PT93863A - Processo para a preparacao de novos derivados de rodomicina com eficacia citostatica - Google Patents

Description

Descrição da patente de invenção de BEHRIIGWERKE AKTIEH-GESELISCHAiO}, alemã, industrial e comercial, com sede em D-3550 Marburg, Alemanha Ocidental, (inventores: Dr. Peter Hermentin, Ernest Raab, Dr.Dr.Hans Peter Kralmer e Dr. Jorg Czech, residentes na Alemanha Ocidental), para "PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE IOYOS DERIVADOS DE RODO-MIO IIA COM EIIOAOIA CIlOSlA-IEICA"

Descrição A presente invenção refere-se a novos derivados de antraciclina com eficácia citoestátiea, de fórmula I, e aos seus sais fisiologieamente aceitáveis, ao processo para a sua preparação, bem como à sua utilização como medieamentos. - 1 -

R1 0 OH OH

Para a fórmula I são válidos os si gnificados seguintes: 1 R representa Hidrogénio ou um grupo Hidroxi e R2 representa Ma-(0H2)R-MaRb em que n=0-12, de preferêneia n=0 ©u 2-5, na qual 1 e R podem representar cada um Hidrogénio, alquilo com 1 a 4 átomos de carbono ou Henzilo, ou R2 representa HRa-CHR5-CH2-R4, Λ 2 na qual R tem © significado indicado acima e RJ pode representar Hidrogénio ou um grupo carHoxilo e R4 pode representar o radical de um L-aminoácido ou de uma amina bio-génea, de preferência o radical de um L-aminoácido aromático ou de uma amina biogénia aromática e sendo especial-mente preferido o radical da amina biogénea tiramina, trip-tamina, Histamina, dopamina ou 5-Hidroxidopamina, sendo o Ιι-amino ácido definido por R quando Ry representa earbo-| xilo, e sendo a amina biogénea definida por R quando Rr • representa Hidrogénio. 2

Dos tumores malignos que já não são curáveis por métodos cirúrgicos ou métodos t erapeuticos oom radiações, são aotualmejate curáveis 7 a 10$ por quimioterapia. Em particular os tumores que proliferam rapidamente, como por exemplo a leueémia linfática aguda da criança, o Morbus Hodgkin, os tumores dos testículos e os tumores de Wilm, possuem uma elevada sensibilidade à quimioterapia com taxas de remissão de 60 a 90$.

Além disso pode conseguir-se por quimioterapia, em cerca de 30$ de todos os pacientes com tumores, uma atraso do crescimento do tumor ou uma remissão total ou parcial da doença tumérica. Contudo, apés períodos de tempo variáveis, no caso do prolongamento do tratamento quimioterapeutieo ocorre também uma recidiva do tumor que se torna então frequentemente resistente contra a quimioterapia inicialmente bem sucedida. Esta ohamada "resistência secundária" que surge na quimioterapia limita pois a possibilidade de uma posterior influênciação quimio-terapeutica do tumor* A este grupo de tumores perteneem os tumores da mama e dos ovários, o carcinoma pulmonar de células pequenas, bem como parte dos linfornas.

Muitas doenças malignas, porém, não são influenciadas presentemente pela quimioterapia, ©u são-no apenas de forma marginal, de modo que nestes easos tem que se ter em consideração uma resistência primária do tumor contra as substâncias actualmente conhecidas. Eeste grupo de tumores estão englobados os tumores pulmonares que não pertencem ao grupo de células pequenas, bem como a maior parte dos tumores gastrointestinais. Se se analisar este grupo de tumores primariamente resistenèes sob o aspeto da sua velocidade de proliferação, verifica-se que precisa-mente os tumores dificilmente influenciáveis pela quimioterapia, ou não influenciáveis, possuem uma taxa de proliferação especialmente lenta. 3 -

Assume a maior prioridade a prooura de novas substâncias que sejam eficazes precisamente nos oasos de tumores humanos resistentes primários, cuja proliferação é lenta. Os agentes quimioterapêuticos de futuro tambéa deverão possuir uma resistência cruzada o mais reduzido possível, relativamente às substâncias já conhecidas para serem utilizáveis com espeerança de exito quando se verifique uma resistência secundária contra substâncias já estabelecidas.

Da classe das antraciclinas em particular a doxorbicina (adriamioina), a epirubicina ou a daunomicina possuem eficácia terapeutioa para um grande número de doenças de tumores. Qlodavia, após um tratamento repetido observa-se uma nítida redução da eficácia anti--tumórica até à total perda de aeção devida a uma "resistência secundária" das células do tumor contra as antraciclinas, que se desenvolvem por si próprias.

Io caso da utilização destas antraciclinas conhecidas na terapia de tumores surge um outro problema fundamental, uma vez que estes compostos, além da eficácia citoestática desejável, possuem também acçSes colaterais indesejáveis, como por exemplo uma toxicidade hematológica ou cardial. A eficácia da daunomicina e da adria-micina na t erapeutiea de tumores é atribuída sobretudo à aptidão destas antraciclinas para intercalação no ADI, o que paralisa o cresoimento das células do tumor e conduz à morde das oélulas.

Partindo-se deste estado da técnica, o objeotivo da presente invenção é revelar novos derivados da antraciclina que, na medida do possível, não possuem resistência cruzada rélativamente à adriamioina e que se caraoterizem por um novo espectro de aeção e uma menor

toxicidade em comparação com a adriamioina, e que por conseguinte possam ter aplicação vantajosa na terapia de tumores.

Com esta finalidade foi já proposto s sintetizar rodosaminil-antraciclinonas de fórmula I nas quai 1 2 R tem o significado indicado e I representa hidroxi, alco xi com 1 a 4 átomos de cartono, de cadeia linear ou ramifi- 2 a cada, substituído ou insubstituído, ou IR2 em que R representa hidrogénio ou alquilo oom 1 a 4 átomos de carbono·

Descobriu-se agora os novos derivados de antraoiclina de fórmula I nos quais, relativamente às antraciclinas conhecidas na técnica actual, por variação do 2 2 radical R da forma indicada na definição de R a solubilidade em água e/ou a reaetividade e/ou a toxicidade da antraoiclina é modificada.

Por exemplo, descobriu-se que quando R^ representa em que n é 2 ou 4» a mo lécula da antracielina possui propriedades anfóteras e a sua solubilidade em água é aumentada em relação às antra-cielinas conhecidas na técnica actual. 2

Descobriu-se ainda que quanto R representa M-CHR^R,, em que R^ representa hidrogénio e R representa o radical da amina biogénea histamina, tira-mina e triptamina, a antracielina - além da sua aptidão para intercalação no ADI - pode também reagir oom determinados enzimas, o que modifica a sua reaetividade em comparação com as antracielinas da técnica actual. 0 objecto da invenção são pois os compostos de fórmula I com os significados a seguir indicados.

Significados preferidos: - 5 -

representa 131^-(0¾) -R^j representa HRa-NR®RbIRa-(CB2)2-MaRa, ©u Ma--(0H2)^-MaRb, sendo preferidos os derivados em que Ra e Rb são iguais e representam hidrogénio: representa MRa-CBR5-0H?-R4, * sendo preferidos os compostos nos quais R^ represn-ta hidrogénio; representa o radieal de um I-aminoácido aromático ou de uma amina aromática biogénea; representa o radical da amina b iogénea tiramina, triptamina, histamina, dopamina ou 5-hidroxidopamina 0 processo para a preparação dos novos derivados de antraciclina de férmula I de acordo com a invenção, com eficácia citoestática, eonsistè em se fazer reagir um "composto de férmula I no qual R1 tem o signifi-cado indicado acima e R representa hlcoxi com 1 a 4 átomos de carbono, de cadeia linear ou ramificada, ou benzilo-xi, com um composto de fórmula HRalí-(0HP) -ERaRb, na qual S Td w n, R e R tem os significados mencionados anteriormente, ou com uma amina biogénea ou com um aminoácido, num dissolvente apropriado, por exemplo dimetilformamida ou etanol, a uma temperatura compreendida por exemplo entre 0°C e a temperatura de ebulição do dissolvente, e se isolarem e purificarem os compostos de fórmula I assim obtidos nos quais R tem o significado já indicado e R representa Ma-(0H2)n-ERaRb ou !H-CSR5R4 nas quais n, Ra, Rb, R3 e R4 possuem os significados anteriormente citados. Os novos derivados de antraciclina obtidos de acordo oom o processo da invenção distinguem-se por uma aetividade citoestática e podem pois ser incorporados em medicamentos que tem aplicação na terapia do cancro, * em combinação com os componentes de formulações e/ou diluen • tes farmaceuticamente correntes. As doses e formas dã apli- R, R r

R

R 4

R 4 - 6 - 'Jt £

cação correspondem neste caso esseneialmente às das substâncias já conhecidas adriamicina, daunomicina, aolaoinomi-cina, 4'-epi-adriamicina, 4,-metoxiadriamicina ou 4'-desoxi.. adriamicina.

Os medicamentos preparados desta forma podem oonter ainda adicionalmente outras substâncias activas desde que estas, em combinação com os compostos de acordo.com a invenção, não apresentem acçães colaterais indesejáveis. A eficácia citoestática dos compostos de acordo com a invenção foi ensaiada com base em células de leucemia 11210 do rato. Para isso recorreu-se à formação de colónias de células de leucémia 11210 em placas de agar. Este método serve para comprovação da influência das substâncias ensaiadas sobre o comportamento de crescimento das células ao longo de uma hora ou ao longo de várias geraçães. Para um ciclo celular de 10 a 12 h observam-se no presente caso, no período de ensaio de 7 dias, cerca de 14 geraçães sucessivas. As substâncias eficazes como oito-estáticas de acordo com a invenção causam neste teste uma redução do número de colónias observáveis, relativamente a uma amostra de controle não tratada.

Os pormenores sobre o processo de ensaio empregue são facilmente depreendidas a partir da descrição seguinte da forma de trabalho para determinação da formação de colónias.

Para elucidação do processo de preparação de acordo com a invenção são apresentados os exemplos ]ja 7 adiante nos quais os compostos preferidos de acordo oom a invenção foram preparados segundo o processo reivindicado. 7 -

Caracterização dos compostos de fórmula I A marcha das reacçoes, assim como os compostos resultantes, foram ensaiados cromatograficamente em camadas delgada ou com a técnica HPLC. A cromatografia em camada delgada, quando não se assinalar nada em contrário, foi realizada com placas prontas de sílica-gel (Merck). A cropatografia em coluna foi realizada através de silica-gel 60 (Merck) com granulometria 0,040-0,063 mm. Os rendimentos não estão optimizados.

Para a cromatografia em camada delgada e a cromatografia em coluna foram utilizados as seguin tes misturas diluentes (as indicaçSes referem-se para cada caso em percentagem em volume):

Mistura eluente composição A B e Clorofórmio (fo) 70 89 77 Metanol ($) 18 7,4 14 ácido acético ($) 8.5 3 7 Agua (fo) 3.5 0.6 2 A estrutura dos eompostos preparados foi determinada por meio de espectroseopia ^H-EMW ou espec-troscopia de massa.

Exemplos

Preparação dos compostos de partida:

Preparação do composto de partida de fórmula II no qual representa hidrogénio e R2 representa etoxi: 7-0-(3l-H-etoxicar'bonilmetil-3 ^I-metil- ^-'D-daunosaminil’)-- β -rodomicinona - 8 - ΐ

100 mg (0,189 mneler) de 7-0-(3'-I--metil- θ' -1-daunosaminil)- fô -rodomicinona e 75 μΐ (113 mg= =0,677 mmole=3,58 equivalentes) de bromo acetato de etilo foram submetidos a reaoção na presença de 80 μλ (58 mg = = 0,574 mmole=3,0 equivalentes) de trietilamina analogamente ao exemplo 1, durante 2 iu 1 mistura de produtos foi dissolvida imediatamente num pouco de clorofórmio depois da concentração, foi transferida para uma coluna de sílioa--gel (15 g de sílica gel) humedecida com éter e eluiu-se, para eliminação do excesso de bromoacetato, com cerca de 100 ml de éter. 0 composto pretendido foi eluido em seguida em clorofórmio/etanol (20/1) (Rf 0,32).

Rendimento 70 mg (0,114 mmol) = 60 fo MS-FAB (M+H+) m/e = 616 XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 1.12 (t, 3H, 3^ χΑ - 7.4 Hz,

Me-14), 1.16 (t, 3H, c = 7.1 Hz, Me-ç), 1.40 (d, 3H, J5, 6, = 6.8 Hz, Me-61J \ 1.7-1.9 (m, 4H, CH2-2' e CH2-13), 2.11 (dd, 1H, J7/8a β 4 Hz, J8a,8b “ 15 Hz' H"8a)' 2.26 (d, 1H, J8a = 15 HZ, H-8b), 2.3s'(S, 3H, N~CH3), 2.72 (d, 1H, «^(/oH-lO *= 4 Hz, OH-IO) , 2.82 (m, 1H, H-3 ’) , 3.14 (bs, 1H, OH—41), 3.31 (d, 1H, &l * 17 Hz, H-a), 3.33 (d, 1H, Ja a, - 17 HZ, H-a»), 3.65 (bs, 1H, H-4'), 4,03 (s, 1H, OH-9), 4.08 (m, 3H, CH2-b e ; H-5'), 4.92 (d, m, J10 OH_10 = 4 HZ, H-10), 5.15 (m, 1H, H-7), 5.51 (bd, 1H, 3V' 2t *=2.5 HZ, H-l'), 7.33 (dd, 1H, 3χ2 *= 1 Hz, = 8.4 HZ, H-3), 7.73 (t, 1H, 3χ 2 = J2 3 - 8.4 Hz, H-2), 7.90 (dd, 1H, 3χ 2 *= 8.4 Hz, 3χ 3 *= 1 Hz, H-l) , 12.16 (bs, 1H, OH-4), 12.84'(bs, 1H, OH-6) 13.63 (bs, 1H, OH-11). - 9 -

Exemplo 1: η

Preparação de um composto de fórmula X no qual R representa hidrogénio e R2 representa M-HBUí 7-0-( 31 -U-hidrazinocarbonilmetil-31 -ϋΓ-metil- C* -Ii-dauno-saminil)- β -rodomicinona (composto 1):

Uma solução de 7-0-(3 '-H-etoxicarbonil-metil-3’-Ι-metil- -l-daunosaminil)- β -rodomicinona (134 mg=0,25 mmole) em etanol (36 ml) foi misturada eom hidrato de hidrazina a 100$ (17,5 ^1=18 mg=0,36 mmole= =1,44 equivalentes) e agita-se durante 60 h à temperatura ambiente em total esouridão. Seguidamente ooncentra-se até à secura num evaporador rotativo e a mistura reactiva foi separada através de 16 g de silica-gel eom a mistura eluente A (Rf 0,26). As fraoçães depois de reunidas foram misturadas com água para separação das fases, ajusta-se a solução a pH 7 com soda cáustica a 10$ (p/v) e ajusta-se em seguida a pH 8 por adição de soikução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Separaram-se depois as fases numa ampola de decantação, a fase aquosa foi extraída várias vezes com clorofórmio e a fase orgânica, depois de reunida foi concentrada até à seeura num evaporador rotativo. - 10 -

Rendimento 51 mg (0,085 mmol) = 34$ MS“FAB (M+H+) m/e =602 XH NMR (300 MHZ, CDClj/Dg-DMSO (6/1)) δ 1.10 (t, 3H, J13 14 * 7.4 Hz , Me -14) , 1.35 (d / 3H, J5' /6« " 6 .5 Hz, Me-6 ')/ 1.6-2 .0 (ffl/ 4H, CH2-2 ' e <*2 ,“13) , 2.19 (bs, 2H, CH 2”8> 2.26 (S/ 3H, n-ch3), 2.52 (bd, IH, J2',3' = 10,5 Hz, H-3 3,06 (d, 1H, Ja, mz a· 16.6 Hz, H-a) , 3.19 (d, 1H, a’ - 16.6 Hz, H-a 3.70 (bs, 1H, H-4' ), 3.90 (bs, 1H :, OH-9) 4.06 (<í/ 1H, J5' .6' 6.6 Hz, H-5’ )z 4.84 (s, 1H, H- 10)/ 5.12 (m, 1H, H“7), 5, 48 (bd, 1H, J l',2» 3.2 HZ, H- 1’)/ 7.31 (dd / 1H ' J1 ,3 ~ 1 Hz ' J2, 3 8.4 Hz, H-3), 7 ,72 (t/ 1H, J 1/2 * J 2/3 = 8.3 Hz, H-2) / 7, 87 (dd, !H, J, 2 * 7.7 Hz, J 1/3 = 1 Hz, H-l) , 9.i 03 (s / 1H , Hidrazida-NH) •

Exemplo 2:

Preparação do composto de fórmula I no qual R.^ representa hidrogénio e R representa M-fOSo^-Uffo 7-0-(3ι-υ-6^ΐ6ηοάϊηιη1ηοο3^οηίΐΒΐ6^1--31-N-metil·-.^-L-daunosaminil·)-/3 -rodomioinona (composto 2)t

Uma solução de 7-0-(3'-U-etoxioarbonil-metil)-31-H-metil--L-daunosaminil)- β -rodomioinona (150 mg=0,24 mmole) em dimetilformamida (20 ml) foi misturada oom 1 ml de etilenodiamina e agitou-se 3 h à temperatura ambiente, em total escuridão. Seguidamente concentrou-se até à secura num evaporador rotativo, a mistura reactiva foi separada através de 15 g de sílioa-gel oom a mistura eluente A (Rf 0,15) e as fracçães foram tratadas'analogamente ao exemplo 1. - 11 -

Rendimento 120 mg (0,19 mmole) = 79/° MS-FAB (M+H+) m/e =630 XH NMR (300 MHZ, CDCl^Dg-DMSO (4/1)) δ 1,09 (t, 3H, J13 14 = 7,4 HZ' Me’14)' 1430 (d' 3H' J5',6' " 6*5 HZ# Me-6'), 1.6-1.9 (m, 4H, CH2-2' e CH2-13), 2,19 (bs, 2H, CH2-8) , 2.28 (s, 3H, N-CH3), 2,55 (m, 1H, H-3*·}, 2.84 (¢, 2H, CH2-c), 3.01 (d, 1H, Ja a, = 18 Hz, H-a), 3.15 (d, 1H,

Ja = 18 Hz, H-a’), 3.25 (m, 1H, H-b), 3.38 (m, 1H, H-b'), 3.62 (bS, 1H, H-41), 4.05 (q, 1H, J5,/6. =6,6 Hz, H-51), 4.82 (ε, 1H, H-10), 5.12 (m, 1H, H-7), 5.48 (bd, 1H,

Jlt 2, = 3 HZ, H-l'), 7.32 (dd, 1H, = 1 HZ, J2 3 = 8.4

Hz/h-3), 7.73 (t, 1H, 2 = J2 3 = 8 Hz, H-2), 7.87 (dd, 1H, 2 e 7,5 Hz, Jl,3 = 1 Hz* H-l), 8.06 (t, 1H, = 6 Hz, -CO-NH-).

Exemplo 5;

Preparação de mm composto de fórmula I no qual R1 representa hidrogénio e R2 representa EH-COH^)2-l(CH^)2 7-0_(3«_]S[_(^jjine-|;j-^aBIiBQe-t;iiaBiiflQQarbQRil)-3 '-f-aietil- £&--!--daunosaminil)-β -rodomioinona (composto 3):

Uma solução de 7-0-(3'-U-etoxicarbonil-metil^^U-metil- Ct--L-daunosa mi ni 1) - /3 -rodomicipona (16 mg=0,026 amole) em metanol (8 ml) foi misturada com 100 ul (81 mg=0,92 mmole) de I,R-dimetilaminoetilamina e agitou-se 16 boras à temperatura ambiente em total escuridão . Seguidamente coneentrou-se até à secura num evapo-rador rotativo e secou-se em alto vácuo. A mistura reacti-va foi separada através de 4 g de silica-gel com a mistura A (Rf 0,14) e as fraeçães são tratadas analogamente ao exemplo 1, - 12 -

Rendimento 13 mg (0,020 mmol) = 77$ XH NKR (300 MHZ, CDCl3) S 1-12 (t, 3H, J13/14 = 7.4 Hz' Me-14), 1.30 (d, 3H; J5«f6i = 6·4 Hz' Me"6')' 1*7-2.05 (m, 4H, CH2~2' e CH--13), 2.11 (dd, 1H, J?^ 8a

4 Hz, J 8a, 8b = 15 HZ, H-8a) , 2.25 (d, 1H, J8af8b - 15 Hz, n-W) , z.za (s, 6H, N(CH3)2), 2.31 (S, 3H, N-CH3), 2.51 (m, 3H, CH2-c e ' H-3*), 2.98 (d, 1H, Jaa« β i8 Hz' H“a)' 3 *I9 (m» 1 H-b) , 3.20 (d, 1H, Ja a, = 18 HZ, H-a'), 3.68 (m, 1H, H-b'), 5.04 (q, 1H, ^,#6, = 6.5 Hz, H-5'), 4.10 (s, 1H, OH-9) f 4.91 (S, 1H, H-10), 5.10 (®, 1H, H-7), 5.52 (bd, 1H, j = 3 Hz, H-l1), 7.33 (d, 1H, J2<3 = 8 Hz, H-3), 7.72 (t/lH, J1/2 = J2^3 = 8 Hz, H-2) 7.89 (d, 1H, J1/2 = 7 Hz, H-l), 8.14 (m, 1H, NH).

Exemplo 4

Preparaoão de um composto de fórmula I no qual RJ 2 ta hidrogénio e R representa ΕΒ-(0Ηρ): 7-0-(4'-H-(i-aminobutilaminooarbonll·)^*-N-metil- *2---L·-daunosaminil-/? -rodotnicinona (composto 4): represen-

Uma solução de 7-0-(3'-R-etoxiearbo-nilmetil-3'-U-metil- ^-l-daunosaminil)-43 -rodomicinona (16 mg=0,026 mmole) em acetonitrilo (3 ml) foi misturado com 200 ^ul de 1,4-diaminobutano e agitou-se 3 h à temperatura ambiente na ausência de luz. Seguidamente concentrou-se até h secura num evaporador rotativo, a mistura reactiva foi separada através de 3 g de siliea-gel, com a mistura eluente G· (Rf 0,16) e as fracçSes foram tratadas analogamente ao exemplo 1. Rendimento 11 mg (0,017 mmol) = 65 $ - 13 - MS-FAB (M+H+) m/e - 658

1H NMR (300 MHZ, CDC13/D 6-DHSO (4/1)) S X 0 H • (t ·, 3H, J13,14 7.4 Hz, Me- 14) , 1,32 (d, 3H, J5» ,6* .SE 6. 5 Hz, . Me-6')/ 1.4-1.6 (m, 4H, CH2-c -e ' CH2- d), 1. 6-2 .0 (a, 4H, CH2-2· e CH2-13), 2.17 (bs, 2H, CH2-8), 2. 29 (s , 3H, N-CH3), 2.55 (m, 1H, H-3 '), 2.69 (bt, 2H, Jd ,e - 6.5 Hz, cH2-e), 3.06 (d, 1H, Ja, a, * 17 HZ, H- a), 3. 08 (d , 1H, Ja,a' “ 17 Hz, H-a’) , 3. 20 (bt, 2H, Jh 1 »,c = 6 .5 HZ , CH2-b), 3.71 (bs, 1H, H-4'), 4.06 (q, 1H, J5', 6·" 6. 6 Hz, H-51), 4.82 (s , 1H, H-10), 5.12 <», 1H, H-7) , 5. 48 (bd 9 íh, ^./2» = 3 HZ, H-l'), 7.29 (dd, Jl,3 « 1 Hz, J2 ,3 m , 8.4 Hz, H-3), 7 ,70 (t, 1H, J 1,2 1 * J2.3 “ 8 HZ, H-: 2), 7. 85 (dd, 1H, Jl,2 " 7.5 Hz, Jx 3 - 1 HZ, H-l).

Exemplo 5; 7,0-(31 -i-M3taminoOarbonilmetil-31-I-metil- L-daunosa-minil)- S -rodomicinona (Composto 5)

Uma solução de 7-0.-(3'-H-etoxicarbo-nilmetil-31-H-metil- ^-L-daunosaminil)- 3 -rodomieinona (25 mg=0,04 mmole) em dimetilformamiâa (7 ml) foi misturada oom 20 mg (0,18 mmole) de bistamina e agitou-se 30 li a 50°C- ex total escuridão. Seguidamente concentrou-se até à secura num evaporador rotativo, a mistura reactiva foi separada com a mistura eluente 0 (Rf 0,14) e as fraeções foram tratadas analogamente ao exemplo 1. rendimento 21 mg (0,03 mmole) = 75 # 14 - ♦ ; *

MS-FAB (M+H ) m/e =681 XH NMR (300 MHz, CDCl3) 5 1,13 (t, 3H, J = 7.4 Hz,

Me-14), 1.40 (d, 3H, J5, 6, = 6.5 Hz, Me-6»), 1.6-2.0 (m, e CH2-13), 2.11 (dd, 1H, J?f8a = 4 Hz, J8 4H, CH -2' (S, 3H, n-ch3), 2.30 (bd, 1H, J2 ' ,3 * = 11 HZ, H- 3 ’) , 2.78 (bt, 2H - Jb = 5.6 Hz, CH 2“c) f 2.96 (d , 1H, a' 17 Hz, H-a), 3 .14 (d, 1H, J a, a 1 * 17 HZ / H- a1) , 3.49 (n 1, 2H, CH2-b), 3.73 (S , 1H, H- 4' ) , 4 .10 (q. 1H ' J5',6' = 6.3 Hz, H-51), 4.92 (S, 1H, H-10), 5.16 (m, 1H, H-7), 5. 51 (bd, 1H, Jl*,2» = 3. 5 Hz , H-l 6. 81 (s, 1H, H- d), 7.33 (dd, 1H, JX,3 = 1 HZ - J2 ,3 8.4 HZ , H-3) , 7. 56 (s, 1H, H -e), 7.73 (t, 1H, 2 J2,3 - 8 Hz / H-2) , 7. 89 (dd, 1H, Jl,2 = 7.5

Hz, J = 1 Hz, H-l), 8.57 (bs, 1H, NH).

Exemplo 6; 7-0-(51 -I-metil-3 * -1-tiraminooarhonilmetil- -l-dauno-saminil)- /3- -rodomioinona (Composto 6) A reaoção foi realizada analogamente ao exemplo 5 eom 20 mg (0,032 mmole) de composto de partida e 20 mg (0,15 mmole) de tiramina em dimetilformamida (3 ml), mas agitando-se durante 50 horas a 50-60°C. A purificação foi realizada eom a mistura eluente C (Rf 0,5).

Rendimento 12 mg (0,017 mmole) = 53 <f0 MS-RAB (M+H**) m/e = 707 - 15 -

‘ή NMR (300 ΜΗζ, CDC13/D6-DMS0 (4/1)) S 1.10 (t, 3H, J13 14 = 7.4 Hz, Me-14) , 1.32 (d, 3H, J5, çl = 6,5 Hz, Mè-6'), 1.6-2.0 (m, 4H, CH2-2' und CH2-13), 2.19 (bs, 2H, CH2-8), 2.20 (s, 3H, N-CH3), 2.54 (bd, 1H, J2, 3, = 11 Hz, H-31) , 2.69 (bt, 2H, Jfa = 7 Hz, CH^-c), 3.03 (d, 1H, J , = 17 Hz, H-a), 3.05 (d, 1H, J . = 17 Hz, H-a'), α, a. a ra 3.40 (m, 2H, CH 2-b) , 3 .65 (bs, 1H, H -4' '), 3.89 (bs, 1H, OH-9) , 4. .05 (q/ 1H, J5 • ,6 , = 6. 7 Hz, H- •5'), , 4.85 (s, 1H, H-10) , 5. .12 (m, 1H, H- 7), 5.47 (bd, 1H, - Ji< i 2· = 3 Hz, H-l') , 6· .74 (d, 2H, Jd ,.e = 8.5 Hz, CH2- -d), 6.97 (d, 2H, °d,e = 8, .5 HZ, Cíi2’ e), 7. 32 (dd, 1H, Jl,3 = = 1 J2,3 = 8.4 Hz, H-3), 7.49 (bt, 1H, JNH b = 6 Hz, NH), 7.72 t (1H, Jl 2 = J2 3 = S HZ, H-2), 7.87 (dd, 1H, ^ 2 = 7.5 Hz, ^ 3 = í Hz, H-l).

Exemplo 7 7-0-(31-B-metil-5 ^H-triptaminocarbonilmetil- -L-dauno-saminil)- -rodomioinona (composto 7) A reaoção foi realizada analogamente ao exemplo 5 com 20 mg (0,032 mmole) do composto de partida e 20 mg (0,12 mmole) de triptamina em dimetilformamida (3 ml) sas agitando-se 50 h a 50-60°C. A purificação foi realizada com a mistura eluente G (Rf 0,46), MS-FAB (M+H+) m/e =730 ΧΗ NMR (300 MHz, CDCl3) 6 1.13 (t, 3H, J13 14 = 7.4 Hz, Me-14), 1.23 (d, 3H, J5, g,.= 6.5 Hz, Me-6'), 1,5-2.0 (m, 4H, CH2-2* und CH2-13), 2.12 (dd, 1H, J? ga = 4 Hz, Jga/8b = 15 Hz , H-8a) ,2 .17 (s, 3H, r N-CH3 )r 2 .20 (d - 1H' J8a, r8b = 15 Hz, H-8a'), 2. 48 (m, 1H, H-3'), 2.96 (bt, 2H' Jb,c = 6.5 HZ, CH2 —c) , 3. 46 (bs , 1H , H-4 *), 3 .59 (m, 2H , CH2-b), 3.96 (S, 1H, OH-9), 4. 00 (q, 1H, J5»,6' = 6 .3 Hz, H-51), 4, .93 (s, 1H, H-10), 5. 11 (m, 1H, H-7) , 5.41 (bs, 1H, H-l’), , 7.0 - 16 -

(d, 1H, Jd, NH 2.2 \ HZ, H-d) 00 0 • 1 f'· (dt , 1H) e 7.17 (dt, 1H) (Je ,f = ! Jf, σ *~ J - 7 σ.η HZ, Je ,g ~ Jf,h = 1 Hz, H-f e H-g)r 7 f * .32 (dd, , 1H, ' Jl,3 “ 1 Hz, J 2,3 = 8.4 HZ, H-3), 7.33 (d, 1H, Je f ~ 8.0 Hz, H-e), 7.54 (d, 1H, J g,b = 7.7 Hz, H-íl)/ 7 e/ .72 (t, 1H, Jl,2J2 ,3- 8 Hz, H-2) , 7. 88 (dd, 1H, Jl,2 = 7.5 Hz, Jl/‘ 3 “ 1 HZ' H-l) , 8.29 (t»s, iH, CO-NH).

Citotoxioidade dos compostos de fórmula I oontra células de leucémia 11210 do rato ia vitro 500 células de leucémia por placa foram incubadas com diversas concentrações da substância de ensaio durante 1 hora a 37°G. Seguidamente as células foram lavadas por 2 vezes com ò meio McOoy 5A e finalmente foram colocadas em placas de Petri, depois da adição de 0,3^ de agar. Os controlos foram incubados simplesmente com 0 meio fresco, Bm vez da incubação de 1 h em muitos casos misturaram-se diversas concentrações e substâncias de ensaio à camada superior de agar para se conseguir deste modo uma exposição contínua das células ao longo de todo 0 período de incubação. Depois da solidificação do agar as placas foram incubadas 7 dias a 37°C numa estufa (5f> em volume de GO2, 95$ de humidade relativa do ar). Em seguida contou-se 0 námero de colónias formadas com um diâmetro superior a 60 um. Os resultados foram expressos com ndmero de colónias em placas de agar tratadas, em percentagem dos controlos não tratados. A partir da curva dose--acção assim obtida determinaram-se os valores IO^q oomo medida da eficácia da substância. Os resultados para os compostos aqui descritos, em comparação com a adriamicina, estão indicados no quadro 1. - 17 -

Quadro 1 : oitotoxioidade dos compostos de fórmula I preparados, contra células de leucémia 11210 in vitro

Substância RS R' (exemplo) 1

R incubação incubação prolongada de 1 hora I050(ug/ml) Ι050(οη/φ1) 1 H hh-ih2 0,32 0,21 b c 2 H nh-oh2-oh2-ih2 0,35 1,0 b c 3 H HH-CH2-CH2-I(0H5)2 0,12 0,26 b c d e 4 H 1H-0H2-0H2-0H2-0H2-HH2 0,35 1,3 5 H d b 0 /V // HH HH-OHg-CHo^ I \ Θ 0,31 1,0

OH 0,41 1,3

Claims (1)

1. REIVINDICAÇÃO Processo para a preparação de povos de rivados de antaciclina com eficácia citostática, de fórmula I - R1 0 OH OH

   e dos seus sais fisiologicamente aceitáveis, nos quais 1 R representa hidrogénio ou um grupo hidroxi e 2 R representa NRa-(CH2)n-]ffiaRb em que n=0-12, de preferência com n=0 ou n=2-fj, em que Q h R e R podem representar,cada um, hidrogénio, alquilo com 1 a 4 átomos de carbono ou "benzilo, ou R2 representa HRa-CHR5-CH2-R4' a “5 na qual R tem o significado mencionado acima e R"^ re- - 19 .* -C' presenta hidrogénio ou um grupo carboxilo e R^ pode representar o radical de um L-aminoácido ou de uma amina biogénea, caracterizado por se fazer reagir um composto de fdrmula I, 1 2 na qual R tem o significado referido e R representa alco- xi oom 1 a 4 átomos de carbono, de cadeia linear ou ramificada, ou benziloxi, com um composto de fdrmula HRa-(0H2) Q V na qual n, R , R possuem os signifioados anteriormente indicados, ou com uma amina biogdnea, ou oom um aminoácido, num dissolvente apropriado, de preferência dimetilformamida ou etanol, a uma temperatura compreendida entre 0°0 e o ponto de ebulição do dissolvente, e se isolarem e purifica- 1 rem os compostos de fórmula I assim preparados nos quais R 2 tem o significado indicado e R representa Ma-(0H2)n-IRaR1:) ou IRa-ClR3-GH2-R4' a b 3 4 nas quais n, R , R , R^ e R tem os significados indicados anteriormente. A requerente reivindica a prioridade do pedido alemão apresentado.em 26 de Abril de 1989, sob o ]P P 39 13 742.2. Lisboa, 24 de Abril de 1990 Q-AGEIES OFICIAL BA BBQPBIESABE HBUSTKIAL

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