PT869132E

PT869132E - Compostos esteroides com actividade contraceptiva e anti-osteoporose

Info

Publication number: PT869132E
Application number: PT98200518T
Authority: PT
Inventors: Hubert Jan Jozef Loozen
Original assignee: Akzo Nobel Nv
Priority date: 1997-02-21
Filing date: 1998-02-18
Publication date: 2002-01-30
Also published as: NO980737L; ES2164400T3; ZA981344B; NZ329789A; MX9801428A; RU2182153C2; KR19980071540A; CA2229960A1; CN101092442A; ATE205217T1; CN1197076A; NO310724B1; AU5541298A; EP0869132B1; TW403736B; BR9800718B1; AU723713B2; PL188079B1; JP4392066B2; HK1016188A1

Description

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DESCRICÂO “Compostos esteróides com nctividadc contraccptiva c anti-osteoporose” O presente invento refere-se a uma nova classe de compostos esteróides e, em particular, a um composto esteróide com a fórmula (I)

na qual Fórmula (I) R3 é =0; -OH; =NOR; -OR ou -OOCR, em que R é um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, R4 é H; =CH2 ou -(CH2)mH, sendo m 1 ou 2, em que o composto esteróide pode, opcionalmente, ter uma ou mais ligações duplas escolhidas de entre o grupo de Δ9(10); Δ5(10), Δ4(5), Δ11(12), Δ14(15), ou qualquer um dos anéis A ou B pode ser aromático. A presença ou ausência de átomos de hidrogénio que não foram representados, depende do facto de um determinado anel ser saturado, insaturado ou aromático e é prontamente evidente para 0 perito na arte; R7 é H; alquilo Cm; alcenilo C2-5 ou alcinilo C2-5, em que 0 grupo alquilo, alcenilo ou alcinilo pode estar substituído com 1 a 3 átomos de halogéneo independentemente seleccionados entre 0 grupo de átomos de flúor e de cloro;

Ru é H; alquilo Cm, alcenilo C2-4, alcinilo C2-4 ou alquilideno Cm, em que o grupo alquilo, alcenilo, alcinilo ou alquilideno pode estar substituído com 1 a 3 átomos de halogéneo seleccionados independentemente entre 0 grupo de átomos de flúor ou de cloro, E representa, incluindo os átomos de carbono 16 e 17 do anel D, um anel de quatro a sete membros, estando o referido anel em posição α relativamente ao anel D, substituído com Re e compreendendo, opcionalmente, uma ou duas ligações duplas endocíclicas. A posição a do anel E em face ao anel D é essencial, uma vez que os esteróides

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ΕΡ 0 869 132/PT correspondentes com um anel E na posição β não possuem a actividade biológica necessária. Deve ser referido que, por razões de nomenclatura, alguns compostos de acordo com o invento têm um nome que Inclui unia referência a substituintes 16β e/ou 17β. Contudo, independentemente disto, em todos os compostos do invento, o anel E, como um todo, está em posição a.

Re é H; alquilo Ci_6; alcenilo C2.6; alcinilo C2-6; alquilideno Cj^; espiro-cicloalquilo C2-6 em anel; -OR; -SR; -OOCR; -NHR; -NRR; -NHCOR, em que R (e no caso de Re ser -NRR cada R independentemente do outro) é um alquilo com 1 a 6 átomos de carbono; -NCO; -(CH2)n-N3 ou -(CH2)n-N3-CN, sendo n de 0 a 5, em que o grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, alquilideno ou cicloalquilo pode estar substituído com 1 a 3 substituintes seleccionados independentemente entre 0 grupo consistindo em -OR; -SR; -OOCR; -NHR; -NRR e -NHCOR, sendo R definido como anteriormente, átomos de flúor e átomos de cloro;

Rn é -OH; -OCH2OR; -OR ou -OOCR em que R é um alquilo com 1 a 6 átomos de carbono;

Qualquer grupo alquilo, alcenilo, alcinilo e alquilideno no composto esteróide com a fórmula (I) pode ser ramificado ou não ramificado. Se R3, R6 ou Ru estiver ligado ao esqueleto esteróide, através de uma ligação simples, o átomo de carbono substituído do esqueleto esteróide compreende um átomo de hidrogénio ou está envolvido muna ligação dupla carbono-carbono. Re está ligado ao anel E através de uma ligação simples, o átomo de carbono substituído do anel E também compreende um átomo de hidrogénio.

Verificámos, surpreendentemente, que os compostos esteróides do presente invento têm excelentes e interessantes propriedades estrogénicas e/ou progestagénicas. Devido a estas características específicas, os compostos esteróides do presente invento são muito adequados para a utilização na prevenção ou tratamento de queixas peri-menopáusicas ou pós-menopáusicas, incluindo sintomas climatéricos, tais como afogueamentos e perturbações do humor, queixas urogenitais tais como incontinência, atrofia de pele (e epitélio vaginal) e outros sintomas associados à deficiência em estrogénio ou carência de estrogénio, como osteoporose, aterosclerose e doença de Alzheimer. Os compostos esteróides de acordo com 0 invento são muito adequados à prevenção e tratamento da osteoporose resultante de deficiência em estrogénio.

Além disso, os compostos esteróides do presente invento podem ser utilizados para fins contraceptivos. 3 87 108

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Foram descritos compostos esteróides com uma substituição 16, 17 no anel. Em Chemical Abstracts 89: 215660p (Kamemitskii A.V. et al.) descreve-se um composto esteróide compreendendo um anel de 5 ou 6 membros entre a posição 16 c 17 c um grupo acetilo na posição 17. Os compostos descritos nesta publicação diferem, contudo, dos compostos esteróides de acordo com o presente invento por o átomo de carbono na posição 11 ter um átomo de hidrogénio.

Em Chemical Abstracts 123: 285604t (Wang, J. et al.) descrevem-se compostos esteróides com um anel E de 10 membros, com duas ligações triplas, um grupo hidroxilo na posição 17 e um átomo de hidrogénio na posição 11.

Em EP 411733 (Schering AG) descreve-se um composto esteróide com um anel E de 6 membros, estando o átomo de carbono da posição 17 envolvido numa ligação CO. Os compostos descritos em EP 411733 diferem, contudo, dos compostos esteróides de acordo com o presente invento por o átomo de carbono na posição 11 ter um grupo arilo (substituído). Estes compostos são descritos como antagonistas competitivos da progesterona.

Assim, nenhuma destas referências da arte anterior descreve os compostos esteróides de acordo com o presente invento. Os compostos esteróides de acordo com o presente invento diferem dos descritos no estado da arte pela substituição na posição 11, 16 e 17. Mais em particular, os compostos esteróides de acordo com o presente invento compreendem um anel E, partilhando os átomos de carbono na posição 16 e 17 com anel D de cinco membros e estando em posição α relativamente ao referido anel D. Adicionalmente, o átomo de carbono na posição 17 está substituído com um grupo compreendendo um átomo de oxigénio através de uma ligação CO. O átomo de carbono na posição 11 não tem um grupo arilo.

Para além disso, nenhuma das publicações anteriores sugere as interessantes propriedades farmacêuticas do composto esteróide de acordo com o presente invento. Consequentemente, os compostos esteróides de acordo com o presente invento formam uma nova classe de compostos esteróides, tal como definido pela sua actividade in vitro e in vivo.

Especificamente para a obtenção de actividades selectivas relativamente a estrogénio, nos compostos esteróides de acordo com o presente invento, o anel E é adequadamente um anel de cinco membros. E preferido que o anel E seja um anel de seis membros, tendo em conta os perfis estrogénio/progestogénio favoráveis dos compostos, que incluem tanto estrogénios selectivos, potentes, como compostos mistos estrogénio/progestogénio, potentes. 4 87 108

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De acordo com uma concretização preferida, o anel A é aromático e os restantes anéis são saturados, sendo adicionalmente preferido que R7 seja α-propilo. O composto mais preferido, com o código Org 38515, c caractcrizado adicionalmcntc por R3 e Rn serem OH e Rú, Rn e Re serem H. O presente invento também se refere a uma composição farmacêutica compreendendo o composto esteróide de acordo com o invento misturado com um auxiliar farmaceuticamente aceitável, tal como descrito na referência padrão, Gennaro et al., “Remmington's Pharmaceutical Sciences”, (18a edição, Mack Publishing Company, 1990, ver em particular a Parte 8. “Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture”). A mistura de compostos esteróides de acordo com 0 invento e do auxiliar farmaceuticamente aceitável pode ser comprimida em unidades de dosagem sólidas, como pílulas, comprimidos, ou podem ser processados em cápsulas ou supositórios. Os compostos também podem ser aplicados através de líquidos farmaceuticamente adequados, como uma preparação para injecção na forma de uma solução, suspensão, emulsão ou como um pulverizado, como um pulverizado nasal. Para o fabrico de unidades de dosagem, e.g. comprimidos, está contemplada a utilização de aditivos convencionais, como cargas, corantes, ligantes poliméricos e semelhantes. Em geral, pode ser utilizado qualquer aditivo farmaceuticamente aceitável que não interfira com a função dos compostos activos. Os compostos esteróides do invento também podem ser incluídos num implante, num anel vaginal, num penso, num gel e em qualquer outra preparação para libertação sustida.

Portadores adequados com os quais as composições podem ser administradas incluem lactose, amido, derivados de celulose e semelhantes, ou suas misturas, utilizados em quantidades adequadas.

Para além disso, 0 invento refere-se à utilização do composto esteróide de acordo com o invento para 0 fabrico de um medicamento com actividade de alívio de queixas peri-e/ou pós-menopáusicas, em particular uma actividade anti-osteoporose. Assim, o invento também se refere às indicações médicas de queixas peri- e/ou pós-menopáusicas (climatéricas) e osteoporose, i.e. um método de tratamento no campo da HRT (terapia de substituição de hormonas), compreendendo a administração a um paciente, uma mulher, de um composto tal como descrito anteriormente (numa forma de dosagem farmacêutica, adequada).

Adicionalmente, o invento refere-se à utilização do composto esteróide de acordo com 0 invento para o fabrico de um medicamento com actividade contraceptiva. Deste modo, 0 invento também se refere à indicação médica de oontracepção, i.e. um método de

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ΕΡ 0 869 132/PT contracepção compreendendo a administração a um sujeito, uma mulher ou um animal fêmea, de um composto tal como descrito anteriormente (numa forma de dosagem farmacêutica, adequada).

Finalmente o invento refere-se à utilização do composto esteróide para o fabrico de um medicamento com actividade estrogénica selectiva, sendo esse medicamento geralmente adequado à área da HRT (terapia de substituição de hormonas) A síntese dos esteróides com anel entre as posições 16a, 17a é conseguida geralmente por, em primeiro lugar, a ligação de um fragmento C3 ou C4, adequadamente funcionalizado, na posição α Ci6 do esteróide (para a formação de anéis de 5 ou 6 membros, respectivamente). Para facilitar este processo, a função ceto em 17 é geralmente convertida em primeiro lugar numa dimetil-hidrazona, que é separada por clivagem após a junção da funcionalidade requerida da cadeia lateral. O fecho do anel pode ser realizado por técnicas organometálicas, tais como o tratamento de derivados ω-iodo-alquilo com metais de transição, tais como samário, (no caso de anéis de 5 membros, exemplificado no exemplo I), ou pela formação de derivados de organolítio pela utilização de reagentes como /-butil-lítio (exemplificado para a formação de anéis de 6 membros no exemplo II). Altemativamente, a formação de anéis de cinco membros pode ser realizada através da geração de aniões, por clivagem assistida por flúor, de grupos silício em cadeias laterais ω-sililo, tal como verificado no exemplo III.

Os ω-acetilenos podem, de modo semelhante, actuar como substratos para as reacções de fecho de anel, em reacções mediadas por radicais aniónicos, utilizando elementos como sódio ou lítio como exemplificado no exemplo IV.

Uma abordagem totalmente diferente consiste na formação de anéis com outro anel ligado por aplicação de técnicas de metátese de olefina, utilizando catalisadores derivados de metais de transição, como ruténio, molibdénio ou tungsténio. Para este fim actuam como substratos os esteróides dialcenilados em 16a, 17a. Eles ficam facilmente disponíveis por alquilação de cetonas esteróides em C-16, seguindo-se a introdução de um fragmento alceno através de derivados organometálicos aniónicos (litiatos, etc.). Como um exemplo de uma destas reacções, foi mostrada no exemplo V a formação tanto de anéis de 5 como de 6 membros.

Assim, para além dos anteriores compostos do invento e das várias utilizações destes compostos, o invento também proporciona os métodos de fabrico, anteriores, de esteróides com anel entre 16,17 por geração de um anel adicionado a um esqueleto esteróide, anel esse 6 87 108

ΕΡ 0 869 132 /PT que inclui os átomos de carbono 16 e 17 do referido esqueleto. Estes métodos, que não foram aplicados na arte da química esteróide, permitem o fabrico de uma grande gama de esteróides com anel entre 16,17. E.g. em DE 19709870 (não prc-publicada) é descrito um método que apresenta graves restrições relativamente aos compostos específicos que podem ser sintetizados. O método envolve uma reacção de cicloadição [4+2] de butadieno ou dimetilbutadieno com uma ligação dupla fortemente activada em Ció-n- Isto significa que deve estar sempre presente em C17 um substituinte fortemente atractor de electrões, como -CN ou -acilo, o que limita muito o número de opções. Adicionalmente, o método apenas permite a realização de anéis 6, permite somente um número e variedade limitados de compostos e requer uma estrutura butadieno simétrica, já que o método não tem regiosselectividade. Os métodos do invento não têm estas restrições e permitem a síntese estereosselectiva e regiosselectiva de uma grande variedade de esteróides com anéis de 5 ou 6 membros entre as posições 16,17, tal como descrito anteriormente. Assim, estes métodos constituem uma contribuição inventiva no campo da química dos esteróides. O presente invento será ilustrado pelas Figuras (esquemas) e Exemplos seguintes, sem necessariamente estar restringido às concretizações específicas aqui descritas.

Figuras (Esquemas 1

Esquema 1: representação esquemática de um processo (2-13) de síntese de dois compostos esteróides (12 e 13) de acordo com 0 presente invento, tal como descrito no Exemplo I.

Esquema 2: representação esquemática de um processo (14-21) de síntese de três compostos esteróides (19, 20 e 21) de acordo com o presente invento, tal como descrito no Exemplo II.

Esquema 3: representação esquemática de um processo (22-33) de síntese de dois compostos esteróides (30 e 33) de acordo com o presente invento tal como descrito no Exemplo ΠΙ.

Esquema 4: representação esquemática de um processo (34-39) de síntese de um composto esteróide (39) de acordo com 0 presente invento tal como descrito no Exemplo IV.

Esquema 5: representação esquemática de um processo (40-44) de síntese de um composto esteróide (44) de acordo com 0 presente invento, tal como descrito no Exemplo V. 7 87 108

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Esquema 6: representação esquemática de um processo (40-47) de síntese de um composto esteróide (47) de acordo com o presente invento tal como descrito no Exemplo VI.

Os números entre parêntesis referem-se à fórmula estrutural correspondente dos compostos representados no esquema.

Exemplo I

Embora o substrato 1 requerido possa ser facilmente sintetizado por desidrogenação de esteróides em C6C7, de acordo com métodos da literatura (e.g. por utilização de cloranilo ou DDQ) foi desenvolvido um novo método que permite, também, a utilização como substratos de uma variedade de esteróides 17a-etinil, 17p-hidroxi, para se ter acesso aos esteróides ceto em 17 adequados. Eles podem ser desetinilados por tratamento com carbonato de cobre precipitado em Celite. Embora tenha sido descrita uma conversão semelhante na literatura utilizando carbonato de prata, o método descrito presentemente tem a vantagem de utilizar um reagente muito mais barato. Foi preparada uma carga de Q1CO3 em Celite como segue. Foram purificados 100 g de Celite por agitação, durante 15 minutos, numa mistura de 500 ml de metanol e de 100 ml de HCI 6N. A mistura foi filtrada e lavada várias vezes com água até estar neutra. O material assim obtido foi transformado numa lama numa solução de 60 g de Cu(N03)2.3H20 em 400 ml de água. A isto foi depois adicionada gota a gota, com agitação eficiente, uma solução de 30 g de Na2CC>3.H2C> em 200 ml de água. Após agitação durante 15 minutos adicionais, 0 material foi filtrado e lavado com água (de modo a remover a maior parte da água antes da secagem, 0 material foi transformado em lama com acetona, foi filtrado e lavado, subsequentemente com pentano). A secagem foi fmalmente realizada in vácuo durante a noite, a 80°, para originar 160 g de reagente.

Foram suspensos 4 g de (17P)-17-hidroxipregna-4,6-dien-20-in-3-ona e 20 g de CuCCh-Celite em 100 ml de tolueno. A mistura foi mantida em refluxo durante cerca de 6 horas com um aparelho de Dean-Stark para a remoção de alguma água residual. O progresso da reacção foi monitorizado por CCF. Após conclusão da reacção, a mistura reaccional foi filtrada sobre Celite. O filtrado foi concentrado e 0 resíduo tratado com éter isopropílico-hexano para originar 2,4 g de pregna-4,6-dien-20-in-3,17-diona, p.f. 182-184. A redução deste boro-hidreto de sódio originou o álcool 17β requerido, que por acetilação com anidrido acético, originou o substrato 1 requerido. Γ

87 108 ΕΡ 0 869 132/ΡΤ (7-alfa. 17-betaV 17-( acetiloxi V7-propilestr-4-en-3 -ona (21

Uma solução de propil-lítio (preparada a partir de 1,4 g de Li e dc 9 ml dc brometo dc propilo em 60 ml de éter, a -20°C) foi adicionada, a -40°C, a 7,6 g de Cul em 60 ml de THF seco.

Após agitação durante 0,5 horas adicionais, foi adicionada gota a gota, a -40°C, uma solução de 5,2 g de (17-beta)-17-(acetiloxi)estra-4,6-dien-3-ona (1) em 20 ml de THF. Após agitação durante 15 minutos adicionais, a reacção estava completa e a mistura foi vertida em 300 ml de solução saturada de NH4CI, seguindo-se extraeção com acetato de etilo. O material orgânico, isolado após lavagem, secagem e evaporação do solvente, foi retomado em 30 ml de THF e agitado na presença de 3 ml de H2SO4 6N para isomerização de algum isómero Δ5,6 a isómero Δ4,5. Após 1 hora, a mistura foi neutralizada com solução saturada de NaHCCb e extractada com acetato de etilo. A cromatografia em sílica-gel do produto em bruto (heptano/acetato de etilo 8/2) originou 2,1 g de 2, p.f. 97-100°C. 17-acetato de (7-alfa,17-beta')-7-propilestra-1.3.5U0')-trieno-3.17-diol (31 A uma solução de 15 g de 2 em 300 ml de acetonitrilo foram adicionados 12 g de CuBr2. A mistura foi agitada durante 20 horas, monitorizando a reacção por CCF (as placas de CCF foram compradas a Merck AG, Alemanha). A reacção foi então vertida em água e extractada com acetato de etilo. A cromatografia do produto em bruto numa coluna curta de sílica-gel (heptano/acetato de etilo 4/1 como eluente) proporcionou 13,5 g de 3 como um material branco, amorfo. Rf 0,57 (heptano/acetato de etilo 7/3).

Acetato de (7-alfa. 17-beta)-3-metoxi-7-nropilestra-1.3.5Π Oí-trien- 17-ol (4) A uma solução de 13,5 g de 3 em 60 ml de DMF foram adicionados, em porções, 2,4 g de NaH (dispersão a 60% em óleo mineral). Após agitação durante 1 hora, a libertação de hidrogénio tinha terminado. Seguidamente, foram adicionados, gota a gota, 3 ml de iodeto de metilo. Após uma hora de agitação à temperatura ambiente, a mistura reaccional foi vertida em 300 ml de água e o produto foi extractado com acetato de etilo. O resíduo que permaneceu após evaporação dos voláteis foi retomado em 20 ml de THF e foi introduzida uma solução de 4 g de NaOH em 80 ml de CH3OH. Após agitação durante 1 hora a saponificação estava completa. A mistura reaccional foi neutralizada por adição de H2SO4 IN, e o produto foi extractado com acetato de etilo, para proporcionar 11,5 g de 4, Rf 0,34 (heptano/acetato de etilo 7/3). 9 87 108

ΕΡ 0 869 132/PT (7-alfaV 3-metoxi-7-propilestra-1 -3.5Π 01-trien-17-ona (5) A uma solução de 10,4 g de 3-0-mctil-7a-propilcstradiol 4 cm 50 ml de cloreto de metileno foram adicionados, subsequentemente, 15 g de acetato de sódio em pó, 30 g de sílica-gel e 32 g de clorocromato de piridínio. Após agitação durante 1 hora a oxidação estava completa. O reagente em excesso foi destruído por adição de 1 ml de isopropanol, seguindo-se, 10 minutos mais tarde, 150 ml de hexano. Todos os precipitados foram filtrados sobre Celite e o filtrado foi concentrado até à secura. Isto proporcionou 9,6 g de cetona 5 essencialmente pura, Rf 0,54 (heptano/acetato de etilo 7/3).

Dimetil-hidrazona de ('7-alfa~)-3-metoxi-7-propilestra-1.3.5('10~)-trien-17-ona 161 A uma solução de 11,2 g de 7a-propil-3-0-metilestrona 5 em 60 ml de tolueno, foram adicionados 6 ml de dimetil-hidrazina e 0,5 ml de ácido trifluoroacético. A mistura foi mantida em refluxo durante 1,5 horas. Após arrefecimento até à temperatura ambiente a mistura reaccional foi neutralizada com NaHCOj a 5% e a camada orgânica foi lavada várias vezes com água e foi seca sobre sulfato de sódio. Após concentração e cromatografia, permaneceram 11,4 g da hidrazona 6 como um óleo, Rf 0,30 (heptano/acetato de etilo 7/3).

Dimetil-hidrazona de f7-alfa.l6-alfa(Sll-16-r3 ITdimetilí 1.1 -dimetiletillsililloxil- 2-metilpropill-3-metoxi-7-propilestr-1.3.5(,10')trien-17-ona('7~) A uma solução de 2,6 g de 6 em 30 ml de THF seco foram adicionados, a -40°C, 5,6 ml de BuLi (solução 1,5N em hexano). Após agitação a esta temperatura durante 0,5 hr foram introduzidos 2,7 g de éter (2R)-2-metil-3-iodopropanol-0-/er/.butildimetilsilílico (TBDMS) em 5 ml de THF. Após agitação durante uma hora adicional a -20°C, a mistura reaccional foi vertida em água e extractada. A cromatografia subsequente originou 4,6 g de 7; Rf 0,50 (heptano/acetato de etilo 7/3 0,50).

Dimetil-hidrazona de f7-alfa.l6-alfafSll- 16-(3-hidroxi-2-metilpropilV3-metoxi- 7-propilestra-1.3.5(101trien-17-ona /81

Uma solução de 4,6 g de 7 em 5 ml de THF foi tratada com 15 ml de TBAF 1M em THF, durante 1 hora, a 50°C. A mistura foi diluída com 100 ml de água e extractada com acetato de etilo. Depois de o produto passar através de uma coluna curta de sílica-gel foram obtidos 3,1 g de 8 como um óleo; Rf 0,18 (heptano/acetato de etilo 7/3). 10 87 108

ΕΡ 0 869 132/PT í7-alfa.l6-alfafS)l-16-r2-metil-3T[Y4-metilfeniDsulfoninoxilpropilT7-propilestra- 1.3.5/1 OVtrien Π-οπα/ΙΟ')

Uma solução de 2,8 g de 9 em 7 ml de piridina foi tratada a 0°C com 2,6 g de cloreto de tosilo. Após agitação durante 2 horas, o reagente em excesso foi decomposto por agitação com gelo durante 0,5 horas. O produto foi extractado com acetato de etilo e purificado por cromatografia, para proporcionar 3,2 g de 10 como um óleo incolor; Rf 0,35 (heptano/acetato de etilo 7/3). r7-alfa.l6-alfa/S)l-16-/3-hidroxi-2-metilpropiD-3-metoxi-7-propilestra- 1.3.5/10)trien-17-ona /91

Uma mistura de 3,1 g de 8 em 30 ml de acetona e 3 ml de água foi tratada com 3 g de resina amberlist-15 ácida (Fluka AG) durante 2 horas, a 55°C. Seguidamente, a mistura reaccional foi filtrada e concentrada para proporcionar 2,8 g de 9 como um óleo; Rf 0,75 (heptano/acetona 1/1). r7-alfa.l6-alfa/SYl-16-/3-iodo-2-metilpropiP-7-propilestra-1.3.5/10~)trien-17-ona /111

Uma mistura de 3,2 g de 10 e de 10 g de iodeto de sódio, em 30 ml de acetona, foi aquecida a 65°C durante 1 hora. Depois de a reacção ter sido vertida em água e extractada com acetato de etilo foram obtidos 2,9 g de iodeto Π; Rf 0,55 (heptano/acetato de etilo 7/3). /4,S.7-alfa.l6-beta.l7-betaV3.4’.5’.16-tetra-hidro-3-metoxi-4’-metil-7-propil-17H- ciclopentari6.171estra-1.3.5/101-trien-17-ol (121

Foi preparada uma solução de SmU a partir de 3 g de samário metálico e de 4,7 g de di-l,2-iodoetano em 70 ml de THF seco. A esta solução foram adicionados a 0°C 20 mg de tris(dibenzoílmetanato)ferro, seguindo-se uma solução de 2,8 g de 11 em 10 ml de THF. Após agitação durante uma hora adicional, a mistura foi vertida em água, acidificada com H2SO4 2N e extractada com éter. O produto em bruto assim obtido foi submetido a cromatografia para a remoção de algum isómero 16,17-beta e proporcionou 1,6 g de 12; Rf 0,32 (heptano/acetato de etilo 7/3). O isómero beta relacionado tem um valor Rf de 0,37. 11 87 108

ΕΡ 0 869 132 /PT f4’S.7-alfa.l6-beta.l7-betaf-3’.4’.5’.16-tetra-hidro-4’-metil-7-propil-17H-ciclopenta- ri6.171estra-1.3.5(10Vtrien-3.17-diol (131 A uma solução de 700 mg de 12 em 5 ml de tolueno foram adicionados 15 ml de DIBAL (1M em tolueno). A mistura foi mantida em refluxo durante 3 horas para se realizar a clivagem do éter. O reagente em excesso foi destruído por adição de água, seguindo-se por diluição adicional com 40 ml de HCI 2N. O produto foi extractado com acetato de etilo. Após secagem e concentração, o resíduo foi triturado com éter di-isopropílico, para originar 460 mg de 13 cristalino; P.f. 166-168°C; Rf 0,36 (heptano/acetato de etilo 7/3).

Exemplo II

Dimetil-hidrazona de ('7-alfa.l6-alfal-16-r4-rrdimetil('l.l-dimetiletillsililloxilbutill- 3-metoxi-7-propilestra-1.3.5(10Vtrien-17-ona (Ί4Ί A uma solução de 3,9 g da hidrazona 6 em 45 ml de THF seco foram adicionados a -60°C 8,5 ml de solução de BuLi 1,5N em hexano. Após agitação durante 0,5 horas, foi adicionada gota a gota uma solução de 4,2 g do éter 4-iodobutanol-TBDMS com 5 ml de THF. A mistura foi agitada, subsequentemente, a -20°C durante 1 hora e depois foi vertida em 200 ml de água e extractada com acetato de etilo. A purificação cromatográfica em sílica-gel proporcionou 6,2 g de 14 como um óleo, Rf 0,52 (heptano/acetato de etilo 7/3).

Dimetil-hidrazona de (7-alfa, 16-alfal-16-(4-hidroxibutilV3-metoxi-7-propilestra- 1.3.5-(101-trien-17-ona (151

Uma solução de 6 g de 14 em 5 ml de THF foi tratada, durante 2 horas, com 20 ml de fluoreto de tetrabutilamónio 1M em THF A reacção foi vertida em água e extractada com acetato de etilo. Após cromatografia permaneceram 4,1 g de 15 como um óleo, Rf 0,17 (heptano/acetato de etilo 7/3). (7-alfa. 16-alfaV 16-(4-hidroxibutilT3-metoxi-7-propilestra-1.3.5(1 Ol-trien-l 7-ona (161

Uma mistura consistindo em 4 g de 15, 40 ml de acetona, 4 ml de água e 4 g de resina ácida Amberlyst-15 foi agitada durante 2 horas a 50°C. A mistura foi filtrada, concentrada, retomada em 40 ml de tolueno, seca e concentrada, para proporcionar 3,7 g de 16 essencialmente puro; Rf 0,61 (heptano/acetona 1/1); material de partida Rf 0,65. 12 87 108

ΕΡ 0 869 132/PT í7-alfa,16-alfaM6í4-rr(4-metilfemBsulfoml1oxi1butil1-7-propilestra-1.3.5(10Vtrien- 17-ona (17)

Uma mistura de 3,7 g de 16 e de 3,2 g de cloreto de tosilo em 10 ml de piridina seca foi agitada, a 0-5°C, durante 3 horas. Após diluição com água o produto foi extractado com acetato de etilo. A purificação cromatográfica originou 4,6 g do tosilato 17, Rf 0,45 (heptano/acetato de etilo 7/3) 0,45. (7-alfa. 17-alfaV 16-f 4-iodobutilV3 -metoxi-7-propilestra-1.3.5 U OVtrien-17-ona /181

Uma mistura de 4,6 g de 17 e de 20 g de iodeto de sódio, em 50 ml de acetona, foi aquecida a 60°C durante 1,5 horas. A mistura reaccional foi concentrada, diluída com água e extractada com tolueno. Após secagem e concentração permaneceram 4,4 g do iodeto 18 como material essencialmente puro, Rf 0,50 (heptano/acetato de etilo 7/3).

(7-alfa.l6-alfa.l7-alfa)-3-metoxi-7-propil-16.24-ciclo-19.21-dinorcola-1.3.5('10V trien-17-ol (19)

Uma solução de 3,8 g do iodeto 18 em 20 ml de THF seco foi tratada, a -60°C, com 9 ml de uma solução de /er/.butil-lítio 1,7 M em heptano. Após agitação durante 15 minutos adicionais a -60°C, a mistura foi vertida em água e extractada com acetato de etilo. O produto em bruto obtido após a remoção dos voláteis foi triturado com heptano, para proporcionar 1,9 g de 19 essencialmente puro, p.f,161-162°C; Rf 0,40 (heptano/acetato de etilo 7/3). (7-alfa. 16-alfa, 17-alfaV 17-hidroxi-7-propil-16.24-ciclo-19.21 -dinorcol-4-en-3-ona 121) A uma solução de 1 g de lítio em 90 ml de amónia líquida foi adicionada, a -33°C, uma solução de 1,3 g de 19 em 30 ml de THF seco. Após agitação em amónia em refluxo durante 4 horas adicionais, a reacção foi tratada com 20 ml de etanol seguindo-se evaporação da amónia sob uma corrente estável de azoto. O resíduo foi diluído com 50 ml de água e extractado com acetato de etilo. A concentração da fase orgânica, seguida de trituração do resíduo com heptano, originou 1,1 g do intermediário dienol-éter puro, p.f. 190-192°C.

Este material foi dissolvido em 25 ml de THF e foi tratado com 5 ml de H2SO4 6N. Após agitação durante 6 horas, a mistura foi neutralizada com Na2C03 e o produto extractado com acetato de etilo. A purificação cromatográfica do material em bruto assim obtido deu 610 mg de 21 como uma espuma branca; Rf 0,25 (heptano/acetato de etilo 7/3). 13 87 108

ΕΡ 0 869 132 /PT í7-alfa.l6-alfa.l7-alfa>17-propil-16.24-ciclo-19.21-dinorcola-1.3.5fl0Vtrien- 3.17-diol /20) A uma solução de 600 mg de 19 em 5 ml de tolueno seco foram adicionados 12 ml de DIBAH 1M (hidreto de di-isobutilalumínio) em tolueno. Após 2 horas de refluxo a desmetilação estava completa; o reagente em excesso foi destruído por adição cuidadosa de água e, subsequentemente, a mistura foi vertida em 50 ml de ácido clorídrico 4N e o produto extractado com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca, concentrada, e o resíduo foi tratado com éter di-isopropílico, para proporcionar 310 mg de 20, p.f. 240°C; Rf 0,20 (heptano/acetato de etilo 7/3). F.xemplo 1Π (1.2-etanodiiDacetal 3-cíclico de fll-beta.l6-alfa)-ll-metil-16-f2-r(trimetilsilillmetill- prop-2-enill estr-5-eno-3.17 -diona (23) A uma solução de 12,7 ml de hexametil-disilazano, em 50 ml de THF, foram adicionados, a -50°C, 40 ml de BuLi 1,5M em solução em heptano. Após agitação durante 20 minutos foi adicionada lentamente, a -50°C, uma solução de 16,5 g de 22 em 100 ml de THF. Após agitação durante um adicional de 0,5 horas, foi introduzida uma solução de 25 g de 3-iodo-2-trimetilsililmetilpropeno em 25 ml de THF. A mistura reaccional foi agitada a -20°C durante 3 horas adicionais, e depois foi vertida em 400 ml de água. O produto foi extractado com acetato de etilo e submetido a cromatografia em sílica-gel. Após trituração com heptano foram obtidos 12,5 g do produto 23; P.f. 184-185°C; Rf 0,55 (heptano/acetato de etilo 7/3). ('1.2-etanodiillacetal 3-cíclico de n i-beta.l6-beta.l7-betaí-4’.5’.16.17-tetra-hidro- 17-hidroxi-11 -metil-4 ’ -metileno-3 ’H-ciclopentar 16.171estra-5.16-dien-3-ona (24)

Uma solução de 8,8 g de 23 em 200 ml de THF seco foi tratada com 4 ml de fluoreto de tetra-butilamónio 1M (TBAF) em THF. A mistura foi mantida em refluxo durante 15 minutos para completar a reacção de fecho do anel. Foi então adicionada uma quantidade adicional de 15 ml de solução de TBAF 1M, e o refluxo foi prolongado durante 1 hora de modo a clivar o éter 17-O-silílico formado durante a reacção. A mistura foi subsequentemente concentrada a um pequeno volume e diluída com água, seguindo-se extracção com acetato de etilo. A purificação cromatográfica proporcionou 4,0 g de 24; P.f. 141-142°C, Rf 0,28 (heptano/acetato de etilo 7/3). 14 87 108

ΕΡ 0 869 132/PT n.2-etanodiiDacetal 3-cíclico de í4;S.ll-beta.l6-beta.l7-betaV4’.5’.16.17-tetra-hidro-17-hidroxi-4’-niidroximetil)-ll-metil-3’H-ciclopentaíl6.171estra-5.16-dien-3-ona (25) e seu análouo 4'R (26)

Foi preparada uma solução de bora-biciclo-nonano (9-BBN) a partir de 3 ml de complexo de borano-dimetilsulfureto 10M e 4 ml de 1,5-ciclo-octadieno em 30 ml de THF seco. A isto foi adicionada uma solução de 3,8 g de 24 em 10 ml de THF. A mistura foi agitada durante 2 horas e, depois, o reagente em excesso foi destruído por adição cuidadosa de 1 ml de etanol, seguindo-se 20 ml de solução 2N de NaOH e 10 ml de H2O2 a 30%. Esta mistura foi agitada durante mais 3 horas, depois foi diluída adicionalmente com água e extractada com acetato de etilo. O produto em bruto foi submetido a cromatografia em sílica-gel (tolueno/acetona como eluente) para proporcionar 2,1 g de 25. (P.f. 178°C, Rf 0,47 (tolueno/acetato 1/1)) e 1,2 g de 26. (Rf 0,55 (tolueno/acetato 1/1)). ('1.2-etanodiiriacetal 3-cíclico de Í4’R. 11 -beta. 16-beta, 17-betai-4’.5 ’.16.17-tetra-hidro-17-hidroxi-11 -metil-4r[T('4-metilfenil')sulfonilloxilmetill-3’H-ciclopentar 16.171estra-5.16-dien-3-ona (31)

Uma solução de 1,2 g de 26 e 0,8 g de cloreto de tosilo em 5 ml de piridina foi agitada a 0-5°C durante 2 horas. Seguidamente, a mistura foi diluída com gelo-água, agitada durante 15 minutos e extractada com acetato de etilo. A secagem e concentração da fase orgânica originaram 1,6 g de 31 essencialmente puro; Rf 0,52 (tolueno/acetato de etilo 7/3). ('4’R.ll-beta.l6-beta.l7-betaV4’-butil-4’.5’.16.17-tetra-hidro-17-hidroxi-ll-metil-3’H-ciclopentari6.171estra-5.16-dien-3-ona (321

Foi preparado um reagente cuprato por adição de 12 ml de uma solução 2M de brometo de propil-magnésio/éter a 2,3 g de Cul, em 20 ml de THF, a -20°C. Após agitação durante 15 minutos foi adicionada uma solução de 600 mg de 31 em 3 ml de THF. A agitação foi continuada durante mais 2 horas, a -20°C. A reacção foi processada por adição de 60 ml de NH4CI e 10 ml de amónia a 10%, seguindo-se extracção com acetato de etilo. O produto em bruto foi submetido a cromatografia para proporcionar 420 mg de 32; P.f. 97-98°C. Rf0,45 (hexano/acetato de etilo 7/3).

87 108 ΕΡ 0 869 132 /PT 15

(4’R.ll-beta.l6-beta.l7-betaV4’-butil-4’.5,.16.17-tetra-hidro-17-hidroxi-ll-metil- 3’H-ciclopentari6.171estra-4.16-dien-3-ona (331

Uma solução de 400 mg de 32 em 5 ml de acetona foi tratada com 2 ml de H2SO4 4N. Após 2 horas à temperatura ambiente, a mistura foi diluída com água e extractada com acetato de etilo. A purificação cromatográfica originou 360 mg de 33 essencialmente puro como um material amorfo; Rf 0,27 (heptano/acetato de etilo 7/3). /1.2-etanodiiDacetal 3-cíclico de /4’S.l l-beta.l6-beta.l7-beta~)-4’.5’.16.17-tetra-hidro- 4’-/hidroximetiD-ll-metil-17-r/trimetilsiliiyioxi1-3’H-ciclopentaU6.171estra-5.16- dien-3-ona (27) A protecção da função 17-OH foi realizada num procedimento em passos múltiplos. Primeiro, o álcool primário foi acetilado. Assim, a uma solução de 750 mg de 25, em 2 ml de piridina, foram adicionados 5 mg de 4-dimetilaminopiridina (DMAP), seguindo-se 0,5 ml de anidrido acético. Após agitação durante 1 hora foram adicionados 10 g de gelo-água, seguindo-se extracção do produto com acetato de etilo. A concentração do material orgânico e o tratamento do resíduo com heptano-éter di-isopropílico rendeu 730 mg do mono-acetato; P.f. 112°C.

Este material foi dissolvido em 3 ml de DMF contendo 200 mg de imidazolo. Seguidamente, foram adicionados 240 μΐ de cloreto de TMS e a mistura foi agitada durante 0,5 horas à temperatura ambiente. Após adição de 15 ml de água, o produto foi extractado com éter. Por secagem e concentração foram obtidos 900 mg de derivado de éter silílico, essencialmente puro, Rf 0,54 (hetano/acetato de etilo 7/3).

Este produto foi dissolvido em 3 ml de THF seco e foram adicionados 70 mg de LÍAIH4. Após agitação durante 10 minutos a mistura foi tratada, subsequentemente, com 0,3 ml de água, 0,1 ml de NaOH 2N e 1 g de NaSC>4. Depois, foi filtrada através de Celite e concentrada para proporcionar 700 mg de 27 como um material amorfo; Rf 0,29 (heptano/acetato de etilo 7/3). /4’S.l 1 -heta.16-beta.17-betaV3.3-r 1.2-etanodiilbis(oxiíl-4’.5 16.17-tetra-hidro-l 1 --metil-17-f(trimeti1silir)oxil-3’H-ciclopentari6.171estra-5.16-dien-4’-carboxaldeído /28) A uma solução de 600 mg de 27 em 15 ml de cloreto de metileno foram adicionados 1,5 g de acetato de sódio anidro, 2,5 g de sílica-gel, seguindo-se 2 g de clorocromato de piridínio. A mistura foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. Depois foram 16 87 108

ΕΡ0 869 132/PT adicionados 50 ml de éter e após agitação adicional durante 15 minutos a reacção foi filtrada através de Celite, seguindo-se evaporação dos voláteis, para proporcionar 420 mg de carboxaldcído 28 csscncialmcntc puro; com o repouso, solidificou lcntamcntc um composto; Rf 0,48 (heptano/acetato de etilo 7/3). ('1.2-etanodiil~)acetal 3-cíclico de (4’S.ll-beta.l6-beta.l7-betaV4’-etenil-4’.5’. 16.17- -tetra-hidro-11 -metil-17- lYtrimetilsiliDoxil^ ’H-ciclopentar 16.171estra-5,16-dien-3- ona(29) A 1,3 g de cloreto metil-trifenilfosfónio em 25 ml de THF foram adicionados 1,7 ml de BuLi 1,5 M, em solução em hexano, a -40°C. Após agitação durante 30 minutos foram adicionados 400 mg de 28 em 2 ml de THF. A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente em cerca de 0,5 horas e depois foi extinta, vertendo-a em 100 ml de água. O produto foi extractado com éter dietílico e, subsequentemente, foi submetido a cromatografia para proporcionar 280 mg de 29 como um óleo, Rf 0,53 (heptano/acetato de etilo 7/3); material de partida Rf 0,23. (4’ S. 11 -beta. 16-beta. 17 -betal-4 ’ -etenil-4 ’ .5 ’. 16.17-tetra-hidro-11 -metil-17-hidroxi- 3’H-ciclopentari6,171estra-4,16-dien-3-ona (301

Uma solução de 260 mg de 29 numa mistura de 3 ml de THF e de 3 ml de H2SO4 4N foi agitada durante 2 horas, a 45°C. Seguidamente, a reacção foi neutralizada com solução de NaHCC>3 a 5% e 0 produto extractado com acetato de etilo. A cromatografia em sílica-gel em percurso curto proporcionou 150 mg de 30; Rf 0,25 (heptano/acetato de etilo 7/3).

Exemplo IV 3-ΓΓ(1.1 -dimetiletilldimetilsililloxilestra-1.3.5íl0)-trien-17-ona, dimetil-hidrazona (35) A uma solução de 15,5 g de dimetil-hidrazona de 3-hidroxiestra-l,3,5(10)-trien-17-ona (34) em 200 ml de DMF, foram adicionados 13 g de imidazolo, seguindo-se adição gota a gota de 15 g de TBDMSC1 em 20 ml de éter. Após agitação durante 16 horas adicionais, a mistura reaccional foi vertida em 2 litros de água e a mistura resultante foi agitada durante 10 minutos adicionais. O precipitado foi filtrado e seco in vácuo, para proporcionar 20 g de 35, P.f. 100-103°C. 17 87 108

ΕΡ 0 869 132/PT

Dimetil-hidrazona de (16-alfaV 3-ΓIY1.1 -dimetiletindimetilsililloxil-l 6-(4-butiniD- estra-1.3.5n0)-trien-17-ona Í36) A alquilação do esteróide foi realizada com o anião gerado primeiro a partir de 4-bromo-l-butino. O método foi o seguinte. Uma solução de 11,9 g de 35 em 100 ml de THF foi tratada, a -20°C, com 20 ml de uma solução de BuLi 1,5M em hexano. Após agitação durante 1 hora, a -20°C, a mistura reaccional foi arrefecida a -70°C. Foi adicionada gota a gota uma solução fria do anião de 4-bromo-l-butino (preparada por adição de 36 ml de BuLi a 7,7 g de 4-bromo-l-butino em 50 ml de THF, a -78°C) e a mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente. A mistura foi depois agitada durante 1 hora adicional e então foi vertida em 300 ml de NH4CI aquoso a 10%. O produto foi extractado com acetato de etilo. Após cromatografia, foram obtidos 9,5 g de 36 como um óleo, Rf 0,85 (tolueno/acetato de etilo 6/4). (16-alfa)-3-lTÍ 1.1 -dimetiletiDdimetilsililloxil-16-(4-butiniPestra-1,3,5(1 OVtrien-17- ona (37) A uma solução de 9 g de 36 em 100 ml de THF e 70 ml de tampão de acetato 1M (pH 4,5) foram adicionados 15 g de ácido periódico em 40 ml de etanol. A mistura foi agitada durante 24 horas. Depois foram adicionados 500 ml de água e o produto foi extractado com acetato de etilo. A cromatografia do material em bruto assim obtido originou 4,2 g de 37. (16-alfa, 17-alfa)-3 -ΓΓ (1.1 -dimetiletiDdimetilsililloxil-16.23-ciclo-19.24-dinorcola- 1.3.5(10).20-tetraen-17-ol (381

Foi preparada uma solução de naftaleneto de lítio a partir de 3,4 g de naftaleno e 150 mg de aparas de lítio em 30 ml de THF seco. Esta solução foi adicionada gota a gota a uma solução de 560 mg de 37 em 5 ml de THF, até que se mantivesse uma cor verde escuro na mistura reaccional. Após agitação durante 10 minutos adicionais, a mistura reaccional foi vertida em 30 ml de NH4CI e o produto foi extractado com acetato de etilo. A purificação cromatográfica proporcionou 150 mg de 38 cristalino. (16-alfa. 17-alfaVl 6.23-ciclo-19.24-dinorcola-l ,3.51101.20-tetraeno-17-diol (39

Uma solução de 130 mg de 35 em 5 ml de HCI a 5% em metanol foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi então tratada com 3 ml de piridina, 18 87 108

ΕΡ 0 869 132/PT foi concentrada e diluída com 10 ml de água. O produto foi extractado com acetato de etilo e, finalmente, purificado por cromatografia para proporcionar 65 mg de 39; P.f. 203-205°C.

Exemnlo V 3.3- dimetilacetal de í7a.l6aV7-metil-16-(prop-2-enilíestr-5n0)-eno-3.17-diona (411

Foi preparada uma solução de di-isopropilamideto de lítio a partir de 16,6 ml de butil-lítio 1,5M em hexano e de 3,85 ml de diisopropilamina em 35 ml de THF, a -20°C. Após agitação durante 20 minutos, foi adicionada uma solução de 8,3 g do esteróide 40 em 30 ml de THF, e a mistura foi agitada durante 20 minutos a -20°. Seguidamente, após arrefecimento a -40°, foram adicionados 2,2 ml de brometo de alilo e então a agitação foi prosseguida durante 4 horas adicionais, a -20°, período após o qual a monitorização por CCF mostrou a conclusão da reacção. A mistura foi extinta por adição de 200 ml de solução de NaHCC>3 a 5%, seguindo-se extracção com acetato de etilo. A cromatografia em sílica-gel (hexano-acetato de etilo a 5% como eluente) proporcionou 7,2 g de 41 como um sólido branco; P.f. 85-86°C. 3.3- dimetilacetal de f7a.l6a.l7BV7-metil-16.17-bis(prop-2-enilV17-hidroxi-estr- -5(10V3-ona(42í A uma solução de 15 ml de brometo de alilmagnésio 1 M em 30 ml de THF, foi adicionada a -40° uma solução de 4,5 g de 41 em 30 ml de THF. Após agitação durante 30 minutos a esta temperatura, a mistura foi vertida em 250 ml de solução de NH4CI a 10% e foi extractada com acetato de etilo. O produto assim obtido foi submetido a cromatografia para originar 3,2 g de do derivado 16a,17a-dialilo 42 como um material branco amorfo. 3.3- dimetilacetal de Γ7α. 16α. 17aV7-metil-17-hidroxi-16,24-ciclo-19.21 -dinorcola- -5(10).22-dien-3-ona (431 A uma solução de 1,3 g de 42 em 30 ml de dicloreto de metileno foram adicionados 200 mg de dicloreto de bis(triciclo-hexilfosfino)benzilideno-ruténio. A reacção foi agitada ató estar completa. O solvente foi removido parcialmente por concentração e o material residual foi submetido a cromatografia em coluna de sílica-gel para originar 1,1 g de 43 como um material branco, amorfo; Rf = 0,38 (heptano/acetato de etilo 7/3 v/v). 19 87 108

ΕΡ 0 869 132/PT (7α. 16α. 17a)-7-metil-17 -hidroxi-16.24-ciclo-19.21 -diporcola-4.22-dien-3-ona (44)

Uma solução de 1 g de 43 em 30 ml de acetona foi tratada com 5 ml de HCI 2N. Após agitação durante 2 horas à temperatura ambiente a reacção estava completa. Após neutralização com uma solução de NaHC03 a 5% a mistura foi extractada com acetato de etilo e o produto foi passado através de uma coluna curta de sílica-gel. O produto assim obtido foi tratado com éter di-isopropílico, para proporcionar 0,65 g de 44; P.f. 130-131°C; Rf (heptano/acetato de etilo 7/3) 0,14.

Exemplo VI 3.3- dimetilacetal de (7a.l6a.l7aV7-metil-16-(prop-2-eniU-17-hidroxi-pregna- -5(Ί01.20-άΪ6η-3-οη8 (451

Foi preparada uma solução de vinil-lítio por adição de 0,8 ml de uma solução 1,6M de butil-lítio em hexano a 0,32 ml de viniltributilestanho em 3 ml de THF, a -50°C. Após agitação durante 20 minutos foi adicionada, gota a gota, uma solução de 300 mg de 41 em 2 ml de THF. Após agitação durante 15 minutos adicionais, a mistura foi extinta por adição de 20 ml de uma solução de NH4CI a 10%, seguindo-se extracção do produto com acetato de etilo. A purificação cromatográfica subsequente proporcionou 120 mg de 45 como um material amorfo, Rf 0,56 (heptano/acetato de etilo 7/3 v/v).

3.3- dimetilacetal de ('7a.l6B.17BV16.17-di-hidro-17-hidroxi-5’H-ciclopentari6.17T estra-5 í 101.16-dien-3-ona (461 A uma solução de 120 mg de 45 em 4 ml de dicloreto de metileno foram adicionados 30 mg de dicloreto de bis(triciclo-hexilfosfino)benzilideno-ruténio. Após agitação durante 2 horas, a mistura foi concentrada e filtrada através de uma coluna de sílica-gel, para proporcionar 80 mg de 46, Rf 0,40 (heptano/acetato de etilo 7/3 v/v). (7α. 16B, 17BV7-metil-l 6.17-di-hidro-17-hidroxi-5 Ή-ciclopentar 16.171estra-4.16- dien-3-ona Γ47)

Uma solução de 80 mg de 46 em 2 ml de acetona foi tratada com 0,2 ml de HCI 2N. Após agitação durante 2 horas à temperatura ambiente a mistura reaccional foi neutralizada por adição de NaHCC>3 e foi diluída com água. O produto foi extractado com acetato de etilo e passado através de uma coluna curta de sílica, para proporcionar 45 mg de 47; P.f 175-176°C; Rf 0,49 (heptano/acetato de etilo 1/1 v/v). 87 108

ΕΡ0 869 132/PT 20

Esquema I

OAc

4

HO

13

12

21 87 108 ΕΡ 0 869 132 /PT

Esquema II

23 87 108 ΕΡ 0 869 132 /PT

Esquema IV

24 87 108 ΕΡ 0 869 132/PT

Esauema V

44

25 87 108 ΕΡ 0 869 132 /PT

Esauema VI

47 26 87 108

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Exemplo VII

Teste de prevenção de oerda óssea induzida por ovariectomia em ratazanas (teste anti-osteoporose)

Introdução A ovariectomia induz, em ratazanas, perda óssea que é devida a deficiência em estrogénio. A administração de compostos estrogénicos previnem este efeito. O teste é utilizado para a avaliação de um composto quanto a actividade anti-osteoporose em ratazanas submetidas a ovariectomia. O efeito sobre a massa óssea pode ser avaliado por medição por Tomografia Quantitativa Computorizada periférica (pQCT) da densidade óssea trabecular.

Teste animal

Ratazanas Wistar, maduras, fêmeas, virgens, preferivelmente com 225-250 g de peso. Estirpe: Hsd/Cpd Wu, linha SPF de Harlan, CPB, Zeist, Holanda.

Experiência

No dia 1 da experiência, as ratazanas foram pesadas e distribuídas em gaiolas por ordem de peso corporal. A ratazana com o menor peso corporal na primeira gaiola e a ratazana mais pesada na última gaiola. Os tratamentos das ratazanas em cada bloco foi tomado aleatório. Um bloco (grupo 3 + n tratamentos) consiste em 1 ratazana placebo intacta, 1 ratazana OVX placebo, 1 ratazana OVX de referência e 1 ratazana para cada n tratamentos. A operação simulada e a ovariectomia foram realizadas sob anestesia com éter. Após recuperação da anestesia, nas 24 horas seguintes, é administrado uma ou duas vezes por dia durante 4 semanas o veículo, o composto de referência ou composto de teste.

Medição por pQCT da densidade mineral óssea A densidade mineral óssea trabecular (mg/cm3) da metáfise do fémur foi medida por pQCT (máquina de Tomografia Quantitativa Computorizada periférica, XCT 960A, Stratec, Birkenfeld, Alemanha) directamente após autópsia em tecido fresco. Foram feitos dois 27 87 108

EPO 869 132/PT varrimentos de 360° que tinham, devido ao feixe de raios X, uma espessura padrão de 1 mm. Os varrimentos tinham uma resolução de 0,148 x 0,148 mm. Um dos varrimentos foi feito a 5,5 mm da extremidade distai do fémur, onde foi medida a densidade mineral óssea trabecular da mstáfise. O outro varrimento foi feito na diáfise a 13,5 mm da extremidade distai, que não tem osso trabecular. No último varrimento, foram determinados a densidade mineral cortical óssea e os parâmetros geométricos, tais como espessura cortical, área óssea total, os diâmetros externo e interno. A variação intra e inter-ensaio para a medição da densidade mineral óssea trabecular no fémur distai foi de cerca de 2-3%. O XCT-960A foi calibrado com um padrão de hidroxi-apatite embutido em plástico acrílico.

Interpretação dos resultados A ovariectomia provoca uma diminuição estatisticamente significativa na densidade mineral óssea trabecular (P<0,05, 2 ANOVA de duas vias). Os compostos de teste são considerados activos quando os valores médios da densidade mineral óssea do fémur distai aumentam significativamente quando comparados com os do grupo de controlo submetido a ovariectomia. A dose activa (ED5o) é a dose à qual é atingida uma diferença proporcional média na densidade mineral óssea trabecular entre 40 a 60% quando comparada com o grupo da operação simulada e o que foi submetido a ovariectomia.

Referências - Wronski T. J. e Yen C.F.. “The ovariectomised rat as an animal model for postmenopausal bone loss”, Cells and Materials, Supp. 1 (1991) 69-76. - Yamazaki I. e Yamaguchi H.: “Characteristics of an ovariectomised osteopenic rat model”, J. BoneMin. Res. 4(1989) 12-22. - Ederveen A.G.H., Spanjers C.P.M., Quaijtaal J.H.M. e Kloosterboer H.J.: “Effect of treatment with tibolone (Org OD 14) or 17a-ethinyl estradiol on bone mass, bone tumover and biochemical quality of cortical and trabecular bone in mature ovariectomised rats”, Osteoporisis Int., no prelo, 1998. 28 87 108

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Exemplo ΥΠΙ

Teste in vitro para ligacao a recepior A afinidade relativa de ligação a receptor de progesterona dos compostos do invento foi medida para receptores citoplasmáticos de progesterona presentes em células tumorais da mama humana (células MCF-7, tempo de incubação 16 horas, temperatura 4°C) e comparada com a afinidade da (16a)-16-etil-21-hidroxi-19-norpregn-4-eno-3,20-diona (de acordo com o procedimento descrito por E.W. Bergink et al., J. Steroid Biochem., Vol. 19, 1563-1570 (1983)). A afinidade relativa de ligação ao receptor de estradiol foi medida do modo descrito anteriormente, mas utilizando 17p-estradiol como uma referência.

Teste in vivo para actividade estrogénica A actividade estrogénica in vivo foi determinada por meios do teste bem conhecido de Allen Doisy, descrito em F. Allen, L.A. Doisy, J. Amer. Med. Assoe., 81, 819-821 (1923).

Teste in vivo para actividade progestagénica A actividade progestagénica in vivo foi determinada por meio do teste bem conhecido de McPhail, descrito em McPhail, M.K. “The assay of progestin”, Journal of Physiology, 1934, 83 145-156. Vários dos compostos de acordo com os Exemplos I-VI, bem como outros compostos de acordo com o invento sintetizados de modo análogo, foram submetidos aos testes descritos nos Exemplos VII e VIII. Os resultados são descritos na Tabela, na qual são indicados o tipo de anel A e a substituição nos átomos de carbono n° 7, 11 e 17. Nas colunas com os títulos E e P, são indicadas as afinidades relativas da ligação para receptores de estrogénio e de progesterona; os resultados de ED50 dos testes de Allen Doisy e de McPhail são indicados em pg/Kg. Na coluna com o título “Osteoporose” são indicados os resultados de ED5o do teste anti-osteoporose (dose em pg/íCg, dia, tal como descrito anteriormente). 87 108

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Tabela

Representam-se as afinidades relativas de ligação ao receptor Estradiol (E) ou Progesterona (P) humanos, e as actividades hormonais in vivo (ED50) por administração oral

Anel-A 7a 11β 16α, 17a Código E (%) P (%) Allen Doisy (pg/kg) McPhail (Pg/kg) Osteoporose (Pg/kg,dia) ΔΊ=5 H H Anel 5+4’S-metilo 38541 58 >500 125 >1000 Δ4=5 H H Anel 5+4’S-propilo 37977 151 >4000 500 >1000 Δ4=5 H H Anel 6 37518 115 >4000 125 >2000 Δ4=5 H Metilo Anel 5+4’R-butilo 38276 115 >500 125 >1000 Δ4=5 H Metilo Anel 5+4’S azidometilo 38322 44 >500 63 >1000 Δ4=5 H Etilo Anel 6 37943 96 192 1000 400 Δ4=5 H Etilo Anel 5+4’S-etilo 38610 03 32 >125 125 Δ4=5 H Etilo Anel 5+4’S-propilo 38577 139 192 >500 250 Δ4=5 Metilo H Anel 5 37352 36 1000 250 500 Δ4=5 Propilo H Anel 5+4’R-metilo 38550 36 125 >125 125 Δ4=5 Metilo H Anel 5+4”S-metilo 38049 250 >2000 1000 >1000 Δ5=10 Metilo H Anel 5 37351 4 4000 2000 1000 Δ5=10 H Etilo Anel 5+4’R-propilo 38151 8 125 >1000 ND Δ5=10 H H Anel 6 37516 13 >4000 1000 >2000 Aromático H H Anel 6 37469 1 23 >4000 >2000 >4000 Aromático H H Anel 5+4’R-propilo 37968 1 6 >1000 >4000 ND Aromático H H Anel 5+4’S-propilo 37969 3 25 >1000 4000 >1000 Aromático H Etilo Anel 6 37862 96 2 32 ND <16 Aromático Metilo H Anel 5+4’S-metilo 37893 38 11 500 >4000 500 Aromático Metilo H Anel 5 |3+4’S-propilo 38079 <1 1 >4000 ND ND Aromático Metilo H Anel 6 37828 11 10 192 - 500 Aromático Propilo H Anel 5+4’R-metilo 38514 11 4 24 >2000 <32 Aromático Propilo H Anel 5+4’S-metilo 38481 23 6 64 >4000 125 Aromático Propilo H Anel 6 38515 16 10 96 4000 190 Aromático Propilo H Anel 5 |i+4’R-metilo 38513 0,2 - 2000 >125 ND NC = Não competitivo. ND = Não determinado. yiif.

Lisboa,

Por AKZO NOBEL N.V. - O AGENTE OFICIAL -

Eng.° ANTÓNIO JOÃO DA CUNHA FERREIRA

Ag. Of. Pr. Ind·

Rua daa Flores, 74-4·,' 1200-1ΘΒ LISBOA

Claims

87 108 ΕΡ 0 869 132/PT 1/3 REIVINDICAÇÕES 1. Composto esteróide com a fórmula

na qual -R3 é =0; -OH; =NOR, -OR ou -OOCR em que R é um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono; - R$ é H; =CH2 ou -(CH2)mH sendo m 1 ou 2 - R7 é H, alquilo Cm; alcenilo C2-5 ou alcinilo C2-5, em que o grupo alquilo, alcenilo ou alcinilo podem estar substituído com 1 a 3 átomos de halogéneo seleccionados independentemente entre 0 grupo consistindo em átomos de flúor e cloro, -Ru é H; alquilo Cm, alcenilo C2-4, alcinilo C2-4 ou alquilideno Cm, em que 0 grupo alquilo, alcenilo, alcinilo ou alquilideno pode estar substituído com 1 a 3 átomos de halogéneo seleccionados independentemente entre 0 grupo consistindo em átomos de flúor e cloro, -E representa, em conjunto com os átomos de carbono 16 e 17 do anel D, um anel de quatro a sete membros, estando 0 referido anel posicionado a relativamente ao anel D, substituído com Rg e compreendendo, opcionalmente, uma ou duas ligações duplas, endocíclicas. -Re é H; alquilo Cm, alcenilo C2-6, alcinilo C2.6, alquilideno Cm, espiro-cicloaqluilo C2-6 em anel; -OR, -SR, -OOCR; -NHR; -NRR; -NHCOR, em que R (e no caso em que Re é -NRR cada R independente do outro), é um alquilo com 1 a 6 átomos de carbono; -NCO, -(CH2)n-N3 ou -(CH2)n-CN sendo n 0 a 5, em que 0 grupo alquilo, alcenilo, alcinilo, alquilideno ou ciclo-alquilo pode estar substituído com 1 a 3 substituintes seleccionados independentemente entre o grupo consistindo em -OR, -SR, -OOCR; -NHR, -NRR e -NHCOR, sendo R definido como anteriormente, átomos de flúor ou átomos de cloro. 87 108 ΕΡ 0 869 132/PT - Rn é -OH; -OCH2OR, -OR ou -OOCR em que R é um alquilo com 1 a 6 átomos de carbono; em que o composto esteróide pode, opcionalmente, ter uma ou mais ligações duplas escolhidas entre o grupo de Δ9(10), Δ5(10), 44(5), Δ11(12), Δ14(15); ou quaisquer dos anéis A ou B pode ser aromático.
2. Composto esteróide de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por o anel E ser um anel de seis membros.
3. Composto esteróide de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado por o anel A ser aromático e os restantes anéis serem saturados.
4. Composto esteróide de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por R7 ser α-propilo, o anel E ser um anel de seis membros, R3 e Rn serem OH e R<5, R11 e Re ser H.
5. Composição farmacêutica compreendendo o composto esteróide de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores e um auxiliar farmaceuticamente aceitável.
6. Utilização de um composto esteróide de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4 para o fabrico de um medicamento para a prevenção ou tratamento de queixas peri-menopáusicas ou pós-menopáusicas.
7. Utilização de acordo com a reivindicação 7, caracterizado por a queixa ser a osteoporose.
8. Utilização de um composto esteróide de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4 para o fabrico de um medicamento com actividade contraceptiva.
9. Processo de preparação de um esteróide com anel entre as posições 16,17 de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4, caracterizado por se utilizar um esteróide ceto em 17 com a fórmula

87 108 ΕΡ 0 869 132/PT 3/3 na qual os grupos substituintes têm o significado descrito nas reivindicações anteriores e se ligar ao átomo de carbono 16, i.e. adjacente à porção ceto em 17, uma cadeia alquilo, substituída ou não, adequadamente funcionalizada de modo a ser obtida uma porção ω-iodoalquilo, e se promover o fecho do anel da porção ω-iodoalquilo por tratamento com um reagente organometálico.
10. Processo de preparação de um esteróide com anel entre as posições 16,17, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4, caracterizado por se utilizar um esteróide ceto em 17 com a fórmula O R*

na qual os grupos substituintes têm o significado descrito nas reivindicações anteriores, e se ligar a cada um dos átomos de carbono 16 e 17 uma cadeia alcenilo, substituída ou não, e se promover o fecho do anel através de metátese olefínica, utilizando um catalisador derivado de um metal de transição. Lisboa, Por AKZO NOBEL N.V. - O AGENTE OFICIAL -

Eng." ANTÓNIO JOÃO DA CUNHA FERREIRA Ag. Of. Pr. Ind. Rua das Flores, 74-4.° 1200-195 LISBOA