alquilo C_{1-4});

R^{2} representa OH, OC(O)R^{6} (en cuya fórmula, en el último caso, R^{6} representa fenilo opcionalmente sustituido, alquilo C_{1-4} lineal, alquilo C_{3-4} ramificado o cis-oleílo).

Compuestos particularmente preferidos de la invención incluyen aquéllos en los cuales:

R^{1} representa alquilo C_{1-6} lineal, cicloalquilo C_{6-10}, o alquil C_{1-3}-fenilo lineal opcionalmente sustituido;

R^{2} representa OH o OC(O)R^{6} (en cuya fórmula, en el último caso, R^{6} representa alquilo C_{1-3} lineal o alquilo C_{3} ramificado).

Cuando R^{1} representa R^{3} y R^{3} representa alquil C_{1-3}-fenilo opcionalmente sustituido, sustituyentes opcionales preferidos incluyen alquilo C_{1-6} (especialmente metilo).

Compuestos preferidos de la invención incluyen los compuestos de los Ejemplos.

Compuestos más preferidos de la invención incluyen:

: MeOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh;

: MeOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;

: EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;

: BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;

: nPrOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;

: iPrOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;

: tBuOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;

: (nPr)_{2}NCOCH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;

: ChNHCOCH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;

: EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OAc;

: HOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH; y

: HOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-O-cis-oleílo.

Compuestos particularmente preferidos de la invención incluyen:

: MeOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;

: EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;

: nPrOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;

: iPrOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;

: BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH; y

: EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Oac.;

Preparación

De acuerdo con la invención, se proporciona también un proceso para la preparación de compuestos de fórmula I, que comprende:

(a) Preparación de un compuesto de fórmula I en la cual R^{2} representa OH por reacción de un compuesto correspondiente de fórmula I, en la cual R^{2} representa OC(O)R^{6} y R^{6} es como se define anteriormente en esta memoria, con una base alcóxido (v.g. un alcóxido de metal alcalino), por ejemplo a la temperatura ambiente en presencia de un disolvente orgánico apropiado (v.g. THF).

(b) Preparación de un compuesto de fórmula I en la cual R^{2} representa OH por reacción de un compuesto correspondiente a un compuesto de fórmula I en la cual R^{2} representa C(O)OR^{7} y R^{7} representa 2-naftilo, fenilo, alquil C_{1-3}-fenilo (estando sustituidos opcionalmente dichos tres últimos grupos con alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, nitro o halógeno), o alquilo C_{1-12} (estando sustituido opcionalmente dicho último grupo con alcoxi C_{1-6}, aciloxi C_{1-6} o halógeno) con hidroxilamina, o una sal de adición de ácido de la misma, por ejemplo a la temperatura ambiente en presencia de una base adecuada (v.g. carbonato de potasio o trietilamina) y un disolvente orgánico apropiado (v.g. THF o EtOH).

(c) Preparación de un compuesto de fórmula I por reacción de un compuesto correspondiente de fórmula II,

IIH-(R)Cgl-Aze-Pab-R^{2}

en la cual R^{2} es como se define anteriormente en esta memoria con un compuesto de fórmula III,

IIIR^{1}O(O)C-CH_{2}-L^{1}

en la cual L^{1} representa un grupo lábil, por ejemplo haluro (v.g. bromuro) o alquilsulfonato (v.g. trifluorometilsulfonato) y R^{1} es como se define anteriormente en esta memoria, por ejemplo entre la temperatura ambiente y temperatura elevada (v.g. 40ºC) en presencia de una base adecuada (v.g. carbonato de potasio) y un disolvente orgánico apropiado (v.g. THF, DMF o acetonitrilo).

(d) Preparación de un compuesto de fórmula I en la cual R^{1} representa H y R^{2} representa OH por reacción de un compuesto correspondiente de fórmula I en al cual R^{1} representa alquilo C_{1-10} o alquil C_{1-3}-fenilo, y R^{2} representa OH, con una base adecuada (v.g. un alcóxido o hidróxido de metal alcalino), por ejemplo a la temperatura ambiente en presencia de un disolvente orgánico apropiado (v.g. agua o MeOH).

(e) Preparación de un compuesto de fórmula I en la cual R^{2} representa OC(O)R^{6} y R^{6} es como se define anteriormente en esta memoria, por reacción de un compuesto correspondiente de fórmula I en la cual R^{2} representa OH, con un compuesto de fórmula IV,

IVR^{6}C(O)-O-C(O)R^{6}

o un compuesto de fórmula V,

VR^{6}C(O)Hal

en la cual Hal representa Cl o Br y, en ambos casos, R^{6} es como se define anteriormente en esta memoria, por ejemplo a la temperatura ambiente en presencia de una base adecuada (v.g. trietilamina, piridina o DMAP) y un disolvente orgánico apropiado (v.g. cloruro de metileno o THF).

(f) Preparación de un compuesto de fórmula I en la cual R^{1} representa H y R^{2} representa OC(O)R^{6}, y R^{6} es como se define anteriormente en esta memoria, por reacción de un compuesto correspondiente de fórmula VI

VIP^{1}O(O)C-CH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-R^{2}

en la cual P^{1} representa un grupo protector de éster lábil en medio ácido (v.g. tBu o Bn), y R^{2} representa OC(O)R^{6}, en cuya fórmula R^{6} es como se define anteriormente en esta memoria, con un ácido adecuado (v.g. TFA), por ejemplo a la temperatura ambiente en presencia de un disolvente orgánico apropiado (v.g. cloruro de metileno).

(g) Preparación de un compuesto de fórmula I en la cual R^{1} representa R^{3}, R^{3} representa alquilo C_{1-10} o alquil C_{1-3}-fenilo, R^{2} representa OH, por una trans-esterificación de un compuesto correspondiente de fórmula VII,

VIIR^{1a}O(O)C-CH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-R^{2}

en la cual R^{1a} representa alquilo C_{1-10} o un grupo alquil C_{1-3}-fenilo distinto del que va a formarse y R^{2} representa OH o un sustituyente alquilo lábil alternativo, en condiciones que son bien conocidas por los expertos en la técnica.

Los compuestos de fórmula II se pueden preparar por desprotección de un compuesto de fórmula VIII,

VIIIBoc-(R)Cgl-Aze-Pab-R^{2}

en la cual R^{2} es como se define anteriormente en esta memoria, en condiciones que son bien conocidas por los expertos en la técnica.

Los compuestos de fórmula VI y VII se pueden preparar análogamente a los métodos descritos anteriormente en esta memoria para preparación de compuestos de fórmula I, en la cual R^{1} representa R^{3} y R^{3} representa alquilo C_{1-10} o alquil C_{1-3}-fenilo.

Los compuestos de fórmula VIII se pueden preparar por reacción de un compuesto de fórmula IX,

IXH-Pab-R^{2}

en la cual R^{2} es como se define anteriormente en esta memoria con Boc-Cgl-Aze-OH, por ejemplo a la temperatura ambiente en presencia de un sistema de acoplamiento adecuado (v.g. EDC), una base apropiada (v.g. DMAP) y un disolvente orgánico adecuado (v.g. diclorometano o acetonitrilo).

Los compuestos de fórmula VIII, en la cual R^{2} representa OH, se pueden preparar por reacción de un compuesto correspondiente a un compuesto de fórmula VIII, en la cual R^{2} representa C(O)OR^{7} o C(O)OCH(R^{8})OC(O)R^{9}, en donde R^{7} es como se define anteriormente en esta memoria, R^{8} representa H o alquilo C_{1-4} y R^{9} representa 2-naftilo, fenilo, alcoxi C_{1-6} o alquilo C_{1-8} (estando sustituido opcionalmente dicho último grupo con halógeno, alcoxi C_{1-6} o aciloxi C_{1-6}) con hidroxilamina, o una de sus sales de adición de ácido, por ejemplo a la temperatura ambiente en presencia de una base adecuada (v.g. carbonato de potasio o trietilamina) y un disolvente orgánico apropiado (v.g. THF o EtOH).

Los compuestos correspondientes a un compuesto de fórmula VIII, en la cual R^{2} representa C(O)OR^{7} o C(O)OCH(R^{8})OC(O)R^{9}, se pueden preparar por reacción de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H con un compuesto de fórmula X,

XL^{2}-C(O)OR^{2a}

en la cual L^{2} representa un grupo lábil (v.g. halógeno o fenolato) y R^{2a} representa R^{7} o -CH(R^{8})OC(O)R^{9} y R^{7}, R^{8} y R^{9} son como se define anteriormente en esta memoria, por ejemplo a la temperatura ambiente o inferior a la misma, en presencia de una base adecuada (v.g. NaOH) y un disolvente orgánico apropiado (v.g. THF).

Los compuestos de fórmula VIII, en la cual R^{2} representa OC(O)R^{6}, se pueden preparar alternativamente por reacción de un correspondiente de fórmula VIII, en la cual R^{2} representa OH, con un compuesto de fórmula IV como se define anteriormente en esta memoria o un compuesto de fórmula V como se define anteriormente en esta memoria, por ejemplo a la temperatura ambiente en presencia de una base adecuada (v.g. trietilamina, piridina o DMAP) y un disolvente orgánico apropiado (v.g. cloruro de metileno o THF).

Los compuestos de fórmula VIII en la cual R^{2} representa OC(O)R^{6} se pueden preparar alternativamente por reacción de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H con un compuesto de fórmula XI,

XIR^{6}C(O)-O-O-C(O)R^{6}

en la cual R^{6} es como se define anteriormente en esta memoria, por ejemplo a la temperatura ambiente en presencia de un disolvente orgánico apropiado (v.g. THF).

Los compuestos de fórmula VIII en la cual R^{2} representa OR se pueden preparar por reacción de un compuesto correspondiente de fórmula VIII, en la cual R^{2} representa OC(O)R^{6} y R^{6} es como se define anteriormente en esta memoria, con una base adecuada (v.g. un alcóxido de metal alcalino) por ejemplo a la temperatura ambiente en presencia de un disolvente apropiado (v.g. THF).

Los compuestos de fórmula IX son bien conocidos en la bibliografía o se pueden preparar utilizando métodos análogos a los descritos anteriormente en esta memoria.

Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H se pueden preparar por reacción de H-Pab-H, o un derivado protegido del mismo, con Boc-Cgl-Aze-OH, por ejemplo como se describe anteriormente en esta memoria para los compuestos de fórmula VIII.

Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H se puede preparar alternativamente por desprotección de un compuesto de fórmula XII,

XIIBoc-(R)Cgl-Aze-Pab-P^{2}

en la cual P^{2} representa un grupo protector ortogonal a Boc, en condiciones que son bien conocidas por los expertos en la técnica.

Los compuestos de fórmula III, IV, V, X, XI y XII, o bien están disponibles comercialmente, o son bien conocidos en la bibliografía, o se pueden obtener utilizando técnicas conocidas (v.g. como se describe más adelante en esta memoria).

Los compuestos de la invención se pueden aislar de sus mezclas de reacción utilizando técnicas convencionales.

Se apreciará por los expertos en la técnica que en el proceso descrito anteriormente, puede ser necesario que los grupos funcionales de los compuestos intermedios estén protegidos por grupos protectores.

Grupos funcionales que es deseable proteger incluyen hidroxi, amino, amidino y ácido carboxílico. Grupos protectores adecuados para hidroxi incluyen grupos trialquilsililo y diarilsililo (v.g. t-butildimetilsililo, t-butildifenilsililo o trimetilsililo) y tetrahidropiranilo. Grupos protectores adecuados para ácido carboxílico incluyen ésteres alquílicos C_{1-6} o bencílicos. Grupos protectores adecuados para amino y amidino incluyen t-butiloxicarbonilo o benzoiloxi-carbonilo. Los nitrógenos de amidino pueden estar mono- o diprotegidos.

Los grupos protectores pueden eliminarse de acuerdo con métodos que son bien conocidos por los expertos en la técnica, tales como los descritos más adelante en esta memoria.

El uso de grupos protectores se describe con todo detalle en "Protective Groups in Organic Chemistry", recopilado por J W F McOmie, Plenum Press (1973), y "Protective Groups in Organic Synthesis", 2ª edición, T W Greene & P GM Wutz, Wiley-Interscience (1991).

Uso médico y farmacéutico

Los compuestos de la invención son útiles porque se metabolizan en el cuerpo para formar compuestos que poseen actividad farmacológica. Aquéllos están indicados por consiguiente como productos farmacéuticos y en particular como profármacos.

En particular, los compuestos de la invención, aunque son inactivos en relación con la trombina per se, se metabolizan en el cuerpo para formar inhibidores potentes de la trombina, como se demuestra por ejemplo en el ensayo descrito más adelante.

Por la expresión "los compuestos de la invención son inactivos en relación con la trombina per se" se da a entender que aquéllos exhiben un valor CI_{50}TT, como se determina más adelante en el Ensayo A, mayor que 1 \muM.

Por consiguiente, es de esperar que los compuestos de la invención sean útiles en aquellas condiciones en las cuales se requiere inhibición de la trombina.

Los compuestos de la invención están indicados, así pues, tanto en el tratamiento terapéutico como en el profiláctico de la trombosis y la hipercoagulabilidad en la sangre y los tejidos de los animales, con inclusión del hombre.

Es sabido que la hipercoagulabilidad puede conducir a enfermedades trombo-embólicas. Enfermedades tromboembólicas que pueden mencionarse incluyen resistencia a la proteína C activada, tal como la mutación del Factor V (Factor V Leiden), y deficiencias heredadas o adquiridas en antitrombina III, proteína C, proteína S, y cofactor II de heparina. Otras condiciones que se sabe están asociadas con la hipercoagulabilidad y enfermedades trombo-embólicas incluyen anticuerpos antifosfolipídicos circulantes (anticoagulante Lupus), homocisteinemia, trombocitopenia inducida por heparina y defectos en la fibrinólisis. Los compuestos de la invención están indicados, por tanto, tanto en el tratamiento terapéutico como en el profiláctico de estas condiciones.

Los compuestos de la invención están indicados además en el tratamiento de condiciones en las que existe un exceso indeseable de trombina sin signos de hipercoagulabilidad, por ejemplo en enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer.

Estados particulares de enfermedad que pueden mencionarse incluyen el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de trombosis venosa y embolia pulmonar, trombosis arterial (v.g. en infarto de miocardio, angina inestable, ataque súbito de origen trombótico y trombosis arterial periférica) y embolia sistémica, usualmente de la aurícula durante la fibrilación arterial o del ventrículo izquierdo después de infarto de miocardio transmural.

Además, es de esperar que los compuestos de la invención tengan utilidad en la profilaxis de la re-oclusión (es decir la trombosis) después de trombólisis, angioplastia trans-luminal percutánea (PTA) y operaciones de derivación ("bypass") coronaria(o); la prevención de la re-trombosis después de microcirugía y cirugía vascular en general.

Indicaciones adicionales incluyen el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de la coagulación intravascular diseminada causada por bacterias, traumatismos múltiples, intoxicación o cualquier otro mecanismo; tratamiento anticoagulante cuando la sangre está en contacto con superficies extrañas en el cuerpo tales como injertos vasculares, dilatadores ("stents") vasculares, catéteres vasculares, válvulas protésicas mecánicas y biológicas o cualquier otro dispositivo médico; y tratamiento anticoagulante cuando la sangre está en contacto con dispositivos médicos fuera del cuerpo, por ejemplo durante la cirugía cardiovascular utilizando una máquina corazón-pulmón o en la hemodiálisis.

Además de sus efectos sobre el proceso de la coagulación, se sabe que la trombina activa un gran número de células (tales como neutrófilos, fibroblastos, células endoteliales y células de la musculatura lisa). Por esta razón, los compuestos de la invención pueden ser útiles también para el tratamiento terapéutico y/o profiláctico del síndrome de dificultad respiratoria idiopática y de los adultos, fibrosis pulmonar después de tratamiento con radiación o quimioterapia, choque séptico, septicemia, respuestas inflamatorias, que incluyen, pero sin carácter limitante, edema, ateroesclerosis aguda o crónica tal como enfermedad arterial coronaria, enfermedad arterial cerebral, enfermedad arterial periférica, lesión por reperfusión, y restenosis después de angioplastia trans-luminal percutánea (PTA).

Los compuestos de la invención que inhiben la tripsina y/o la trombina pueden ser útiles también en el tratamiento de la pancreatitis.

De acuerdo con un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un uso de un compuesto de fórmula I como se define anteriormente en esta memoria, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en un método de tratamiento de una condición en la cual se requiere inhibición de la trombina.

Los compuestos de la invención se administrarán normalmente por vía oral, bucal, rectal, dérmica, nasal, traqueal, bronquial, por cualquier otra vía parenteral o por inhalación, en forma de preparaciones farmacéuticas que comprenden el profármaco sea como base libre, o como una de sus sales de adición de ácido orgánico o inorgánico no tóxico farmacéuticamente aceptable, en una forma de dosificación farmacéuticamente aceptable. Dependiendo del trastorno y el paciente a tratar, así como de la vía de administración, las composiciones se pueden administrar en dosis variables.

Los compuestos de la invención pueden combinarse también y/o co-administrarse con cualquier agente antitrombótico que tenga un mecanismo de acción diferente, tales como los agentes antiplaquetarios, ácido acetil-salicílico, ticlopidina, clopidogrel, inhibidores del receptor de tromboxano y/o de la sintetasa, antagonistas del receptor de fibrinógeno, miméticos de la prostaciclina e inhibidores de fosfodiesterasas así como antagonistas del receptor ADP (P_{2}T).

Los compuestos de la invención pueden combinarse y/o co-administrarse adicionalmente con agentes trombolíticos tales como el activador del plasminógeno tisular (natural o recombinante), estreptoquinasa, uroquinasa, prouroquinasa, complejo activador del plasminógeno-estreptoquinasa anisolado (ASPAC), activadores del plasminógeno de las glándulas salivares animales, y análogos, en el tratamiento de enfermedades trombóticas, en particular el infarto de miocardio.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona por tanto una formulación farmacéutica que incluye un compuesto de fórmula I como se define anteriormente en esta memoria, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en mezcla con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

Las dosis diarias adecuadas de los compuestos de la invención en el tratamiento terapéutico de humanos son aproximadamente 0,001-100 mg/kg de peso corporal en el caso de administración por vía oral y 0,001-50 mg/kg de peso corporal en el caso de la administración parenteral.

Los compuestos de la invención tienen la ventaja de que pueden poseer propiedades farmacocinéticas mejoradas, tales como las identificadas anteriormente en esta memoria, tanto después de administración oral como parenteral, cuando se comparan con compuestos de fórmula:

R^{a}O(O)C-CH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-H

en la cual R^{a} es como se define anteriormente en esta memoria, y en particular el compuesto en el cual R^{a} representa H.

Los compuestos de la invención son inactivos frente a la trombina, la tripsina y otras serina-proteasas. Así pues, los compuestos se mantienen inactivos en el tracto gastrointestinal, y por esta razón pueden evitarse las complicaciones potenciales experimentadas por los anticoagulantes administrados por vía oral que son activos per se, tales como hemorragia e indigestión resultantes de la inhibición de la tripsina.

Adicionalmente, la hemorragia local asociada con y posterior a la administración parenteral de un inhibidor activo de la trombina puede evitarse por la utilización de los compuestos de la invención.

Los compuestos de la invención pueden tener también la ventaja de que pueden ser más eficaces, ser menos tóxicos, tener actividad más duradera, tener un campo de actividad más amplio, producir menos efectos secundarios, ser más fácilmente absorbidos que los compuestos conocidos en la técnica anterior, o pueden tener otras propiedades farmacológicas útiles superiores a las de dichos compuestos.

Ensayos biológicos

Ensayo A

Determinación del tiempo de coagulación por trombina (TT)

Se incubaron durante 1 min trombina humana (T 6769, Sigma Chem Co, concentración final de 1,4 unidades NIH/ml) en solución tampón, pH 7,4, 100 \mul, y solución de inhibidor, 100 \mul. Se añadió luego plasma humano citrado normal agrupado, 100 \mul, y se midió el tiempo de coagulación en un dispositivo automático (KC 10, Amelung).

Se representó el tiempo de coagulación en segundos en función de la concentración de inhibidor, y se determinó por interpolación el valor CI_{50}TT.

CI_{50} TT es la concentración de inhibidor que duplica el tiempo de coagulación de la trombina para plasma humano.

Ensayo B

Determinación del tiempo de trombina en plasma ex vivo

La inhibición de la trombina después de administración oral o parenteral de los compuestos de la invención se examinó en ratas conscientes que, uno o dos días antes del experimento, se proveyeron de un catéter para toma de muestras de sangre de la arteria carótida. El día del experimento, se administró el compuesto, disuelto en etanol:Solutol^{TM}:agua (5:5:90), y se extrajeron muestras de sangre en tiempos fijados recogiéndolas en tubos de plástico que contenían una parte de solución de citrato de sodio (0,13 moles por l) y 9 partes de sangre. Los tubos se centrifugaron para obtener un plasma pobre en plaquetas. El plasma se utilizó para determinación del tiempo de trombina como se describe más adelante.

El plasma de rata citrado, 100 \mul, se diluyó con una solución salina, 0,9%, 100 \mul, y se inició la coagulación del plasma por adición de trombina humana (T 6769, Sigma Chem Co, USA) en una solución tampón, pH 7,4, 100 \mul. Se midió el tiempo de coagulación en un dispositivo automático (KC 10, Amelung, Alemania).

Las concentraciones del inhibidor de trombina activo HO(O)C-CH_{2}(R)Cgl-Aze-Pab-H (véase Solicitud de Patente Internacional WO 94/29336) en el plasma de rata se estimaron mediante el uso de curvas patrón que relacionaban el tiempo de trombina en el plasma de rata citrado agrupado con concentraciones conocidas del inhibidor de trombina activo mencionado anteriormente disuelto en solución salina.

Sobre la base de las concentraciones en plasma estimadas del inhibidor de trombina activo HO(O)C-CH_{2}(R)Cgl-Aze-Pab-H (lo que supone que la prolongación del tiempo de trombina es causada por el compuesto mencionado anteriormente) en la rata, se calculó el área bajo la curva después de administración oral y/o parenteral del profármaco (AUCpd) utilizando la regla del trapecio y la extrapolación de los datos hasta el infinito.

La biodisponibilidad del inhibidor de trombina activo HO(O)C-CH_{2}(R)Cgl-Aze-Pab-H después de administración oral o parenteral del profármaco se calculó como se indica a continuación:

[(AUCpd/dosis)/(AUCactivo, iv/dosis)] x 100

donde AUCactivo, iv representa el AUC obtenida después de administración intravenosa de HO(O)C-CH_{2}(R)Cgl-Aze-Pab-H a ratas conscientes como se describe anteriormente.

Ensayo C

Determinación del tiempo de trombina en orina ex vivo

La cantidad del inhibidor de trombina activo HO(O)C-CH_{2}(R)Cgl-Aze-Pab-H que se excretaba en orina después de administración oral o parenteral de los compuestos de la invención, disueltos en etanol:Solutol^{TM}:agua (5:5:90), se estimó por determinación del tiempo de trombina en orina ex vivo (suponiendo que la prolongación del tiempo de trombina es causada por el compuesto mencionado anteriormente).

Se pusieron ratas conscientes en jaulas de metabolismo, permitiendo la recogida por separado de orina y heces durante 24 horas después de la administración oral de los compuestos de la invención. Se determinó el tiempo de trombina sobre la orina recogida como se describe a continuación.

Se incubó plasma humano citrado normal agrupado (100 \mul) con la orina de rata concentrada o diluciones de la misma con solución salina, durante 1 minuto. Se inició luego la coagulación del plasma por administración de trombina humana (T 6769, Sigma Chem Company) en solución tampón (pH 7,4; 100 \mul). Se midió el tiempo de coagulación en un dispositivo automático (KC 10; Amelung).

Las concentraciones del inhibidor de trombina activo HO(O)C-CH_{2}(R)Cgl-Aze-Pab-H en la orina de rata se estimaron mediante el uso de curvas patrón que relacionaban el tiempo de trombina en el plasma humano citrado normal agrupado con concentraciones conocidas del inhibidor de trombina activo mencionado anteriormente disuelto en orina concentrada de rata (o diluciones de la misma con solución salina). Multiplicando la producción total de orina de rata durante el periodo de 24 horas por la concentración media estimada del inhibidor activo mencionado anteriormente en la orina, pudo calcularse la cantidad del inhibidor activo excretada en la orina (CANTIDADpd).

[(CANTIDADpd/dosis)/(CANTIDAD activo, iv/dosis)] x 100

donde CANTIDADactivo, iv representa la cantidad excretada en la orina después de administración intravenosa de HO(O)C-CH_{2}(R)Cgl-Aze-Pab-H a ratas conscientes como se ha descrito anteriormente.

Ensayo D

Determinación de HO(O)C-CH_{2}(R)Cgl-Aze-Pab-H en orina por LC-MS

La cantidad del inhibidor de trombina activo HO(O)C-CH_{2}(R)Cgl-Aze-Pab-H que se excretaba en la orina después de administración oral o parenteral de los compuestos de la invención, disueltos en etanol:Solutol^{TM}:agua (5:5:90), se midió por análisis LC-MS como se describe a continuación.

Los estudios con animales se realizaron como se describe en el Método C anterior. Se recogieron muestras de orina y se congelaron a -20ºC antes de su análisis.

Se analizaron las muestras de orina respecto a su contenido de HO(O)C-CH_{2}(R)Cgl-Aze-Pab-H de acuerdo con el método siguiente:

Las muestras de orina descongeladas se mezclaron y, en caso requerido, se sometieron a rotación en una centrífuga. Los tubos de extracción de fase sólida (Analytichem Bond Elut. Nº 1210-2059) se activaron con 1,0 ml de metanol y se acondicionaron con 1,0 ml de acetonitrilo:agua (50:50), seguido por 1,0 ml de ácido fórmico al 0,1%. Se añadieron 50 \mul del patrón interno de trabajo (20 \mumol/l) a cada tubo de extracción. Para los patrones de orina, se añadieron 50 \mul de solución patrón. Se añadieron 200 \mul de una muestra o, para los patrones de orina, orina en blanco a cada tubo y se extrajeron después de ello por gravedad o mediante un vacío suave. La orina residual se eliminó por lavado con 1,0 ml de acetato de amonio (2 milimoles/l), antes de elución con 1,0 ml de acetonitrilo:acetato de amonio (2 milimoles/l) (35:65). El producto de elución recogido se transfirió a viales de toma de muestras automática. Se inyectaron 30 \mul del extracto en la columna LC (Hypersil BDS-C18; 3 \mum; 75 mm x 4,0 mm de diámetro interior; Hewlett-Packard Nº 79926 03-354), se eluyeron con tampón de acetato de amonio (1,3 milimoles/l) con acetonitrilo al 40% y ácido fórmico al 0,1% a razón de 0,75 ml/min. El efluente se dividió de tal manera que entraron 30 \mul/min en la fuente de electropulverización iónica de un espectrómetro de masas P-E Sciex API-3. Tanto HO(O)C-CH_{2}(R)Cgl-Aze-Pab-H como HO(O)C-CH_{2}(R)Cgl-Pro-Pab-H (patrón interno) tienen tiempos de retención próximos a 1,5 minutos. Sus iones moleculares ((M+H)^{+}) se observaron a m/z 430,2 y 444,2 respectivamente, para resolución de masas unidad. Se utilizaron patrones de orina a dos niveles, encontrándose uno de ellos en el límite de cuantificación, para calibración basada en las relaciones de área de los picos de HO(O)C-CH_{2}(R)Cgl-Aze-Pab-H sobre el patrón interno. La linealidad del método se comprobó a lo largo del intervalo de 0,050-20 \mumoles/l. El coeficiente de variación era 1-2% a 1-20 \mumoles/l y 7% a 0,50 \mumoles/l. El límite de cuantificación era 0,050 \mumoles/l.

Multiplicando la producción total de orina durante el periodo de 24 horas por la concentración medida de HO(O)C-CH_{2}(R)Cgl-Aze-Pab-H en la orina, pudo calcularse la cantidad del inhibidor activo excretada en la orina (CANTIDADpd). La biodisponibilidad del inhibidor de trombina activo se calculó luego como se describe anteriormente en el Método C.

La invención se ilustra por medio de los ejemplos siguientes.

Ejemplos Procedimientos experimentales generales

Los espectros de masas se registraron en un espectrómetro de masas de cuadrupolotriple Finnigan MAT TSQ 700, equipado con una interfaz de pulverización electrónica.

Las medidas de ^{1}H NMR y ^{13}C-NMR se realizaron en espectrómetros BRUKER ACP 300 y Varian UNITY plus 400 y 500, que operaban a frecuencias ^{1}H de 300,13, 399,96 y 499,82 MHz respectivamente, y a frecuencias ^{13}C de 75,46, 100,58 y 125,69 MHz, respectivamente. Los desplazamientos químicos se consignan en unidades \delta.

Preparación de los materiales de partida

Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H, Boc-(R)Cgl-Aze-Pab x HCl, H-(R)Aze-Pab-Z, H-(R)Aze-Pab-Z x HCl, Bn-OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z, Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-Z, Boc-(R)Cgl-Aze-OH y Pab-Z x HCl se prepararon de acuerdo con los métodos descritos en la Solicitud de Patente Internacional WO 94/29336.

Ejemplo de referencia 1

EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH=CH_{2} (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH=CH_{2}

A una solución de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (6,1 g; 13 milimoles) en THF (125 ml) y NaOH 2M (70 ml; 140 milimoles) a 0ºC se añadió gota a gota cloroformiato de alilo (1,7 g; 14 milimoles). Después de agitar a 0ºC durante 1 h, se concentró la mezcla de reacción, se añadió agua (100 ml) y la fase acuosa resultante se extrajo con cloruro de metileno (3 x 100 ml). Las fases orgánicas reunidas se concentraron para dar 6,4 g de un producto bruto que se purificó por cromatografía instantánea utilizando EtOAc:THF:Et_{3}N (68:29:3) como eluyente. La concentración dio 5,8 g (81%) del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.

^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 8.19 (bt,1H), 7.78 (d, 2H), 7.26 (d, 2H), 6.02-5.92 (m, 1H), 5.32 (d, J = 17 Hz, 1H), 5.18 (d, J = 10 Hz, 1H), 5.06 (d, J = 7 Hz, 1H), 4.82 (bs, 1H),4.61 (d, J = 6 Hz, 2H), 4.58-4.48 (m, 1H), 4.38-4.27 (m, 2H), 4.14-4.03 (m, 1H), 3.77-3.68 (m, 1H), 2.60-0.90 (m, 24H).

^{13}C-NMR (125 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 172,70, 170,74, 168,02, 164,54, 155,98.

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH=CH_{2} x 2TFA

A una solución de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH=CH_{2} (2,03 g; 3,65 milimoles; procedente del paso (i) anterior) en cloruro de metileno (15 ml) a 0ºC se añadió TFA (15 ml). La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 3 h seguido por concentración para dar los 2,8 g del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.

^{1}H NMR (500 MHz, MeOH(d4)): \delta 7.80 (d, 2H), 7.57 (d, 2H), 6.02 (m, 1H), 5.45 (d, J = 17 Hz, 1H), 5.33 (d, J = 10 Hz, 1H), 5.91-4.80 (m, 3H), 4.56 (s, 2H), 4.38 (bq, J = 8 Hz, 1H), 3.71 (d, J= 7 Hz, 1H) 2.76-2.60 (m, 1H), 2.35-2.20 (m, 1H), 1.9-1.0 (m, 11H).

(iii) EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH=CH_{2}

Una mezcla de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH=CH_{2} x 2TFA (649 mg; 0,95 milimoles; del paso (ii) anterior), K_{2}CO_{3} (656 mg, 4,8 milimoles), agua (0,1 ml), y THF (10 ml) se agitó a 40ºC durante 2 h seguido por adición de bromoacetato de etilo (190 mg; 1,14 milimoles) en THF (1 ml). Después de agitar a 40ºC durante 4 h y a la temperatura ambiente durante 14 h, la mezcla de reacción se filtró, se concentró, y se purificó por cromatografía instantánea utilizando EtOAc:THF:Et_{3}N (68:29:3) como eluyente para dar 244 mg (47%) del compuesto del título como un sólido blanco.

1H NMR (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 8.46 (bt, 1H), 7.81 (d, 2H), 7.35 (d, 2h), 6.08-5.94 (m, 1H), 5.35 (d, J=18 Hz, 1H), 5.23 (d, J=11 Hz, 1H), 4.93 (dd, J=6 y 9 Hz, 1H), 4.66 (d, 2H), 4.62-4.38 (parte AB de un espectro ABX), 4.16-4.04) (m, 4 H), 3.20 (d, 2H), 2.86 (d, 1H), 2.64-2.45 (m, 2H), 2.0-1.0 (m 17H).

^{13}C-NMR (100 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 175,33, 172,24, 170,72, 168,19, 164,35.

Ejemplo de referencia 2

nPrOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH=CH_{2}

El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH=CH_{2} x 2TFA (503 mg; 0,74 milimoles; véase Ejemplo 1(ii) anterior) y bromoacetato de n-propilo (160 mg, 0,88 milimoles) para dar 277 mg (68%) como un sólido blanco.

^{1}H-NMR (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,48 (bt, 1H), 7,83 (d, 2H), 7,35 (d, 2H), 6,76 (ancho, 1H), 6,02 (m, 1H), 5,37 (dd, 1H), 5,24 (dd, 1H), 4,94 (t, 1H), 4,67 (dd, 2H), 4,49 (parte AB de un espectro ABX, 2H), 4,12 (m, 2H), 3,98 (t, 2H), 3,24 (sistema AB, 2H), 2,87 (d, 1H), 2,52 (m, 2H), 1,99 (bd, 2H), 1,80-1,50 (m, 7H), 1,61 (q 2H), 1,30-1,10 (m, 2H), 1,00 (qd, 2H), 0,90 (t, 3H).

^{13}C-NMR (100 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 175,4, 172,3, 170,7, 167,9, 164,5.

Ejemplo de referencia 3

t-BuOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH=CH_{2}

El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH=CH_{2} x 2TFA (285 mg; 0,42 milimoles; véase Ejemplo 1(ii) anterior) y bromoacetato de t-butilo (96 mg; 0,50 milimoles) para dar 93 mg (39%) como un sólido blanco.

^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 8.50 (bt, 1H), 7.81 (d, 2H), 7.36 (d, 2H), 6.07-5.97 (m, 1H), 5.36 (d, J = 16 Hz, 1H), 5.22 (d, J = 10 Hz, 1H), 4.93 (dd, J=9 y 6 Hz, 1H), 4.76 (d, J = 6 Hz, 2H), 4.57-4.46 (m, 2H), 4.18-4.04 (m, 2H), 3.19-3.08 (espectro AB, J_{AB} = 20 Hz, 2H), 2.86 (d, J=8 Hz, 1H), 2.72-2.53 (m, 2H), 2.0-0.9 (m, 23H).

^{13}C-NMR (100 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 175,28, 171,53, 170,76, 167,81, 164,1.

\newpage

Ejemplo de referencia 4

EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt

El compuesto del subtítulo se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1(i) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (600 mg; 1,3 milimoles) y cloroformiato de etilo (150 mg; 1,4 milimoles) obteniéndose 240 mg (34%) como un sólido blanco.

^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 9.37 (bs, 1H), 8.16 (bs, 1H), 7.72 (d, 2H), 7.18 (d, 2H), 5.17 (d, 1H), 4.73 (t, 1H), 4.47 (dd, 1H), 4.27 (m, 2H), 4.06 (q, 2H), 3.66 (t, 1H), 2.48 (m, 1H), 2.37 (m, 1H), 1.4-1.8 (m, 7H), 1.22 (s, 9H), 1.3-0.8 (m, 7H).

^{13}C-NMR (75 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 172,6, 170,7, 167,9, 164,8, 156,0.

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt x 2HCl

A una solución de Boc(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt (240 mg; 0,44 milimoles; procedente del paso (i) anterior) en EtOAc (20 ml) se añadió cloruro de hidrógeno a 0ºC durante 5 minutos. La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 1 h seguido por concentración para dar 225 mg (100%) como un sólido blanco.

^{1}H-NMR (300 MHz, D_{2}O): \delta 7.85 (d, 2H), 7.61 (d, 2H), 4.98 (dd, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.44 (p, 5H), 3.90 (d, 1H), 2.73 (m, 1H), 2.37 (m, 1H), 2.0-1.65 (m, 9H), 1.39 (t, 3H), 1.4-1.1 (m, 7H), 0.98 (m, 1H).

^{13}C-NMR (75 MHz, D_{2}O) señales de carbonilo y amidina: \delta 172,7, 169,4, 166,8, 154,3.

(iii) EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt

Se preparó el compuesto del título de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt x 2HCl (160 mg; 0,31 milimoles; procedente del paso (ii) anterior) y bromoacetato de etilo (52,5 mg; 0,31 milimoles). Rendimiento: 100 mg (61%) como un polvo amarillo claro.

^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,48 (bt, 1H), 7,81 (d, 2H), 7,38 (d, 2H), 4,51 (parte AB de un espectro ABX, 2H), 4,21 (q, 2H), 4,15-4,05 (m, 4H), 3,21 (espectro AB, 2H), 2,86 (d, 1H), 2,68 (m, 1H), 2,53 (m, 1H), 1,96 (bd, 2H), 1,90-1,70 (m, 12H), 1,35 (t, 3H), 1,22 (t, 6H), 1,30-0,95 (m, 2H).

^{13}C-NMR (75 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 175,5, 172,2, 170,7, 167,6, 164,9.

Ejemplo de referencia 5

EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr

El compuesto del subtítulo se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1(i) anterior utilizando Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (6,0 g; 13 milimoles) y cloroformiato de n-propilo (1,57 ml; 14 milimoles). Rendimiento 5,4 g (76%).

^{1}H-NMR (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 8.25 (bt, 1H), 7.82 (d, 2H), 7.31 (d, 2H), 5.09 (bd, 1H), 4.87 (dd, 1H), 4.58 (dd, 1H), 4.39 (dd, 2H), 4.14 (q, 1H), 4.10 (t, 2H), 3.79 (t, 1H), 2.54 (dm, 2H), 2.21 (s, 1H), 1,87-1,55 (m, 8H), 1.33 (s, 9H), 1.45-1.0 (m, 4H), 0.99 (T, 3H).

^{13}C-NMR (100 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 172,7, 170,6, 167,8, 165,0, 155,9.

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr X 2TFA

El compuesto del subtítulo se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1(ii) utilizando 2,1 g (3,7 milimoles) de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr (procedente del paso (i) anterior). Rendimiento 3,7 g.

^{1}H-NMR (400 MHz, MeOH-d_{4}): \delta 7,77 (d, 2H), 7,60 (d, 1H), 4,86 (dd, 1H), 4,56 (parte AB de un espectro ABX, 2H), 4,33 (m, 4H), 3,72 (d, 1H), 3,30 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 2,28 (m, 1H), 1,9-1,7 (m, 9H), 1,4-1,1 (m, 6H), 1,02 (t, 3H).

^{13}C-NMR (100 MHz, MeOH-d_{4}) señales de carbonilo y amidina: \delta 172,7, 169,3, 168,0, 161,4.

(iii) EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr

El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr x 2TFA (472 mg; 0,69 milimoles; procedente del paso (ii) anterior) y bromoacetato de etilo (138 mg; 0,83 milimoles) para dar 0,22 mg (58%) como un sólido blanco.

^{1}H-NMR (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,46 (bt, 1H), 7,82 (d, 2H), 7,32 (d, 2H), 4,92 (dd, 1H), 4,49 (parte AB de un espectro ABX, 2H), 4,10 (m, 6H), 3,23 (espectro AB, 2H), 2,80 (dm, 2H), 1,98 (bd, 2H), 1,74 (q, 2H), 1,63 (dd, 2H), 1,52 (m, 1H), 1,21 (t, 3H), 1,20-1,10 (m, 2H), 0,98 (t, 3H).

^{13}C-NMR (100 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 175,3, 172,2, 170,7, 167,6, 164,8.

Ejemplo de referencia 6

MeOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr

El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) anterior a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr x 2TFA (365 mg; 0,53 milimoles; véase Ejemplo 5 (ii) anterior) y bromoacetato de metilo (98 mg; 0,64 milimoles) para dar 114 mg (41%) como un sólido blanco.

^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,44 (bt, 1H), 7,82 (d, 2H), 7,32 (d, 2H), 7,04 (ancho, 1H), 4,92 (dd, 1H), 4,49 (parte AB de un espectro ABX), 4,12 (m, 2H), 4,10 (t, 2H), 3,63 (s, 3H), 3,24 (s, 2H), 2,87 (d, 1H), 2,65 (m, 1H), 2,52 (m, 1H), 2,01 (ancho, 1H), 1,96 (bd, 2H), 1,75 (q, 4H), 1,63 (bdd, 1H), 1,53 (m, 1H), 1,3-1,1 (m, 5H), 0,99 (t, 3H).

^{13}C-NMR (100 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 175,3, 172,5, 170,7, 167,7, 165,0.

Ejemplo de referencia 7

EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH_{2}OMe (i) Boc-(R) Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH_{2}OMe

El compuesto del subtítulo se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1(i) anterior utilizando Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (6,0 g; 13 milimoles) y cloroformiato de 2-metoxietilo (1,94 g; 14 milimoles). Rendimiento 3,9 g (52%).

^{1}H-NMR (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 8.24 (bt, 1H), 7.83 (d, 2H), 7.31 (d, 2H), 5.08 (bd, 1H), 4.87 (dd, 1H), 4.58 (dd, 1H), 4.39 (dd, 2H), 4.30 (t, 2H), 4.15 (m, 1H), 3.79 (bt, 1H), 3.68 (t, 2H), 3.40 (s, 3H), 2.65-2.45 (m, 2H), 2.20 (ancho, 1H), 1.9-1.55 (m, 6H), 1.34 (s, 9H), 1.3-0.95 (m, 6H).

^{13}C-NMR (100 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 172,7, 170,7, 167,8, 164,6, 155,9.

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH_{2}OMe x 2TFA

El compuesto del subtítulo se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1(ii) anterior utilizando 1,71 g de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH_{2}OMe (procedente del paso (i) anterior). Rendimiento 1,89 g (88%).

^{1}H-NMR (400 MHz, MeOH-d4): \delta 7.77 (d, 2H), 7.59 (d, 2H), 4.85 (dd, 1H), 4.56 (d, 2H), 4.49 (m, 2H), 4.37 (m, 1H), 4.28 (m, 1H), 3.70 (m, 3H), 3.37 (s, 3H), 2.68 (m, 1H), 2.28 (m, 1H), 1.9-1.7 (m, 7H), 1.4-1.1 (m, 6H).

^{13}C-NMR (100 MHz, MeOH-d4) señales de carbonilo y amidina: \delta 172,7, 169,3, 168,0, 154,6.

(iii) EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH_{2}OMe

El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) anterior a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH_{2}OMe x 2TFA (487 mg; 0,69 milimoles; procedente del paso (ii) anterior) y bromoacetato de etilo (138 mg, 0,83 milimoles) para dar un producto bruto que se purificó por cromatografía instantánea utilizando THF:cloruro de metileno (3:1) como eluyente. El rendimiento fue 0,13 mg (34%) como un sólido blanco.

^{1}H-NMR (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,46 (bt, 1H), 7,83 (d, 2H), 7,32 (d, 2H), 7,21 (ancho, 1H), 4,92 (dd, 1H), 4,49 (parte AB de un espectro ABX, 2H), 4,30 (t, 2H), 4,12 (q, 2H), 4,07 (q, 2H), 3,68 (t, 1H), 3,40 (s, 3H), 3,24 (s, 2H), 2,62 (m, 1H), 2,52 (m, 1H), 2,07 (ancho, 1H), 1,97 (bd, 1H), 1,8-1,5 (m, 5H), 1,3-1,1 (m, 6H), 1,05-0,95 (m, 2H).

^{13}C-NMR (100 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 175,3, 172,2, 170,7, 167,8, 164,6.

\newpage

Ejemplo de referencia 8

MeOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH_{2}OMe

El compuesto del título se preparó de acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 1(iii) anterior a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH_{2}OMe x 2TFA (490 mg; 0,7 milimoles; véase Ejemplo 7 (ii) anterior) y bromoacetato de metilo (128 mg; 0,84 milimoles) para dar un producto bruto que se purificó por cromatografía instantánea utilizando THF: cloruro de metileno (3:1) como eluyente. El rendimiento fue 155 mg (41%) como un sólido blanco.

^{1}H-NMR (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,44 (t, 1H), 7,83 (d, 2H), 7,31 (d, 2H), 4,92 (dd, 1H), 4,49 (parte AB de un espectro ABX, 2H), 4,30 (t, 2H), 4,13 (m, 2H), 3,68 (t, 2H), 3,63 (s, 3H), 3,39 (s, 3H), 3,25 (s, 2H), 2,87 (d, 1H), 2,62 (m, 1H), 2,52 (m, 1H), 1,96 (bd, 1H), 1,8-1,5 (m, 6H), 1,3-1,1 (m, 5H), 1,00 (q, 2H).

^{13}C-NMR (100 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 175,2, 172,6, 170,7, 167,8, 164,5.

Ejemplo de referencia 9

EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu

El compuesto del subtítulo se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1(i) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (1,01 g; 2,1 milimoles) y cloroformiato de n-butilo (0,32 g; 2,4 milimoles). Después de agitar a la temperatura ambiente durante 1,5 h, la mezcla de reacción se concentró y se extrajo con tres porciones de cloruro de metileno. La fase orgánica reunida se lavó luego con agua, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, y se concentró para dar 1,0 g (83%) del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.

^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 9.81-9.31 (bs, 1H), 8.36-8.20 (m, 1H), 7.35 (d, 2H), 7.84 (d, 2H), 6.78-6.43 (bs, 1H), 5.05-4.82 (m, 2H), 4.69-4.15 (m, 3H), 4.15-4.08 (m, 3H), 3.86-3.70 (m, 1H), 2.68-2.42 (m, 2H), 1.92-0.88 (m, 25H).

^{13}C-NMR (125 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 172,5, 170,7, 167,9, 164,9, 156,0.

FAB-MS: (m+1) = 572 (m/z).

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu x 2HCl

El compuesto del subtítulo se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 4 (ii) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu (2,5 g, 4,4 milimoles; procedente del paso (i) anterior) para dar 2,4 g (100%) como un sólido blanco.

^{1}H-NMR (300 MHz, MeOH-d4): \delta 7,78-7,60 (m, 2H), 4,66-4,49 (m, 2H), 0,98 (t, 2H), 4,49-4,35 (m, 3H), 4,35-4,22 (m, 1H), 3,75 (d, 1H), 1,92-1,67 (m, 8H), 1,56-1,07 (m, 8H). La señal de uno de los protones está oscurecida parcialmente por la señal de CD_{3}OH.

^{13}C-NMR (100 MHz, MeOH-d4) señales de carbonilo y amidina: \delta 172,7, 169,3, 167,9, 154,7.

MS (m+1) = 472 (m/z).

(iii) EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu x 2HCl (400 mg; 0,74 milimoles) y bromoacetato de etilo (147 mg; 0,88 milimoles). El producto se purificó por cromatografía instantánea utilizando cloruro de metileno y EtOH en gradiente 0,1% = >12,8% como eluyente para dar 290 mg (70%) como un sólido blanco.

^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 9.70-9.36 (bs, 1H), 8.47 (t, 1H), 7.81 (d, 2H), 7.32 (d, 2H), 7.07-6.73 (bs, 1H), 4.97-4.87 (dd, 1H), 4.62-4.35 (m, 2H), 4.20-3.98 (m, 6H), 3.27-3.12 (m, 2H), 2.84 (s, 1H), 2.70-2.40 (m, 2H), 2.03-0.85 (m, 22H).

^{13}C-NMR (75 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 175,3, 172,3, 170,8, 167,9, 165,0.

FAB-MS: (m+1) = 558 (m/z).

\newpage

Ejemplo de referencia 10

PrlC(O)CH_{2}CH_{2}CH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (i) PrlC(O)CH_{2}CH_{2}CH_{2}OH

Una mezcla de \gamma-butirolactona (4,0 g; 46,5 milimoles) y pirrolidina (6,6 g; 92,8 milimoles) se agitó a la temperatura ambiente durante 2,5 h. El producto se concentró a vacío para dar 14,5 g (100%) del producto como un aceite amarillo.

^{1}H-NMR (300 MHz, MeOH-d4): \delta 3.58 (t, 2H), 3.50 (t, 2H), 3.40 (t, 2H), 2.42 (t, 2H), 2.60-1.75 (m, 6H).

(ii) PrlC(O)CH_{2}CH_{2}CH_{2}OOCCH_{2}Br

A una mezcla de PrlC(O)CH_{2}CH_{2}CH_{2}OH (7,2 g; 45,8 milimoles; procedente del paso (i) anterior) y DMAP (5,6 g; 45,8 milimoles) en cloruro de metileno a 0ºC se añadió gota a gota bromuro de bromoacetilo (4,0 ml; 45,8 milimoles). Después de agitar a la temperatura ambiente durante 1,5 h se añadió otra porción de bromuro de bromoacetilo (1,0 ml, 11,4 milimoles) y DMAP (1,4 g, 11,4 milimoles) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 1,5 h. Se añadió agua y el cloruro de metileno se extrajo tres veces. La fase orgánica se secó con Na_{2}SO_{4} y se concentró para dar 10,3 g (81%) del producto como un aceite amarillo.

^{1}H-NMR (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 4.15 (t, 2H), 3.75 (s, 2H), 3.40-3.31 (m, 4H), 2.30 (t, 2H), 1.98-1.83 (m, 4H), 1.81-1.73 (m, 2H).

(iii) PrlC(O)CH_{2}CH_{2}CH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab(Z)

El compuesto del título se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (6 g; 10,4 milimoles) y PrlC(O)CH_{2}CH_{2}CH_{2}OOCCH_{2}Br (3,5 g; 12,4 milimoles; procedente del paso (ii) anterior). El producto bruto se purificó por cromatografía instantánea utilizando heptano:EtOAc:isopropanol (1:2:2) como eluyente para dar 4,2 g que se purificaron luego utilizando RPLC preparativa con empleo de acetonitrilo al 44% en NH_{4}OAc 0,1 M como eluyente para dar 2,64 g (36%) del producto como un sólido blanco.

^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 9.80-9.22 (bs, 1H), 8.36 (t, 1H), 7.96-7.58 (m, 3H), 7.45 (d, 2H), 7.37-7.22 (m, 5H), 5.20 (s, 2H), 4.95-4.88 (dd, 1H), 4.72-4.29 (m, 2H), 4.15-4.04 (m, 2H), 4.04-3.88 (m, 2H), 3.40 (t, 2H), 3.34 (t, 2H), 3.28-3.17 (m, 2H), 2,85 (d,1H), 2.67-2,48 (m, 1H), 2,23 (t, 2H), 2,14-0,93 (m, 18H).

^{13}C-NMR (125 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 175,3, 172,4, 170,9, 170,4, 168,2, 164,6.

FABS-MS: (m+1) = 703 (m/z).

Ejemplo de referencia 11

ChNHC(O)CH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (i) ChNHC(O)CH_{2}OH

Una mezcla de ciclohexilamina (9,9 g; 99,8 milimoles) y 2,5-dioxo-1,4-dioxano (3,0 g, 25,9 milimoles) se agitó a 100ºC durante 2,5 h. El producto se concentró para dar 8,1 g (100%) del producto como un sólido pardo.

^{1}H-NMR (500 MHz, MeOH-d4): \delta 3,92 (s, 2H), 3,75-3,65 (m, 1H), 1,90-1,58 (m, 5H), 1,43-1,07 (m, 5H). Las señales de dos de los protones están oscurecidas por la señal de CD_{3}OH.

^{13}C-NMR (125 MHz, MeOH-d4) señales de carbonilo y amidina: \delta 174,0, 62,5, 33,7, 26,5, 26,1, 26,0. La señal de uno de los carbonos está oscurecida por la señal de CD_{3}OD.

(ii) ChNHC(O)CH_{2}OOCCH_{2}Br

A una mezcla de ChNHC(O)CH_{2}OH (8,0 g; 50,9 milimoles; procedente del paso (i) anterior) y DMAP (6,2 g; 50,9 milimoles) en cloruro de metileno (80 ml) a 0ºC se añadió gota a gota bromuro de bromoacetilo (4,0 ml; 45,8 milimoles). Después de agitar a la temperatura ambiente durante 1,5 h, se añadieron porciones adicionales de bromuro de bromoacetilo (1,0 ml, 11,4 milimoles) y DMAP (1,4 g, 11,4 milimoles) y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 1,5 h. Se añadió agua y la fase acuosa se extrajo con tres porciones de cloruro de metileno. La fase orgánica se lavó con agua, se secó Na_{2}SO_{4} y se concentró para dar 10,3 g (73%) del producto como un sólido pardo.

^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 6.12-6.00 (bs, 1H), 4.62 (s, 2H), 3.90 (s, 2H), 3.84-3.76 (m, 1H), 1.95-1.86 (m, 2H), 1.75-1.65 (m, 2H), 1.65-1.56 (m, 1H), 1.43-1.29 (m, 2H), 1.24-1.10 (m, 3H).

(iii) ChNHC(O)CH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) partiendo de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (6 g; 10,4 milimoles) y ChNHC(O)CH_{2}OOCCH_{2}Br (3,5 g; 12,4 milimoles; procedente del paso (ii) anterior). El producto bruto se purificó por cromatografía instantánea utilizando heptano:EtOAc:isopropanol (5:2:2) como eluyente, seguido por concentración y luego por RPLC preparativa utilizando acetonitrilo al 50% en NH_{4}OAc 0,1 M como eluyente. Por concentración y liofilización se obtuvieron 2,6 g (36%) del producto como un sólido blanco.

^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 9.78-9.25 (bs, 1H), 7.90 (t, 1H), 7.78 (d, 2H), 7.44 (d, 2H), 7.38-7.24 (m, 5H), 6.66 (t, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.90-4.83 (dd, 1H), 4.60-4.45 (m, 2H), 4.18-3.93 (m, 4H), 3.73-3.62 (m, 1H), (d, 1H), 3.23-3.44 (AB, 2H), 2,87, 2.65-2.08 (m, 3H), 1.98-0,93 (m, 22H).

^{13}C-NMR (125 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 175,1, 171,7, 170,7, 168,8, 166,1, 164,4.

FAB-MS: (m+1) = 703 (m/z).

Ejemplo de referencia 12

(nPr)_{2}NC(O)CH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCC(CH_{3})_{3} (i) (nPr)_{2}NC(O)CH_{2}OH

Una mezcla de 2,5-dioxo-1,4-dioxano (2,02 g; 17,4 milimoles) y di-n-propilamina (5 ml; 36,5 milimoles) se calentó a 50ºC durante 1 h y a 90ºC durante 66 h. Se añadió tolueno y se eliminó subsiguientemente a vacío con exceso de di-n-propilamina. El residuo se purificó por cromatografía instantánea utilizando 10% de metanol en cloruro de metileno como eluyente para dar 4,18 g (66%) del compuesto deseado.

^{1}H-NMR: (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 4,1 (d, 2H), 3,65 (t, 1H), 3,25-3,35 (m, 2H), 2,9-3,0 (m, 2H), 1,45-1,6 (m, 4H), 0,8-0,95 (m, 6H).

(ii) (nPr)_{2}NC(O)CH_{2}OOCCH_{2}Br

Una mezcla de (nPr)_{2}NC(O)CH_{2}OH (0,743 g; 4,7 milimoles; procedente del paso (i) anterior), DCC (0,951 g, 4,6 milimoles), y ácido bromoacético (0,704 g; 5,1 milimoles) en cloruro de metileno (15 ml) se agitó a la temperatura ambiente durante 1,5 h. El precipitado se eliminó por filtración y el disolvente se separó del filtrado a vacío. La destilación en tubo de bolas del residuo dio 0,66 g (50%) del compuesto deseado.

^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 4,8 (s, 2H), 4,0 (s, 2H), 3,2-3,3 (m, 2H), 3,05-3,15 (m, 2H), 1,5-1,7 (m, 4H), 0,8-1,0 (dt, 6H).

(iii) 4-Nitrofenil-carbonato de pivaloiloximetilo

Una mezcla de pivalato de plata (7,5 g; 25 milimoles) y 4-nitrofenil-carbonato de yodometilo (Alexander et al., J. Med. Chem. (1988) 31, 318; 7,99 g; 25 milimoles) se calentó a reflujo en benceno (50 ml) durante 2 h. Se eliminó el benceno a vacío y el residuo se disolvió en tolueno. La filtración a través de Hyflo y purificación por cromatografía instantánea utilizando tolueno como eluyente proporcionaron 4,00 g (54%) del compuesto del subtítulo.

^{1}H-NMR (300 MHz; CDCl_{3}): \delta 8,25 (d, 2H), 7,40 (d, 2H), 5,85 (s, 2H), 1,2 (s, 2H).

^{13}C-NMR (75 MHz, CDCl_{3}) señales de amidina y carbonilo: \delta 176,77, 155,06.

(iv) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCC(CH_{3})_{3}

Una solución de 4-nitrofenil-carbonato de pivaloiloximetilo (1,18 g; 4 milimoles; procedente del paso (iii) anterior) en cloruro de metileno (20 ml) se añadió a la temperatura ambiente a una solución de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (1,88 g; 4 milimoles) y trietilamina (0,66 ml; 4,75 milimoles) en cloruro de metileno (20 ml). Después de 1 h, se reemplazó el cloruro de metileno por EtOAc y la mezcla se purificó por cromatografía instantánea utilizando EtOAc como eluyente para dar 1,27 g (50%) del compuesto del subtítulo.

^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 9.5 (bs, 1H), 8.25 (t, 1H), 7.8 (d, 2H), 7.3 (d, 2H), 7.0 (bs, 1H), 5.0-4.8 (m, 2H), 4.65-4.5 (m, 1H), 4.5-4.3 (m, 2H), 4.2-4.05 (m, 1H), 3.75 (t, 1H), 2.7-2.4 (m, 2H), 1.9-1.45 (m, 5H), 1,45-0.8 (m, 24H).

(v) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCC(CH_{3})_{3}

Se disolvió Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCC(CH_{3})_{3} (327 mg; 0,52 milimoles; procedente del paso (iv) anterior) en una mezcla de cloruro de metileno (5 ml) y TFA (1,2 ml). Después de 2 h, la mezcla de reacción se concentró a vacío, se añadió acetonitrilo, y el disolvente se eliminó de nuevo a vacío para dar el producto del subtítulo bruto que se utilizó sin purificación ulterior en el paso inmediatamente siguiente.

(vi) (nPr)_{2}NC(O)CH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCC(CH_{3})_{3}

El residuo procedente del paso (v) anterior se mezcló con (nPr)_{2}NC(O)CH_{2}OOCCH_{2}Br (150 mg; 0,53 milimoles; procedente del paso (ii) anterior) y K_{2}CO_{3} (480 mg; 3,5 milimoles) en THF (5 ml) y se calentó durante 3 h a 40ºC. La mezcla de reacción se filtró y se concentró para dar un producto bruto que se purificó por RPLC preparativa para dar 78 mg (21%) del compuesto del título.

^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 9.3-9.6 (bs, 1H), 8.5 (m, 1H), 7.95-8.15 (bs, 1H), 7.85 (d, 2H), 7.2-7.3 (d, 2H), 5.8 (s, 2H), 4.8-4.9 (dd, 1H), 4.5-4.7 (m, 3H), 4.0-4.4 (m, 3H), 2.8-3.4 (m, 5H), 2.2-2.7 (m, 3H), 1,75-1,3 (m, 9H), 1,3-1,0 (m, 14H), 1,0-0,7 (m, 7H).

^{13}C-NMR (75 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 177,24, 175,30, 171,85, 170,79, 168,78, 165,82, 163,14.

Ejemplo de referencia 13

EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCC(CH_{3})_{3}

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 12 (vi) anterior a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCC(CH_{3})_{3} bruto (0,41 g; 0,65 milimoles; véase Ejemplo 12(iv) anterior) utilizando acetonitrilo (10 ml) como disolvente. Después de agitar durante una noche a la temperatura ambiente, el disolvente se eliminó a vacío y el residuo se repartió entre EtOAc y agua. La fase acuosa se extrajo tres veces con EtOAc y las fases orgánicas reunidas se secaron (Na_{2}SO_{4}) y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se sometió a cromatografía instantánea utilizando cloruro de metileno/metanol como eluyente. La liofilización a partir de ácido acético glacial dio 84 mg (21%) del compuesto del título.

^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 9.9 (bs, 1H), 8.5 (t, 1H), 7.35 (d, 2H), 5.85 (s, 2H), 5.90 (dd, 2H), 4.6-4.35 (m, 2H), 4.15-4.0 (m, 4), 3.2 (s, 2H), 2.85 (d, 1H), 2.7-2.45 (m, 2), 2.0-1.9 (m, 2H), 1.8-1.45 (m, 5H), 1,3-0.9 (m, 18H).

^{13}C-NMR (75 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 177,23, 175,48, 172,29, 170,80, 168,85, 163,14.

Ejemplo de referencia 14

EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH_{3})OOCCH_{3} (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH_{3})OOCCH_{3}

Una solución de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (6,38 g, 13,5 milimoles), 4-nitrofenil-carbonato de 1-acetoxietilo (Alexander et al., J. Med. Chem. (1988) 31, 318) (3,05 g; 12 milimoles) y trietilamina (1,95 ml; 14 milimoles) en cloruro de metileno (40 ml) se agitó a la temperatura ambiente durante 16 h seguido por adición de EtOAc. La solución resultante se concentró ligeramente, se lavó con Na_{2}CO_{3} acuoso (10%), y se concentró a para dar un producto bruto, que se purificó por cromatografía instantánea utilizando EtOAc como eluyente, para dar 5,59 g (77%) del compuesto del subtítulo.

^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 9.5 (bs, 1H), 8.25 (t, 1H), 7.85 (d, 2H), 7.35 (d, 2H), 6.95 (q, 1H), 6.7 (bs, 1H), 5.0-4.85 (m, 2H), 4.65-4.5 (m, 1H), 4.5-4.25 (m, 2H), 4.2-4.05 (m, 1H), 3.75 (t, 1H), 2.65-2.45 (m, 2H), 2.05 (s, 3H), 1.9-1.45 (m, 11H), 1.45-0.8 (m, 12H).

^{13}C-NMR (75 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 172,61, 170,80, 169,54, 168,91, 162,50, 156,02.

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH_{3})OOCCH_{3}

El compuesto bruto del subtítulo se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 12(v) anterior a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH_{3})OOCCH_{3} (2,21 g; 3,68 milimoles; procedente del paso (i) anterior).

(iii) EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH_{3})OOCCH_{3}

El compuesto H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH_{3})OOCCH_{3} bruto procedente del paso (ii) anterior se disolvió en cloruro de metileno (150 ml). La mezcla se lavó con una solución de Na_{2}CO_{3} al 10% y la fase orgánica se secó con K_{2}CO_{3} y se filtró. A la solución resultante se añadieron K_{2}CO_{3} (756 mg, 5,5 milimoles) y (O-trifluorometanosulfonil)-glicolato de etilo (790 mg; 3,3 milimoles) en cloruro de metileno (5 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 5-10 minutos a la temperatura ambiente y se concentró luego a vacío. El residuo se disolvió en EtOAc y la mezcla resultante se filtró a través de Celite. El filtrado se sometió a cromatografía instantánea utilizando EtOAc como eluyente, seguido por HPLC para dar 475 mg (22%) del compuesto del título.

^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta 9.5 (bs, 1H), 8.3 (t, 1H), 7.7 (d, 2H), 7.2 (d, 2H), 6.85 (q, 1H), 4.8 (t, 1H), 4.45-4.25 (m, 2H), 4.1-3.85 (m, 4H), 3.1 (s, 2H), 2.75 (s, 1H), 2.5-2.3 (m, 2H), 1.95 (s, 3H), 1.9-1.8 (m, 1H), 1.7-1.25 (m, 8H), 1.25-1.75 (m, 8H).

^{3}C-NMR (75.5 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 175,26, 172,34, 170,81, 169,49, 168,80, 162,43.

Ejemplo 15 MeOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh

A una solución de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (1,0 g; 2,1 milimoles) y Na_{2}HPO_{4} (18,7 g; 105 milimoles) en THF (45 ml) a 20ºC se añadió gota a gota peróxido de dibenzoílo (556 mg; 2,3 milimoles) disuelto en THF (10 ml) durante 45 minutos. Después de agitar a 20ºC durante 24 h, la mezcla de reacción se concentró y el producto bruto resultante se sometió a RPLC preparativa. Esto dio 124 mg (10%) del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.

^{1}H-NMR: (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 8.26 (m, 1H), 8.09 (m, 2H), 7.72 (m, 2H), 7.59 (m, 1H), 7.48 (m, 2H), 7.36 (d, 2H), 5.13 (s, 2H), 4.87-4.98 (m, 2H), 4.54-4.61 (m, 1H), 4.33-4.47 (m, 2H), 4.13-4.19 (m, 1H), 3.81 (t, 1H), 2.53-2.63 (m, 2H), 1.73-1.86 (m, 3H), 1.66-1.72 (m, 2H), 1.36 (s, 9H), 0.968-1.28 (m, 6H).

^{13}C-NMR (100 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 172,7, 170,6, 163,9, 157,0, 155,9.

LC-MS: m/z 592 (M+H^{+}); m/z 614 (M+Na^{+}).

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh

A una solución de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh (600 mg; 1,01 milimoles; procedente del paso (i) anterior) en cloruro de metileno (18 ml) se añadió TFA (6 ml) a 20ºC. Después de agitar durante 14 h, la mezcla de reacción se concentró y el producto bruto resultante se repartió entre EtOAc:NaOH 0,1 M. Se separaron las fases y la capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}) y se evaporó. Rendimiento: 480 mg (96%) como un sólido blanco.

^{1}H-NMR (400 MHz, MeOH-d4): \delta 8.18 (m, 2H), 7.77 (m, H), 7.64 (m, 1H), 7.52 (m, 2H), 7.43 (d, 2H), 4.75-4.81 (m, 1H), 4.50 (s, 2H), 4.18-4.34 (m, 2H), 3.12 (d, 1H), 2.57-2.68 (m, 1H), 2.23-2.33 (m, 1H), 1.88-1.96 (m, 1H), 1,73-1.84 (m, 2H), 1.59-1.71 (m, 1H), 0.80-1.34 (m, 5H).

LC-MS: m/z 492 (M+H^{+}); m/z 514 (M+Na^{+}).

(iii) MeOOCCH_{2}-(R)-Cgl-Aze-Pab-OOCPh

A una solución de H-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh (480 mg; 0,97 milimoles; procedente del paso (ii) anterior), K_{2}CO_{3} (270 mg; 2 milimoles) en acetonitrilo (5 ml) a 20ºC se añadió bromoacetato de metilo (177 mg; 1,16 milimoles). La mezcla de reacción se agitó a 20ºC durante 14 h. Se filtró la mezcla de reacción y se concentró para dar un producto bruto que se purificó por RPLC preparativa para dar 269 mg (49%) del compuesto del título como un sólido blanco.

^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}): \delta 9.43 (m, 1H, NH), 8.09 (m, 2H), 7.69 (m, 2H), 7.59 (m, 1H), 7.47 (m, 1H), 7.47 (m, 2H), 7.34 (m, 2H), 5.27 (s, 2H), 4.93 (dd, 1H), 4.59 (dd, 1H), 4.40 (dd, 1H), 4.12 (m, 2H), 3.65 (s, 3H), 2.85 (d, 1H) 2.72-2.63 (m, 1H), 2.55-2.48 (m, 1H), 1.96 (m, 1H), 1.74 (m, 2H), 1.67 (d, 1H), 1.59 (d, 1H), 1.56-1.50 (m, 1H), 1.29-1.08 (m, 4H), 1.04-0.94 (m, 1H).

^{13}C-NMR (100 MHz, CDCl_{3}) señales de carbonilo y amidina: \delta 175,1, 172,5, 170,6, 164,0, 157,1.

LC-MS: m/z 564 (M+H^{+}).

Ejemplo 16 MeOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

A una solución de MeOOCCH_{2}-(R)-Cgl-Aze-Pab-OC(O)Ph (260 mg; 0,46 milimoles; véase Ejemplo 15 (iii) anterior) en THF (4,6 ml) se añadió KOMe (1,6 ml; 0,29 M; 0,46 milimoles) a 20ºC. Después de 15 minutos de agitación, se concentró la mezcla y se sometió a RPLC preparativa. Esto dio 109 mg (52%) del compuesto del título como un sólido blanco.

^{1}H-NMR (500 MHz, MeOH-d4): \delta 7.59 (d, 2H), 7.34 (d, 2H), 4.83 (s, 2H), 4.82-4.76 (m, 1H), 4.48 (d, 1H), 4.33 (d, 1H), 4.15-4.30 (m, 2H), 3.64 (s, 3H), 3.04 (d, 1H), 2.57 (m, 1H), 2.26 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.75 (m, 2H) 1.58-1.70 (m, 2H), 1.53 (an, 1H), 1.31-1.10 (m, 4H), 1.04 (m, 1H).

^{13}C-NMR (100 MHz, MeOH-d4) señales de carbonilo y amidina: \delta 175,9, 174,3, 172,7, 155,2

LC-MS: m/z 460 (M+H^{+}), m/z 482 (M+Na^{+}).

Ejemplo 17 EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

A una solución de ç EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-C(O)OCH(CH_{3})OOCCH_{3} (184 mg; 0,31 milimoles; véase Ejemplo 14 (iii) anterior), se añadieron hidrocloruro de hidroxilamina (120 mg; 1,72 milimoles) y trietilamina (0,8 ml; 5,7 milimoles) en EtOH (95%; 4,0 ml), y la mezcla se agitó a la temperatura durante 4 días. La mezcla de reacción se concentró y el producto bruto se sometió a RPLC preparativa. Esto dio 85 mg (58%) del compuesto del título.

^{1}H-NMR (300 MHz, CD_{3}OD): \delta 7.6 (d, 2H), 7.35 (d, 2H), 4.75-4.85 (m, 1H), 4.4-4.55 (m, 2H), 4.0-4.35 (m, 4H), 3.35 (d, 2H), 3.05 (d, 1H), 2.5-2.65 (m, 1H), 2.2-2.35 (m, 1H), 1.9-2.05 (m, 1H), 1.4-1.85 (m, 1H), 1.74 (m, 2H), 1.67 (d, 1H), 1.59 (d, 1H), 1.56-1.50 (m, 1H), 1.29-1.08 (m, 5H), 1.85-1.35 (m, 8H).

^{13}C-NMR (75,5 MHz, CD_{3}OD) señales de carbonilo y amidina: \delta 175,97, 173,91, 172,72, 155,23.

LC-MS: (m+1) = 474 (m/z).

Ejemplo 18 BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

A una solución de hidrocloruro de hidroxilamina (320 mg; 4,59 milimoles) y trietilamina (1,7 ml; 12,24 milimoles) en EtOH se añadió BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (1,0 g; 1,52 milimoles). La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 40 horas y se concentró luego. El producto bruto se purificó por RPLC preparativa utilizando 50% de acetonitrilo en NH_{4}OAc 0,1 M como eluyente para dar 0,34 g (42%) del compuesto del título.

LC-MS: (m+1) = 536 (m/z).

Ejemplo de referencia 19

nPrOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Se preparó el compuesto del título análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z x 2HCl (700 mg; 1,2 milimoles) y bromoacetato de n-propilo (268 mg; 1,45 milimoles). Rendimiento 259 mg (35%).

FAB-MS: (m+1) = 606 (m/z).

Ejemplo 20 nPrOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 18 a partir de nPrOOCCH_{2}
(R)Cgl-Aze-Pab-Z (182 mg; 0,3 milimoles; véase Ejemplo 19 anterior). El producto bruto se purificó por RPLC preparativa utilizando 40% de acetonitrilo en NH_{4}OAc 0,1 M como eluyente para dar 74 mg (51%) del compuesto deseado.

LC-MS: (m+1) = 488 (m/z).

Ejemplo 21 iPrOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 18 a partir de iPrOOCC
H_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (590 mg; 0,7 milimoles; véase Ejemplo 39 más adelante). Rendimiento 110 mg (32%).

LC-MS: (m+1) = 488 (m/z).

Ejemplo 22 tBuOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 18 a partir de t-BuOOC
CH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (738 mg; 1,2 milimoles; véase Ejemplo 37 más adelante). Rendimiento 290 mg (48%).

LC-MS: (m+1) = 502 (m/z).

Ejemplo 23 (nPr)_{2}NCOCH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab(OH) (i) HOOCCH_{2}-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-O-Boc

Una solución de HOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (670 mg; 1,5 milimoles; véase Ejemplo 28 más adelante), (Boc)_{2}
O (654 mg; 3 milimoles), y DMAP (92 mg; 0,75 milimoles) en THF:agua (10:1) se agitó a la temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró y se purificó por RPLC preparativa. La liofilización proporcionó 112 mg (12%) del compuesto del subtítulo como un sólido blanco.

LC-MS: (m-1) = 643 (m/z).

(ii) (nPr)_{2}NCOCH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-O-Boc

Una solución de HOOCCH_{2}-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-O-Boc (100 mg; 0,15 milimoles; procedente del paso (i) anterior), (nPr)_{2}NCOCH_{2}OH (27 mg; 0,17 milimoles; véase Ejemplo 12 (i) anterior), EDC (40 mg; 0,21 milimoles) y DMAP (10 mg; 0,075 milimoles) en acetonitrilo (5 ml) se agitó a la temperatura ambiente durante 4 días. La mezcla de reacción se concentró, se purificó por RPLC preparativa y se liofilizó para dar 21 mg (18%) del compuesto del subtítulo.

LC-MS: (m-1) = 787 (m/z).

(iii) (nPr)_{2}NCOCH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

Una solución de (nPr)_{2}NCOCH_{2}-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-O-Boc (20 mg; 0,025 milimoles) en TFA:cloruro de metileno (1:1) se agitó a la temperatura ambiente durante 5 minutos. La mezcla de reacción se concentró y se liofilizó a partir de acetonitrilo y agua para dar 5 mg (34%) del compuesto del título.

LC-MS: (m+1) = 587 (m/z).

Ejemplo 24 ChNHCOCH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 18 a partir de ChNHCO
CH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (118 mg; 0,17 milimoles; véase Ejemplo 11(iii) anterior). Rendimiento 1,8 mg.

LC-MS: (m+1) = 585 (m/z).

Ejemplo 25 MeNHCOCH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 18 a partir de MeNHCO
CH_{2}-(R)-Cgl-Aze-Pab-Z (81 mg; 0,12 milimoles, véase el Ejemplo 36 más adelante). Rendimiento 10 mg (16%).

LC-MS: (m+1) = 517 (m/z).

Ejemplo 26 EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OAc (i) H-(R)-Cgl-Aze-Pab-OAc

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al método descrito en el Ejemplo 27 siguiente (pasos (i), (ii) y (iii)) utilizando anhídrido del ácido acético en lugar de anhídrido del ácido propiónico.

LC-MS: (m+1) = 430 (m/z)

(ii) EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OAc

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) anterior a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-OAc (370 mg; 0,6 milimoles) y bromoacetato de etilo (105 mg; 0,63 milimoles). Rendimiento 67 mg (22%).

LC-MS (m+1) = 516 (m/z).

Ejemplo 27 EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OC(O)Et (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

A una solución de hidrocloruro de hidroxilamina y trietilamina en EtOH se añadió Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (1,0 g; 1,52 milimoles). La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 40 horas y se concentró luego. El producto bruto se purificó por RPLC preparativa.

LC-MS: (m+1) 488 (m/z).

(ii) Boc(R)Cgl-Aze-Pab-OC(O)Et

Una solución de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (500 mg; 0,91 milimoles; procedente del paso (i) anterior) y anhídrido del ácido propiónico (3,5 ml) se agitó a la temperatura ambiente durante 45 minutos y se concentró luego. El producto bruto se purificó por RPLC preparativa utilizando 50% de acetonitrilo en NH_{4}OAc 0,1 M como eluyente para dar 266 mg (54%) del compuesto del subtítulo.

LC-MS: (m+1) 544 (m/z).

(iii) H(R)Cgl-Aze-Pab-OC(O)Et

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(ii) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-OC(O)Et (238 mg; 0,44 milimoles; procedente del paso (ii) anterior). Rendimiento 290 mg (100%).

LC-MS: (m+1) 444 (m/z).

(iv) EtOOCCH_{2}(R)Cgl-Aze-Pab-OC(O)Et

A una solución de H(R)Cgl-Aze-Pab-OC(O)Et (300 mg; 0,45 milimoles; procedente del paso (iii) anterior) y K_{2}CO_{3} (308 mg; 2,23 milimoles) en cloruro de metileno (6 ml) a 0ºC se añadió gota a gota EtOOCCH_{2}OSO_{2}CF_{3} (105 mg; 0,45 milimoles, preparado a partir de anhídrido tríflico y glicolato de etilo). Después de agitar la mezcla de reacción a la temperatura ambiente durante 1 h, se lavó la mezcla de reacción con agua, ácido cítrico y agua, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. El producto bruto se purificó por RPLC preparativa utilizando acetonitrilo al 45% en NH_{4}OAc 0,1 M como eluyente para dar 63 mg (27%) del compuesto del título.

LC-MS: (m+1) 530 (m/z).

Ejemplo 28 HOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (i)tBuOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh (250 mg; 0,5 milimoles; véase Ejemplo 15(ii) anterior) y bromoacetato de t-butilo (119 mg; 0,6 milimoles). Rendimiento 211 mg (69%).

LC-MS: (m+1) = 606 (m/z).

(ii) HOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(ii) a partir de tBuOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh (233 mg; 0,3 milimoles; procedente del paso (i) anterior). Rendimiento 65 mg (37%).

LC-MS: (m+1) = 550 (m/z).

(iii) HOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

Una solución de HOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh (60 mg; 0,1 milimol; procedente del paso (ii) anterior) y KOMe (0,2 M; 0,2 milimoles) en THF (10 ml) y metanol (1,5 ml) se agitó a la temperatura ambiente durante 5 minutos. La mezcla de reacción se concentró y liofilizó en agua y acetonitrilo para dar 28 mg (63%) del compuesto del título.

LC-MS: (m+1) = 446 (m/z).

Ejemplo 29 HOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-O-cis-oleílo (i)tBuOOCCH_{2}-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-Z

Una solución de tBuOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (1,7 g, 2,8 milimoles; véase Ejemplo 37 más adelante), (Boc)_{2}
O (672 mg; 3,08 milimoles) y DMAP (68 mg; 0,56 milimoles) en THF (30 ml) se agitó a la temperatura ambiente durante 24 h. Se añadió una nueva cantidad de (Boc)_{2}O (305 mg; 1,4 milimoles) a 5ºC. Después de 24 h adicionales, la mezcla de reacción se concentró y purificó por RPLC preparativa para dar 587 mg (30%) del compuesto deseado.

EC-MS: (m+1) = 720 (m/z).

(ii)tBuOOCCH_{2}-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-OH

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 18 a partir de tBuOOCCH_{2}-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-Z (580 mg; 0,8 milimoles; procedente del paso (i) anterior). Rendimiento 341 mg (71%).

EC-MS: (m+1) = 602 (m/z).

(iii)tBuOOCCH_{2}-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-O-cis-oleílo

Una solución de tBuOOCCH_{2}-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-OH (340 mg; 0,56 milimoles; procedente del paso (ii) anterior), cloruro de cis-oleílo (170 mg; 0,56 milimoles) y trietilamina (62 mg; 0,61 milimoles) en cloruro de metileno se agitó durante 5 minutos. La mezcla de reacción se concentró y purificó por RPLC preparativa para dar 326 mg (67%) del compuesto del subtítulo.

EC-MS: (m+1) = 867 (m/z).

(iv) HOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-O-cis-oleílo

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(ii) a partir de tBuOOC
CH_{2}-(R)Cgl(Boc)-Aze-Pab-O-cis-oleílo (223 mg; 0,25 milimoles; procedente del paso (iii) anterior).

LC-MS: (m+1) = 710 (m/z).

Ejemplo de referencia 30

Ciclooctil-OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (i) Bromoacetato de ciclooctilo

Se disolvieron ciclooctanol (1,3 g; 10 milimoles)y DMAP (0,3 g) en cloruro de metileno seguido por adición de cloruro de bromoacetilo (1 ml; 12 milimoles). Después de agitar durante 18 h, la mezcla de reacción se lavó con Na_{2}CO_{3} acuoso (2 M) y HCl (1 M), se secó, se concentró y se purificó por cromatografía instantánea utilizando éter de petróleo:cloruro de metileno (50:50) para dar 1,8 g (72%) del compuesto del subtítulo.

(ii) Ciclooctil-OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z x 2HCl (703 mg; 1,2 milimoles) y bromoacetato de ciclooctilo (363 mg; 1,46 milimoles; procedente del paso (i) anterior). Rendimiento 379 mg (46%).

FAB-MS: (m+1) = 674 (m/z).

Ejemplo de referencia 31

tBuCH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z x 2HCl (2,5 g; 4,3 milimoles) y bromoacetato de terc-butilmetilo (1,08 g; 5,2 milimoles). Rendimiento 1,87 g (69%).

FAB-MS: (m+1) = 634 (m/z).

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Ejemplo de referencia 32

(2-Me)BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (i) Bromoacetato de metilbencilo

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 30 (i) a partir de alcohol 2-metilbencílico (5 g; 41 milimoles) y cloruro de bromoacetilo (12,6 g; 80 milimoles). Rendimiento 8,2 g (82%).

(ii) (2-Me)BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z x 2HCl (580 mg; 1 milimol) y bromoacetato de 2-metilbencilo (290 mg; 1,2 milimoles; procedente del paso (i) anterior). Rendimiento 30 mg (4,5%).

LC-MS: (m+1) = 668 (m/z).

Ejemplo de referencia 33

ChCH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Una solución de BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (1,41 g; 1,7 milimoles) y alcohol ciclohexil-metílico (6 ml) en trietilamina (474 \mul) y cloruro de metileno (3 ml) se calentó a reflujo durante 4 días. La mezcla de reacción se trató para dar un producto bruto que se purificó por cromatografía instantánea utilizando cloruro de metileno:metanol (95:5) como eluyente para dar 801 mg (71%) del compuesto del título.

FAB-MS: (m+1) = 660 (m/z).

Ejemplo de referencia 34

ChOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (i) Bromoacetato de ciclohexilo

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 32 (i) anterior a partir de ciclohexanol (1 g; 10 milimoles) y cloruro de bromoacetilo (1 ml; 12 milimoles).

(ii) ChOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z x 2HCl (2,5 g; 4,32 milimoles) y bromoacetato de ciclohexilo (1,5 g; 5,2 milimoles). Rendimiento 1,7 g (60%).

FAB-MS: (m+1) = 646 (m/z).

Ejemplo de referencia 35

PhC(Me)_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (i) Bromoacetato de 2-fenil-2-propilo

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 30 (i) a partir de 2-fenil-2-propanol (3 g; 22 milimoles) y cloruro de bromoacetilo (4,16 g; 26 milimoles). Rendimiento 1,2 g (44%).

(ii) PhC(Me)_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)-Cgl-Aze-Pab-Z x 2HCl (1,2 g; 2,2 milimoles) y bromoacetato de 2-fenil-2-propilo (640 mg: 2,5 milimoles; procedente del paso (i) anterior). Rendimiento 1,3 g (86%).

^{1}H-NMR (500 MHz; CDCl_{3}) \delta 9,3 (br s, 1H), 8,35 (t, 1H), 7,75 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,30-7,05 (m, 10H o 11H), 5,15 (s, 2H), 4,78 (t, 1H), 4,40-4,30 (parte AB de espectro ABX, 2H), 3,95 (q, 1H), 3,74 (q, 1H), 3,27-3,19 (espectro AB, 2H), 2,72 (d, 1H), 2,43 (q, 2H), 1,93 (br d, 1H), 1,75-1,60 (m, 9H o 10H), 1,54 (d, 1H), 1,49-1,40 (m, 1H), 1,25-1,0 (m, 4H), 0,92 (q, 1H)

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Ejemplo de referencia 36

MeNHCOCH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z x 2HCl (1,0 g; 1,7 milimoles) y MeNHCOCH_{2}OOCCH_{2}Br (440 mg; 2 milimoles; preparado análogamente a los procedimientos descritos en el Ejemplo 11 anterior (pasos (i), (ii) y (iii)) utilizando metilamina en lugar de ciclohexilamina. Rendimiento 380 mg (35%).

FAB-MS: (m+1) = 635 (m/z).

Ejemplo de referencia 37

tBuOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z x 2HCl (500 mg; 1,0 milimol) y bromoacetato de t-butilo (231 mg; 1,2 milimoles). Rendimiento 420 mg (69%).

LC-MS: (m+1) = 620 (m/z).

Ejemplo de referencia 38

(Me)_{2}CHC(Me)_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (787 mg; 1,4 milimoles) y bromoacetato de 2,3-dimetil-2-butilo (364 mg; 1,63 milimoles). Rendimiento 590 mg (67%).

FAB-MS: (m+1) = 648 (m/z).

Ejemplo de Referencia 39

iPrOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (700 mg; 1,2 milimoles) y bromoacetato de isopropilo (262 mg; 1,5 milimoles). Rendimiento 225 mg (31%).

FAB-MS: (m+1) = 606 (m/z).

Ejemplo de referencia 40

BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe)

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(i) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H y cloroformiato de 4-metoxifenilo.

FAB-MS: (m+1) = 622 (m/z).

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) x 2HCl

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 4 (ii) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) (procedente del paso (i) anterior).

(iii) BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe)

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) x 2HCl (85 mg; 0,16 milimoles; procedente del paso (iii) anterior) y bromoacetato de bencilo (90 mg; 0,2 milimoles). Rendimiento 60 mg (56%).

FAB-MS: (m+1) = 670 (m/z).

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Ejemplo de referencia 41

ChCH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe)

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en elEjemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) (554 mg; 0,64 milimoles; véase Ejemplo 40 (ii) anterior) y bromoacetato de ciclohexilmetilo (165 mg; 0,7 milimoles). Rendimiento 34 mg (8%).

FAB-MS: (m+1) = 676 (m/z).

Ejemplo de referencia 42

(2-Me)BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe)

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) (522 mg; 1 milimol; véase Ejemplo 40 (ii) anterior) y bromoacetato de 2-(metil)bencilo (365 mg; 1,5 milimoles). Rendimiento 158 mg (23%).

LC-MS: (m+1) = 684 (m/z).

Ejemplo de referencia 43

EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me) (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me)

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(i) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab (1,96 g; 4,56 milimoles) y cloroformiato de 4-tolilo (850 mg; 4,99 milimoles). Rendimiento 1,39 g (55%).

FAB-MS: (m+1) = 606 (m/z).

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me)

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 4 (ii) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me) (388 mg; 0,64 milimoles; procedente del paso (i) anterior). Rendimiento 293 mg (91%).

FAB-MS: (m+1) = 506 (m/z).

(iii) EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me)

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me) (288 mg; 0,6 milimoles; procedente del paso (ii) anterior) y bromoacetato de etilo (114 mg; 0,7 milimoles). Rendimiento 81 mg (24%).

FAB-MS: (m+1) = 592 (m/z).

Ejemplo de referencia 44

BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me)

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-Me) (272 mg; 0,54 milimoles; véase Ejemplo 43 (ii) anterior) y bromoacetato de bencilo (147 mg; 0,6 milimoles). Rendimiento 107 mg (31%).

FAB-MS: (m+1) = 654 (m/z).

Ejemplo de referencia 45

BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nBu x 2HCl (400 mg; 0,74 milimoles; véase Ejemplo 9 (ii) anterior) y bromoacetato de bencilo (210 mg; 0,88 milimoles). Rendimiento 220 mg (48%).

FAB-MS: (m+1) = 620 (m/z).

Ejemplo de referencia 46

iPrOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH=CH_{2}

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CH=CH_{2} x 2TFA (456 mg; 0,67 milimoles; véase Ejemplo 1(ii) anterior) y bromoacetato de isopropilo (145 mg; 0,8 milimoles). Rendimiento 294 mg (79%).

FAB-MS: (m+1) = 556 (m/z).

Ejemplo de referencia 47

EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-iBu (i) Boc-Pab-COO-iBu

A una solución de Boc-Pab-H (500 mg; 2,0 milimoles; preparado a partir de Pab-Z y (Boc)_{2}O (con formación de Boc-Pab-Z), seguido por hidrogenación sobre Pd/C) y trietilamina (400 mg; 4,0 milimoles) en cloruro de metileno (10 ml) se añadió cloroformiato de i-butilo (270 mg; 2,2 milimoles) a 0ºC. Después de agitar durante 5 h, se añadió agua. La fase orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró para dar 530 mg (76%) del compuesto del subtítulo.

^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}: \delta 9.5 (bs, 1H), 7.82 (d, 2H), 7.31 (d, 2H), 6.6 (bs, 1H), 5.0 (bs, 1H), 4.33 (bd, 2H), 3.93 (d, 2H), 2.04 (m, 1H), 1.45 (s, 9H), 0.97 (d, 6H).

(ii) H-Pab-COO-iBu x 2HCl

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 4 (ii) a partir de Boc-Pab-COO-iBu (520 mg; 1,5 milimoles; procedente del paso (i) anterior). Rendimiento 430 mg (88%).

^{1}H-NMR (500 MHz, MeOD): \delta 7.89 (d, 2H), 7.75 (d, 2H), 4.30 (s, 2H), 4.17 (d, 2H), 2.11-2.05 (m, 1H), 1.02 (d, 6H).

(iii) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-iBu

A una solución de Boc-(R)Cgl-Aze-OH (480 mg; 1,4 milimoles), H-Pab-COO-iBu x 2HCl (430 mg; 1,3 milimoles; procedente del paso (ii) anterior) y DMAP (650 mg; 5,3 milimoles) en acetonitrilo (20 ml) se añadió EDC (270 mg; 1,4 milimoles). Después de agitar durante 3 días a la temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró y se disolvió luego en agua y EtOAc. La fase orgánica se lavó con NaHCO_{3} (aq) y se secó (Na_{2}SO_{4}), se concentró y se purificó por cromatografía instantánea utilizando EtOAc como eluyente para dar 510 mg (52%) del compuesto del subtítulo.

(iv) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-iBu x 2HCl

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 4 (ii) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-iBu (500 mg; 0,88 milimoles; procedente del paso (iii) anterior). Rendimiento 360 mg (87%).

(v) EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-iBu

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-iBu x 2HCl (290 mg; 0,53 milimoles; procedente del paso (iv) anterior) y bromoacetato de etilo(110 mg; 0,64 milimoles). Rendimiento 140 mg (47%).

FAB-MS: (m+1) = 558 (m/z).

Ejemplo de referencia 48

BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr x 2TFA (902 mg; 1,3 milimoles; véase Ejemplo 5 (ii) anterior) y bromoacetato de bencilo (362 mg; 1,6 milimoles). Rendimiento 199 mg (25%).

^{1}H-NMR: (400 MHz; CDCl_{3}) \delta 8,43 (bs, 1H), 7,78 (d, 2H), 7,38-7,27 (m, 7H), 5,05 (s, 2H), 4,90 (dd, 1H), 4,56-4,39 (parte AB de espectro ABX, 2H), 4,12-4,03 (m, 3H), 3,98-3,91 (q, 1H), 3,33-3,22 (espectro AB, 2H), 2,85 (d, 1H), 2,65-0,94 (m, 19H).

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Ejemplo de referencia 49

EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCCh (i) EtSCOOCH_{2}OOCCh

A una solución de hidrogenosulfato de tetrabutilamonio (15,6 g, 45,6 milimoles) y ácido ciclohexano-carboxílico (5,85 g, 46 milimoles) en cloruro de metileno se añadió NaOH (9,1 ml, 10 M; 68 milimoles) a 0ºC. Después de agitar durante 5 minutos, la mezcla de reacción se filtró, se lavó con cloruro de metileno, se disolvió en tolueno, se concentró y se disolvió en THF para dar [Bu_{4}N]^{+}[OOCCh]^{-}. Se añadió EtSCOOCH_{2}Cl (4 g; 25,9 milimoles; véase Folkmann y Lund, J. Synthesis, (1990), 1159) a la solución de [Bu_{4}N]^{+}[OOCCh]^{-} en THF a la temperatura ambiente. Después de agitar a la temperatura ambiente durante 12 h, la mezcla de reacción se concentró y purificó por cromatografía instantánea para dar 2,57 g (40%) del compuesto del subtítulo.

^{1}H-NMR (400 MHz, CDCl_{3}) picos de diagnóstico \delta 5,80 (s, 2H, O-CH_{2}-O), 2,85 (q, 2H, CH_{2}-S).

(ii) ClCOOCH_{2}OOCCh

A EtSCOOCH_{2}OOCCh (2,9 g; 11,8 milimoles; procedente del paso (i) anterior) se añadió gota a gota SO_{2}Cl_{2} (3,18 g; 23,6 milimoles) a 0ºC. Después de agitar durante 30 minutos, la mezcla de reacción se concentró para dar 1,82 g (70%) del compuesto deseado.

^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) picos de diagnóstico \delta 5,82 (s, 2H, O-CH_{2}-O).

(iii) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCCh

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(i) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (750 mg; 1,59 milimoles) y ClCOOCH_{2}OOCCh (460 mg; 2,1 milimoles; procedente del paso (ii) anterior). El producto bruto se purificó por RPLC preparativa. Rendimiento 355 mg (9%).

FAB-MS: (m+1) 656 (m/z).

(iv) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCCh x 2TFA

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(ii) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCCh (procedente del paso (iii)anterior).

(v) EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCCh

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCCh x 2TFA (193 mg; 0,35 milimoles; procedente del paso (iv) anterior) y trifluoroacetato de etilo (83 mg; 0,35 milimoles). Rendimiento 87 mg (39%).

^{1}H-NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,48 (t br, 1H), 7,83 (d, 2H), 7,37 (d, 2H), 5,86 (s, 2H), 4,95 (dd, 1H), 4,15-4,39 (parte AB de espectro ABX, 2H), 4,18-4,05 (m, 5H), 3,26-3,17 (espectro AB, 2H), 2,87 (d, 1H), 2,75-0,95 (m, 29H).

Ejemplo de referencia 50

EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCCH_{2}Ch

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 49 anterior partiendo de ácido ciclohexil-acético en lugar de ácido ciclohexano-carboxílico. Rendimiento 74 mg (17%).

FAB-MS: (m+1) = 656(m/z).

Ejemplo de referencia 51

EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(Me)OOCPh

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 49 anterior partiendo de EtSCOOCH(CH_{3})Cl(preparado a partir de ClCOCH(CH_{3})Cl y EtSH utilizando el procedimiento descrito por Folkmann et al. en J. Synthesis (1990), 1169) en lugar de EtSCOOCH_{2}Cl. Rendimiento 70 mg (23%).

FAB-MS: (m+1) = 650 (m/z).

\newpage

Ejemplo de referencia 52

EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCPh

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el ejemplo 49 anterior utilizando ácido benzoico en lugar de ácido ciclohexano-carboxílico. Rendimiento 50 mg (39%).

^{1}H-NMR (300 MHz, CDCl_{3}: \delta 9.73-9.25 (s, br, 1H), 8.45 (t, 1H), 8.05 (d, 2H), 7.83 (d, 2H), 7.60-7.10 (m, 6H), 6.10 (s, 2H), 4.96-4.84 (dd, 1H), 4.62-4.30 (ABX, 2H), 4.20-3.93 (m, 4H), 3.25 (s, 2H), 2.84 (d, 1H), 2.73-2.41 (m, 2H), 2.41-0.87 (m, 15H).

^{13}C-NMR (300 MHz, CDCl_{3}, carbonos de anilina y carbonilo) \delta 163,1, 165,3, 169,0, 170,8, 172,3, 175,5.

Ejemplo de referencia 53

BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(Me)OAc

El compuesto del título se preparó análogamente el procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH(CH_{3})OC(O)CH_{3} (108 mg; 0,21 milimoles);véase Ejemplo 14 (ii) anterior) y bromoacetato de bencilo (36 \mul; 0,23 milimoles). Rendimiento 41 mg (30%).

FAB-MS: (m+1) = 650 (m/z).

Ejemplo de referencia 54

EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OAc (i) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OAc x 2TFA

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 14 (pasos (i) y (ii)) anterior utilizando 4-nitrofenilcarbonato de acetoximetilo (preparado análogamente al método descrito en el Ejemplo 12 (iii) utilizando acetato de plata en lugar de pivalato de plata). El tratamiento dio el compuesto del subtítulo, que se utilizó en el paso inmediatamente siguiente sin purificación ulterior.

(ii) EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OAc

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) anterior a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OAc x 2TFA (0,83 milimoles; procedente del paso (i) anterior) y bromoacetato de etilo (2,2 milimoles). Rendimiento 286 mg.

FAB-MS: (m+1) 574 (m/z).

Ejemplo de referencia 55

tBuOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OAc

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) anterior a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OAc x 2TFA (0,313 milimoles; véase Ejemplo 54 (i) anterior) y bromoacetato de t-butilo (73 mg; 0,376 milimoles). Rendimiento 156 mg (83%).

FAB-MS: (m+1) = 602 (m/z).

Ejemplo de referencia 56

BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOC-tBu

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOC-tBu (379 mg; 0,71 milimoles; véase Ejemplo 12 (v) anterior) y bromoacetato de bencilo (135 \mul; 0,85 milimoles). Rendimiento 146 mg (30%).

FAB-MS: (m+1) = 678 (m/z).

\newpage

Ejemplo de referencia 57

EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CCl_{3} (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CCl_{3}

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(i) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (1,0 g; 2,12 milimoles), NaOH 2M (11,7 ml) y cloroformiato de tricloroetilo (494 mg; 2,33 milimoles). Rendimiento 1,08 g (79%).

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CCl_{3}

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(ii) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CCl_{3} (1,04 g; 1,607 milimoles; procedente del paso (i) anterior). Rendimiento 1,43 g (99%).

^{1}H-NMR (500 MHz, CD_{3}OD): \delta 7.79 (d, 2H), 7.61 (d, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.87-4.81 (m, 2H), 4.63-4.52 (q, 2H), 4.41-4.34 (m, 1H), 4.30-4.24 (m, 1H), 3.72 (d, 1H), 2.72-2.63 (m, 1H), 2.32-2.25 (m, 1H), 1.88-1.10 (m, 14H).

(iii) EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CCl_{3}

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}CCl_{3} (400 mg; 0,52 milimoles; procedente del paso (ii) anterior) y bromoacetato de etilo (95 mg; 0,57 milimoles). Rendimiento 8 mg (23%).

^{1}H-NMR (500 MHz; CDCl_{3}) \delta 8,47 (bt, 1H), 7,83 (d, 2H), 7,48 (bs, 1H), 7,31 (d, 2H), 4,92 (dd, 1H), 4,85 (s, 2H), 4,58-4,39 (parte AB de espectro ABX, 2H), 4,16-4,06 (m, 4H), 3,24 (s, 2H), 4,87 (d, 1H), 2,65-2,59 (m, 1H), 2,56-2,48 (m, 1H), 2,10-0,95 (m, 16H).

Ejemplo de referencia 58

MeOOC-C(=CEt)CH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (i) MeOOC-C(=CH)C(OH)Et

Se añadió gota a gota aldehído propiónico (10,1 g, 0,174 moles) a una solución de acrilato de metilo (10 g; 0,116 moles) y 1,4-diazobiciclo[2,2,2]octano (1,3 g; 0,0116 moles). La mezcla de reacción se agitó a la temperatura ambiente durante 14 días. Se añadió acetato de etilo (150 ml). La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró para dar el compuesto deseado. Rendimiento 15,5 g (93%).

^{1}H-NMR: (400 MHz; CDCl_{3}) \delta 6,24 (s, 1H), 5,81 (s, 1H), 4,34 (t, 1H), 3,78 (s, 3H), 2,82 (bs, 1H), 1,69 (m, 2H), 0,95 (t, 3H).

(ii) MeOOC-C(=CEt)CH_{2}Br

Se añadió gota a gota HBr (6,5 ml, \sim48%) a MeOOC-C(=CH)C(OH)Et (3 g; 20,8 milimoles; procedente del paso (i) anterior) a 0ºC. Después de 5 minutos se añadió gota a gota H_{2}SO_{4} (conc.; 6 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a la temperatura ambiente. Se separaron dos fases y la fase superior se diluyó con éter. La fase etérea se lavó con agua y NaHCO_{3} acuoso, se secó (Na_{2}SO_{4} y carbón vegetal) y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía instantánea. Rendimiento 1,7 g (40%).

^{1}H-NMR: (400 MHz; CDCl_{3}) \delta 6,97 (t, 3H), 4,23 (s, 2H), 3,8 (s, 3H), 2,32 (m, 2H), 1,13 (t, 3H).

(iii)tBuOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (2,1 g; 3,6 milimoles) y bromoacetato de t-butilo (780 mg; 4,0 milimoles). Rendimiento 1,73 g (78%).

(iv) HOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Una solución de tBuOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (procedente del paso (iii) anterior) y TFA en cloruro de metileno se agitó a la temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se concentró y liofilizó a partir de agua y HCl (conc.; 10 eq.).

(v) MeOOC-C(=CEt)CH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

Una solución de HOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (263 mg; 0,41 milimoles; procedente del paso (iv) anterior), NaOH (1 M; 1,239 ml; 1,239 milimoles) y agua (4 ml) se liofilizó. Se añadió DMF (5 ml), seguido por adición gota a gota de Me-OOC-C(=CEt)CH_{2}Br (103 mg; 0,496 milimoles; procedente del paso (ii) anterior) a 0ºC. La mezcla de reacción se agitó durante 24 h a la temperatura ambiente, se diluyó con tolueno (5 ml), se lavó con agua, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía instantánea utilizando EtOAc:metanol (95:5) como eluyente. Rendimiento 95 mg (33%).

FAB-MS: (m+1) = 690 (m/z).

Ejemplo de referencia 59

MenOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe) (i) MenOOCCH_{2}Br

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 30 (i) anterior a partir de MenOH (10 milimoles) y cloruro de bromoacetilo (12 milimoles). Rendimiento 1,5 g (54%).

(ii) MenOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOPh(4-OMe)

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Ph(4-OMe) (521 mg; 1 milimol; véase Ejemplo 40 (ii) anterior) y MenOOCCH_{2}Br (416 mg; 1,5 milimoles; procedente del paso (i) anterior). Rendimiento 36 mg (5%).

FAB-MS: (m+1) = 718 (m/z).

Ejemplo de referencia 60

tBuOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOnPr

Se preparó el compuesto del título análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-nPr (575 mg; 0,837 milimoles; véase Ejemplo 5 (ii) anterior) y bromoacetato de t-butilo (196 mg; 1,01 milimoles). Rendimiento 110 mg (23%).

LC-MS: (m+1) = 572 (m/z).

Ejemplo de referencia 61

MenOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (0,7 g; 1,21 milimoles) y MenOOCCH_{2}Br (0,4 g; 1,45 milimoles; véase Ejemplo 59 (i) anterior). Rendimiento 0,33 g (38%).

FAB-MS: (m+1) = 702 (m/z).

Ejemplo de referencia 62

BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO_{2}) (i) Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO_{2})

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(i) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-H (1,03 g; 2,18 milimoles), NaOH 2M (24 ml) y cloroformiato de 4-NO_{2}-bencilo (518 mg; 2,4 milimoles). Rendimiento 1,32 g (93%).

FAB-MS: (m+1) = 651 (m/z).

(ii) H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO_{2})

El compuesto del subtítulo se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 4 (ii) a partir de Boc-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO_{2}) (1,32 mg; 2,03 milimoles; procedente del paso (i) anterior). Rendimiento 1,0 g (79%).

FAB-MS: (m+1) = 551 (m/z).

(iii) BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO_{2})

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO_{2}) (0,5 g; 0,80 milimoles; procedente del paso (ii) anterior) y bromoacetato de bencilo (220 mg; 0,90 milimoles). FAB-MS: (m+1) = 699 (m/z).

Ejemplo de referencia 63

EtOOCCH_{2}(R)Cgl-Aze-Pab-Bn(4-NO_{2})

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO_{2}) (211 mg; 0,38 milimoles; véase Ejemplo 62 (ii) anterior) y bromoacetato de etilo (47 \mul: 0,42 milimoles). Rendimiento 44 mg (18%).

^{1}H-NMR (300 MHz; CDCl_{3}) \delta 9,55 (bs, 1H), 8,50 (bt, 1H), 8,20 (d, 2H), 7,80 (d, 2H), 7,60 (d, 2H), 7,35 (d, 2H), 6,87 (bs, 1H), 4,95 (dd, 1H), 4,65-4,40 (parte AB de espectro ABX, 2H), 4,18-4,04 (m, 5H), 3,27-3,15 (espectro AB, 2H), 2,87 (d, 1H), 2,75-2,60 (m, 1H), 2,57-2,45 (m, 1H), 2,00-0,95 (m, 16H).

Ejemplo de referencia 64

PrlC(O)CH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (i) PrlC(O)CH_{2}OH

Una mezcla de 2,5-dioxo-1,4-dioxano (2,0 g; 17 milimoles) y pirrolidina (8 ml; 97 milimoles) se calentó a reflujo durante 1 hora. El exceso de pirrolidina se eliminó por evaporación. Rendimiento 4,4 g (99%).

FAB-MS: (m+1) = 130 (m/z).

(ii) PrlC(O)CH_{2}OOCCH_{2}Br

A una solución de PrlC(O)CH_{2}OH (0,4 g; 3,1 milimoles; procedente del paso (i) anterior) en DMF (15 ml) se añadió gota a gota bromuro de bromoacetilo (0,63 g; 3,1 milimoles) a 0ºC. La mezcla de reacción se agitó durante 1,5 h a 0ºC y 3 h a la temperatura ambiente. Se añadió una nueva cantidad de bromuro de bromoacetilo (0,63 g; 3,1 milimoles) y la mezcla de reacción se calentó a 80ºC, se agitó a la temperatura ambiente durante 12 h y se concentró. Rendimiento 320 mg (41%)

FAB-MS: (m+1) = 252 (m/z).

(iii) PrlC(O)CH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-Z

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-Z (580 mg; 1 milimol) y PrlC(O)CH_{2}OOCCH_{2}Br (300 mg; 1,2 milimoles; procedente del paso (ii) anterior). Rendimiento 400 mg (60%).

FAB-MS: (m+1) = 675 (m/z).

^{1}H-NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 9.66-9.42 (bs, 1H), 8.64-8.56 (m, 1H), 8.03-7.93 (d, 2H), 7.89-7.66 (bs, 1H), 7.45 (d, 2H), 7.45-7.25 (m, 5H), 5.20 (s, 2H), 4.98-4.92 (dd, 1H), 4.82-4.74 (m, 1H), 4.62, 4.58 (espectro AB, 2H), 4,26-4,05 (m, 3H), 3,47-3,16 (m, 6H), 2,95 (d, 1H), 2,78-2,68 (m, 1H), 2,54-2,42 (m, 1H), 2,03-1,95 (m, 16H).

Ejemplo de referencia 65

(2-Me)BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO_{2})

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO_{2}) (500 mg; 0,80 milimoles; véase Ejemplo 62 (ii) anterior) y bromoacetato de 2-(metil)bencilo (234 mg; 0,96 milimoles; véase Ejemplo 32 (i) anterior). Rendimiento 528 mg (92%).

^{1}H-NMR: (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,34 (bs, 1H), 8,38 (t, 1H), 8,09 (d, 2H), 7,72 (d, 2H), 7,48 (d, 2H), 7,37 (bs, 1H), 7,23 (d, 2H), 7,17-7,05 (m, 4H), 5,18 (s, 2H), 5,00 (s, 2H), 4,81 (dd, 1H), 4,45-4,34 (parte AB de espectro ABX, 2H), 4,04-3,97 (q, 1H), 3,93-3,86 (q, 1H), 3,27-3,17 (espectro AB, 2H), 2,79 (d, 1H), 2,54-2,35 (m, 2H), 2,22 (s, 3H), 1,91-1,84 (bd, 1H), 1,71-1,39 (m, 5H), 1,19-0,84 (m, 4H).

Ejemplo de referencia 66

MeOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOEt (305 mg; 0,69 milimoles; véase Ejemplo 4 (ii) y bromoacetato de metilo (126 mg; 0,83 milimoles). Rendimiento 188 mg (53%).

LC-MS: (m+1) = 516 (m/z).

Ejemplo de referencia 67

(nPr)_{2}NC(O)CH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO_{2}) (i) (nPr)_{2}NC(O)CH_{2}OOCCH_{2}Cl

Una mezcla de (nPr)_{2}NC(O)CH_{2}OH (244 mg; 1,53 milimoles; véase Ejemplo 12 (i) anterior) y cloruro de bromoacetilo (270 mg; 1,72 milimoles) se agitó a la temperatura ambiente durante 12 horas. La mezcla se vertió en NaHCO_{3} acuoso y se extrajo con cloruro de metileno. La fase orgánica se lavó con KHSO_{4} acuoso (0,2 M) y salmuera, se secó y se concentró.

FAB-MS: (m+1) = 237 (m/z).

^{1}H-NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 4.82 (s, 2H), 4.22 (s, 2H), 3.31-3.26 (t, 2H), 3.10-3.15 (t, 2H), 1.68-1.52 (m, 2H), 1.97-0.86 (m, 6H).

(ii) (nPr)_{2}NC(O)CH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COO-Bn(4-NO_{2})

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOBn(4-NO_{2}) (343 mg; 0,62 milimoles; véase Ejemplo 62 (ii) anterior) y (nPr)_{2}NC(O)CH_{2}OOCC
H_{2}Cl (160 mg; 0,68 milimoles; procedente del paso (i) anterior). Rendimiento 89 mg (19%).

FAB-MS: (m+1) = 750 (m/z).

Ejemplo de referencia 68

(2-Me)BnOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCtBu

El compuesto del título se preparó análogamente al procedimiento descrito en el Ejemplo 1(iii) a partir de H-(R)Cgl-Aze-Pab-COOCH_{2}OOCtBu (380 mg; 0,71 milimoles; véase Ejemplo 12 (v) anterior) y bromoacetato de 2-(metil)bencilo (215 mg; 0,88 milimoles; véase Ejemplo 32(i) anterior). Rendimiento 37 mg (7,5%).

FAB-MS: (m+1) = 692 (m/z).

Ejemplo 69

Los compuestos de los Ejemplo 1 a 68 se ensayaron todos ellos conforme al Ensayo A anterior y se encontró que todos exhibían un valor CI_{50}TT mayor que 1,0 \muM (es decir, eran inactivos frente a la trombina per se; compárese con el inhibidor activo HOOC-CH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-H que exhibe un valor CI_{50}TT de 0,01 \muM).

Ejemplo 70

Los compuestos de los Ejemplos 1 a 68 se ensayaron en uno, dos o la totalidad de los Ensayos B, C y/o D anteriores, y se encontró que todos ellos exhibían biodisponibilidad oral y/o parenteral en la rata como el inhibidor activo HOOC-CH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-H, sea como el ácido libre y/o como uno o más ésteres del mismo. Sobre la base de la suposición de que HOOC-CH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-H se forma en la rata, se calculó la biodisponibilidad de acuerdo con las fórmulas descritas en el Ensayo B y/o el Ensayo C según fuese apropiado.

Abreviaturas

Ac =: Acetilo

Aq =: acuoso

Aze =: Ácido S-azetidina-2-carboxílico

Boc =: t-butiloxicarbonilo

(Boc)_{2}O =: Dicarbonato de di-t-butilo

Bn =: Bencilo

Bu =: Butilo

Cgl =: Ciclohexilglicina

Ch =: Ciclohexilo

DCC =: Diciclohexil-carbodiimida

DMAP =: N,N-Dimetil-amino-piridina

EDC =: Hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida

Et =: Etilo

EtOH =: Etanol

EtOAc =: Acetato de etilo

H =: horas

HCl =: Ácido clorhídrico

H-Pab-H =: 1-Amidino-4-aminometil-benceno

H-Pab-Z =: 4-Aminometil-1-(N-benciloxicarbonil-amidino)-benceno

HPLC =: Cromatografía líquida de alta resolución

K_{2}CO_{3} =: Carbonato de potasio anhidro

Me =: Metilo

Men =: (1R,2S,5R)-mentilo

Pab-OH =: 4-Aminometil-benzamidoxima(4-aminometil-1-(amino-hidroxiiminometil)-benceno

Piv(aloílo) =: 2,2-Dimetilacetilo

Pr =: Propilo

Prl =: N-pirrolidinilo

RPLC =: Cromatografía líquida de alta resolución en fase inversa

TFA =: Ácido trifluoroacético

THF =: Tetrahidrofurano

Z =: Benciloxi-carbonilo

Los prefijos n, s, i y t tienen sus significados usuales: normal, iso, sec y terciario. Los prefijos s, d, t, q, y b en los espectros NMR significan singulete, doblete, triplete, cuartete, y ancho, respectivamente.

La estereoquímica para los aminoácidos es por defecto (S) si no se indica otra cosa.

Claims

1. Un compuesto de fórmula I,

IR^{1}O(O)C-CH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-R^{2}

en la cual

R^{1} representa -R^{3} o -A^{1}C(O)N(R^{4})R^{5} o -A^{1}C(O)OR^{4};

A^{1} representa alquileno C_{1-5};

R^{4} y R^{5} representan independientemente H, alquilo C_{1-6}, fenilo, 2-naftilo o, cuando R^{1} representa -A^{1}C(O)N(R^{4})R^{5}, junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos representan pirrolidinilo o piperidinilo; y

R^{6} representa alquilo C_{1-17}, fenilo o 2-naftilo (todos los cuales están sustituidos opcionalmente con alquilo C_{1-6} o halógeno);

o una de sus sales farmacéuticamente aceptables en donde Cgl representa ciclohexilglicina, Aze representa ácido S-azetidina-2-carboxílico y Pab representa 1-amidino-4-aminometilbenceno.

2. Un compuesto de fórmula I, como se define en la reivindicación 1, en la cual A^{1} representa alquileno C_{1-3} cuando R^{1} representa -A^{1}C(O)N(R^{4})R^{5}.

3. Un compuesto de fórmula I, como se define en la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la cual R^{4} representa H o alquilo C_{1-6} cuando R^{1} representa -A^{1}C(O)N(R^{4})R^{5}.

4. Un compuesto de fórmula I, como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la cual R^{5} representa alquilo C_{1-6} o cicloalquilo C_{4-6} cuando R^{1} representa -A^{1}C(O)N(R^{4})R^{5}.

5. Un compuesto de fórmula I, como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la cual R^{4} y R^{5} representan juntos pirrolidinilo cuando R^{1} representa -A^{1}C(O)N(R^{4})R^{5}.

6. Un compuesto de fórmula I, como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en la cual A^{1} representa alquileno C_{1-3}, y R^{4} representa H o alquilo C_{1-3} y R^{5} representa alquilo C_{2-6} o cicloalquilo C_{5-6}, o R^{4} y R^{5} representan juntos pirrolidinilo.

7. Un compuesto de fórmula I, como se define en la reivindicación 1, en la cual A^{1} representa alquileno C_{1-5} cuando R^{1} representa -A^{1}C(O)OR^{4}.

8. Un compuesto de fórmula I, como se define en la reivindicación 1 o la reivindicación 7, en la cual R^{4} representa alquilo C_{1-6} cuando R^{1} representa -A^{1}C(O)OR^{4}.

9. Un compuesto de fórmula I, como se define en la reivindicación 7 o la reivindicación 8, en la cual A^{1} representa alquileno C_{1-5} y R^{4} representa alquilo C_{1-4}.

10. Un compuesto de fórmula I, como se define en la reivindicación 1, en la cual R^{3} representa H o alquilo C_{1-10} (pudiendo dicho último grupo ser lineal o, cuando hay un número suficiente de átomos de carbono, ser ramificado y/o ser parcialmente cíclico o cíclico), o alquil C_{1-3}-fenilo (estando dicho último grupo opcionalmente sustituido y pudiendo ser lineal o, cuando existe un número suficiente de átomos de carbono, ser ramificado), cuando R^{1} representa R^{3}.

11. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 10, en el cual R^{1} representa H, alquilo C_{1-10} lineal, alquilo C_{3-10} ramificado, alquilo C_{4-10} parcialmente cíclico, cicloalquilo C_{4-10}, alquil C_{1-3}-fenilo lineal opcionalmente sustituido y alquil C_{3}-fenilo ramificado opcionalmente sustituido.

12. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 11, en el cual R^{1} representa alquilo C_{1-6} lineal, cicloalquilo C_{6-10}, o alquil C_{1-3}-fenilo lineal opcionalmente sustituido.

13. Un compuesto de fórmula I, como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la cual R^{2} representa OH.

14. Un compuesto de fórmula I, como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en la cual R^{6} representa fenilo o alquilo C_{1-17} opcionalmente sustituidos (pudiendo dicho último grupo ser lineal o, cuando existe un número suficiente de átomos de carbono, ser ramificado, cíclico o parcialmente cíclico, y/o ser saturado o insaturado) cuando R^{2} representa OC(O)R^{6}.

15. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 14 en el cual R^{6} representa fenilo, alquilo C_{1-4} lineal, alquilo C_{3-4} ramificado o cis-oleílo, opcionalmente sustituidos.

16. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 15 en el cual R^{6} representa alquilo C_{1-3} lineal o alquilo C_{3} ramificado.

17. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 o 14 a 16, en el cual, cuando R^{1} representa R^{3} y R^{3} representa alquil C_{1-3}-fenilo opcionalmente sustituido, el sustituyente opcional es alquilo C_{1-6}.

18. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 17, en el cual el sustituyente es metilo.

19. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es

: MeOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OOCPh;

: (nPr)_{2}NCOCH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;

: ChNHCOCH_{2}OOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OH;

: EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-PAB-OAc; o

: HOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-PAB-O-cis-oleílo.

20. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es EtOOCCH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-OAc.

21. Un compuesto de fórmula I, como se define en la reivindicación 1, con las salvedades adicionales de que R^{1} no representa -A^{1}C(O)OR^{4}; R^{4} y R^{5} no representan independientemente H; R^{6} no representa alquilo C_{1-17}, cuando R^{2} representa OC(O)R^{6}.

22. Un compuesto de fórmula I, como se define en la reivindicación 1, en la cual R^{1} representa -A^{1}C(O)OR^{4}; R^{4} y R^{5} representan independientemente H; R^{6} representa alquilo C_{1-17}, cuando R^{2} representa OC(O)R^{6}.

23. Una formulación farmacéutica que incluye un compuesto de fórmula I como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en mezcla con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

24. Un compuesto de fórmula I, como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso como producto farmacéutico.

25. Un compuesto de fórmula I como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso en el tratamiento de una condición en la que se requiere la inhibición de la trombina.

26. Un compuesto de fórmula I como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso en el tratamiento de la trombosis.

27. Un compuesto de fórmula I como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para uso como anticoagulante.

28. El uso de un compuesto de fórmula I como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, como ingrediente activo en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una condición en la que se requiere la inhibición de la trombina.

29. El uso de acuerdo con la reivindicación 28, en el cual la condición es trombosis.

30. El uso de un compuesto de fórmula I como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, como ingrediente activo en la fabricación de un anticoagulante.

31. El uso de acuerdo con la reivindicación 28, en el cual la condición es hipercoagulabilidad en la sangre y los tejidos.

32. El uso de un compuesto de fórmula I, como se define en la reivindicación 1, como profármaco.

33. Un proceso para la preparación de compuestos de fórmula I, que comprende:

(a) para los compuestos de fórmula I en la cual R^{2} representa OH, reacción de un compuesto correspondiente de fórmula I, en la cual R^{2} representa OC(O)R^{6} y R^{6} es como se define en la reivindicación 1 con una base alcóxido;

(b) para los compuestos de fórmula I en la cual R^{2} representa OH, reacción de un compuesto correspondiente a un compuesto de fórmula I en la cual R^{2} representa C(O)OR^{7} y R^{7} representa 2-naftilo, fenilo, alquil C_{1-3}-fenilo (estando sustituidos opcionalmente dichos tres últimos grupos con alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, nitro o halógeno), o alquilo C_{1-12} (estando dicho último grupo sustituido opcionalmente con alcoxi C_{1-6}, aciloxi C_{1-6} o halógeno), y R^{1} es como se define con respecto a un compuesto correspondiente de fórmula I, con hidroxilamina, o una de sus sales de adición de ácido;

(c) reacción de un compuesto correspondiente de fórmula II,

IIH(R)Cgl-Aze-Pab-R^{2}

en la cual R^{2} es como se define en la reivindicación 1 con un compuesto de fórmula III,

IIIR^{1}O(O)C-CH_{2}-L^{1}

en la cual L^{1} representa un grupo lábil y R^{1} es como se define en la reivindicación 1;

(d) para compuestos de fórmula I en la cual R^{1} representa H y R^{2} representa OH, reacción de un compuesto correspondiente de fórmula I en la cual R^{1} representa alquilo C_{1-10} o alquil C_{1-3}-fenilo y R^{2} representa OH, con una base;

(e) para los compuestos de fórmula I en la cual R^{2} representa OC(O)R^{6} y R^{6} es como se define en la reivindicación 1, reacción de un compuesto correspondiente de fórmula I en la cual R^{2} representa OH, con un compuesto de fórmula IV,

IVR^{6}C(O)-O-C(O)R^{6}

o un compuesto de fórmula V,

VR^{6}C(O)Hal

en la cual Hal representa Cl o Br y, en ambos casos, R^{6} es como se define en la reivindicación 1;

(f) para los compuestos de fórmula I en la cual R^{1} representa H y R^{2} representa OC(O)R^{6}, y R^{6} es como se define en la reivindicación 1, reacción de un compuesto correspondiente de fórmula VI,

VIP^{1}O(O)C-CH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-R^{2}

en la cual P^{1} representa un grupo protector éster lábil en medio ácido y R^{2} representa OC(O)R^{6}, en donde R^{6} es como se define en la reivindicación 1, con un ácido;

(g) para compuestos de fórmula I en la cual R^{1} representa R^{3}, R^{3} representa alquilo C_{1-10} o alquil C_{1-3}-fenilo, y R^{2} representa OH, trans-esterificación de un compuesto correspondiente de fórmula VII,

VIIR^{1a}O(O)C-CH_{2}-(R)Cgl-Aze-Pab-R^{2}

en la cual R^{1a} representa un grupo alquilo C_{1-10} o alquil-C_{1-3}-fenilo distinto del que va a formarse, o un sustituyente alquilo lábil alternativo y R^{2} representa OH.