PT90706B

PT90706B - Processo para a preparacao de derivados de antraciclinas dotados de actividade citostatica

Info

Publication number: PT90706B
Application number: PT90706A
Authority: PT
Inventors: Cenek Kolar; Dieter Hoffmann; Hans Peter Kraemer; Manfred Gerken; Peter Hermentin; Ulrich Stache; Ernst Raab
Original assignee: Behringwerke Ag
Priority date: 1988-06-04
Filing date: 1989-06-01
Publication date: 1993-12-31
Also published as: EP0345598B1; ES2120944T3; DE58909836D1; DE3819092A1; PT90706A; FI892685A; FI892685A0; US5260425A; EP0345598A2; KR910000777A; AU623892B2; FI93220B; FI93220C; ATE169630T1; CA1340021C; KR0132566B1; DK270889D0; DK270889A; EP0345598A3; JPH0225497A

Description

Descrição da patente de invenção de BEHRINGWERKE AKTIENGESELLSCHAFT, alemã, industrial e comercial, com sede em D-3550 Marburg, República Federal Alemã, (inventores: Dr. Peter Hermentin, Ernest Raab, Dr. Cenek Kolar, Dr₀ Manfred Gerken, Dr. Dieter Hoffmann, Dr. Hans Peter Kraemer, Dr, Ulrich Stache, residentes na Alemanha Ocidental) para PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS DE AIITRACICDINAS DOTADAS DE ACTIVIDADE CITOSTATICA

Descrição

A presente invenção refere-se a um processo para a preparação de novos derivados de antraciclinas dotadas de actividade citostática da fórmula geral I e de composições farmacêuticas que contém estes derivados.

GSP

CH₅

Na fórmula I os símbolos posBuem os se-

guintes significados:

R¹	significa	hidrogénio	ou	um	grupo	hidroxilo,
R²	significa	hidrogénio	ou	um	grupo	hidroxilo ou metoxi
R⁵	significa	hidrogénio	ou	um	grupo	hidroxilo,
R⁴	significa	hidrogénio	ou	um	grupo	hidroxilo,
R⁵	significa hidrogénio metoxicarbonilo,	ou	um	grupo	hidroxilo ou
R⁶	significa	ch₂ch₅, coch₅,	COCHgOH	, CHOHCH^ ou CHOH-

CH₂OH e

R significa um substituinte orgânico com 2 a 6 átomos de carbono, o qual contém pelo menos um átomo de oxigénio ou de azoto ou de enxofre ou uma dupla ligação C-C ou uma tripla ligação C-C, podendo a dupla ligação ser parte de um sistema heteroaromático e o átomo de oxigénio, de azoto ou de enxofre

parte de um sistema de cadeia aberta ou heterociclico, estando, no entanto, excluídos os compostos em que R é um grupo cianometilo ou ura substituinte da fórmula geral COR*, cora R* = CH^, CF^ ou CCl^.

R é de preferência

com X=0, N ou S, podendo o heterociclico eventualmente ser substituido por -CH^, -N0₂, -CHgOH, -Cl ou -Br, não contendo de preferência, no entanto, qualquer substituinte.

R é de preferência um resíduo 2-picolilo, (2-metileno-piridilo), 3-picolilo ou 4-picolilo substituido ou não substituido, de modo especialmente preferido sendo ura resíduo 2-picolilo ou 4-picolilo, ou

R é de preferencia ura resíduo alilo, crotilo ou propargilo, de modo especialraente preferidp sendo ura resíduo alilo, ou

R é de preferência ura hidroxialquilo com 2 a 4 átomos de carbono, de modo especialmente preferido sendo hidroxietilo, ou

R é de preferência glicidilo ou

R^ é de preferência -CHgCOORl cora R^ = hidrogénio, alquilo-C^-C^ linear ou ramificado, substituido ou não substituido, de raodo especialmente preferido com

R^ = hidrogénio, metilo ou etilo, ou

é de preferência -CHgCOMR^ com R^ = hidrogénio, aiquilo-C-, -C_A , de modo ec.pecialmente preferido com + 4

R = hidrogénio, metilo ou etilo.

Os compostos da fórmula I podem eventualmente também apresentar-se sob a forma dos seus sais de adição de ácido com ácidos fisiologicamente aceitáveis inorgânicos ou orgânicos.

E conhecido que um número considerável de antraciclinas apresentam propriedades citostáticas e que algumas antraciclinas, como por exemplo adriamicina, daunomicina, aclacinomicina, 4¹-epi-adriamicina, 4'-metoxiadriamicina ou 4'-desoxiadriamicina são utilizadas para a terapia de tumores.

NA utilização para a terapia de tumores destas antraciclinas conhecidas subsiste um problema importante: estes compostos apresentam juntamente com a actividade citostática pretendida efeitos secundários indesejáveis, como por exemplo uma toxicidade hematológica ou cardíaca.

Tendo em consideração o estado da técnica descrito, consistiu um objectivo da presente invenção a preparação de novos derivados de antraciclinas que possivelmente não apresentam resistência cruzada com a adriamicina e possuam um novo espectro de actividade e uma toxicidade mais baixa em comparação com a adriamicina e deste modo sejam utilizáveis vantajosamente na terapia de tumores.

Com este objectivo já foi descrita a monodesmetilação por via fotolítica de rodosaminil-antraciclinonas e a modifiçação ou substituição selectiva na função metilamina das 3'-N-metil-daunosaminil-antraciclinonas assim preparadas, obtendo-se deste modo numerosas novas

antraciclinas cora actividade citostática,

Por exemplo já foi descrita a derivatização deste modo de 3'-N-raetil-daunosaminil-antraci- clinonas de modo a obter compostos em que R na fórmula I significa cianometilo, COR* ou 0Η₉Η^θ, sendo R* = H, CH_X, 10 ' CF^ ou CCl^ e R alquilo a Cg, alquilo substituido, fenilo ou fenilo substituido, podendo 0 grupo fenilo conter como substituintes no anel fenílico na posição orto, meta ou para grupos metilo, etilo, hidroxilo, metoxi, etoxi, nitro ou ciano ou átomos de fluor, cloro ou brcmo.

Prepararam-se agora pela primeira vez os novos derivados de antraciclinas da fórmula I, os quais não apresentam resistência cruzada em relação às antraciclinas de acordo com 0 estado da técnica e apresentara vantagens era virtude da respectiva solubilidade na água e/ou reactividade e/ou toxicidade. Estes compostos são caracterizados pela fórmula I.

Na realidade é possível, por exemplo melhorar a solubilidade em água, que é importante para a n sua aplicabilidade, dos derivados de benzilo (R = benzilo ou benzilo substituido) já conhecidos quando o núcleo de fenilo do grupo benzilo contém um átorao de azoto sendo deste raodo substituido por um resíduo piridilo.

Surpreendentemente não só a solubilidade era água mas também a actividade citostática de ura composto da fórmula I são influenciadas favoravelmente era com7 paração com 0 composto 3'-N-benzilo quando R é furfurilo ou tenilo.

Foi uma completa surpresa ter-se ve7 rificado que quando R é glicidilo, a citotoxicidade de ura composto da fórraula I é drasticamente aumentada de raodo que este substituinte apresenta uma vantagem considerável.

Quando R é hidroxietilo em vez de etilo ou de propilo, melhora a solubilidade na água do derivado .

Quando R é atilo observa-se uma actividade citostática especialmente boa do derivado de antraciclina.

processo da presente invenção para a preparação dos novos derivados de antraciclínicos dotados de actividade citostática caracteriza-se por fazer-se

2 reagir um composto da fórmula I na qual R = H ou OH, R = = H, OH ou OCH₅, R⁵ = H ou OH, R⁴ = H ou OH, R⁵ = H, OH ou cooch5, r⁶ = ch2ch₅, coch₃, coch₂oh, chohch₅ ou CHOHCHgOH e R^ = Η, o que pode ser levado a efeito de um modo conhecido em si (Tong et al., J. Med. Chem. (1979, 22, 912) na presença de cianoboro-hidreto de sódio, com um aldeído, o qual contém pelo menos ura átomo de oxigénio, de azoto ou de enxofre ou uma dupla ligação C-C ou uma tripla ligação C-C, podendo a dupla ligação ser também parte de ura sistema heteroaroraático e o átomo de oxigénio, de azoto ou de enxofre parte de um sistema de cadeia aberta ou de heterocíclico, ou fazer-se reagir o referido composto de um modo conhecido era si com um composto organo-halogenado, o qual contém pelo menos um átomo de oxigénio, de azoto ou de enxofre ou uma dupla ligação C-C ou uma tripla ligação C-C, podendo a dupla ligação ser também parte de ura sistema heteroaromático e o átomo de oxigénio, de azoto ou de enxofre parte de um sistema de cadeia aberta ou heterocíclico, excluindo -se no entanto qualquer halogeno-acetonitrilo, de modo a ob1 6 ter-se um composto da fórmula I no qual R a R possuem os signif cados anteriormente definidos e R é um substituinte orgânico, o qual contéra pelo raenos um átomo de oxigénio, de azoto, o qual contém pelo menos ura átomo de oxigénio, de azoto ou de enxofre ou uma dupla ligação C-C

ou uma tripla ligação C-C, podendo a dupla ligação também ser parte de um sistema heteroatromático e o átomo de oxigénio, de azoto ou de enxofre parte de um sistema de cadeia aberta ou heterocíclico.

A preparação dos compostos de partida é levada a efeito por monodesmetilação fotolítica de rodosarainil-antraciclinonas de um modo conhecido em si (Hermentin et al., 4th European Carbohydrate Symposium, Darmstadt, RFA, 12-17 de Julho de 1987, Abstracts of Papers, A-144; Hermention et al., EP 0 270 992 Ah). A transformação nos compostos da fórmula I de acordo com a presente invenção é levada a efeito por exemplo por reacção de cada um dos compostos de partida da fórmula I com R =H com aldeídos ou halogenetos que dependem da definição do R pretendido. As condições processuais são conhecidas para as reacções com os aldeídos (Tong et al,. J. Med. Chem. (1979, 22, 912). A reacção com halogenetos é levada a efeito de preferência em condições anidras, de preferencia em dimetilformamida ou em acetonitrilo e uma temperatura entre 20 e 80°C na presença de uma base, de preferência de trietilamina ou de carbonato de potássio.

Os novos derivados de antraciclinas obteníveis por meio do processo da presente invenção apresentam actividade citostática e podem portanto ser utilizados como substâncias activas em conjunto com os adjuvantes e/ou aditivos farmacêuticos habituais para a preparação de composições farmaceucas úteis para a utilização na terapia do cancro. A dosagem e o modo de administração são semelhantes nesta utilização aos das substâncias conhecidas adriamicina, daunomicíria , aclacinomicina, 4'-epi-adriamicina, 4'-metoxiadriamicina ou 4’-desoxiadriamicina.

As composições farmacêuticas preparadas do modo indicado podem conter adicionalmente outras substâncias activas sempre que estas em conjunto com os compostos

da presente invenção não aprsentera efeito secundários indesejáveis.

A actividade citostática dos compostos da presente invenção foi determinada com o auxílio de células de leucemia 11210 do rato. Para este fim procedeu-se à formação de colónias de células de leucemia 11210 em placas de agar. Estes métodos são úteis para a detecção da influência das substâncias a analisar sobre o comportamento do crescimento das células durante 1 hora ou durante várias gerações. Com um período de ciclo celular de 10 a 12 horas observam-se decte modo no período de ensaio de 7 dias cerca de 14 gerações consecutivas. As substâncias da presente inven$ão dotadas de actividade citostática provocam neste ensaio uma redução no número de colónias observadas em comparação cora uma cultura padrão não tratada.

Ma descrição que se segue das formas de concretização do processo para a avaliação da formação de colónias apresentam-se pormenores dos procedimentos de ensaio referidos.

A fim de esclarecer melhor o processo de preparação de acordo com a presente invenção apresentam-se seguidamente os Exemplos 1 a 15, nos quais os compostos da presente invenção são preparados de acordo com o processo reivindicado.

Caracterização dos compostos da fórmula I decurso das reacções foi seguido por cromatografia em camada fina ou por HP1C, técnicas que tambúm foram utilizadas para caracterização dos compostos resultantes. A cromatografia em camada fina foi levada a efeito, sempre que nada era contrário seja indicado, era placas prontas de gel de silica (Merck). A cromatografia

em coluna foi levada a efeito através de (Merck) com uma dimensão de partícula de Os rendimentos não foram optimizados.

gel de silica 60 0,040 a 0,063 mm.

Para a cromatografia em camada fina ou em coluna utilizaram-se as seguintes misturas de solven tes (todos os dados em percentagem em volume):

Composição da

Mistura de solventes

Clorofórmio (%)

Metanol (%)

Acido acético (%)

Agua (%) dos são apresentados

A

8.5

3.5

Os valores deRp dos no Quadro 4.

BC

8977

7,414

0,62 compostos preparaAs estruturas dos compostos preparados

Ί foram determinados por meio de espectroscopia de H-NMR e de MS. Os dados de ⁴H-NMR são apresentados no Quadro 5.

Exemplos:

Preparação dos compostos de partida

7-0-(3'-N-Metil-alfa-L-daunosaminil)- <3 -rodomicino1 2 na-A (composto da fórmula I com R = H, R = OH, R⁵ = R⁴ = R⁵ = OH, R⁶ = CH₂CH₃ e R⁷ = Η),

7-0-(3'-N-Metil-alfa-L-daunosaminil)- *3 -iso-rodomicinona B (composto da fórmula I com R⁴ = R^ = R^ = R⁴ = R^ = = OH, R⁶ = CH₂CH₅ e R⁷ = Η),

7-0-(3'-N-Metil-alfa-L-daunosaminil)-epsilon-iso

-rodomicinona C (composto da fórmula I com R⁴ = R² = R^ = R⁴ = q^·

R⁵ = COOCHp R⁶ = CH₂CH₃ e R⁷ = H),

- 7-0-(3 ' -N-Metil-alfa-L-daunosaminil)-daunoinicinona D

2 (composto da fórmula I com R = H, R = OCH^, R⁵ = R⁴ = OH, R⁵ = H, R⁶ = COCH^ e R⁷ = Η),

7-0-(3'-N-Metil-alfa-L-daunosaminil)-adriamicinona E

2 (composto da fórmula I com R = H, R = OCH^, R⁵ = R⁴ = OH, R⁵ = H, R⁶ = C0CH₂0H e R⁷ = H) e

7-0-(3 ¹ -Ν’-Me til-a lfa-L-daunosami nil)-dauno mi cicinona-13-ol E

2 (composto da fórmula I com R = H, R = OCH^, R⁵ = R⁴ = OH, R⁵ = H, R⁶ = CHOHCH^ e R⁷ = Η),

7-0-(3¹-N-Metil-alfa-L-daunosamini1)-4-0-metil- G -rodomicicinona G (composto da fórmula I com R⁴ = H, R² = OCH^, R^ = OH, R⁵ = OH, R⁶ = CH₂CH₅ e R⁷ = H) é levada a efeito de um modo conhecido em si (Hermentin et al., 4th. European Carbohydrate Symposium, Darmstadt, REA, 12-17 de Julho de 1987, Abstracts of Papers, A-144; Herraentin et al., EP 0 270 992 A2) por desmetilação fotolítica das correspondentes 7-0-rodosaminil-antraciclinonas:

A foi preparado a partir de <3 -rodomicina I (7-0-alfa-L-rodosaminil- 0 -rodomicinona);

B foi preparado a partir de 6 -iso-rodomicina I (7-0-alfa-L-rodosaminil- 6 -iso-rodomicinona);

C. foi preparado a partir de

7-0-alfa-L-rodosamini1-epsilon-iso-rodomicinona;

D foi preparado a partir de Ν,Ν-dimetil-daunomicina (7-0-alfa-L-rodosamini1-daunomicinona);

E foi preparado a partir de N,N-dimetil-adriamicina (7-0-alfa-L-rodosaminil-adriamrinona);

E foi preparado a partir de Ν,Ν-dimetil-daunomicina-13-01 (7-0-alfa-L-rodosamini1-daunomicinona-13-o1):

G foi preparado a partir de 4-0-metil- 6 -rodomicina I (4-0-metil-7-alfa-L-rodosaminil- /3 -rodomicinona),

Exemplo 1:

7-0-(3'-N-Alil-3'-N-metil-alfa-L-daunosaminil)- 6 -rodomicinona (Composto 1)

A uma solução de 7-0-(3¹-N-metil-alfa-L-daunosaminil)- β -rodomicinona (300 mg = 0,567 mmol) e trietilamina (240 μιΐ = 174 mg = 1,72 mmol = 3,0 equiv.) em 30 ml de dimetilformamida seca adicionaram-se 75 _zul (105 mig = 0,867 mmol = 1,53 equiv) de brometo de alilo e agitou-se à temperatura ambiente e ao abrigo da luz. Após 16 h adicionou-se mais trietilamina (80 ,ug = 58 mg = = 0,574 mmol = 1,0 equiv.) e brometo de alilo (25 41I = 35 mg = 0,289 mmol = 0,51 equiv.) e agitou-se ainda durante 16 h. Em seguida concentrou-se à secura num evaporador rotativo sob alto vácuo e submeteu-se a mistura reaccional a duas cromatografias consecutivas em coluna através de gel de silica (30 g e 20 g respectivamente) com a mistura eluente C (Rj 0,49). Tr..:taram-se as fracçães purificadas com 'água para separação de fases, ajustou-se a pH 8 por adição de solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Em seguida separaram-se as fases numa ampola de decantação, extraíu-se a fase aquosa várias vezes com cloro11 fórmio e concentraram-se à secura num evaporador rotativo as fases orgânicas reunidas.

Rendimento: 153 mg (0,27 mmol) = 47

Exemplo 2;

7-0-(3¹-N-Metil-3¹-N-propargil-alfa-L-daunosaminil·)- G -rodomicinona (Composto 2)

Trataram-se durante 30 min 53 mg (0.10 mmol) de 7-0-(3'-N-metil-alfa-L-daunosaminil)-/¾ -rodomicinona e 106 ul de brometo de propargilo a 80 em tolueno (113 mg = 0,95 mmol) = 9,5 equiv.) na presença de 40 ul (29 mg = 0,287 mmol = 2.87 equiv. ) de trietilamina de modo análogo ao do Exemplo 1 e purificou-se através de 10 g de gel de silica na mistura eluente B (R^ = 0,29) procedendo-se a um tratamento posterior como anteriormente .

Rendimento: 31 mg (0,055 mmol) = 55 $

MS-PAB (M+H⁺) m/e = 568

Exemplo 3:

7-0-(3'-N-Hidroxietil-3'-N-metil-alfa-L-daunosaminil)- 6 -rodomicinona (Composto 3)

Trataram-se durante 4 dias 30 mg (0,057 mmol) de 7-0-(3'-N-metil-alfa-L-daunosaminil)-/} -rodomicinona e 50 ul de bromoetanol (88 mg = 0,71 mmol = = 12,4 equiv.) na presenÇa de 24 /il (17 mg = 0,17 mmol = = 3,0 equiv.) de trietilaraina de modo análogo ao do Exemplo 1 e procedeu-se a um tratamento posterior como anteriormente. Para purificação em coluna condicionaram-se 15 g de gel de sílica com uma mistura de clorofórmio/metanol (20/1). Em seguida fez-se passar a mistura liquida contendo 0 produto através da coluna e elirainou-se 0 excesso de bromo

etanol e de dimetilformaraida por lavagem com clorofórmio/ /metanol (20/1) (cerca de 150 ml). Em seguida procedeu-se à eluição do produto da reacção adsorvido no ponto de carga da coluna com a mistura eluente A (Ry 0,58) procedendo-se a um tratamento posterior análogo ao do Exemplo 1«, Rendimento: 14 mg (0,024 mmol) = 42 %

Exemplo 4?

7-0-(3¹-Metil-3¹-N-(4-picolil)-alfa-L-dauno saminil)-rodomicinona (Composto 4)

Tratou-se uma solução de 100 mg (0,189 mmol) de 7-0-(3’-N-Metil-alfa-L-daunosaminil)-/^ -rodomicinona em 10 ml de acetonitrilo/água (4/1) com 50 ,ul (53 mg = 0,88 mmol =4,7 equiv.) de ácido acético e 800 mg (713 >il = 7,47 mmol = 39,5 equiv.) de piridina-4-aldeído e agitou-se durante 2 h à temperatura ambiente ao abrigo da luz. Era seguida adicionou-se cianoboro-hidreto de sódio (240 mg = 3,82 mmol = 20 equiv.) e agitou-se a mistura reaccional durante outras 2 h. Em seguida verteu-se a mistura reaccional sobre uma solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio e extraiu-se cora clorofóriraio. Extraíram-se novaraente as fases clorofórmicas reunidas com água a pH 13 (adição de soda cáustica), obtendo-se nesta operação o composto de piridilo era excesso na fase clorofórmica e a antraciclina (sob a forma de sal sódico; cor azul) na água. Depois de se ajustar o pH da fase aquosa a 8 extraíu-se a antraciclina com clorofórmio e purificou-se através de 12 g de gel de silica usando a mistura eluente B (Ry 0,23) e procedeu-se a ura tratamento posterior análogo ao do Exemplo 1.

Rendimento: 42 rag (0,068 mmol) = 36%

Exemplo 5:

7-0-(3’-N-Metil-3¹-N-(2-picolil)-alfa-L-daunosaminil)- 6 -rodomicinona (Composto 5)

I

Trataram-se 20 mg (0,038 mmol) de 7-0-(3 ' -N-metil-a lfa-L-daunosaminil)- -rodomicinona e 160 mg de piridina-2-aldeído de modo análogo ao do Exemplo 4; a puirificação por cromatografia em coluna foi efectuada com a mistura eluente C (Ry 0,79).

Rendimento; 14 mg (0,023 mmol) = 60 %

Exemplo 6;

7-0-(3¹-N-(2-Furfuril)-3¹-N-metil-alfa-L-daunosaminil)-3 -rodomicinona (Composto 6)

Trataram-se 200 mg (0,38 mmol) de 7-0-(3’-N-metil-alfa-L-daunosaminil)- 2 -rodomicinona e 1,5 ml (1734 mg = 18,0 mmol = 47 equiv.) de furfural de modo análogo ao do Exemplo 4, agitando-se ainda durante 40 h após a adição do cianoboro-hidreto de sódio. Em seguida verteu-se a solução sobre água, ajustou-se o pH a 8 com hidrogenocarbonato de sódio, extraíu-se com clorofórmio e eliminou-se o solvente por evaporação num evaporador rotativo. Secou-se a mistura obtida contendo o produto sob alto vácuo para eliminar o excesso de furfural e em seguida purificou-se através de gel de 20 g cie silica com a mistura eluente C (Ry 0,57) e recroraetografo u-se na mistura eluente B )R_p 0,22).

Rendimento; 129 mg (0,21 mmol) = 55%

Exemplo 7

7-0-(3¹-N-Acetamido-3¹-N-metil-alfa-L-daunosaminil)- /3-rodomicinona (Composto 7)

Trataram-se durante 16 h 30 mg (0,057 mmol) de 7-0-(3'-N-metil-alfa-L-daunosaminil)--rodomicinona e 30 mg (0,162 mmol = 2,84 equiv.) de iodoacetamida na presença de 24 _zul (17,4 mg = 0,17 mmol = 3,0 equiv.)

de trietilamina de modo análogo ao do Exemplo 1, utilizando-se no entanto para solvente acetonitrilo. A mistura reaccional foi feita passar através de 6 g de gel de silica utilizando-se a mistura eluente C (Ry 0,31) e procedeu-se a um tratamento posterior análogo ao do Exemplo 1. Rendimento: 19 mg (0,032 mmol) = 56 %

Exemplo 8

7-0-(3¹-N-Glicidil-3¹-N-metil-alfa-L-daunosaminil) - 3 -rodomicinona (Compostos 8m, 8a e Ab)

Agitou-se durante 30 h a 60°C ao abrigo da luz uma mistura de 7-0-(3'-N-metil-alfa-L-daunosaminil)-Q -rodomicinona (200 mg - 0,378 mmol, epibromidrina (400 /11 = 640 mg * 4,675 mmol = 12,4 equiv.) e carbonato de potássio (400 mg) em acetonitrilo seco (25 ml). Em seguida concentrou-se à secura num evaporador rotativo retraou-se o resíduo em clorofórmio/etanol (20/1), filtrou-se, fez-se passar através de 20 g de gel de silica em clorofórmio/etanol (20/1). Deste modo isolou-se, segundo o espectro de ^H-NMR, uma mistura de 1:1 de isómeros (composto 8m) num rendimento de 102 mg (0,17 mmol =

Uma nova cromatografia em clorofórmio/ /etanol (20/1) permitiu a separação parcial da mistura de isómeros 8m nos isómeros puros 8a (Ry 0,35) e 8b (Ry 0,32). MS-FAB (M+H+) m/e = 586

Exemplo 9s

7-0-(3¹-N-Alil-3¹-N-metil-alfa-L-daunosaminil)-’^ -iso-rodomicinona (Composto 9)

Trataram-se 300 mg (0,55 mmol) de 7-0-(3'-N-metil-alfa-L-daunosaminil)-g -iso-rodomicinona e 100 jil (140 ,ug = 1,16 mmol = 21 equiv.) de brometo de al:.

lo na presença de 330 ul (240 mg = 2,4 mmol * 44 equiv.) de trietilamina de modo análogo ao do Exemplo 1. Após 16 h. adicionou-se mais 165 _xul (2,2 equiv,) de trietilamina e 50 _xul (1 equiv.) de brometo de alilo e agitou-se durante mais 6 h à temperat ra ambiente ao abrigo da luz?

Em seguida concentrou-se à secura sob alto vácuo e fez-se passar a mistura reaccionala través de 52 g de gel de silica no eluente C (Ry 0,52). As fracçães reunidas foram tratadas de modo análogo ao do Exemplo 1.

Rendimento; 154 mg (0,26 mmol) = 48%

Exemplo 10

7-0-(3¹-N-(Etoxicarbonilmetil)-3¹-N-metil-alfa-L-daunosaminil)- ^-rodomicinona (Composto 10)

Trataram-se durante 2 h 100 mg (0,189 mmol) de 7-0-(3'-N-metil-alfa-L-daunosaminil)-/3 -rodomicinona e 75 _zul (113 mg = 0,677 mmol = 3,58 equiv.) de bromoacetato de etilo na presença de 80 jul (58 mg = = 0,574 mmol =3,0 equiv,) de trietilamina de modo análogo ao do Exemplo 1. Dissolveu-se a mistura que contém o produto imediatamente após a concentração à secura numa pequena quantidade de clorofórmio, fez-se passar através de uma coluna de gel de silica preparada com éter (15 g de gel de silica) e eluindo-se com cerca de 100 ml de éter para eliminação do éster do ácido bromoacetico em excesso. 0 composto 10 foi em seguida eluído com clorofórmio/etanol (20/1) (R_p 0,32).

Rendimento: 70 mg (0,114 mmol) = 60 %

Exemplo 11

7-0-(3¹-N-Carboximetil-3¹-N-metil-alfa-L-daunosaminil·)- $ -rodomicinona (Composto 11)

Trataram-se durante 2 h 20 mg (0,038 mmol) de 7-0-(3'-N-metil-alfa-L-daunosaminil)- Q -rodomicinona e 15 /il (29 mg = 0,21 mmol = 5,5 equiv. ) de ácido bromoacético na presença de 16 _?ul (11,6 mg = 0,L15 mmol = =3,0 equiv.) de trietilamina de modo análogo ao do Exemplo 1 e determinou-se o valor do R_p.

Exemplo 12;

7-0-(3¹-N-Metil-3¹-N-(3-tenil-alfa-L-daunosaminil)- 5 -rodomicinona (Composto 12)

Fizeram-se reagir 20 mg (0,038 mmol) de 7-0-(3'-N-metil-alfa-L-daunosaminil)-Q -rodrmicinona e 156 ^ul (200 mg = 0,178 mmol = 47 equiv.) de tiofeno-3-aldeído de modo análogo ao do Exemplo 4 e continuou-se a agitação durante 16 horas à temperatura ambiente após adição de cianoboro-hidreto de sódio (48 mg = 0,76 mmol = = 20 equiv.). Submeteu-se a purificação por cromatografia em coluna em primeiro lugar em clorofórmio (para eliminação do composto de tiofeno em excesso) e em seguida na mistura eluente B (R_p 0,22).

Rendimento: 9,2 mg (0,015 mmol) = 39 %

Exemplo 13:

7-0-(3¹-N-Metil-3¹-N-(2-tenil)-alfa-L-daunosamlnil·)--rodomicinona (Composto 13)

Fizeram-se reagir 20 mg (0,038 mmol) de 7-0-(3'-N-metil-alfa-L-daunosaminil)-<3 -rodomicinona e 167 _zul (200 mg = 0,178 mmol = 47 equiv.) de tiofeno-2-aldeído de modo análogo ao do Exemplo 4 e apos adição de cianoboro-hidreto de sódio (48 mg = 0,76 mmol = 20 equiv.) continuou-se a agitação durante 16 h à temperatura ambiente e em seguida durante mais 8 h a 50°C. Submeteu-se a purificação por cromatografia em coluna através de 4 g de

gel de sílica na mistura eluente B (Rp 0,25); em seguida submeteu-se a nova cromatografia através de 3 g de gel de silica na mistura eluente C (Rp 0,63). Rendimento; 8,2 mg (0,013 mmol) = 34- /

Exemplo 14:

7-0-(3¹-N-Glicidil-3¹-N-metil-alfa-L-daunosaminil·)- & -iso-rodomicinona (Composto 14m)

Agitou-se durante 3 h a 70°C ao abrigo da luz uma mistura de 7-0-(3'-N-metil-alfa-L-daunosaminil)- 6 -rodomicinona (85 mg = 0,156 mmol), epibromidrina (125 „ul = 185 mg = 1,35 mmol = 8,7 equiv,) e carbonato de potássio (125 mg) em dimetilformamida seca (8 ml). Em seguida concentrou-se à secura num evaporador rotativo e secou-se de um dia para o outro sob alto vácuo. Dissolveu-se 0 resíduo em água e ajustou-se 0 pH a 7,0 com ácido clorídrico diluído, Extraíu-se 0 produto com clorofórmio, cromatografou-se através de 12 g de gel de silica numa mistura de eluente B e eluente C (1/1) e trataram-se as fracções reunidas de modo análogo ao descrito no Exemplo 1, Rendimento: 68 mg (0.11 mmol) = 70 /

Exemplo 15:

7-0-(3 ¹ -N-Alil-3 ¹ -N-metil-alfa-L-daunosaminil)-daunomicinona (Composto 15)

Trataram-se durante 24 h 30 mg (0,055 mmol) de 3¹-N-metil-daunomicina e 10 _zul (14 _zug =0,116 mmol =2.1 equiv.) de brometo de alilo na presença de 33 _zul (24 mg = 0,24 mmol = 4,4 equiv.) de trietilamina de modo análogo ao do Exemplo 1, efectuou-se 0 tratamento posterior e purificou-se através de 5 g de gel de silica no eluente

C (Ry 0,53). Trataram-se as fracções reunidas de modo análo- 18 -

go ao do Exemplo 1.

Rendimento: 17 mg (0,029 mmol) = 53 %

Exemplo 16:

7-0-(3 ^l-N-Alil-3 ¹-N-metil-alfa-Ij-daunosaíninil)-adriamicinona (Composto 16)

Trataram-se durante 24 horas 32 mg (0,057 mmol) de 3' -N-metil-adriamicina e 10 jul (14 pg = = 0,116 mmol = 2,1 equiv.) do brometo de alilo na presença de 33 JãI (24 mg = 0,24 mmol =4,4 equiv,) de trietilamina de modo análogo ao do Exemplo 1, efectuou-se o tratamento posterior e purificou-se através de 5 g de gel de silica no eluente C (Rp 0,22). Trataram-se as fracções reunidas de modo análogo ao do Exemplo 1₉

Rendimento: 14 mg (0,023 mmol) = 40 %

Exemplo 17:

7-0-(3¹-Alil-3¹-N-metil-alfa-L-daunosaminil)-4-0-metil- /3 -rodomicinona (Composto 17)

Trataram-se durante 24 h 29 mg (0,053 mmol) de 7-0-(3¹-N-metil4alfa-L-daunosaminil)-4-0-metil- 6 -rodomicinona e 10 ,ul (14 _zug = 0,116 mmol = = 2,2 equiv. de brometo de alilo na presença de 33 jil (24 mg = 0,24 mmol = 4,5 equiv.) de trietilamina de modo análogo ao do Exemplo 1, efectuou-se o tratamento posterior e purificou-se através de 5 g de gel de silica numa mistura do eluente B e do eluente C (1/1). Trataram-se as fracções reunidas de modo análogo ao do Exemplo 1,

Rendimento: 18 mg (0,031 mmol) = 58 °/>

Exemplo 18;

7-0-(3 ¹ -N~Acetonil-5 '-N-metil-alfa-L-daunosaminil) 3 -rodomicinona (Composto 18)

Agitaram-se durante 16 h ao abrigo da luz 53 mg (0,10 mmol) de 7-0-(3’-metil-alfa-L-daunosaminil)- /3 -rodomicinona e 0,5 ml (580 mg = 6,27 mmol) de cloroacetona na presença de 1 g de carbonato de potássio em 10 ml de dimetilformamida seca. Em seguida filtrou-se a solução, concentrou-se à secura e extraíu-se com clorofórmio/ /água em condições de neutralização. Cromatografou-se o produto da fase orgânica através de 10 g de gel de silica no eluente B (Rp 0,16). Trataram-se as fracções reunidas de modo análogo ao descrito no Exemplo 1,

Rendimento: 27 mg (0,046 mmol) = 46 %

Citotoxicidade dos compostos da fórmula I contra células de leucemia 11210 do rato in vitro

Procedimento para a avaliação da formação de colónias de células de leucemia 11210 em agar brando

Incubaram-se 500 células de leucemia por placa com diferentes concentrações da substância a analisar durante 1 hora a 37°C. Em seguida lavaram-se as células duas vezes com meio McCoy5A e finalmente verteu-se em cápsulas de Petri após adição de 0,3 % de agar. Incubaram-se placas de comparaçao apenas com meio fresco. Em vez da incubação de 1 hora em muitos casos misturaram-se diferentes concentrações da substância a analisar da camada de agar superior de modo a conseguir uma exposição continua das células durante todo o período de incubação. Após solidificação do agar incubaram-se as placas num incubador durante 7 dias a 37°C (5% em vol. de COg. 95% de humidade relativa). Em seguida contou-se o número de colónias existentes com um diâmetro superior a 60 ,um. Os resultados foram calculados como número de colónias em placas de agar tratadas em percentagem das placas de comparação não tratadas. A partir da curva dose/actividade assim obtida calcularam-se os valores de ΙΟ^θ como medida para a actividade da substância. Os resuldados para os compostos anteriormente deecritos na presente memória descritiva em comparação com a adriamicina não apresentados no Quadro 1.

Quadro la ⁷; Compostos da fórmula I preparados

Substância R¹ R² R⁵ R⁶ R⁷ (Exemplo)

Adriamicina (Referência)

1	H	OH	OH	ch₂ch^	CH₂CHCH₂
2	H	OH	OH	ch₂ch^	ch₂cch
3	H	OH	OH	ch₂ch₃	ch₂ch₂oh
4	H	OH	OH	ch₂ch₃	4-picolil
5	H	OH	OH	CH₂CH₅	2-picolil
6	H	OH	OH	CH₂CH₅	furfuril
7	H	OH	OH	CH₂CH₅	ch₂conh₂
8m²)	H	OH	OH	CH₂CH₅	glicidil
8a⁵)	H	OH	OH	CH₂CH₅	glicidil-a
8b⁵)	H	OH	OH	ch₂ch^	glic idil-b
9	OH	OH	OH	CH₂CH₅	ch₂chch₂
10	H	OH	OH	CH₂CH₅	ch₂cooch₂ch
11	H	OH	OH	CH₂CH₅	CH₂COOH
12	H	OH	OH	CH₂CH₅	34henil
13	H	OH	OH	CH₂CH₅	2-thenil
14m²)	OH	OH	OH	CH₂CH₅	glicidil
15	H	och₅	H	COCH,	ch₂chch₂
16	H	OCH, 3	H	COCH₂OH	ch₂chch₂
17	H	och₅	OH	CH₂CH₅	ch₂chch₂
18	H	OH	OH	CHgCH,	ch₂coch.

D

2)

3)

para os compostos referidos é ti? = = ra; mistura dos isómeros a e b a e b: isómeros puros

Quadro lb;

Citotoxicidade parados contra in vitro

OH sem determinação estruturai dos células de leucemia L 1210 compostos da fórmula I preSubstância (Exemplo)

Incubação prolongada ^IC50 ( Λδ/⁰¹¹)

Incubação de

h.

ic50 ( Hg/ml)

Adriamicina	0,02	0,04
1	0,01	0,08
2	0,08	0,3
3	0,02	0,044
4	0,023	0,1
5	0,038	0,24
6	0,03	0,038
7	0,084	0,24
em¹^	0,002	0,0072
8a²)	0,001	0,0034
8b²)	0,003	0,01
9	0,008	0,5
10	0,1	0,06
11	-	-
12	0,032	0,17
13	0,034	0,38
14m^)	0,005	0,0024

Quadro lb: (Continuação)

Substância	Incubação	Incubação de
N2	prolongada	1 h
(Exemplo)	IC₅₀ ( ng/ml)	IC₅₀ ( _xug/ml)
15	0,008	superior a 1
16	-	-
17	0,036	superior a 1
18	0,018	0,073

1) m: mistura dos isómeros a e b

2) a e b: isómeros puros sem determinação estrutural

Determinação da resistência cruzada in vitro em comparação com adriamicina

Ensaio de proliferação (redução MTT)

Incubaram-se células 11210, A 549 ou

HT 29 na fase de crescimento exponencial a uma densidade 'Z celular de 5 x 10 células/ml em RPMI 1640 numa placa de microtitulação de 96 alvéolos durante 72 horas com diferentes concentrações da substância a analisar a 37°C, 5% de COg e 95^ de humidade relativa. Os ensaios de comparação continham em vez de substância a analisar apenas meio de crescimento. Para cada substância analisar bem como para os ensaios de comparação efectuaram-se determinações em quadruplicado. Após 65 h de incubação adicionaram-se 50 ul de uma solução de MTT (2,5 mg/ml; MTT = brometo de 3-(4,5-dimetil-tiazolil-2)-2,5-difenil-tetrazólio) em solução salina tamponizada com fosfato). Na presença de células vivas o MTT é reduzido a uma forma insolúvel corada de vermelho escuro. Faz-se parar a reacção após 7 h (células

- 24 11210) ou após 24 h (células A 549 e HT 29) e aspira-se cuidadosamente o meio sobrenadante. Dissolve-se o corante insolúvel por adição de 100 _xul de DMSO (dimetilsulfóxido) e determina-se em seguida a extinção da solução assim obtida para cada alvéolo num Multiscan Photometer 340 CC da firma Flow a um comprimento de onda de 492 nm.

A partir do quociente entre as extinções das células tratadas e não tratadas obtem-se uma curva dose-actividade a partir da qual se pode ler a concen tração mínima que provoca a morte de 50% das células ÍC^q). Nos ensaios em duplicado verificou-se um coeficiente de variação inferior a 15 %.

Efectuou-se a determinação da resistência cruzada entre cada substância em ensaio utilizando para substância padrão a doxorubicina com 0 auxílio do ensaio de MTT (ver método acima) em células sensíveis e resistentes de leucemia L1210.

A linha de células resistente foi estabelecida por meio de incubação de uma sub-linha sensível com concentrações gradualmente superiores da substância de referência.

Os valores de ΙΟ^θ das substâncias em ensaio sobre a sub-linha resistente referidos aos valores de ICcjQ da sub-linha sensível dão tanto o grau de resistência para 0 composto em ensaio (DR^p como também para o composto de referência (DR/_P\) correspondente da fórmula

IC₅₀ da linha de células resistentes

ICqjQ da linha de células sensível

Adicionalmente calculou-se o grau de resistência cruzada (DCR) para o composto em ensaio, correspondente à fórmula

DR(ij)-1

DCR % = -------- χ 100 ^DR(R)

No caso de a perda de actividade do composto em ensaio sobre a linha resistente em proporção com a linha sensível ser superior ao do composto de referência, é possível um grau de resistência cruzada de mais de 100 %>,

Os resultados apresentados no Quadro 2 mostram que as substâncias até agora não ensaiadas 1, 4 e 6 não apresentam resistência cruzada com a doxorubicina.

Quadro 2;

Substância	Sistema	Duração	Grau de	Resistência
N2.	de	da	resistência	cruzada com
	ensaio	incubação	das células	a adriamicina
Adriatócina	MTT	3d	60-80	100,0
1	MTT	5d	10_T0	19,0
4	MTT	5d	1,6	0,2
6	MTT	5d	2,0	2,0

Dados in vivo dos compostos preparados

Avaliação da toxicidade de orientação

A fim de avaliar a toxicidade de orien tação injectaram-se por via intraperitoneal no dia 0 dife

- 26 rentes doses da substância em ensaio dissolvida em 0,5 ml de solução de glucose a 57° em ratos NMRI. Por cada concentração da substância a ensaiar usaram-se 5 ratos. No dia 14 contou-se o número de ratos sobreviventes e a partir destas contagens calcularam-se os valores de LD5, LD50 e LD95 segundo o método de Lichtfield. A toxicidade (LD50 (mg/kg) dos compostos descritos em comparação com a adriamicina é apresentada no Quadro 3.

Actividade in vivo dos compostos da fórmula I contra a leucemia 11210 do rato

Método:

Colheu-se líquido ascítico sob condições de esterilizar de ratos DBA2 (sexo feminino, 18 a 20

g) 7 dias após inoculação de células tumorais. Lavaram-se as ascites três vezes com PBS (salina tamponizada com fosfato = Phosphate Buffered Saline), contaram-se e ajustaram-se a um número de células de 10^ em 0,2 ml de PBS.

Em seguida injectaram-se intraperito6 nealmente 10 células suspensas em 0,2 ml de PBS em ratos DBF1 (sexo feminino, 18 a 20 g). Utilizaram-se 6 animais por grupo para cada concentração ou para comparação.

Avaliação da actividade antitumoral:

a) Pesaram-se os animais no dia 1 e no dia 5 após injecção da substância em ensaio. Uma perda de peso superior a 20% no dia 5 é tomada como uma indicação de uma actividade tóxica da substância.

b) No fim da experiência (morte de todos os animais ou animais sobreviventes no dia 60) determinou-se o período médio de sobrevivência dos animais em cada

grupo sempre que no dia 5 da experiência pelo menos 65% dos animais ainda sobreviventes. 0 período médio de sobrevivência foi determinado exclusivamente para os animais que morreram durante o decurso da experiência. A sobrevivência por longos períodos (LTS) não foi deste modo tomada em consideração e foi apresentada em separado.

A partir do período médio de sobrevivência (MST_r) dos grupos tratados bem como dos grupos de comparação (MST ) determinou-se a actividade antitumoral (τ/c) para cada concentração de cada substância em percentagem dos grupos de comparação não tratados por meio da fórmula seguinte:

MST_T

T/C % = ____________________ x 100

MST c

Os valores de T/C e o esquema de tratamento utilizado em cada caso são - em conjunto com a toxi cidade de orientação - apresentados no Quadro 3. Os valores de T/C superiores a 125 % são considerados como uma indicação de uma actividade antitumoral significativa da substância em ensaio.

Quadro 3: Actividade in vivo dos compostos preparados

	— 1 CXJ	o	o	CO	o
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O •rd ( β

CO I -a- -η rd Ρ I <*í I

1)	3xip,	q3d: três aplicações por via intraperitoneal
		com intervalos de 3 dias
2)	3xip,	q3d: três aplicações por via intravenosa
		com intervalos de 3 dias
3)	T/C:	taxa de sobrevivência expressa em % dos grupos de comparação

4) Dois de entre 6 ratos curaram-se (sobrevivência de longo termo)

Quadro 4-: Substância N° (Exemplo)	Valores de Ry dos compostos preparados
A	Mistura eluente	clorofórmio/etanol (20/1)
B	C
1	0,77	0,18	0,49	0,27
2	0,82	0,29	0,56	0,45 '
3	0,58	0,054	0,28	0,03
4	0,63	0,23	0,47	0,21
5	0,90	0,38	0,79	-
6	0,76	0,22	0,57	0,26
7	0,58	0,11	0,31	0,13
8a	0,72	0,17	0,44	0,35
8b	0,72	0,17	0,44	0,32
9	0,78	0,17	0,52	0,24
10	0,88	0,42	0,74	0,32
11	0,50	0,05	0,32	0
12	0,78	0,22	0,59	0,25
13	0,82	0,25	0,63	0,35
14a	0,73	0,11	0,45	0,32
14b	0,73	0,11	0,45	0,28
15	0,62	0,16	0,53	0,24
16	0,31	0,012	0,22	0,014
17	0,62	0,12	0,53	0,19
18	0,69	0,16	0,58	0,27

Quadro 5:

Dados de ^H-NMR a 300 MHz de diferentes compostos da fórmula I número das substâncias da primeira coluna corresponde ao respectivo número do exemplo. A determinação dos espectros foi efectuada, sempre que nada em contrário seja indicado, em CDCl^ contra trimetilsilano como padrão interno.

Abreviaturas:	s =	singuleto
	d	=	dubleto
	t	=	tripleto
	q	=	quarteto
	dd	=	dubleto	de	um	dubleto
	ddd	=	dubleto	de	um	dubleto de um dubleto
	dt	=	dubleto	de	um	tripleto
	dq	=	dubleto	de	um	quarteto

bs = singuleto largo

- 32 Quadro 5, Parte 1:

Substância

N2
.(Protão)	1	2	3	4 b c
; ;	a b c	a b	a b
R	⁷ :CH₂CHC11₂	CH₂CCH	ch₂ch₂oh
H-l	7.89 dd	7 . 88 d	7.88 dd	7.90 dd
H-2	7 . 72 t	7.72 t	7.72 t	7.73 t
H-3	7.33 dd	7.33 dd	7.33 dd	7.34 dd
H-7	5.15 m	5.15 m	5.15 m	5.17 rr.
H- 8 alfa	2.12 dd	2.12 dd	2.12 dd	2.12 dd
H-8B	2.26 d	2.26 d	2.24 d	2.27 d
H-10	4.91 s	4.91 s	4.91 s	4.93 s
H₂-13	1.7-1.9 m	1 .'7-1 . 9 m	1 .7-1.9 m	1.7-1.9 m
H -14	1.12 t	1.12 t	1.12 t	1.13 t
H-l '	5.51 bs	5.52 d	5.52 bs ,	' 5.55 bs
H₂-2'	1.7-1 . 9 m	1.7-1.9 π	1.7-1.9 m	1.7-1.9 m
H-3 '	2.48 dt	.2.64 ddd	2.5-2.7 m	2.62 dt
H-4 '	3.70 bs	3.69 d	3.76 bs	3.80 bs
H-5 '	4 . 08 q	4.09 q	4.12 q	4.14 q
H₃-6 '	1.41 d	1 .41 d	1 . 38 d	1.43 d
n-ch₃	2.18 s	2.31 s	2.26 s	2.12 s
OH-4	12.15 bs			12.14 bs
OH-6	12.84 bs			12.86 bs
OH-11	13.63 bs			13.63 bs
a	2.97dd,	3.39dd,	2.5-2.75m	3.45d
	3.15dd;	3.41dd;		3.62d;
	J ,=14Hz aa J , =J ,, =7Hz ab a b	J ,=18Ηζ aa ab a b	2Hz	J ,=14Hz aa
b	5.6-5.8m	2.121;	3.6 11;	7 . 1 7 d ;
	^Jab	=J ,,=2Hz ι a b	J = 5Hz	J. =6 Hz bc

c

5.05-5.15m

8.51c;

= 6Hz

Quadro 5, Parte 2:

Substância (Protão)

H-l	7.89 d	7.89 d	7.86 d
H-2	7.72 t	7.72 t	7 .72 t
H-3	7.33 d	7 .33 d	7.31 d
H-7	5.17 m	5.16 m	5.12 bs
H-8 alfa	2.12 dd	2.12 dd
			2.19 bs
H-86	2.28 d	2.26 d
H-10	4.93 s	4.91 s	4 . 83 s
H -13	1.7-2.0 m	1 . 7-2.0 m	1.7-1.9 m
^h ₃-14	1 . 13 t	1.12 t	1 .10 t
H-l '	5.55 bs	5.53 bs	5.4 9 b<?
H₂-2 '	1 . 7-2.0 m	1 .7-1 .95 m	1.97dt²⁾ ;
H-3 '	2.62 dt	2.5-2.7 m	3)
H-4 '	3.83 bs	3.81 bs	3.72 bs
H-5 '	4.15 q	4.10 q	4.07 q
H₃-6'	1 . 43 d	1 . 42 d	1 . 34 d
N-CH₃	2.22 s	2.22 s	2.30 s
OH-4	12.16 bs	12.15 bs
OH-6	12.84 bs	12.85 bs
OH-11	13.61 bs	13.63 bs

Continuação na próxima página

Continuação do Quadro 5, Parte 2:

Substância

N° 5 (Protão)

a	3.59d,3.81d: ^Jaa’=^14Hz	3.59d,3.72d:	3.02d,3_o09d: J_aa,8.5Hz
b	7,24d;J_bc=8Hz	6.12d;J_bc=3Hz	5.97bs(lH), 7.47bs(lH)
c	7.63ddd; ^Jbc^=Jcd^=8Hz’^Jce⁼ = 2Hz	6.24dd; ^Jbc=^5Hz’^Jcd^=2Hz
d	7.15ddd: J_cd=8Hz,J_de=5Hz, J_bd=lHz	7.27dd; J_cd=2Hz,Jb_d=lHz
e	8.53dd; ^Jde=^5Hz> J_ce=lHz

1) determinado em CDCl^/Dg-DMSO (5/1) ^{2) J}l',2’ = 3 Hz, J₂._a,2’b = ^{12 Hz}

3) não identificado inequivocamente

- 35 Quadro 5, Parte 5:

Substância

N2 (Protão)

a b c

CH CHCJL,

H-l	7.90 dd	7.90 dc	7.29	s ,
H-2	7.73 dd	7.73 dd
H-3	7.34 dd	7.34 dd
H-7	5.16 τη	5.16 m	5.0-	5.2
H-B alfa	2.12 dd	2.12 dd	2.20	bs
H-8B	2.25 d	2.25 d
H-10	4 . 92 s	4.91 s	4 .81	s
H -13	1 . 7-1 . 9 m	1.7-1.9 m	1.5-	1 . 7
H -14	1.12 t	1.12 t	1.10	t
H-l '	5.52 t	5.52 t	5·. 4 8	m
H₂-2 ’	1.7-1.9 m	1.7-1 . 9 m	1 .5-	1 . 7
H-3 '	2)	2)	2.49	dt
H-4 '	3.69 bs	3.71 bs	3.70	bs
H-5'	4.09 q	4 . 09 q	4 .08	q
H -6 ’	1 . 40 d	1.41 d	1 . 37	d
N-CH₃	2.31 s	2.35 s	2.19	s
OH-4	12.16 bs	12.17 bs	6)
OH-6	12.85 bs	12.85 bs	6)
OH-11	13.64 bs	13.63 bs	6)
	3)	3)	7)

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Continuação do Quadro 5, Parte 3?

1) determinação em CDCl^/Dg-DMSO (5/1)

2) não identificado inequivocamente

3) os protões a a c no domínio 2,3 a 3,0 ppm não foram ordenados inequivocamente

4) sobreposto a CH2 (c)

5) sobreposto a N-CH^

6) OH fenólico a 12,37 bs (2H) e 13,04 bs (2H)

7) a: 2.99dd (IH). 3.14dd (IH) J_aaj=14Hz, J_ab=J_a,_b=6Hz b: 5.6-5.8m (IH) c: 5.0-5.2m (sobreposto a H-7)

R :CH COCI^CH

Quadro 5

Substância

H-l	7.90	dd	7.88 dd	7.88 dd
H-2	7.73	t	7.72 dd	7.72 t
H-3	7.33	dd	7.33 dd	7.33 dd
H-7	5.15	m	5.16 m	5.16 m
H—8. alfa	2.11	dd	2.13 dd	2.13 dd
H-8B	2.26	d	2.27 d	2.27 d
H-IO	4 .91	s	4 . 92 s	4 . 92 s
H-l 3	1.7-1	. 9 m	1.7-2.0 m	1.7-2.0 m
H -14	1 .12	t	1 .13 t	1 .13 t
H-l '	5.51	bd	5.53 bs	5.54 bs.
H₂-2 '	1 . 7-1	. 9 m	1.7-2.0 m	1.7-2.0·m
H-3 '	2.82	m	2.56 m	2.62 dt
H-4 '	3.65	bs	3.80 bs	3.79 bs
H-5'	4 .09	q	4.12 q	4.11 q
H₃-6'	1.40	d	1 .43 d	1 . 43 d
N-CH₃	2.38	s	2.12 s	2.19 s
OH-4	12.16	bs	12.14 bs	12.15 bs
OH-6	12.84	bs	12.84 bs	12.84 bs
OH-1 1	13.63	bs	13.61 bs	13.62 bs

Continuação na próxima página

Continuação do Quadro 5, Part.p 4:

10	12	13
3.31d,	3.46d,	3.71d ,
3.33d;	3.66d;	3 . 8 3 d ;
J ,=I9Hz α d	J ,=14Hz d d	J ,=14Hz d d
4 . 09q	7.02dd	6.82dd
	J_bc=lHz, ^Jbd^=3Hz	^Jbc⁼³’^5Hz ^Jbd^=1Hz
I . 16t	6.94dd	6.88 dd
	^Jbc’^1Hz' ^Jcd’^5Hz	^Jbc⁼³-^5Hz J_cd=SHz
	7.24dd	7.17dd ’ .
	^Jbd^=3Hz' J \ = 5Hz cd	^Jbd^=1Hz' ^Jcd^=5Hz

Quadro 5, Parte 5:

Substânc ia N2	14¹’	15³⁾
(protão)	^a O	a b c
R:		CH_CHCH_
	²M	2 2
H-l		8.04 d
	7.30 s,2H
H-2		7.79 t
H-3		7.41 d
H-7	5.13 m	5.30 m
H-θ alfa		2.10 dd
H-8B		2.37 d
H-10	4 . 83s	4)
H -13	1.7-2.0 m	-
H -14	1.10 t	2.43 s
H-l '	5.49 bs	5.57 bd
H-2 '	1.7-2.0 m	1.84 m
H-3 '		2.57 m
H-4 '	3.70 bs	3.74 bs
H-5'	4.09 q	4.03 q
H₃-6'	1 . 38 d	1 .38 d
N-CH₃	2.20 s	2.23 s
OH-4	2)	-
OH-6	2)	13.31 bs
OH-11	2)	14.00 bs

Continuação na próxima página

í
Continuação do Quadro 5, Parte 5:
	15
a	3.0-3.25m⁵)
b	5.7-5.9m(lH)
c	5.13bs e
	5.17d

J=3.5Hz

1) determinado em CDCl^/Dg-DMSO (5/1)

2) OH fenólico a 12,34 bs (2H) e 12,99 bs (2H)

3) OCH₅ a 4.10 s (3H)

4) 10 alfa: 2,98 d; 105 : 3.23 d; J=19 Hz

5) sobreposto a H-10

Quadro 5,	Parte 6:
Substância Νθ	16		17	18
(Protão )	a b	c	a b c	a b
	R⁷ :CH₂CHCH₂	ch₂chch₂	CH-COCH-,
H-l	8 . 04	d	7.89 dd	7.89 d
H-2	7 .79	t	7.72 t	7.72 t
H-3	7 .39	d	7.33 dd	7.3 3 d
H-7	5.32	m	5.15 m	5.14 m
H-8 alfa			2.12 dd
H-85			2.26 d
H-10			4.91 s	4.91 s
H -13	-		' 1.7-1.9 m
H -14	-		1 .12 t	1.11 t
H-r	5.57	bs	5.51 bs	5.57 bd
H-2'			1.7-1.9 m
H-3'			2.48 dt	2.8 5 ra
H-4 '	3.72	bs	3.70 bs	3.86 bs
H-5 '	4 .03	q	4 .08 q	4.24 q
H..-6 '	1.41		1 .41 d	1 .32 d
N-CH	2.22	s	2.20 s	2.23 s
OH-4	-		-	12.16 bs
OH-6	13.34	bs	13.36 bs	12.84 bs
OH-11	13.98	bs	13.81 bs	13.61 bs
a			2.97 dd,	2.37 d,
			3.15 dd;	2.57 d;
			J ,= 14 Hz aa	J ,=11.5 H aa ¹
			J =J ,,=7 Hz ab a ¹ b
b	5.68-5.	8 2 m	5.6-5.8m	1.42 s, 3H
c	5.1-5.2	Π1	5.05-5. 15m
OCH-.	4.09	s	4.09 s

Claims

REIVINDICAÇÃO

Processo para a preparação de novos derivados de antraciclinas dotados de actividade citostática da fórmula I ou dos respectivos sais de adição de ácido fisiologicamente aceitáveis com sais inorgânicos ou orgânicos, em que

R¹ significa hidrogénio ou um grupo hidroxilo, R² significa hidrogénio ou um grupo hidroxilo ou metoxi, R³ significa hidrogénio ou um grupo hidroxilo, R⁴ significa hidrogénio ou um grupo hidroxilo, R⁵ significa carbonilo hidrogénio 1 ou um grupo hidroxilo ou metoxi- R⁶ significa CH₂CH₅, COCH₅ C0CH₂0H , CHOHCH^ ou chohch₂oh

- 42 - A e

R significa um substituinte orgânico com 2 a 6 átomos de carbono, o qual contém pelo menos um átomo de oxigénio ou de azoto ou de enxofre ou uma dupla ligação C=C ou uma tripla ligação C=C, podendo a dupla ligação ser parte de um sistema heteroaromático e o átomo de oxigénio, de azoto ou de enxofre parte de um sistema de cadeia aberta ou heterociclico, no γ qual, no entanto, R não é um grupo cianometilo nem um substituinte da fórmula geral COR⁺, com R⁺ = = CH^, CF^ ou CCl^.

caracterizado por:

fazer-se reagir um composto da fórmula I na qual R^ = H ou OH, R² = H, OH ou OCH^, R⁵ = H ou OH, R⁴ = H ou OH, R⁵ = = H, OH ou COOCH,,, R⁶ = CH₂CH₅, COCH₅, C0CH₂0H, CHOHCH^ ou CHOHCHgOH e R* = H, de um modo conhecido em si na presença de ciano-hidreto de sódio com um aldeído com 2 a 6 átomos de carbono, o qual contém pelo menos um átomo de oxigénio ou de azoto ou de enxofre ou uma dupla ligação C=C ou uma tripla ligação C=C, podendo a dupla ligação ser também parte de um sistema heteroaromático e o átomo de oxigénio, de azoto ou de enxofre parte de um sistema de cadeia aberta ou heterociclico, ou fazer-se reagir o referido composto de um modo conhecido em si sob condições anidras na presença de uma base com um composto halogenado com 2 a 6 átomos de carbono, 0 qual contém pelo menos um átomo de oxigénio ou de azoto ou de enxofre ou uma dupla ligação C=C ou uma tripla ligação C=Ç , podendo a dupla ligação ser também parte de um sistema heteroaromático e 0 átomo de oxigénio, de azoto ou de enxofre parte de um sistema de cadeia aberta ou heterociclico, excluindo-se no entanto qualquer halogeno-acetonitrilo, de modo a obter-se um com1 6 posto da fórmula I no qual R a R possuem os significados

7 anteriormente definidos e R é um substituinte orgânico com 2 a 6 átomos de carbono, o qual contém pelo menos um átomo de oxigénio ou de azoto ou de enxofre ou uma dupla ligação

- 43 C=C ou uma tripla ligação C=C, podendo a dupla ligação também ser parte de um sistema heteroaromático e o átomo de oxigénio, de azoto ou de enxofre parte de um sistema de cadeia aberta ou heterocíclica, e eventualmente transformar-se o composto obtido por meio de um ácido inorgânico ou orgânico fisiologicamente aceitável num sal de adição de ácido.

A requerente reivindica a prioridade do pedido alemão apresentado em 4 de Junho de 1988. sob o ns. P 38 19 092.2.

Lisboa, 1 de Junho de 1989 o agente oficial da propriedade industrial

RESUMO

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS DE ANTRACICLINAS DOTADAS DE ACTIVIDADE CITOSTÃTICA

A invenção refere-se a utn processo para a preparação de novos derivados de antraciclinas dotados de actividade citostática da fórmula I ou dos respectivos sais de adição de ácido fisiologicamente aceitáveis com sais inorgânicos ou orgânicos que compreende fazer-se reagir um composto da fórmula I na qual R⁴ = = H ou OH, R² = Η, OH ou OCH5, R⁵ = H ou OH, R⁴ = H ou OH, R⁵ = H, OH ou COOCH5, R⁶ = CHgCH^, COCH^, C0CH₂0H, CHOHCH^ ou CH0HCH₂0H e R⁷ = H, de um modo conhecido era si na presença de cianoboro-hidreto de sódio com ura aldeído com 2 a 6 átomos de carbono, qual contém pelo menos ura átomo de oxigénio ou de azoto ou de enxofre ou uma dupla ligação C=C ou uma tripla ligação C=C , podendo a dupla ligação ser também parte de um sistema heteroaroraático e o átorao de oxi génio, de azoto ou de enxofre _x,arte de um sistema de cadeia aberta ou heterociclico, ou fazer-se reagir o referido composto de um modo conhecido em si sob condições anidras na presença de uma base com um composto halogenado com 2 a 6 átomos de carbono, o qual contém pelo menos um átomo de oxigénio ou de azoto ou de enxofre ou uma dupla ligação C=C ou uma tripla ligação C=C , podendo a dupla ligação ser também parte de um sistema heteroaromático e o átomo de oxigénio, de azoto ou de enxofre parte de um sistema de cadeia aberta ou heterociclico, excluindo no entantà qualquer halogeno-acetonitrilo, de modo a obter-se um composto da fórmula I no qual R¹ a R^ possuem os significados anteriormente definidos e R é um substituin te orgânico com 2 a 6 átomos de carbono, o qual contém pelo menos um átomo de oxigénio ou de azoto ou de enxofre ou uma dupla ligação C=C ou uma tripla ligação C=C, podendo a dupla ligação também ser parte de um sistema heteroaromático e o átomo de oxigénio, de azoto ou de enxofre parte de um sistema de cadeia aberta ou heterociclico, e eventualmente transformar-se o composto obtido por meio de um ácido inorgânico ou orgânico fisiològicamente aceitável num sal de adição de ácido.