PT86350B - Processo para a preparacao de compostos macrolidos e de composicoes parasiticidas que os contem - Google Patents

Description

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PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS MACROLIDOS E DE COMPOSIÇÕES PARASITICIDAS QUE OS

CONTÊM

Memória Descritiva

Antecedentes da invenção

A presente invenção descreve a preparação de uma série de novos compostos macrolidos. Estes novos compostos possuem uma apreciável actividade acaricida, insecticida e anti-helmíntica, que se refere a seguir como actividades parasiticidas. A presente invenção descreve também processos para a preparação de composições parasiticidas contendo os n£ vos compostos macrolidos e os respectivos métodos de utilização ,

Os novos compostos, descritos na presente invenção, são macrolidos relacionados quimicamente com milbemici^ nas, avermectinas e compostos similares já conhecidos.

Há várias classes de compostos conhecidos com uma estrutura baseada num núcleo macrolido com 16 átomos. Obtém-se por fermentação de vários microorganismos ou por processos semi-sintéticos, por meio da derivatização química de produtos resultantes da fermentação natural e exibem propriedades acaricidas, insecticidas e anti-helmínticas e outras actividades anti-parasitárias. As milbemicinas e as avermectinas são exemplos dessas classes de compostos conhecidos, mas

existem várias outras classes que se identificam por diferentes nomes ou números de código. Os nomes destes vários compo_s tos macrolidos formam-se, geralmente, a partir dos nomes ou números de código dos microorganismos que produzem os membros de cada classe que ocorrem naturalmente e esses nomes têm sido alargados de modo a cobrirem os derivados químicos da mesma classe, o que teve como consequência não existir uma nomenclatura sistemática normalizada para a designação desses compostos .

Para evitar confusães, na presente invenção far-se-á referência aos nomes baseados num composto principal hipotético, representado pela fórmula

(A)

Para evitar duvidas, a formula A mostra também a numeração de alguns átomos de carbono mais importantes pa

ra os compostos da presente invenção. 0 grupo metilo na posição 4 foi numerado como 0-26.

As milbemicinas, produzidas naturalmente, formam uma série de compostos. As milbemicinas e A^, entre outras, estão descritas na patente de invenção americana n?. 3 95θ 36o e a milbemicina D está descrita na patente de invenção americana nS. 4346171, onde vem referida como ⁿcompo_s to B-41D”, Estes compostos podem ter a fórmula A, atrás referida, na qual a posição 25 é substituída, respectivamente por um grupo metilo, etilo ou isopropilo. A milbemicina análoga, substituída na posição 25 por um sec.-butilo. foi descrita na patente de invenção americana nS. 4 173 571»

Tem-se preparado e feito investigações relativamente às milbemicinas originais. Por exemplo, as patentes de invenção americanas n2.s 4 201 861, 4 206 205, 4 173 571, 4 171 314, 4 203 976, 4 289 760, 4 457 920, 4 579 864 e 4 547 491, as especificações das patentes europeias n?. 8184, 102 721, 115 930, 142 969, 180 539 e 184 989 e os pedidos de patentes japonesas da Kokai, com os nS.s 57-120589 e 59-16894, descrevem milbemicinas esterifiçadas na posição S.

A patente de invenção norte-americana nS.

423 209 descreve derivados da 13-hidroxi-5-cetomilbemicina. A patente de invenção americana n?. 4 547 520 e a especificação da patente europeia n2. 203 832 descrevem derivados da 5-oxima de milbemicina. A memória da patente de invenção britânica nS. 2 168 345 descreve derivados de milbemicina com um grupo carboxi ou um substituinte do grupo carboxi esterifica-

do, na posição 13, em combinação com um grupo hidroxi ou um substituinte esterifiçado do grupo hidroxi na posição 5·

Tal como as milbemicinas, as avermectinas baseiam-se no mesmo composto comportando um núcleo macrolido com 16 átomos. As avermectinas estão descritas, por exemplo, no J. Antimicrob. Agents Chemother.; 1979(15); 1979; P.3&1 e no ”J. Am. Chem. Soe.”; 103; 1981; p. 4216. Estes compostos têm a fórmula A, mas com a posição 13 substituída por um grupo 4’-( o(-L-oleandrosil)-o(-L-oleandrosiloxi. A posição 25 pode ser substituída por um grupo isopropilo ou um grupo sec-butilo e tem ainda uma dupla ligação carbono-carbono entre as posições 22 e 23 ou tem um grupo hidroxi na posição 23.

As avermectinas definem-se do seguinte modo:

avermectina ^C22“^C23

Ala	dl	sec-Bu	H	OMe
Alb	dl	i-Pr	H	OMe
A2a	ls	sec-Bu	OH	OMe
A2b	ls	i-Pr	OH	OMe
B^a	dl	sec-Bu	H	OH
Bxb	dl	i-Pr	H	OH
B2a	ls	sec-Bu	OH	OH
B„b	ls	i-Pr	OH	OH

No quadro anterior, símbolo R representa um substituinte na posição 25;

símbolo R representa um

- 5 substituinte na posição 23; e o símbolo R representa um substituinte na posição 5í dl” indica uma ligação dupla entre as posições 22 e 23, e ”ls” indica uma ligação simples entre as posições 22 e 23.

Os derivados de avermectina com um grupo cetona na posição 23 designados por A^a, A^b, Bga e B^b conhecem -se da patente de invenção americana n2. 4 289 7Ó0. Os derivados de avermectina com um grupo di-hidro nas posições 22 e 23 podem obter-se por redução da dupla ligação entre as posições 22 e 23 e estão descritos na patente de invenção americana 4 199 569· Os derivados de agliconas das avermectinas, que são análogos da milbemicina, têm sido algumas vezes referidos na literatura como compostos de C-O76 e conhecem-se vários deri vados. Por exemplo, a patente de invenção norte-americana n?.

201 861 descreve esses derivados substituídos na posição 13 por um grupo alcanoílo inferior.

A memória da patente europeia n2. 7½ 57θ des. creve compostos de avermectina substituídos na posição 4 pelo grupo metilo. Descreve a conversão do grupo metilo da posição 4 num grupo hidroximetilo, assim como a formação de vários derivados de oximetilo tais como acetiloximetilo, benzoiloximetilo e outros compostos de carboniloximetilo.

A memória da patente de invenção europeia n?. I70 006 descreve uma família de compostos bioactivos produzidos por fermentação, identificados colectivamente pelo nú mero de código LL-F28249. Alguns destes compostos têm uma estrutura de macrolido com 16 átomos no núcleo, correspondente

a fórmula A citada anteriormente, com uma substituição na posição 23 por um grupo hidroxi e uma substituição na posição 25 por um grupo 1-metil-l-propenilo, 1-metil-l-butenilo ou 1,3-dimetil-l-butenilo. Nestes compostos, o grupo hidroxi da posição 5 pode ser também substituído por um grupo metoxi.

Os mesmos compostos ou similares, identificados como S-541 são conhecidos da memória da patente de invenção britânica n?. 2 166 436. Os derivados substituídos por um grupo cetona na posição 23 e os derivados substituídos, na posição 23, por um grupo desoxi, dos compostos designados por S-541, são conhecidos da patente de invenção belga n9. 904 709· Os derivados designados por S-541 com uma dupla ligação entre as posições 22 e 23 estão descritos na memória da patente de invenção europeia n2. 215 654. Os derivados dos compostos S-541 substituídos na posição 26 por um grupo hidroxi ou alcanoíloxi C^-C^ ou substituídos na posição 23 por um grupo cetona ou por um grupo desoxi estão descritos na memória da patente de invenção americana n$. 237 341.

A memória da patente de invenção britânica nS. 2 176 182 descreve outro grupo de antibióticos macrolidos de fórmula A, com um grupo hidroxi ou ura grupo hidroxi substí. tuído na posição 5, um grupo hidroxi ou um grupo hidroxi subs tituído ou ainda um grupo cetona na posição 23 e um grupo alcenilo -ramificado na posição 25.

Um outro grupo de derivados de macrolidos está descrito no pedido de patente japonesa da Kokai com o n?, 62-29590· Estes derivados têm a fórmula A, com um grupo

- 7 ί ·* hidroxi ou metoxi na posição 5. A posição 13 do núcleo pode ser substituída por um grupo 4’-( 0( -L-oleandrosil) - 0( -L-olean drosiloxi, tal como nas avermectinas e pode existir uma dupla ligação carbono-carbono entre as posições 22 e 23 ou, alternativamente, a posição 23 pode ser substituída por um grupo hidroxi. 0 substituinte na posição 25 é de um tipo não encontrado nas milbemicinas e nas avermectinas produzidas naturalmente e inclui vários grupos alquilo, alcenilo, alcinilo, alcoxialquilo, alquiltioalquilo ¢(-ramificados e cicloalquilalquilo ou grupos cicloalcenilo, cicloalquilo ou grupos heterocíclicos.

Este substituinte introduz-se na posição 25 por adição do correspondente ácido carboxílico ou de um seu derivado, ao caldo de fermentação de um microorganismo produtor de avermectina.

As várias classes de compostos macrolidos relacionados com a milbemicina descritos antes, têm todos um ou mais tipos de actividade como antibiótico, anti-helmíntico, ectoparasiticida, acaricida ou outra actividade como agente pesticida. Contudo, há ainda uma necessidade crescente de pr£ parar compostos com uma actividade diversificada contra uma ou mais classes de parasitas.

Objectivos da presente invenção objectivo da presente invenção é preparar compostos macrolidos com uma actividade parasiticida diversificada. È ainda objectivo da presente invenção a preparação de composições parasiticidas que contêm os referidos compostos.

Resumo da presente invenção

Descobriu-se agora que a actividade dos derivados da milbemicina pode ser modificada por introdução de um grupo éster insaturado na posição 4, em vez do grupo metilo. Especi ficamente, a presente invenção descreve derivados da milbemicina e de outros macrolidos, substituídos por grupos alcenoíloxi na posição 26.

Assim, a presente invenção descreve a preparação de compostos de fórmula geral

(I) na qual;

-X-Y- representa um grupo de fórmula

-ch₂-ch₂-,

-CH₂-CH0H-, -CH=CH ou -CH₂-C(=0)-;

R^ representa um grupo metilo, etilo, isopropi1°, sec-butilo ou um grupo de fórmula geral -C(CH^)=CHR^ na qual Rj, representa um grupo metilo, etilo ou isopropilo;

R„ representa um grupo de fórmula geral -(CH₂)_n-C(Rg)-C(R^)(Rg) na qual n representa 0, 1 ou 2, R^ e representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo e Rg representa um átomo de hidrogénio ou um quilo(C^-C^), fenilo ou fenilo substituído com pelo substituinte escolhido entre átomos de halogéneo ou grupo almenos um um grupo metilo e/ou nitro;

ou um

R^ representa um átomo de hidrogénio grupo metilo, um grupo protector do grupo hidroxi, um resí duo de ácido carboxílico formando um éster e

R^ representa um átomo de hidrogénio ou um gru po o(-L-oleandrosil- b(-L-oleandrosiloxi, com a condição de R^ representar um átomo de hidrogénio quando o símbolo R^ representar um grupo metilo ou etilo ou um grupo de fórmula geral -C(CH^)=CHR^ na qual representa um grupo metilo, etilo ou isopropilo.

A presente invenção descreve também uma composição parasiticida que pode ter uma actividade anti-helmíntica, acaricida, insecticida ou outra actividade. A composição inclui um composto de fórmula geral I, misturado com uma substância veicular ou um diluente aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, agrícola veterinário ou hortícula.

A presente invenção também descreve um método de tratamento ou de protecção de animais (humanos ou não) ou de plantas atingidos por parasitas como ácaros, helmintos e insectos, método esse que consiste em aplicar ou administrar um composto de fórmula geral I aos referidos animais, plantas ou sementes dessas plantas ou ainda aplicar esse composto em locais onde se encontrem os referidos animais, plantas ou sementes .

Descrição detalhada da presente invenção

Nos compostos de bolo Rg representa um grupo de símbolo Rg representa um grupo fórmula geral I, quando o sím fórmula geral -C(CH^)=CHR^, o

1-metil-l-propenilo, 1-metil-

-1-butenilo ou 1,3-dimetil-l-butenilo.

Quando o símbolo R representa um grupo protector do grupo hidroxi, pode ser qualquer um dos grupos utiliza dos convencionalmente para este fim. Por exemplo, o grupo pro. tector pode ser um grupo sililo representado pela fórmula geral Si(R’) (R”) (R^M’ ) na qual os símbolos R’, R” e R^m representam, cada um, um grupo alquilo (C^-C^), um grupo benzilo ou um grupo fenilo. São exemplos de grupos sililo os grupos tri metil-sililo, trietil-sililo, tripropil-sililo, tri-isopropML -sililo, di-isopropil-metil-sililo, t-butil-metil-sililo, dimetil-fenil-sililo, t-butil-difenil-sililo, trifenil-sililo e tribenzil-sililo. Dentre estes grupos, preferem-se os grupos trimetil-sililo, trietil-sililo e t-butil-dimetil-sililo. 0 grupo protector pode ser também um resíduo de um ácido carboxílico ou do ácido carbónico, tal como já se mencionou.

Quando ο ácido, não há qualquer de ser escolhido entre símbolo R_o representa um resíduo de j

limitação à natureza do ácido, que po uma grande variedade de ácidos oarboxí licos ou ácidos carbónicos, já que se supõe que a actividade biológica dos compostos de fórmula geral I se deve à forms.ção de compostos nos quais o grupo de fórmula geral -OR^ represen ta um grupo hidroxi. Tal como já se referiu, a literatura con tém muitos exemplos de ácidos apropriados para formar milbemi cinas esterifiçadas na posição 5 θ, tais ácidos podem ser fa cilmente adoptados para os compostos da presente invenção.

Sem ser exaustivo, o símbolo R^, quando representa um resíduo de um ácido carboxílico ou carbónico formando um éster, pode ter a fórmula geral -CO-(o)_n-R^^, na qual o símbolo n representa ou 1 e o símbolo R^^ representa um gru po alquilo (C^-C^g) de cadeia linear ou ramificada, ciclo-alquilo(C^-C^), aralquilo(C^-C^) alcenilo (Cg-Cg) ou alcinilo (C₂-C₆), arilo (C₆-C_lo) ou um grupo monocíclico ou heterocí clico fundido comportando 5 a 10 átomos no núcleo e comportan do, pelo menos um átomo de oxigénio, enxofre ou azoto. 0 grupo representado pelo símbolo pode comportar, eventualmente, um ou mais substituintes, tais como, por exemplo, átomos de halogéneo ou grupos alquilo, alcoxi, alcoxi-alquilo, halo geno-alquilo, alcoxi-carbonilo, aciloxi, hidroxi, carboxi, aibino, monoalquil-amino, dialquil-amino, trialquil-amino, acilamino, ciano, carbamoílo, mono-alquil-carbamoílo, di-alquil-carbamoílo, mercapto, alquiltio, alquil-sulfinilo, alquil-sulfonilo, nitro, fenoxi, halogeno-fenoxi, alquil-sulfo_

niloxi, aril-sulfoniloxi, cianotio ou grupos heterocíclicos pentagonais ou hexagonais, comportando, pelo menos, um átomo de oxigénio, enxofre ou azoto. Quando o substituinte contém um ou vários átomos de carbono, é preferível que o número de átomos de carbono esteja compreendido entre 1 e 9. Quando o próprio símbolo R^ representa um grupo alquilo, alcenilo ou alcinilo, o substituinte não é nenhum dos grupos alquilo, alcoxi-alquilo ou halogeno-alquilo,

São exemplos de resíduos de ácido, apropriados para se utilizarem como grupos protectores do grupo hidroxi, os grupos formilo, acetilo, cloro-acetilo, dicloroacetilo, tricloro-acetilo, trifluoro-acetilo, metoxi-acetilo, propionilo, n-butirilo, (E)-2-metil-2-butenoílo, isobutirilo, pentanoílo ou pivaloílo; ou um grupo acilo aromático, como por exemplo um grupo benzoílo, o_-(dibromoe til)-benzoílo, o-(metoxicarbonil)-benzoílo, jD-fenilbenzoílo, 2,4,6-trimetilbenzoí1°, JJ-toloílo, js-anisoílo, jj-clorobenzoílo, j)-nitrobenzoílo, o-nitrobenzoílo ou o<-naftoílo.

Os compostos de fórmula geral I preferidos incluem os compostos nos quais:

a) -X-Y- representa um grupo de fórmula -CH₂-CH₂-, -CH₂-CH0H ou -CH₂-C(=0)-;

b) . i) representa um grupo metilo, etilo ou isopropilo e R^ representa um átomo de hi drogénio; ou

b), ii) R^ representa um grupo isopropilo ou um grupo sec,-butilo e representa um

grupo Of-L-oleandrosil- 0(-L-oleandrosiloxi; ou

b).iii) R^ representa um grupo de fórmula geral -C(CH₃)=CHR₃ (na qual R^ tem o significado definido antes) e representa um átomo de hidrogénio;

c) Rg representa um grupo de fórmula geral

-CH=C(CH₃)(R^q), na qual representa um grupo metilo ou etilo.

d)

R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alcanoílo inferior comportando a 4 átomos de carbono (tal como um grupo acetilo ou propionilo) ou um grupo alcoxi-carbonilo inferior comportando de a 5 átomos de carbono (como por exemplo um grupo etoxi-carbonilo).

Particularmente preferidos são os compostos nos quais -X-Y- representa um grupo de fórmula -CHg-CHg, o símbolo

R^ representa um grupo metilo ou etilo, Rg representa 2-metil-l-propenilo e os símbolos

R^ e representam um grupo átomos de hidrogénio ficos dos

No quadro seguinte, compostos preferidos da incluem-se exemplos especípresente invenção, cuja estrutura é dada em função da fórmula geral I, que se repete aqui para facilitar

(ι)

No.	X-Y	R1	R2	S	R
1	ch9-ch9	Me	CH=C(CH3)2	H	H
2	CH2-CH2	Me	CH=C(CH3)(C2H5)	H	H
3	ch2-ch2	Et	ch=c(ch3)2	H	H
4	ch2-ch2	Et	CH=C(CH3)(C2H5)	H	H
5	ch2-ch2	Et	Cn=CHCH3	H	H
6	CH9-CH9	Et	C(CH3)=CHCH3	H	H
7	ch2-ch2	Et	CH=CH(CH2)2CH3	II	H
8	ch2-ch2	Et	CH=GHC(CH3)2	II	I-I

No.	X-Y	S1	r2	R3
9	ch2-ch2	Et	ch2ch=chc2h	H	H
10	ch2-ch2	Et	CH2CH2CH=CH2	H	H
11	ch2-ch2	Et	CH=CH-fenilo	H	H
12	ch2-ch2	Et	CH-CH-p-clorofenilo	H	H
13	0H2-ch2	Et	ch=c(ch3)2	BMS	H
14	ch2-ch2	Et	ch=c(ch3)2	C0C„H_ 2 5	H
15	ch2-ch2	Et	gh=c(ch3)2	COOC„H„ 2 5	H
16	ch2-ch2	i-Pr CH=C(CH3)2	H	H
17	ch2-ch2	sec-	•Bu CH-C(CH3)2	H
18	CHsCH	sec-	Bu CH=C(CH3)2	H
19	ch2-ch2	DMB	ch=c(ch3)2	H	H
20	ch2-choh	DMB	ch=c(ch3)2	H	H
21	CH2-C(=o)	DMB	CH=C(CH3)2	H	H

Neste quadroí

BMS - t-butil—dimetil-sililo c{ _ o( -L-oleandros.il- <4 -L-oleandrosiloxi

DMB - 1,3-dimetil-l-butenilo

Os compostos do quadro anterior têm os seguintes nomes:

1. 26-(3-Metil-2-butenoíloxi)-milbemicina

2. 26-(3-Metil-2-pentenoíloxi)-milbemicina A^

3. 26-(3-Metil-2-butenoíloxi)-milbemicina A^

Ç:

4. 26-(3-Metil-2-pentenoíloxi)-mi3.bemicina A^

5. 26-(2-Butenoíloxi)-milbemicina A^

6. 26-(2-Metil-2-butenoíloxi)-milbemicina A^

7. 26-(2-Hexenoíloxi)-milbemicina

8. 26—(4-Metil-2-pentenofloxi)-milbemicina

9. 26-(3-Hexenoíloxi)-milbemicina A.

10. 26-(4-Pentenoíloxi)-milbemicina A^

11. 26-Cinamoiloxiiiiilbemicina A^

12. 26-p-Clorocinamoiloximilbemicina

13. 5-0-t-Butildimetilsilil-2-(3-metil-2-buteniloxi)-milbe- micina A^

14. 5“0-Propionil-2-(3-metil-2-butenoíloxi)-milbemicina

15. 5-0-Etoxicarbonil-2-(3-metil-2-butenoíloxi)-milbemicina ^A4

16. 26-(3-Metil-2-butenoíloxi)-milbemicina D

17. 26-(3-Metil-2-butenoíloxi)-ivermectina

18. 26-(3-Metil-2-butenoíloxi)-avermectina B^_a

19. 23-Desoxi-26-(3-metil-2-butenoiloxi) S-541A

20. 26-(3-Metil-2-butenoíloxi) S-541A

21. 23-Ceto-26-(3-metil-2-butenoíloxi) S-541A.

Destes compostos, há uma particular preferência pelos compostos 1, 2, 3, 4, 7, 8, 10, 11, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 e 21 e, especialmente pelos compostos 1, 2, 3, 4, 16, 17, 18, 19, 20 e 21.

Os compostos de fórmula geral I da presente invenção podem preparar-se seguindo os passos indicados no esque ma de reacção seguinte (onde os grupos representados pelos sím

bolos -X-Y e a R^ têm os significados definidos antes):

No esquema reaccional a fase A inclui uma oxida

ção selectiva do grupo metilo da posição 4 da molécula de milbemicina, para se obter um grupo hidroxi-metilo na mesma posição. Esta reacção é conhecida como a reacção de Sharpless ou a oxidação de Sharpless” e é uma oxidação do grupo alilo utilizando dióxido de selénio e t-butil-hidroperóxido.

Ê já conhecida a aplicação da reacção de Sharpless a macrolidos de fórmula geral II e pode-se mencionar aqui como referência específica a patente de invenção europeia n?. 7475θ e a memória da patente de invenção americana nS. 237 341. Assim, o passo A, atrás mencionado, pode ser rea lizado em condições semelhantes às descritas nas memórias daquelas patentes.

Assim, o passo A envolve o composto de fórmula geral II, comportando um grupo metilo na posição 4, com hidroperóxido de t-butilo, na presença de uma quantidade catalítica de dióxido de selénio que oxida o grupo metilo da posição 4 para um grupo hidroxi-metilo na mesma posição, que por sua vez é oxidado durante o processo. 0 hidroperóxido de t-bu tilo oxida os compostos de selénio reduzidos transformando-os novamente em dióxido de selénio que se usa novamente para a oxidação da molécula. Deste modo, só é necessária uma pequena quantidade catalítica de dióxido de selénio.

A reacção realiza-se no seio de um solvente inerte que não e susceptível de se oxidar. É preferível utilizar o cloreto de metileno, embora também se utilize acetato de etilo, tetra-hidrofurano e outros solventes. A temperatura da reacção não é crítica e pode realizar-se, por exemplo, a uma

temperatura compreendida entre 0° e 50° C. É preferível que a reacção se realize à temperatura ambiente. A reacção está geralmente completa dentro dum intervalo de tempo compreendido entre 1 e 48 horas e, nas condições preferidas, a reacção está normalmente completa ao fim de 24 horas.

grupo representado pelo símbolo R^, no composto de fórmula geral II, é, de preferência, um grupo metilo, um grupo protector do grupo hidroxi ou um resíduo de um ácido carboxílico ou de um ácido carbónico formando um éster que actua como um grupo protector. Quando o simbolo R^ do com posto de fórmula geral TI representa um átomo de hidrogénio e portanto também representa um átomo de hidrogénio no composto de fórmula geral III, converte-se, de preferência num dos outros grupos antes do passo B, utilizando os processos descritos antes.

passo B consiste na esterificação do grupo hidroxi do composto de fórmula geral III, na posição 26, por meio de um ácido carboxílico de fórmula geral R^COOH (Rg tem o significado definido antes) ou de outro reagente deriva do do ácido, esterificação que se pode realizar nas condições conhecidas per se.

São exemplos de reagentes derivados os seguintes: halogenetos de ácido como cloreto, brometo ou iodeto de ácido; anidridos de ácido; uma mistura de anidridos de ácido; ésteres activos como éster de pentacloro-fenilo ou éster de p-nitrofenilo; e amidas activas de ácidos.

passo B realiza-se, de preferência, na

presença de um solvente, cuja natureza não é crítica, na condição de não ter efeitos adversos sobre a reacção.

São exemplos de solventes apropriados: hidrocarbonetos que podem ser alifáticos ou aromáticos e que podem ser halogenados como o hexano, éter de petróleo, benzeno, tolueno, xileno, clorofórmio, cloreto de metileno ou cloroben zeno; éteres como éter dietílico, tetra-hidrofurano ou dioxano; e ésteres como acetato de metilo ou acetato de etilo. A reacção pode realizar-se dentro duma vasta gama de temperaturas e a temperatura precisa escolhida não é crítica para a pre sente invenção. A reacção pode realizar-se, de forma convenien te, a uma temperatura compreendida entre 0 Ce 100 C e, de preferência, a uma temperatura compreendida entre 20° C e 50°θ. 0 tempo necessário para a reacção pode variar, de acordo com muitos factores. Normalmente é suficiente um tempo que está compreendido entre 30 minutos e 3 horas.

Usa-se normalmente 1 a 10 equivalentes, de preferência 1,5 a 4 equivalentes do ácido ou do seu derivado reagente, por cada mole do composto de fórmula geral III,

Quando se utiliza o próprio ácido, a reacção efectua-se, de preferência, na presença de um agente desjl dratante, tal como diciclo-hexilcarbo-di-imida (DCC), polifoja fato de etilo (PPE), triazolido de mesitileno-sulfonilo (MST), ácido p-tolueno-sulfónico ou ácido sulfúrico, de preferência DCC. A quantidade de agente desidratante é, normalmente, de 1 a 5 equivalentes, de preferência de 1,5 a 4 equivalentes. Quando se utiliza DCC, a reacção pode realizar-se, de uma

forma conveniente, na presença de uma quantidade catalítica de uma base tal como a piridina ou a 4-pirrolidino-piridina.

Quando se utiliza um derivado reactivo do ácido, a reacção realiza-se, de preferência, na presença de uma base, preferencialmente ainda na presença de uma base or gânica tal como trietilamina, N,N-dimetilanilina, piridina, 4-dimetilaminopiridina, 1,5-diazabiciclo/ 4.30^/-noneno-5 (dbn) ou 1,8-diazabiciclo/”5.4,o7-undeoeno-7 (DBU). A quantidade de base está normalmente compreendida entre 2 e 8 equiva lentes.

Quando o produto de reacção do passo B produz um grupo protector sililo, este pode ser facilmente elimi nado para se repor o grupo hidroxi na posição 5. Pode-se alcançar a desprotecção utilizando um ácido diluído tal como ácido clorídrico diluído ou ácido sulfúrico diluído; um ácido orgânico como ácido fórmico ou ácido acético; ácido p-tolueno-sulfónico/fluoreto de tetra-butilamónia; ou ácido fluorídrico/piridina; entre os compostos citados preferem-se o ácido clorídrico diluído e o ácido fluorídrico/piridina. Usa-se normalmente o ácido em excesso, de preferência numa quantidade que pode variar entre 2 e 100 equivalentes.

A reacção de desprotecção realiza-se, de prjs ferência, na presença de um solvente, cuja natureza não é crítica, na condição de não ter efeitos adversos sobre a reacção. São exemplos de solventes apropriados: hidrocarbonetos, que podem ser alifáticos ou aromáticos e que podem ser halogenados, tal como hexano, éter d.e petróleo, benzeno, tolueno,

clorofórmio, cloreto de metileno ou dicloroetano; éteres como éter dietílico, tetra-hiclrofuraxio, dioxano ou dimetoxietano; álcoois como metanol ou etanol; nitrilos como acetonitri lo ou propionitrilo; e misturas destes solventes,

A reacção pode efectuar-se dentro de uma vasta gama de temperaturas e a temperatura precisa escolhida não é crítica para a invenção. Contudo, a reacção pode realizar-se, de uma forma conveniente, a uma temperatura compreendida entre -20° C e 70° C e, de preferência, a uma temperatura compreendida entre -10° C e 30° C, 0 tempo necessário para a realização da reacção pode variar, de acordo com muitos fac_ tores; contudo, normalmente é suficiente um período compreendido entre 30 minutos e 24 horas, de preferência entre 30 minutos e 6 horas.

Um composto de fórmula geral I, na qual o símbolo R^ representa um átomo de hidrogénio, pode ser sujeito a uma esterificação com um ácido carboxílico ou um ácido carbónico ou ainda um derivado reactivo, para se obter um com posto esterificado na posição 5

Depois de estarem completos os passos da s£ quência reaccional, pode-se recuperar o produto resultante da mistura reaccional pelos meios convencionais e, se necessário, pode-se purificá-lo posteriormente pelos meios convencitínais como as várias técnicas cromatográficas, particularmente a cromatografia de coluna. 0 composto de fórmula geral I obtém

-se, por vezes, sob a forma de uma mistura daqueles compostos, que não têm, necessariamente, que ser separados uns dos outros.

Os materiais iniciais, de fórmula geral II, são compostos conhecidos ou podem ser preparados pelos métodos descritos na literatura. Pode-se citar, por exemplo; a memória da patente de invenção britânica n⁵« 1390336; o pedido de patente de invenção japonesa da Kokai n2. 57-120559; J. Am. Chem. Soc.”; 103; 1981; p. 4216; patente de invenção americana n?. 4199569; patente de invenção americana n?. 4 289 76O; memória da patente de invenção britânica n?.

166 436; memória da patente europeia n?. 215 654; patente de invenção belga n?. 9θ^ 7θ9; reedição da patente de invenção americana n?. 32034; patente de invenção americana n9 .

457 920; e patente de invenção europeia n?. 2615; cujos textos se indicam aqui como referência.

Podem adoptar-se processos convencionais pa átomo de hidrogénio, ra converter um composto, no qual o símbolo R^ representa um num composto desejado no qual o símbolo tem um dos outros de preferência antes significados. Essa conversão efectua-se, dos passos A e B

A metilação do grupo hidroxi da posição 5 pode realizar-se usando as técnicas descritas, por exemplo, na memória da patente de invenção europeia n?. 237 341.

A protecção do grupo hidroxi da posição 5 com um grupo protector como o grupo sililo pode realizar-se, por exemplo, por meio da reacção com um halogeneto de sililo no seio de um solvente, de preferência na presença de uma base.

Não há qualquer limitação particular á natureza do solvente usado na sililação, na condição de que sje

ja inerte para a reacção. Os solventes preferidos incluem: hidrocarbonetos, tais como hexano ou benzeno; hidrocarbonetos clorados tais como cloreto de metileno ou clorofórmio; éteres tais como éter dietílico; e solventes polares tais como tetra -hidrofurano, acetonitrilo, dimetilformamida, dimetilacetamida, dimetil sulfóxido ou piridina.

Os exemplos de agentes de sililação preferidos incluem os agentes de fórmula geral Si(R’)(Rⁿ)(R^m)Z, na qual os símbolos R’, R” e R”' representam, cada um, um grupo alquilo(C^-C^), benzilo ou fenilo e o símbolo Z representa um átomo de halogéneo ou outro contra-ião catiónico apropriado. Os exemplos específicos dos agentes de sililação preferidos incluem cloreto de trialquil-silxlo, cloreto de triaril-sililo e trifluoro-metano-sulfonatos de sililo.

A sililação efectua-se, normalmente, na presença de uma base. A natureza da base não é crucial, mas, em geral preferem-se as bases orgânicas às inorgânicas. Os exemplos de bases que podem ser utilizadas incluem sulfureto de lítio, imidazol, piridina, trietilamina e dimetil-amino-piridina, particularmente imidazol.

Alguns reagentes de sililação, como as hexametil-di-silazanos, amina de dietil-trimetil-sililo e outros, funcionam como agente de sililação e fornecedor de base, ao mesmo tempo e podem ser adoptados para a presente invenção.

A esterificação do grupo hidroxi da posição

5, com um ácido carboxílico ou carbónico pode realizar-se uti_ lizando as técnicas descritas no passo B atrás referido.

Existem também processos que permitem a conversão de compostos nos quais -X-Y- tem alguns dos significados já referidos, em compostos nos quais -X-Y- toma alguns dos outros significados. Esses processos estão descritos, por exemplo, na patente de invenção europeia n2. 7475θ·

Os materiais iniciais que são produtos naturais podem tomar a forma de um único composto isolado ou de uma mistura de dois ou mais compostos que podem ser utiliza dos sem separação. Por exemplo, dado que as misturas de mil bemicinas e estão facilmente disponíveis e podem ser facilmente utilizadas, podem sujeitar-se à sequência reacci£ nal sem separação

Alguns dos compostos de fórmula geral I da presente invenção podem também obter-se como produtos de fer mentação

Assim, a presente invenção descreve também um processo para a preparação de um composto de fórmula geral I na qual -X-Yrepresenta um grupo de fórmula -CHg-CHg-; os símbolos e representam, cada um, um átomo de hidrogénio; e i) o símbolo representa um grupo metilo e o símbolo Rg representa um grupo 2-metil-l-propenilo, ii) o símbolo representa um grupo metilo e o símbolo Rg representa um grupo 2-metil-l-butenilo ou iii) o símbolo representa um grupo etilo e o símbolo Rg representa um grupo 2-metil-l-pro penilo.

Esses compostos referem-se aqui como milbenri

dade ii) indicado antes) e (^a possibilidade iii) indicado antes). Podem obter-se por cultura de um microorganismo produtivo do gene Streptomyces. Tal microorganismo é o estir pe SANK 60286 pertencente à espécie Streptomyces que se isola do solo da cidade Miura da perfeitura de Kanajowa do Japão.

As milbemicinas 0(13 ^e ^14 f^azem parte de uma série de compostos isolados de uma calda de fer mentação da estirpe SANK 60286 de Streptomyces e que se designam por milbemicinas «11^a

tal como se indica no quadro seguinte.

^R1 ^R2

^11	metilo	2-metil-l-propenilo
*12	metilo	isobutilo
*13	metilo	2-metil-l-butenilo
«14	etilo	2-metil-l-propenilo
*15	etilo	isobutilo

Características da Streptomyces SANK 60286

As propriedades micológicas da estirpe SANK 60286 de actinomicetes são as seguintes.

1. Características morfológicas

Esta estirpe apresenta-se ao microscópio ramificada, com micélias básicas amarelo claro ou castanho ama

relado, a partir das quais se alongam micélias aéreas cinzentas amareladas com as extremidades em forma de espiral. Numa cadeia de esporos crescente observam-se 10 ou mais esporos em linha e os esporos têm uma superfície rugosa. A estirpe forma, nalgumas espécies de meios de cultura, lâminas douradas claras na superfície do micélio aéreo e estas lâminas transformam-se em manchas amareladas à medida que o processo de cultu ra progride. Algumas vezes as manchas negras formam-se devido à humidade no estádio final da cultura.

2. Crescimento em vários meios de cultura

Esta estirpe exibe as propriedades abaixo in dicadas, após cultura durante 14 dias a 28° C em vários meios. As cores, nomes e números aqui utilizados foram atribuídos com base no Guia das cores normalizadas, que é um manual publica do pela Nippon Shikisai Kenkyusho.

meio	propriedade	características
sucrose-nitrata	c	boas, branco acinzentado (N-9)
agar	MA	boas, branco
	R	cinzento amarelado
	PS	nenhumas

glucose-asparagina agar	C MA R PS	muito boas, cinzento amarelado (2-9-11) boas, branco acinzentado (N-9) amarelo claro (3-9-10) nenhumas
agar de glicerol-aspa	C	boas, castanho amarelado
ragina		(2-9-11)
(ISP 5)	MA	boas, branco a amarelado cinzento (2-9-11)
	R	amarelo claro (8-9-11)
	PS	nenhuma
agar de sal de ami-	C	muito boas, verde azeito-
do inorgânico		na claro (6-0-11)
(ISP 4)	MA	abundante, branco a verde
		azeitona claro (4-8-11)
	R	castanho amarelado
		(2-9-11)
	PS	nenhuma

agar de	tirosina	C	boas, cinzento esverdea do claro
(ISP 7)				(2-8-11)
			MA	boas, branco a amarelo claro (3-9-10)
			R	amarelo claro (6-8-10)
			PS	nenhuma
fermento	de	peptona	C	boas, cinzento amarelado
extracto	de	ferro		(2-9-12)
agar			MA	boas, branco
(1SP 6)			R	cinzento amarelado (4-9-11)
			PS	nenhuma
agar nutriente	C	boas, cinzento amarela-
(Difco)				do (1-9-10)
			MA	formação leve, cinzento
				(N-9)
			R	amarelo claro (3-9-10)
			PS	nenhuma

fermento-extracto malte-extracto de (ISP 2)

C agar

MA

PS muito boas, castanho amarelado (2-9-11) abundante, branco acin zentado (N-9) amarelo avermelhado (12-8-9) amarelo claro (8-9-12) agar de cereais (ISP 3)

C muito boas, amarelo claro (8-9-12)

MA Abundante, branco acin zentado (N-8)

R castanho amarelado (2-9-11)

PS cinzento esverdeado claro (4-7-11) agar de água

C fracas, branco acinzen tado (N-9)

MA formação ténue, cinzen to acastanhado claro (2-8-8)

R branco acinzentado (N-9)

PS nenhuma

extracto de batata	C	fracas, branco acinzen-
		tado (N-9)
extracto de cenoura	MA	bons, cinzento acastanha
agar		do claro (2-8-8)
	R	cor de laranja amarelado
		claro (2-9-9)
	PS	nenhuma

m: C: crescimento

MA: micélio aéreo

R: superfície inversa

PS: pigmento solúvel

3. Propriedades fisiológicas

As propriedades fisiológicas da estirpe SANK

60286 estão indicadas a seguir.

hidrólise de amido liquefacção de gelatina redução de nitrato coagulação de leite (a 28° C e 37° c) peptonização de leite (a 28° C e 37° C) intervalo de temperatura (meio 1) * positiva positiva (fraca) positiva positiva (fraca) positiva (fraca) crescimento

18-37° C /

produção de pigmento mielanoide (meio 2) (meio 3) (meio 4) negativa negativa negativa * : meio 1: extracto de fermento - agar de extracto de malte (ISP 2) meio 2: triptona - extracto de fermento - calda (ISP 1) meio 3: peptona - extracto de fermento - agar de ferro (ISP 6) melo 4: agar de tirosina (ISP 7)

Após uma cultura durante 14 dias à temperatura de 28° C num meio de agar de Pridham-Gottlieb, a estirpe SANK 60286 mostrava uma utilização das fontes de carbono tal como se indica no quadro seguinte.

açúcar

D-glucose L-arabinose D-xilose i-inositol

D-manitol D-fructose L-ramnose sucrose rafinose controle utilização ++ ++ +

++ ++ ++ ++ ++ ++ í ·* ++ bem utilizado + utilizado

- não utilizado

4. Componentes da célula

Examinou-se a parede da célula da estirpe SANK 60286, de acordo com o método descrito por B. Becker et al« (Applied Microbiology”; 12; 1964; p. 421). Como se pô de detectar ácido L,L-diamino-pimélico e glicina, a parede da célula revelou ser uma parede de célula do tipo I. Examinaram -se então os componentes de açúcares nas células todas, de acordo com o método descrito por M.P. Lechevalier (Journal of Laboratory & Clinicai Medecine”; 71; 19^8; p. 934), Não se observou nenhum modelo característico.

Em resumo, a estirpe revelou pertencer à espécie Streptomyces das actinomicetes,

A identificação da estirpe SANK 60286 de Streptomyces fez-se de acordo com a norma do ISP (The Interna tional Streptomyces Project); Manual de Bergey de Determinati ve Bacteriology; oitava edição; The Actinomycetes de S.A. Waksman; e outras referências recentes sobre actinomicetes.

Quando se comparam as propriedades da estirpe SANK 60286 com as de outras espécies conhecidas do género Streptomyces. as propriedades morfológicas e fisiológicas são praticamente idênticas às da Streptomyces hygroscopicus da sub-espécie aureolacrimosus (”J, Antibiotics; 36; 1983; P. 438).

Observou-se, contudo, uma pequena diferença nas propriedades de cultura entre as duas espécies. É bem conhecido que as propriedades de actinomicetes variam, nalguma medida, mesmo para a mesma estirpe, após culturas sucessivas. Em consequência, as estirpes não podem ser sempre diferenciadas taxonicamente, em virtude de uma ligeira diferença nas propriedades da cultura. Por estas razões, a estirpe

SANK 60286, que produz milbemicinas $12* ^13’ *^14 ^e identificado como Streptomyces hygroscopicus d _ _ tem sido da sub-espécie aureolacrimosus SANK 60286. Esta estirpe foi depositada, de acordo com as condições do Tratado de Budape_s te, em 20 de Outubro de 1986 no Fermentation Research Insti tute do Japão, com o número de acesso FERM BP-1190. Estarão disponíveis amostras da estirpe nas condições aplicáveis do

Tratado de Budapeste.

Os actimonices, incluindo o Streptomyces hygroscopicus da sub-espécie aureolacrimosus SANK 60286, sofrem rapidamente mutação quer através de causas naturais quer como resultado de tratamentos artificiais tais como irradiação UV, tratamento por radiação e tratamento químico. A presente invenção inclui todos os mutantes produtivos da estirpe SANK

60286. Estas estirpes mutantes pes obtidas por manipulação de transdução e transforme^ção dos presente invenção inclui todas incluem também quaisquer estir genes, tal como recombinação, genes. Por outras palavras, a essas estirpes que podem produzir uma ou mais das milbemicinas

^4 ®» especialmente, estirpes que não possam ser claramente diferencia

- 35 das da estirpe SANK 60286 ou dos seus mutantes

obter-se fazendo uma cultura da estirpe SANK 60286 num meio a propriado e recolhendo as milbemicinas desse meio. Podem utilizar-se, geralmente, substâncias convencionais como nutrientes para a cultura de microorganismos do gene Streptomyces. Por exemplo, a fonte de carbono pode ser glicose, sacarose, amido, glicerina, xarope espesso de malte, melaços e óleo de soja. Também a título de exemplo, a fonte de azoto pode ser farinha de soja, germen de trigo, extracto de carne, peptona, células de fermento, licor impregnado de milho, sulfato de amónia ou nitrato de sódio. Ser for necessário, podem utilizar-se numa combinação adequada, aditivos orgânicos e inorgânicos que promovem o crescimento de microorganismos e activam a promoção de milbemicinas * _X1.

e ^24* ^ass:*-^{m como} sais inorgânicos tais como carbonato de cálcio, cloreto de só dio, cloreto e fosfatos de potássio.

Tal como acnntece nos métodos convencionais utilizados para a produção de antibióticos, a cultura mais apropriada para os microorganismos é uma cultura em caldo, em particular um caldo denso. A cultura realiza-se em meio aeróbico. A temperatura apropriada para cultura está compreendida entre 22° e 30°C e, na maior parte dos casos, a cultura faz-se a cerca de 28°C. A produção de milbemicinas ^13 e

em cultura por agitação quer em cultura em tanque.

A produção de milbemicinas

- 36 c\ .

14, pode ser controlada pelo seguinte processo. Coloca-se um ml do material de cultura num pequeno tubo, adiciona-se 9 ml de metanol aquoso a 8o $, agita-se o tubo e centrifuga-se. Utiliza-se cromatografia em fase líquida de elevada resolução (tal como uma coluna H-2151 de fase inversa ODS da Senshu Co., de x 150 mm e uma bomba Hitachi modelo 655). Injecta-se cincogul da amostra e desenvolve-se com uma mistura dos solventes, acetonitrilo e água (80:20), a uma velocidade de 1,5 ml/minuto. As milbemicinas e

controlam-se por meio de um detector UV (240 nm) e determinam-se por meio de uma unidade de tratamento de dados (como uma Union Tech. Inst. MCPD-35U PC).

Para colher as milbemicinas ^13 ^e do meio da cultura, pode utilizar-se um adsorvente tal como carbono activado, alumina ou gel de sílica; um adsorvente sintático tal como Diaion HP-20 (Mitsubishi Chem. Ind. Ltd.) um adsorven te tal como Avicel (Asahi Chem. Ind, Co., Ltd) ou papel de fil_ tro; uma resina de permuta iónica; ou um material filtrante, per mutador de iães, de gel. 0 processo seguinte á o mais eficaz.

Filtra-se o material da cultura usando um filtro tal como diatomite. Extrai-se o bolo obtido com metanol para dissolver os compostos desejados em metanol aquoso. Adiciona-se água e extrai-se a mistura com hexano. Evapora-se a solução de hexano a pressão reduzida para se obter uma substância oleosa contendo milbemicinas n» 13 ^e substância oleosa á adsorvida numa coluna de Lobar Si60 (Merck, dimensão B) e faz-se a eluição com uma mistura de solventes constituída por hexano e acetato de etilo (8:2) para recolher várias fracçães todas elas contendo milbemicinas

11»

ou

Evapora-se, a pressão reduzida, cada fracção conten do qualquer uma das milbemicinas, para se obter uma substân cia oleosa. Mistura-se o óleo com uma pequena quantidade de metanol e faz-se a sua adsorção numa coluna Lobar RP-8 (Merck, tipo B) e elux-se com uma mistura dos solventes, acetonitrilo e água (80:20). Recolhem-se as fracçSes contendo um destes com postos e, depois de se destilar o acetonitrilo a pressão redu zida, extrai-se com acetato de etilo. Finalmente, através de uma cromatografia em fase líquida de elevada resolução (coluna

de fase inversa) obteve-se cada uma das milbemicinas c< , e ^s°b ^a forma de um pó. Também se podem obter as milbemicinas

por um processo semelhante.

Os compostos de fórmula geral I da presente in venção têm uma excelente actividade acaricida contra animais adultos e ovos de dois aracnídeos pintalgados (Tetranychus),áca ro vermelho dos citrinos (Panonychus), ácaro vermelho da Europa (Panonychus). ácaros de ferrugem que são parasitas das árvo res de fruto, dos vegetais e das plantas ornamentais e contra Ixodidae, Dermanysside, Sarcoptidae e outros parasitas que são parasitas dos animais. Os compostos têm também actividade contra Oestrus. Lucilia, Hypoderma. Gautrophilus; pulgas e piolhos entre outros que são parasitas dos animais e pássaros; insectos domésticos como baratas, moscas e outros insectos; e vários insectos nocivos para a agricultura e a horticultura como afídios, traças em forma de losango e larvas de Lepidoptera. Os compostos da presente invenção têm também actividade contra Meloidogyne. Bursaphelenchus, Rhizoglyphus e outras espécies presentes no solo

- 38 Além disso, os compostos da presente invenção

têm uma excelente actividade parasiticida contra endoparasitas dos animais e das pessoas. Em particular, os compostos são efi. cazes não só contra nemátodes parasitas dos animais domésticos e de aves domésticas, como por exemplo de porcos, ovelhas, cabras, cavalos, cães, gatos e pássaros, mas também contra parasitas pertencendo às Filariidae ou às Setariidae e parasitas encontrados no tracto digestivo, no sangue e noutros tecidos e orgãos humanos.

Quando se pretende utilizar os compostos da pre sente invenção com fins agrícolas ou para horticultura, pode-se formá-los, sob a forma de preparações usadas habitualmente como produtos químicos para a agricultura, isto é, como pós, pós molháveis, concentrados emulsionáveis, suspensões aquosas ou oleosas e aerossóis, misturando-os com substâncias veicula res ou com qualquer outro agente auxiliar, se necessário. As substâncias veiculares podem ser naturais ou sintéticas e sub tâncias orgânicas ou inorgânicas que se incorporam nas formulações para a agricultura, a fim de ajudar o ingrediente activo a atingir o sítio a desparasitar e a tornar mais fácil a sua armazenagem, o seu transporte e manuseamento.

Como substâncias veiculares sólidas apropriadas, podem-se citar substâncias inorgânicas como as argilas (por exemplo caulinite, montmorilonite e atapulgite), talco, mica, pirrofilite, pedra-pomes, vermiculite, gesso, carbonato de cálcio, dolomite, terra de diatomáceas, carbonato de magnésio, apatite, zeolite, anidrido silícico e silicato sintético de cálcio; substâncias orgânicas vegetais como farinha

de soja, pó de tabaco, pó de casca de noz, farinha de trigo, serradura, amido e celulose cristalina; compostos sintéti cos ou naturais de elevado peso molecular como resinas de cu marona, resinas de petróleo, resinas alquídicas, cloreto de polivinilo, glicóis de polialquileno, resinas cetónicas, gomas de éster, goma copal e goma de damar; ceras como cera de carnaúba e cera de abelhas; e ureia.

Como substâncias veiculares líquidas apropria das pode-se citar hidrocarbonetos parafínicos ou nafténicos como petróleo iluminante, óleo mineral, óleo para parafusos e óleo branco; hidrocarbonetos aromáticos como benzeno, tolueno, xileno, etilbenzeno, cumeno e metil-naftaleno; hidro carbonetos clorados como tetracloreto de carbono, clorofórmio, tricloro-etileno, monocloro-benzeno e o-clorotolueno; éteres como dioxano e tetra-hidrofurano; cetonas como aceto na, metil-etil-cetona, di-isobutil-cetona, ciclo-hexanona, acetofenona e isoforona; ésteres como acetato de etilo, ace tato de amilo, acetato de etileno-glicol, acetato de dietil£ no-glicol, maleato de dibutilo e succinato de dietilo; álcoois como metanol, n-hexanol, etileno-glicol, dietileno-glicol; ciclo-hexanol e álcool benzílico; álcoois de éter como éter etílico de etileno-glicol, éter fenílico de etileno-glicol, éter etílico de dietileno-glicol e éter butílico de dietileno-glicol; solventes polares como dimetil-formami da e dimetil-sulfóxido, e água.

Como substâncias veiculares gasosas apropriadas, pode-se citar ar, azoto, dióxido de carbono e gás Freon (mar«ra registada). Estes gases podem ser misturados para se- 4ο rem pulverizados.

Para melhorar algumas propriedades das formulações como dispersão, emulsificação, propagação, penetração e aderência, pode-se juntar, se necessário, algumas espécies de agentes superficiais activos e compostos de elevado peso molecular, através dos quais se pode aumentar a molhabilidade, a adesão e a absorção da formulação ao animal ou á planta, aumen tando assim a eficácia.

No que respeita aos agentes activos de superfície, podem-se utilizar para melhorar a emulsificação, dispersão, molhabilidade, expansão, ligação, controle de desintegração, estabilização dos ingredientes activos, aumento da fluidez e prevenção da ferrugem, qualquer agente não-iónico, aniónico, catiónico e anfotérico, mas utilizam-se mais os agentes activos de superfície não-iónicos e/ou aniónicos.

Como agentes activos de superfície não-iónicos apropriados, podem-se citar, por exemplo, os aductos de polimerização de óxido de etileno com álcoois de peso molecular mais elevado como álcool laurílico, álcool estearílico e álcool olealílico; os aductos de polimerização de óxido de etileno com alquil-fenóis como iso-octilfenol e nonilfenol; os aductos de polimerização de óxido de etileno com alquil-naftois como butil-naftol e octil-naftol; os aductos de polimerização de óx_i do de etileno com ácidos gordos de peso molecular mais elevado como ácido palmítico, ácido esteárico e ácido oleico; os aductos de polimerização de óxido de etileno com ácido monoalquil-fosfórico e ácido dialquil-fosfórico como ácido estearil-fosfónico e ácido dilauril-fosfóricoj os aductos de polimeriza-

ção do óxido de etileno com aminas como dodecilamina e amida esteárica; ésteres de ácidos gordos de elevado peso molecular de poliálcoois como sorbitano e aductos de polimerização de óxido de etileno; e aductos de polimerização de óxido de etileno com óxido de propileno. Gomo agentes activos de superfície aniónicos apropriados, pode-se mencionar, por exemplo, sais (éster) de sulfato de alquilo como lauril-sulfato de sódio e sais de amina de éster de ácido sulfúrico e do álcool oleilico; sulfonatos de alquilo como sal de sódio de éj5 ter dioctílico do ácido sulfo-succínico e 2-etxl-hexano-sulfonato de sódio, e sulfonatos de arilo como isopropil-naftalje no-sulfonato de sódio, metileno bis-naftaleno-sulfonato de sódio, lignino-sulfonato de sódio e dodecil-benzeno-sulfonato de sódio.

Para melhorar as propriedades da formulação e o efeito biológico, podem utilizar-se as composições da presente invenção em combinação com compostos de elevado peso mo lecular ou com outras substâncias auxiliares como caseína, ge latina, albumina, cola, alginato de sódio, carboximetil celulose, metil celulose, hidroxietil celulose e álcool polivinxlico.

As substâncias veiculares e as várias substân cias auxiliares atrás mencionadas podem utilizar-se isoladas ou em qualquer combinação desejada, conforme o tipo de formulação, a aplicação pretendida e outros fac^ores semelhantes.

Os pós podem conter, por exemplo de 1 a 25$ em peso de ingrediente activo em geral e uma substância vexcu lar sólida na percentagem restante.

- 42 Os pós molháveis podem conter, por exemplo, de 10 a 90$ em peso de ingrediente activo em geral e uma substância veicular sólida, um agente de dispersão e um agente molhan te na percentagem restante. Se for necessário, pode juntar-se um coloide protector, um agente tixotrópico e um agente anti-modelação.

Os concentrados emulsionáveis podem conter,por exemplo, de 5 a 5θ$ ^em peso de ingrediente activo em geral e de 5 a 20$ em peso de agente de emulsificação e uma substância veicular líquida para completar os 100$ em peso. Se for necessário, pode-se juntar um agente anti-corrosão.

As formulações oleosas podem conter, por exem pio, de 0,5 a 5$ ^em peso de ingrediente activo em geral uma substância veicular líquida como o petróleo, na percentagem restante.

Os aerossóis podem conter, por exemplo, de 0,1 a 5$ em peso de ingrediente activo em geral e, eventualmente, um perfume e uma substância veicular oleosa e/ou líquida, na percentagem restante. Pode-se carregar propelentes como gás de petróleo liquefeito, gás de fluoro-carbono e dióxido de car bono.

Depois de serem formuladas, tal como se referiu antes, as composições da presente invenção podem aplicar-se eficazmente às colheitas e aos animais domésticos parasitizados com insectos nocivos ou traças em campos de arroz, po mares «campos de regiões montanhosas, tratando os troncos e as folhas das colheitas, o solo ou os animais domésticos com uma concentração do ingrediente activo variando entre 0,5 ®

- 43 /

100 ppm

Quando se pretende utilizar os compostos da presente invenção em animais e pessoas, como agentes anti-helminticos, a sua administração pode ser oral, sob a forma de uma be bida. A bebida é normalmente uma solução, suspensão ou dispersão com um solvente não-tóxico apropriado ou com água, em conjunto com um agente de suspensão como bentonite e um agente molhante ou qualquer outra substância veicular. Em geral a bebida contem também um agente anti-espuma. A composição da bebida é, em geral, de 0,01 a 0,5 $, de preferância de 0,01 a 0,1 $ em pe so do ingrediente activo.

Quando se pretende dar os compostos da presente invenção a animais, sob a forma de alimentos, deve-se dispersá-los homogeneamente sobre a comida, revestindo-a ou sob a forma de comprimidos. Para se obter o efectivo anti-helmintico deseja do, o ingrediente activo deve estar presente, em geral, numa percentagem compreendida entre 0,0001 e 0,02 $ em relação ao tç> tal do alimento.

Os compostos da presente invenção podem-se administrar também aos animais por via parentérica, por meio de injecção no estomago, músculos ou traqueia ou por injecção sub-cutânea, dissolvida ou dispersa numa substância veicular líqui da. No caso de administração parentérica, o composto activo pode ser, preferencialmente, misturado com um óleo vegetal apropriado como óleo de amendoim ou óleo de algodão. Esse tipo de formulação contém, geralmente, de 0,05 a 50$ em peso de ingrediente activo.

Os compostos da presente invenção podem também

ser administrados localmente, misturando-os com uma substância veicular apropriada como dimetil-sulfóxido ou um solvente cons tituído por um hidrocarboneto. Este tipo de formulação pode aplicar-se directamente à superfície do corpo do animal usando um pulverizador ou por injecção directa.

A dose oral mais apropriada para se obter o melhor resultado depende do tipo de animal a ser tratado e do ti po e grau da infecção parasítica. Geralmente, a dose está compreendida entre 0,01 e 100 mg, de preferência entre 0,5 e 50,0mg, por quilo de peso do animal. A dose pode ser administrada de uma só vez ou dividida em várias doses administradas num curto espaço de tempo, compreendido entre 1 e 5 dias.

Exemplos da invenção

A presente invenção é ilustrada em mais detalhe pelos exemplos seguintes, que não são, no entanto limitativos.

Exemplo 1 milbemicinas X n» 13 ^e ^14 (Compostos N? 1, 2 e 3)

Em dez balões de Erlenmeyer de 5θθ ml inoculou-se, em 100 ml de um meio de pré-cultura contendo sacarose, polipeptona e K^HPO^ (1%, 0,35% ou 0,05%) respectivamente, Streptomyces higroscopicus da sub-espécie aureolacrimosus SANK 60286, com uma colher oval. Depois da cultura permanecer durante 48 ho ras, a 28°C, num agitador rotativo, transplantou-se 1 litro de líquido da cultura para dois recipientes de fermentação de 30 litros contendo, cada um deles, 20 litros do meio de produção

(8$ de sacarose, 1% de farinha de soja, 1$ de leite desnatado,

0,1$ de extracto de fermento, 0,1$ de extracto de carne, 0,3$ de CaC0₃, 0,03$ de KgHPO^, 0,1$ de MgSO^^HgO, 0,005$ de FeS0^,7H2®> ^{com 0} P^{H de} 7,2 antes da esterilização).

A cultura desenvolveu-se a 28°C durante 12 dias nos recipientes de fermentação, sob uma corrente de ar esteri lizado de 0,5 wm, a uma pressão interna de 0,5 kg cm², a uma velocidade de rotação de 40 a 180 rpm e um valor de DO de 4 a 7 ppm. Misturaram-se trinta e dois litros do material de cul_ tura com 1,8 kg de celite e filtrou-se. Lavou-se o bolo micelial com 5 litros de água e deitou-se fora o filtrado e as àguas de lavagem. Misturou-se o bolo micelial com 20 1 de meta nol durante uma hora e depois de uma nova filtração lavou-se com 5 litros de metanol.

Recolheu-se o filtrado e as águas de lavagem e evaporou-se a pressão reduzida para se obter cerca de 2 litros de líquido residual aquoso. Fez-se a extracção deste líquido três vezes com 2 litros de hexano. Lavou-se a camada de hexano três vezes com 1 litro de uma solução de hidróxido de sódio a 2$. Secou-se a camada de hexano sobre sulfato de sódio anidro e filtrou-se. Evaporou-se o filtrado para se obter 38 g de uma substância oleosa. Dissolveram-se 20 gramas desta substância oleosa em 500 ml de hexano. Carregou-se a sç> lução numa coluna que tinha sido preparada a partir de 300g de gel de sílica (Mallinckrodt Inc. Sílica do tipo 60) com um tratamento de hexano e eluíu-se com 2 litros de hexano e depois com hexano/acetato de etilo (3:1).

Analisando as fracçães eluídas utilizando CLER,

- 46 11»

12» recolheu-se uma mistura de milbemicinas

13’

Evaporando o solvente obteve-se 1,9 g do produ to oleoso bruto. Dissolveu-se todo o produto em 10 ml de meta nol/água a 5θ$· Carregou-se a solução numa coluna que se preparou a partir de 160 g de gel de sílica silanado (Merck Co., artigo 7719) tratado com metanol/água h 50$ e fez-se a eluiçãa com metanol/água a 60$, depois com metanol/água a 70$ e final mente com metanol/água a 80$. Controlando as fracções eluídas por meio de cromatografia líquida de elevada resolução, obte-

Evaporando

obteve-se 84o

produto bruto oleoso. Dissolveu-se o produto todo em 20 ml de acetonitrilo. Fez-se uma cromatografia líquida preparativa de elevada resolução utilizando uma coluna de fase inversa (Senshu Co., ODS, H-5251, 20 x 250 mm). Carregaram-se amostras de 1 ml de solução de cada vez e eluxram-se com acetonitrilo/água a 80$ a uma velocidade de 9,9 ml/min. Controlando as fracções por meio de UV a 24o nm, obtiveram-se as fracções contendo o produto. Destilou-se o solvente de cada uma dessas fracções, Liofilizando o líquido residual aquoso obteve-se 128g de 11,7 mg de ^12» 1^,8 mg de ^13»

4-3 mg de qq ^e 3 mg de na ordem da eluição e, cada uma delas, sob a forma de uma substância pulverulenta.

milbemicina análise elementar ($) : C = 68,83, H = 8,32 peso molecular: 626 (medido por espectro de massa de bombardeamento por electrões. 0 mesmo se aplicou para a determinação dos pesos moleculares seguintes).

fórmula molecular: Ο^Η^θΟ^ rotação específica: ~ + 1θ4,3°Ο (C « 1,05, chci₃) (medida usando a linha de sódio-D. 0 mesmo se aplicou as análises seguintes.) espectro de absorção UV: _max (CH^OH) nm (E¹^, cm¹): 230 (sh), 238 (990), 244 (990), 252 (sh)

espectro de absorção	de XV:	\) ' v max	(KBR)	-1 cm :
3450, 2950, 1715,	1650,	1450,	1380,	1330,	1270
1220, 1180, 1160,	1140,	IO9O,	1080,	1050,	1020
990, 940, 850

espectro de ressonância magnética nuclear do protão (CDC1₃, 27O MHz):

1,90 (3H, singlete, trans-CH₃-0(CH₃)=CH-C00-)

2,15 (3H, singlete, cis-CH₃-C(CH₃)=CH-COO-)

3,27 (1H, doblete de quartetos, Cg^H)

4,00 (1H, doblete, J=6Hz, CgH)

4,65-4,90 (4H, multiplete, ^G26^H- ^C27^H<

espectro de massa por bombardeamento do electrão: m/Z= 626 (M⁺), 558, 526, 508, 400, 181, 153 tempo de retenção na cromatografia líquida de elevada resolução: 13,4 minutos (ODS, H-2151, 6 x 150 mm, Senshu Co., eluição com o solvente - acetonitrilo/água a 80$, a uma velocidade de 1,5 ml/min, controlado por UV 240 nm. Aplicaram-se a seguir as mesmas condiçães.) milbemicina <X

análise elementar ($): C = 67,04, H = 8,01 peso molecular: 628 fórmula molecular: C^^H^gO^

rotação específica:	F<J	23 = ♦	118,	3° (C =	: 1,0,
CHCl^)
espectro de absorção	UV:
ί X , (CH„OH) nm rtmax v 3		-ls cm ):	238	(750),
244(810), 253 (sh)
espectro de abosrção	IV:
‘X / (KBr) cm1: •M max x '	3500,	2950,	1740,	1710,	1450
1380, 1330, 1290,	1180,	1120,	1090,	1050,	990

espectro de massa por bombardeamento de eletrães:

548, 525, 4oo, 382, 329, 181, 153 tempo de retenção na CLER: 14,6 minutos milbemicina análise elementar ($): C = 67,41, H = 8,12 peso molecular: 640 fórmula molecular: C_o_H_cn0_n

9 rotação específica:

+91,6° (C = 0,89, chci₃) espectro de absorção ! z (CH„OH) nm max ' 3 '

UV:

(E¹^, cm¹): 230 (sh),

- 49 -/ z

237 (805), 245 (795), 253 (sh)

espectro de absorção	IV:
0 máx	(KBr)	-1 cm :	3500, 2950, 1720,	1650, 1450
1380,	1340,	1310,	1270, 1210, 1180,	1140, 1115,
1095,	1050,	990,	960, 940, 860

espectro de ressonância magnética nuclear de protão (CDCl^, 270 MHz):

1,07 (3H, triplete, CH₃CH₂-C(CH₃)=CH-COO-)

2,16 (3H, singlete, CH^-CfCgH^CH-COO-)

3,27 (1H, doblete de quartetos, Cg^H)

4,00 (1H, doblete, J=6Hz, CgH)

4,65-4,90 (4H, multiplete, C^H, θ₂γΗ) espectro de massa por bombardeamento de electrães:

Ϊ1/Ζ x 640 (M⁺), 526, 508, 276, 181, 153 tempo de retenção CLER: 16,4 minutos milbemicina tf análise elementar (%): C = 67,62, H x 7,84 peso molecular: 640 fórmula molecular:

rotação específica: ” *96,1° (C χ 1,14 chci₃) espectro de absorção UV:

): 230 (sh),

- 50 - / f

237 (800), 244 (810), 253 (sh) espectro de ressonância magnética nuclear de protão (CDCl^, 270 MHz) :

3,09 (1H, doblete de tripletes, J=2,4, 9,3Hz,

4,00 (1H, doblete, J=6,6Hz, CgH)

4,64-4,88 (4H, multiplete, C₂₆H,C

5,81 (1H, singlete principal, C^H) espectro de absorção IV:

$ (KBr) cm¹: 3450, 2950, 1720, 1650,1450,

1380, 1340, 1270, 1220, 1180, 1140, 1100,1θ6θ,

1030, 990, 960,86O espectro de massa por bombardeamento de electrães:

m/Z s 640, 540, 522, 276, 263, 195,167 tempo de retenção CLER: 18,0 minutos milbemicina c* peso molecular: 642 fórmula molecular: ^C37^H54°9 espectro de massa por bombardeamento de alectrães:

m/Z = 642, 555, 5^0, 414, 396, 385, 356, 314,

264, 245, 195, 167 tempo de retenção de CLER: 19,6 minutos

Exemplo 2

5-0-t-butil-dimetil-silil-milbemicina c* (Composto Ne 13)

Adicionou-se 150 >ul de piridina e 200 Arl de

3-metil-2-butenoílo a uma solução de 219,3 mg de 26-hidroxi-5-0-t-butil-metil-silil-milbemicina em 10 ml de cloreto de metileno e arrefeceu-se até 0°C. Agitou-se a mistura duran te 30 minutos. Verteu-se a mistura reaccional numa solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonato de sódio e extraíu-se com cloreto de metileno. Secou-se o extracto sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se por evaporação.

Purificou-se o resíduo por cromatografia em c£ luna, através de gel de sílica para se obter 326,2 mg do composto em epígrafe (rendimento de 91%)·

Espectro de massa (Método ET, m/z):

754 (M⁺), 736, 715, 697, 654, 636, 597, 589

Espectro de ressonância magnética nuclear (270 MHz, CDCl^, cíppm) ·

0,11 (3H, singlete, SiCH^)

0,13 (3H, singlete SiCHp

3,07 (1H, doblete de tripletes, J=2,4, 9,3Hz,

3,85 (1H, doblete, J=5,6Hz, CgH)

5,78 (1H, singlete, C^H)

Exemplo 3

Milbemicina (Composto N? 3)

Ad±cionou-se 2,5 ml de ácido fluorídrico a 68% em piridina, a uma solução de 302,8 mg de 5-0-t-butil-dimetil-silil-milbemicina em 15 ml de acetonitrilo, arrefeceu- 52 -

-se até 0°C e depois agitou-se a mistura durante 2,5 horas. Ao fim deste tempo, adicionou-se à mistura reaccional cerca de 300 mg de carbonato de potássio e de água, por esta ordem e depois fez-se a extracção da mistura com clorofórmio. Secou -se o extracto sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se por evaporação. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna através de gel de sílica para se obter 232,2 mg do composto em epígrafe (rendimento de 90$) que evidenciava as propriedades da milbemicina preparada no Exemplo 1.

I

Exemplo 4

26-(2-butenoíloxi)-milbemicina (Composto N? 5)

Adicionou-se 24 jil de piridina e 39 J|il de cloreto de 2-butenoílo a uma solução de 150 mg de 2ó-hidroxi-5-0-t-butil-dimetil-silil-milbemicina A^ em 2 ml de cloreto de metileno, arrefeceu-se até 0°C depois agitou-se à temperatura ambiente durante 3 horas. Verteu-se a mistura reaccional em água gelada e extraíu~se com acetato de etilo. Secou-se o extracto sobre sulfato de sódio anidro e concentrou-se por evaporação. Dissolveu-se o resíduo em 4 ml de acetonitrilo que se arrefeceu então até 0°C. Adicionou-se 0,5 ml de ácido fluo rídrico em piridina a 68$ e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Ao fim deste tempo, verte-se a mistura reaccional em água gelada e extraiu-se com acetato de etilo. Lavou-se o extracto com uma solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonato de sódio, secou-se sobre sulfato de sói dio anidro e concentrou-se por evaporação. Purificou-se o resíduo por cromatografia em camada fina para se obter 66,5 mg

do composto em epígrafe (rendimento de 48%).

Espectro de massa (Método EI, m/z):

626 (M⁺), 540, 522, 414, 264, 245, 191, 167, 151

Espectro de ressonância magnética nuclear (270 MHz, CDCl^, cf ppm) :

1,99 (3H, doblete de dobletes, J=6,9, 1,6Hz),

CH -CH^CH-COO-)

3,08 (1H, doblete de tripletes, J=2,4, 9,3Hz, C^H)

4,84 (1H, doblete, J=13,3Hz, CggH)

5,87 (1H, quarteto de dobletes, J=l,6, 15,3Hz,

CH—CH^CH-COO-)

7,03 (1H, quarteto de dobletes, J-6,9, 15,3Hz,

CH —CH^CH-COO-)

Exemplo 5

26-(3-metil-2-butenoíloxi)-milbemicina D (Composto Νδ 16)

Adicionou-se 0,15 ml de cloreto de 3-metil-2-butenoílo a uma solução de 177,3 mg de 2ó-hidroxi-5-0-t-butil-dimetil-silil-milbémicina D e 0,1 ml de piridina em 15 ml de cloreto de metileno e arrefeceu-se até 0°C. Agitou-se então a mistura durante 2 horas. Verteu-se a mistura reajc cional numa solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonato de sódio e extraíu-se com cloreto de metileno. Secou-se o extra£ to sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se por evaporação. Dissolveu-se o resíduo em 10 ml de acetonitrilo que

- 54 se arrefeceu até 0°C. Adicionou-se à mistura 1 ml de ácido fluorídrico em piridina a 68$ e agitou-se a mistura durante 2 horas. Ao fim deste tempo, verteu-se a mistura reaccional sobre uma solução aquosa saturada de hidrogeno-carbonato de sódio e extraíu-se com acetato de etilo. Secou-se o extracto sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se por evapora ção. Purificou-se o resíduo por meio de cromatografia em coluna utilizando gel de sílica, para se obter 144,7 mg do com posto em epígrafe (rendimento de 86$).

espectro de massa (Método EI, m/z) i

654 (M⁺), 618, 554, 428, 410, 356

Espectro de ressonância magnética nuclear (27θ MHz, CDCl^, ó ppm) :

3,07	(1H, doblete principal,	J=7,7Hz,	c25“)
4,48	(1H, doblete principal,	J=4,0Hz,	c3h)
4,68	(1H, doblete, J=14,7Hz,	C26H>
4,79	(1H, doblete, J=14,7Hz,	C26h>

Os compostos seguintes preparam-se seguindo, es sencialmente, cada um dos processos apropriados descritos nos exemplos 2 a 5»

Exemplo 6

26-(2-metil-2-butenoxloxi)-milbemicina

Composto N? 6

Espectro de massa (Método EI, m/z) :

64o (M⁺), 604, 54o, 522, 414

Espectro de ressonância magnética nuclear (27O MHz, cdci₃, cí PPm) :

1,80	(3H,	doblete, J=	=7,2Hz, CH3-CH=C(CH3)-COO-)
1,85	(3H,	singlete,	ch3-ch=c(CH^)-COO-)
3,08	(1H,	doblete de	tripletes, J=2,4, 9,3Hz, C^H)
4,73	(1H,	doblete,	J=13,7H, C26H)

Exemplo 7

26-(2-hexenoíloxi)-milbemicina

Composto N- 7

Espectro de massa (Método EI, m/z) :

654 (M⁺), 618, 522, 504, 414, 396

Espectro de ressonância magnética nuclear (270 MHz, CDCl^, cí PPm) s
0,93	(3H,	triplete,	J=7,3Hz,
CH —CH^CH-gH=gH-COO-)
4,02	(1H, doblete,	J=13,3Hz, C26H)
4,86	(1H, doblete,	J=13,3Hz, C26h)
7,01 ο3η?.	(1H, triplete -CH=CH-C00«)	de dobletes, J=6,9,	15,7H,

Exemplo 8

26-(4-metil-2-pentenoxloxi)milbemicina

Composto N? 8

Espectro de massa (Método EI, m/z) :

654 (M⁺), 618, 522, 414, 396

- 56 Espectro de ressonância magnética nuclear (270 MHz, CDCl^, cí ppm) :

1,07 (6h, doblete, J=6,9Hz, (CH^)₂CH-CH=CH-C00-)

3,08 (1H, doblete de tripletes, J=2,4, 9»3Hz, Cg^H)

4,72 (1H, doblete, J=13,3Hz, C^H)

4,86 (1H, doblete, J=13,3Hz, θ₂6^Η^

6,99 (1H, doblete de dobletes, J=6,5, 15,7Hz, (ch₃)₂ch-ch=ch-coo-)

Exemplo 9

26-(3-Hexenoíloxi)milbemicina

Composto N9 9

Eapectro de massa (Método EI, m/z) s

654 (M⁺), 414, 279, 195, 167

Espectro de ressonância magnética nuclear (27O MHz, CDCl^, ppm) :

3,07 (2H, doblete, J=6,4Hz,

C H -gH=CH-CH—COg-)

4,68 (1H, doblete, J=12,9Hz, C^H)

4,79 (1H, doblete, J=12,9Hz, C^H)

Exemplo 10

26-(4-pentenoíloxi)-milbemicina

Composto N9 10

Espectro de massa (Método EI, m/z) j

640 (M⁺), 604, 522, 264, 195, 167

- 57 Espectro de ressonância magnética nuclear (270 MHz,

CDCl^, cí PP®) :

3,07 (1H, doblete de tripletes, J=2,4, 9,3Hz, C^H)

4,69 (1H, doblete, J=13,7Hz, c₂₆h)

4,79 (1H, doblete, J=13,7Hz, Cg^H)

4,99-5,10 (2H, multiplete, CH^CH-CHgCI^-COO-)

Exemplo 11

26-Cinamoiloximilbemicina

Composto N2 11

Espectro de massa (Método EI, m/z) :

688 (M⁺), 652, 522, 276, 195, 167

Espectro de ressonância magnética nuclear (270 MHz, CDCl^, tí PP^m) t

3,07	(1H,	doblete de tripletes, J=2,4, 9,7Hz, C^H)
4,81	(1H,	doblete, J=13,3Hz, C26H)
4,89	(1H,	doblete, J=13,3Hz, C26H)
6,47	(1H,	doblete, J=16,lHz, Ph-CH=CH-C00-)
7,72	(1H,	doblete, J=16,1Hz, Ph-CH=CH-C00-)
Exemplo 12

26-p-Clorocinamoiloximilbemicina

Composto N? 12

Espectro de massa (Método EI, m/z) :

722 (M⁺), 704, 54o, 522, 504

-58-/

Espectro de ressonância magnética nuclear (270 MHz, CDCl^,

J PP^m) :

3,07	(1H,	doblete de tripletes, J=2,4, 8,9Hz, C2^H)
4,81	(1H,	doblete, J=13,3Hz,	C26H>
4,93	(1H,	doblete, J=13,3Hz,	C26h>
6,44	(1H,	doblete, J=16,lHz,	p-Cl-Ph-CH=CH-COO-)
7,67	(1H,	doblete, J=16,lHz,	p-Cl-Ph-CH=CH-COO~)
Exemplo 13

5-0-Propionil-2-(3-metil-2-butenoíloxi)milbemicina

Composto N2 14

Espectro de massa (Método EI, m/z)j

696 (m⁺), 6o4, 504, 414, 396, 356, 264, 195, 167,

151

Espectro de ressonância magnética nuclear (270 MHz, CDCl^, J PPm):

1,15 (3H, triplete, J=7,6Hz, CH^CHgCO-)

2,40 (2H, quartete, J=7,6Hz, CH^C^CO-)

3,07 (1H, triplete principal, J=8,0Hz, C^H)

4,11 (1H, doblete, J=6,0Hz, CgH)

4,50-4,76 (4H, multiplete, C₂^H, ^27^)

5,65-5,95 (5H, multiplete, C^H, C^, ^H, ^C10^H’ (CH₃)₂C=CH-COO-)

Exemplo 14

5-0-Etoxicarbonil-2-(3-metil-2-butenolíloxi)milbemicina A^

- 59 /

Composto N° 15

Espectro de massa (Método EI, m/z) :

712 (M⁺), 414, 396, 264, 195, 16?, 151

Espectro de ressonância magnética nuclear (270 MHz, CDCl^, ¢/ ppm) í

1,31 (3H, triplete, J=7,lHz, CH^CHgOCOO-)

3,07 (1H, doblete de tripletes, J=2,4, 8,9Hz, Cg^H)

4,14 (1H, doblete, J=6,1Hz, CgH)

4,19 (2H, quartete, J=7,lHz, CH^CÍ^OCOO-) ^,57-^,76 (4H, multiplete, C^H, C^H)

5,54 (1H, doblete de dobletes, J=l,6, 6,1Hz, C^H)

Exemplo 15

26-(3-Metil-2-butenoíloxi)-ivermectina

Composto Ne 17

Espectro d® massa (Método FAB adicionando trietanolamina, m/z):

1014, 992, 978, 962, 934, 878 , 830, 299, 194

Espectro de ressonância magnética nuclear (270 MHz, CDCl^, tT PPm) :

3,07-3,29 (3H, multiplete, C^,H, Ο^,,Η, C^H)

3,35 (1H, singlete, CgH)

3.48 (óH, singlete, dois -OCH^)

3.97 (1H, doblete, J=6,lHz, CgH)

4.49 (1H, singlete principal, C^H)

4,69 (2H, singlete principal, C^^H)

4.97 (1H, doblete principal, J=7,3Hz, C₁₅H)

- 6θ

Exemplo 16

26-(3-Metil-2-butenoíloxi) S-541A

Composto N^e 20

Espectro de massa (Método EI, m/z) :

710 (M⁺), 592, 523, 468, 448, 423, 376

Espectro de ressonância magnética nuclear (270 MHz, CDCl^, <fpP^m) :

3,75	(1H,	doblete,	J=10,9Hz,	c25h)
4,67	(1H,	doblete,	J=13,3Hz	• C26h)
4,82	(1H,	doblete,	J=13,3Hz,	c26h)
5,20	(1H,	doblete,	J=8,9Hz,	c32h)

Exemplo 17

Testes de actividade: ácaros adultos

Preparam-se soluções amostra contendo, cada uma, 0,3 ppm, 1 ppm ou 3 ppm dos compostos individuais da presente invenção, ou uma das três soluções de controle (milbemicõ. na C, uma mistura de milbemicina C^ e milbemicina Cg descrita na patente de invenção japonesa da Laid Open N2 29742-84; 26-acetoxi-milbemicina A^; ou 26-acetoxi-avermectina B^a) e 0,01$ de um agente dispersante.

Inoculou-se, nas primeiras folhas de feijão fradinho (Vigna sinensis Savi), ácaros duas manchas (Tetranychus urticae), sensíveis aos insecticidas organo-fosforados. Um dia após a inoculação pulverizou-se 7 ml da solução da amostra mencionada antes, através de um pulverizador ro- 61 tativo (Mizuho Seisakusho Co) para se obter uma área de fo-

pulverizada

ordem

Após a pulverização,

deixou-se a folha em repouso numa sala a 25°C. Após 3 dias, verificou-se se os insectos adultos tinham morrido ou não, por meio de um microscópio binocular e calculou-se a mortalidade em percentagem. 0 quadro seguinte mostra os resulta dos.

mortalidade ($)

Numero do

1 (of )	si—titiX— 100	- 100	93,0
2 («.„)	100	95,6	77,3
3 (“14)	100	100	100
5	100	100	54
6	100	100	55
7	100	100	61
8	100	100	51
9	100	100	50
10	100	100	44
11	100	100	40
12	100	100	55
14	100	100	65
15	100	100	60
16	100	100	57
17	100	100	53
20	100	100	59
C1 + C2	100	100	28
26-acetoximilbemicina A^	92	81	23
26-acetoxiavermectina B^a	83	65	15

Exemplo 18

Testes de actividade: ovos de aracnídeos

Preparam-se amostras das soluções contendo, cada uma, 1 ppm ou 3 ppm de cada um dos compostos da presente invenção ou um dos três compostos de controlo (milbemicina C, uma mistura de milbemicina e de milbemicina Cg descrita na patente de invenção japonesa, da Laid Open com o N? 29742-84; 26-acetoxi-milbemicina A^J ou 26-acetoxi-avermectina B^a) e 0,01% de um agente dispersante.

Fez-se com que aranhas fêmeas adultas de duas manchas pusessem ovos nas primeiras folhas de plantas de fei jão fradinho. Retiraram-se os aracnídeos adultos para se ob terem folhas de ensaio contendo cada uma cerca de 5θ ovos.

De uma forma semelhante à mencionada no exemplo precedente, aplicou-se a solução da amostra à folha a ensaiar. Após duas semanas de repouso numa sala a 25°C, contaram-se os ovos que não se tinham d estacado e calculou-se a taxa de ovos não destacados, em percentagem.

quadro seguinte mostra os resultados.

Numero do Composto	Actividade ovicida (%)
3 ppm	1 ppm
1 fcqq)	94	51
2 («13)	94	71
3 (“íD	95	57
5	94	45
6	62	33

Quadro (Cont,)

Número do Composto	Actividade ovicida (%)
3 ppm	1 PPm
7	77	50
8	55	23
10	53	23
14	82	41
15	63	20
16	67	21
19	43	20
C1 + C2	2,7	2,1
26-Acetoximilbemicina	31	12
26-Acetoxiavermectina B^a	4,2	2,4

Verificou-se assim que as novas milbemicinas da presente invenção exibem um elevado efeito acaricida contra ácaros adultos ou concentrações baixas, da ordem dos 0,3 ppm e possuem também uma útil actividade ovicida.

Claims (14)

1,- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral

-X-Y- representa um grupo -CHg-CHg-_t -CHg-CHOH-, -CH=CH- OU -CH₂-C(=O)-;

R^ representa um grupo metilo, etilo, isopropilo, sec-butilo ou um grupo de fórmula geral -C(CH₃)=CHR₅ na qual representa um grupo metilo, etilo ou isopropilo;

R₂ representa um grupo de fórmula geral -(CH₂)_n-C(Rg)=0(1^) (Ηθ) na qual n representa 0, 1 ou 2, Rg e R-, representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo e ^R8 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo

C^-C^, fenilo ou fenilo substituído com pelo menos um substituinte escolhido entre átomos de halogéneo ou um grupo metilo e/ou nitro;

R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo, um grupo protector do grupo hidroxi, um resíduo de ácido carboxílico formando um éster ou um resíduo de ácido carbónico formando um éster e representa um átomo de hidrogénio ou um grupo ·\. -L-oleandrosil-^ - L -oleandrosiloxi, com condição de R^ representar um átomo de hidrogénio quando o símbolo R^ representar um grupo metilo ou etilo ou um grupo de fórmula geral —C (CHg) =CHRj- no qual R₅ representa um grupo metilo, etilo ou isopropilo, caracterizado pelo facto de se esterificar um composto de fórmula geral

III na qual -X-Y-, e têm os significados definidos antes, utilizando um ácido de fórmula geral I^COOH ou um seu derivado, em que o símbolo R₂ tem o significado definido antes.

2. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I, na qual -X-Y- representa um grupo -CH₂-CH₂~, -CH₂-CHOH- ou -CH₂~C(=O)-, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos .

3. - Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações

1 ou 2, para a preparação de compostos de fórmula geral I, na qual o símbolo R^ representa um grupo metilo, etilo ou isopropilo e R^ representa um átomo de hidrogénio, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

4. - Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 ou 2, para a preparação de compostos de fórmula geral I, na qual o símbolo R^ representa um grupo isopropilo ou sec.-butilo e o símbolo representa um grupo ^l-L-oleandrosil-^-L-oleandrosiloxi, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

5.- Processo de acordo com uma qualquer das reivindica-61 ções 1 ou 2, para a preparação de compostos de fórmula geral I, na qual R^ representa um grupo de fórmula geral -C (CH^) =CHRi(na qual R^ tem o significado definido antes) e R^ representa um átomo de hidrogénio, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

6. - Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações anteriores, para a preparação de compostos de fórmula geral

I na qual R₂ representa um grupo de fórmula geral -CH=C(CH₃)(R^_Q)< na qual R^_Q representa um grupo metilo ou etilo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

7. - Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações anteriores, para a preparação de compostos de fórmula geral I, na qual R^ representa um átomo de hidrogénio, um grupo alcanoílo inferior com 1 a 4 átomos de carbono ou um grupo alcoxicarbonilo inferior com 2 a 5 átomos de carbono, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituí dos.

8. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I, na qual -X-Y- representa um grupo -GH₂~CH₂-, R^ representa um grupo metilo ou etilo, R₂ representa um grupo 2-metil-l-propenilo e R^ e representam átomos de hidrogénio, caracterizado pelo facto de se utilizar compos-68- tos iniciais correspondentemente substituídos.

9.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de:

26-(3-metil-2-butenoilox ikmilbemicina A^;

26- (3-metil-2-pentenoil ox i)milbemicina A^;

26- (3-metil-2-butenoiloxi)inilbemicina A^;

26-(3-metil-2-pentenoiloxi)milbemicina A^;

26-(2-butenoiloxi)milbemicina A^;

26-(2-metil-2-butenoiloxi)milbemicina A^;

26-(2-hexenoiloxi)milbemicina A^;

26-(4-metil-2-pentenoiloxi)milbemicina A₄;

26-(3-hexenoiloxi)milbemicina A^;

26-(4-pentenoiloxi)-milbemicina A^;

26-cinamoiloximilbemicina A^;

26-p-clorocinamoiloximilbemicina A^;

5-O-t-butildimetilsilil-2-(3-metil-2-buteniloxi)-milbemicina A^;

5-0-propionil-2-(3-metil-2-butenoiloxi)-milbemicina A₄;

5-0-etoxicarbonil-2-(3-metil-2-butenoiloxi)-milbemicina A₄;

26-(3-metil-2-butenoiloxi)milbemicina D;

26-(3-metil-2-butenoiloxi)-ivermectina

26-(3-metil-2-butenoiloxi)-avermectina ;

23-deoxi-26-(3-metil-2-butenoiloxi) S-541A;

26-(3-metil-2-butenoiloxi) S-541A; e

23-ceto~26-(3-metil-2-butenoiloxi) S-541A, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

10.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de:

26-(3-metil-2-butenoiloxi)-milbemicina A^;

26-(3-metil-2-pentenoiloxi)-milbemicina A^;

26-(3-metil-2-butenoiloxi)-milbemicina A^;

26-(3-metil-2-pentenoiloxi)-milbemicina A^;

26-(2-hexenoiloxi)-milbemicina A^;

26- (4-metil-2-pentenoiloxi)-milbemicina

26-(4-pentenoiloxi)-milbemicina A^; .

26-cinamoiloximilbemicina A^;

5-0-propionil-2-(3-metil-2-butenoiloxi)-milbemicina A^;

5-0-etoxicarbonil-2-(3-metil-2-butenoiloxi)-milbemicina A^;

26-(3-metil-2-butenoiloxi)-milbemicina D;

26- (3-metil-2-butenoiloxi)-ivermectina Β^_&;

26-(3-metil-2-butenoiloxi)-avermectina B₁ ;

23-deoxi-26-(3-metil-2-butenoiloxi) S-541A;

26-(3-metil-2-butenoiloxi) S-541A; e

23-ceto-26-(3-metil-2-butenoiloxi) S-541A, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

11.-70-

11.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de:

26-(3-metil-2-butenoiloxi)-milbemicina A^;

26-(3-metil-2-pentenoiloxi)-milbemicina A^;

26-(3-metil-2-butenoiloxi)-milbemicina A^;

26-(3-metil-2-pentenoiloxi)-milbemicina A^;

26-(3-metil-2-butenoiloxi)milbemicina D;

26- (3-metil-2-butenoiloxi)-ivermectina

26- (3-metil-2-butenoiloxi) -avermectina B^_a;

23-deoxi-26-(3-metil-2-butenoiloxi) S-541A;

26-(3-metil-2-butenoiloxi) S-541A; e

23-ceto-26-(3-metil-2-butenoiloxi) S-541A, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

12. - Processo para a preparação de um composto desi- gnado por milbemicina milbemicina ^ou milbemicina ^4, caracterizado pelo facto de se fazer fermentar um microrganismo produtor da estirpe Streptomyces e de se isolar o composto desejado.

13, - Processo de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo facto de se utilizar como microrganismo produtor Streptomyces hygroscopicus sub-espécie aureolacrimosus SANK 60286 FERM BP-1190.

14.-71

14.- Processo para a preparação de uma composição parasiticida, caracterizado pelo facto de se misturar uma quantidade efectiva de um composto de fórmula geral na qual

-X-Y- representa um grupo -ΟΙ^-ΟΕ^-,-ΟΙ^-ΟΗΟΗ-,-ΟΗ^Ηou -Cllg-C (=0) - ;

representa um grupo metilo, etilo, isopropilo ou sec*-butilo ou um grupo de fórmula geral -C (CH^) =CHRç. na qual Rj. representa um grupo metilo, etilo on isopropilo;

R₂ representa um grupo de fórmula geral -(CHg)_n~C(Rg)=C(R^XRg) na qual n representa 0,1 ou 2, R_g e R_? representam, cada um, um ãtomo de hidrogénio ou um grupo metilo e Rg representa um ãtomo de hidrogénio, um grupo alquilo C^-C^, fenilo ou fenilo substituído com pelo menos um substituinte escolhido entre átomos de halogéneo ou grupos-metilo e/ou nitro;

Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo, um grupo protector do radical hidroxi, um resíduo de ácido carbónico formando um éster; e representa um ãtomo de hidrogénio ou um grupo ot-L-72

-oleandrosil-^-L-oleandrosiloxi, com a condição de o símbolo R₄ representar um átomo de hidrogénio quando representa um grupo metilo, etilo ou um grupo de fórmula -CfCH^JsCHR^ na qual R^ representa um grupo metilo, etilo ou isopropilo, quando preparado pelo processo de acordo com a reivindicação 1, com uma substância veicular ou um diluente aceitáveis sob o ponto ' de vista farmacêutico, agrícola, veterinário ou da horticultura.