PT86313B

PT86313B - Processo para a preparacao de derivados de antraciclina citostaticamente activos e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT86313B
Application number: PT86313A
Authority: PT
Inventors: Cenek Kolar; Hans Peter Kraemer; Peter Hermentin; Michael Paal
Original assignee: Behringwerke Ag
Priority date: 1986-12-08
Filing date: 1987-12-07
Publication date: 1990-11-07
Also published as: DK640487A; FI875354A0; FI875354A7; DE3641835A1; EP0277310A1; JPS63156798A; FI875354L; CA1296326C; US4965352A; AU600051B2; AU8213387A; PT86313A; DK640487D0

Description

Memória Descritiva

A presente invenção refere-se a novos derivados da antracidina citostaticamente aotivos, ao processo para a sua preparação assimt como à sua utilização na preparação de composições farmacêuticas.

A classe de substâncias das antraciclinas é já conhecido desde há muito tempo. Desde a descoberta da estrutura das rodomicinas, daadriamioina da daunomicina e da difulgação da actividade citostática de deter* minados membros desta classe de antraciolinas, obteve-se um ? grande número de antraciolinas por via biológica por meio

- 1 ‘ «

do desenvolvimento de membros da espécie de actinomicetas

Streptomyces e investigou-se a sua actividade.

Sabe-se que antraciclinas em que está presente o esqueleto de daunosaainilo ou de rodosaminilo possuem actividade antitumores e que por exemplo a adriamioina e a aclacinomicina estão contidas oomo substâncias activas em produtos farmacêuticos que se encontram à venda no mercado.

A partir de uma publicação de Essery e Doyle (Can. J. Chem. 58. 1869 (1980)) é conhecida a reacção de acoplamento entre uma daunosamina funcionalizada e uma £ -rodomioinona. 0 óc-glicósido resultante apresenta em comparação com a adriamicina apenas uma ligeira actividade citostática.

Surpreendentemente nos ensaios realizados pela Requerente sobre este domínio descobriu-se que a £ -iso-rodomicinona pode ser glicosidada com l,4-di-0-acetil-L-rodosamina e que a 7-0- óu-L-rodosaminil- £ --iso-rodomicinona assim formada e o seu derivado de 4'-0-acetilo possuem actividade citostática que é comparável com a da adri amicina.

A presente invenção tem portanto como objectivo proporcionar novos derivados de antraciclina que se podem obter por via biológica e os seus derivados correspondentemente substituídos na posição 10 que possuem actividade citostática.

Os novos derivados de antraciclina de acordo com a presente invenção correspondem nesse caso à fórmula geral I

na qual os símbolos

R^ significa um grupo CH,(CH₉)„ em que n = 0 até 5,

D Π

R significa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo,

R significa um átomo de hidrogénio, um grupo metilo ou um grupo de protecção acilo usual na química dos hidratos de carbono como por exemplo um grupo acetilo, trifluoracetilo, benzoílo ou para-nitrobenzoílo e

R⁴ significa um átomo de hidrogénio ou um grupo de protecção acilo, e eventualmente existem sob a forma de sais dum ácido inorgânico ou orgânico que evidentemente é aceitável do ponto de vista da saúde.

No quadro da presente invenção são especialmente preferidos os conjugados de £ -iso-rodomicinona-glicosilo da fórmula geral anteriormente referida (I), em que os símbolos rI significa um grupo metilo

R² significa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo,

R^ significa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo, um grupo de trifluoracetilo ou acetilo e

R⁴ signifioa um átomo de hidrogénio, um grupo acetilo, benzoílo ou para-nitrobenzoílo e

- 3 eventualmente podem existir sob a forma dum sal dum ácido orgânico ou inorgânico.

processo de acordo com a presente invenção para a preparação dos novos derivados de antraciclina anteriormente descritos parte da antraciclona que se pode obter por via biológica ou do seu derivado correspondente esterificado na posição 10 da fórmula geral II

II na qual r! é um grupo CHgCCH^)^ oom n igual a um número desde até 3. Este derivado de antraciclona.

a) é feito reagir com um derivado funcionalizado da daunosamina da fórmula geral III

OR⁵ lll na qual R significa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo, R significa um grupo metilo ou um grupo acilo de proa 5 tecção, R significa um grupo de protecção e R significa um grupo acilo de protecção, em presença dum dissolvente orgânico e de um catalisador e eventualmente em presença dum agente captador de ácido e de um agente sicativo, a uma tempera- 4 -

“ lura da reacção compreendida entre -70°G até +30°C de modo a obter-se um composto da fórmula geral (I), depois do que eventualmente

b)num produto da reacção da fase a), se desbloqueiam de maneira parcial ou eompletamente os grupos de protecção existentes no segmento de hidrato de carboo procedendo de maneira em si conhecida por meio da recção com uma base inorgânica ou orgânica no seio dum dissolvente e eventualmente em seguida de maneira selectiva se introduz um novo acilo, digo grupo acilo de protecção no grupo 4’-hidroxi e/ou 3’-amino ou 3’-metilamino e eventualmente

e) num produto da reacção com o grupo 3’-Ν,Ν-dimetilamino obtido na fase a/ ou na fase b), se elimina o grupo metilo ligado ao azoto procedendo de maneira em si conhecida por via fotolítica em presença dum dissolvente e a uma temperatura reaccional compreendida entre +10°0 e +100°C e eventualmente se faz reagir o derivado de 3’-Ν-metilamino assim obtido de modo a obter-se um derivado de N-acilo ou um derivado de N-acilo e O-acilo e eventualmente

d) num produto reaccional derivado da daumosamina obtido na fase b) se realiza uma N-metilação procedendo de maneira em si conhecida de maneira a obter-se um produto da reacção de 3-N-metil-daunosamina ou uma Ν,Ν-dimetilação de maneira a obter-se o produto da reacção da rodosamina e eventualmente

e) de maneira em si conhecida se transformar no sal dum ácido inorgânico ou orgânico.

derivado de daunosamina empregado no processo de acordo com a presente invenção pode por exempio como grupo de protecção e como radical R possuir um • grupo acilo de proteoção usual na química dos hidratos de

carbono como por exemplo um grupo acetilo ou trifluoraceti- lo; como radical R pode possuir um grupo acetilo, benzoílo ou para-nitrobenzoílo que correntemente bloqueia na química dos hidrates de carbono ou como radical R pode conter o grupo acetilo ou para-nitrobenzoílo.

Como dissolvente orgânico, no seio do qual se realiza a reacção, podem utilizar-se por exemplo clorofórmio, diclorometano, tolueno, éter, dimetil-formamida, acetona, acetonitrilo ou suas misturas e, como catalisador, pode por exemplo utilizar-se éster de trimetil-sililo do ácido trifluormetanossulfónico. Como agente captador de ácido usa-se convenientemente um peneiro molecular 4 & e como agente cicativo por exemplo sulfato de aálcio,

A eliminação dos grupos de protecção na fase b) pode realizar-se por meio de uma base, como um . hidróxido de metal alcalino ou alcalino-terroso, carbonato de sódio e trietilamina no seio dum dissolvente tal como água, metanol, etanol, THF ou suas misturas.

A eliminação fotolítica realizada na fase c) de um grupo metilo pode por exemplo efectuar-se por I actuação duma fonte luminosa como por exemplo a luz do sol ou a luz do dia de uma fonte luminosa intensa, podendo utilizar-se como dissolvente por exemplo, clorofórmio, metanol, água ou as suas misturas.

Rara a metilação do grupo 3‘-amino prevista na fase d), podem usar-se quaisquer agentes de metilação. Como exemplo para a formação do composto de N,N-dimetil, podendo mencionar-se por exemplo, a metilação com aldeído fórmico aquoso a 37$ e ciano-hidreto de sódio.

Para a formação de sal de acordo com a fase e) do processo podem utilizar-se quaisquer ácidos • inorgânicos ou orgânicos, desde que eles sejam aceitáveis — do ponto de vista de saúde relativamente à posterior utiliza- 6 -

ção das composições farmacêuticas. De preferência, utiliza-se ácido glutâmico ou gluourónico.

De acordo com uma forma de realização preferida do processo de acordo com a presente invenção, faz-se reagir £ -iso-rodomicinona com 1,4-di-O-acetil- CL··-1-rodosamina em presença dum dissolvente orgânico, de um catalisador, eventualmente dum agente captador de ácido e dum agente sicativo e eventualmente submete-se à eliminação fotolítica do grupo metilo, à desacilação e a nova acilação • formação de sal.

De aoordo com uma outra forma de realização vantajosa do processo de acordo com a presente invenção, faz-se reagir £ -iso-rodomicinona com l,4-di-0-acetil-3-N-aoetil- ÓV-L-daunosamina em presença dum dissolvente orgânico, dum catalisador e eventualmente dum agente captador de ácido e dum agente sicativo, submetendo-se eventualmente à desacilação e a N-metilação assim oomo eventualmente a nova acilação e/ou formação de sal.

Os novos derivados de antraciclina obtidos de acordo com o prooesso da presente invenção carac terizam-se, como já se mencionou, por possuírem actividade citostátioa e podem portanto ser processados conjuntamente com os agentes de confecção e/ou com os agentes diluentes farmaceuticamente usuais de modo a obterem-se composições farmacêuticas que são utilizadas na terapia do cancro. A maneira de dosagem e de utilização correspondem essencialmente às das substâncias conhecidas adriamicina, daunomicina, aclacinomicina, 4’-epi-adriamicina, 4’-metoxi-adriamicina ou 4’“desoxi-adriamioina.

As composições farmacêuticas preparadas dessa forma podem conter adicionalmente ainda outras substâncias activas desde que, em conjunto com os compostos de acordo com a presente invenção, não mostrem actividades seeundárias indesejadas.

A actividade citostática dos compostos de acordo com a presente invenção foi ensaiada em células de leucemia L1210 do rato. Para o efeito cultivaram-se colónias de células de leucemia LI210 em agar mole. Este método serve para demonstrar a influência das substâncias ensaiadas sobre o comportamento ao crescimento das células ao longo de varias gerações. Sendo o tempo de ciclo das células igual a 10 a 12 horas observam-se cerca de 14 gerações consecutivas umas às outras durante um tempo de ensaio de 7 dias. As substâncias que actuam citostaticamente de acordo com a presente invenção, provocam neste ensaio uma redução do número de colónias observadas em comparação com uma amostra de controlo não tratada.

Na seguinte descrição da maneira de proceder para a determinação da formação de colónias indicam-se pormenores sobre o processo de ensaio. Para a determinação d.a toxicidade aguda dos derivados de antraciclina d.e acordo com a presente invenção realizaram-se os correspondentes ensaios em ratos NMRI. Os pormenores do processo de ensaio são indicados na seguinte maneira de proceder para a determinação da toxicidade aguda.

Maneira de Proceder rara a Formação de Colónias de Células de Leucemia LI 210 em Agar Macio

Incubaram-se 500 células de leucemia por placa durante 1 hora a 37°C com diferentes concentrações da substância de ensaio 1. Sm seguida lavaram-se as células 2 veães com meio de McCoy5A e finalmente despejaram-se em cápsulas de Petri depois de se adicionar O,3% de agar. In^Gubaram-se controlos apenas com meio fresco. Em vez da incubação durante 1 hora,em muitos casos misturaram-se diferentes concentrações e substâncias de ensaio na camada superior de agar d.e modo a atingir-se assim uma exposição contínua das células durante todo o tempo de incubação. Depois de o agar solidificar, incubaram-se as placas em estufa de incubação a

37°C durante 7 dias (5% de CC^ em volume, 95% de humidade relativa do ar). S_m seguida, contou-se o número das colónias obtidas com um diâmetro maior do que 60 7 . Os resultados foram expressos em número de colónias em placas de agar tratadas em percentagem em relação ao controlo não tratado. A partir da curva da acção em função da dose assim obtida determinou-se o valor de como uma medida para a actividade da substância. Os resultados para os compostos descritos na presente I-lemória Descritiva são reunidos na T_abela 1 em comparação com a Adriamicina.

Maneira de proceder para a determinação da toxicidade aguda

Para a determinação da toxicidade âgucia injectaram-se intravenosamente ratos NKRI no dia 0 com diferentes doses da substância d.e ensaio, dissolvida em 0,5 ml de solução de cloreto de sódio fisiológica. G_rupos de controlo receberam simplesmente 0,5 ml d.e solução de cloreto de sódio fisiológica. Por cada concentração da substância ensaiada utilizaram-se 5 ratos. Ν_ο dia 14 determinou-se o: número de ratos sobreviventes e a partir desse valor determinou-se a DL50 de acordo com o método de Litchfield Wilcoxon. Na Tabela 1 reunem-se os valores da toxicidade dos compostos descritos em comparação com a Adriamicina.

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Para o esclarecimento do processo de preparação de acordo com a presente invenção descrevem-se em seguida os Exemplos 1 a 11, nos quais se prepararam os compostos preferidos de acordo com a presente invenção seguindo o processo reivindicado.

A estrutura dos compostos preparados foi determinada por meio de ensaio de ressonância magnética nuclear protónica, ressonância magnética nuclear de ^C, dõ espectro de massa ou do espectro de infravermelho. 0 decurso das reacções assim como os compostos resultantes foram ensaiados por cromatografia em camada fina ou por técnicas de cromatografia em fase líquida sob alta pressão (HPLC).

Exemplo 1

-0-(4’-0-Aoetil- 6C/-L- -iso-rodomicinona.

(Composto 1)

Dissolveu-se 1 grama (2,25 milimoles) de £ -iso-rodomicinona em 200 ml de diclorometano isento de água. A esta solução adicionou-se à temperatura ambiente 0,65 g (2,55 milimoles) de 1,4-di-O-acetil-L-rodosamina e 5 g de peneiro molecular 4 & em 20 ml de diclorometano isento de água e, em seguida, agitou-se durante 0,5 h. Adicionou-se a esta solução 0,6 ml de éster de metil-sililo do ácido trifluorometanossulfónico. Depois de meia hora, à ímistu- ra reaccional adicionou-se solução saturada de hidrogeno carbonato de sódio. Lavou-se a fase orgânica com água, secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se em vácuo (vácuo provocado por trompa de água). Seguiu-se uma purificação por cromatografia em coluna contendo 80 g de gel de sílica (agente de eluição : tolueno/etanol 10:1). Obteve-se 0.8 g (55% de rendimento em relação à aglioona) do composto 1 indicado em título.

Ponto de fusão: 223 - 224°C.

- 11 Análise elementar

Valores calculados ($): C 59,71; H 5,79; N 2,17

Valores determinados ($): 0 59,97; H 5,81; N 2,03

Dados espectrosoópicos

Espectro de ressonância magnética nuclear protónica (400 MHz, :®01₅, 5); 5,68 (m, H-1‘), 5,27 (dd, H-4’), 5,22 (dd, H-7), 4,49 (H-3‘), 4,24 (S, H-10), 4,20 (H-5‘), 3,70 (s, OCH₅), 2,19 (s, N(CH₅)₂), 21,18 (s, Ac).

Exemplo 2

7-0-( £, -íso-rodomicinona (Composto 2)

Dissolveu-se 0,5 g (0,77 milimoles) do Composto 1 em 100 ml de metanol isento de água e tratou-se com 0,1 ml de solução., a 30$ de metilato de sódio. Depois de se agitar durante 2 horas à temperatura ambiente, neutralizou-se com resina permutadora de ióes Dowex WX8. Em seguida, filtrou-se e conoentrou-se o filtrado em vácuo. Obteve-se 0,35 grama (90$) do Composto 2 indicado em título.

Análise elementar

Valores calculados ($): C 59,89; H 5,86; N 2,32

Valores determinados ($): C 59,97; H 5,91; N 2,13

Dados espectroscópicos

Espectro de ressonância magnética nuclear protónica (400 MHz, CDCl^, J? ): 5,52 (dd, H-l'), 5,23 (H-7), 4,50 (H-9), 4,27 (H-10), 4,07 (H-5‘), 3,73 (0CH₅),

2,25 (N(CH₃)₂).

Exemplo 3

7-0-(4’-0-para-Nitrobenzoil-3~N-trifluoracetil--L-daunosamin.il)-iso-rodomicinona (Composto 3)

- 12 3*’='ΐ

Dissolveu-se 1,0 g (2,25 milimoles) de £ -iso-rodomicinona em 200 ml de diclorometano/éter na proporção de 1 í 1 isento de água, misturou-se com 5 g de peneiro molecular 4- i e agitou-se à temperatura ambiente durante 30 minutos, Ra suspensão arrefecida até -20°0, introduziram-se 3,25 g (6 milimoles) de 1,4-di-O-para-nitrobenzoil-3-N-trifluoraoetil-D-daunosamina, dissolvidos em 50 ml de diclorometano. Em seguida, adicionou-se gota a gota 1 ml de éster de trimetil-sililo do ácido trifluormetanossulfónico. Depois de 30 minutos, adicionaram-se à mistura adicionar 2,2 ml de trimetilamina e, em seguida, agitou-se durante mais 10 minutos. Separou-se por filtração a mistura reaccional e lavou-se o resíduo da filtração com diclorometano. Lavaram-se as soluções orgânicas com água e seearam-se sobre sulfato de sódio isento de água. Cromatografou-se em gel de sílica o resíduo obtido por evaporação do dissolvente. Obtiveram-se 1,52 g (rendimento 82% em relação à aglicona) do Composto 3).

Análise elementar

Valores calculados (%): C 54,28; H 4,06; R 3,42; E 6,69

Valores determinados (%)í 0 54,02; H 4,06; R 3,28; F 6,80

Exemplo 4

7_0-(4'-0-acetil-3*-R-trifluoraoetil- ^U-L-daunosaminil·/- & -iso-rodomicinona (Composto 4)

A partir de £ -iso-rodomicinona e l,4-di-0-acetil-3-R-trifluoracetil-L-daunosamina preparou-se o Composto 4, como se descreveu no modo de proceder para a preparação do Composto 3, muito embora como dissolvente para a mistura reaccional se tenha utilizado uma mistura de dissolvente constituído por diclorometano/aoetona na proporção de 1 : 1.

Ponto de fusão : 238°C

Valores calculados (%) s C 54,01; H 4,53; N 1,96 Valores determinados (%)s C 54,03; H 4,61; N 1,79

Dados espectroscópicos

Egpectro de ressonância magnética nuclear protónica (400 i'4Hz, CDC1₃, 5 )· 5,49 (dd, H-l’), 5,32 (d, J - 7,0 Hz,

NHCO), 5,20 (dd, H-4’), 5,12 (H-7), 4,33 (m, H-5’ e H-3 ·), 4,27 (s, H-10), 3,68 (s, OCHg) .

Exemplo 5

7-0-(3'-N-Trifluoracstil-a-L-daunosaminil)- £, -iso-rodomicinona (Composto 5)

Dissolverarft-se 200 mg (0,24 milimoles) do Composto 3 em 20 ml de metanol e à temperatura ambiente tratou-se com 0,1 ml de solução aquosa 0,1 n de HaOH. D_epois de 10 minutos neutralizou-se a mistura reaccional com 0,1 ml de solução aquosa 0,1 N de HC1. 0 produto obtido, depois da evaporaçãodo dissolvente, foi em seguida purificado numa curta coluna contendo gel de sílica.

Rendimento do C_omposto 5 indicado em títulos 149 mg (93%)_o

Análise elementar

Valores calculados (%) t C 53,81; 11 4,51; N 2,09; F 8,51 Valores determinados (%) s C 54, Oq; H 4,52; N 2,03; F 8,38

Exemplo, 6

7-0-a-L-Daunosaminil- £, -iso-rodomicinona (Composto 6)

Desbloqueou-se o C_omposto 5 procedendo de maneira correspondente à maneira de proceder descrita no

Exemplo 5 muito embora com utilização de NaOH 0,5 normal para

- 14 o Composto 6

P_onto de fusão: 153 - 155°C

Análise elementar

Valores calculados (%): C 58#64; H 5,45; N 2,44

Valores determinados (%): C 58,37; H 5,51; N 2,32

Dados espectroscópicos

Espectro de ressonância nuclear magnética protónica (270 MHz, CD₃0D, £)); 7,18 (H-2, H-3), 5,47 (H-l'), 5,11 (H-7), 4,2 (II-10), 3,73 (COOCH₃).

E_spectro de infravermelho: (KBr, , cm ^) : 1720, 1590

Exemplo 7

7-0- (3 ' -N-Acetil-4 ’ -O-acetil-Cí-L-daunosaminil) - 8 -iso-rodomi cinona (C_omposto 7).

Composto 6 foi transformado num derivado de 3'-N-4’-0-diacelilo procedendo de acordo com o proces· so de acetilação usual na química dos hidratos de carbono com anidrido acético/piridina/Mclorometano.

Dados espectroscópicos

Espectro de ressonância magnética nuclear protónica (4OO MHz, CDCly H 5/49 (H-l’), 5,32 (j(NH, 3') - 7 Hz, NHCO), 5,20 (Π-4·), 5,12 (11-7), 4,33 (m, H-5', H-3’), 4,27 (s, 10-K), 3,68 (OCH₃), 2,19 (OAc), 2,17 (NAc).

Exemplo 8

7-0 (4 '-O-Acet.il-3 ’-Ν-metil-a-L-daunosaminil) - £, -iso-rodomicinona (Composto 8).

Â temperatura de 0°C submeteu-se à acção da iluminação por uma lâmpada de 500 Watt (Schiansky) durante 1 hora colocada à distância de 25 cm uma solução de 7-0-(4’-0-acetil-u-L-rodosaminil)- -iso-rodomicinona (Composto 1) (50 mg = 0,078 milimoles) dissolvida numa mistura de clorofórmio (100 ml) e metanol (5 ml) contida numa cápsula de Petri com o diâmetro de 18 centímetros colocada sobre uma base reflectora. Em seguida, eliminou-se o dissolvente por evaporação em eaporador rotativo, dissolveu-se o resíduo na quantidade mínima possível de metanol, misturou-se com água, regulou-se a pH 4,4 com ácido clorídrico a 1% e elimineu-se o metanol em evaporador de rotação. Extraíu-se a solução aquosa assim obtida três vezes com clorofórmio. Lavaram-se as fases clorofórmicas depois de reunidas com água de ρίϊ 4, 5 e em seguida com água de píl 9, 5, secou-se sobre sulfato de sódio, filtrou-se e eliminou-se o dissolvente por evaporação em evaporador rotativo. Pu^ificou-se o resíduo por dissolução repetitiva em diclorometano e precipitação por adição de hexano e detectou-se por cromatografia em camada fina.

Rendimento no C_omposto 8 indicado em título : 26 mg 0,041 milimole) = 53%.

Dados espectroscópicos

Espectro de ressonância magnética nuclear protónica (4OO MHz, CDClg): 1,13 (_t, 3H, J = 7, 3 Hz, CHg-14), 1,20 (<g, 3?I Jg = = 6,5 Hz, Oi₃-6'(, 2,18 (_s, 33, acetil-CHg), 2,33 (s, 3H, N-CH₃), 2,83 (bd, 1H, J₃, ₂,_a = 11,7 Hz, H-3¹), 3,71 (s, 3H, C00CH₃) 4,21 (q, 1H, J₅, ₆, = 6,5 Hz, H-5·), 4,29 (_s, 1H, H-10), 4,38 (s, 1H, OH-9), 5,18 (_s, 13- H-4»), 5,25 (d, 1H, J₇,₈ =2,2 Hz, H-7), 5,52 (d, 1H, J-p ₂, = 3,4 Hz, 3-1·), η

7,29 (s, 2H, H-2 e H-3).

Exemplo 9

7-0-(3’-Ν-Metil- rtz-L-daunosaminil)-<£, -iso-rodomicinona (Composto 9).

Desmetilou-se por fotólise uma solução de 7-0-/^-Ii-rodoaaminil-£-iso-rodomicinona (Composto 2) (62 mg = 0.103 milimole) numa mistura constituída por clorofórmio/metanol (20/1) (310 ml) procedendo de maneira análoga à que se descreveu no Exemplo 8, seguindo-se o avanço da reacção por cromatografia em camada fina. Depois de se ter consumido completamente o composto de partida, eliminou-se o dissolvente em evaporador de rotação e submeteu-se o produto da reacção a purificação repetidas por cromatografia em coluna (10 g de gel de sílica 60 para cromatografia em fase líquida sob alta pressão, 25 - 40 /im, Merck; agente diluente: diclorometano/metanol/água (80/8/1)). Para se eliminar os restos de gel de sílica, extraiu-se o produto sólido purificado várias vezes com clorofórmio e obteve-se a partir das fases clorofórmicas depois de reunidas

Rendimento no Composto 9 indicado em título: 27 mg (não optimizado).

Dados espectroscópioos

Espectro de ressonância magnética nuclear protónica (270 MHz, CDClj): 1,13 (t, 3H, J = 7,3 Hz, C^-14), 1,37 (d, 3H, θ, =» 6,5 Hz, 0H₅-6‘), 2.39 (bs, 3H, N-CH ), 2.81 (bd, 1H,

J₂, ₃, ca. 10 Hz, H-3*), 5-72 (s, 3H, COOCH₅) 4,10 (q, J₅,,θ, = β’,5 Hz, H-5'), 4,28 (s, 1H, H-10), 4,43 (bs, 1H, OH-9),

5,25 (d, 1H, θ = 2,0 Hz, H-7), 5,49 (d, 1H, = 2,5

Hz, H-l’), 7,30’(s, 2H, H-2 e H-3.

pico molar do espectro de massa (Μ + H ⁺ = 588) está em concordância com a massa molecular

Exemplo 10

7-0-(3’-Aoetil-3'-N-metil- -L-daunosaminil)- 6 -iso-rodomioinona (Composto 10)

Isomerizou-se uma solução de 7-0-(4 -0-acetil-3’-Ν-metil- 0J -L-daunosaminil)- -iso-rodomicinona (15 mg = 0,024 milimol) no seio de metanol isento de água em presença de quantidades catalíticas de metilato de sódio de maneira a obter-se o produto de 3’-N-acetil e seguiu-se a reacção por cromatografia em camada fina. Depois de a reacção terminar, neutralizou-se com resina permutadora de iões sob a forma de ácido forte Dowex 50 WX8, filtrou-se e eliminou-se o dissolvente por evaporação em evaporador de rotação_o

Dados espectroscópicos

Espectro de ressonância magnética nuclear protónica (400 MHz, CDClj); 1,13 (t, 3H, J = 7,2 Hz, 0^-14), 1,28 (d, 3H, j θ, = 6,4 Hz, CH₅-6«), 1,47 (m, 1H, H-134) 1,θ4 (m, 1H, H-13 β ), 2,04 (s, 3H, N-CO-CH^), 2,1-2,4 (m, CH₂-8) (s, 3H, N-CH₅), 3,71 (s, 3H, COOCH^), 3,81 (bs, 1H, H-4), 4,17 (q, 1H, H-5'), 4,30 (s, 1H, H-10), 5,24 (bs, 1H, H-7), 5,55 (bs. 1H- H-l’), 7,31 (s, 2H, H-2 e H-3).

Ex.e.fflBj^L.11

7-0- & -L-rodosaminil-£-iso-rodomicinona (Composto 2)_o

Dissolveram-se 30 mg (0,05 milimole) do Composto 6 em 10 ml de metanol. Depois de se adicionar 0.1 ml duma solução aquosa de aldeído fórmico a 37$ e 30 mg de cianoboro-hidreto de sódio, agitou-se a mistura reaccional durante 3 dias. Em seguida evaporou-se até à secura e purifi. cou-se 0 resíduo restante por cromatografia sobre gel de sí- 18 -

lica. Obtiveram-se 34 mg do Composto 2. 0 ensaio de cromatografia em fase líquida sob alta pressão mostrou que este composto era idêntico ao Composto 2 descrito no Exemplo 2₀

Claims

- lê Processo para a preparação de derivados de antraciclina citnstaticamente activos da fórmula geral I na qual

R significa um grupo CHj(CK₂)_n em que n = 0 a 3,

R^ significa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo, %

R significa um átomo de hidrogénio, um grupo metilo ou um grupo acilo de protecção e

Λ

ΈΓ significa um átomo de hidrogénio ou um grupo acilo de protecção e que eventualmente se encontram sob a forma de sal dum ácido inorgânico ou orgânico, caracterizado por

a) se fazer reagir uma antraciclinona da fórmula geral II na qual

R“L tem as significações acima indicadas para a fórmula I, com um derivado funoionalizado da fórmula geral III na qual
2 R significa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo,

R significa um grupo metilo ou um grupo acilo de protecção,

R significa um grupo acilo de protecção e

R significa um grupo acilo de protecção, em presença dum dissolvente orgânico e dum catalisador, eventualmente dum agente oaptador de ácido e dum agente sicativo, a uma temperatura reaccional compreendida entre -70°0 e +30°C, de maneira a obter-se um composto da fórmula geral I em que R e R são diferentes de hidrogénio e eventual mente

b) num produto de reacção obtido na operação a) se desbloquear parcial ou eompletamente os grupos de protecção existentes no segmento de hidrato de carbono por meio duma base inorgânica ou orgânica no seio dum dissolvente e eventualmente se introduzir de novo, de maneira selectiva, um novo grupo acilo de protecção no grupo 4’-hidróxi e/ou 3^r-amino ou 3’-metilamina, e eventualmente

c) num produto da reacção de 3’-lT,N-dimetilamino obtido ou na fase a) ou na fase b) se eliminar um dos grupos metilo ligados ao átomo de azoto por via fotolítioa, em presença dum dissolvente e a uma temperatura reaccional de +10°C até +100°C e eventualmente em seguida de se fazer reagir o derivado de 3’-N-metilamino assim obtido de modo a obter-se um derivado de N-acilo ou um derivado de N-aoilo-O-acilo, e eventualmente

d) num produto da reaoção com o derivado de daunosamina obtido na fase b), se realizar uma N-metilação de maneira a obter-se como produto da reacção um derivado de 3-N-metil-daunosamina ou uma N,U-dimetilação de maneira a obter-se como produto da reacção derivado da rodosamina e eventualmente

e) se transformar um produto obtido nas fases a), b), c) ou d) no respectivo sal dum áoido inorgânico ou orgânico.

I - 2â Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se fazer reagir £ -iso-rodomicinona com l,4-di-0-acetil- &/-L-rodosamina em presença dum dissolvente orgânico, dum catalisador, eventual mente, dum aceitador de ácido e dum agente de secagem e eventualmente se submeter o composto assim obtido à eliminação fotolítica dum grupo metilo, à desacilação e eventualmente a nova acilação e formação de sal.

¢48-¾

- 3* Processo de acordo com a reivindicação

1, caracterizado pelo facto de se fazer reagir £ -iso-rodomicinona com l,4-di-0-acetil-3-N-acetil- Ú^-L-daunosamina em presença dum dissolvente orgânico, dum catalisador, eventualmente dum captador de ácido edura agente de secagem e eventualmente se submeter o composto assim obtido à desacilação e à N-metilação assim oomo eventualmente a nova acilação e/ou à formação de sal.

_ 4§ _

Processo para a preparação de composições farmacêuticas, caracterizado pelo facto de, oomo ingrediente activo, se incorporar um derivado de antraciclina quando obtido de acordo com a reivindicação 1, numa mistura de substâncias veiculares e/ou auxiliares farmacologicamente aceitáveis.

A requerente declara que o primeiro pedido desta patente foi apresentado na República Federal Alemã em 8 de Dezembro de 1986, sob ο η-. P 36 41 835.8.