PT93213B

PT93213B - Processo para a preparacao de derivados de n-fenilbenzamida com accao anti-ulcerosa e anti-alergica e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT93213B
Application number: PT93213A
Authority: PT
Inventors: Francesco Makovec; Luigi Rovati; Walter Peris
Original assignee: Rotta Research Lab
Priority date: 1989-02-22
Filing date: 1990-02-21
Publication date: 1996-01-31
Also published as: ES2055424T3; EP0460083B1; GR1002183B; ATE106863T1; WO1990009989A1; JP2716259B2; US5232937A; IE900645L; AU627285B2; GR900100136A; DE69009746T2; IT1232252B; AU5175690A; DE69009746D1; DD294477A5; CA2046874A1; IE64437B1; IT8967119A0; ZA901316B; EP0460083A1

Description

A presente invenção diz respeito a derivados originais de N-fenil-benzamida de fórmula geral

R, *1· /

na qual

R-^ representa um átomo de nitro, hidroxi, alquil -ilo , halogéneo ou um grupo ciano, Ci_4> metoxi ou tetrazol-5R₂ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi ou metoxi,

-2/

CZ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo tetrazol-5-ilo, e R^ representam, cada um, um átomo de hidrogénio quando R^ representa um grupo tetrazolilo ou R^ e R^ representam, cada um, independentemente, um grupo carboxiio, metoxicarboniio, etoxicarbonilo ou carbamoílo quando R^ representa um átomo de hidrogénio, e

Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo, e aos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

Estes compostos exibem importantes propriedades farmacológicas quando administrados em mamíferos. Uma destas propriedades consiste numa acção reguladora muito intensa da secreção gástrica, espeeialmente numa acção contra a secreção ácida quando esta é estimulada por diversos agentes tais como a histamina, o carba col e a pentagastrina. Outra propriedade consiste numa acção curativa e protectora relativamente à membrana mucosa gastro-entérica. Ainda uma outra propriedade consiste na capacidade de inibir a libertação de mediadores químicos responsáveis pelas reacçoes alérgicas ou imunológicas.

Estes compostos podem, assim, utilizar-se vantajosamente no tratamento de diversas perturbações que afligem o homem tal como perturbações do sistema digestivo como por exemplo as que resultam de lesões ou perturbações gastro-secretórias, isto é

-3{ ” úlceras pépticas, gastro-duodenites ou colites; ou podem utilizar-se no tratamento de diversas situações patológicas atribuíveis à hipersensibilidade a alergenos tais como, por exemplo, asma bronquica, rinite ou conjuntivite alérgica ou outras situações patológicas que afectam outros orgãos ou áreas.

método para a preparação dos derivados de N-fenilbenzamida de acordo com a presente invenção caracteriza-se por diversas fases que se podem representar do seguinte modo :

a) para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual e R^ representam, cada um, independentemente, um grupo carboxilo, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo ou carbamoíio e R^ representa um átomo de hidrogénio, de se fazer reagir um composto de fórmula geral

1-R,-3-R_c-5-aminofenilo 4 5 na qual

R^ e R^ têm os significados definidos antes, numa proporção equimolar, com o cloreto de um derivado apropriado de ácido benzóico Rp R₂ substituído em que R^ e R₂ têm os significados definidos antes, a uma temperatura compreendida entre aproximadamente -5°C e aproximadamente +20°C, de preferência a uma temperatura próxima de +5°C, na presença de um hidróxido de um metal alcalino ou alcalino-terroso, de um carbonato ou de um carbonato hidrogenato (servindo ambos para salificar as funções carboxilo do ácido 5-amino-isoftálico sob a forma de um

-4/ receptor do ácido clorídrico) ou na presença de uma base orgânica terciária. 0 cloreto de ácido pode adicionar-se tal e qual ou dissolvido num dissolvente miscível com água como por exemplo o dioxano, a acetona ou o tetra-hidrofurano.

tempo reaccional pode variar entre cerca de 30 minutos e 24 horas e considerando-se, na generalidade, a reacçao concluída decorridas 12 horas altura em que se acidifica a mistura reacional· e se separam produtos pretendidos por filtração e se purificam por cristalização,

b) para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual e R^ representam, cada um, um átomo de hidrogénio, R^ re presenta um grupo tetrazol-5-ilo, R^ tem os significados definidos antes excepto um grupo tetrazol-5-ilo, R^ tem os significados definidos antes excepto um grupo tetrazol-5-ilo e R₂ tem os significados definidos antes, de se fazer reagir o 5-(p-amino-fe nil)-tetrazol com uma quantidade estequeométrica do cloreto de um de rivado de ãcido benzoico apropriadamente substituído dissolvido num dissolvente miscível com água, de preferência em tetra-hidr£ furano, a uma temperatura compreendida entre cerca de -5°C e cer ca de 20°C, de preferência a uma temperatura próxima de +5°C na presença de uma base orgânica terciária. 0 tempo reacional pode variar entre aproximadamente 30 minutos e 24 horas, considerando -se, na generalidade, a reacção concluída decorridas 24 horas. Evapora-se depois o dissolvente no vazio, trata-se o resíduo com água e acidifica-se com ácido clorídrico diluído. Separam-se os produtos pretendidos por filtração, lavam-se até à neutralidade

-5e purificam-se por cristalização,

c) para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual e representam, cada um, independentemente, um grupo carboxilo, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo ou carbamoílo, representa um átomo de hidrogénio, R₂ tem os significados defini dos antes e R^ representa um grupo tetrazol-5-ilo, de se converter o composto correspondente preparado em a) em que R^ represen ta um grupo ciano por reacção a quente com azida sódica e cloreto de amónio no seio de um dissolvente em franca ebulição, de preferência no seio de dimetilformamida a uma temperatura compre endida entre cerca de 60° e 140°C, de preferência ã temperatura de 100°C. O tempo reacional varia entre cerca de 8 e 36 horas mas, em média, 24 horas são suficientes para concluir a reacção. Concluída a reacção dilui-se a mistura reacional com água e acidifica-se. Filtra-se o precipitado, lava-se até à neutralidade e cristaliza-se eventualmente.

d) para a preparaçao de compostos de fórmula geral I na qual e representam, cada um, um grupo tetrazol-5-ilo, e R5 representam, cada um, um átomo de hidrogénio e R₂ tem os significados definidos antes, de se fazer reagir 4-ciano-anilina numa proporção estequeométrica com o cloreto de um derivado de ácido 4-cianobenzóico apropriadamente substituído e dissolvido no tetra-hidrofurano, na presença de uma base terciária tal como, por exemplo, a triatilamina que actua como aceitante do

-6Ζ

ácido clorídrico, a uma temperatura compreendida entre cerca de 0° e 20°C, de preferência a uma temperatura próxima de 10°C durante um período que pode variar entre cerca de uma hora e 24 horas, considerando-se a reacção, na generalidade concluída decorridas 12 horas. Evapora-se o dissolvente no vazio, trata-se o resíduo com ãgua, filtra-se lava-se até ã neutralidade e seca-se.

Converte-se depois o composto resultante no derivado ditetrazolílico mediante reacção com azida sódica e cloreto de amónio utilizando um método similar ao descrito antes.

Os exemplos seguintes apresentam-se para melhor exemplificação a presente invenção.

Exemplo 1

N-(3,5-dicarboxi)-fenil-4-cianobenzamida (composto 1).

-Ί.S •4

A uma solução conservada ã temperatura de 5°C contendo 60g (0,33 mole) de ãcido 5-amino-isoftálico em 660 ml de hidróxido de sódio IN adicionam-se simultaneamente mais 330 ml' de hidróxido de sódio IN e 54,6 g (0,33 mole) de cloreto de 4-cianobenzoílo em 150 ml de acetona. Deixou-se a mistura reacional reagir du rante 12 horas depois do que se acidificou com ácido clorídrico diluído e se observou a formaçao do precipitado que se lavou com água. A purificação realizou-se mediante uma cristalização numa mistura de dimetilformamida e água obtendo-se 76 g (rendimento 74%).

P.F: 324°C (os pontos de fusão determinaram-se por análise térmica diferencial).

Exemplo 2

N-(3,5-dicarboxil)-fenil-4-nitrobenzamida (composto 2).

Preparou-se este composto de acordo com a técnica descrita no Exemplo 1 utilizando cloreto de 4-clorobenzoílo em vez de cio reto de 4-cianobenzoílo.

Rendimento 79%. P.F: 325°C.

Exemplo 3

N-(3,5-dicarboxi)-fenil-4-clorobenzamida (composto 4).

Preparou-se este composto de acordo com a técnica descrita no Exemplo 1 utilizando o cloreto de 4-clorobenzoílo em vez de

cloreto 4-cianobenzoílo.

Rendimento 75%. P.F: 347°C.

Exemplo 4

N-(3,5-dicarboxi)-fenil-4-metilbenzamida (composto 4).

Preparou-se este composto de acordo com a técnica descrita no Exemplo 1 utilizando cloreto de 4-metilbenzoílo em vez de cio reto de 4-cianobenzoílo.

Rendimento 83%. P.F: 340°C.

Exemplo 5

N-(3,5-dicarboxi)-fenil-4-metoxibenzamida (composto 5).

Preparou-se este composto mediante uma técnica similar ã descrita no Exemplo 1 utilizando cloreto de 4-metoxibenzoílo em vez de cloreto de 4-cianobenzoílo.

Rendimento 72%. P.F: 329°C.

Exemplo 6

N-(3,5-dicarboxi)-fenil-3-hidroxi-4-nitrobenzamida (composto 6).

Preparou-se este composto mediante uma técnica similar ã descrita no Exemplo 1 utilizando o cloreto de 3-hidroxi-4-nitrobenzoílo em vez do cloreto de 4-cianobenzoílo.

Rendimento 79%. P.F: 320°C.

-9Exemplo 7

N-(3,5-dicarboxi)-fenil-3,4-di-hidroxibenzamida (composto 7).

Preparou-se este composto mediante uma técnica similar ã descrita no Exemplo 1 utilizando o cloreto de 3,4-diacetoxibenzoílo em vez do cloreto de 4-cianobenzoílo. Dissolveu-se o derivado diacetílico bruto resultante em tetra-hidrofurano adicionando 2 mmoles de hidróxido de sódio 2N, deixou-se reagir durante 12 horas à temperatura de 20°C, acidificou-se com ácido clorídri co diluído, filtrou-se, lavou-se até ã neutralidade e cristalizou-se numa mistura de dimetilformamida-água.

Rendimento 73%. P.F: 322°C.

Exemplo 8

N-(3,5-dicarboxi)-fenil-3,4-dimetoxibenzamida (composto 8).

Preparou-se este composto pela técnica descrita no Exemplo 1 utilizando cloreto de 3,4-dimetoxibenzoílo em vez de cloreto de 4-cianobenzoílo.

Rendimento 78%. P.F: 333°C.

Exemplo 9

N-(3,5-dicarboxi)-fenil-3-metoxi-4-nitrobenzamida (composto 9).

Preparou-se este composto pela técnica descrita no Exemplo

-1.0/ / *· utilizando o cloreto de 3-metoxi-4-nitrobenzoílo em vez do cio reto de 4-cianobenzoílo.

Rendimento 80%. P.F: 332°C.

Exemplo 10

N-4-(5-tetrazolil)-fenil-4-cianobenzamida (composto 10).

Preparou-se este composto pela técnica descrita no Exemplo 1 utilizando o 5-(p-aminofenil)-tetrazol (preparado pela técnica descrita por Van Straaten et al. - Rec. des Trav. Chim. Playbas-77 (1958), 1129-1134) em vez do ácido 5-amino-isoftálico. Rendimento 70%. P.F: 284°C.

Exemplo 11

N-(3,5-dicarboxi)-fenil-4-(5-tetrazolil)-benzamida (composto 11).

A uma suspensão de 26 g (0,0838 mole) de N-(3,5-dicarboxi)-fenil-4-cianobenzamida (composto 1) em 300 ml de dimetilformamida adicionaram-se 9,7 g (0,18 mole) de cloreto de amónio e 10,9 g (0,17 mole) de azida sódica. Esta mistura reagiu à temperatura de 100°C e sob agitação durante 24 horas. Diluiu-se a mistura com água, acidificou-se com ácido clorídrico diluído e filtrou-se a preparação formada e lavou-se com ãgua. Purificou-se por cristalização numa mistura de dimetilformamida e água.

Quantidade obtida 24,3 g (rendimento 82%). P.F: 303°C.

-11Exemplo 12

N-(4-cianofenil)-4-cianobenzimada.

A uma solução de 14,2 g (0,12 mole) de 4-aminobenzonitrilo em 100 ml de tetra-hidrofurano adicionaram-se 13,1 g (0,13 mole) de trietilamina, conservou-se a temperatura num valor próximo de 5°C e adicionaram-se, gota a gota, 20 g (0,12 mole) de cloreto de 4-cianobenzoílo. A mistura reagiu durante 12 horas sob agitação. Evaporou-se o dissolvente, tratou-se o resíduo com água e filtrou-se o precipitado formado. Lavou-se o precipitado com áci do clorídrico diluído, uma solução a 107 de carbonato hidrogenado e novamente com água. Obtiveram-se 27 g do produto (rendimento 917) . P.F: 265°C.

Exemplo 13

N-4-(5-tetrazolil)-fenil-4-(5-tetrazolil)-benzamida (composto 12).

A uma suspensão de 20 g (0,08 mole) de N-(4-ciano)-fenil-4-ciano-benzamida (Exemplo 12) em 300 ml de dimetilformamida adicionaram-se 21 g (0,32 mole) de azida sódica e 18,7 g (0,35 mole) de cloreto de amónio. Continua-se a reacção utilizando o método descrito no Exemplo 11. Obtiveram-se 19,2 g do produto (rendimento 727). P.F: 301°C.

-12ί

Exemplo 14

Ν-(3-carboxi-5-carbamoil)-fenil-4-cianobenzamida (composto 13).

A uma solução conservada ã temperatura de 5°C de 39,4 g (0,2 mole) de sal de amónio do ácido 5-amino-3-carmaboil benzoico em 200 ml de água adicionaram-se 33,1 g (0,2 mole) de cloreto de 4-cianobenzoílo dissolvidos em 100 ml de acetona e 18,5 g (0,22 mole) de carbonato de hidrogénio e sódio dissolvidos em 100 ml de água. A mistura reagiu sob agitação durante 12 horas, depois do que se acidificou com ácido clorídrico diluído e se se parou o precipitado por filtração e se lavou com água. A purificação realizou-se por cristalização numa mistura de dimetilforma mida e água. Obtiveram-se 43,9 g (rendimento 71%). P.F: 341°C.

ãcido 5-amino-3-carbamoil-benzoico preparou-se por redução do ácido 3-carbometoxi-5-nitrobenzóico dissolvido em etanol sob uma pressão de 4 atmosferas de hidrogénio, na presença de óxido de platina como catalisador, para se obter o ácido 3-carba metoxi-5-aminobenzóico (P.F: 236°C sob a forma de cloridrato) que se converteu no derivado 3-carbamoílico correspondente mediante tratamento com uma solução concentrada de amoníaco em exces so à temperatura de 5°C. Isolou-se este composto sob a forma de um sal de amónio (P.F: 130°C) por precipitação da massa reacional com acetona.

Exemplo 15

N-(3-carboxi-5-carbamoil)-fenil-4-(5-tetrazoil)-benzamida (composto 14).

Preparou-se este composto de acordo com a técnica descrita no Exemplo 11 utilizando o composto 13 em vez do composto 1. Rendimento 77%. P.F: 314°C.

A acção anti-secretória dos produtos de acordo com a presente invenção e a sua acção protectora relativamente ãs membranas das mucosas determinaram-se realizando-se diversas experiências como as que se descrevem seguidamente.

A acção anti-secretória determinou-se em ratos pesando aproximadamente 200 g e anestesiados com uretano.

Estimulou-se a secreção gástrica com pentagastrina, histamina ou cabacol. Utilizou-se o método de K.S. Lai Gut 5, (1964), 327-341” ligeiramente modificado.

Após uma traqueiotomia inseriram-se cânulas no esófago e no duodeno. Perfundiram-se estas cânulas com uma solução tépida (37°C) que passou através do estômago a uma velocidade constante de 1 ml/minuto mediante a utilização de uma bomba peristáltica. Após estabilização durante 20 minutos perfundiu-se o estimulante, dissolvido numa solução de soro fisiológico, durante 120 minutos na dose indicada no Quadro 1 num volume de 0,95 me/hora. Decorri

-14/ ( _^ζ —ζ dos 60 minutos de perfusão (estimulação base) administrou-se o produto em ensaio endovenosamente (I.V.) sob a forma de bolus tendo a perfusão do estimulante continuado durante mais 60 minutos. Registou-se a função ácida continuamente em função do tempo.

Avaliou-se a actividade do produto sob a forma de uma redu ção da percentagem no ãcido segregado após a administração do produto contra a acidez inicial medida nos primeiros 60 minutos de recolha a qual· se efectuou apenas na presença do estimulante.

Os compostos antagonistas ansaiados administraram-se em di ferentes doses de modo a permitir o cálculo dos valores de ϋΕ^θ isto é a dose, em mg/Kg administrada endovenosamente, que pode reduzir em 50Σ o efeito dos diversos estimulantes da secreção.

Os resultados obtidos podem observar-se no Quadro seguinte que apresenta as actividades dos compostos expressas sob a forma de ΟΕ^θ nas três situações diferentes estudadas, isto é, sob o estímulo de pentagastrina, histamina e carbacol nas doses indica das no mesmo Quadro.

-15Acção antagonista (DE^q mg/Kg I.V.) relativa ã secreção induzida por diversos agentes nos ratos

DE₅₀ mg/Kg

Pentagastrina (30 mcg/Kg/h)	Histamina (2,3 mg/Kg/h)	Carbacol (30 mcg/Kg/h)
50	47	33
91	109	68
115	108	104
189	IN (> 250)	216
223	240	IN (> 250)
210	205	186
97	102	90
208	222	188
88	100	88
42	45	39
33	41	50
26	32	30
68	73	65
51	48	48

7A actividade anti-secretória mostra-se particularmente importante nos compostos em que representa um substituinte capaz de atribuir fortemente electroes como, por exemplo, um grupo nitro, ciano ou tetrazol-5-ilo. Esta actividade é mesmo mais importante quando se tem em consideração a baixa toxicidade dos próprios compostos. Por exemplo, o composto 1 apresenta uma DL^g por administraçao endovenosa em murganhos de 2,400 mg/Kg. A dose tóxica neste caso é assim cerca de 50 vezes superior do que a do se capaz de inibir a secreção ácida, calculada com base na ϋΕ^θ da pentagastrina.

Alguns dos compostos de acordo com a presente invenção que apresentam acções anti-secretórias particularmente baixas no tex to Lai descrito antes, examinaram-se relativamente à sua acção gastro-protectora ou citoprotectora em diferentes modelos experimentais de úlceras.

a) Olcera provocada por álcool e cloreto de sódio

A ratos machos pesando aproximadamente 150 g que se mantiveram em jejum durante 24 horas administraram-se doses orais de 1,5 ml por animal de etanol ou alternativamente 1,5 ml de uma solução hipertónica a 25% de cloreto de sódio. Os compostos em ensaio administraram-se endovenosamente 15 minutos antes do composto irritante. Uma hora depois da administração do álcool ou do cloreto de sódio sacrificaram-se os animais, retiraram-se os estômagos, abriram-se e praticou-se uma incisão ao longo da curvatura principal, depois do que se examinaram microscopicamente

-17(aumento 10 x) as lesões necróticas que se contaram e classifica ram de acordo com o método citado antes que constitui uma modifi_ cação do descrito em Med. Exp. 4, 284-292 (1961). Este método consiste na designação de pontos arbitrários de acordo com o número e gravidade das lesões seguindo o critério seguinte :

1- quando a extensão da área necrótica

2- quando a extensão da área necrótica entre 2 e 4 mm;

3- quando a extensão da área necrótica

5- quando a extensão da ãrea necrótica úlcera perfurada.

é de 2 mm;

está compreendida é de 4 mm;

é de 4 mm com uma

Um index das lesões obtém-se depois adicionando o número de lesões multiplicado pelos pontos respectivos.

Os compostos administraram-se endovenosamente em diversas doses de modo a permitir o cálculo de valores de protectores isto é, da dose em mg/Kg administrada endovenosamente que é capaz de reduzir em 50Z os danos induzidos pelo agente lesivo do músculo gástrico.

b) Úlcera de Stress

Ratos machos pesando aproximadamente 150 g e que se tinham

ί conservado em jejum durante 24 horas foram enjaulados em gaiolas cilíndricas individuais e mergulhados na posição vertical até que o processo xifoide em água fria se conserve termostaticamente a 19°C. Os compostos administraram-se por via intramuscular 15 minutos antes do inicio do ensaio.

Cinco horas depois do início do encarceramento sacrificaram-se os animais, retiraram-se os estômagos e realizou-se uma avaliação quantitativa de acordo com a técnica citada antes.

Neste caso administraram-se os compostos novamente em diferentes doses de modo a permitir o cálculo dos valores de DE^q protectores isto é a dose em mg/Kg quando administrada por via intramuscular, capaz de reduzir em 50% os danos causados pelo stress do encarceramento.

Os resultados obtidos podem observar-se no Quadro 2 em que a acção protectora dos compostos está expressa em valores de DE^q em mg/Kg relativamente ãs diferentes condições experimentais investigadas.

-19QUADRO 2: ACÇÃO CITOPROTECTORA EM ÚLCERAS EXPERIMENTÁIS EM

RATOS

ÚLCERA PROVOCADA POR ETANOL ΟΕ^θ mg/Kg I.V.

ÚLCERA PROVOCADA PELA SOLUÇÃO A 25% DE CLORETO DE SÓDIO DE₅₀mg/Kg I.V.

ÚLCERA PROVOCA DA PELO STRESS ^de50 ™g/^Kg

I.M.

COMPOSTO 1	45	42	135
COMPOSTO 11	7	29	65
COMPOSTO 12	3	12	56
CIMETIDINA	INACTIVO (> 50)	INACTIVO (> 50)	INACTIVO (> 75)
PIRENZEPINA	INACTIVO (> 50)	INACTIVO (>50)	INACTIVO (> 75)

Os dados apresentados no Quadro 2 mostram que a acção protectora dos compostos reivindicados é muito elevada mesmo quando se utilizaram condições experimentais muito graves. Os dois compostos utilizados como termo de comparação, a cimetidina que é um antagonista H₂ e a pirenzepina que é um anticolinérgico mostraram-se ambas inactivos nas condições experimentais utilizadas.

Os compostos reivindicados na presente invenção como também se afirmou exibem uma importante acção antagonista na libertação de mediadores responsáveis pelas reacções alérgicas.

Por exemplo estes compostos mostram antagonismos relativamente ao desenvolvimento de uma reacção anafiláctica cutânea indu zida passivamente num rato sensibilizado.

método consiste numa modificação do método de Goose e Blair (Immunology 16 (1969), 749-760). Trataram-se pelas vias in traperitoneal e intramuscular ratos machos pesando aproximadamen te 400 g com 10 mg/Kg de albumina de ovo grau V dissolvidos em 1 ml de uma solução fisiológica com 1 mg de solução adjuvante completa de Freund. Treze dias após a sensibilização sacrificaram-se os animais sob anestesia externa, sangraram-se e conservou-se o soro a -70°C após dosear o título de imunoglobulinas E específicas relativamente ã albumina do ovo. Com base no tipo determinado injectaram-se em -24 horas por via intradérmica nos dorsos barbeados de ratos machos pesando 200 g duas injecções in tradérmicas de 0,1 ml do anti-soro titulado e diluído apropriada mente.

No tempo zero injectaram-se por via endovenosa 5 mg/Kg de uma solução fisiológica contendo 25 mg/Kg de antigéneo e 3 mg/Kg de azul de Evans.

Os produtos em ensaio administraram-se por via endovenosa 20 minutos antes do antigéneo. Sacrificaram-se os animais 30

-21minutos depois do estímulo, virando do avesso as peles dos dorsos e avaliaram-se os diâmetros de maiores e menores dimensões de cada uma das manchas. Na prática a resposta de cada animal foi avaliada como uma média de 4 diâmetros. Os compostos admini^ traram-se em doses diferentes (na generalidade 5 animais por dose e por grupo) de modo a permitir o cálculo da dose eficaz 50 (de₅₀), isto é, a dose capaz de reduzir em 50£ a reacçao anafiláctica cutânea passiva (PCA) nos animais tratados quando se toma como termo de comparação os grupos de controlo.

Os resultados obtidos podem observar-se no Quadro 3.

-2 2QUADRO 3: ACÇÃO SOBRE A ANAFILAXIA CUTÂNEA PASSIVA (PCA) EM RATOS

COMPOSTO	DOSE (mg(Kg I.V.)	inibição (Z)	^DE50
COMPOSTO 1	50	20,0	127,9
	100	37,2
	150	58,2
COMPOSTO 11	50	53,3	42,6
	100	66
	150	74,7
COMPOSTO 12	10	39,0	30,9
	30	45,3
	100	67,6
cromoglicaito	50	16,0	153,3
dissódico	100	22,1
(DSCG)	150	57,5

A partir dos resultados obtidos pode observar-se que a maio ria dos compostos activos de acordo com a presente invenção apresenta acção antialérgica no ensaio de anafilaxia cutânea passiva aproximadamente 4 vezes maior do que a acção exercida pelo cromo glicato dissódico que é considerado como o composto de referên-23/

Os resultados obtidos no ensaio de anafilaxia cutânea passiva foram confirmados por em ensaio anafiláctico realizado in vitro sobre fragmentos de pulmão de cobaia activamente sensibilizados .

método consiste numa modificação do método de W.E. Brokiehurst em J. Phisiol. 151 (1960), 416-435. Sensibilizaram-se cobaias machos pesando aproximadamente 250 g com 100 mg/ml de albumina de ovo do grau V dissolvidos em 1 ml de solução fisioló gica e administraram-se (1 ml/Kg) por via intraperitoneal e por via subcutânea. Decorridas três semanas sacrificaram-se os animais anestesiados com éter sangrando-os. Os pulmões foram retira dos e imersos em solução de Tyrode à temperatura de 4°C. Cortaram-se fragmentos homogéneos de aproximadamente 2 mm de comprimento que se colocaram em placas de ensaio contendo aproximadamente 400 mg de tecido e 0,8 mg de solução de Tyrode. Pré-incuba ram-se as amostras ã temperatura de 37°C durante 15 minutos com os compostos em ensaio, dissolvidos em 0,1 mg de solução de Tyro de e incubaram-se durante mais 20 minutos ã temperatura de 37°C. Imterrompeu-se a reacção mediante arrefecimento com gelo.

A hístamina libertada pela reacçao anafiláctica foi extraí, da pelo método de Shire et al. J. Pharmacol Exp. Ther. 127 (1959), 182. Tratou-se 0,8 ml do líquido sobrenadante com ãcido perclórico e centrifugou-se para eliminar as proteínas. Alcalini_ zou-se depois o líquido sobrenadante com hidróxido de sódio 5N, extraiu-se a histamina com n-butanol e, após diluição apropriada com n-héptano, extraiu-se novamente com ácido clorídrico diluído

-24?

Adicionou-se 0-ftaldeí.do ãs amostras e determinou-se a flu orescência das mesmas com um fluorímetro a 450 njiò após activação através 360 m^, .

A concentração de histamina nas amostras obteve-se a partir de um gráfico linear padrão na ordem dos 500-800 ng/ml de histamina.

Analisaram-se os compostos em concentrações diversas de mo do a calcular a concentração eficaz 50% (ΟΕ^θ) isto é a concentração capaz de reduzir em 50% a libertação de histamina induzida pela adição de albumina de ovo a amostras de pulmão de cobaia previamente sensibilizada utilizando como termo de comparação o grupo de controlo.

Os resultados obtidos podem observar-se no Quadro 4.

-25QUADRO 4: ACÇAO SOBRE A ANAFILAXIA IN VITRO COM FRAGMENTOS

DE PULMÃO DE COBAIA ACTIVAMENTE SENSIBILIZADO

COMPOSTOS	Concentração (mcg/ml)	inibição (%)	^CE50 (mcg/ml)
COMPOSTO 11	10	11,8	216
	30	27,2
	100	42,4
	300	53,3
COMPOSTO 12	10	22,8	93
	30	28,4
	100	56,2
	300	65,4
Cromoglicato	10	6,8	1455
dissódico	30	19,7
(DSCG)	100	17,8
	300	41,2

A partir dos resultados apresentados no Quadro 4 pode observar-se que alguns dos compostos de acordo com a presente in venção, isto é os compostos 11 e 12, foram 10 a 15 vezes mais activos neste modelo de anafilaxia in vitro do que o composto de referência, o cromoglicato dissódico, cuja actividade parece pou co depender da dose e cujo efeito em todas as doses ensaiadas nunca excedeu um efeito inibitório de 50% sobre a libertação de histamina.

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Os dados experimentais citados antes mostram que os compo_s tos de acordo com a presente invenção se podem considerar como uma inovação terapêutica considerável para o tratamento de algumas situações patológicas do tracto gastroduodenal tal como, por exemplo, úlcera gástrica e duodenal, colite ulcerosa, etc.. Na realidade estes compostos associam uma baixa toxicidade a uma acçao antagonista considerável face à secreção ácida gástrica induzida por diversos antagonistas tais como a pentagastrina, a histamina e o carbacol e igualmente um efeito citoprotector intenso. A acção terapêutica parece manifestar-se através de um me canismo protector dual mediante inibição da formação de ácido gástrico em excesso sob o estímulo de diferentes agentes e mediante protecção da membrana da mucosa que directamente como no caso de agentes agressivos tais como o etanol ou uma solução hipertónica de cloreto de sódio ou mediante um mecanismo de defesa indirecta como no caso da úlcera que resulta de uma situação de repressão e que é considerada como uma úlcera característica de origem psicogénica.

Além do mais se considerarmos a acção citoprotectora e a acção antialérgica manifestada nos ensaios anafilácticos experimentais in vitro e in vivo podemos prever uma utilização auspiciosa dos compostos de acordo com a presente invenção no tratamento de situações patológicas que têm origem num componente alérgico como, por exemplo, a asma bronquica ou rinite ou conjuntivi. te alérgica. Situações patológicas em que os compostos de acordo com a presente invenção podem actuar por um mecanismo similar ao mecanismo citoprotector mediante a estabilização das membranas

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celulares, estabilização que impede a libertação de mediadores químicos os quais, a nível muscular terminam num processo inflamatório e a nível pulmonar numa reacção broncospástica.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1.- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral

R^ representa um átomo de halogéneo ou um grupo ciano, nitro, hidroxi, alquilo , metoxi ou tetrazol-5-ilo,

1*2 representa um átomo de hidrogéneo ou um grupo hidroxi ou metoxi;

R^ representa um átomo de hidrogéneo ou um grupo tetrazol-5-ilo, e Rj representam, cada um, um átomo de hidrogéneo quando Rg representa um grupo tetrazolilo ou R^ e Rj representam, cada um, independentemente, um grupo carboxilo, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo ou carbamollo quando Rg representa um átomo de hidrogénio, e

Κθ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo, e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto:

(a) para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual

R^ e R^ representam, cada um, independentemente, um grupo carboxilo, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo ou carbamoílo e Rg represen ta um átomo de hidrogénio, de se fazer reagir um composto de fórmula geral

1-R.-3-R_r-5-aminofenilo 4 5 na qual

R^ e Rj têm os significados definidos antes, numa proporção equimolar, com o cloreto de um derivado apropriado de ãcido benzóico R^, Rg-substituído em que Rg e Rg têm os significados definidos antes excepto um grupo tetrazol-5-ilo, a uma temperatura compreendida entre -5° e +20°C na presença de uma base inorgânica ou de uma base orgânica terciária, de se isolar os compostos resultantes da massa reaccional e de se purificar esses mesmos compostos por cristalização;

(b) para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R^ e Rj representam , cada um, um átomo de hidrogénio, Rg representa um grupo tetrazol-5-ilo e R^ e ^os significados definidos antes excepto um grupo tetrazol-5-ilo, de se fazer reagir o 5-(p-aminofenil)-tetrazol numa proporção equimolar com o cloreto de um derivado de ãcido benzóico apropriadamente substituído, a uma temperatura compreendida entre -5°C e +20°C na presença de uma base orgânica terciária, de se evaporar o dissolvente reaccional, de se isolarem da massa reaccional os compostos de fórmula geral I resultantes mediante acidificação e de se purificarem esses compostos por cristalização;

(c) para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R^ e R$ representam, cada um, independentemente, um grupo carboxilo, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo ou carbamoílo, R^ representa um ãtomo de hidrogénio, R₂ tem os significados definidos antes e representa um grupo tetrazol-5-ilo, de se fazer reagir o composto correspondente preparado em (a) em que R^ representa um grupo ciano com azida sódica e cloreto de amónio numa proporção molar de 1 para 5 e a uma temperatura compreendida entre 60°C e o ponto de ebulição do dissolvente, de se isolarem os compostos de fórmula geral I resultantes da massa reaccional mediante acidificação e de se purificarem os mesmos compostos por cristalização;

(d) para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R^ e R₃ representam, cada um, um grupo tetrazol-5-ilo, R^ e R^ representam, cada um, um átomo de hidrogénio e R₂ tem os significados definidos antes, de se fazer reagir 4-ciano-anilina numa proporção estequiométrica com o cloreto de um derivado de ãcido 4-cianoben-31zõico apropriadamente substituído, a uma temperatura compreendida entre 0° e 20°C na presença de uma base terciária, de se isolarem os compostos resultantes da massa reaccional e de se converterem esses compostos nos correspondentes derivados de ditetrazolilo de fórmula geral I mediante reacção com azida sódica e cloreto de amónio de acordo com a técnica descrita em (c).
2. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual representa um grupo ciano ou tetrazol-5-ilo, representa um ãtomo de hidrogénio, representa um grupo tetrazol-5-ilo quando R^ e R^ representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou R^ representa um ãtomo de hidrogénio quando R^ e R^ representam, cada um, um grupo carboxilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
3. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R^ representa um grupo ciano, R^, R^ e Rj. representam, cada um, um ãtomo de hidrogénio e R^ representa um grupo tetrazolilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
4. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R^ representa um

-32grupo ciano, R^ e R^ representam, cada um, um átomo de hidrogénio e R^ e R^ representam, cada um, um grupo carboxilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
5. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R^ e R^ representam, cada um, um grupo tetrazol-5-ilo e R₂, R^ θ R^ representam, cada um, um átomo de hidrogénio, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
6. - Processo para a preparação de composições farmacêuticas utilizadas no tratamento de situações patológicas do tracto gastrointestinal e do sistema respiratório relacionadas com fenómenos alérgicos e de todas as manifestações patológicas de origem imunolõgica, caracterizado pelo facto de se misturar uma quantidade efectiva de um composto de fórmula geral I, preparado pelo processo de acordo com a reivindicação 1, como ingrediente activo, ou de um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, com um veículo também aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.

Lisboa, 21 de Fevereiro de 1990

O Age/.íj QíiCiui da rropnedaae Industrial

-33Ref.: E023045 /BEN-PR/mp

Case.: CR2039

RESUMO

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS DE N-FENILBENZAMIDA COM ACÇÃO ANTI-ULCEROSA E ANTI-ALÉRGICA E DE COMPOSIÇÕES

FARMACÊUTICAS QUE OS CONTÊM

Descreve-se um processo para a preparação de compostos de fórmula geral e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico que consiste:

(a) em fazer reagir um composto de fórmula geral l-R.-3-R_c-5-aminofenilo 4 5 com o cloreto de um derivado apropriado de ãcido benzóico R^, R2-substituído, em separar os compostos resultantes e em purificar esses compostos;

(b) em fazer reagir o 5-(p-aminofenil)-tetrazol com o cloreto de um derivado de ãcido benzóico apropriadamente substituído, em evaporar o dissolvente, em separar os compostos resultantes e em pu-34- rificar esses compostos;

(c) em fazer reagir o composto correspondente preparado em (a) comportando um grupo ciano com azida sódica e cloreto de amónio, em separar os compostos resultantes e em purificar esses compostos ;

(d) em fazer reagir 4-ciano-anilina com o cloreto de um derivado de ãcido 4-cianobenzóico apropriadamente substituído, em separar os compostos resultantes e em converter esses compostos nos correspondentes derivados de ditetrazolilo pela técnica descrita em (c)

Estes compostos utilizam-se como agentes anti-ulcerosos e anti-alérgicos.