PT93867A - Processo para a preparacao de derivados de rodomicina com eficacia citostatica - Google Patents

Description

Descrição referente à patente de invenção de BEHRINGWERKE AKTIENGE SELLSCHAFT, alemã, industrial e comercial, com sede em D-3550 Mar burg, Alemanha Ocidental, (inventores: Dr. Peter Hermentin, Ernst Raab, Dr. Dieter Hoffmann e Dr. Dr. Hans Peter Kraemer, residentes na Alemanha Ocidental), para "PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS DE RODOMICINA COM EFICA-CIA CITOSTATICA".

DESCRIÇÃO A presente invenção refere-se a novos derivados de antraciclina com eficácia citotática, de fórmula I, e aos seus sais fisiologicamente aceitáveis, ao processo para a sua preparação, bem como â sua utilização como medicamentos.

R1 0 OH OH

1

Para a fórmula I são válidos os signifi cados seguintes: 1 , . . . R representa hidrogénio ou um grupo hidroxi e 2 xx R representa cloro, bromo ou OCOR , em que R representa alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, de cadeia linear ou ramí ficada, fenilo ou benzilo, ou NRaRb, NRa-(CH0) -NRaRb, NRa-NRa-CO-(CH„) -CO-NRaNRaRb na 2 n 2 y qual n é 0 a 12, de preferência n é 0 ou n é 2 a 5, eyêO a 10, de preferência y é 0 a 5, em que R e R podem representar em cada caso hidrogénio, alquilo com 1 a 4 átomos de carbono ou benzilo, ou R^ representa NRa-CHR^-CH9-R^-, na qual Ra tem o significado indicado acima e R pode representar hidrogénio ou um grupo 4 carboxilo e R pode representar o radical de um L-ammoaci- do ou de uma amina biogénea, de preferência o radical de um L-aminoãcido aromático ou de uma amina biogénea aromática e sendo especialmente preferido o radical da amina biogénea tiramina, triptaamina, histamina, dopamina ou 5-hidroxidopa 2 3 mina, sendo o L-aminoácido definido por R quando R repre- 2

senta carboxilo, e sendo a amina biogénea definida por R 3 „ . quando R representa hidrogénio.

Dos tumores malignos que já não são curáveis por métodos cirúrgicos ou métodos terapêuticos com radia çóes, são actualmente curáveis 7 a 10% por quimioterapia. Em particular os tumores que proliferam rapidamente, como por exem pio a leucémia linfática aguda da criança, o Morbus Hodgkin, os tumores dos testículos e os tumores de Wilm, possuem uma elevada sensibilidade â quimioterapia com taxas de remissão de 60 a 90%.

Além disso pode conseguir-se por quimio terapia, em cerca de 30% de todos os pacientes com tumores, um atraso do crescimento do tumor ou uma remissão total ou parcial da doença tumõrica. Contudo, após períodos de tempo variáveis, no caso do prolongamento do tratamento quimioterapeutico ocorre também uma recidiva do tumor que se torna então frequentemente resistente contra a quimioterapia, inicialmente bem sucedida. Esta chamada "resistência secundária" que surge na quimioterapia limita pois a possibilidade de uma posterior influenciação 2 r A. ^Syr: "•*»ií ifctii*r~ni»iiiri Γι

quimioterapeutica do tumor. A este grupo de tumores pertencem os tumores da mama e dos ovários, o carcinoma pulmonar de células pequenas, bem como parte dos linfomas.

Muitas doenças malignas, porém, não são influenciadas presentemente pela quimioterapia, ou são-no apenas de forma marginal, de modo que nestes casos tem que se ter em consideração uma resistência primária do tumor contra as substâncias actualmente conhecidas. Neste grupo de tumores estão englobados os tumores pulmonares que não pertencem ao grupo de células pequenas, bem como a maior parte dos tumores gastrointestinais. Se se analisar este grupo de tumores primariamente resistentes sob o aspecto da sua velocidade de proliferação, ve rifica-se que precisamente os tumores dificilmente influenciáveis pela quimioterapia, ou não influenciáveis, possuem uma taxa de proliferação especialmente lenta.

Assume a maior prioridade a procura de novas substâncias que sejam eficazes precisamente nos casos de tumores humanos resistentes primários, cuja proliferação é lenta. Os agentes quimioterapeuticos de futuro também deverão possuir uma resistência cruzada o mais reduzida possível, relativa mente às substâncias já conhecidas, para serem utilizáveis com esperança de êxito quando se verifique uma resistência secundária contra substâncias já estabelecidas.

Da classe das antraciclinas em particular a doxorubicina (adriamicina), a epirubicina ou a daunomici-na possuem eficácia terapêutica para um grande número de doenças de tumores. Todavia, após um tratamento repetido observa-se uma nítida redução da eficácia anti-tumórica até à total perda de acção devida a uma "resistência secundária" das células do tumor contra as antraciclinas, que se desenvolvem por si próprias.

No caso da utilização destas antracicld^ nas conhecidas na terapêutica de tumores surge um outro problema fundamental, uma vez que estes compostos, além da eficácia cito-estática desejável, possuem também acções colaterais indesejáveis, como por exemplo uma toxicidade hematológica ou cardial. A eficácia da daunomicina e da adriamicina na terapêutica de tumores é atribuída sobretudo â aptidão destas antraciclinas para intercalação no ADN, o que paralisa o 3

crescimento das células do tumor e conduz à morte das células.

Partindo-se deste estado da técnica, o objectivo da presente invenção é revelar novos derivados de an- traciclina que, na medida do possível, não possuam resistência cruzada relativamente â adriamicina e que se caracterizem por um novo espectro de acção e uma menor toxicidade em comparação com a adriamicina, e que por conseguinte possam ter aplicação vantajosa na terapia de tumores.

Com esta finalidade foi já proposto sin 1

tetisar rodosammil-antraciclinonas de formula I nas quais R 2 tem o significado indicado e R representa alquilo com 1 a 6 átomos de carbono (Hermentin et al, DE 3 641 833 Al) ou um grupo hidroxi.

Surpreendentemente descobriu-se agora que a antraciclina já descrita por nós (Hermentin et al, DE 3 641 833 Al) 7-0-(3 1 -N-metil-Of-L-daunosaminil) -^3-rodomicinona pode ser transformada por reacção com cloroacetaldeldo, num com 1 2 posto de fórmula I em que R representa hidrogénio e R repre- - 2 senta cloro. A partir deste composto de formula I com R = cloro pôde mostrar-se que, surpreendentemente, ê relativamente estável em condições moderadamente ácidas, mas que no entanto o radical R = cloro em condiçoes moderadamente basicas pode ser permutado. Por exemplo, a hidrólise alcalina aquosa dos citados compostos conduz à substituição do átomo de cloro por um grupo hidroxi e, consequentemente, conduz a uma antraciclina cuja sín tese já tinha sido proposta por nós. Pôde ainda mostrar-se que o referido con. 2 „ posto de formula I em que R representa cloro e apropriado como composto de inclusão para a reacção de compostos contendo grupos amino e que os derivados assim obtidos se distinguem, relativamente âs antraciclinas da técnica actual, na sua solubilida de em água e/ou reactividade e/ou toxicidade.

Por exemplo, descobriu-se que o átomo de cloro pode ser substituído por um grupo dimetilamino e que o 1 2 composto em que R representa hidrogénio e R representa N(CH3)2 possui propriedades anfóteras, e a sua solubilidade em água é . alta, em comparação com as antraciclinas da técnica actual. - Descobriu-se ainda que, por reacção do 4

átomo de cloro com Ν,Ν1-dimetil-etilenodiamina, o composto é 1 2

transformado num composto em que R representa hidrogénio e R representa N(CH3)-CH2-CH2-NH-CH3.

Descobriu-se ainda que também se pode fa zer reagir com histamina um composto de fórmula I no qual R^ re . - 2 presenta hidrogénio e R representa cloro, obtendo-se deste mo- - 2 do um composto de formula I no qual R representa um radical histaminilo.

Descobriu-se ainda que se pode fazer re agir um composto de fórmula I no qual R^ representa hidrogénio 2 e R representa cloro, com acetato de sodio, obtendo-se um com- 2 posto de formula I no qual R representa OCOCH3· 0 objectivo da invenção são pois os com postos de fórmula I com os significados jã indicados das variáveis , São preferidos os seguintes significados : 2 R representa cloro ou bromo mas de preferencia cloro; R2 representa NRaRb; R2 representa NRa(-CH2)n-NRaRb; R2 representa NRa-NRa-CO-(CHj -CO-NRa-NRaRb;

2 a 3 g Y R representa NR -CHR -CH^-R mas sao preferidos os compostos 3 ^ em que R representa hidrogénio; 4 , R representa o radical de um L-aminoacido aromatico ou de uma amina biogénea aromática; 4 R representa o radical das aminas biogeneas tiramina, tripta-mina, histamina, dopamina ou 5-hidroxidopamina e de preferência o radical da amina biogénea tiramina; 2 xx R representa OCOR , em que R representa metilo.

0 processo para a preparação dos novos derivados de antraciclina de fórmula I de acordo com a invenção, com eficácia citostática, consiste em se transformar um composto de fórmula II 5

R1 0 OH OH

(Hermentin et al, DE 3 641 833 Al) na qual R^" tem o significado já indicado anteriormente, por reacção com cloroacetaldeído ou bromoacetaldeído, na presença de cianoborohidreto de sódio, num composto de fórmula I no qual tem o significado anteriormen-2 te indicado e R representa cloro ou bromo, fazendo-se depois reagir este composto com um composto de fórmula MeOCORX, na qual RX tem o significado já indicado e Me representa um ião alcalino, ou com um composto de fórmula HNRaRb ou HRNa-(CH2) -NRaRb ou HNRa-NRa-CO-(CH2)y-CO-NRa-NRaRb, nas quais n, Ra, R^ e Y têm os significados jã indicados, ou com uma amina biogénea, ou com um aminoácido, num dissolvente apropriado como por exemplo dime tilformamida, a uma temperatura compreendida entre por exemplo OSC e a temperatura de ebulição do dissolvente, e isolando-se e purificando-se o composto de fórmula I assim obtido.

Os novos derivados de antraciclina obtidos de acordo com o processo da invenção distinguem-se por uma actividade citoestãtica e podem pois ser incorporados em medica mentos que têm aplicação na terapia do cancro, em combinação com os componentes de formulações e/ou diluentes farmaceuticamente correntes. As doses e formas de aplicação correspondem neste caso essencialmente às das substâncias já conhecidas adriamicina, . daunomicina, aclacinomicina, 4'-epi-adriamicina, 41-metoxiadri-amicina ou 4'-desoxiadriamicina.

Os medicamentos preparados desta forma podem conter ainda adicionalmente outras substâncias activas des^ de que estas, em combinação com os compostos de acordo com a in- 6

venção, não apresentem acções colaterais indesejáveis. A eficácia citoestãtica dos compostos de acordo com a invenção foi ensaiada com base em células de leucemia L1210 do rato. Para isso recorreu-se â formação de colónias de células de leucemia L1210 em placas de agar. Este método serve para comprovação da influência das substâncias ensaiadas sobre o comportamento de crescimento das células ao lon go de uma hora ou ao longo de várias gerações. Para um ciclo ce lular de 10 a 12 h observam-se no presente caso, no período de ensaio de 7 dias, cerca de 14 gerações sucessivas. As substâncias eficazes como citoestáticas de acordo com a invenção causam neste teste uma redução do número de colónias observáveis relativamente a uma amostra de controle não tratada.

Os pormenores sobre o processo de ensaio empregue são facilmente depreendidos a partir da descrição seguinte da forma de trabalho para determinação da formação de colónias.

Para elucidação do processo de preparação de acordo com a invenção são apresentados os exemplos 1 a 5 adiante nos quais os compostos preferidos de acordo com a inven ção foram preparados segundo o processo reivindicado.

Caracterisação dos compostos de fórmula I A marcha das reacções, assim como os compostos resultantes, foram ensaiados cromatograficamente em camada delgada ou com a técnica HPLC. A cromatografia em camada delgada, quando não se assinala nada em contrário, foi realizada com placas prontas de silica-gel (Merck). A cromatografia em coluna foi realizada através de silica-gel 60 (Merck) com granu lometria 0,040-0,063 mm. Os rendimentos não estão optimisados.

Para a cromatografia em camada delgada e a cromatografia em coluna foram utilisadas as seguintes mistu ras diluentes (as indicações referem-se para cada caso em percentagem em volume): 7 A B C 70 89 77 18 7.4 14 8.5 3 7 3.5 0.6 2

Mistura eluente Composição

Clorofórmio (%) Metanol (%) Ácido acético (%) Água (%) A estrutura dos compostos preparados 1 foi determinada por meio de espectroscopia H-MRN ou espectros copia de massa.

EXEMPLOS EXEMPLO 1 7-0- (3' -N-cloroetil-31 -N-metil-OC-L-daunosaminil) -^-rodomicinona (composto 1)

Uma solução de 7-0- (3' -N-metil-íf-L-dau-nosaminil)-^-rodomicinona (100 mg = 0,19 mmol) em acetonitrilo (120 ml) foi misturada sucessivamente com ácido acético (50 ul, cerca de 4,6 equivalentes) cloroacetaldeído (130 ul de uma solu ção aquosa a 50% (p/v)) e cianoborohidreto de sódio (75 mg) e agitou-se em total escuridão 1 hora à temperatura ambiente. Seguidamente a solução reactiva foi misturada com acetato de eti-lo e o excesso de cianoborohidreto de sódio foi extraído por meio de solução aquosa de cloreto de sódio e a fase aquosa foi então reextraída 4 vezes com acetato de etilo. Seguidamente as fases orgânicas foram reunidas e foram reextraídas por meio de solução saturada de cloreto de sódio, secaram-se com sulfato de sódio e concentraram-se até â secura em vácuo, em evaporador ro tativo. O produto bruto assim obtido (95 mg), devido à elevada instabilidade do produto, foi aplicado sobre silica-gel sem purificação cromatogrãfica, para realização das reacções posterio res. Para a caracterização do derivado em cloroetilo uma toma de 150 mg foi cromatografada depois do tratamento, através de 15 g de silica-gel com a mistura eluente.D, em virtude de se ter observado decomposição com a mistura diluente C, e finalmen te foi purificado por 3 vezes em clorofõrmio/etanol (10/1). Os 8

dados analíticos foram obtidos a partir do produto puro obtido deste modo (5,2 mg). (Mistura eluente B:Rf 0,30). MS-FAB (M+H+) m/e = 592 MS-FAB (M+H+-Cl“) m/e = 556 *Η NMR (300 MHz, CDC13) & 1.12 (t, 3H, J13 ^ = 7.4 Hz, Me-14), 1.41 (d, 3H, J , 6, = 6.4 Hz, Me-6'), 1.7-2.0 (m, 4H, CH2-2' e CH2-13), 2.12 (dd, 1H, J7 8a = 4 Hz, J8a 8b = 15 Hz, H“8a), 2-25 (d, 1H, J0 = 15 Hz, H-8b) , 2.26 (s, 3H, N-CH.J , 2.56 (m, 1H, o cL f olD j H-3'), 2.73 (m, 1H, H-a), 2.81 (m, 1H, H-a'), 3.51 (bt, 2H, J& b = 6.5 Hz, CH2-b), 3.68 (bs, 1H, H-4'), 4.04 (s, 1H, OH-9), 4.09 (q, 1H, J5, 6, = 6.1 Hz, H-5'), 4.91 (s, 1H, H-10), 5.16 (m, 1H, H-7), 5.53 (bd, 1H, , 2, = 2.5 Hz, H-l'), 7.34 (dd, 1H, ^ 3 = 1 Hz, J2 3 = 8.4 Hz, H-3), 7.73 (t, 1H, ^ 2 = J2 3 = 8 Hz, H-2), 7.89 (dd, 1H, J1 2 = 7.5 Hz, ^ 3 = Hz, H-l), 12.16 (bs, 1H, OH-4), 12.85 (bs, 1H, OH-6), 13.61 (bs, 1H, OH-11). EXEMPLO 2 7-0-(31-N-dimetilaminoetil-31-N-metil-oC-L-daunosaminil)ηβ-rodo-micinona (composto 2)

Uma solução do composto 1 (12 mg = 0,020 mmole) em etanol (2 ml) misturou-se com μΐ de uma solução aquosa a 40% de dimetilamina (p/v) e agitou-se 16 h em total escuri. dão à temperatura ambiente. Seguidamente concentrou-se até à se cura em evaporador rotativo e a mistura reactiva foi depois separada através de 5 g de silica-gel com a mistura eluente A (Rf 0,2). As fracções depois de reunidas foram misturadas com água para a separação das fases, ajustou-se a pH 7 com soda cáustica a 10% (p/v) e seguidamente, por adição de solução aquosa satura da de hidrogenocarbonato de sódio, ajustou-se o pH a um valor 9. Separaram-se depois as fases numa ampola de decantação, a fase aquosa foi extraída várias vezes com clorofórmio e as fases orgânicas, depois de reunidas, foram concentradas até ã secura num evaporador rotativo.

Rendimento: 7 mg (0,012 mmole) = 60% MS-FAB (M+H+) m/e = 601 9

χΗ NMR (300 MHz , cdci3 ) $1 .12 (t , 3H, J 13 /14 7. 4 Hz , Me -14) , 1.39 (d, 3H ' J5 ',6 1 “ 6.4 Hz, Me -6'), 1 .7 -1. 9 (m, 4H, ch2 -2' e ch2- 13) , 2. 10 (dd, 1H, J7, 8a = 4 Hz- J8a, 8b - 15 Hz, H-8a), 2.20 (d, 1H, J8a ,8b = 15 Hz , H- 8b) , 2 .22 (s, 3H, N- CH, 2 .25 (s, 6H, N (CH 3)2) , 2 .1-2 .7 (m, 5H, ch2 -a/ CH2-b e H-3 ') t 5.67 (bs, 1H, H-4 1 ), 4 .08 (q, 1H , J5 ' / 6' = 6.6 Hz, H- 5' ), 4. 14 (bs, 1H, OH-9), 4.91 (s, 1H , H- 10) , 5. 16 (m, 1H, H-7) , 5. 52 (bd, 1H, J1‘, 2' 2 Hz , H- 1') , 7. 34 (dd, 1H, H1 /3 = 1 Hz. J 2,3 8. .4 Hz / H- 3), 7.75 (t, 1H ' Ji ,2 J2 / 3 = 8 Hz, H-2) , 7. 90 (dd. 1H, J1,2 = 7.6 Hz, J1.3 Hz, H-l), 12,16 (bs, 1H, OH- 4) , 12. 85 (bs, 1Η, OH-6), 13.63 (bs, 1H, OH- 11) . EXEMPLO 3 7-0-(31-N-(Ν,Ν1-dimetil-etilenodiaminoetil)-31-N-metil-QC-L-dau-nosaminil)-^-rodomicinona (composto 3) A uma solução do composto 1 (50 mg=0,084 mmole) em etanol (5 ml) adicionou-se gota a gota Ν,Ν'-dimetil--etilenodiamina até ao aparecimento de uma coloração azul forte e em seguida agitou-se 16 h à temperatura ambiente em total escuridão. Seguidamente concentrou-se até à secura em evaporador rotativo, a mistura reactiva foi depois separada através de 5 g de silica-gel com a mistura eluente A (Rf 0,17) e as fracções recolhidas foram tratadas analogamente ao Exemplo 2.

Rendimento: 23 mg (0,036 mmole) = 43% MS-FAB (M+H+) m/e = 644 h : NMR (300 MHz, CDC13) $ 1.12 (t, 3H , J 13,14 : = 7. 4 Hz / Me-14), 1.40 (d / 3H, J5· /6' = 6. .4 Hz, Me- 6') , 1 .6-1.9 (m, 4Η, CH2-2' e ch2 -13) / 2.10 (dd, 1H' J7,8a - 4 Hz, J8 a,8b = 15 Hz, H -8a), 2.20 (s, 3H, N -ch3 ), 2.25 (s, r 3Η, N -CH 3* ' 2. 25 (d. 1H, J8a / 8b = 15 Hz, H-8b) , 2. 55 (s, 3H, n-ch3) , 2 .34 -2. 72 (m, ch2 -a, CH -b, ch2 -c, CH :2-d) , 3 .69 (bs. r 1H, H -4' ), 4.08 (q, 1H, J51 . 6 , = 6.9 Hz, Η-5 ') , 4. 90 (s, 1H, Η-10), 5. 15 (m, 1H, H -7), 5.51 (bs, 1Η, H-l '), 7. 29 (d, 1H, J2,3 8 *3 Hz / H -3) , 7.71 (t, 1H, Jl,2 “ J2, 3 = 8 Hz, H-2 ) r 7.88 (d, 1H , J 1,2 = 7.5 Hz , H- D . - 10 -

EXEMPLO 4 7-0- (3 1-N-histaminoetil-3 1 -N-metil-oC-L-daunosaminil) -^-rodomici-nona (composto 4)

Uma solução do composto 1 (50 mg = 0,084 mmole) em dimetilformamida (6 ml) foi misturada com histamina sólida até se verificar a mudança de cór para azul, e agitou-se 20 h à temperatura ambiente, em total escuridão. Seguidamente concentrou-se até â secura em evaporador rotativo, a mistura foi separada através de 2 g de silica-gel com a mistura eluente A (Rf 0,26) e as fracções recolhidas foram tratadas analogamente ao Exemplo 2.

Rendimento: 12 mg (0,018 mmole) = 21% MS-FAB (M+H+) M/e = 1H NMR (300 MHz, CDC1-/Dc-DMS0 (3/1)) & 1.09 (t, 3H, J... .. = 7.4 j O 1J/14

Hz, Me-14), 1.33 (d, 3H, J5, gI = 6.4 Hz, Me-6'), 1.7-1.9 (m, 4H, CH2-2' e CH2-13), 2.17 (bs, 2H, CH2-8), 2.19 (s, 3H, N-CH3), 2.42-2.96 (m, 9H, CH2-a, CH2-b, CH2-c, CH2-d e H-3'), 3.68 (bs, 1H, H-4?), 3.97 (bs, 1H, OH-9), 4.07 (q, 1H, , βΙ = 6.7 Hz, H-51), 4.78 (s, 1H, H-10), 5.11 (m, 1H, H-7), 5.49 (bs, 1H, H-l'), 6.74 (s, 1H, H-e), 7.27 (d, 1H, J2 3 = 8,2 Hz' H“3) / 7.47 (s, 1H, H-f), 7.69 (t, 1H, J2 3 = 8 Hz, H-2) , 1.82 (d, 1H, J± 2 = 7.4 Hz, H-l). EXEMPLO 5 7-0- (31 -N-acetoxietil-3' -N-metil-pC-L-daunosaminil) -{3-rodomicino-na (composto 5) A reacção foi realizada analogamente ao Exemplo 1, mas no entanto em vez de 1 h agitou-se durante 6 h. Durante este período o átomo de cloro do composto formado em ie lugar foi substituído por acetato. A purificação cromatográfica foi realizada com a mistura eluente C (Rf 0,65) .

Rendimento: 43% MS-FAB (M+H+) m/e = 616 1H NMR (300 MHz, CDC13)$ 1.12 (t, 3H, J13 14 = 7.4 Hz, Me-14), • 1.41 (d, 3H, J5, gl = 6.6 Hz, Me-6'), 1.7-1.9 (m, 4H, CH2-2' e 11

CH„-13), 1.99 (s, 3H, acetil-CH0), 2.12 (dd, 1H, J„ 0 =4 Hz,

£ j / f o cL J8a 8b = 15 Hz' H_8a)' 2*25 <d' 1H' J8a 8b = 15 Hz' H~8b)' 2,26 (s, 3H, N-CH^), 2.5-2,7 (m, 2H, H-a e H-31), 2.8-2.9 (m, 1H, H-a1), 3.66 (bs, 1H, H-41), 4.04-4.12 (m, 4H, OH-9 (s) , H-5' (q) e CH2-b (t)) , 4.90 (s, 1H, H-10), 5.16 (mf 1H, H-7), 5.52 (bs, 1H, H-l'), 7.35 (dd, 1H, ^ 3 = 1 Hz, J2 = 8.4 Hz, H-3), 7.73 (t, 1H, J1 2 = J2 3 = 8 Hz/h-2), 7.90 (dd, 1H, J± 2 = 7.4

Hz, ^3=1 Hz, H-l).

Citotoxicidade dos compostos de fórmula I contra células de leucemia L1210 do rato in vitro

Processo de trabalho para determinação da formação de colónias de células de leucemia L1210 em soft-agar 500 células de leucémia por placa foram incubadas com diversas concentrações d& substância de ensaio du rante 1 h a 37QC. Seguidamente as células foram lavadas por 2 vezes com o meio McCoy 5A e finalmente foram colocadas em placas de Petri, depois da adição de 0,3% de agar. Os controles foram incubados simplesmente com o meio fresco. Em vez da incubação de 1 h, em muitos casos misturaram-se diversas concentrações e substâncias de ensaio da camada superior de agar para se conseguir deste modo uma exposição contínua das células ao longo de todo o período de incubação. Depois da solidificação do agar as placas foram incubadas 7 dias a 37QC numa estufa (5% em volume de C02, 95% de humidade relativa do ar). Em seguida contou-se o número de colónias formadas com um diâmetro superior a 60 um. Os resultados foram expressos como número de colónias em placas de agar tratadas em percentagem dos controles não tratados. A partir da curva dose-acção assim obtida determinaram-se os valores IC50 como medida da eficácia da substância. Os resultados para os compostos aqui descritos, em comparação com a adriamicina, estão indicados no Quadro 1. - 12 -

QUADRO 1

Citotoxicidade dos compostos de fórmula I preparados contra células de leucemia L1210 in vitro

Substância NQ. 1 2 (Exemplo) R R

Duração da incubação ^50 (fig/ml)

Incubação de 1 hora IC5Q (jig/ml) 1 H Cl 0.03 0.11 2 H n(ch3)2 0.033 0,12 3 H N(CH3)-CHG2- CHd2-NH(CH3) 4 H NH-CHC2-CHd2-^ Cí N -^f 5 H ococh3 13

Claims (2)

1. REIVINDICAÇÃO Processo para a preparação dos novos de rivados de antraciclina com eficácia citostática, de fórmula I

   e dos seus sais fisiologicamente aceitáveis, nos quais 1 - , R representa hidrogénio ou um grupo hidroxi e R2 representa cloro, bromo, NRaRb, NRa-(CH2)n~NRaRn, NRa-NRa-CO-(CH2)y-CO-NRa-NRaRb na qual n é 0 a 12, de preferência n é 0 ou n é 2 a 5, eY é 0 a 10, de preferência y é 0 a 5, em que R e R° podem representar em cada caso hidrogénio, alquilo com 1 a 4 átomos de carbono ou benzilo, ou R2 representa NRa-CHR3-CH -R4, a ^ - 3 na qual R tem o significado ja indicado acima e R represen ta o radical de um L-aminoácido ou de uma amina biogênia, ou R representa OCOR , em que R representa alquilo com 1 a 6 áto mos de carbono, de cadeia linear ou ramificada, fenilo ou benzilo, caracterizado por se transformar um composto de fórmula II 14 « * i
2. 2 na qual R tem o significado já indicado anteriormente, por re- acção com cloroacetaldeído ou bromoacetaldeído na presença de , 1 cianoborohidreto de sodio, num composto de formula I na qual R . . . . . 2 tem o significado anteriormente indicado e R representa cloro ou bromo, por se fazer reagir depois este composto com um composto de fórmula HNRaRb ou HRaN-(CH„) -NRaRb ou HNRaNRa-CO-a. a b an ^ -(CH2) -CO-NR -NR R , nas quais n, R , R e y têm os significados já indicados, ou com uma amina biogénia ou com um aminoãci-do ou com um composto de fórmula MeOCORx, na qual Rx representa alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, de cadeia linear ou ramif_i cada, fenilo ou benzilo, e Me representa um ião alcalino, num dissolvente apropriado, de preferência dimetilformamida, a uma temperatura compreendida entre OQC e a temperatura de ebulição do dissolvente, e por se isolar e purificar o composto de fórmu la I assim preparado. A requerente reivindica a prioridade do pedido alemão apresentado em 26 de Abril de 1989, sob o nQ. P 39 13 743.0. Lisboa, 24 de Abril de 1990. © A8EOT 5M3AL BL EIFELCSVEIIAI·

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