EA011074B1 - Гидразидсодержащие соединения - ингибиторы cftr и их применение - Google Patents

Гидразидсодержащие соединения - ингибиторы cftr и их применение Download PDF

Info

Publication number
EA011074B1
EA011074B1 EA200601799A EA200601799A EA011074B1 EA 011074 B1 EA011074 B1 EA 011074B1 EA 200601799 A EA200601799 A EA 200601799A EA 200601799 A EA200601799 A EA 200601799A EA 011074 B1 EA011074 B1 EA 011074B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
mono
alkyl
naphthalenyl
hydroxy
halogen
Prior art date
Application number
EA200601799A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200601799A1 (ru
Inventor
Алан Веркмэн
Нитин Даттатрая Сонаване
Чатчай Муанпрасат
Original Assignee
Дзе Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Калифорния
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дзе Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Калифорния filed Critical Дзе Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Калифорния
Publication of EA200601799A1 publication Critical patent/EA200601799A1/ru
Publication of EA011074B1 publication Critical patent/EA011074B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7012—Compounds having a free or esterified carboxyl group attached, directly or through a carbon chain, to a carbon atom of the saccharide radical, e.g. glucuronic acid, neuraminic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/38—Nitrogen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A01K2267/0306—Animal model for genetic diseases
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Изобретение относится к композициям, фармацевтическим препаратам и способам ингибирования кистозно-фиброзного регулирующего трансмембранную проводимость белка (CFTR), которые могут использоваться для исследования и лечения CFTR-опосредованных заболеваний и состояний. Композиции и фармацевтические препараты согласно изобретению могут включать одно или несколько гидразидсодержащих соединений и дополнительно могут включать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, эксципиентов и/или адьювантов. Иллюстативное гидразидсодержащее соединение, описанное в данном изобретении, имеет следующую структуру (Ia)где каждый из X, Y, R, Rи Rимеют значения, определенные в описании и формуле изобретения. Способы по изобретению включают в некоторых вариантах осуществления введение пациенту, страдающему от CFTR-опосредованного заболевания или состояния, эффективного количества гидразидсодержащего соединения. В других вариантах осуществления изобретение обеспечивает способы ингибирования CFTR, которые включают контактирование клеток в организме субъекта с эффективным количеством гидразидсодержащего соединения. Кроме того, отличительной особенностью изобретения является животная модель CFTR-опосредованного заболевания, где животное не является человеком, где модель получают путем введения гидразидсодержащего соединения животному, не являющемуся человеком, в количестве, достаточном для ингибирования CFTR

Description

Состояние, касающееся научного исследования, проведенного при финансовой поддержке государства
Данное изобретение было осуществлено при правительственной поддержке по грантам №№ НБ73854, ЕВ00415, ΕΥ13574, ΌΚ35124, ΌΚ43840 и ИС1 ΑΙ062530-01, присужденным Национальным институтом здравоохранения (Ναΐίοηαΐ ΙηδΙίΙιιΚδ οί Неа11й). Правительство может обладать определенными правами на данное изобретение.
Предпосылки создания изобретения
Кистозно-фиброзный регулирующий трансмембранную проводимость белок, (СЕТЕ), представляет собой цАМФ-активированный хлоридный (С1-) канал, экспрессируемый в эпителиальных клетках дыхательных путей, кишечника, поджелудочной железы и яичек млекопитающих. СЕТЕ представляет собой хлоридный канал, ответственный за цАМФ-опосредованное выделение С1-. Гормоны, такие как βадренергический агонист, или токсин, такой как токсин холеры, приводят к повышению уровня цАМФ, активации цАМФ-зависимой протеинкиназы и фосфорилированию СЕТЕ С1- канала, что вызывает открывание канала. Повышение уровня клеточного Са2+ также может активировать различные апикальные (верхушечные) мембранные каналы. Фосфорилирование посредством протеинкиназы С может или открывать, или закрывать С1- каналы в апикальной мембране. СЕТЕ располагается главным образом в эпителии, где он обеспечивает путь для передвижения ионов С1- через апикальную мембрану и ключевое место для регулирования скорости трансэпителиального транспорта соли и воды. Функция СЕТЕ хлоридного канала связана с широким спектром заболеваний, включая кистозный фиброз (СЕ) и некоторые формы мужского бесплодия, поликистозное заболевание почек и секреторную диарею.
Мутации СЕТЕ вызывают наследственное заболевание со смертельным исходом - кистозный фиброз (СЕ). Наблюдения, проведенные на людях, страдающих кистозным фиброзом (СЕ), и мышиных моделях СЕ, указывают на функциональную важность СЕТЕ в транспорте жидкости в кишечнике и поджелудочной железе, а также в мужской способности к воспроизведению потомства (СгиЬЬ е! а1., 1999, РЬу8ю1. Ееу. 79: 8193-8214; \Уопд. Р. Υ., 1997, Мо1. Нит. Еергой. 4: 107-110). Однако механизм, по которому дефектный СЕТЕ вызывает заболевание дыхательных путей, которое является основной причиной заболеваемости и смертности при СЕ, остается неясным (Рйете1с1 е1 а1., 1999, Р11у5ю1. Ееу. 79: 82158255). Основные трудности в понимании заболевания дыхательных путей при СЕ включают неадекватность мышиных моделей СЕ, в которых проявляется незначительное или совсем не проявляется заболевание дыхательных путей, недостаток животных моделей СЕ на крупных животных и ограниченная доступность дыхательных путей человека, страдающего от СЕ, которые бы не были бы повреждены хронической инфекцией и воспалением. Для исследования механизмов СЕ или для создания фенотипа СЕ на животных моделях крупных животных СЕТЕ-селективные ингибиторы с высокой аффинностью доступны не были.
Высокоаффинные ингибиторы СЕТЕ также находят клиническое применение в терапии секреторных диарей и кистозного заболевания почек и для ингибирования способности мужчин к воспроизведению потомства. Было открыто несколько ингибиторов СЕТЕ, хотя большинство из них обладает слабой эффективностью и недостатком специфичности в отношении СЕТЕ. Пероральный гипогликемический агент глибенкламид ингибирует СЕТЕ С1 проводимость с внутриклеточной стороны путем блокирования механизма открытия канала (8йеррагй & ЕоЬшзоп, 1997 1. РНумоГ 503: 333-346; Ζΐιοιι е! а1., 2002, 1. Оеп. Р11у5юГ 120: 647-662) в высоких микромолярных концентрациях, при которых он воздействует на другие С1- и катионные каналы (Ей^агйб & ^е81оп, 1993; ЕаЬе е! а1., 1995, Вг. 1. Рйагтасо1., 110: 1280-1281; 8с1ш11х е! а1., 1999, РйумоР Ееу., 79: 8109-8144). Другие неселективные ингибиторы анионного транспорта, включая дифениламин-2-карбоксилат (ИРС), 5-нитро-2-(3-фенилпропиламино)бензоат (АРРВ) и флуфенаминовую кислоту, также ингибируют СЕТЕ путем закрывания пор во внутриклеточном сайте (Иает8оп е! а1., 1999, Рйубю1.Ееу., 79: 847-875; МсСайу, 2000, 1. Ехр. Вю1., 203: 1947-1962).
Соответственно, существует необходимость в ингибиторах СЕТЕ, в особенности таких, которые являются растворимыми в воде. Настоящее изобретение адресовано такой необходимости, также как и другим, и преодолевает недостатки, существующие на настоящий момент в предшествующем уровне техники.
Литература:
Ма е! а1., 2002, 1. С1ш. 1пуе81., 110: 1651-1658 описывает тиазолидиноновый класс ингибиторов СЕТЕ
Краткое изложение сущности изобретения
Изобретение относится к композициям, фармацевтическим препаратам и способам ингибирования белка, регулирующего кистозно-фиброзную трансмембранную проводимость, (СЕТЕ), которые могут использоваться для исследования и лечения СЕТЕ-опосредованных заболеваний и состояний. Композиции и фармацевтические препараты согласно изобретению могут включать одно или несколько гидразидсодержащих соединений и дополнительно могут включать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, эксципиентов и/или адьювантов. Способы по изобретению включают в некоторых вариантах осуществления введение пациенту, страдающему от СЕТЕ-опосредованного заболевания или состояния, эффективного количества гидразидсодержащего соединения. В других вариантах осуществ
- 1 011074 ления изобретение обеспечивает способы ингибирования СЕТК, которые включают контактирование клеток в организме субъекта с эффективным количеством гидразидсодержащего соединения. Кроме того, отличительной особенностью изобретения является животная модель СЕТК-опосредованного заболевания, где животное не является человеком, где модель получают путем введения гидразидсодержащего соединения животному, не являющемуся человеком, в количестве, достаточном для ингибирования СЕТК.
Данные и другие задачи, преимущества и отличительные особенности изобретения будут очевидны специалистам в данной области из подробного описания гидразидсодержащих соединений, как они более полно описаны далее.
Краткое описание чертежей
Изобретение будет лучше понятно со ссылкой на следующие чертежи, которые предназначены только для иллюстративных целей.
На фиг. 1А показано схематическое представление методики скрининга, использованной для обнаружения ингибиторов СЕТК. СЕТК стимулировали в максимальной степени с помощью множества агонистов в стабильно трансфицированных эпителиальных клетках соэкспрессирующих СЕТК человека и желтый флуоресцентный белок (ΥΕΡ), обладающий СЕ/Е чувствительной флуоресценцией. После добавления тестируемого соединения приток йода индуцировали с помощью добавления раствора, содержащего I-.
На фиг. 1В показаны химические структуры ингибиторов СЕТК, выявленные методом скрининга, показанным на фиг. 1А.
На фиг. 1С представлен график, полученный с использованием метода скрининга в соответствии с фиг. 1А, где представлена относительная флуоресценция относительно времени для ингибитора СЕТК гидразида И-2-нафталенил-[(3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен]глицина (упоминаемого в данном описании как С1уН-101) в нескольких концентрациях.
На фиг. 1Ό представлен график ингибирования С1уН-101 тока короткого замыкания в клетках ЕКТ с нарушенной проницаемостью мембраны, экспрессирующих СЕТК человека. СЕТК стимулировали с использованием 100 мкМ СРТ-цАМФ.
На фиг. 2А представлен график, на котором представлена временная кривая ингибирования, показывающая скорость СЕТК-опосредованного транспорта I-- в различные моменты времени после добавления 10 мкМ 61уН-101.
На фиг. 2В представлен график, на котором представлена временная кривая обратимого ингибирования, показывающая скорость транспорта I- в различные моменты времени после вымывания С1уН-101.
На фиг. 2С представлен график, иллюстрирующий приток йода с использованием С1уН-101 (50 мкМ) после СЕТК стимуляции с использованием указанных агонистов (50 мкМ). Закрашенные полосы показывают агонист, а пустые полосы показывают агонист вместе с С1уН-101.
На фиг. ЗА представлены химические структуры класса аналогов С1уН-101. где места модификации обозначены в скобках.
На фиг. ЗВ показана реакционная схема синтеза С1уН-101, гидразида И-(6-хинолинил)-[(3,5дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен]глицина (упоминаемого в данном описании как С1уН-126), гидразида 3,5-дибром-2,4-дигидрокси[2-(2-нафталинамин)ацето]бензойной кислоты (упоминаемого в данном описании как С1уН-201) и гидразида И-2-нафталенил-[(3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил)метил]глицина (упоминаемого в данном описании как 61уН-301). Реагенты и условия: (а) 1СН2СООЕ1, ИаОАс, 95°С; (Ь) Ν2Η4, Н2О, ЕЮН/нагревание при кипении с обратным холодильником; (с) 3,5-ди-Вг-2,4-ди-ОН-Рй-СНО, Е1ОН/нагревание при кипении с обратным холодильником; (б) 3,5-ди-Вг-2,4-ди-ОН-Рй-СОС1, пиридин, 22°С; (е) ^Н4, Н2О, Рб/С (10%), ДМФ/нагревание при кипении с обратным холодильником; (Е) глиоксалевая кислота, 10°С; (д) №-ьВН3СА/СН3СН 48 ч; сухой НС1, Е1ОН.
На фиг. 3С показан график, представляющий ингибирование гидразидом №2-нафталенил-[(3,5дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен]оксаминовой кислоты (упоминаемого в данном описании как ОхаН-110) тока короткого замыкания в клетках ЕКТ с нарушенной проницаемостью мембраны, экспрессирующих СЕТК человека (правая полоса), и структура ОхаН-110 (левая полоса). СЕТК стимулировали с использованием 100 мкМ СРТ-цАМФ.
На фиг. 4 А представлен график, иллюстрирующий ингибирование С1уН-101, измеренное в экспериментах фиксации потенциала с цельными клетками на клетках ЕКТ, экспрессирующих СЕТК человека. Мембранные токи цельных клеток вызывали с использованием напряжения от -100 до +100 мВ с шагом в 20 мВ после максимальной стимуляции СЕТК с помощью 5 мкМ форсколина. График слева представляет измерения перед добавлением С1уН-101, а график справа представляет измерения, полученные после добавления 61уН-101.
На фиг. 4В представлен график, отображающий взаимоотношение ток-напряжение в отсутствие ингибиторов (контроль, незаштрихованные кружки), после добавления 10 мкМ (закрашенные квадраты) и 30 мкМ С1уН-101 (закрашенные кружки), после вымывания 10 мкМ С1уН-101 (возвращение к исходному состоянию, треугольники) и после добавления 5 мкМ СЕТК1пЬ-172 (закрашенные кружки).
На фиг. 4С представлен график, иллюстрирующий взаимоотношение доза-ответная реакция, опре
- 2 011074 деленный для С1уН-101 при указанных мембранных потенциалах.
На фиг. 4Ό представлен график, иллюстрирующий представительные зарегистрированные показатели фиксации потенциала на закрепленных клетках, показывающие активность отдельного канала СЕТИ при концентрациях С1уН-101 0, 0,4 и 5 мкМ. Пунктирные линии показывают уровень нулевого тока (закрытые каналы) с преломлением по нисходящей линии, указывающим на открывание каналов (движение С1-ионов из пипетки в клетку). Потенциал пипетки составлял 60 мВ.
На фиг. 5А представлен график, иллюстрирующий рН-зависимые изменения поглощения (правая полоса) химических соединений (10 мкМ) (соответствующие химические структуры, левая полоса) в растворе №1С1 (100 мМ), содержащем МЕ8, НЕРЕ8, бороновую кислоту и лимонную кислоту (каждую по 10 мМ), титрованном до различных значений рН с использованием НС1/ЫаОН. Изменения поглощения измеряли при аналитических длинах волн, составляющих 346, 348, 346 и 236 нм (сверху вниз).
На фиг. 5В представлена иллюстрация выведенного ионного равновесия для С1уН-101, где показаны величины рКа.
На фиг. 6 А представлен график, иллюстрирующий ингибирование С1уН-101 при регистрации назальной разницы потенциалов (ΡΌ), показывающий ответные реакции на амилорид и растворы с низкой концентрацией С1- (левая полоса) или усредненные величины ΡΌ (правая полоса, среднее значение ± средняя ошибка п=5). Там, где это указано, растворы с низкой концентрацией С1- содержали форсколин в отсутствие или в присутствии С1уН-101.
На фиг. 6В представлен график, иллюстрирующий двухсторонний анализ экспериментов на фиг. 6А, показывающий изменения ΡΌ (ΑΡΌ) для действия форсколина, форсколина и СЕТК.1п11-172, и форсколина и С1уН-101.
На фиг. 6С представлен график, иллюстрирующий изменение ΡΌ (среднее значение ± средняя ошибка) в серии экспериментов по гиперполяризации, индуцированной низким С1- (левая полоса), или индуцированной форсколином гиперполяризации (правая полоса), в которых растворы содержали или 4,4'-диизотиоцианостильбен-2,2'-дисульфоновую кислоту (ΌΙΌδ) или С1уН-101 (*Ρ<0,005 для пониженного ΑΡΌ для контроля).
На фиг. 7 А представлен график, иллюстрирующий ингибирование С1уН-101 тока короткого замыкания после стимуляции СЕТИ в клетках Т84 (верхняя полоса), клетках дыхательных путей человека (средняя полоса) и выделенной подвздошной кишке мыши (нижняя полоса). После появления постоянной базовой линии тока добавляли амилорид (10 мкМ, верхний раствор) и СРТ-цАМФ (0,1 мМ, оба раствора) с последующим добавлением указанных концентраций С1уН-101 (оба раствора).
На фиг. 7В представлен график, иллюстрирующий ингибирование посредством С1уН-101 выделения жидкости в модели индуцированного холерным токсином выделения жидкости в закрытой петле кишечника. Жидкость из просвета кишечника, показанную как соотношение веса петли к длине (г/см, средняя ошибка, 6 мышей) измеряли через 4 ч после инъекции физиологического раствора (контроль), холерного токсина (1 мкг) или холерного токсина + С1уН-101 (0,25 мкг).
На фиг. 8 приведены химические структуры класса неабсорбируемого дигидразида малоновой кислоты (обозначен как Ма1Н-х) аналогов соединений гидразида глицина по изобретению.
На фиг. 9 показана реакционная схема синтеза полярных неабсорбируемых ингибиторов СЕТИ: дигидразида 2-нафталениламино-бис-[(3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен]пропандиовой кислоты (Ма1Н-1), дигидразида 2-нафталениламино-[(3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен] [(2,4-динатрийдисульфофенил)метилен]пропандиовой кислоты (Ма1Н-2), и дигидразида 2-нафталениламино-[(3,5дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен][3-(4-натрийсульфофенил)тиоуреидо]пропандиовой кислоты (Ма1Н-3). Реагенты и условия: (а) диэтилброммалонат, ЫаОАс, 90°С, 8 ч, 84%; (Ь) Ы2Н4, Н2О, ЕЮН/нагревание при кипении с обратным холодильником, 10 ч, 92%; (с), (б) 3,5-ди-Вг-2,4-ди-ОНбензальдегид (1 эквивалент), Е1ОН/нагревание при кипении с обратным холодильником, 3 ч, 58%; (е) 2,4ди-§О3Ыа-бензальдегид, ДМФ/нагревание при кипении с обратным холодильником, 4 ч, 58%; и (ί) 4натрийсульфофенилизортиоцианат, ДМФ/нагревание при кипении с обратным холодильником, 4 ч, 47%.
На фиг. 10 показана реакционная схеме синтеза ΡЕС-илированного ингибитора СЕТИ, содержащего фрагмент ΡЕ6 (ΡЕ6-илированного соединения) Ма1Н-(ΡЕ6)η (полоса А) и МаН^ВС^В (полоса В).
На фиг. 11 показана реакционная схеме синтеза ΡЕ6-илированного ингибитора СЕТИ 61уН-(ΡЕ6)η. Реагенты и условия: (1) Вг-бутиролактон, ЫаОАс, 90°С, 8 ч, 89%; О) Ы2Н4, Н2О, ЕЮН/нагревание при кипении с обратным холодильником, 10 ч, 89%; (к) (ВОС)2О, ТГФ, комнатная температура, 86%; (1) ТЮЕ пиридин, -15°С, 8 ч, 73%; (т) NН2-ΡЕ6, ДМФ, 80°С, 24 ч, 38%; (п) ТФУК, СН2С12, комнатная температура, 30 мин, 73%; и (о) 3,5-ди-Вг-2,4-ди-ОН-бензальдегид, ЕЮН/нагревание при кипении с обратным холодильником, 3 ч, 58%.
На фиг. 12 представлена серия графиков, показывающих ингибирование хлоридного тока апикальной мембраны в эпителиальных ЕИТ клетках, экспрессирующих СЕТИ человека дикого типа. Хлоридный ток измеряли с помощью анализа тока короткого замыкания в клетках, подвергаемых градиентному действию хлорид-иона и после нарушения проницаемости базолатеральной мембраны. СЕТИ стимулировали с использованием 10 мкМ СРТ-цАМР.
- 3 011074
Повышающиеся концентрации соединений Ма1Н добавляли, как указано.
На фиг. 13 представлена серия графиков, показывающих всасывание в кишечнике и противодиарейную эффективность ингибиторов СРТК. Полоса А представляет собой график всасывания в течение 2 ч указанных соединений Ма1Н в закрытых петлях тощей кишки у живых мышей (8Ό, п=4-6 мышей). Для сравнения показано всасывание СРТК1пВ-172, измеренное тем же способом. На полосе В представлен график, показывающий ингибирование индуцированного холерным токсином выделения жидкости в закрытых петлях тощей кишки. В петли вводили инъекции физиологического раствора (РВ8) или физиологического раствора, содержащего 1 мкг холерного токсина (ХТ) с указанными количествами соединений Ма1Н. Соотношения вес-к-длине для петель кишечника измеряли через 6 ч (8Ό, п=3-5 мышей).
Перед тем, как будет описано настоящее изобретение, следует понять, что данное изобретение не ограничено конкретными описанными вариантами осуществления, поскольку таковые могут, конечно, изменяться. Также следует понимать, что использованная в данном описании терминология используется только для описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения изобретения, поскольку объем настоящего изобретения будет ограничен только прилагаемой формулой изобретения.
Когда приведен диапазон величин, следует понимать, что изобретение охватывает каждую промежуточную величину до десятых единиц нижнего предела между верхней и нижней границами диапазона, если контекст четко не указывает обратного, а также любые другие указанные и промежуточные значения в данном указанном диапазоне. Более высокие и более низкие предельные значения данных меньших диапазонов независимо могут быть включены в меньшие диапазоны значений, также охватываемые изобретением, при условии любого конкретно исключенного предела в указанном диапазоне. Когда указанный диапазон включает одно или оба из предельных значений, диапазоны, исключающие любой или оба из данных предельных значений, также включены в изобретение.
Если не определено другого, все технические и научные термины, использованные в данном описании, имеют те же значения, которые обычно понимаются обычными специалистами в данной области, к которой принадлежит изобретение. Хотя любые способы и материалы, аналогичные или эквивалентные указанным в данном описании, также могут использоваться для практической реализации или тестирования настоящего изобретения, в данный момент описаны предпочтительные способы и материалы. Все отмеченные в данном описании публикации включены в данное описание путем ссылки для раскрытия и описания способов и/или материалов, в связи с которыми процитированы данные публикации.
Следует отметить, что как они использованы в данном описании и прилагаемой формуле изобретения, неопределенная форма единственного числа, союз «и» и определенная форма единственного числа включают отсылку на множественное число, если контекст четко не указывает другого. Таким образом, ссылка на «ингибитор» включает ссылку на множество таких ингибиторов, а ссылка на «данную клетку» включает ссылку на одну или несколько клеток и их эквивалентов, известных специалистам в данной области, и тому подобное.
Обсуждавшиеся здесь публикации обеспечены только с целью их раскрытия до даты подачи настоящей заявки. Ничто в данном описании не следует истолковывать как допущение, что настоящее изобретение дает права предвидеть ранним числом такую публикацию на основании предшествующего изобретения. Кроме того, приведенные даты публикации могут отличаться от фактических дат публикации, которые могут требовать независимого подтверждения.
Подробное описание изобретения
Данное изобретение основано на открытии гидразидсодержащих соединений, которые представляют собой высокоаффинные ингибиторы СРТК. Структура данных соединений, обладающих СРТКингибирующей активностью, раскрытых в данном описании, и их производных, а также фармацевтические препараты и способы применения более подробно описаны далее.
Определения
Выражение «состояние или симптом, опосредованные кистозно-фиброзным регулирующим трансмембранную проводимость белком» или «СРТК-опосредованное состояние или симптом» означает любое состояние, нарушение или заболевание или симптомы такого состояния, нарушения или заболевания, которые являются результатом активности кистозно-фиброзного регулирующего трансмембранную проводимость белка (СРТК), например, активность СРТК в ионном транспорте. Такие состояния, нарушения, заболевания или симптомы поддаются лечению путем ингибирования активности СРТК, например, путем ингибирования ионного транспорта посредством СРТК. Активность СРТК, например, влечет за собой секрецию кишечника в качестве ответной реакции на различные агонисты, включая холерный токсин (см., например, 8пуйег е! а1., 1982 Ви11. ТСогШ НеаНй Огдап. 60: 605-613; Сйао е! а1., 1994, ЕМВО 1., 13: 1065-1072; КтЬегд е! а1., 1971, 1.С1ш. !п\еМ. 50:1218-1230).
Выражение «ингибитор СРТК», как оно использовано в данном описании, относится к соединению, которое снижает продуктивность транспорта ионов посредством СРТК, в частности это относится к транспорту хлоридных ионов посредством СРТК. Предпочтительно ингибиторы СРТК по изобретению представляют собой специфические ингибиторы СРТК, т.е. соединения, которые ингибируют активность СРТК без существенного или неблагоприятного воздействия на активность других
- 4 011074 переносчиков ионов, например, других переносчиков хлорида, переносчиков калия и тому подобного. Предпочтительно ингибиторы СЕТИ являются высокоаффинными ингибиторами СЕТИ, например, обладают аффинностью в отношении СЕТИ примерно по крайней мере одномикромолярной, обычно примерно от одно- до пятимикромолярной.
Термин «выделенное соединение» означает соединение, которое, по существу, отделено или обогащено по отношению к другим соединениям, вместе с которыми оно существует в природе. Предпочтительно соединение имеет по меньшей мере более чем примерно 80%-ную, более предпочтительно по меньшей мере 90%-ную чистоту, даже более предпочтительно по меньшей мере 98%-ную чистоту, наиболее предпочтительно по меньшей мере 99%-ную чистоту по весу. Подразумевается, что настоящее изобретение охватывает диастереомеры, а также рацемические и разделенные, энантиомерно чистые формы и их фармацевтически приемлемые соли.
Термин «лечить» или «лечение», как он использован в данном описании, относится к лечению заболевания, состояния, нарушения или симптома у субъекта, где заболевание, состояние, нарушение или симптом опосредованы активностью СЕТИ, и включает: (1) предотвращение заболевания, состояния или нарушения, т.е. обеспечение того, чтобы клинические симптомы заболевания не развивались бы у субъекта, который может быть подвержен или предрасположен к заболеванию, состоянию или нарушению, но у которого еще не ощущаются или не проявляются симптомы, (2) приостановку развития заболевания, состояния или нарушения, т. е. остановку или уменьшение развития заболевания, состояния или нарушения или его клинических симптомов, или (3) облегчение заболевания, состояния или нарушения, т.е. обеспечение регрессии заболевания, состояния или нарушения или их клинических симптомов.
Выражение «терапевтически эффективное количество» или «эффективное количество» означает количество соединения по изобретению, которое, при введении млекопитающему или другому, нуждающемуся в этом субъекту, является достаточным для эффективного лечения, как определено выше, заболеваний, состояний, нарушений или симптомов, опосредованных активностью СЕТИ. Количество соединения по изобретению, которое составляет «терапевтически эффективное количество» будет изменяться в зависимости от соединения, заболевания и его тяжести, а также возраста, веса и т.д. субъекта, подвергаемого лечению, но может быть определено обычным образом специалистом в данной области на основании его собственных знаний и данного описания.
Термин «субъект» и «пациент» означает члена или членов вида млекопитающих или не млекопитающих, которым необходимы описанные здесь фармацевтические способы, композиции и лечение.
Таким образом, субъекты и пациенты включают, без ограничения, приматов (включая человека), представителей семейства псовых, представителей семейства кошачьих, копытных животных (например, лошадей, коров, представителей семейства свиньих (например, свиней)), представителей семейств птичьих и других субъектов. Люди и животные, не являющиеся человеком, имеющие коммерческую значимость (например, крупный рогатый скот и домашних животные) представляют особый интерес.
Термин «млекопитающее» означает члена или членов вида млекопитающих и включает, в качестве примера, представителей семейства псовых, представителей семейства кошачьих, лошадей, коров, овец, грызунов и т.д. и приматов, в частности, людей. Животные модели, где животное не является человеком, в частности модели млекопитающих, например, примата, мыши, представителя отряда зайцеобразных и т.д. можно использовать для экспериментальных исследований.
Термин «единичная дозированная форма», как он использован в данном описании, относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичной дозировки для людей и животных; где каждая единица содержит определенное количество соединений по настоящему изобретению, рассчитанное в количестве, достаточном для обеспечения желательного эффекта, в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем, носителем или средой-носителем. Детализированная спецификация новых единичных дозированных форм по настоящему изобретению зависит от конкретного используемого соединения и действия, которое должно быть достигнуто, и фармакодинамики, связанной с каждым соединением в организме хозяина.
Подразумевается, что термин «физиологические состояния» охватывает те состояния, которые сочетаются с живыми клетками, например, например, преимущественно водные состояния, относящиеся к температуре, рН, солености и т.д., которые сочетаются с живыми клетками.
Выражение «фармацевтически приемлемый эксципиент» означает эксципиент, который можно использовать для получения фармацевтической композиции, который является, как правило, безопасным, нетоксичным и не является нежелательным ни с биологической, ни с какой-либо другой точки зрения, и включает эксципиент, который является приемлемым для ветеринарного применения, а также для фармацевтического применения у людей. Выражение «фармацевтически приемлемый эксципиент», как оно использовано в описании и формуле изобретения, включает как один, так и больше одного такого эксципиента.
Как использовано в данном описании, подразумевается, что термин «фармацевтическая композиция» включает в себя композицию, подходящую для введения субъекту, такому как млекопитающее, в частности, человеку. Как правило, «фармацевтическая композиция» является стерильной и предпочтительно не содержит загрязняющих веществ, которые способны вызвать нежелательную ответную реак
- 5 011074 цию у субъекта. Фармацевтические композиции могут быть разработаны для введения субъектам или пациентам, нуждающимся в этом, посредством различных путей введения, включая пероральный, буккальный, ректальный, парентеральный, внутрибрюшинный, внутрикожный, внутритрахейный и тому подобными. В некоторых вариантах осуществления композиция является подходящей для введения посредством чрезкожного пути с использованием усилителя проницаемости, отличающегося от ДМСО. В других вариантах осуществления фармацевтические композиции являются подходящими для введения путем, отличающимся от чрезкожного введения.
Как использовано в данном описании, термин «фармацевтически приемлемые производные» соединения по изобретению включает его соли, сложные эфиры, простые эфиры енолов, сложные эфиры енолов, ацетали, кетали, ортоэфиры, полуацетали, полукетали, кислоты, основания, сольваты, гидраты или пролекарства. Такие производные легко могут быть получены специалистом в данной области с использованием способов для получения производных. Полученные соединения можно вводить животным или людям, не вызывая существенного токсического действия, и они либо являются фармацевтически активными, либо представляют собой пролекарства.
Выражение «фармацевтически приемлемая соль» соединения по изобретению означает соль, которая является фармацевтически приемлемой и обладает желаемой фармакологической активностью исходного соединения. Такие соли включают: (1) кислотно-аддитивные соли, образованные неорганическими кислотами, такими как хлористо-водородная кислота, бромисто-водородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и тому подобные; или соли, образованные органическими кислотами, такими как уксусная кислота, пропионовая кислота, гексановая кислота, циклопентанпропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, молочная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, 3-(4-гидроксибензоил)бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, 1,2-этансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, 4-хлорбензолсульфоновая кислота, 2-нафталинсульфоновая кислота, 4толуолсульфоновая кислота, камфорсульфоновая кислота, 4-метилбицикло[2,2,2]окт-2-ен-1-карбоновая кислота, глюкогептановая кислота, 4,4'-метиленбис-(3-гидрокси-2-ен-1-карбоновая кислота), 3фенилпропионовая кислота, триметилуксусная кислота, трет-бутилуксусная кислота, лаурилсерная кислота, глюконовая кислота, глутаминовая кислота, гидроксинафтойная кислота, салициловая кислота, стеариновая кислота, слизевая кислота и тому подобные; или соли, образованные в том случае, когда кислый протон в исходном соединении либо заменен на ион металла, например, ион щелочного металла, ион щелочно-земельного металла или ион алюминия; либо координирован с органическим основанием, таким как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, трометамин, Ν-метилглукамин и тому подобные.
Выражение «фармацевтически приемлемый сложный эфир» соединения по изобретению означает сложный эфир, который является фармацевтически приемлемым, обладает желаемой фармакологической активностью исходного соединения и включает, не ограничиваясь указанным, алкиловые, алкениловые, алкиниловые, ариловые, гетероариловые, аралкиловые, гетероаралкиловые, циклоалкиловые и гетероциклические сложные эфиры кислотных групп, включая, но не ограничиваясь указанным, карбоновые кислоты, фосфорные кислоты, фосфиновые кислоты, сульфоновые кислоты, сульфиновые кислоты и бороновые кислоты.
Выражение «фармацевтически приемлемый простой эфир енола» соединения по изобретению означает простой эфир енола, который является фармацевтически приемлемым, обладает желаемой фармакологической активностью исходного соединения, и включает, не ограничиваясь указанным, производные формулы С=С(ОВ), где В представляет собой водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, гетероарил, аралкил, гетероаралкил, циклоалкил или гетероциклил.
Выражение «фармацевтически приемлемый сложный эфир енола» соединения по изобретению означает сложный эфир енола, который является фармацевтически приемлемым, обладает желаемой фармакологической активностью исходного соединения, и включает, не ограничиваясь указанным, производные формулы С=С(ОС(О)В), где В представляет собой водород, алкил, алкенил, алкинил, арил, гетероарил, аралкил, гетероаралкил, циклоалкил или гетероциклил.
Выражение «фармацевтически приемлемый сольват или гидрат» соединения по изобретению означает сольватный или гидратный комплекс, который является фармацевтически приемлемым, обладает желаемой фармакологической активностью исходного соединения и включает, не ограничиваясь указанным, комплексы соединения по изобретению с одной или несколькими молекулами растворителя или воды, или содержит от 1 до примерно 100, от 1 до примерно 10, или от одной до примерно 2, 3 или 4 молекул растворителя или воды.
Термин «пролекарство» означает любое соединение, которые высвобождает активное исходное соединение формулы (I) ίη νίνο, когда пролекарство вводят субъекту-млекопитающему. Пролекарства соединений формулы (I) содержат функциональные группы, которые в обычных физиологических условиях гидролизуются в соответствующие карбокси, гидрокси или аминогруппы. Примеры таких функциональных групп включают, но не ограничиваются указанным, сложные эфиры (например, ацетатные, формиатные и бензоатные производные) и карбаматы (например, Ν,Ν-диметиламинокарбонил) гидроксиль
- 6 011074 ных групп в соединениях формулы (I) и тому подобные. Дополнительные примеры включают дипептидные или трипептидные сложные эфиры гидроксильных или карбоксильных групп в соединениях формулы (I) и тому подобные. Получение таких функциональных групп хорошо известно в данной области. Например, соединение формулы (I), имеющее присоединенную к нему гидроксильную группу, может быть обработано карбоновой кислотой или дипептидом, имеющим свободный карбоксильный конец в условиях этерификации, хорошо известных в данной области, с получением целевой сложноэфирной функциональной группы. Аналогично, соединение формулы (I), имеющее присоединенную к нему свободную карбоксильную группу, может быть обработано трипептидом, содержащим гидроксильную группу, такую как остаток серина (например, -Ы(Н)-С(Н)(СН2ОН)-С(О)-) в условиях этерификации, хорошо известных в данной области, с получением целевой сложноэфирной функциональной руппы. Кроме того, соединения формулы (I), содержащие присоединенную карбоксильную сложноэфирную группу, могут быть обработаны различными сложными эфирами карбоновых кислот в стандартных условиях переэтерификации с получением соединений формулы (I) с присоединенной целевой сложноэфирной функциональной группой. Предусматривается, что все такие функциональные группы входят в объем данного изобретения.
Термин «органическая группа» и «органический радикал», как они использованы в настоящем описании, означают любую углеродсодержащую группу, включая углеводородные группы, которая классифицирована как алифатическая группа, циклическая группа, ароматическая группа, их функционализированные производные и/или их различные комбинации. Термин «алифатическая группа» означает насыщенную или ненасыщенную линейную или разветвленную углеводородную группу и охватывает, например, алкильные, алкенильные и алкинильные группы. Термин «алкильная группа» означает замещенную или незамещенную, насыщенную линейную или разветвленную углеводородную группу или цепь (например, от С1 до С8), включая, например, метил, этил, изопропил, трет-бутил, гептил, н-октил, додецил, окстадецил, амил, 2-этилгексил и тому подобные. Подходящие заместители включают карбокси, защищенный карбокси, амино, защищенный амино, галоген, гидрокси, защищенный гидрокси, меркапто, низший алкилтио, нитро, циано, монозамещенный амино, защищенный монозамещенный амино, дизамещенный амино, С1-С7алкокси, С1-С7ацил, С1-С7ацилокси и тому подобные. Термин «замещенный алкил» означает определенную выше алкильную группу, которая от одного до трех раз замещена гидрокси, защищенным гидрокси, амино, защищенным амино, циано, галогеном, трифторметилом, монозамещенным амино, дизамещенным амино, низшим алкокси, меркапто, низшим алкилтио, карбокси, защищенным карбокси, или соли карбоксила, амино и/или гидроксила. Как использовано в отношении к заместителям гетероарильных колец, термины «замещенный (циклоалкил)алкил» и «замещенный циклоалкил» являются такими, как определено ниже, замещенными такими же группами, которые перечислены для «замещенной алкильной» группы. Термин «алкенильная группа» означает ненасыщенную, линейную или разветвленную углеводородную группу с одной или несколькими углерод-углеродными двойными связями, такую как винильная группа. Термин «алкинильная группа» означает ненасыщенную, линейную или разветвленную углеводородную группу с одной или несколькими углеродуглеродными тройными связями. Термин «циклическая группа» означает закрытую кольцевую углеводородную группу, которая классифицирована как алициклическая группа, ароматическая группа или гетероциклическая группа. Термин «алициклическая группа» означает циклическую углеводородную группу, обладающую свойствами, аналогичными свойствам алифатических групп. Термин «ароматичекая группа» или «арильная группа» означает моно- или полициклическую ароматическую углеводородную группу и может включать один или несколько гетероатомов, и которая дополнительно определена ниже. Термин «гетероциклическая группа» означает закрытый кольцевой углеводород, в котором один или несколько атомов в кольце представляют собой элементы, отличающиеся от углерода (например, азот, кислород, сера и т.д.), и дополнительно определен далее.
«Органические группы» могут быть функционализированными или иным образом могут включать дополнительные функциональные группы, связанные с органической группой, такие как карбоксил, амино, гидроксил и тому подобные, которые могут быть защищеннымми или незащищенными. Например, выражение «алкильная группа» предназначено не только для того, чтобы включать чистые насыщенные углеводородные алкильные заместители с открытой цепью, такие как метил, этил, пропил, трет-бутил и тому подобные, но также и алкильные заместители, содержащие дополнительные заместители, известные в данной области, такие как гидрокси, алкокси, меркапто, алкилтио, алкилсульфонил, галоген, циано, нитро, амино, карбоксил и т.д. Таким образом, выражение «алкильная группа» включает простые эфиры, сложные эфиры, галогеналкилы, нитроалкилы, карбоксиалкилы, гидроксиалкилы, сульфоалкилы и т.д.
Термины «группы галогена» или «галоген» использованы в данном описании взаимозаменяемо и относятся к группам фтора, хлора, брома или иода.
Термин «галогеналкил» относится к алкильной группе, как определено выше, которая является замещенной одним или несколькими атомами галогена. Атомы галогена могут быть одинаковыми или разными. Термин «дигалогеналкил» относится к алкильной группе, как определено выше, которая является замещенной двумя группами галогена, которые могут быть одинаковые или разные. Термин «тригалоге
- 7 011074 налкил» относится к алкильной группе, как определено выше, которая является замещенной тремя группами галогена, которые могут быть одинаковые или разные. Термин «пергалогеналкил» относится к галогеналкильной группе, как определено выше, в которой каждый атом галогена в алкильной группы заменен на атом галогена. Термин «перфторалкил» относится к галогеналкильной группе, как определено выше, в которой каждый атом галогена в алкильной группе заменен на атом фтора.
Термин «циклоалкил» означает моно-, би- или трициклическое насыщенное кольцо, которое является полностью насыщенным или частично ненасыщенным. Примеры такой группы включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, адамантил, циклооктил, цис- или трансдекалин, бицикло[2,2,1]гепт-2-ен, циклогекс-1-енил, циклопент-1-енил, 1,4-циклооктадиенил и тому подобные.
Термин «(циклоалкил)алкил» означает определенную выше алкильную группу, замещенную одним из вышеуказанных циклоалкильных колец. Примеры такой группы включают (циклогексил)метил, 3(циклопропил)-н-пропил, 5-(циклопентил)гексил, 6-(адамантил)гексил и тому подобные.
Термин «замещенный фенил» определяет фенильную группу, замещенную одним или несколькими фрагментами, в некоторых случаях одним, двумя или тремя фрагментами, выбранными из групп, включающих галоген, гидрокси, защищенный гидрокси, циано, нитро, меркапто, алкилтио, трифторметил, С1С7алкил, С1-С7алкокси, С1-С7ацил, С1-С7ацилокси, карбокси, оксикарбокси, защищенный карбокси, карбоксиметил, защищенный карбоксиметил, гидроксиметил, защищенный гидроксиметил, амино, защищенный амино, (монозамещенный) амино, защищенный (монозамещенный) амино, (дизамещенный) амино, карбоксамид, защищенный карбоксамид, Ы-(С1-С6алкил)карбоксамид, защищенный Ы-(С1С6алкил)карбоксамид, Н,Н-ди(С1-С6алкил)карбоксамид, трифторметил, Н-((С1-С6алкил)сульфонил)амино, Ы-(фенилсульфонил)амино или фенил, замещенный или незамещенный, так что образуется, например, бифенил или нафтильная группа.
Примеры термина замещенный фенил включают моно- или ди(галоген)фенильную группу, такую как 2-, 3- или 4-хлорфенил, 2,6-дихлорфенил, 2,5-дихлорфенил, 3,4-дихлорфенил, 2-, 3- или 4бромфенил, 3,4-дибромфенил, 3-хлор-4-фторфенил, 2-, 3- или 4-фторфенил и тому подобные; моно- или ди(гидрокси)фенильную группу, такую как 2-, 3- или 4-гидроксифенил, 2,4-дигидроксифенил, их гидроксизащищенные производные и тому подобные; нитрофенильную группу, такую как 2-, 3- или 4нитрофенил; цианофенильную группу, например, 2-, 3- или 4-цианофенил; моно- или ди(алкил)фенильную группу, такую как 2-, 3- или 4-метилфенил, 2,4-диметилфенил, 2-, 3- или 4(изопропил)фенил, 2-, 3- или 4-этилфенил, 2-, 3- или 4-(н-пропил)фенил и тому подобные; моно или ди(алкокси)фенильную группу, например, 2,6-диметоксифенил, 2-, 3- или 4-(изопропокси)фенил, 2-, 3или 4-(трет-бутокси)фенил, 3-этокси-4-метоксифенил и тому подобные; моно- или ди(галоген)-, моно-, ди- или три-(гидроксил)фенил, такой как 3,5-дибром-2,4,6-тригидроксифенил, 3,5-дибром-2,4дигидроксифенил, 3,5-дибром-4-гидроксифенил и 3-бром-4-гидроксифенил и тому подобные; моно- или ди(галоген)-моно- или ди-(гидроксил)-моно- или ди-(алкокси)фенил, такой как 3,5-дибром-2-гидрокси-4метоксифенил и тому подобные; 2-, 3- или 4-трифторметилфенил; моно- или дикарбоксифенильную или (защищенный карбокси)фенильную группу, такую как 2-, 3- или 4-карбоксифенил или 2,4ди(защищенный карбокси)фенил; моно- или ди(гидроксиметил)фенил или (защищенный гидроксиметил)фенил, такой как 2-, 3- или 4-(защищенный гидроксиметил)фенил или 3,4-ди(гидроксиметил)фенил; моно- или ди(аминометил)фенил или (защищенный аминометил)фенил, такой как 2-, 3- или 4(аминометил)фенил или 2,4-(защищенный аминометил)фенил; или моно- или ди(Ы(метилсульфониламино))фенил, такой как 2-, 3-или 4-(Ы-(метилсульфониламино))фенил. Также термин замещенный фенил относится к дизамещенным фенильным группам, где заместители являются разными, например, 3-метил-4-гидроксифенил, 3-хлор-4-гидроксифенил, 2-метокси-4-бромфенил, 4-этил-2гидроксифенил, 3-гидрокси-4-нитрофенил, 2-гидрокси-4-хлорфенил и тому подобные.
Термин «(замещенный фенил)алкил» относится к одной из вышеуказанных фенильных групп, присоединенных к одной из вышеописанных алкильных групп. Примеры включают такие группы, как 2фенил-1-хлорэтил, 2-(4'-метоксифенил)этил, 4-(2,6'-дигидроксифенил)-н-гексил, 2-(5'-циано-3'метоксифенил)-н-пентил, 3-(2',6'-диметилфенил)пропил, 4-хлор-3-аминобензил, 6-(4'-метоксифенил)-3карбоксигексил, 5-(4'-аминометилфенил)-3-(аминометил)пентил, 5-фенил-3-оксопент-1-ил, (4гидроксинафт-2-ил)метил и тому подобные.
Как отмечено выше, термин «ароматический» или «арил» относится к пяти- или шестичленным карбоциклическим кольцам. Также как отмечено выше, термин «гетероарил» означает необязательно замещенные пятичленные и шестичленные кольца, которые содержат от 1 до 4 гетероатомов, таких как атомы кислорода, серы и/или азота, в особенности азота, или по отдельности или в сочетании с атомами серы или кислорода. Данные пятичленные или шестичленные кольца могут быть полностью ненасыщенными.
Кроме того, вышеуказанные необязательно замещенные пятичленные или шестичленные кольца необязательно могут быть конденсированными с ароматической 5-членной или 6-членной кольцевой системой. Например, кольца необязательно могут быть конденсированными с ароматической 5-членной или 6-членной кольцевой системой, такой как пиридиновая или триазольная система, и предпочтительно
- 8 011074 с бензольным кольцом.
Следующие кольцевые системы являются примерами гетероциклических (либо замещенных, либо незамещенных)радикалов, обозначенных термином «гетероарил»: тиенил, фурил, пирролил, пирролидинил, имидазолил, изоксазолил, триазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, тетразолил, тиатриазолил, оксатриазолил, пиридил, пиримидил, пиразинил, пиридазинил, оксазинил, триазинил, тиадиазинил, тетразоло,
1,5-[Ь]пиридазинил и пуринил, а также их бензоконденсированные производные, например, бензоксазолил, бензтиазолил, бензимидазолил и индолил.
Заместители для вышеуказанных необязательно замещенных гетероарильных колец представляют собой от одного до трех галогенов, тригалогенметилов, аминогрупп, защищенных аминогрупп, солей аминогрупп, монозамещенных аминогрупп, дизамещенных аминогрупп, карбоксигрупп, защищенных карбоксигрупп, карбоксилатных солей, гидрокси, защищенных гидрокси, солей гидроксильной группы, низших; алкокси, меркапто, низших алкилтио, алкилов, замещенных алкилов, циклоалкилов, замещенных циклоалкилов, (циклоалкил)алкилов, замещенных (циклоалкил)алкилов, фенилов, замещенных фенилов, фенилалкилов, и (замещенный фенил)алкилов. Заместители для гетероарильной группы являются такими, как определено до этого, или в случае тригалогенметила могут представлять собой трифторметил, трихлорметил, трибромметил или трииодметил. Как использовано в сочетании с вышеуказанными заместителями для гетероарильных колец, «низший алкокси» означает С1-С4алкоксигруппу, аналогично, «низший алкилтио» означает С1-С4алкилтиогруппу.
Термин «(монозамещенный) амино» относится к аминогруппе, содержащей один заместитель, выбранный из группы, включающей фенил, замещенный фенил, алкил, замещенный алкил, С1-С4ацил, С2С7алкенил, С2-С7замещенный алкенил, С2-С7алкинил, С7-С16алкиларил, С7-С16замещенный алкиларил и гетероарильную группу. (Монозамещенный) амино может дополнительно содержать амино-защитную группу, как что охватывается термином «защищенный (монозамещенный)амино». Термин «(дизамещенный) амино» относится к аминогруппам с двумя заместителями, выбранными из группы, включающей фенил, замещенный фенил, алкил, замещенный алкил, С1-С7ацил, С2-С7алкенил, С2-С7алкинил, С7С16алкиларил, С7-С16замещенный алкиларил и гетероарил. Два заместителя могут быть одинаковыми или разными.
Термин «гетероарил(алкил)» означает алкильную группу, как определено выше, замещенную в любом положении гетероарильной группой, как определено выше.
Термин «необязательный» или «необязательно» означает, что описанные впоследствии событие, обстоятельство, отличительная особенность или элемент могут, но не обязательно должны существовать, и что описание включает случаи, где событие или обстоятельство происходят, и случаи, где они не происходят. Например, выражение «гетероциклическая группа, необязательно моно- или дизамещенная алкильной группой» означает, что алкил может, но не должен присутствовать, и в описании встречаются ситуации, где гетероциклическая группы является моно- или дизамещенной алкильной группой и ситуации, где гетероциклическая группа не является замещенной алкильной группой.
Термин «электроноакцепторная группа» относится к способности функциональной группы молекулы оттягивать электроны в свою сторону в большей степени, чем атом водорода, если бы атом водорода занимал тоже самое положение в молекуле. Примеры электроноакцепторных групп включают, но не ограничиваются указанным, группы галогена, группы -С(О)Я (где Я представляет собой алкил); группы карбоновой кислоты и сложного эфира карбоновой кислоты; группы -ΝΚ.7 (где Я представляет собой алкил или водород); азо; нитро; группы -ОЯ и -8Я (где Я представляет собой водород или алкил); и органические группы (как определено в данном описании), содержащие такие электроноакцепторные группы, такие как галогеналкильные группы (включая пергалогеналкильные группы) и тому подобные.
Соединения, которые имеют одну и ту же молекулярную формулу, но различаются по природе и последовательности связывания или расположения атомов в пространстве, определяют термином «изомеры». Изомеры, которые различаются взаимным расположением атомов в пространстве, называют термином «стереоизомеры». Стереоизомеры, которые не являются зеркальным отображением друг друга, определяют как «диастереомеры», а те, которые являются несовместимыми при наложении зеркальными изображениями друг друга, определяют как «энантиомеры». Когда соединение имеет асимметрический центр, например, связанный с четырьмя различными группами, возможно существование пары энантиомеров. Энантиомер может быть охарактеризован абсолютной конфигурацией его асимметрического центра и описывается на основании Я- и 8-правил последовательности Кана и Прелога, или он может быть охарактеризован способом, в котором молекулы вращают плоскость поляризованного света и определен как правовращающий или левовращающий (т.е. как (+) или (-) изомеры, соответственно). Хиральное соединение может существовать или в виде индивидуального энантиомера, или в виде их смесей. Смесь, содержащую равное соотношение энантиомеров, называют рацемической смесью.
Соединения по данному изобретению могут иметь один или несколько асимметрических центров; следовательно, такие соединения могут быть получены в виде индивидуальных (Я)- или (8)стереоизомеров или в виде их смеси. Если не указано другого, предполагается, что описание или название конкретного соединения в описании и формуле изобретения включает оба индивидуальных энантиомера и их смеси, рацемические или другие. Способы определения стереохимии и разделения стерео
- 9 011074 изомеров хорошо известны в данной области (см., например, описание в части 4 Лбуапсеб Огдашс С11С1Ш51гу. 4-е издание, 1. Матсй, бо1из \Убеу и §оп8, Νο\ν Уотк, 1992).
Общий обзор
Изобретение относится к гидразидсодержащим соединениям, полученным на их основе композициям и способам их применения для ингибирования с высокой степенью аффинности кистозно-фиброзного белка, регулирующего трансмембранную проводимость (СЕТК), и для исследования и лечения СЕТКопосредованных заболеваний и состояний. Открытие рассматриваемых гидразидсодержащих соединений и их производных является результатом скрининга многочисленных потенциальных соединенийкандидатов с использованием анализа, разработанного для идентификации ингибиторов СЕТК, которые непосредственно взаимодействуют с СЕТК. Не ограничиваясь какой-либо конкретной теорией и способом действия, поскольку такие множественные активаторы СЕТК, которые работают на различных путях активации, были включены в исследования, которые привели к выявлению рассматриваемых соединений, ингибирующие соединения по изобретению, вероятно, вызывают ингибирование путем воздействия на СЕТКС1- транспортный путь или поблизости от него. Скрининг 100000 различных соединений выявил несколько соединений и производных в качестве эффективных ингибиторов СЕТК (фиг. 1В). Данные соединения и производные не являются химически и структурно родственными ранее известным активаторам СЕТК или ранее известным ингибиторам СЕТК, таким как ΌΡΟ ΝΡΡΒ глибенкламид или тиазолидинон. Наиболее эффективный ингибитор СЕТК, установленный при скрининге, имел Κι ~ 2 мкМ для ингибирования потока С1- в клетках дыхательных путей человека. Ингибирование было быстрым, обратимым и специфическим в отношении СЕТК.
Композиции и способы по изобретению далее будут описаны более подробно.
Гидразидсодержащие соединения.
Описанные здесь гидразидсодержащие соединения включают замещенный ароматическим или гетероароматическим фрагментом азот, гидразид (который может представлять собой гидразид глицина или оксаминовый гидразид) и замещенную или незамещенную арильную группу. В конкретных вариантах осуществления соединения, являющиеся предметом изобретения, как правило, описываются следующей формулой (I):
где X независимо выбран из алкильной группы или карбонильной группы; Υ независимо выбран из алкильной группы; алкильной группы, имеющей полярные заместители, такие как сульфогруппа или карбонильная группа, или линкера, такого как амидная связь или простой эфирный линкер, для обеспечения присоединения одной или нескольких больших полярных молекул, таких как полиоксиалкиловый простой полиэфир (такой как полиэтиленгликоль (ΡΕΟ), полипропиленгликоль, полигидроксиэтиловый глицерин), дисахариды, замещенная или незамещенная фенильная группа, полиалкилимины, дендримеры 0-10 поколения и тому подобные, где Υ может дополнительно включать присоединенную(ые) полярную(ые) молекулу(ы); К1 независимо выбран из замещенной или незамещенной фенильной группы, замещенной или незамещенной гетероароматической группы, такой как замещенная или незамещенная хинолинильная группа, замещенной или незамещенной антраценильной группы и замещенной или незамещенной нафталенильной группы; К2 представляет собой замещенную или незамещенную фенильную группу; и К3 независимо выбран из водорода или алкильной группы; или их фармацевтически приемлемое производное в виде индивидуального стереоизомера или их смеси. В одном варианте осуществления К1 выбран из замещенной фенильной группы, незамещенной хинолинильной группы, незамещенной антраценильной группы, и незамещенной нафталенильной группы; К2 представляет собой замещенную фенильную группу; и К3 независимо выбран из водорода или алкильной группы. Иллюстративные заместители для К1, К2 и К3 далее описаны более подробно.
В некоторых вариантах осуществления гидразидсодержащие соединения, как правило, описываются формулой (I), где X представляет собой алкильную группу. Такие соединения в общем описываются следующей формулой (1а):
У н (Ь) где Υ представляет собой водород или алкильную группу, такую как замещенная или незамещен
- 10 011074 ная, насыщенная линейная или разветвленная углеводородная группа или цепь (например, от С1 до С8), включая, например, метил, этил, изопропил, трет-бутил, гептил, н-октил, додецил, октадецил, амил, 2этилгексил; Х1 независимо выбран из водорода и алкильной группы, такой как замещенная или незамещенная, насыщенная линейная или разветвленная углеводородная группа или цепь (например, от С1 до С8), включая, например, метил, этил, изопропил, трет-бутил, гептил, н-октил, додецил, октадецил, амил, 2-этилгексил; или алкильной группы, включающей полярную молекулу, выбранную из сульфогруппы, карбоксильной группы, карбоксамидной группы, полиоксиалкилового простого полиэфира, дисахарида, замещенной или незамещенной фенильной группы или полиэтиленимина (ΡΕΙ), или дендримера 0-10 поколения; В1 независимо выбран из замещенной или незамещенной фенильной группы, замещенной или незамещенной гетероароматической группы, такой как хинолинильная группа, замещенной или незамещенной антраценильной группы и замещенной или незамещенной нафталенильной группы; В2 представляет собой замещенную или незамещенную фенильную группу; и В2, независимо выбран из водорода или алкильной группы. В некоторых вариантах осуществления, когда Х1 представляет собой водород, В1 представляет собой замещенную или незамещенную антраценильную группу, и гетероароматическую группу. В некоторых других вариантах осуществления, когда Х1 представляет собой водород, Υ не является водородом.
В конкретных вариантах осуществления В1 независимо выбран из моно(галоген)фенильной группы, такой как 2-, 2- или 4-хлорфенил; моно-(алкил)фенила, такого как 2-, 2- или 4-метилфенил; нафталенильной группы, такой как 1- или 2-нафталенил; моно- или ди(галоген)нафталенила, такого как 1-, 2-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-хлорнафталенил, 2,4- или 5,6-, или 5,7-, или 5,8-дихлорнафталенил; моно- или ди(гидрокси)нафталенила, такого как 1-, 2-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-гидроксинафталенил, 1,8-, 2,4дигидроксинафталенил; моно- или ди, или три(алкокси)нафталенила, такого как 1-, 2-, 5-, 6-, 7- или 8метоксинафталенил, 5,8-диметоксинафталенил, 1,4,8-триметоксинафталенил; моно- или ди(алкил)нафталенила, такого как 1-, 2-, 4-, 5- или 6-метилнафталенил, 4,5-, 4,6-диметилнафталенил; моно(гидрокси)моно или ди(сульфо)нафталенила, такого как 4-гидрокси-2-сульфонафталенил, 8-гидрокси-
2.6- дисульфонафталенил; моно(алкил)моно- или ди(алкокси)нафталенила, такого как 1-метил-5,6диметоксинафталенил; или хинолинильной группы, такой как 6-хинолинил; В независимо выбран из группы, включающей замещенные фенильные группы, такие как моно(галоген)фенильная группа, такая как 2-, 2- или 4-бромфенил; моно- или ди(гидроксил)фенильная группа, такая как 2,2,4-гидроксифенил и
2.4- дигидроксифенил; моно- или ди(галоген)моно-, ди-, или три(гидроксил)фенил, такой как 2,5-дибром-
2.4.6- тригидроксифенил, 2,5-дибром-2,4-дигидроксифенил, 2,5-дибром-4-гидроксифенил и 2-бром-4гидроксифенил; моно- или ди(галоген)моно- или ди(гидроксил)моно-, или ди(алкокси)фенил, такой как
2.5- дибром-2-гидрокси-4-метоксифенил; и Вэ независимо выбран из водорода или алкильной группы.
В следующих вариантах осуществления гидразидсодержащие соединения и производные формулы (1а) могут включать соединения, где Υ представляет собой водород; X представляет собой водород, метильную или этильную группу; В1 независимо выбран из моно(галоген)фенильной группы, такой как 2-, 2-, или 4-хлорфенильная группа, нафталенильной группы, такой как 2-нафталенил или 1-нафталенил; В2 независимо выбран из ди(галоген)моно- или ди(гидроксил)фенильной группы, такой как 2,5-дибром-2,4ди-гидроксифенильная группа, 2,5-дибром-4-гидроксифенильная группа; и Вэ представляет собой водород или метильную группу.
В других вариантах осуществления гидразидсодержащие соединения, как правило, описываются формулой (I), где X представляет собой СН. Такие соединения в общем описываются следующей формулой (1Ь):
(Πι) где Υ представляет собой водород или алкильную группу, такую как замещенная или незамещенная, насыщенная линейная или разветвленная углеводородная группа или цепь (например, от С1 до С8), включая, например, метил, этил, изопропил, трет-бутил, гептил, н-октил, додецил, октадецил, амил, 2этилгексил; В1 независимо выбран из замещенной или незамещенной фенильной группы, замещенной или незамещенной гетероароматической группы, такой как хинолинильная группа, замещенной или незамещенной антраценильной группы и замещенной или незамещенной нафталенильной группы; В2 представляет собой замещенную или незамещенную фенильную группу; и В2 независимо выбран из водорода или алкильной группы.
В некоторых вариантах осуществления Υ представляет собой алкильную группу, такую как замещенная или незамещенная, насыщенная линейная или разветвленная углеводородная группа или цепь (например, от С1 до С8), включая, например, метил, этил, изопропил, трет-бутил, гептил, н-октил, додецил, октадецил, амил, 2-этилгексил; и В1 независимо выбран из замещенной или незамещенной фениль
- 11 011074 ной группы, замещенной или незамещенной гетероароматической группы, такой как хинолинильная группа, замещенной или незамещенной антраценильной группы и замещенной или незамещенной нафталенильной группы; В2 представляет собой замещенную или незамещенную фенильную группу; и В3 независимо выбран из водорода или алкильной группы.
В конкретных вариантах осуществления К независимо выбран из моно(галоген)фенильной группы, такой как 2-, 3- или 4- хлорфенил; моно(алкил)фенила, такого как 2-, 3- или 4-метилфенил; нафталенильной группы, такой как 1- или 2-нафталенил; моно- или ди(галоген)нафталенила, такого как 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-хлорнафталенил, 3,4- или 5,6-, или 5,7-, или 5,8-дихлорнафталенил; моно- или ди(гидрокси) нафталенила, такого как 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-гидроксинафталенил, 1,8-, 3,4-дигидроксинафталенил; моно- или ди, или три(алкокси) нафталенила, такого как 1-, 3-, 5-, 6-, 7- или 8-метоксинафталенил, 5,8диметоксинафталенил, 1,4,8-триметоксинафталенил; моно- или ди(алкил)нафталенила, такого как 1-, 3-, 4-, 5- или 6-метилнафталенил, 4,5-, 4,6-диметилнафталенил; моно(гидрокси)моно или ди(сульфо)нафталенила, такого как 4-гидрокси-2-сульфонафталенил, 8-гидрокси-3,6дисульфонафталенил; моно(алкил)моно- или ди(алкокси)нафталенила, такого как 1-метил-5,6диметоксинафталенил; или хинолинильной группы, такой как 6-хинолинил; В2 независимо выбран из группы, включающей замещенные фенильные группы, такие как моно(галоген)фенильная группа, такая как 2-, 3- или 4-бромфенил; моно или ди(гидроксил)фенильная группа, такая как 2,3,4-гидроксифенил и
2.4- дигидроксифенил; моно- или ди(галоген)моно-, ди-, или три(гидроксил)фенил, такой как 3,5-дибром-
2,4,6-тригидроксифенил, 3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил, 3,5-дибром-4-гидроксифенил и 3-бром-4гидроксифенил; моно- или ди(галоген)моно- или ди(гидроксил)моно-, или ди(алкокси)фенил, такой как
3.5- дибром-2-гидрокси-4-метоксифенил; и В3 независимо выбран из водорода или алкильной группы. Соединения, описанные формулой (1Ь), обычно описаны как гидразиды глицина.
В следующих вариантах осуществления гидразидсодержащие соединения и производные формулы (1Ь) могут включать соединения, где Υ представляет собой водород; К независимо выбран из моно(галоген)фенильной группы, такой как 2-, 3- или 4-хлорфенильная группа, нафталенильной группы, такой как 2-нафталенил или 1-нафталенил; В2 независимо выбран из ди(галоген)моно- или ди(гидроксил)фенильной группы, такой как 3,5-дибром-2,4-дигидроксифенильная группа, 3,5-дибром-4гидроксифенильная группа; и В3 представляет собой водород или метильную группу.
Еще в некоторых других вариантах осуществления гидразидсодержащие соединения, как правило, описываются формулой (I), где X представляет собой карбонил. Такие соединения в общем виде описываются следующей формулой (1с):
где Υ представляет собой водород или алкильную группу, такую как замещенная или незамещенная, насыщенная линейная или разветвленная углеводородная группа или цепь (например, от С1 до С8), включая, например, метил, этил, изопропил, трет-бутил, гептил, н-октил, додецил, окстадецил, амил, 2этилгексил; В! независимо выбран из замещенной или незамещенной фенильной группы, замещенной или незамещенной гетероароматической группы, такой как хинолинильная группа, замещенной или незамещенной антраценильной группы и замещенной или незамещенной нафталенильной группы; В2 представляет собой замещенную или незамещенную фенильную группу; и В3 независимо выбран из водорода или алкильной группы.
В некоторых вариантах осуществления Υ представляет собой алкильную группу, такую как замещенная или незамещенная, насыщенная линейная или разветвленная углеводородная группа или цепь (например, от С1 до С8), включая, например, метил, этил, изопропил, трет-бутил, гептил, н-октил, додецил, октадецил, амил, 2-этилгексил; В1 независимо выбран из замещенной или незамещенной фенильной группы, замещенной или незамещенной гетероароматической группы, такой как хинолинильная группа, замещенной или незамещенной антраценильной группы и замещенной или незамещенной нафталенильной группы; В2 представляет собой замещенную или незамещенную фенильную группу; и В3 независимо выбран из водорода или алкильной группы.
В конкретных вариантах осуществления Κι независимо выбран из моно(галоген)фенильной группы, такой как 2-, 3- или 4-хлорфенил; моно(алкил)фенила, такого как 2-, 3- или 4-метилфенил; нафталенильной группы, такой как 1- или 2-нафталенил; моно- или ди(галоген)нафталенила, такого как 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-хлорнафталенил, 3,4- или 5,6-, или 5,7-, или 5,8-дихлорнафталенил; моно- или ди(гидрокси)нафталенила, такого как 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8гидроксинафталенил, 1,8-, 3,4-дигидроксинафталенил; моно- или ди-, или три(алкокси)нафталенила, такого как 1-, 3-, 5-, 6-, 7- или 8-метоксинафталенил, 5,8-диметоксинафталенил, 1,4,8- 12 011074 триметоксинафталенил; моно- или ди(алкил)нафталенила, такого как 1-, 3-, 4-, 5- или 6метилнафталенил, 4,5-, 4,6-диметилнафталенил; моно(гидрокси)моно или ди(сульфо)нафталенила, такого как 4-гидрокси-2-сульфонафталенил, 8-гидрокси-3,6-дисульфонафталенил; моно(алкил)моно- или ди(алкокси)нафталенила, такого как 1-метил-5,6- диметоксинафталенил; или хинолинильной группы, такой как 6-хинолинил; К.2 независимо выбран из группы, включающей замещенные фенильные группы такие как моно(галоген)фенильная группа, такая как 2-, 3- или 4-бромфенил; моно или ди(гидроксил)фенильная группа, такая как 2-, 3-, 4-гидроксифенили 2,4-дигидроксифенил; моно- или ди(галоген)моно-, ди-, или три(гидроксил)фенил, такой как 3,5-дибром-2,4,6-тригидроксифенил, 3,5дибром-2,4-дигидроксифенил, 3,5-дибром-4-гидроксифенил и 3-бром-4-гидроксифенил; моно- или ди(галоген)моно- или ди(гидроксил)моно-, или ди(алкокси)фенил, такой как 3,5-дибром-2-гидрокси-4метоксифенил; и К3 независимо выбран из водорода или алкильной группы. Соединения, описанные формулой (1с), обычно описаны как гидразиды оксаминовой кислоты.
В следующих вариантах осуществления гидразидсодержащие соединения и производные формулы (1с) могут включать соединения, где Υ представляет собой водород; В1 представляет собой нафталенильную группу, такую как 2-нафталенил или 1-нафталенил; К.2 представляет собой ди(галоген)-моно- или ди(гидроксил)фенильную группу, такую как 3,5-дибром-2,4-дигидроксифенильная группа, 3,5-дибром-4гидроксифенильная группа; и К.3 представляет собой водород или метильную группу.
В некоторых вариантах осуществления гидразидсодержащие соединения могут включать следую-
- 13 011074
- 14 011074
обеспечения желательных характеристик. Предпочтительно, модификация соединений не оказывает существенного или нежелательного неблагоприятного влияния на желаемые характеристики гидразидсодержащих соединений, например, на способность ингибировать функцию СЕТИ и растворимость соединения в воде. Например, описанные здесь соединения могут быть модифицированы таким образом, чтобы снизить способность соединения проникать черех клеточную мембрану, например клеточную мембрану клеточной линии поверхности слизистой оболочки, например, клетки желудочно-кишечного тракта. Непроницаемость через мембрану для описанных здесь соединений может быть повышена путем, например, увеличения размера или других физических характеристик соединения.
В таких вариантах осуществления проницаемость через мембрану соединений, описываемых в общем формулой I, понижают путем добавления полярных групп, таких как сульфо и алкилкарбоксильные группы. Такие соединения описываются в общем следующей формулой (I):
- 15 011074
Υ о
Η *з (Ι) где Υ независимо выбран из алкильной группы; алкильной группы, имеющей полярные заместители, такие как сульфогруппа или карбонильная группа, или линкера, такого как амидная связь или простой эфирный линкер, для обеспечения присоединения одной или нескольких больших полярных молекул, таких как полиоксиалкиловый простой полиэфир (такой как полиэтиленгликоль (РЕС), полипропиленгликоль, полигидроксиэтиловый глицерин), дисахариды, полиалкилимины и тому подобные, где Υ может дополнительно включать присоединенную(ые) полярную(ые) молекулу(ы); X независимо выбран из алкильной группы или карбонильной группы; К1 независимо выбран из замещенной или незамещенной фенильной группы, замещенной или незамещенной гетероароматической группы, такой как хинолинильная группа, замещенной или незамещенной антраценильной группы и замещенной или незамещенной нафталенильной группы; К2 представляет собой замещенную или незамещенную фенильную группу; и К3 независимо выбран из водорода или алкильной группы.
В конкретных вариантах осуществления Υ независимо выбран из замещенной или незамещенной алкильной группы, такой как замещенная или незамещенная, насыщенная линейная или разветвленная углеводородная группа или цепь (например, от С1 до С8), включая, например, метил, этил, изопропил, трет-бутил, гептил, н-октил, додецил, октадецил, амил, 2-этилгексил; алкильная группа содержит полярные группы, такие как гидрокси, сульфо, карбоксилат, и замещенные и незамещенные карбоксамидные группы (где иллюстративные группы включают 3-сульфопропил, 4-сульфобутил, карбоксиметил, 2карбоксипропил, 2-метокси-2-оксоэтил, 3-метокси-3-оксопропил); или линкера, такого как амидная связь или простой эфирный линкер, для обеспечения присоединения одной или нескольких больших полярных молекул, таких как полиоксиалкиловый простой полиэфир (такой как полиэтиленгликоль (РЕС), полипропиленгликоль, полигидроксиэтиловый глицерин), полиэтиленимины, дисахариды, трисахариды, полиалкилимины, небольшие аминодекстраны и тому подобные, где Υ может дополнительно включать присоединенную(ые) полярную(ые) молекулу(ы).
В некоторых вариантах осуществления азот, участвующий в ненасыщенной амидной связи соединения, может быть замещен, как проиллюстрировано ниже
«э (1<1) где X независимо выбран из алкильной группы или карбонильной группы; К.1 независимо выбран из замещенной или незамещенной фенильной группы, замещенной или незамещенной гетероароматической группы, такой как хинолинильная группа, замещенной или незамещенной антраценильной группы и замещенной или незамещенной нафталенильной группы; Р2 представляет собой замещенную или незамещенную фенильную группу; и К.3 независимо выбран из водорода или алкильной группы; и Υ' независимо выбран из замещенной или незамещенной алкильной группы; такой как замещенная или незамещенная, насыщенная линейная или разветвленная углеводородная группа или цепь (например, от С1 до С8), включая, например, метил, этил, изопропил, трет-бутил, гептил, н-октил, додецил, октадецил, амил, 2этилгексил; алкильной группы, содержащей полярные группы, такие как гидрокси, сульфо, карбоксилат, и замещенные и незамещенные карбоксамидные группы (где иллюстративные группы включают 3сульфопропил, 4-сульфобутил, карбоксиметил, 2-карбоксипропил, 2-метокси-2-оксоэтил, 3-метокси-3оксопропил); или линкера, такого как амидная связь или простой эфирный линкер, для обеспечения присоединения одной или нескольких больших полярных молекул, таких как полиоксиалкиловый простой полиэфир (такой как полиэтиленгликоль (РЕС), полипропиленгликоль, полигидроксиэтиловый глицерин), полиэтиленимины, дисахариды, трисахариды, полиалкилимины, небольшие аминодекстраны и тому подобные, где Υ' может дополнительно включать присоединенную(ые) полярную(ые) молекулу(ы).
В некоторых вариантах осуществления X независимо выбран из карбонильной группы; алкильной группы, такой как замещенная или незамещенная, насыщенная линейная или разветвленная углеводородная группа или цепь (например, от С1 до С8), включая, метилен, замещенных алкильных групп, таких как пропен; замещенных или незамещенных фенильных групп, таких как фенильная группа, содержащая полярные группы; или линкера, несущего полярные группы; К.1 независимо выбран из моно(галоген)фенильной группы, такой как 2-, 3- или 4-хлорфенил; моно(алкил)фенила, такого как 2-, 3или 4-метилфенил; нафталенильной группы, такой как 1- или 2-нафталенил; моно- или ди(галоген)нафталенила, такого как 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-хлорнафталенил, 3,4- или 5,6-, или 5,7-, или
- 16 011074
5,8-дихлорнафталенил; моно- или ди(гидрокси)нафталенила, такого как 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8гидроксинафталенил, 1,8-, 3,4-дигидроксинафталенил; моно- или ди-, или три(алкокси)нафталенила, такого как 1-, 3-, 5-, 6-, 7- или 8-метоксинафталенил, 5,8-диметоксинафталенил, 1,4,8триметоксинафталенил; моно- или ди(алкил)нафталенила, такого как 1-, 3-, 4-, 5- или 6метилнафталенил, 4,5-, 4,6-диметилнафталенил; моно(гидрокси)моно или ди(сульфо)нафталенила, такого как 4-гидрокси-2-сульфонафталенил, 8-гидрокси-3,6-дисульфонафталенил; моно(алкил)моно- или ди(алкокси)нафталенила, такого как 1-метил-5,6-диметоксинафталенил; или хинолинильной группы, такой как 6-хинолинил; И2 независимо выбран из группы, включающей замещенные фенильные группы, такие как моно(галоген)фенильная группа, такая как 2-, 3- или 4-бромфенил; моно или ди(гидроксил)фенильная группа, такая как 2, 3, 4-гидроксифенил и 2,4-дигидроксифенил; моно- или ди(галоген)моно-, ди-, или три(гидроксил)фенил, такой как 3,5-дибром-2,4,6-тригидроксифенил, 3,5дибром-2,4-дигидроксифенил, 3,5-дибром-4-гидроксифенил и 3-бром-4-гидроксифенил; моно- или ди(галоген)моно- или ди(гидроксил)моно-, или ди(алкокси)фенил, такой как 3,5-дибром-2-гидрокси-4метоксифенил; и И3 независимо выбран из водорода или алкильной группы.
В некоторых вариантах осуществления X в соединении может быть замещенным, как проиллюстрировано ниже
О
(1е) где X представляет собой алкильную группу; И£ независимо выбран из замещенной или незамещенной фенильной группы, замещенной или незамещенной гетероароматической группы, такой как хинолинильная группа, замещенной или незамещенной антраценильной группы и замещенной или незамещенной нафталенильной группы; И2 представляет собой замещенную или незамещенную фенильную группу; И3 независимо выбран из водорода или алкильной группы; и Υ независимо выбран из замещенной или незамещенной алкильной группы; такой как замещенная или незамещенная, насыщенная линейная или разветвленная углеводородная группа или цепь (например, от С1 до С8), включая, например, метил, этил, изопропил, трет-бутил, гептил, н-октил, додецил, окстадецил, амил, 2-этилгексил; алкильной группы, содержащей полярные группы, такие как гидрокси, сульфо, карбоксилат, и замещенные и незамещенные карбоксамидные группы (где иллюстративные группы включают 3-сульфопропил, 4-сульфобутил, карбоксиметил, 2-карбоксипропил, 2-метокси-2-оксоэтил, 3метокси-3-оксопропил); или линкера, такого как амидная связь или простой эфирный линкер, для обеспечения присоединения одной или нескольких больших полярных молекул, таких как замещенная или незамещенная фенильная группа, полиоксиалкиловый простой полиэфир (такой как полиэтиленгликоль (РЕС), полипропиленгликоль, полигидроксиэтиловый глицерин), полиэтиленимины, дисахариды, трисахариды, полиалкилимины, небольшие аминодекстраны, дендримеры 0-10 поколения и тому подобные, где Υ может дополнительно включать присоединенную(ые) полярную(ые) молекулу(ы).
В некоторых вариантах осуществления X представляет собой замещенную алкильную группу, такую как метильная группа, содержащая полярные группы или линкер, связанный с полярными группами; И1 независимо выбран из моно(галоген)фенильной группы, такой как 2-, 3- или 4-хлорфенил; моно(алкил)фенила, такого как 2-, 3- или 4-метилфенил; нафталенильной группы, такой как 1- или 2-нафталенил; моно- или ди(галоген)нафталенила, такого как 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-хлорнафталенил, 3,4- или 5,6-, или 5,7-, или 5,8дихлорнафталенил; моно- или ди(гидрокси)нафталенила, такого как 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8гидроксинафталенил, 1,8-, 3,4-дигидроксинафталенил; моно- или ди-, или три(алкокси)нафталенила, такого как 1-, 3-, 5-, 6-, 7- или 8-метоксинафталенил, 5,8-диметоксинафталенил, 1,4,8-триметоксинафталенил; моно- или ди(алкил)нафталенила, такого как 1-, 3-, 4-, 5- или 6-метилнафталенил, 4,5-, 4,6-диметилнафталенил; моно(гидрокси)моно или ди(сульфо)нафталенила, такого как 4-гидрокси-2-сульфонафталенил, 8-гидрокси-3,6дисульфонафталенил; моно(алкил)моно- или ди(алкокси)нафталенила, такого как 1-метил-5,6диметоксинафталенил; или хинолинильной группы, такой как 6-хинолинил; И2 независимо выбран из группы, включающей замещенные фенильные группы такие как моно(галоген)фенильная группа, такая как 2-, 3- или 4-бромфенил; моно или ди(гидроксил)фенильная группа, такая как 2, 3, 4-гидроксифенил и
2.4- дигидроксифенил; моно- или ди(галоген)моно-, ди-, или три(гидроксил)фенил, такой как 3,5-дибром2,4,6-тригидроксифенил, 3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил, 3,5-дибром-4-гидроксифенил и 3-бром-4гидроксифенил; моно- или ди(галоген)моно- или ди(гидроксил)моно-, или ди(алкокси)фенил, такой как
3.5- дибром-2-гидрокси-4-метоксифенил; и И3 независимо выбран из водорода или алкильной группы, и
Υ независимо выбран из алкильной группы; алкильной группы, содержащей полярные заместители, такие как сульфогруппа или карбокисльная группа; или линкера, такого как амидная связь или простой эфирный линкер, для обеспечения присоединения одной или нескольких больших полярных молекул, полиоксиалкилового простого полиэфира (такого как полиэтиленгликоль
- 17 011074 (РЕС), полипропиленгликоль, полигидроксиэтиловый глицерин), дисахаридов, полиэтилениминов, замещенной или незамещенной фенильной группы, такой как 2,4-дигидрокси-3,5-дибромфенильная группа, 2,4-динатрийдисульфофенильная группа, и 3-мононатриймоносульфофенильная группа, где Υ может дополнительно включать присоединенную(ые) полярную(ые) молекулу(ы).
В некоторых вариантах осуществления гидразидсодержащее соединение может иметь следующую формулу:
, дисахарид/полиамины/РЕб дисахарид/амины/РЕО ,
- 18 011074
Вг
В следующих вариантах осуществления гидразидсодержащие соединения димеризованы с исполь- 19 011074 зованием бифункционального линкера с варьируемой длиной цепи. Такие соединения не проникают через клетку вследствие большой, объемной природы и стерических затруднений. В конкретных вариантах осуществления соединения, являющиеся предметом изобретения, в общем виде описаны следующей формулой (И):
где Ζ представляет собой мономерное или полимерное звено, такое как полиоксиалкиловый простой полиэфир (такой как полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, полигидроксиэтиловый глицерин), линейный полиамин или бифункциональный полисахарид; и п находится в диапазоне от 0 до 500, от 1 до 450, от 2 до 400, от 5 до 300, от 10 до 250, от 20 до 200, от 30 до 150, от 40 до 100, от 50 до 90 и тому подобном. В некоторых вариантах осуществления η находится в диапазоне от 0 до 100, от 1 до 95, от 10 до 90, от 20 до 80, от 30 до 70, от 40 до 60, и тому подобном. В конкретных вариантах осуществления X независимо выбран из алкильной группы или карбонильной группы; Υ независимо выбран из алкильной группы; алкильной группы, содержащей полярные заместители, такие как сульфогруппа или карбоксильная группа; или линкера, такого как амидная связь или простой эфирный линкер, для обеспечения присоединения одной или нескольких больших полярных молекул, полиоксиалкилового простого полиэфира (такого как полиэтиленгликоль (РЕС), полипропиленгликоль, полигидроксиэтиловый глицерин), дисахаридов, полиэтилениминов, и тому подобного, где Υ может дополнительно включать присоединенную(ые) полярную(ые) молекулу(ы); В| независимо выбран из замещенной фенильной группы, хинолинильной группы, антраценильной группы и нафталенильной группы; В2 представляет собой замещенную фенильную группу; В3 независимо выбран из водорода или алкильной группы; или их фармацевтически приемлемое производное, индивидуальный стереоизомер или их смесь.
В следующих вариантах осуществления изобретения гидразидсодержащее соединение может иметь следующую формулу:
Фармацевтические препараты
Изобретение также относится к фармацевтическим препаратам, включающим рассматриваемые гидразидсодержащие соединения, описанные выше. Рассматриваемые соединения могут быть введены в состав различных композиций, предназначенных для введения различными путями. Более конкретно, соединения по настоящему изобретению могут быть введены в состав фармацевтической композиции путем объединения с подходящими фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями, эксципиентами и/или адъювантами и могут быть введены в препараты, находящиеся в твердом, полутвердом, жидком или газообразном виде, такие как таблетки, капсулы, порошки, гранулы, мази, растворы, суппозитории, инъекционные препараты, ингаляторы и аэрозоли. Предпочтительно композиции не содержат ДМСО (диметилсульфоксид) в обнаруживаемом количестве и получены с использованием усилителя проницаемости, отличающегося от ДМСО. Препараты могут быть разработаны для введения субъектам или пациентам, нуждающимся в этом, с помощью ряда различных путей, которые могут быть парентеральными или энтеральными. Иллюстративные пути введения включают пероральный, буккальный, па
- 20 011074 рентеральный, внутрибрюшинный, внутрикожный, чрезкожный, внутритрахальный и т.д. пути введения.
В фармацевтических дозированных формах рассматриваемые соединения по изобретению можно вводить в виде их фармацевтически приемлемых производных, таких как соль, или их также можно использовать сами по себе или в виде подходящей комбинации, а также комбинации с другими фармацевтически активными соединениями. Следующие способы и эксципиенты являются только иллюстративными и не предназначены для какого-либо ограничения.
В одном варианте осуществления представляющего особый интерес соединения согласно изобретению вводят в желудочно-кишечный тракт субъекта таким образом, чтобы обеспечить пониженную секрецию жидкости. Подходящие композиции для данного варианта осуществления изобретения включают любую композицию, которая обеспечивает доставку соединения к поверхности желудочно-кишечного тракта, в частности к поверхности кишечника.
Для пероральных композиций рассматриваемые соединения можно использовать сами по себе или в сочетании с подходящими вспомогательными добавками для получения таблеток, порошков, гранул или капсул, например, с использованием обычных вспомогательных добавок, таких как лактоза, маннит, кукурузный крахмал или картофельный крахмал; вместе со связующими веществами, такими как крахмал, желатин, природные сахара, такие как глюкоза или бета-лактоза, кукурузные подсластители, природные и синтетические камеди, такие как аравийская камедь, трагакантовая камедь или альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлоза, полиэтиленгликоль, воски, кристаллическая целлюлоза, производные целлюлозы и аравийская камедь; вместе с дезинтегрирующими веществами, такими как кукурузный крахмал, картофельный крахмал или карбоксиметилцеллюлоза натрия, метилцеллюлоза, агар, бентонит или ксантановая камедь; вместе с лубрикантами, такими как тальк, олеат натрия, стеарат магния, стеарат натрия, бензоат натрия, ацетат натрия или хлорид натрия; и, при желании вместе с разбавителями, буферными агентами, увлажняющими агентами, консервантами, красителями и ароматизаторами. Особый интерес представляет композиция рассматриваемых гидразидсодержащих соединений с буферным агентом для обеспечения защиты соединения от низкого рН в желудочной среде. Также может оказаться предпочтительным обеспечение оболочки, растворяющейся в кишечном тракте. В одном варианте осуществления соединения вводят в состав препаратов для пероральной доставки вместе с ароматизатором, например, в виде жидкой, твердой или полутвердой композиции.
Пероральные композиции могут быть обеспечены в виде желатиновых капсул, которые могут содержать активное вещество и порошкообразные носители, такие как лактоза, крахмал, производные целлюлозы, стеарат магния, стеариновая кислота и тому подобные. Аналогичные носители и разбавители можно использовать для получения таблеток, изготавливаемых методом прессования. Таблетки и капсулы могут быть получены в виде продуктов с замедленным высвобождением для обеспечения непрерывного высвобождения активных ингредиентов в течение некоторого промежутка времени. Таблетки, полученные прессованием, могут быть покрыты сахарной оболочкой или пленочным покрытием для маскирования какого-либо неприятного вкуса и защиты таблетки от действия атмосферы или покрыты растворяющейся в кишечном тракте оболочкой для селективного разрушения в желудочно-кишечном тракте. Жидкие дозированные формы для перорального введения могут содержать красители и/или ароматизаторы для увеличения одобрения пациентов.
Другие подходящие пероральные композиции включают те, которые предназначены для замедленного высвобождения, которое может быть контролируемым высвобождением соединения. Такие композии включают гидрогели, микрочастицы и другие дозированные формы и композиции, известные в данной области.
Воду, подходящее масло, физиологический раствор, водный раствор декстрозы и растворы родственных сахаров и гликолей, таких как пропиленгликоль или полиэтиленгликоль, можно использовать в качестве носителей для парентеральных растворов. Такие растворы также могут содержать растворимую в воде соль активного ингредиента, подходящие стабилизирующие агенты и, при необходимости, буферные вещества. Подходящие стабилизирующие агенты включают агенты-антиокислители, такие как бисульфат натрия, сульфит натрия или аскорбиновая кислота, или сами по себе или в виде комбинации, лимонная кислота и ее соли и натрий-ЭДТА (натриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты). Парентеральные растворы также могут содержать консерванты, такие как хлорид бензалькония, метил- или пропилпарабены и хлорбутанол.
Рассматриваемые соединения согласно изобретению могут быть введены в состав препаратов для инъекций путем растворения, суспендирования или эмульгирования их в водном или неводном растворителе, таком как растительное или другие аналогичные масла, синтетические глицериды алифатических кислот, сложные эфиры высших алифатических кислот или пропиленгликоль; и, при желании, вместе с обычными вспомогательными добавками, такими как солюбилизаторы, изотонические агенты, суспендирующие агенты, эмульгирующие агенты, стабилизаторы и консерванты. При желании, применяемые солюбилизаторы могут включать витамин Е ТРО8 (ά-α-токоферилполиэтиленгликоль 1000 сукцинат), циклодекстрины и тому подобные.
Кроме того, рассматриваемые соединения могут быть введены в состав суппозиториев путем смешивания их с различными основами, такими как эмульгирующие основы или растворимые в воде осно- 21 011074 вы. Соединения по настоящему изобретению можно вводить ректально с помощью суппозитория. Суппозиторий может включать носители, такие как масло какао, карбовоски и полиэтиленгликоли, которые плавятся при температуре тела, оставаясь твердыми при комнатной температуре.
Единичные формы дозировки для перорального или ректального введения, такие как сиропы, эликсиры и суспензии, можно обеспечить в каждом случае с помощью единичной дозы, например, чайной ложки, столовой ложки, таблетки или суппозитория, содержащих определенное количество композиции, содержащей один или несколько ингибиторов. Аналогично, единичные формы дозировки для инъекции или внутривенного введения могут включать ингибитор(ы) в композиции в виде раствора в стерильной воде, обычном физиологическом растворе или другом фармацевтически приемлемом носителе.
Соединения по изобретению можно использовать в виде аэрозольных препаратов для введения путем ингаляции. Соединения по настоящему изобретению могут быть введены в композиции вместе со способными находиться под давлением приемлемыми пропеллентами, такими как дихлордифторметан, пропан, азот и тому подобные.
В одном варианте осуществления представляет интерес местное введение (например, чрескожное введение). Наружные композиции могут иметь вид чрезкожного пластыря, мази, пасты, лосьона, крема, геля и тому подобного. Наружные композиции могут включать один или несколько агентов проницаемости, загустителей, разбавителей, эмульгаторов, диспергирующих вспомогательных добавок или связующих веществ. Когда соединение вводят в состав композиции для чрезкожной доставки, соединение может быть введено в состав препарата вместе или для применения вместе с усилителем проницаемости. Усилители проницаемости, которые включают химические усилители проницаемости и физические усилители проницаемости, облегчают доставку соединения через кожу и могут также упоминаться взаимозаменяемо как «усилители всасываемости». Физические усилители проницаемости включают, например, электрофоретические методы, такие как ионофорез, применение ультразвука (или «фонофорез») и тому подобные. Химические усилители проницаемости представляют собой агенты, которые вводят или до, вместе или сразу же после введения соединения, что увеличивает проницаемость кожи, в частности 51гаЦцп согпеит (верхнего слоя) для обеспечения повышенной проницаемости лекарственного средства через кожу.
Соединения, которые используют для повышения проницаемости через кожу, включают сульфоксиды, диметилсульфоксид (ДМСО) и децилметилсульфоксид (Сю М8О); простые эфиры, такие как моноэтиловый эфир диэтиленгликоля, декаоксиэтилен-олеиловый простой эфир и монометиловый эфир диэтиленгликоля; поверхностно-активные вещества, такие как лаурат натрия, лаурилсульфат натрия, бромид цетилтриметиламмония, хлорид бензалькония, полоксамер (Ро1охатег (231, 182, 184)), Тетееп (20, 40, 60, 80) и лецитин; 1-замещенные азациклогептан-2-оны, в частности, 1-ндодециклазациклогептан-2-он; спирты, такие как этанол, пропанол, октанол, бензиловый спирт и тому подобные; вазелины, такие как вазелин (петролатум), минеральное масло (жидкий вазелин) и тому подобные; жирные кислоты, такие как С8-С22 и другие жирные кислоты (например, изостеариновая кислота, октановая кислота, олеиновая кислота, лауриновая кислота, валериановая кислота); С8-С22 жирные спирты (например, олеиловый спирт, лауриловый спирт); низшие алкиловые сложные эфиры С8-С22 жирных кислот и других жирных кислот (например этилолеат, изопропилмиристат, бутилстеарат, метиллаурат, изопропилмиристат, изопропилпальмитат, метилпропионат, этилолеат); моноглицериды С8-С22 жирных кислот (например, монолаурат глицерина); простой эфир полиэтиленгликоля и тетрагидрофурфурилового спирта; 2-(2-этоксиэтокси)этанол; монометиловый простой эфир диэтиленгликоля; алкилариловые простые эфиры полиэтиленоксида; монометиловые эфиры полиэтиленоксида; диметиловые простые эфиры полиэтиленоксида; ди-низшие алкиловые сложные эфиры С6-С8 дикарбоновых кислот (например, диизопропиладипат); этилацетат; ацетоуксусный эфир; многоатомные спирты и их сложные эфиры, такие как пропиленгликоль, этиленгликоль, глицерин, бутандиол, полиэтиленгликоль и монолаурат полиэтиленгликоля; амиды и другие азотсодержащие соединения, такие как мочевины, диметилацетамид (ДМА), диметилформамид (ДМФ), 2-пирролидон, Ν-алкилпирролидон, например, 1-метил-2пирролидон; этаноламин, диэтаноламин и триэтаноламин; терпены; алканоны и органические кислоты, в частности, салициловая кислота и салицилаты, лимонная кислота и янтарная кислота. Дополнительные химические и физические усилители проницаемости описаны, например, в Тгап§6егта1 ОеНуегу о£ Эгид®. А. Е. Кубошеик (ΕΌ) 1987 СКЬ Рге55; Регси1апеои5 Репейайоп Епйапсегк, еб5. 8тйй е! а1. (СКС Рге55, 1995); Ьепиегиак е! а1., I. Рйагт. Рйагтасо1. 2002; 54 (4): 499-508; Кагапбе е! а1., Рйагт. Ке5. 2002; 19 (5): 655-60; УабФ е! а1., I. Рйагт. 8οΐ. 2002 1и1у; 91 (7): 1639-51; Уеп!ига е! а1., I. Пгид Тагде! 2001; 9 (5): 37993; 8йокп е! а1., 1п!. I. Рйагт 2001; 228 (1-2): 99-107; 8и/ик1 е! а1., Бю1. Рйагт. Ви11. 2001; 24 (6): 698-700; А1ЬегО е! а1., I. Соп!го1 Ке1еа5е 2001; 71 (3): 319-27; Со1б8!еш е! а1., Иго1оду 2001; 57 (2): 301-5; Кщауашеп е! а1., Еиг. I. Рйагт. 8ск 2000; 10 (2): 97-102; и Теп)аг1а е! а1., 1п!. I. Рйагт. 1999; 192 (2): 147-58.
Когда соединения вводят в состав композиции вместе с химическим усилителем проницаемости, усилитель проницаемости выбирают таким образом, чтобы он был совместим с соединением, и он присутствует в количестве, достаточном для облегчения доставки соединения через кожу субъекта, например, для доставки соединения в систему кровообращения. В одном варианте осуществления соединение вводят в состав композиции вместе с усилителем проницаемости, не являющимся ДМСО.
- 22 011074
В одном варианте осуществления доставка соединения обеспечена в виде пластыря, например, чрезслизистого или чрезкожного пластыря, и в состав рецептуры может быть введен усилитель проницаемости. Пластырь обычно включает защитный слой, который является непроницаемым для соединения и других компонентов композиции, матрицу, контактирующую с одной стороной защитного слоя, где матрица обеспечивает замедленное высвобождение соединения, которое может быть контролируемым высвобождением, и клейкий слой, который находится на той же стороне защитного слоя, что и матрица. Матрица может быть выбрана так, чтобы она была подходящей для пути введения, и она может представлять собой, например, полимерную матрицу или матрицу на основе гидрогеля.
В зависимости от субъекта и состояния, подвергаемого лечению, и пути введения, рассматриваемые соединения можно вводить в дозировке, например, от 0,1 мкг до 10 мг/кг веса тела в сутки. Диапазон является широким, поскольку обычно эффективность терапевтического действия для различных млекопитающих широко меняется и для человека дозировки обычно в 20, 30 или даже 40 раз меньше (на единицу веса тела), чем для крысы. Аналогично способ введения может оказывать большое влияние на дозировку.
Типичная дозировка может представлять собой раствор, подходящий для внутривенной инъекции, таблетку, принимаемую от двух до шести раз в день или капсулу или таблетку замедленного высвобождения, принимаемую один раз в день и содержащую пропорционально более высокое содержание активного ингредиента и т.д. Эффект замедленного высвобождения может достигаться за счет использования материала капсулы, который растворяется при различных величинах рН, за счет капсул, содержимое которых медленно высвобождается под действием осмотического давления или с помощью любых других известных способов контролируемого высвобождения.
Для применения в рассматриваемых способах обсуждаемые соединения могут быть введены в состав рецептур вместе с другими фармацевтически активными агентами, включая другие ингибирующие СРТК агенты и агенты, которые блокируют хлоридные каналы кишечника.
Фармацевтически приемлемые эксципиенты, используемые в данном изобретении, такие как средыносители, адьюванты, носители и разбавители, легко доступны для общества. Более того, легко доступны для общества фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как агенты, регулирующие рН и буферные агенты, агенты, регулирующие изотоничность растворов, стабилизаторы, смачивающие агенты и тому подобные.
Специалистам в данной области будет легко понять, что уровни дозировки могут изменяться как функция конкретного соединения, тяжести симптомов и подверженности субъекта побочным действиям. Предпочтительные дозировки для данного соединения легко могут быть определены специалистами в данной области с помощью множества способов.
Разработаны наборы с единичными дозировками рассматриваемых соединений обычно в виде препаративных форм для перорального введения или инъекций. В такие наборы в дополнение к контейнерам, содержащим единичные дозировки, будут вкладываться информационные вкладыши с описанием применения и сопутствующих преимуществ лекарственных средств при лечении представляющего интерес патологического состояния.
Предпочтительными соединениями и единичными дозировками являются те, которые описаны выше.
Состояния, которые поддаются лечению с использованием ингибиторов СРТК по изобретению
Раскрытые в данном описании ингибиторы СРТК можно использовать для лечения СРТКопосредованного состояния. Т. е. любого состояния, нарушения или заболевания или симптомов такого состояния, нарушения или заболевания, которые возникают за счет активности СРТК, например, активности СРТК при транспорте ионов. Такие состояния, нарушения, заболевания или их симптомы поддаются лечению путем ингибирования активности СРТК, например, ингибирования СРТК ионного транспорта.
В одном варианте осуществления ингибиторы СРТК по изобретению используют для лечения состояний, связанных с аномально повышенной секрецией кишечника, в частности, с острой аномально повышенной секрецией кишечника. Активность СРТК вовлечена в секрецию кишечника в качестве ответной реакции на различные агонисты, включая холерный токсин (см., например, 8пуйег е! а1. 1982 Ви11. ТСогШ НеаИЬОгдап. 60: 605-613; Сйао е! а1. 1994 ЕМВО 1. 13: 1065-1072; К1шЬегд е! а1. 1971 1 С1т. !п\еМ. 50: 1218-1230). Таким образом, ингибиторы СРТК по изобретению можно вводить в количестве, эффективном для ингибирования СРТК ионного транспорта, и таким образом уменьшать выделение жидкости из кишечника. В таких вариантах осуществления ингибиторы СРТК в соответствии с изобретением обычно вводят через слизистую поверхность желудочно-кишечного тракта (например, посредством энтерального пути, например, перорально, внутрикишечно, ректально и тому подобными способами) или через слизистую поверхность ротовой или носовой полостей (например, внутриназально, буккально, сублингвально и тому подобными способами). В некоторых вариантах осуществления особый интерес представляет введение ингибитора СРТК по изобретению, который является относительно непроницаемым через мембрану (например, обладает пониженными характеристиками проницаемости через мембрану, например, вследствие модификации путем введения фрагментов РЕС (РЕСилирования) и тому
- 23 011074 подобного, как описано выше).
Таким образом, ингибиторы СЕТК можно использовать для лечения воспалительных заболеваний кишечника и диареи, в частности секреторной диареи. Секреторная диарея является основной причиной детской смертности в развивающихся странах, насчитывая примерно 5 миллионов смертей ежегодно (СаЬпс1 е! а1., 1994 8с1епсе 266: 107-109). В нескольких исследованиях, включая исследования с использованием СЕ мышей, показано, что СЕТК представляет собой обычный конечный путь для выделения кишечного хлорид-иона (и таким образом жидкости) в качестве ответной реакции на различные агонисты (8пубет е! а1., 1982, Ви11. \\'ог1б НеаИЪ Отдал. 60: 605-613; С1ао е! а1., 1994 ЕМВО. 1. 13: 1065-1072; и КттЬетд е! а1., 1971, С1т. Шуей. 50: 1218-1230).
Диарея, которая поддается лечению с использованием ингибиторов СЕТК по данному изобретению, может быть результатом воздействия различных патогенов и агентов, включая, но не ограничиваясь указанным, холерный токсин (У1Ьтю с1ю1ега). Е. со11 (в частности энтеротоксигенный (ЕТЕС)), 8Ыде11а, 8а1топе11а, Сатру1оЬас!ег, Сбойпбшт б1Гйсбе, паразитов (например, 61атб1а, Еп!атоеЬа Ыйо1у11са, Сгур!окропбюйк, Сус1о§рота), диарейных вирусов (например, ротавирусов), пищевого отравления или действия токсина, возникающего при повышенной кишечной секреции, опосредованной СЕТК. Другие виды диареи включают диарею, связанную со СПИДом (например, СПИД-связанная диарея), диареи, вызванные лекарственными средствами против СПИДа, такими как ингибиторы протеазы, и воспалительными желудочно-кишечными нарушениями, такими как язвенный колит, воспалительное заболевание кишечника (ГВИ), болезнь Крона и тому подобные. Сообщалось, что кишечные воспаления модулируют экспрессию трех основных медиаторов транспорта солей кишечника и могут вносить свой вклад в диарею при язвенном колите как посредством повышения трансэпителиальной секреции С11-, так и путем ингибирования эпителиальной абсорбции №1С1 (см., например, ЬоЫ е! а1., 2002, Ат. 1 РЬуйо1. 6айтот!ей. Ыует РЬуйо1. 283 (3): С567-75).
Ингибиторы СЕТК по изобретению также можно использовать при лечении таких состояний, как поликистозное заболевание почек, и, кроме того, их можно использовать в качестве лекарственных средств при мужском бесплодии, оказывают действие путем ингибирования активности СЕТК в яичках.
Скрининг ингибиторов СЕТК по изобретению может быть в дальнейшем проведен на моделях крупных животных (например, модели кролика, описанной в публикации 8р1та е! а1., 1981, !пГес1. [ттип. 32: 739-747). Кроме того, анализ выходящих испражнений с использованием живого вибриона У1Ьтю с1ю1егае также можно исследовать для того, чтобы дополнительно охарактеризовать ингибиторы СЕТК по изобретению.
Модели животных, не являющихся человеком, и модели тканей человека СЕТК-недостаточности
Ингибиторы СЕТК по изобретению также можно использовать для создания моделей заболеваний на животных, не являющихся человеком, где заболевание связано с пониженной функцией СЕТК (например, сниженный транспорт ионов). Имеются растущие подтверждения тому, что недостаточная секреция жидкости и макромолекул подслизистыми железами дыхательных путей приводит к ослабленному мукоцилиарному и бактериальному клиренсу у субъектов с СЕТК недостаточностью, в частности у тех, кто поражен кистозным фиброзом (СЕ); однако функциональные исследования на железах дыхательных путей человека были ограничены тяжелыми заболеваниями дыхательных путей, полученными во время трансплантации легкого (1ауататап е! а1. 2001 Ргос. №111. Асаб. 8с1. И8А 98: 8119-8123). Острое ингибирование СЕТК дает возможность определения роли СЕТК в секреции воды, соли и макромолекул подслизистыми железами. Высокая аффинность ингибиторов СЕТК дает возможность фармакологического создания моделей животных, не являющихся человеком, которые имитируют СЕТК-недостаточность у людей (например, имитируют СЕ фенотип человека). В частности, модели крупных животных СЕТКнедостаточности (например, СЕ) находят особое применение для оценки эффективности терапии СЕ, например, для скрининга агентов-кандидатов для лечения СЕТК-недостаточности и ее симптомов.
Ингибирование ионного транспорта посредством СЕТК может проявляться в виде заболеваний дыхательных путей и поджелудочной железы, а также в виде бесплодия у особей мужского пола. Например, ингибирование СЕТК каналов в легких и дыхательных путях оказывает влияние на поверхностную жидкость дыхательных путей, приводя к накоплению слизи, которая в свою очередь закупоривает дыхательные пути и собирается в виде массы на стенках легких, обеспечивая первичную окружающую среду для возникновения инфекции, что, в свою очередь, может привести к хроническому воспалению легких. Такое же явление существует и в поджелудочной железе, где накапливаемая слизь разрушает экзокринную функцию поджелудочной железы и не дает возможности незаменимым ферментам, перерабатывающим пищу, попадать в кишечник.
Такие модели животных, не являющихся человеком, можно генерировать путем введения ингибитора СЕТК в количестве, эффективном для снижения активности СЕТК в транспорте ионов.
Особый интерес привлекает применение ингибиторов СЕТК по изобретению для индуцирования кистозно-фиброзного (СЕ) фенотипа у животного, не являющегося человеком. Введение количества ингибитора СЕТК, эффективного для ингибирования СЕТК, например, в легком, эффективно имитирует дефицит СЕТК, выявленный при СЕ. Пути доставки ингибитора СЕТК подробно обсуждаются выше в данном описании. В зависимости от используемого животного, не являющегося человеком, рассматри
- 24 011074 ваемое соединение можно вводить в дозах, например, от 50 до 500 мкг/кг веса тела от одного до трех раз в день путем внутрибрюшинного, подкожного или другого пути введения для образования модели животного, не являющегося человеком. Дозировки при пероральном введении могут составлять до десятикратной дозы, используемой при внутрибрюшинном или подкожном введении.
Животные модели СЕТК-связанного заболевания на животных, не являющихся человеком, можно использовать в качестве моделей любого подходящего состояния, связанного с пониженной активностью СЕТК. Такие состояния включают те, которые связаны с мутациями СЕТК, где указанные мутации приводят к аномалиям в эпителиальном транспорте ионов и воды. Данные аномалии в свою очередь могут быть связаны с нарушениями в мукоцилиарном клиренсе дыхательных путей, а также другого слизистого эпителия и эпителия протоков. Состояния, которые можно фармакологически моделировать путем индуцирования СЕТК-дефицитного фенотипа у животного, не являющегося человеком, включают, но не ограничиваются указанным, кистозный фиброз (включая атипичный СЕ), идиопатический хронический панкреатит, дефекты семенных протоков, слабое заболевание легких, астму и тому подобные. Для обзора заболеваний, связанных с нарушенной функцией СЕТК, см., например, Νοοηο с1 а1. Кекрп Кек 2328-332 (2001). Образованные с помощью ингибитора СЕТК модели животных, не являющихся человеком, также могут служить моделями микробной инфекции (например, бактериальной, вирусной или грибковой инфекции, в частности респираторных инфекций) у СЕТК-дефицитных субъектов. В одном варианте осуществления, представляющем особый интерес, ингибиторы СЕТК по изобретению используют для фармакологического индуцирования кистозно-фиброзного фенотипа.
Животные, подходящие для применения с целью получения животных моделей по изобретению, включают любое животное, в частности млекопитающее, например, приматов, не являющихся людьми (например, обезьяна, шимпанзе, горилла и тому подобные), грызунов (например, крысы, мыши, песчанки, хомяки, хорьки, тому подобные), представителей отряда зайцеобразных, представителей семейства свиньих (например, свинья, миниатюрная свинья), лошадей, представителей семейства псовых, представителей семейства кошачьих, и тому подобных. Особый интерес представляют крупные животные.
Ингибиторы СЕТК также могут быть приведены в контакт с выделенной тканью человека для создания моделей заболевания ех νίνο. Такие ткани приводят в контакт с количеством ингибитора СЕТК, эффективным для уменьшения активности СЕТК в ткани, для чего может потребоваться как минимум 15 мин или такое время как два часа или более. Представляющие интерес ткани человека включают, но не ограничиваются указанным, легкое (включая трахею и дыхательные пути), печень, поджелудочную желеу, яички и тому подобные. На обработанных ингибитором тканях можно проводить физиологические, биохимические, геномные и другие исследования для идентификации новых терапевтическких целевых молекул, которые являются важными в патофизиологии заболевания. Например, выделенные ткани людей без СЕ могут быть подвергнуты действию ингибитора, достаточного для индуцирования СЕфенотипа, и такие исследования могут быть проведены для идентификации новых терапевтических целевых молекул, которые являются важными в патофизиологии СЕ.
Синтез соединений согласно изобретению
Соединения согласно изобретению могут быть получены способами, известными специалистам в данной области, или способами, аналогичными описанным далее.
Следует понимать, что следующее описание, комбинации заместителей и/или переменных в указанных формулах допустимо только в том случае, когда их введение приводит к стабильным соединениям.
Специалистам в данной области также следует понимать, что в описанном ниже способе может оказаться необходимой защита подходящими защитными группами для функциональных групп промежуточных соединений. Такие функциональные группы включают гидрокси, амино, меркапто группы и группу карбоновой кислоты. Подходящие защитные группы для гидроксигруппы включают триалкилсилил или диарилалкилсилил (например, трет-бутилдиметилсилил, трет-бутилдифенилсилил или триметилсилил), тетрагидропиранил, бензил и тому подобные. Подходящие защитные группы для амино, амидино и гуанидино групп включают трет-бутоксикарбонил, бензилоксикарбонил и тому подобные. Подходящие защитные группы для меркаптогруппы включают -С(О)-К (где К представляет собой алкил, арил или аралкил), р-метоксибензил, тритил и тому подобные. Подходящие защитные группы для группы карбоновой кислоты включают алкиловые, ариловые или аралкиловые сложные эфиры.
Защитные группы могут быть введены или удалены в соответствии со стандартными способами, которые хорошо известны специалистам в данной области и как указано в данном описании.
Применение защитных групп подробно описано в монографии Тйеобота ^. Сгеепе, Ре1ег Г. М. Жак. Рго1ее1Ке Сгоирк ίη Отдаше §упШек1к (1999), 3гб Еб., \УПеу-1Щегкс1епсе. Защитные группы также могут представлять собой полимерную смолу, такую как смола Ванга или смола на основе 2хлортритилхлорида.
Специалистам в данной области также будет понятно, что хотя такие защищенные производные соединений формулы (I), как описано выше (например, в разделе «Общий обзор» и разделе «Гидразидсодержащие соединения и производные»), могут не обладать сами по себе фармакологической активностью, их можно вводить млекопитающим, после чего они будут метаболизировать в организме с образо
- 25 011074 ванием соединений по изобретению, которые являются фармакологически активными. Такие производные следовательно могут быть описаны как «пролекарства». Все пролекарства соединений формулы (I) включены в объем настоящего изобретения.
Следующие реакционные схемы иллюстрируют способы получения соединений по изобретению. Понятно, что специалист в данной области способен получить соединения по изобретению аналогичными способами или способами, известными специалистам в данной области. Как правило, исходные соединения могут быть получены из таких источников как ЛИпсй или синтезированы в соответствии с литературными данными известными обычным специалистам в данной области (см., например, 8шйй и МатсЬ, Матсй'8 Абуапсеб Отдашс СйепиДгу: Кеасбопк, Месйапщтк, апб 8!тис!иге, 5(Н издание (\УПеу !п!егкаепсе, №\ν Уогк)). Кроме того, различные группы заместителей (например, К1, К2, К3 и X, и т.д.) для соединений по изобретению могут быть присоединены к исходным компонентам, промежуточным компонентам и/или конечным продуктам в соответствии со способами, известными специалистам в данной области.
Следующая реакционная схема 1 относится к получению соединений формулы (1), которые представляют собой соединения согласно изобретению, как описано выше (например, в разделах «Общий обзор» или «Гидразидсодержащие соединения и производные»), где Кь К2 и К3 являются такими, как описано выше (например, в разделах «Общий обзор» или «Гидразидсодержащие соединения и производные»).
Реакционная схема 1.
ν
I «Г
Диэтилоксалат или
Г идразин гидрат
О)
Этиловый эфир 2-иодпропионовой кислоты (Х=СНСН3) (А)
Этанол
(О
Обычно соединения формулы (I) получают, объединяя первоначально содержащий группу К1 терминальный амин, имеющий группу Υ, с диэтилоксалатом или соединением, содержащим X, таким как Хзамещенный этилиодацетат, где X является таким, как описано выше, используя по 10 ммоль каждого соединения.
Полученную реакционную смесь затем перемешивают в течение ночи при повышенной температуре. После охлаждения твердое вещество отфильтровывают и перекристаллизовывают из гексана, получая соединение формулы (А). Раствор соединения формулы (А) в этаноле затем нагревают при кипении с обратным холодильником с 12 ммоль гидразингидрата в течение промежутка времени, составляющего примерно 10 ч. Растворитель и избыток реагента затем отгоняют в вакууме. Продукт затем перекристаллизовывают из этанола, получая соединение формулы (В). Соединение формулы (В) затем объединяют с соединением с карбонильной группой (например, кетон или альдегид), содержащим группы К2, К3, в этаноле и затем нагревают при кипении с обратным холодильником в течение промежутка времени, составляющего примерно 3 ч, получая целевой продукт формулы (I).
Альтернативно, соединения формулы (I), где и X представляет собой алкильную группу, содержащую X! где X1 представляет собой алкильную группу, такую как замещенная или незамещенная, насыщенная линейная или разветвленная углеводородная группа или цепь (соединения формулы Ы), могут быть получены в соответствии со следующей реакционной схемой 2, где Кь К2 и К3 являются такими, как описано выше (например, в разделах «Общий обзор» или «Гидразидсодержащие соединения и производные»).
- 26 011074
Обычно, соединения формулы (1а) получают, объединяя первоначально содержащий группу В! терминальный амин, имеющий группу Υ, и этилиодацетат, содержащий группу Хь где Х1 является таким, как описано выше, используя по 10 ммоль каждого из них, с 20 ммоль ацетата натрия. Полученную реакционную смесь затем перемешивают при повышенной температуре в течение промежутка времени, составляющего примерно 3 ч. После охлаждения твердое вещество отфильтровывают и перекристаллизовывают из гексана, получая соединение формулы (С). Раствор соединения формулы (С) в этаноле затем нагревают при кипении с обратным холодильником с 12 ммоль гидразингидрата в течение промежутка времени, составляющего примерно 10 ч. Растворитель и избыток реагента затем отгоняют в вакууме. Продукт затем перекристаллизовывают из этанола, получая соединение формулы (Ό). Соединение формулы (Ό) затем объединяют с соединением, имеющим карбонильную группу (например, кетон или альдегид), содержащим группы В2, В3, в этаноле и затем нагревают при кипении с обратным холодильником в течение промежутка времени, составляющего примерно 3 ч, получая целевой продукт формулы (1а).
Следующая реакционная схема 3 предназначены для получения соединений формулы (1Ь), где X представляет собой СН2, которые представляют собой соединения согласно изобретению, как описано выше (например, в разделах «Общий обзор» или «Гидразидсодержащие соединения и производные»), где В1, В2 и В3 являются такими, как описано выше (например, в разделах «Общий обзор» или «Гидразидсодержащие соединения и производные»).
Реакционная схема 3.
Обычно, соединения формулы (1Ь) получают, объединяя первоначально содержащий группу Κι терминальный амин и этилиодацетат, используя по 10 ммоль каждого из них, с 20 ммоль ацетата натрия. Полученную реакционную смесь затем перемешивают при повышенной температуре в течение промежутка времени, составляющего примерно 3 ч. После охлаждения твердое вещество отфильтровывают и перекристаллизовывают из гексана, получая соединение формулы (Е). Раствор соединения формулы (Е) в этаноле затем нагревают при кипении с обратным холодильником с 12 ммоль гидразингидрата в течение промежутка времени, составляющего примерно 10 ч. Растворитель и избыток реагента затем отгоняют в вакууме. Продукт затем перекристаллизовывают из спирта, получая соединение формулы (Р). Соединение формулы (Р) затем объединяют в этаноле с соединением, имеющим карбонильную группу (например, кетон или альдегид), содержащим группы В2, В3. и затем нагревают при кипении с обратным холодильником в течение промежутка времени, составляющего примерно 3 ч, получая целевой продукт формулы (1Ь).
Альтернативно, соединения формулы (I), где X представляет собой карбонильную группу (соединения формулы 1с) могут быть получены в соответствии со следующей реакционной схемой 4, где Κ1, В2 и В3 являются такими, как описано выше в разделе «Общий обзор».
- 27 011074
Обычно соединения формулы (1Ь) получают, объединяя первоначально в толуоле содержащий группу Е1 терминальный амин, имеющий группу Υ, и диэтилоксалат, используя по 10 ммоль каждого из них. Полученную реакционную смесь затем перемешивают при повышенной температуре в течение промежутка времени, составляющего примерно 3 ч. После охлаждения твердое вещество отфильтровывают и перекристаллизовывают из гексана, получая соединение формулы (С). Раствор соединения формулы (С) в этаноле затем нагревают при кипении с обратным холодильником с 12 ммоль гидразингидрата в течение промежутка времени, составляющего примерно 10 ч. Растворитель и избыток реагента затем отгоняют в вакууме. Продукт затем перекристаллизовывают из этанола, получая соединение формулы (Н). Соединение формулы (Н) затем объединяют в этаноле с соединением, имеющим карбонильную группу (например, кетон или альдегид), содержащим группы Е2, Е3, и затем нагревают при кипении с обратным холодильником в течение промежутка времени, составляющего примерно 3 ч, получая целевой продукт формулы (1с).
Альтернативно, соединения формулы (I), где X представляет собой алкильную группу, содержащую Υ (соединения формулы 1е)может быть получено в соответствии со следующими реакционными схемами 5-8, где Еь Е2 и Е3 являются такими, как описано выше (например, в разделе «Общий обзор» и разделе «Гидразидсодержащие соединения и производные»), и где Υ независимо выбирают из замещенной или незамещенной алкильной группы, такой как замещенная или незамещенная, насыщенная линейная или разветвленная углеводородная группа или цепь (например, С1-С8), включая, например, метил, этил, изопропил, трет-бутил, гептил, н-октил, додецил, окстадецил, амил, 2-этилгексил; алкильной группы, содержащей полярные группы, такие как гидрокси, сульфо, карбоксилат и замещенные или незамещенные карбоксамидные группы (где иллюстративные группы включают такие, как 3сульфопропил, 4-сульфобутил, карбоксиметил, 2-карбоксипропил, 2-метокси-2-оксоэтил, 3-метокси-3оксопропил); или линкера, такого как амидная связь или простой эфирный линкер, чтобы обеспечить присоединение одной или нескольких больших полярных молекул, таких как замещенная или незамещенная фенильная группа, полиоксиалкиловый простой полиэфир (такой как полиэтиленгликоль (РЕС), полипропиленгликоль, полигидроксиэтиловый глицерин), полиэтиленимины, дисахариды, трисахариды, полиалкилимины, небольшие аминодекстраны и тому подобные, где Υ может дополнительно включать такую(ие) присоединенную(ые) полярную(ые) молекулу(ы).
- 28 011074
Обычно, в некоторых вариантах осуществления соединения формулы (1е) получают, объединяя первоначально содержащий группу К1 терминальный амин, имеющий группу Υ, и диэтилброммалонат, используя по 10 ммоль каждого из них. Полученную реакционную смесь затем перемешивают при повышенной температуре в течение промежутка времени, составляющего примерно 8 ч. После охлаждения твердое вещество отфильтровывают и перекристаллизовывают из гексана, получая соединение формулы (I). Раствор соединения формулы (I) в этаноле затем нагревают при кипении с обратным холодильником с 2 ммоль гидразингидрата в течение промежутка времени, оставляющего примерно 10 ч. Растворитель и избыток агента затем отгоняют в вакууме. Продукт затем перекристаллизовывают из этанола, получая соединение формулы (1). Соединение формулы (1) затем объединяют в этаноле с соединением, имеющим карбонильную группу, содержащим группы К2, К3, и затем нагревают при кипении с обратным холодильником в течение промежутка времени, составляющего примерно 3 ч, получая целевой продукт формулы (К). Соединение формулы (К) затем объединяют с соединением с замещенной или незамещенной фенильной группой, как более подробно описано выше (например, в разделе «Общий обзор» и разделе «Гидразидсодержащие соединения и производные»), и нагревают с обратным холодильником в течение некоторого промежутка времени. Продукт затем перекристаллизовывают из этанола, получая соединение формулы (Ь).
Реакционная схема 6.
Обычно, в некоторых вариантах осуществления соединения формулы Це) получают, объединяя первоначально содержащий группу К1 терминальный амин, имеющий группу Υ, и диэтилброммалонат, используя по 10 ммоль каждого из них. Полученную реакционную смесь затем перемешивают при повышенной температуре в течение промежутка времени, составляющего примерно 8 ч. После охлаждения твердое вещество отфильтровывают и перекристаллизовывают из гексана, получая соединение формулы (I). Раствор соединения формулы (I) в этаноле затем нагревают при кипении с обратным холодильником с 12 ммоль гидразингидрата в течение промежутка времени, составляющего примерно 10 ч. Растворитель и избыток реагента затем отгоняют в вакууме. Продукт затем перекристаллизовывают из этанола, получая соединение формулы (1). Соединение формулы (1) затем объединяют в этаноле с соединением, имеющим карбонильную группу, содержащим группы К2, К3, и затем нагревают при кипении с обратным холодильником в течение промежутка времени, составляющего примерно 3 ч, получая целевой продукт формулы (К). Соединение формулы (К) затем объединяют с соединением с замещенной тиоцианатом фенильной группой, как более подробно описано выше (например, в разделе «Общий обзор» и разделе «Гидразидсодержащие соединения и производные»), и нагревают с обратным холодильником в течение некоторого промежутка времени. Продукт затем перекристаллизовывают из этанола, получая соединение формулы (М).
- 29 011074
Обычно, в некоторых вариантах осуществления соединения формулы (1е) получают, объединяя первоначально соединение с тиоцианатсодержащей фенильной группой с амино-РЕО в ДМФ и нагревают при повышенной температуре в течение промежутка времени, составляющего примерно 24 ч. ДМФ затем упаривают в вакууме, и остаток растворяют в минимальном количестве ЕЮАс и добавляют к перемешиваемому раствору ЕьО. Полученный осадок затем отфильтровывают и промывают Е12О. получая содержащее РЕО соединение. Содержащее РЕО соединение затем объединяют с соединением формулы (К) и нагревают в течение некоторого промежутка времени. Продукт затем перекристаллизовывают из этанола, получая соединение формулы (Ν).
Обычно в некоторых вариантах осуществления соединения формулы (1е) получают, объединяя первоначально соединение с тиоцианатсодержащей фенильной группой с амино-РЕО в ДМФ и нагревают при повышенной температуре в течение промежутка времени, составляющего примерно 24 ч. ДМФ затем упаривают в вакууме, и остаток растворяют в минимальном количестве ЕЮАс и добавляют к перемешиваемому раствору ЕьО. Полученный осадок затем отфильтровывают и промывают Е12О, получая содержащее РЕО соединение. Содержащее РЕО соединение затем объединяют с соединением формулы (К) и нагревают в течение некоторого промежутка времени. Продукт затем перекристаллизовывают из этанола, получая соединение формулы (О).
- 30 011074
Реакционная схема 9.
Обычно в некоторых вариантах осуществления соединения формулы (1е) получают, объединяя первоначально содержащий группу В4 терминальный амин, имеющий группу Υ, и диэтилбромбутиролактон или бромбутиролактон, используя по 10 ммоль каждого из них. Полученную реакционную смесь затем перемешивают при повышенной температуре в течение промежутка времени, составляющего примерно 8 ч. После охлаждения твердое вещество отфильтровывают и перекристаллизовывают из гексана, получая соединение формулы (Р). Раствор соединения формулы (I) в этаноле затем нагревают при кипении с обратным холодильником с 12 ммоль гидразингидрата в течение промежутка времени, составляющего примерно 10 ч. Растворитель и избыток реагента затем отгоняют в вакууме. Продукт затем перекристаллизовывают из этанола, получая соединение формулы (Ц). Соединение формулы (О) (10 мМ) затем объединяют с 20 мМ (ВОС)2О в 10 мл ТГФ и нагревают в условиях кипения с обратным холодильником в течение промежутка времени, составляющего примерно 5 ч. Растворитель затем удаляют, и остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле при элюировании дихлорметаном, получая соединение формулы (В). Соединение формулы (В) (1 ммоль) затем объединяют с Т§С1 (1 ммоль) в пиридине (5 мл), добавляя последний в виде трех порций примерно через 30 мин одна за другой. Реакционную смесь затем перемешивают при низкой температуре, составляющей примерно -15°С, в течение примерно 8 ч. Реакционную смесь затем оставляют нагреваться до комнатной температуры, разбавляют 1н. НС1 и затем экстрагируют три раза ЕЮАс. Объединенный органический экстракт затем промывают насыщенным раствором соли, сушат над №28О4 и упаривают досуха, получая соединение формулы (8). Соединение формулы (8) затем объединяют с амино-РЕС, таким как 2-аминоэтоксиэтанол, в ДМФ и нагревают при повышенной температуре в течение промежутка времени, составляющего примерно 24 ч. ДМФ затем упаривают в вакууме, и остаток растворяют в минимальном количестве ЕЮАс и добавляют к перемешиваемому раствору Е12О. Полученный осадок затем отфильтровывают и промывают Е12О. получая соединение формулы (Т). Соединение формулы (Т) затем растворяют в минимальном количестве смеси трифторуксусная кислота:СН2С12 (1:1) и перемешивают при комнатной температуре в течение примерно 30 мин. Реакционную смесь затем разбавляют насыщенным водным NаНСОз и экстрагируют СН2С12. Объединенный органический слой затем последовательно промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат и концентрируют в вакууме, получая соединение формулы (И). Соединение формулы (И) затем объединяют в этаноле с соединением, имеющим карбонильную группу и содержащим группы В2, В3, и затем нагревают при кипении с обратным холодильником в течение промежутка времени, составляющего примерно 3 ч, получая целевой продукт формулы (V).
Структуры были подтверждены методами 'Н ЯМР и масс-спектрометрии. Чистота составляла >98%, как было установлено с помощью тонкослойной хроматографии и ВЭЖХ.
Примеры
Следующие примеры приведены таким образом, чтобы предоставить обычному специалисту в данной области полное раскрытие и описание того, каким образом можно осуществить и использовать настоящее изобретение, и не предназначены для ограничения объема того, что авторы настоящего изобретения рассматривают в качестве изобретения, а также не предполагается, что приведенные ниже эксперименты являются всеми проведенными или единственными проведенными экспериментами. Были предприняты попытки для гарантии точности использованных числовых значений (например, количества, температура и т.д.), однако следует принимать во внимание некоторые экспериментальные ошибки и отклонения. Если не указано другого, части представляют собой части по весу, молекулярные массы представляют собой средневесовые молекулярные массы, температура приведена в градусах Цельсия, и давление является атмосферным или около этого.
- 31 011074
Методы и материалы
В приведенных далее примерах использовали следующие материалы и методы.
Высокопроизводительный скрининг для выявления ингибиторов СЕТК
Скрининг осуществляли с использованием интегрированной системы (Весктап), состоящей из 3метровой роботизированной «руки», инкубатора с СО2, устройства для промывки планшетов, рабочей установки для работы с жидкостями, считывателя для штрих-кода, устройства для раскупоривания, устройства для закрывания планшетов и двух флуоресцентных планшетных ридеров (Орбта, ВМС ЬаЬ Тес11по1о§1е5). каждый из которых оборудован двумя шприцевыми насосами и фильтром для возбуждения НО500/20Х (500±10 нм) и эмиссионным фильтром (535±15 нм) (Сйгота).
Из коммерческих источников отбирали для скрининга сто тысяч небольших молекул (большинство с массой 350-550 Дальтон) (СйетВпбде и С1етО1У, оба из 8ап Э1едо, СА) с использованием алгоритмов, разработанных для создания максимального химического разнообразия и лекарственно подобных свойств. Соединения были получены в виде сухого порошка и растворы в ДМСО готовили непосредственно перед тестированием и хранили замороженными в виде 2,5 М исходных раствором для последующего применения.
Клетки щитовидной железы рыбоядного хомяка (ЕИТ), стабильно экспрессирующие СЕТИ человека дикого типа и ΥΕΡ-Β148Ο культивировали в 96-луночных планшетах с черными стенками, как описано ранее (Ма е! а1., I. В1о1. С1ет., 277: 37235-37241, 2002). Для скрининга клетки в 96-луночных планшетах промывали три раза и затем активировали галогенидную проводимость СЕТИ путем инкубирования в течение 15 мин с активирующим «коктейлем», содержащим 10 мкМ форсколина, 20 мкМ апигенина и 100 мкМ изобутилметилксантина (1ВМХ). Тестируемые соединения (конечная концентрация 25 мкМ) добавляли за 5 мин перед анализом притока иода, в котором клетки подвергали действию 100 мМ направленного внутрь градиента йода. Флуоресценцию ΥΕΡ регистрировали в течение 2 с перед созданием градиента йода и 12 с после его создания. Первоначальные скорости притока йода рассчитывали из временного хода снижения флуоресценции после создания грандиента йода (Υηπ^ е! а1., I. Вю1. С1ет., 35079-35085, 2003).
Измерение тока короткого замыкания
ЕИТ, эпителиальные клетки прямой кишки Т84 и эпителиальные клетки дыхательных путей человека культивировали на фильтрах 8пар\ге11 с площадью поверхности 1 см2 (Согшпд-Сойаг) до устойчивости >1000 Ω см2, как описано ранее (Ма е! а1., I. Вю1. С1ет., 277: 37235-37241, 2002). Фильтры устанавливали для исследования в системе камер с легкой установкой Еазутоип! СйатЬег 8у81ет (ΡΗν81о1ощс ИМгитепК 8ап Э1едо). Для измерения апикального тока С1- на клетках ЕИТ базолатеральную полукамеру заполняли буфером, содержащим (в мМ): 130 ЫаС1, 2,7 КС1, 1,5 КН^О^ 1 СаС12, 0,5 МдС12, 10 ^-4^^18, 10 глюкозы (рН 7,3). Проницаемость базолатеральной мембраны нарушали с использованием амфотерицина В (250 мкг/мл) непосредственно перед измерениями. В апикальном растворе 65 мМ №1С1 заменяли на глюконат натрия и содержание СаС12 повышали до 2 мМ. Для измерений тока короткого замыкания в клетках (с ненарушенной проницаемостью мембраны) Т84 и дыхательных путей человека, обе полукамеры содержали раствора Креба (в мМ): 120 ЫаС1, 25 ЫаНСО3, 3,3 КН^О^ 0,8 КЭТО^ 1,2 МдС12, 1,2 СаС12 и 10 глюкозы (рН 7,3). Через растворы барботировали 95% О2 и 5% СО2 и поддерживали температуру при 37°С. Для исследований на мышином кишечнике выделяли сегменты тощей кишки, промывали их охлажденным на льду буфером Креба, рассекали продольно по брыжеечной границе и помещали для исследования в камеру для микроиспользования (0,7 см2 площадь отверстия, \Уог1б ΡιόΩ81оп ИМгитеЩЦ. Полукамеры заполняли раствором Креба, содержащим 10 мкМ индометацина. Регистрировали ток апикальный С1-/ток короткого замыкания с использованием устройства ЭУС-1000 фиксируемого напряжения (\Уог1б Ρ^ес^8^ои ИМгитеЩЦ с электродами Ад/АдС1 и 1М КС1 агаровыми мостиками.
Анализ фиксации потенциала
Эксперименты по фиксации потенциала проводили при комнатной температуре на клетках ЕИТ, стабильно экспрессирующих СЕТИ дикого типа. Использовали конфигурацию анализа для закрепленных клеток и цельных клеток (Натй1 е! а1., ΡΠι,^ιέ АгсН. 391: 85-100, 1981). Клеточные мембраны закрепляли при конкретных напряжениях с использованием усилителя фиксированного потенциала ЕРС-7 (Ыз! Меб1са1). Данные фильтровали при 500 Гц и переводили в цифровую форму при 2000 Гц. Для экспериментов на цельных клетках раствор в пипетке содержал (в мМ): 120 СзС1, 10 ТЕА-С1, 0,5 ЕСТА, 1 МдС12, 40 маннита, 10 С8-НЕΡЕ8 и 3 мМ Мд АТФ (рН 7,3). Для экспериментов с закрепленными клетками ЕСТА заменяли на 1 мМ СаС12. Раствор в бане для экспериментов на цельных клетках содержал (в мМ): 150 ЫаС1, 1 СаС12, 1 МдС12, 10 глюкозы, 10 маннита, 10 Ыа-ТЕ8 (рН 7,4). В экспериментах на закрепленных клетках раствор в бане содержал (в мМ): 130 КС1, 2ЫаС1, 2СаС12, 2МдС12, 10 глюкозы, 20 маннита и 10 К-Нерез (рН 7,3). Ингибиторы наносили с помощью межклеточного разбрызгивания. Активность СЕТИ канала на участках закрепленных клеток анализировали, как описано ранее (Таббе! е! а1., ЕЕВ8 Ьеб. 558: 52-56, 2004).
- 32 011074
Измерения разницы в назальных потенциалах у мышей
После анестезии внутрибрюшинно кетамином (90-120 мг/кг) и ксилазином (5-10 мг/кг) дыхательные пути защищали рототрахеальной интубацией с использованием ангиокатетера 21 размера, как описано. ПЭ-10 канюлю, натянутую до диаметра 0,3 мм, вставляли в одну ноздрю на периферии от передних ноздрей и связывали с помощью 1М КС1 агарового мостика с Ад/АдС1 электродом и высокоимпедансным цифровым вольтметром (ΙδοΜίΙΙίνοΙΐ Мс1сг. \Уог1б Ргесыоп 1п51гитсп(5). В носовую канюлю разбрызгивали из расчета 50 мкМ/мин с использованием двойных микроразбрызгивающих насосов серийные растворы забуференного фосфатом физиологического раствора (РВ8), РВ8 с низкой концентрацией хлорида (хлорид заменен на глюконат), РВ8 с низкой концентрацией хлорида, содержащий форсколин (10 мкМ) без, а затем с добавлением С1у-101 (10 мкМ), а затем РВ8. В некоторых исследованиях С1у-101 (10 мкМ) или 4,4'-диизотиоцианостильбен-2,2'-дисульфоновая кислота (ΌΙΌ8) (100 мкМ) присутствовали во всех растворах. Электрод сравнения представлял собой заполненную РВ8 иглу 21 размера, вставленную в подкожную ткань в брюшной полости и соединенную со вторым Ад/АдС1 электродом с помощью 1М КС1 агарового мостика.
Измерения секреции жидкости в кишечнике
Мышей (штамм СЭЕ 28-34 г) лишали пищи на 24 ч, а затем проводили внутрибрюшинно анестезию кетамином (40 мг/кг) и ксилазином (8 мг/кг). Температуру тела поддерживали при 36-38°С с использованием нагревающей подстилки. После небольшого надреза брюшины три закрытые петли тощей кишки (длина 20-30 мм) в проксимальном направлении к слепой кишке выделяли путем накладывания швов. В петли вводили инъекции 100 мкл РВ8 или РВ8, содержащий холерный токсин (1 мкг) без или с добавлением О1уН-101 (2,5 мкг). Брюшинный разрез зашивали, и мышам давали возможность прийти в себя после анестезии. Через 4 ч мышам проводили анестезию, кишечные петли удаляли и измеряли длину петли и вес для количественной оценки чистой секреции жидкости.
Модели холеры
Для исследований на закрытых петлях мышей (штамм СЭЕ 28-34 г) лишали пищи на 24 ч, а затем проводили внутрибрюшинно анестезию кетамином (40 мг/кг) и ксилазином (8 мг/кг).
Температуру тела поддерживали при 36-38°С с использованием нагревающей подстилки. После небольшого надреза брюшины три закрытые петли средней части тощей кишки (длина 15-20 мм) выделяли путем накладывания швов. В петли вводили инъекции 100 мкл РВ8 или РВ8, содержащий холерный токсин (1 мкг) без или с добавлением тестируемых соединений. Брюшинный разрез зашивали и мышам давали возможность прийти в себя после анестезии. Через 4 ч мышам проводили анестезию, кишечные петли удаляли и измеряли длину петли и вес для количественной оценки чистой секреции жидкости. Мышей умерщвляли путем введения передозировки кетамина и ксилазина. Все протоколы одобрены комитетом по исследованиям на животных Калифорнийского Университета в Сан-Франциско (ИС8Р).
Исследования всасывания в кишечнике
Исследования всасывания проводили с использованием петель средней части тощей кишки, полученных как описано выше. В петли вводили инъекции по отдельности Ма1Н-1, Ма1Н-2, Ма1Н-3, Ма1Н(РЕС)п и О1уН-(РЕО)п, содержащие 10-20 мкг тестируемых соединений вместе с 5 мкг Б1ТС-дектрана (40 кДа). Через 2 ч извлекали жидкость из петель и измеряли оптическое поглощение тестируемого соединения и Б1ТС (ОП342/ОП494нм). Рассчитывали процент всасывания в кишечнике, предполагая, что Б1ТС-дектран имеет нулевое всасывание.
Синтез соединений
Синтез соединений по изобретению проиллюстрирован, но не ограничен следующими примерами. Все синтезированные соединения имели чистоту >98% (ТСХ/ВЭЖХ), и их строение было подтверждено данными масс- и ЯМР 1Н спектроскопии.
Синтез гидразида И-2-нафталенил-[(3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен]глицина (С1уН-101) и родственных гидразидов глицина (С1уН-102-109, 114-127).
Смесь 2-нафтиламина (соединение I, фиг. 3В) (1,43 г, 10 ммоль), этилиодацетата (2,14 г, 10 ммоль) и ацетата натрия (1,64 г, 20 ммоль, растворенный в 2 мл воды) перемешивали при 90°С в течение 3 ч. Твердое вещество, полученное при охлаждении, отфильтровывали и перекристаллизовывали из гексана, получая 1,5 г этил-И-(2-нафталенил)глицината (соединение II, фиг. 3В) (выход, 65%, т.пл. 83-84°С) (Вататибйу и ВЬай, Е Меб. СЬет. 32: 2421-2426, 1989). Раствор вышеуказанного продукта (2,29 г, 10 ммоль) в этаноле (10 мл) нагревали при кипении с обратным холодильником с гидразин гидратом (0,6 г, 12 ммоль) в течение 10 ч. Растворитель и избыток реагента отгоняли в вакууме. Продукт перекристаллизовывали из этанола, получая 1,8 г гидразида И-(2-нафталенил)глицина (соединение III, фиг. 3В) (выход 82%, т.пл. 147-148°С). Смесь соединения III (2,15 г, 10 ммоль) и 3,5-дибром-2,4дигидроксибензальдегида (3 г, 10 ммоль) в этаноле (5 мл) нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 3 ч. Гидразон, который кристаллизовался при охлаждении отфильтровывали, промывали этанолом и перекристаллизовывали из этанола, получая 3,8 г (78%) С1уН-101. Температура плавления (т.пл.) >300°С, масс-спектр (Е8-): М/Ζ 492 (М-), Ή ЯМР (ДМСО-б6): δ 4,1 (с, 2Н, СН2), 6,5-7,5 (м, 9Н, ароматические, ИН), 8,5 (с, 1Н, СН=И), 10,4 (с, 1Н, ИН-СО), 11,9 (с, 1Н, ОН), 12,7 (с, 1Н, ОН).
- 33 011074
Соединения С1уН-102-109, С1уН-114-127 и АсеН401-404 были синтезированы аналогичным образом конденсацией подходящих гидразидов с замещенными бензальдегидами.
Синтез гидразида Ы-(6-хинолинил)-[3,5-дибром-2,4-дигидроксифенилметилен]глицина (С1уН-126) и родственных гидразидов хинолинил-глицин.
К перемешиваемому раствору 6-аминохинолина (соединение IV, фиг. 3В) (0,72 г, 5 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) добавляли 33% водный раствор гилоксалевой кислоты (1,85 г, 20 ммоль). Затем добавляли при 3°С в течение 20 мин раствор №1ВН3С'^ (0,64 г, 10,2 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 48 ч. Ацетонитрил упаривали в вакууме, к остатку добавляли воду (20 мл), раствор подщелачивали до рН 9,5, и образовавшийся амин экстрагировали простым эфиром. К водному раствору добавляли концентрированную НС1 (25 мл) и смесь перемешивали при 25°С в течение 1 ч. Растворитель упаривали в вакууме. Полученный остаток Ν(6-хинолинил)глицина растворяли в сухом этаноле (50 мл), насыщенным сухим НС1, перемешивали в течение ночи и затем нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 3 ч. Этанол упаривали, гидрохлорид сложного эфира суспендирвоали в сухом эфире и барботировали газообразный аммиак. Хлорид аммония отфильтровывали и простой эфир упаривали, получая этил-№(6-хинолинил)глицинат (0,5 г, 87%, т.пл. 122-123°С). Гидразид №(6-хинолинил)глицина (соединение VI, фиг. 3В) синтезировали гидрогенолизом вышеуказанного сложного эфира, который был подвергнут взаимодействию с 3,5дибром-2,4-дигидроксибензальдегидом с получением С1уН-126. Аналогичный способ был использован для синтеза С1уН-127.
Синтез оксаминовых гидразидов (ОхаН-110-113)
Оксаминовые гидразиды синтезировали путем нагревания смеси 2-нафталинамина с диэтилоксалатом в толуоле. Полученный этиловый эфир Ν-замещенной оксаминовой кислоты обрабатывали гидразингидратом с последующей конденсацией с замещенными бензальдегидами, получая соединения ОхаН110-113.
Синтез гидразида 3,5-дибром-4-гидрокси-[2-(2-нафталинамин)ацето]бензойной кислоты (С1уИ-202) и родственных С1уИ-201 и Оха-203-204
Гидразид №(2-нафталенил)глицина (соединение III, фиг. 3В) (2,15 г, 10 ммоль) подвергали взаимодействию с 3,5-дибром-4-гидроксибензоилхлоридом (3,14 г, 10 ммоль) (СПЬсй е1. а1., Еиг. I. Меб Скет., 17: 581-588, 1982) в пиридине (10 мл) в течение 5 ч. Пиридин удаляли и остаток разбавляли водой. Продукт перекристаллизовывали из этанола, получая серый порошок в количестве 3,8 г (77%), т.пл. >300°С. Соединения С1уН-201 и Оха-203-204 синтезировали аналогичным образом.
Синтез гидразида ^2-нафталенил-[(3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил)метил]глицина (С1уИ-301) и родственных гидразидов глицина (С1уИ-302, ОхаН-303-304)
Смесь С1уН-101 (1,5 г, 3 ммоль), гидразингидрата (0,15 мл, 3 ммоль) и катализатора Рб/С (0,1 г, 10% Рб) в 5 мл диметилформамида нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 6-8 ч ^егта е! а1., Агск, Ркагт. 317: 890-894, 1984). Реакционную смесь фильтровали, разбавляли холодной водой и экстрагировали диэтиловым эфиром. С1уН-301 кристаллизовали из эфира, получая 0,9 г (60%), т.пл. 258-260°С. Соединения С1уН-302 и ОхаН-303-304 получали аналогично.
Синтез аналогов
Синтез аналогов соединение проиллюстрирован, но не ограничен следующими примерами. Все синтезированные соединения имели >98% чистоту (ТСХ/ВЭЖХ) и их строение было подтверждено данными масс- и ЯМР 1Н спектроскопии. Спектры ЯМР 1Н регистрировали в растворах СЭСГ или ДМСО-б6 на спектрометре ν;·ιπ;·ιη 400 МГц относительно СЭСГ или ДМСО. Масс-спектры регистрировали с использованием системы \Уа1ег5 ЖХМС (АШаисе НТ 2790+Ζρ, ВЭЖХ: ^а1ет8, модель 2960, Мботб, МА). Флэш-хроматографию проводили с использованием силикагеля ЕМ (230-400 меш) и тонкослойную хроматографию проводили на пластинах силикагеля Мегк 60 Е254.
Синтез диэтил-(2-нафталениламино)пропандиоата (соединение 2, фиг. 9)
Смесь 2-нафтиламина (соединение 1, фиг. 9) (10 ммоль), диэтилброммалоната (10 ммоль) и ацетата натрия (1,64 г, 20 ммоль, растворенный в 4 мл воды) перемешивали при 90°С в течение 8 ч. Полученное при охлаждении черное твердое вещество отфильтровывали и перекристаллизовывали из гексана, получая 2,5 г 2 (выход 84%); т.пл. 189-190°С; масс-спектр (Е8+): М/Ζ 302 (М+1)+;
Ή ЯМР (ДМСО-б6): δ 1,17 (т, 6Н, 7,33 Гц), 4,17 (кв, 4Н, 7,33), 5,10 (д, 1Н, 8,79 Гц), 6,54 (д, 1Н, 8,79 Гц), 6,75 (д, 1Н, 2,20 Гц), 7,13 (т, 1Н, 7,32 Гц), 7,19 (дд, 1Н, 2,19, 8,79 Гц), 7,28 (т, 1Н, 8,06 Гц), 7,51 (д, 1Н, 8,42 Гц), 7,61 (т, 2Н, 8,79 Гц).
Синтез дигидразида (2-нафталениламино)пропандиовой кислоты (соединение 3, фиг. 9)
Раствор соединения 2 (фиг. 9) (10 ммоль) в этаноле (10 мл) нагревали при кипении с обратным холодильником с гидразингидратом (12 ммоль) в течение 10 ч. Растворитель и избыток реагента отгоняли в вакууме. Продукт перекристаллизовывали из этанола, получая 2,5 г соединения 3 (92%); т.пл. 268-270°С; масс-спектр (Е8+): М/Ζ 274 (М+1)+;
Ή ЯМР (ДМСО-б6): δ 4,29 (д, 4Н, 4,03), 4,56 (д, 1Н, 8,79 Гц), 6,03 (д, 1Н, 8,79 Гц), 6,62 (д, 1Н, 1,46 Гц), 7,09 (м, 2Н), 7,28 (т, 1Н, 8,05 Гц), 7,50 (д, 1Н, 8,06 Гц), 7,61 (м, 2Н), 9,22 (с, 2Н).
- 34 011074
Синтез гидразида 2-нафталениламино-бис-[(3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил-метилен]пропандиовой кислоты (Ма1Н-1)
Смесь соединения 3 (фиг. 9) (10 ммоль) и 3,5-дибром-2,4-дигидроксибензальдегида (20 ммоль) в этаноле (5 мл) нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 3 ч. Гидразон, который выкристаллизовывался при охлаждении, отфильтровывали, промывали этанолом и очищали колоночной хроматографией (силикагель, ЕЮАс: гексан 2:3), получая 3,2 г соединения 4 (58%) в виде не совсем белого твердого вещества; т.пл. 246-248°С; масс-спектр (Е8+): М/Ζ 830 (М+1)+;
Ή ЯМР (ДМСО-б6): δ 4,91, 5,48 (д, 1Н, 7,69, 9,15 Гц), 6,62 (д, 1Н, 7,32 Гц), 6,73, 6,84 (с, 1Н), 7,137,32 (м, 3Н), 7,57 (д, 1Н, 8,06 Гц), 7,61-7,70 (м, 3Н), 7,80, 7,90 (с, 1Н), 8,15, 8,37 (с, 2Н), 10,10-10,40 (уширенный с, 2Н), 11,72, 11,90 (с, 2Н), 12,22, 12,53 (с, 2Н).
Синтез дигидразида 2-нафталениламино-[(3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен] [(2,4динатрий-дисульфофенил)метилен]пропандиовой кислоты (Ма1Н-2)
Смесь дигидразида 4 (фиг. 9) (5 ммоль) и 2,4-динатрийдисульфобензальдегида (5 ммоль) в ДМФ (5 мл) нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 4 ч. Реакционную смесь после охлаждения добавляли по каплям к перемешиваемому раствору ЕЮАс:ЕЮН (1:1), фильтровали, промывали этанолом и дополнительно очищали колоночной хроматографией (силикагель Е1ОАс:гексан 2:3), получая 2,3 г соединения Ма1Н-2 (58%) в виде не совсем белого твердого вещества; т.пл. >300°С; масс-спектр (Е8+): М/Ζ 800(М+1)+;
Ή ЯМР (ДМСО-б6): δ 4,95, 5,44 (д, 1Н, 7,63, 9,16 Гц), 6,64 (д,1Н, 7,31 Гц), 6,70, 6,81 (с, 1Н), 7,127,44 (м, 4Н), 7,59 (д, 1Н, 8,00 Гц), 7,64-7,76 (м, 4Н), 7,80, 7,90 (с, 1Н), 8,25, 8,37 (с, 2Н), 10,36 (уширенный с, 1Н), 11,62, 11,82 (с, 1Н), 12,11, 12,43 (с, 2Н).
Дигидразид 2-нафталениламино-[(3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен][3-(4-натрийсульфофенил)тиоуреидо]пропандиовой кислоты (Ма1Н-3) и дигидразид 2-нафталениламино-[(3,5дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен][3-[4-(3-(РЕС)п-тиоуреидо)фенил]тиоуреидо]пропандиовой кислоты (Ма1Н-(РЕС)п) синтезировали в реакционных условиях, аналогичных использованным для синтеза Ма1Н-2, за исключением того, что 4-натрийсульфофенилизотиоцианат и соединение 6 (фиг. 10) использовали соответственно вместо 2,4-динатрийдисульфобензальдегида.
Ма1Н-3: т.пл. >300°С; масс-спектр (Е8-): М/Ζ 765(М-1)+;
Ή ЯМР (ДМСО-б6): δ 4,90, 5,31 (д, 1Н, 7,61, 9,12 Гц), 6,54 (д, 1Н, 7,31 Гц), 6,70, 6,81 (с, 1Н), 7,127,44 (м, 4Н), 7,59 (д, 1Н, 8,00 Гц), 7,64-7,76 (м, 4Н), 7,90 (д, 2Н), 8,25, 8,37 (с, 1Н), 9,88 (с, 1Н) 10,05 (с, 1Н, С8ЫН), 10,36 (с, 1Н, ОН), 11,11, 11,43 (с, 2Н, СОИН), 11,62, 11,82 (с, 1Н, ОН).
Ма1Н-(РЕС)1: т.пл. >300°С; масс-спектр (Е8+): М/Ζ 849 (М+1)+;
Ή ЯМР (ДМСО-б6): δ 3,70-4,37 (м, 8Н), 4,81, 5,01 (д, 1Н, 7,51, 9,13 Гц), 5,27 (с, 1Н), 6,60 (д, 1Н, 7,31 Гц), 6,75 (С, 1Н), 7,19-7,38 (м, 4Н), 7,59 (д, 2Н, 8,00 Гц), 7,64-7,76 (м, 3Н), 7,90 (д, 2Н, 8,00 Гц), 8,21, 8,30 (с, 1Н), 9,76 (с, 2Н) 9,83 (с, 1Н), 10,01 (с, 1Н), 10,36 (с, 1Н), 11,20, 11,51 (с, 2Н), 11,54, 11,62 (с, 1Н).
Синтез 2-[3-(4-изотиоцианатофенил)тиоуреидо]этил-(РЕС)1 (соединение 6а, фиг. 10).
К раствору 1,4-фенилендиизотиоцианата (1 ммоль, 2 мл ДМФ) добавляли 2-аминоэтоксиэтанол (0,3 ммоль, 2 мл ДМФ) в течение 30 мин. После перемешивания в течение дополнительных 30 мин ДМФ отгоняли и продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле с использованием в качестве растворителя смеси н-гексан: АсОЕ1 (1:1). Фракции упаривали, получая 58 мг соединения 2 с выходом (65%); масс-спектр (Е8+): М/Ζ 298 (М+1)+;
Ή ЯМР (ДМСО-б6): δ 2,84 (т, 2Н, 6,46 Гц), 2,95 (т, 2Н, 6,31 Гц), 3,12 (т, 2Н, 6, 38 Гц), 3,58 (кв, 2Н, 5,98 Гц), 5,63 (с, 1Н), 7,15 (д, 2Н, 8,62 Гц), 7,44 (д, 2Н, 8,62 Гц), 7,97 (с, 2Н, ЫН).
Аналогично синтезировали соединение 6Ь с использованием подходящего амино-РЕС; выход, 58%; масс-спектр (Е8+): М/Ζ 736 ( +/-44, 88, 132, 176) (М+1)+;
Ή ЯМР (ДМСО-б6): δ 3,24 (с, 3Н), 3,31-3,82 (м), 7,21 (д, 2Н, 8,60 Гц), 7,47 (д, 2Н, 8,60 Гц), 7,92 (с, 2Н).
Синтез гидразида 2-(2-нафталениламино)-4-гидроксибутановой кислоты (соединение 7, фиг. 11).
Данное соединение синтезировали в соответствии с реакционными условиями, использованными для соединений 2 и 3.
89%; т.пл. 258-260°С; масс-спектр (Е8+): М/Ζ 260 (М+1)+;
Ή ЯМР (ДМСО-б6): δ 1,79 (м, 2Н) 3,46 (кв, 2Н) 3,98 (с, 1Н), 4,17 (д, 2Н); 4,52 (т, 1Н), 5,94-5,96 (с, 1Н), 6,68 (с, 1Н), 6,98 (дд, 1Н), 7,05 (т, 1Н), 7,24 (т, 1Н), 7,46 (д, 1Н), 7,52-7,60 (м, 2Н) 9,17 (с, 1Н).
Синтез 2-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]гидразида [2-(2-нафталениламино)-4-гидрокси]бутановой кислоты (соединение 8, фиг. 11)
К раствору гидразида 7 (10 мМ) в ТГФ (10 мл) добавляли (ВОС)2О (20 мМ) и нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 5 ч. Растворитель удаляли и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле. Элюирование дихлорметаном давало 3,1 г соединение 8 (86%) в виде белого твердого вещества; т.пл. 235-237°С; масс-спектр (Е8+): М/Ζ 360 (М+1)+;
Ή ЯМР (ДМСО-б6): δ 1,33 (с, 9Н), 1,92 (м, 2Н), 3,52 (кв, 2Н), 4,01 (кв, 1Н), 4,52 (т, 1Н), 6,00 (д, 1Н), 6,70 (с, 1Н), 6,97 (дд, 1Н), 7,06 (т, 1Н), 7,25 (т, 1Н), 7,45 (д, 1Н), 7,52-7,59 (м, 2Н), 8,73 (с,1Н), 9,77 (с, 1Н).
- 35 011074
Синтез 2-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]гидразида[2-(2-нафталениламино)-4-(п-тозил)]бутановой кислоты (соединение 9, фиг. 11).
К раствору гидразида 7 (1 ммоль) в пиридине (5 мл) добавляли р-Т§С1 (1 ммоль) в виде трех порций с 20-минутными интервалами (-15°С). Реакционную смесь перемешивали в течение 8 ч при -15°С, давали возможность нагреться до комнатной температуры, разбавляли 1н. НС1 и экстрагировали три раза ЕЮАс. Объединений органический экстракт промывали насыщенным раствором соли, сушили над Ыа28О4 и упаривали досуха, получая 274 мг соединения 9 (72%) в виде бледно-желтого масла, использованного на следующей стадии без дополнительной очистки; масс-спектр (Е8+): Μ/Ζ 514 (М+1)+.
Синтез 2-[(1,1-диметоксиэтокси)карбонил]гидразида [2-(2-нафталениламино)-4-(РЕС-амино)]бутановой кислоты (соединение 10, фиг. 11)
Раствор 2-аминоэтоксиэтанола (1 мМ) и соединения 9 (1 мМ) в ДМФ (2 мл) перемешивали при 80°С в течение 24 ч. ДМФ упаривали в вакууме и остаток растворяли в минимальном количестве ЕЮАс и добавляли к перемешиваемому раствору ЕьО. Белый порошкообразный осадок отфильтровывали и промывали Е12О, получая 170 мг соединения 9 (28%) в виде желтой вязкой массы; масс-спектр (Е8+): Μ/Ζ 447 (М+1)+;
Ή ЯМР (ДМСО-66): δ 1,25 (с, 9Н), 1,71 (м, 2Н) 2,40-2,51 (м, 4Н), 2,57 (т, 2Н), 2,68-2,79 (м, 5Н, СН2), 2,92 (с, 1Н), 4,52 (т, 1Н), 6,04, 6,16 (с, 1Н), 6,67 (с, 1Н), 6,92 (дд, 1Н), 7,02 (т, 1Н), 7,22 (т, 1Н), 7,45 (д, 1Н), 7,50-7,62 (м, 2Н), 9,27 (с, 1Н), 9,89 (с, 1Н).
Синтез гидразида [2-(2-нафталениламино)-4-(РЕС-амино)]бутановой кислоты (соединение 11, фиг. 11)
Гидразид 10 (1 мМ) растворяли в минимальном количестве смеси трифторуксусная кислота: СН2С12 (1:1) и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин. Реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором ЫаНСОз и экстрагировали СН2С12. Объединенный органический слой промывали последовательно водой и насыщенным раствором соли, сушили (Ыа28О4) и концентрировали в вакууме, получая 252 мг соединения 11 (72%) в виде желтого полутвердого вещества; масс-спектр (Е8+): Μ/Ζ 247 (М+1)+;
Ή ЯМР (ДМСО-66): δ 1,71 (м, 2Н) 2,40-2,51 (м, 4Н), 2,57 (т, 2Н), 2,68-2,79 (м, 5Н, СН2), 2,92 (с,1Н), 4,26 (д, 2Н) 4,52 (т, 1Н), 6,02, 6,21 (с, 1Н), 6,71 (с, 1Н), 6,85 (дд, 1Н), 7,10 (т, 1Н), 7,24 (т, 1Н), 7,51 (д, 1Н), 7,52-7,76 (м, 2Н), 9,27 (с, 1Н).
Синтез 2-[(2,5-дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен]гидразида [2-(2-нафталениламино)-4-(РЕ6амино)]бутановой кислоты (соединение 12, фиг. 11)
Смесь соединения 11 (1 ммоль) и 2,5-дибром-2,4-дигидроксибензальдегида (1 ммоль) в этаноле (2 мл) нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали и добавляли к перемешиваемому раствору ЕьО. и выпавший в осадок гидразон отфильтровывали и промывали Е12О, получая 262 мг соединения 12 (58%); масс-спектр (Е8+): Μ/Ζ 625 (М+1)+;
Ή ЯМР (ДМСО-66): δ 1,75 (м, 2Н) 2,42-2,48 (м, 4Н), 2,59 (т, 2Н), 2,72-2,81 (м, 5Н, СН2), 2,97 (с, 1Н), 4,59 (т, 1Н), 6,12, 6,26 (с, 1Н), 6,75 (с,1Н), 6,85-6,96 (м, 2Н), 7,15-7,51 (т, 2Н), 7,52-7,76 (м, 2Н), 8,87 (с, 1Н), 9,27 (с, 1Н), 10,68 (с, 1Н), 11,92 (с, 1Н).
Пример 1. Открытие новых классов ингибиторов СРТВ.
Для выявления новых ингибиторов СРТВ проводили скрининг коллекции, состоящей из 100000 небольших соединений, подобных лекарственным средствам. Как представлено в виде диаграммы на фиг. 1 А, скрининг соединений проводили в концентрации 25 мкМ с использованиеим анализа притока йода на основе клеток после активации СРТВ смесью агонистов, содержащей форсколин, ΙΒΜΧ и апигенин. Первоначальные скорости притока йода обсчитывали на компьютере на основании кинетики уменьшения флуоресценции после замены хлора на йод. Было выявлено четыре соединения (фиг. 1В), понижавших приток йода более чем на 50%, которые структурно не были родственными с известными активаторами или ингибиторами СРТВ. Двенадцать соединений снижало приток йода на 25-50%, большинство из них были структурно родственными соединениям на фиг. 1В или тиазолидинонам.
Для выбора ингибитора(ов) для дальнейшей оценки были проведены измерения доза-ответная реакция для соединений, представленных на фиг. 1В, и ингибирование СРТВ было подтверждено электрофизиологически с помощью анализа тока короткого замыкания. К1 составляло ~7, 5,5 и 5 мкМ для соединений а-6, соответственно. На фиг. 1с показана иллюстративная флуоресценция, а на фиг. 1Ό показаны данные по току короткого замыкания для соединения 6. Проводили скрининг 100-250 коммерчески доступных аналогов каждого класса соединений для определения того, существуют ли активные структурные аналоги, что является важным предварительным условием для последующей оптимизации соединения путем синтеза целевых аналогов. В то время как для соединений а, Ь и с были выявлено немного или вообще не выявлено активных аналогов соединений, первоначальный скрининг 285 аналогов соединения 6 (замещенные гидразиды глицина С1уН) выявил 24 аналога, которые ингибировали СРТВопосредованный приток йода на >25 % при концентрации 25 мкМ.
Был проведен анализ структура-активность и определены характеристики механизма ингибирования, а также временной ход действия и обратимость действия синтезированных аналогов С1уН. Кроме
- 26 011074 того, также была проанализирована эффективность аналогов для различных механизмов активации СРТВ. На фиг. 2А показано быстрое ингибирование притока йода в анализах флуоресценции и тока короткого замыкания при добавлении С1уН-101. Интересно, что ~50% ингибирования происходило в течение ~1 с времени добавления/смешивания, тогда как последующее ингибирование в течение ~1 мин. На фиг. 2В показана полная обратимость ингибирования после вымывания С1уН-101, при этом >75% обратимости происходит в течение 5 мин. На фиг. 2с показано эффективное ингибирование СРТВ с помощью С1уН-101 после активации различными типами агонистов, включая мощные непосредственные активаторы; СРТВ, которые не повышают цитозольный цАМФ или ингибируют активность фосфатазы (СРТВас1 ~01, 08 и 10; Ма е1 а1., 1. С1т. Ιηνβδΐ. 110: 1651-1658, 2002).
Пример 2. Химия и взаимоотношение структура-активность гидразидов глицина.
Структуру С1уН-101 системно модифицировали для того, чтобы установить взаимоотношение структура-активность и выявить аналоги с улучшенной СРТВ ингибирующей активностью. На фиг. 3А показаны различные классы структурных аналогов, которые были синтезированы и протестированы на ингибирование СРТВ. Структурные модификации были выполнены по обоим концам основной цепи гидразида глицина (фиг. 3А, слева, вверху и посередине). Замена метиленовой группы в глицине на карбонильную группу и замена азота на кислород давали гидразиды оксаминовой кислоты (ОхаН, справа, вверху) и гидразиды уксусной кислоты (АсеН, справа, посередине), соответственно. Модификация группы гидразона приводила к двум важным сериям соединений (посередине, внизу и справа, внизу). Также показаны соединения, содержащие дополнительную метильную группу на гидразоновой связи (сверху, посередине) и содержащие 6-хинолинильную группу, заменяющую нафталенильную группу (слева, внизу).
На фиг. 3В показаны реакционные схемы, разработанные для синтеза различных классов аналогов гидразина глицина. Синтез С1уН-101 включает взаимодействие 2-нафталемина и этилиодацетата с последующей реакцией с гидразин гидратом и 2,4-дигидрокси-3,5-дибромбензальдегидом. Аналогичный способ использовали для получения большинства остальных производных гидразина глицина (перечислены в табл. 1). Для гетероароматических аналогов, содержащих 6-хинолинильную группу, требуется другой путь синтеза, в котором 6-аминохинолинин конденсируют с глиоксалевой кислотой и восстанавливают с использованием цианоборгидрида натрия (с получением Ν-6-хинолинглицина, ВататшЛу е1 а1., 1989), который был далее этерифицирован и подвергнут взаимодействию с гидразин гидратом и бензальдегидом. Гидразиды оксаминовой кислоты были синтезированы, исходя из ароматических аминов и диэтилоксалата.
Первоначально модификации проводили по Ν-альному (ВД и бензальдегидному положениям (В2) (см. табл. 1-4 для определения групп В- и Х- и ингибирование СРТВ). Хорошее ингибирование СРТВ было выявлено в том случае, когда В2 содержал 3,5-дибром и по крайней мере один гидроксильный заместитель в 4-положении (С1уН-102, 105, 114); добавление второй гидроксильной группы увеличивало ингибирование (61уН-101, 104, 115-116). Ингибирование снижалось, когда В2 содержал 4бромфенильные или 4-карбоксифенильные заместители (С1уН-120-121). Кроме того, 4-гидроксильная группа в С1уН-101 была важной для ингибирования, поскольку его 4-метоксильный аналог С1уН-103 обладал невысокой активностью. Аналогичные результаты структура-активность были выявлены для 61уН-115 и 61уН-122.
Группу В1 модифицировали, сохраняя В2 в виде 2,4-дигидрокси-3,5-дибромфенила и 3,5-дибром-4гидроксифенила. Аналоги, содержащие В1 в виде 2-нафталенила, были лучшими ингибиторами, чем когда В! представлял собой 4-хлорфенил или 4-метилфенил. Замена 2-нафталенила в 61уН-101 на 1нафталенил (С1уН-104) снижала ингибирование в 10 раз, что говорило в пользу 2-нафталенильного заместителя. С1уН-124-125, содержащие 2-антраценильную группу были менее активными. Замена 2нафталенильной группы в С1уН-101 и С1уН-102 на более полярные гетероароматические кольца, такие как 6-хинолинил, приводила к соединению с меньшей активностью (С1у-126-127), также как и 2нафтокси-аналоги АсеН-401 и АсеН-402.
Далее модифицировали группу X (замена метилена) при сохранении 2-нафталенила в качестве В1 и дибром-дигидроксифенила в качестве В2. Введение карбонильной группы в С1у1Н-101 и С1уН-102 в качестве X с получением ОхаН-110 и ОхаН-111, приводило к двух-трехкратному повышению способности ингибирования. На фиг. 3С показан анализ ингибирования СРТВ с использованиеием тока короткого замыкания для наиболее активного аналога ОхаН-110 с видимым К1 ~ 2 мкМ. Замена СН2 на СНСН3 (С1уН-106-107) также улучшала ингибирование СРТВ. При другом изменении структуры добавление метильной группы в качестве В3 в соединении С1уН-102, приводящее к С1уН-109, приводило к лучшему ингибированию СРТВ. Модификация группы Ν^ 61уН-101 и 61уН-102 в группу Ν^№2 в 61уН-301 и 61уН-302 или ΝΉ-СО в 61уН-201 и 61уН-202, снижало ингибирующую способность в отношении СРТВ.
- 37 011074
Таблица 1. Взаимоотношение ι-активность группы 1
Группа 1
и я '4 н гидразиды глицина {С1уН, Х=СНЦ гидразиды оксамовой кислоты (ОхаН, Х=СО) 3
Соединение Κι X К; Кз Κι (мкМ) % ингибирования при 50 мкМ
С1уН-101 2-нафталенил сн2 3,5-ди-Вг- 2,4-ди-ОНРН Н 5 95
С1уН-1О2 2-нафталенил сн2 3,5-ди-Вг- 4-ОН-РИ н 5 98
С1уН-103 2-нафталенил сн; 3,5-ди-Вг- 2-ОН-4ОМе-РИ н 20 56
С1уН-104 1-нафталенил сн2 3,5-ди-Вг- 2,4-ди-ОНРЬ н 12 86
С1уН-105 1-нафталенил СН; 3,5-ди-Вг- 4-ОН-РЬ Н 15 87
С1уН-106 2-нафталенил СНСНэ 3,5-ди-Вг- 2,4-ди-ОНРН н 6 91
С1уН-107 2-нафталенил СНСНз 3,5-ди-Вг4-ОН-РИ Н 10 80
С1уН-108 2-нафталенил сн; 3,5-ди-Вг- 2,4-ди-ОНРП СНз 10 81
С1уН-109 2-нафталенил сн; 3,5-ди-Вг- 4-ОН-РЬ СН3 2,5 100
ОхаН-110 2-нафталенил со 3,5-ДИ-Вг- 2,4-ди-ОНРН н 2 86
соединений.
- 38 011074
ОхаН-111 2-нафталенил СО 3,5-ДИ-ВГ-4ОН-РЬ Н 2,5 52
ОхаН-112 2-нафталенил СО 3,5-ди-Вг- 2,4-ди-ОН-РЬ СНз 3 95
ОхаН-113 2-нафталенил СО 3,5-ди-Вг-4ОН-РЬ СНз 3 90
О1уН-114 4-С1-РН СН; 3,5-ДИ-ВГ-4ОН-РЬ Н 5 95
01уН-115 4-С1-РН СН; 3,5-ди-Вг- 2,4-ди-ОН-РЬ Н 5 91
О1уН~116 4-Ме-РЬ СН; 3,5-ди-Вг- 2,4-ди-ОН-РЬ Н 10 79
01уН-117 2-Ме-РЬ СН; 3,5-ди-Вг- 2,4-ди-ОН-РЬ Н
61УН-118 1-нафталенил сн; З-Вг-4-ОН-РЬ Н
<31уН-119 2-нафталенил СН; 2,4-ди-ОН-РЬ Н
С1 уН-120 2-нафталенил СН; 4-Вг-РЬ Н
С1уН-121 2-нафталенил СН; 4-карбоксиРЬ Н
01уН-122 4-С1-РН СН; 3,5-ДИ-ВГ-2ΟΗ-4-СМе-РЬ Н
С1уН-123 4-С1-РН СН; 2,4-ди-ОН-РЬ Н
С1уН-124 2-анΐρаценил СН; 3,5-ди-Вг- 2,4-ди-ОН-РЬ н
С1уН-125 2-ан траценил СН; 3,5-ди-Вг-4ОН-РЬ н
01уН-126 6-хинолинил СН; 3,5-ди-Вг- 2,4-ДИ-ОН-РЬ Н
01уН-127 6-хинолинил СН; 3,5-ди-Вг-4ОН-РЬ н
Таблица 2. Взаимоотношение структура-активность группы 2 гидразидсодержащих соединений
алкил, тригалоген, алкокси, дигалоген, галоген, 4Й-РИ:
гидрокси+алкокси,
Гризамещенный-РЬ: дигалоген+алкил
Монозамещеняый-РЬ: галоген, алкокси, арил, нитро, диалкиламино, дигалоген, диалкил,
К2=РЬ, алкил, арилокси, гидрокси,
Дизамащенный-РЬ: дигидрокси, галоген+алкил, гидрокси+алкокси,
диалкокси
Соединение Κι X К2 к. (мкМ) % ингибир ования при 50 мкМ
С1уН-201 2-нафталенил сн2 3,5-ди-Вг-2,4ди-ОН-РЬ 20 65
01уН-202 2-нафталенил сн2 3,5-ди-Вг-4-ОНРЬ 22 57
ОхаН-203 2-нафталенил со 3,5-ди-Вг-2,4ди~ОН-РЬ >50
ОхаН-204 1-нафталенил со 3,5-ДИ-ВГ-4-ОНРЬ >50
- 39 011074
Таблица 3. Взаимоотношение структура-активность группы 3 гидразидсодержащих соединений
Соединение Κι X В; К, (мкМ) % ингибиро вания при 50 мкМ
С1уН-ЗО1 2-нафталенил СН: 3,5-ди-Вг- 2,4-ди-ОН-РП ~50 50
О1уН-302 2-нафталенил СН; 3,5-ди-Вг-4- ОН-РЬ ~50 55
ОхаН-ЗОЗ 2-нафталенил СО 3,5-ди-Вг-2ОН-4-ОМе-РП 10 70
ОхаН-304 2-нафталенил СО 3,5-ди-Вг- 2,4-ди-ОН-РН 12 78
Таблица 4. Взаимоотношение структура-активность группы 4 гидразидсодержащих соединений
-и (IV) н
Соединение В1 К; К1 (мкМ) % ингибирования при 50 мкМ
АсеН-401 2-нафтокси 3,5-ди-Вг-2,4-диОН-РЬ 21 84
АсеН-402 2-нафтокси 3,5-ДИ-ВГ-4-ОН-РН 17 86
АсеН-403 4-Ме-РЬ 3,5-ди-Вг-2-ОН-4ОМе-РЬ 10· 54
АсеН-404 4-Ме-РЬ 3,5-ди-Вг-2,4-диОН-РЬ 15 63
(Таблицы 1-4: К1 показывает концентрацию, приводящую к 50%-ному ингибированию С1- проводимости СЕТК по данным анализа тока короткого замыкания на ЕКТ клетках, экспрессирующих СЕТК).
Пример 3. Анализ механизма ингибирования СЕТК методом фиксации потенциала.
Механизм блокирования СЕТК с помощью С1уН-101 исследовали с использованием метода фиксации потенциала на цельных клетках. После максимальной активации СЕТК в стабильно трансфицированных клетках ЕКТ с помощью 5 мкМ форсколина, измеряли соотношения ток-напряжение при концентрациях С1уН-101 от 0 до 50 мкМ. Иллюстративные первоначальные результаты регистрации тока показаны на фиг. 4А. В отсутствие ингибитора (левая полоса) мембранный ток линейно увеличивается при увеличении напряжения, и явление релаксации не наблюдается, как ожидалось для чистых токов СЕТК С1-. Межклеточное обрызгивание 10 мкМ С1уН-101 приводило к немедленному уменьшению тока, который сильно зависел от мембранного потенциала (фиг. 4А, правая полоса). При более положительных мембранных потенциалах наружные положительные токи (движение С1- в клетку) снижались по сравнению с внутренними токами. На фиг. 4В показано взаимоотношение ток-напряжение для концентраций С1уН-101, составляющих 0 (контроль), 10 и 30 мкМ, и после вымывания 30 мкМ С1уН-101 (восстановление). Данные для тиазолидинона - 3-[(3-трифторметил)фенил]-5-[(4-карбоксифенил)метилен]-2-тиоксо-4тиазолидинон (упоминаемый в данном описании как СЕТК1п41-172), (5 мкМ) приведены для сравнения. Взаимоотношение ток-напряжение было линейным в отсутствие ингибитора, после вымывания С1уН-101 и после ингибирования с использованием СЕТК11Л-172, тогда как ингибирование с использованием С1уН101 при субмаксимальной концентрации приводило к внутреннему выпрямлению. На фиг. 4С суммированы данные процента блокирования тока СЕТК как функции концентрации С1уН-101 при различных мембранных напряжениях. Ингибирующая способность С1уН-101 снижалась при более отрицательных напряжениях при видимой К1, составляющей 1,4, 3,8, 5,0 и 5,6 мкМ для напряжений +60, +20, -20 и -60
- 40 011074 мВ, соответственно (коэффициенты Хилла, пН= 0,5, 0,7, 1,3, 1,8).
Эксперименты фиксации потенциала на закрепленных клетках проводили для исследования механизма блокирования посредством С1уН-101 С1- тока СРТК на уровне отдельного канала. На фиг. 4Ό показано зависимое от концентрации С1уН-101 уменьшение активности канала СРТК без изменения проводимости в отдельном канале. Среднее время открытия канала заметно снижалось с появлением кратких закрываний во время открытых разрывов, частота которых повышалась с увеличением концентрации С1уН-101. В отсутствие ингибитора среднее время открытия канала составляло 264±11 мс (средняя ошибка, п=10). Среднее время открытия канала при +60 мВ при концентрации С1уН-101 0,4, 1 и 5 мкМ уменьшалось до 181±29, 38±5 и 13±2 мс, соответственно (п=5; р<0,01 для всех концентраций относительно контроля).
Кинетические и электрофизиологические данные указывают, что гидразидсодержащие соединения блокируют СРТК С1- проводимость путем закупоривания анионной поры СРТК при или около внешней поверхности мембраны. В отличие от других ингибиторов СРТК, включая тиазолидинон СРТК1пВ-172, блокирование СРТК посредством гидразидсодержащего С1уН-101 вызывало внутренне спрямляющиеся токи СРТК С1-. По сравнению с СРТК1пЬ-172 С1уН-101 является в ~50 раз более растворимым в воде и быстродействующим/обратимым при добавлении или удалении из межклеточного раствора, что согласуется с его действием на обращенной вовне поверхности СРТК Анализ структура-активность, проведенный для серии целевых гидразидсодержащих аналогов, определил структурные определяющие факторы для ингибирования СРТК и дал возможность создания аналогов с большей ингибирующей способностью в отношении СРТК, лучшим из которых является ОхаН-110 с К1 ~2 мкМ. Хотя наиболее эффективный тиазолидинон СРТК1пВ-172 имеет К1 ~0,2-0,3 мкМ в препаратах клеток с нарушенной проницаемостью, его К1 составляет 2-5 мкМ в большинстве целых эпителиальных клеток вследствие внутреннего отрицательного мембранного потенциала, который снижает его концентрацию в цитоплазме. Таким образом, гидразидсодержащие соединения являются такими же или более эффективными, чем тиазолидиноны, и аналогично тиазолидинонам они блокируют СРТК в эпителии носа и кишечника ш у1уо.
Исследования фиксации потенциала показывают, что ингибирование СРТК посредством С1уН-101 является чувствительным к мембранному потенциалу. При субмаксимальных концентрациях С1уН-101 имелось заметное внутреннее выпрямление во взаимоотношении ток СРТК-напряжение, показывающее, что поток С1- от внешней к внутренней стороне мембраны блокируется более сильно, чем в противоположном направлении. Видимые К1 увеличиваются приблизительно в 4 раза при изменении прикладываемого потенциала от +60 до -60 мВ. Поскольку С1уН-101 является отрицательно заряженными при рН 6-8, простейшая интерпретация этих данных заключается в том, что ингибирование посредством С1уН-101 включает непосредственное взаимодействие с порами канала на внешней стороне мембраны. Соответственно, отрицательные мембранные потенциалы снижают ингибирующую эффективность отрицательно заряженного С1уН-101 посредством электростатического отталкивания, которое направляет соединение во внешнюю часть поры. В противоположность этому, блокатор открытого канала глибенкламид, который, как предполагается, действует с внутренней стороны поры СРТК (8йерраМ & КоЬшкоп, 1997 1. РЬу8ю1., 503: 333-346), приводит к внешнему выпрямлению взаимоотношения ток СРТК-напряжение (/Кои е! а1., 2002, 1. Сеп. РЬу8ю1., 120: 647-662).
Анализ данных доза-ответная реакция для С1уН-101 также показал повышение видимого коэффициента Хилла при более отрицательных мембранных потенциалах, демонстрируя возможность существования более одного сайта связывания ингибитора внутри поры и/или совместное взаимодействие между молекулами ингибитора, как сообщалось ранее для других ионных каналов (Ро!!о81п е! а1., 1999, ВюрКу8. 1., 77: 1973-1979; Вгоск е! а1., 2001, 1. Сеп. РЬу8ю1. 118: 113-134). В поддержку гипотезы о том, что С1уН-101 представляет собой блокатор открытого канала, говорят связанные с клетками эксперименты по фиксации потенциала на закрепленных клетках, показавшие быстрое закрытие внутри разрывов отверстий каналов. Частота быстрых закрытий увеличивалась с увеличением концентрации С1уН-101, приводя к снижению среднего времени существования открытого канала, как это было выявлено для глибенкламида (8йеррагй & КоЬт8оп, 1997, 1. Р11у8ю1.. 503: 333-346). Появление случаев закрытия в миллисекундной временной шкале позволяет классифицировать С1уН-101 как блокатор канала «промежуточного» типа, аналогично глибенкламиду; в отличие от этого «быстрые» блокаторы снижают видимую проводимость отдельного канала, а «медленные» блокаторы вызывают закрытие, имеющее продолжительность многих секунд. В экспериментах по фиксации потенциала для целых клеток и тока короткого замыкания СРТК С1- проводимость полностью ингибировалась при высоких концентрациях (> 30 мкМ) С1уН-101. Вместе данные результаты демонстрируют, что механизм ингибирования С1уН-101 включает непосредственную непроходимость пор СРТК в месте поверхности пор, обращенной в межклеточное пространство, или около него.
Пример 4. Физические свойства гидразидов глицина.
Интерпретация зависимого от напряжения механизма ингибирования требует знания о строении ионных частиц С1уН-101, которые взаимодействуют с СРТК. Исследования тока короткого замыкания показывают, что К1 для ингибирования посредством С1уН-101 С1- тока СРТК не зависят от рН в диапазо
- 41 011074 не 6-8 (не показано), в котором соединение является высокорастворимым в воде (0,8-1,3 мМ в воде, 22°С). Возможные титруемые группы в С1уН-101 при рН в диапазоне 3-10 включают вторичный глицинильный амин и резорциновые гидроксилы.
Спектрофотометрическое титрование С1уН-101 показывает наличие по крайней мере двух протонирований/депротонирований при рН между 4 и 9 (фиг. 5А, верхняя полоса). Для установления величин рКа были синтезированы аналоги С1уН-101, которые не содержат одной или нескольких титруемых групп. Удаление вторичного амина (АсеН-403) оказывало незначительное влияние на титрование, вызывая только минимальный сдвиг влево восходящей кривой, что позволяет предположить рКа ~5,5 для титрования первого фенольного гидроксила. Удаление одного гидроксила в орто-положении (С1уН-102) приводило к пропаданию нисходящей части кривой, что подтверждало величину рКа ~5,5 для первого пара-гидроксила и ~8,5 для второго орто-гидроксила. Удаление ароматического кольца, содержащего резорциновые гидроксилы (этил-№(2-нафталенил)глицинат, фиг. 5А, нижняя полоса), указывало на рКа ~4,7 для оставшегося вторичного амина. Выведенное из этих данных равновесие между ионными формами С1уН-101 показано на фиг. 5В. С1уН-101 при рН между 6 и 8 в первую очередь существует в виде однократно заряженного аниона.
Пример 5. Ингибирование СЕТВ у мышей ίη νίνο.
Ингибирование СЕТВ-зависимого С1- тока в эпителии дыхательных путей ίη νίνο было продемонстрировано с помощью измерения разницы назального потенциала (ΡΌ) на мышах. Значения назальных ΡΌ измеряли непрерывно как ответную реакцию на изменяющиеся серийные растворы, в которые добавляли амилорид (для блокирования каналов Е№1С Να') с последующей заменой С1- на глюконат (для индуцирования С1- зависимой гиперполяризации), с добавлением форсколина (для активации СЕТВ) и добавлением С1уН-101 (для ингибирования СЕТВ). Иллюстративные зарегистрированные данные ΡΌ на фиг. 6 А (левая полоса) показывают гиперполяризацию (более отрицательные значения ΡΌ) с последующими растворами с низкой концентрацией С1- и форсколином, представляющие СЕТВ-независимый и зависимый С1- токи, соответственно. Местное применение С1уН-101 в перфузате быстро обращает в противоположном направлении индуцированную форсколином гиперполяризацию. Средние результаты серии измерений суммированы на фиг. 6А (правая полоса). Парный анализ изменений ΡΌ (ΔΡΌ, фиг. 6В) указывал гиперполяризацию в ~4 мВ после форсколина с деполяризацией на аналогичную величину после добавления С1уН-101; для сравнения показаны данные для СЕТВщь-172, полученные в предшествующем исследовании. В отдельной серии экспериментов назальные значения ΡΌ измеряли, как в случае А, за исключением того, что все растворы содержали ΌΙΌ8 или С1уН-101. На фиг. 6С показано частичное ингибирование посредством ΌΙΌ8 (СЕТВ-независимой) гиперполяризации, вызываемой низким содержанием С1- (левая полоса) и значительное ингибирование посредством С1уН-101 индуцированной форсколином гиперполяризации (правая полоса). Совместно данные результаты показывают быстрое ингибирование С1- проводимости СЕТВ верхних дыхательных путей при местном введении С1уН-101.
Также была оценена эффективность С1уН-101 для ингибирования секреции жидкости в кишечнике, индуцированной цАМФ/холерным токсином. Были проведены эксперименты, связанные с током короткого замыкания в клетках различных типов и в целой тощей кишке мыши в условиях без нарушения целостности мембраны и в отсутствие градиента С1-. В каждом случае СЕТВ активировали с использованием СРТ-цАМФ после ингибирования Е№1С с помощью амилорида. На фиг. 7А показаны аналогичные Κί ~ 5 мкМ для ингибирования цАМФ-стимулированного тока короткого замыкания с помощью С1уН-101 в клетках Т84 (верхняя полоса), первичных культурах бронхиальных клеток человека (средняя полоса) и в целой тощей кишке мыши (нижняя полоса). Ингибирование составляло ~ 100% при более высоких концентрациях С1уН-101. Индуцированную холерным токсином секрецию жидкости измеряли на модели закрытой петли кишечника ίη νίνο, в которых в петли каждой мыши вводили инъекции физиологического раствора (контроль), холерного токсина (1 мкг) или холерного токсина (1 мкг) + С1уН-101 (0,25 мкг). С1уН-101 добавляли в просвет кишечника (а не системно), основываясь на первоначальных исследованиях, показывающих слабое всасывание в кишечнике и незначительное воздействие системно введенного соединения. По сравнению с контролем при использовании физиологического раствора, индуцированное холерным токсином увеличение секреции жидкости в течение 4 ч, количественно оцененное по соотношению вес петли к длине петли уменьшалось на 80% с помощью С1уН-101.
Пример 6. Синтез блокирующих поры СЕТВ соединений с высокой растворимостью в воде.
Стратегия создания соединений ингибиторов СЕТВ с высокой растворимостью в воде с минимальным всасыванием в кишечнике заключалась в модификации структуры С1уН-101 путем добавления полярных объемных групп, как показано на фиг. 8. Из анализа взаимоотношения структура-активность для соединений гидразидов глицина было установлено, что минимальные модификации положения глицильного метила не оказывают влияния на ингибирующую активность в отношении СЕТВ. Эффективный синтез ингибиторов СЕТВ с высокой растворимостью в воде был разработан с применением диэтилброммалонатного промежуточного соединения (фиг. 9-11). Взаимодействие 2-нафталинамина с диэтилброммалонатом с последующей реакцией с гидразином давала универсальное промежуточное соединение дигидразида малоновой кислоты (фиг. 9). Конденсация данного дигидразида с 3,5-дибром-2,4
- 42 011074 дигидроксибензальдегидом приводила к ключевому соединению 4, которое при дальнейшей конденсации с тем же альдегидом давало соединение Ма1Н-1. Аналогично, 2,4-динатрийдисульфобензальдегид и 4-натрийсульфофенилизотиоцианат конденсировали с соединением 4 для образования соединений Ма1Н2 и Ма1Н-3, соответственно.
Ма1Н-1 является структурно аналогичным О1уН-101 за исключением дополнительного бензальдегидного фрагмента, который делает его дважды заряженным, более объемным и более гидрофильным. Ма1Н-1 растворим в воде до >5 мМ. Ма1Н-2 содержит две группы дисульфоновой кислоты, а Ма1Н-3 содержит один фрагмент сульфоновой кислоты с гидрофильным тиомочевинным линкером. Оба соединения неограниченно растворимы (> 50% вес/объем, 20°С) в воде и физиологическом растворе.
Промежуточное соединение 4 также использовали для образования Ма1Н-(ΡΕ6)η и Ма1Н-(ТЕС)||В посредством конденсации с различными фенилизотиоцианатами 6а и 6Ь, содержащими ΡΕΟ (фиг. 10). Промежуточные соединения 6а и 6Ь были синтезированы реакцией 1,4-фенилендиизотиоцианата 5а и бис-[(4-изотиоцианато)фенил]метана 6Ь с подходящими амино-ΡΕΟ соединениями. Фрагмент ΡΕΟ повышал растворимость в воде до ~ 10 мМ. Другой подход к синтезу соединений, содержащих фрагмент ΡΕΟ (ΡΕΟ-илированных соединений) включал введение гидроксиэтильного фрагмента по глицильному метилу и дальнейшее использование гидроксильной группы для связывания цепи ΡΕΟ (фиг. 11). Реакция бромбутиролактона с 2-нафталинамином и последующая реакция с гидразидом приводила к гидразиду 7. С использованием стандартной химии с введением и снятием защитной Вос группы, данный гидразид превращали в производное ΡΕΟ с использованием его гидроксильной группы. Гидразид 11, содержащий группу ΡΕΟ, конденсировали с ароматическим альдегидом для получения 61уΜ-ΐΤΕΟ),, который имеет такую же растворимость, что и
Пример 7. Ингибирование СЕТК блокирующими поры СЕТК соединениями с высокой растворимостью в воде.
Ингибирование СЕТК соединениями Ма1Н анализировали с помощью анализа тока короткого замыкания с использованием клеток ЕКТ, экспрессирующих СЕТК человека дикого типа. Апикальный мембранный хлоридный ток измеряли после нарушения проницаемости клеточной базолатеральной мембраны в присутствии трансэпителиального градиента хлорида. Как показано на фиг. 12, СЕТК активировали с помощью проникающего в клетки агониста цАМФ СРТ-цАМФ, а затем добавляли повышающиеся концентрации соединения Ма1Н. Результаты показывают, что ингибирование было быстрым и почти полным при высоких концентрациях Ма1Н. Дополнительно результаты также показывают, что ингибирующая способность (Κ1) была в диапазоне 2-8 мкМ.
Анализ тока короткого замыкания в монослоях эпителиальных клеток, экспрессирующих СЕТК, показал быстрое ингибирование хлоридного тока в качестве ответной реакции на добавление соединения в раствор просвета кишечника. Важно, что около 100% блокирования хлоридного тока достигалось при высоких ингибирующих концентрациях. Ингибиторы были также химически стабильными в присутствии содержимого кишечника, а токсичность не проявлялась, когда ингибиторы присутствовали в высокой концентрации в клеточных культурах или при системном введении мышам. Эффективное блокирование СЕТК данными растворимыми в воде непроницаемыми соединениями при добавлении извне обеспечивает прямое доказательство того, что местом блокирования является обращенная наружу поверхность СЕТК.
Пример 8. Исследование всасывания в кишечнике и противодиарейной эффективности для соединений, обладающих высокой растворимостью в воде, блокирующих поры СЕТК.
Всасывание в кишечнике измеряли на мышах ш νίνο по исчезновению соединений Ма1Н из просветов закрытых петель средней части тонкого кишечника в течение 2 ч. В данных экспериментах в содержащие Ма1Н растворы включали маннит для предотвращения поглощения жидкости. Скорости всасывания соотносили относительно большого Е^С-декстрана, который, как предполагается, не подвергается всасыванию в исследовании в течение 2 ч. Суммированные данные на фиг. 13, полоса А, показывают, что всасывание соединений Ма1Н в течение 2 ч составляет ниже 5%, тогда как в течение данного времени абсорбировалось > 90% тиазолидинонового ингибитора СЕТК1пЬ-172.
Противодиарейная эффективность была проанализирована на закрытых петлях средней части тонкого кишечника на мышах. В петли вводили инъекции физиологического раствора или растворов холерного токсина, содержащих различные концентрации соединений Ма1Н. Выделение жидкости из кишечника определяли через 6 ч путем измерения длины и веса петли. Данные, суммированные на фиг. 13, полоса В, показывают соотношение веса петли к длине петли (соответствующее 100% ингибированию), составляющее 0,09, в петлях в случае инъекции физиологического раствора и 0,28 (соответствующее 0% ингибированию) в петлях с инъекцией холерного токсина. Результаты показывают, что каждое из соединений Ма1Н ингибировало секрецию петли доза-зависимым образом, по существу при полном ингибировании при более высоких концентрациях.
Результаты показывают, что ингибиторы СЕТК на основе гидразидов глицина незначительно всасываются в кишечнике и в модели грызунов выделения жидкости, индуцированного холерным токсином, эффективны для предотвращения выделения жидкости, индуцированного холерным токсином. Преиму
- 43 011074 щества противодиарейной терапии с использованием неабсорбируемых соединений заключаются в том, что можно достичь высоких концентраций в кишечнике при минимальном беспокойстве о токсичности и не целевых воздействиях, связанных с клеточным поглощением и системной абсорбцией.
Хотя настоящее изобретение было описано со ссылкой на его конкретные варианты осуществления, специалистам в данной области следует понимать, что могут быть сделаны различные изменения, а эквиваленты могут быть заменены, не отступая от истинной сути и объема изобретения. Кроме того, могут быть осуществлены многие модификации для приспособления к конкретной ситуации, веществу, композиции вещества, способу, стадии или стадиям способа задачи, сути и объема настоящего изобретения. Предполагается, что все такие модификации входят в объем прилагаемой формулы изобретения.

Claims (57)

1. Фармацевтическая композиция, включающая фармацевтически приемлемый эксципиент и соединение формулы (1а)
0*) или его фармацевтически приемлемую соль или стереоизомер, где Х1 представляет собой водород или линейный или разветвленный С1-С8алкил, где С1-С8алкил необязательно замещен сульфогруппой, карбоксильной группой, карбоксамидной группой, полиоксиалкиловым простым полиэфиром, дисахаридом, полиэтиленимином (РЕ1), фенильной группой, необязательно замещенной галогеном, гидрокси, циано, нитро, меркапто, алкилтио, трифторметилом, С1-С7алкилом, С1-С7алкокси, С1-С7ацилом, С1С7ацилокси, карбокси, оксикарбокси, карбоксиметилом, гидроксиметилом, амино, (монозамещенным)амино или (дизамещенным)амино;
Υ представляет собой водород или линейный или разветвленный С1 -С8алкил, где С1 -С8алкил необязательно замещен сульфогруппой, карбоксильной группой, карбоксамидной группой, полиоксиалкиловым простым полиэфиром, дисахаридом, полиамином или полиэтиленимином (РЕ1);
К1 представляет собой незамещенную фенильную группу; замещенную фенильную группу, где фенил замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, включающей гидрокси, С1-С8алкил и галоген; хинолинильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8 алкилом, С1-С7алкокси или сульфо; антраценильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо; нафталенильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо;
К2 представляет собой незамещенный фенил; замещенную фенильную группу, где фенил замещен бромом или карбокси; ди(гидроксил)фенил; моно- или ди(галоген)моно-, ди- или три(гидроксил)фенил или моно- или ди(галоген)моно- или ди(гидрокси)моно или ди-(С1-С7алкокси)фенил; и
К3 представляет собой водород или С1-С8алкил.
2. Композиция по п.1, где Υ представляет собой С1-С8алкил.
3. Композиция по п.1, где Х1 представляет собой С1-С8алкил.
4. Композиция по п.1, где Х1 представляет собой водород, метил или этил.
5. Композиция по п.1, где Х1 представляет собой замещенный С1-С8алкил, где заместитель выбирают из сульфогруппы, карбоксильной группы, карбоксамидной группы, полиоксиалкилового простого полиэфира, дисахарида, полиэтиленимина (РЕ1) или фенильной группы, необязательно замещенной галогеном, гидрокси, циано, нитро, меркапто, алкилтио, трифторметилом, С1-С7алкилом, С1-С7алкокси, С1С7ацилом, С1-С7ацилокси, карбокси, оксикарбокси, карбоксиметилом, гидроксиметилом, амино, (монозамещенным)амино или (дизамещенным)амино.
6. Композиция по п.1, где К1 представляет собой хинолинильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо; антраценильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо, или нафталенильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо.
7. Композиция по п.1, где К1 представляет собой 2-нафталенил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо, или 1-нафталенил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо.
8. Композиция по п.1, где К2 выбран из 3,5-дибром-2,4-дигидроксифенила; 3,5-дибром-4гидроксифенила; 2,4-дигидроксифенила; 4-бромфенила; 4-карбоксифенила и 3,5-дибром-2-гидрокси-4метоксифенила.
9. Композиция по п.1, где К3 представляет собой водород, метил или этил.
10. Композиция по п.1, где Υ представляет собой водород; Х1 представляет собой водород, метил
- 44 011074 или этил; К| представляет собой моно(галоген)фенил или нафталенил; К2 представляет собой ди(галоген)моно(гидрокси)фенил или ди(галоген)-ди(гидрокси)фенил и К3 представляет собой водород или метил.
11. Композиция по п.1, где Υ представляет собой замещенный С1-С8алкил и где Υ замещен сульфогруппой, карбоксильной группой, карбоксамидной группой, группой полиоксиалкилового простого эфира, дисахарида, полиамина или полиэтиленимина (РЕ1).
12. Композиция по п.1, где соединение формулы (1а) имеет структуру, выбранную из следующих формул:
„ДА
- 45 011074
13. Композиция по п.1, где соединение формулы Ца) представляет собой гидразид Ν-2-нафталенил- [(3,5-дибром-2-гидрокси-4-метоксифенил)метилен]глицина, гидразид №1-нафталенил-[(3-бром-4гидроксифенил)метилен] глицина или гидразид 4-хлорфенил-[(3,5-дибром-2-гидрокси-4метоксифенил)метилен]глицина.
14. Композиция по п.1, где соединение формулы Ца) имеет следующую структуру:
15. Фармацевтическая композиция, включающая фармацевтически приемлемый эксципиент и соединение формулы (Ш) или его фармацевтически приемлемую соль или стереоизомер,
Υ представляет собой водород или линейный или разветвленный С1-С8алкил, где С1-С8алкил необязательно замещен сульфогруппой, карбоксильной группой, карбоксамидной группой, полиоксиалкиловым простым полиэфиром, дисахаридом, полиамином или полиэтиленимином (РЕТ);
К1 представляет собой незамещенный фенил; замещенную фенильную группу, где фенил замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, включающей гидрокси, С1-С8алкил и галоген; хинолинильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1С7алкокси или сульфо; антраценильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8 алкилом, С1-С7алкокси или сульфо; нафталенильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо;
- 46 011074
В2 представляет собой незамещенный фенил; замещенный фенил, где фенил замещен бромом или карбокси; ди(гидроксил)фенил; моно- или ди(галоген)моно-, ди- или три(гидроксил)фенил или моно- или ди(галоген)моно- или ди(гидрокси)моно или ди(алкокси)фенил;
В представляет собой водород или С1-С8алкил.
16. Композиция по п.15, где В1 представляет собой моно(галоген)фенил; моно(С1-С8алкил)фенил; моно(галоген)нафталенил, ди(галоген)нафталенил; моно(гидрокси)нафталенил; ди(гидрокси)нафталенил; моно(С1-С7алкокси)нафталенил; ди(С1-С7алкокси)нафталенил; три(С1-С7алкокси)нафталенил; моно(С1С8алкил)нафталенил; ди(С1-С8алкил)нафталенил; моно(гидрокси)моно(сульфо)нафталенил; моно(гидрокси)ди(сульфо)нафталенил; моно(С1-С8алкил)моно (С1-С7алкокси)нафталенил или моно(С1-С8 алкил)ди(С1-С7алкокси)нафталенил.
17. Композиция по п.15, где В1 представляет собой 1-нафталенил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо, 2-нафталенил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо, 2-хлорфенил, 4-хлорфенил, 4-метилфенил, 2-антраценил или 6-хинолинил.
18. Композиция по п.15, где В2 представляет собой 2,5-дибром-2,4-дигидроксифенил; 2,5-дибром2,4,6-тригидроксифенил; 2,5-дибром-4-гидроксифенил; 2,5-дибром-2-гидрокси-4-метоксифенил; 2-бром4-гидроксифенил; 2,4-дигидроксифенил; 4-бромфенил или 4-карбоксифенил.
19. Композиция по п.15, где В выбирают из водорода или метила.
20. Композиция по п.15, где Υ представляет собой С1-С8алкил.
21. Композиция по п.15, где Υ представляет собой водород; В1 представляет собой моно(галоген)фенил или нафталенил; В2 представляет собой ди(галоген)-моно- или ди(гидрокси)фенил; и В2 представляет собой водород или метил.
22. Фармацевтическая композиция, включающая фармацевтически приемлемый эксципиент и соединение формулы (1с) или его фармацевтически приемлемую соль или стереоизомер,
Υ представляет собой водород или линейный или разветвленный С1-С8алкил, где С1-С8алкил необязательно замещен сульфогруппой, карбоксильной группой, карбоксамидной группой, полиоксиалкиловым простым полиэфиром, дисахаридом, полиамином или полиэтиленимином (РЕ1);
В1 - хинолинил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо; антраценил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо; нафталенил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо;
В2 представляет собой незамещенный фенил; замещенный фенил, где фенил замещен бромом или карбокси; ди(гидрокси)фенил; моно- или ди(галоген)моно-, ди- или три(гидрокси)фенил; или моно- или ди (галоген)моно или ди-(С1-С7алкокси)фенил; и
В представляет собой водород или С1-С8алкил.
22. Композиция по п.22, где В1 представляет собой 1-нафталенил или 2-нафталенил.
24. Композиция по п.22, где В1 представляет собой нафталенил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо; или хинолинил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо.
25. Композиция по п.22, где В1 представляет собой моно(галоген)нафталенил, ди(галоген)нафталенил; моно(гидрокси)нафталенил; ди(гидрокси)нафталенил; моно(С1С7алкокси)нафталенил; ди(С1-С7алкокси)нафталенил; три(С1-С7алкокси)нафталенил; моно(С1С8алкил)нафталенил; ди(С1-С8алкил)нафталенил; моно(гидрокси)моно(сульфо)нафталенил; моно(гидрокси)ди(сульфо)нафталенил; моно(С1-С8 алкил)моно(С1-С7 алкокси)нафталенил или моно(С1-С8 алкил)ди(С1-С7 алкокси)нафталенил.
26. Композиция по п.22, где В2 выбирают из моно(галоген)фенила, моно- или ди(гидрокси)фенила и моно- или ди(галоген)моно-, ди- или три(гидрокси)фенила.
27. Композиция по п.22, где В2 выбирают из 2,5-дибром-2,4-дигидроксифенила или 2,5-дибром-4гидроксифенила.
28. Композиция по п.22, где В выбирают из водорода, метила или этила.
29. Композиция по п.22, где Υ представляет собой водород; В1 представляет собой нафталенил; В2 представляет собой ди(галоген)моно- или ди(гидрокси)фенил и В2 представляет собой водород или ме тил.
20. Композиция по п.22, где соединение формулы (1с) имеет структуру, выбранную из следующих
- 47 011074 формул:
31. Композиция по п.22, где соединение формулы (!с) имеет структуру следующей формулы:
32. Фармацевтическая композиция, включающая фармацевтически приемлемый эксципиент и соединение, имеющее формулу (II)
О ° (И) или его фармацевтически приемлемую соль или стереоизомер, где X представляет собой -СН2- или -С(=О)-; И1 представляет собой 2-нафталенил; и И2 представляет собой 3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил или 3,5-дибром-4-гидроксифенил.
33. Фармацевтическая композиция, включающая фармацевтически приемлемый эксципиент и соединение, имеющее формулу (III) или его фармацевтически приемлемую соль или стереоизомер, где X представляет собой -СН2- или -С(=О)-; И1 представляет собой 2-нафталенил и И2 представляет собой 3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил или 3,5-дибром-4-гидроксифенил.
34. Фармацевтическая композиция, включающая фармацевтически приемлемый эксципиент и соединение, имеющее формулу (IV)
Н или его фармацевтически приемлемую соль или стереоизомер, где И£ представляет собой 2нафтокси или 4-метилфенил и И2 представляет собой 3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил или 3,5-дибром-4гидроксифенил.
35. Соединение, имеющее структуру следующей формулы Це):
или его фармацевтически приемлемая соль или стереоизомер,
- 48 011074 где Κι представляет собой фенил, необязательно замещенный гидрокси, С1-С8алкилом или галогеном; хинолинил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо; антраценильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1С7алкокси или сульфо; или нафталенил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо;
К2 представляет собой фенил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С£-С7алкокси, С1С8алкилом или сульфо;
К3 представляет собой водород или С1-С8алкил, и
Υ представляет собой линейный или разветвленный С1-С8алкил; или полярную молекулу, где полярную молекулу выбирают из фенильной группы, необязательно замещенной галогеном, гидрокси, циано, нитро, меркапто, алкилтио, трифторметилом, С1-С7алкилом, С1-С7алкокси, С1-С7ацилом, С1С7ацилокси, карбокси, оксикарбокси, карбоксиметилом, гидроксиметилом, амино, (монозамещенный)амино или (дизамещенный)амино; полиоксиалкилового простого полиэфира; полиэтиленимина; дисахарида; трисахарида; полиалкилимина и небольшого аминодекстрана, где полярная молекула присоединена посредством атома кислорода или -С(=О)NΗ-группы.
36. Соединение по п.35, где Κι представляет собой моно(галоген)фенил; моно(С1-С8алкил)фенил; нафталенил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо; или хинолинил.
37. Соединение по п.35, где К1 представляет собой моно(галоген)нафталенил, ди(галоген)нафталенил; моно(гидрокси)нафталенил; ди(гидрокси)нафталенил; моно(С1С7алкокси)нафталенил; ди(С1-С7алкокси)нафталенил; три(С1-С7алкокси)нафталенил; моно(С1С8алкил)нафталенил; ди(С1-С8алкил)нафталенил; моно(гидрокси)моно(сульфо)нафталенил; моно(гидрокси)ди(сульфо)нафталенил; моно(С1-С8 алкил)моно(С1-С7алкокси)нафталенил или моно(С1-С8 алкил)ди(С1-С7алкокси)нафталенил.
38. Соединение по п.35, где К2 выбирают из моно(галоген)фенила; моно или ди(гидроксил)фенила; моно- или ди(галоген)моно-, ди- или три(гидроксил)фенила; и моно- или ди(галоген)моно- или ди(гидроксил)моно- или ди(алкокси)фенила.
39. Соединение по п.35, где Υ представляет собой полярную молекулу, где полярная молекула представляет собой полиоксиалкиловый простой полиэфир, выбранный из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля и полигидроксиэтилглицерина, и где полярная молекула присоединена посредством атома кислорода или -ί’(=Ο)ΝΗ- группы.
40. Соединение по п.35, где Υ представляет собой полярную молекулу, где полярная молекула представляет собой замещенную фенильную группу, выбранную из 2,4-дигидрокси-3,5-дибромфенила; 2,4-динатрийдисульфофенила и 3-мононатриймоносульфофенила, и где полярная молекула присоединена посредством атома кислорода или -ί’(=Ο)ΝΗ- группы.
41. Соединение по п.35, где соединение представляет собой
a) дигидразид 2-нафталениламино-бис-[(3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен]пропандиовой кислоты (Ма1Н-1);
b) дигидразид 2-нафталениламино-[(3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен] [(2,4-динатрийдисульфофенил)метилен]пропандиовой кислоты (Ма1Н-2);
c) дигидразид 2-нафталениламино-[(3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен][3-(4-натрий- сульфофенил)тиоуреидо]пропандиовой кислоты (Ма1Н-3);
6) дигидразид 2-нафталениламино-[(3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен][3-[4-(3-(РЕС)птиоуреидо)фенил]тиоуреидо]пропандиовой кислоты (Ма1Н-(РЕС)п);
е) дигидразид 2-нафталениламино-[(3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен][3-[4-(3-(РЕС)птиоуреидо)дифенил]тиоуреидо]пропандиовой кислоты [Ма1Н-(РЕС)пВ] или
ί) 2-[(3,5-дибром-2,4-дигидроксифенил)метилен]гидразид[2-(2-нафталениламино)-4-(РЕСамино)] бутановой кислоты-(С1уН-(РЕС)п).
42. Соединение по п.35, где соединение выбирают из
- 49 011074
43. Соединение по п.35, где соединение имеет структуру
- 50 011074 где п равно 0-100.
44. Соединение по п.35, где соединение имеет структуру
С1уН-(РЕС), где п равно 0-100.
45. Фармацевтическая композиция, включающая соединение по любому из пп.35-44 и фармацевтически приемлемый эксципиент.
46. Способ лечения субъекта, имеющего болезненное состояние, связанное с аномальным ионным транспортом за счет регулятора кистозно-фиброзной трансмембранной проводимости (СЕТК), где данный способ включает введение субъекту композиции, включающей фармацевтически приемлемый эксципиент и соединение формулы (1а) или его фармацевтически приемлемую соль или стереоизомер, где Х1 представляет собой водород или линейный или разветвленный С1-С8алкил, где С1-С8алкил необязательно замещен сульфогруппой, карбоксильной группой, карбоксамидной группой, полиоксиалкиловым простым полиэфиром, дисахаридом, полиэтиленимином (РЕ1), фенильной группой, необязательно замещенной галогеном, гидрокси, циано, нитро, меркапто, алкилтио, трифторметилом, С1С7алкилом, С1-С7алкокси, С1-С7ацилом, С1-С7ацилокси, карбокси, оксикарбокси, карбоксиметилом, гидроксиметилом, амино, (монозамещенным)амино или (дизамещенным)амино;
Υ представляет собой водород или линейный или разветвленный С1-С8алкил, где С1-С8алкил необязательно замещен сульфогруппой, карбоксильной группой, карбоксамидной группой, полиоксиалкиловым простым полиэфиром, дисахаридом, полиамином или полиэтиленимином (РЕ1);
Κι представляет собой фенильную группу, необязательно замещенную одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, включающей гидрокси, С1-С8алкил и галоген; хинолинильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо; антраценильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо; нафталенильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7 алкокси или сульфо;
- 51 011074
В2 представляет собой фенил, необязательно замещенный одним или несколькими гидрокси, карбокси, С1-С7алкокси и галогенами;
и В3 представляет собой водород или С1-С8алкил, и где при этом СРТВ транспорт ионов ингибируется.
47. Способ лечения субъекта, имеющего болезненное состояние, связанное с аномальным ионным транспортом за счет регулятора кистозно-фиброзной трансмембранной проводимости (СРТВ), где данный способ включает введение субъекту композиции по любому из пп.1-34 и 45, где при этом СРТВ транспорт ионов ингибируется.
48. Способ по п.47, где ионный транспорт посредством СРТВ аномально повышен.
49. Способ по п.48, где состояние, связанное с аномально повышенным СРТВ ионным транспортом, представляет собой поликистозное заболевание почек.
50. Способ по п.48, где состояние, связанное с аномально повышенным СРТВ ионным транспортом, представляет собой диарею.
51. Способ по п.50, где диарея представляет собой секреторную диарею.
52. Способ ингибирования активности кистозно-фиброзного регулирующего трансмембранную проводимость белка (СРТВ) в клетке при анализе ίη νίίΓΟ, включающий контактирование клетки с композицией по любому из пп.1-34 и 45 в количестве, эффективном для ингибирования СРТВ активности.
53. Способ выработки кистозно-фиброзного фенотипа на модели животного, не являющегося человеком, где способ включает введение животному, не являющемуся человеком, композиции по любому из пп.1-34 и 45 в количестве, эффективном для ингибирования СРТВ ионного транспорта.
54. Животное-модель, не являющееся человеком, имеющее недостаток кистозно-фиброзного трансмембранного регулятора проводимости (СРТВ), полученное способом по п.53, где недостаток возникает при введении животному композиции по любому из пп.1-34 и 45.
55. Способ получения соединения дигидразида малоновой кислоты, включающий превращение промежуточного соединения, имеющего структуру (К), в дигидразид малоновой кислоты взаимодействием промежуточного соединения (К) с фенилтиоцианатным соединением, где фенилтиоцианатное соединение необязательно замещено одним или несколькими галогенами, С1-С8алкилами, гидрокси, С1С8алкокси и сульфо, и где промежуточное соединение имеет следующую струкуру (К):
где
В1 представляет собой фенильную группу, необязательно замещенную одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, включающей гидрокси, С1-С8алкил и галоген; хинолинильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7алкокси или сульфо; антраценильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С8алкокси или сульфо; нафталенильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С7 алкокси или сульфо;
В2 представляет собой фенильную группу, необязательно замещенную галогеном, гидрокси или С1С7алкокси;
и В3 представляет собой водород или С1-С8алкил.
56. Способ по п.55, где В1 представляет собой моно(галоген)фенил; моно(С1-С8алкил)фенил; нафталенил, необязательно замещенный галогеном, гидрокси, С1-С8алкилом, С1-С8алкокси или сульфо; или хинолинил.
57. Способ по п.55, где В2 выбирают из моно(галоген)фенила; моно- или ди(гидроксил)фенила и моно- или ди(галоген)моно-, ди- или три(гидроксил)фенила.
58. Способ по п.55, где В2 выбирают из 3,5-дибром-2,4-дигидроксифенила или 3,5-дибром-4гидроксифенила.
59. Способ по п.55, где соединение дигидразида малоновой кислоты дополнительно включает фрагмент полиэтиленгликоля.
EA200601799A 2004-03-30 2005-03-29 Гидразидсодержащие соединения - ингибиторы cftr и их применение EA011074B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US55793004P 2004-03-30 2004-03-30
PCT/US2005/010787 WO2005094374A2 (en) 2004-03-30 2005-03-29 Hydrazide-containing cftr inhibitor compounds and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200601799A1 EA200601799A1 (ru) 2007-04-27
EA011074B1 true EA011074B1 (ru) 2008-12-30

Family

ID=35064333

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200601799A EA011074B1 (ru) 2004-03-30 2005-03-29 Гидразидсодержащие соединения - ингибиторы cftr и их применение

Country Status (10)

Country Link
US (3) US7414037B2 (ru)
EP (1) EP1740532A4 (ru)
CN (1) CN1960966A (ru)
AU (1) AU2005228685B2 (ru)
BR (1) BRPI0509282A (ru)
CA (1) CA2561560A1 (ru)
EA (1) EA011074B1 (ru)
IL (1) IL178297A0 (ru)
WO (1) WO2005094374A2 (ru)
ZA (1) ZA200608142B (ru)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2734876C2 (ru) * 2014-10-06 2020-10-23 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед Модуляторы регулятора трансмембранной проводимости при муковисцидозе
RU2756743C2 (ru) * 2016-06-03 2021-10-05 Эббви Глобал Энтерпрайзис Лтд. Замещенные гетероарилом пиридины и способы применения
US11453655B2 (en) 2016-12-09 2022-09-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulator of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, pharmaceutical compositions, methods of treatment, and process for making the modulator
US11465985B2 (en) 2017-12-08 2022-10-11 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes for making modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
US11517564B2 (en) 2017-07-17 2022-12-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods of treatment for cystic fibrosis

Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7414037B2 (en) * 2004-03-30 2008-08-19 The Regents Of The University Of California Hydrazide-containing CFTR inhibitor compounds and uses thereof
AU2007231012B2 (en) * 2006-03-24 2013-07-04 The Feinstein Institute For Medical Research Phenolic hydrazone macrophage migration inhibitory factor inhibitors
RU2451018C2 (ru) 2006-04-07 2012-05-20 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед Модуляторы атф-связывающих кассетных транспортеров
US10022352B2 (en) 2006-04-07 2018-07-17 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of ATP-binding cassette transporters
US7645789B2 (en) 2006-04-07 2010-01-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Indole derivatives as CFTR modulators
US8563573B2 (en) 2007-11-02 2013-10-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Azaindole derivatives as CFTR modulators
US8552067B2 (en) * 2006-12-22 2013-10-08 The Regents Of The University Of California Macromolecular conjugates of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator protein inhibitors and uses therefor
US8283351B2 (en) 2007-04-02 2012-10-09 Institute For Oneworld Health Cyclic and acyclic hydrazine derivatives compositions including them and uses thereof
CA2705562C (en) 2007-11-16 2016-05-17 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Isoquinoline modulators of atp-binding cassette transporters
CN101910156B (zh) 2007-12-07 2013-12-04 沃泰克斯药物股份有限公司 3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰氨基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸的固体形式
US20110015239A1 (en) 2007-12-14 2011-01-20 The Regents Of The University Of California Inhibitors of calcium-activated chloride channels
US20110105565A1 (en) * 2008-03-25 2011-05-05 The Regents Of The University Of California Water soluble small molecule inhibitors of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
PT2615085E (pt) 2008-03-31 2015-10-09 Vertex Pharma Derivados piridilo como moduladores cftr
JP2011516499A (ja) * 2008-04-04 2011-05-26 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子を阻害するための二価ヒドラジド化合物コンジュゲート
WO2009131957A2 (en) 2008-04-21 2009-10-29 Institute For Oneworld Health Compounds, compositions and methods comprising oxadiazole derivatives
WO2009131958A2 (en) * 2008-04-21 2009-10-29 Institute For Oneworld Health Compounds, compositions and methods comprising triazine derivatives
WO2009131956A1 (en) * 2008-04-21 2009-10-29 Institute For Oneworld Health Compounds, compositions and methods comprising triazole derivatives
US20100099677A1 (en) * 2008-04-21 2010-04-22 Institute For Oneworld Health Compounds, Compositions and Methods Comprising Thiazole Derivatives
US8236838B2 (en) * 2008-04-21 2012-08-07 Institute For Oneworld Health Compounds, compositions and methods comprising isoxazole derivatives
WO2009131954A2 (en) * 2008-04-21 2009-10-29 Institute For Oneworld Health Compounds, compositions and methods comprising oxadiazole derivatives
WO2009131947A2 (en) * 2008-04-21 2009-10-29 Institute For Oneworld Health Compounds, compositions and methods comprising pyridazine derivatives
WO2010033626A1 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Institute For Oneworld Health Compounds, compositions and methods comprising imidazole and triazole derivatives
US8511216B2 (en) * 2009-03-30 2013-08-20 Kanzaki Kokyukoki Mfg. Co., Ltd. Hydraulic actuator unit
US8343976B2 (en) 2009-04-20 2013-01-01 Institute For Oneworld Health Compounds, compositions and methods comprising pyrazole derivatives
WO2011019737A1 (en) 2009-08-10 2011-02-17 The Regents Of The University Of California Pyrimido-pyrrolo-quinoxalinedione inhibitors of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator protein and uses therefor
EP2490696A1 (en) 2009-10-20 2012-08-29 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of disorders of glucose homeostasis
WO2011084106A1 (en) * 2010-01-06 2011-07-14 Agency For Science, Technology And Research Novel amphiphiles
CN101941953B (zh) * 2010-02-10 2013-04-10 深圳市湘雅生物医药研究院 含氮杂环取代的酰肼类化合物及其制备方法和用途
US8802868B2 (en) 2010-03-25 2014-08-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of (R)-1(2,2-difluorobenzo[D][1,3]dioxo1-5-yl)-N-(1-(2,3-dihydroxypropyl-6-fluoro-2-(1-hydroxy-2-methylpropan2-yl)-1H-Indol-5-yl)-Cyclopropanecarboxamide
PT2826776T (pt) 2010-03-25 2021-02-01 Vertex Pharma Forma amorfa sólida de (r)-1(2,2-difluorobenzo(d)(1,3)dioxol-5-ilo)-n-(1-(2,3-dihidroxipropilo)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-ilo)-1h-indol-5-ilo)-ciclopropanocarboxamida
BR112012026257A2 (pt) 2010-04-07 2017-03-14 Vertex Pharma formas sólidas de ácido 3-(6-(1-(2-,2-difluorbenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzóico
DK3150198T3 (da) 2010-04-07 2021-11-01 Vertex Pharma Farmaceutiske sammensætninger af 3-(6-(1-(2,2-difluorbenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)-cyclopropancarboxamido)-3-methylpyriodin-2-yl)benzoesyre og indgivelse deraf
MX2012012204A (es) 2010-04-22 2012-12-05 Vertex Pharma Proceso para producir compuestos de cicloalquilcarboxamido-indol.
US8563593B2 (en) 2010-06-08 2013-10-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Formulations of (R)-1-(2,2-difluorobenzo[D] [1,3] dioxol-5-yl)-N-(1-(2,3-dihydroxypropyl)-6-fluoro-2-(1-hydroxy-2-methylpropan-2-yl)-1H-indol-5-yl)cyclopropanecarboxamide
MX2013002035A (es) 2010-08-23 2013-03-25 Vertex Pharma Composiciones farmaceuticas de (r)-1-(2, 2-difluorobenzo[d] [1, 3]dioxol-5-il)-n-(1-(2, 3-dihidroxipropil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2 -metilpropano-2-il)-1h-indol-5-il) ciclopropanocarboxamida y administracion de las mismas.
US9062073B2 (en) 2011-05-27 2015-06-23 The Regents Of The University Of California Pyrimido-pyrrolo-oxazine-dione compound inhibitors of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator protein and uses therefor
WO2013019169A1 (en) 2011-08-01 2013-02-07 Institute For Oneworld Health Phosphate prodrugs
ME02650B (me) 2011-11-08 2017-06-20 Vertex Pharma Modulatori atp- vezujućih kasetnih transportera
BRPI1106472A2 (pt) * 2011-11-29 2014-04-15 Univ Rio De Janeiro Compostos n-glicinil-n-acilidrazônicos heterocíclicos, processo de síntese, composições farmacêuticas e método de tratamento
CA2862859C (en) 2012-01-25 2022-08-02 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Formulations of 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl) cyclopropanecarboxamido)-3-methylpyridin-2-yl)benzoic acid
WO2013173595A1 (en) * 2012-05-16 2013-11-21 Stefan Worgall Methods to decrease susceptibility to asthmatic bronchoconstriction
AR092857A1 (es) 2012-07-16 2015-05-06 Vertex Pharma Composiciones farmaceuticas de (r)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-n-(1-(2,3-dihidroxipropil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1h-indol-5-il)ciclopropancarboxamida y administracion de las mismas
IL283276B2 (en) 2012-11-02 2024-05-01 Vertex Pharma Preparations containing 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[1,3][D]dioxol-5-yl)cycloproponecarboxamide)-3-methylpyridin-2-yl)benzoic acid and N-(5-hydroxy- 2,4-di-tert-butyl-phenyl)-4-oxo-H1-quinoline-3-carboxamide and their uses
MX2015017103A (es) 2013-06-11 2016-11-07 Harvard College Celulas beta derivadas de células madre ( sc-beta ) y composiciones y métodos para generarlas.
ES2957761T3 (es) 2014-04-15 2024-01-25 Vertex Pharma Composiciones farmacéuticas para el tratamiento de enfermedades mediadas por el regulador de la conductancia transmembrana de fibrosis quística
EP3302466A4 (en) 2015-05-29 2018-12-26 Emory University 3-(phenyl)-n-(4-phenoxybenzyl)-1,2,4-oxadiazole-5-carboxamide compounds for the management of cftr protein mediated diseases
EP3804706B1 (en) * 2015-05-29 2023-08-23 Emory University 2-amino-n'-benzylideneacetohydrazides and derivatives for the management of cftr protein mediated diseases
KR101839391B1 (ko) * 2018-01-30 2018-03-16 한국생명공학연구원 아실하이드라존 유도체를 포함하는 항염증 조성물

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0952159A2 (en) * 1998-04-24 1999-10-27 Biostatin Gyogyszerkutato-Fejleszto Kft. Use of somatostatin derivatives and/or of phenylhydrazone derivatives as antinflammatory or analgetic agents
WO2001030333A2 (en) * 1999-10-27 2001-05-03 Sunol Molecular Corporation Tissue factor antagonists and methods of use thereof
US6331555B1 (en) * 1995-06-01 2001-12-18 University Of California Treatment of platelet derived growth factor related disorders such as cancers

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3733374A (en) 1970-04-24 1973-05-15 Exxon Research Engineering Co Thiophosphate acetyl hydrazines
HU167365B (ru) 1973-11-29 1975-09-27
GB2107074B (en) 1981-09-02 1984-09-12 Kodak Ltd Hydrazide compositions methods employing them and photographic materials containing them
DE3382743D1 (de) * 1982-05-07 1994-05-11 Ciba Geigy Verwendung von Chinolinderivaten zum Schützen von Kulturpflanzen.
JPS59162541A (ja) 1983-03-07 1984-09-13 Ricoh Co Ltd 熱現像型ジアゾ複写材料
ES2161594B1 (es) * 1998-12-17 2003-04-01 Servier Lab Nuevos derivados de la hidrazida, su procedimiento de preparacion y las composiciones farmaceuticas que los contienen.
US7414037B2 (en) * 2004-03-30 2008-08-19 The Regents Of The University Of California Hydrazide-containing CFTR inhibitor compounds and uses thereof
US8552067B2 (en) 2006-12-22 2013-10-08 The Regents Of The University Of California Macromolecular conjugates of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator protein inhibitors and uses therefor
US20110105565A1 (en) * 2008-03-25 2011-05-05 The Regents Of The University Of California Water soluble small molecule inhibitors of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
JP2011516499A (ja) 2008-04-04 2011-05-26 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子を阻害するための二価ヒドラジド化合物コンジュゲート

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6331555B1 (en) * 1995-06-01 2001-12-18 University Of California Treatment of platelet derived growth factor related disorders such as cancers
EP0952159A2 (en) * 1998-04-24 1999-10-27 Biostatin Gyogyszerkutato-Fejleszto Kft. Use of somatostatin derivatives and/or of phenylhydrazone derivatives as antinflammatory or analgetic agents
WO2001030333A2 (en) * 1999-10-27 2001-05-03 Sunol Molecular Corporation Tissue factor antagonists and methods of use thereof

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AMINABHAVI et al. Synthesis and Characterization of Biologically Active Organosilicon and Organotin Complexes of Phenylglycyl Hydrazones. Inorganica Chimica Acta, 1987, vol. 135, No. 2, pages 139-143, see Scheme 1, Compounds A-G. *
CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 55, No. 14, 10 July 1961 (Columbus, OH, USA), page 13350-13351, see abstract No. 13350h-i, KONDO et al. "N-Arylglycine Series Chemotherapeutics. I. Synthesis of Aryl Sulfone Derivatives", Yakugaku Zasshi, 1961, vol. 81, pages 97-100. *
VERMA et al. Syntheses and Anti-inflammatory Activities of Substituted Arylamino-[N'-benzylidene)acetohydrazides and Derivatives. Archiv der Pharmazie (Weinheim), 1984, vol. 317, No. 10, pages 890-894, see Table 1, Compounds 1-6. *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2734876C2 (ru) * 2014-10-06 2020-10-23 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед Модуляторы регулятора трансмембранной проводимости при муковисцидозе
US11426407B2 (en) 2014-10-06 2022-08-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
RU2756743C2 (ru) * 2016-06-03 2021-10-05 Эббви Глобал Энтерпрайзис Лтд. Замещенные гетероарилом пиридины и способы применения
US11453655B2 (en) 2016-12-09 2022-09-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulator of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, pharmaceutical compositions, methods of treatment, and process for making the modulator
US11517564B2 (en) 2017-07-17 2022-12-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods of treatment for cystic fibrosis
US11465985B2 (en) 2017-12-08 2022-10-11 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes for making modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator

Also Published As

Publication number Publication date
WO2005094374A3 (en) 2006-09-08
EA200601799A1 (ru) 2007-04-27
US20090048207A1 (en) 2009-02-19
CN1960966A (zh) 2007-05-09
WO2005094374A2 (en) 2005-10-13
EP1740532A4 (en) 2009-06-10
IL178297A0 (en) 2007-02-11
US7414037B2 (en) 2008-08-19
US7888332B2 (en) 2011-02-15
ZA200608142B (en) 2008-05-28
CA2561560A1 (en) 2005-10-13
EP1740532A2 (en) 2007-01-10
US20110119775A1 (en) 2011-05-19
BRPI0509282A (pt) 2007-09-18
AU2005228685A1 (en) 2005-10-13
AU2005228685B2 (en) 2010-08-19
US20050239740A1 (en) 2005-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA011074B1 (ru) Гидразидсодержащие соединения - ингибиторы cftr и их применение
JP4977319B2 (ja) 嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子蛋白質阻害薬およびその使用方法
US11787804B2 (en) Compositions and methods for modulating hair growth
US7638543B2 (en) Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator protein inhibitors and uses thereof
ZA200502517B (en) Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator protein inhibitors and uses thereof
US11813257B2 (en) Methods of treating erythropoietic protoporphyria, X-linked protoporphyria, or congenital erythropoietic porphyria with glycine transport inhibitors
US20200325148A1 (en) Compositions and methods of treatment for neurological disorders comprising motor neuron diseases
JP4625236B2 (ja) ＮＡＡＬＡＤａｓｅ阻害剤としてのヒドロキサム酸およびアシルヒドロキサミン
CN115003380B (zh) 化合物及其用于治疗α1-抗胰蛋白酶缺乏症的用途
US8664237B2 (en) Spiperone derivatives and methods of treating disorders
US20210309634A1 (en) Compositions and methods for treating epigenetic disease
CN111432814A (zh) 用于减轻或治疗包括脆性X染色体综合征、Angelman综合征或Rett综合征的发育障碍的氨基甲酸酯化合物的用途
KR20190054559A (ko) 염증성 통증 또는 염증성 질환에서 기인한 통증의 예방, 경감 또는 치료를 위한 카바메이트 화합물의 용도
CN117321023A (zh) 作为药物活性化合物的间苯二酚衍生物及其制备方法
US20210052537A1 (en) Colitis ameliorating agent

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): RU