HU198723B - Process for producing macrolide compounds and pharmaceutical compositions comprising such compounds as active ingredient, and plant protectives comprising such compounds - Google Patents

Process for producing macrolide compounds and pharmaceutical compositions comprising such compounds as active ingredient, and plant protectives comprising such compounds Download PDF

Info

Publication number
HU198723B
HU198723B HU875602A HU560287A HU198723B HU 198723 B HU198723 B HU 198723B HU 875602 A HU875602 A HU 875602A HU 560287 A HU560287 A HU 560287A HU 198723 B HU198723 B HU 198723B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
methyl
milbemycin
butenoyloxy
formula
compounds
Prior art date
Application number
HU875602A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT45982A (en
Inventor
Takao Okazaki
Shuji Takahashi
Seigo Iwado
Keiji Tanaka
Toshiaki Yanai
Hisaki Kajino
Original Assignee
Sankyo Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sankyo Co filed Critical Sankyo Co
Publication of HUT45982A publication Critical patent/HUT45982A/hu
Publication of HU198723B publication Critical patent/HU198723B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
    • C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N49/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, containing compounds containing the group, wherein m+n>=1, both X together may also mean —Y— or a direct carbon-to-carbon bond, and the carbon atoms marked with an asterisk are not part of any ring system other than that which may be formed by the atoms X, the carbon atoms in square brackets being part of any acyclic or cyclic structure, or the group, wherein A means a carbon atom or Y, n>=0, and not more than one of these carbon atoms being a member of the same ring system, e.g. juvenile insect hormones or mimics thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/22—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces
    • Y10S435/898—Streptomyces hygroscopicus

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás új makrolid vegyületek és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket tartalmazó készítmények értékes akaracid, inszekticid és féregirtó hatásúak, mely hatásokat a következőkben általában mint parazitaelleni hatásokat fogjuk említeni. A találmány ilyen vegyületeket tartalmazó növényvédőszerekre is vonatkozik.
A találmány szerinti új vegyületek többek között az ismert milbemicinekkel és avermektinekkel kémiailag rokon vegyületek. 16-tagú makrolid gyűrűt mint alapszerkezelet tartalmazó ismert vegyületek közül számos olyan osztály is- 13 meretes, amelybe tartozó vegyületeket különböző mikroorganizmusok fermentálásával vagy ilyen természetes fermentációs termékek kémiai átalakítása útján félszintetikusan állítanak elő és amelyek akaricid, inszekticid, féregirtó és más tipusú antiparazita hatásúak. A milbemicineket és az avermektineket az ilyen ismert vegyületek két különböző csoportjának tekinthetjük, azonban számos másfajta ismert vegyület is van, amelyeket különböző nevekkel vagy kódszámokkal azonosítanak. Az ezeknek a különböző makrolid vegyületeknek a nevét általában azoknak a mikroorganizmusoknak a nevéből vagy kódszámából vesszük, amelyek ezeknek a csoportoknak a természetben előforduló tagjait képesek előállítani, ’θ és ezeket a neveket rendszerint úgy használják, hogy az azonos osztályba tartozó összes, kémiailag rokon vegyületre kiterjedjenek. Ennek eredményeképpen nincsen olyan standardizált szisztematikus nomenklatúra, amely ezekre a vegyü- letekre általánosságban vonatkozna.
Mindenféle félreértés megelőzése céljából a következőkben olyan standardizált nomenklatúra-rendszert fogunk használni, amely arra a hipotetikus alapvegyületre van alapítva, amelyet az ™ (A) általános képlettel jellemzünk. Mindenféle kétségek megelőzése céljából az (A) képlet a makrolid gyűrűrendszer azon helyzeteiben számozással van ellátva, amely helyzetek a legfontosabbak a következőkben ismertetendő találmány ’5 szerinti vegyületek szempontjából. A 4-helyzetfl metilcsoport szénatomja a 26-os számot kapta.
A természetes úton előállítható milbemicinek tehát a makrolid vegyületek egyik csoportját alkotják. Az A3 és A4 kódszámú milbemicinek a 50 3.950.360. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásból ismertek. A milbemicin D a
4.346.171. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásból ismeretes, amelyben B-41D vegyületként említik. Ezek a vegyületek is leírhatók a fenti (A) képlettel, amelynek a 25helyzete ezeknek a vegyületeknek az esetében metil-, etil- vagy izopropilcsoporttal helyettesített, annak megfelelően, hogy a milbemicin A3, milbemicin A4 vagy milbemicin D vegyületről van szó. A 25-helyzetben szek-butilcsoporttal helyettesített milbemicin-analógot a 4.173.571. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban ismertetik.
A későbbiekben az eredeti milbemicinek különböző származékait állították elő és vizsgálták ezeknek a származékoknak a hatását. Az 5-helyzetben észterezett milbemicineket ismertetnek a
4.201.861., 4.206.205., 4.173.571., 4.171.314.,
4.203.976., 4.289.760., 4.457.920., 4.579.864. és
4.547.491. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban, a 8184., 102.721.,
115.930., 142.969., 180.539. és 184.989. számú publikált európai szabadalmi leírásokban, valamint az 57 - 120589. és 59- 16894. számú publikált japán szabadalmi bejelentésekben.
A 4.423.209. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásból 13-hidroxi-5-oxo-milbemicin-származékok váltak ismertté. A 4.547.520. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban és a 203.832. számú európai szabadalmi leírásból milbemicin-5-oximszármazékokat ismertetnek. A 2.168.345. számú nagy-britanniai szabadalmi leírásból az 5-helyzetű hidroxil- vagy észterezett hidroxilcsoporttal kombinációban a 13-helyzetben karboxil- vagy észterezett karboxilcsoportot hordozó milbemicin-származékok ismeretesek.
Miként a milbemicinek, az avermektinek is ugyanebből a 16-tagú gyűrűt tartalmazó makrolid vegyületből származtathatók le. Avermektineket ismertetnek például a J. Antimicrob. Agents Chemother., 15(3),361-367 (1979) és a J. Am. Chem. Soc., 103, 4216 (1981) szakirodalmi helyeken. Ezek a vegyületek a fenti (A) képlettel jellemezhetők, azonban a 13-helyzetben 4’-(alfa-L-oleandrozil)-alfa-L-oleandrozil-oxi-csoport helyezkedik el. A 25-helyzet izopropilcsoporttal vagy szek-butil-csoporttal lehet helyettesítve, és/vagy a 22- és 23-helyzetek között szénszén kettőskötés van, vagy pedig a 23-helyzetben hidroxilcsoport kapcsolódik. Az avermektinek a következőképpen definiálhatók:
avermektin C22 ~ C23 R25 R23 r5
A|3 kk szek-Bu H OMe
A]b kk i-Pr H OMe
A2a ek szek-Bu OH OMe
A2b ek i-Pr OH OMe
- Bta kk szek-Bu H OH
B]b kk i-Pr H OH
B2a ek szek-Bu OH OH
B2b ek i-Pr OH OH
HU 198723 Β
A fenti táblázatban 25 helyzetű helyettesítő, R23 23-helyzetű helyettesítő és R5 5-helyzetű helyettesítő, kk a 22- és 23-helyzetek közötti kettőskötésre utal és ek a 22- és 23-helyzetek közötti egyszeres kötésre utal.
Az avermektin A2a, A2b, B2a és B2b 23-oxoszármázé kai a 4.289.760. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásból ismertek. A 22,23-dihidro-avermektinek a 22- és 23-helyzetek közötti kettőskötés redukálásával állíthatók elő, illetve a 4,199.569. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban kerültek ismertetésre. Az avermektinek aglükon-származékai (amelyek milbemicin-analógok) a szakirodalomban néha mint C-076 vegyületek kerülnek említésre, és ezeknek a vegyületeknek különböző származékaik ismeretesek. így például a 4.201.861. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban olyan származékokat ismertetnek, amelyek a 13-helyzetben rövidszénláncú alkanoilcsoporttal vannak helyettesítve.
A 74.758. számú európai szabadalmi leírásból olyan avermektin-származékok ismeretesek, amelyek a 4-helyzetben lévő metilcsoporton képzett származékok. így ebben a leírásban a 4-metilcsoport hidroxi-metilcsoporttá alakítását ismertetik, a legkülönbözőbb oxi-metil-származékok, például az acetil-oxi-metil-, benzoil-oxi-metil- és más karbonil-oxi-metil-származékok előállításával együtt.
A 170.006. számú publikált európai szabadalmi leírásból fermentáció útján előállított bioaktív vegyületek olyan családját ismertetik, amelyeket kollektiven az LL — F28249 kódszámmal azonosítanak. Ezek közül néhány vegyületnek olyan 16-tagú makrolid szerkezete van, amely megfelel a fenti (A) képletnek, a 23-helyzetben hidroxilcsoporttal és a 25-helyzetben 1-metil-l-propenil-, 1-metil-l-butenil- vagy 1,3-dimetil-l-butenilcsoporttal helyettesítve. Ezeknél a vegyületeknél az 5-helyzetű hidroxilcsoport metoxicsoporttal lehet helyettesítve.
A 2.166.436. számú brit szabadalmi leírásban S —541 kódnév alatt azonosított, azonos vagy hasonló vegyületeket ismertetnek. Az S-541 vegyületek 23-oxo- és 23-dezoxi-származékai a 904.709. számú belga szabadalmi leírásból ismertek. A 215.654, számú európai szabadalmi leírásból a 22- és 23-helyzetek között szén-szén kettőskötést tartalmazó S —541 származékok ismertek. A 237.341. számú európai szabadalmi leírásból az S-541 vegyületek 26-hidroxi- és 26(1-4 szénatomot tartalmazó)alkanoil-oxi-származékai, valamint 23-oxo- és 23-dezoxi-származékai ismeretesek.
A 2.176.182. számú publikált angol szabadalmi bejelentésből a makrolid antibiotikumoknak egy másik olyan csoportja ismeretes, amely megfelel a fenti (A) képletnek, az 5-heIyzetben adott esetben helyettesített hidroxilcsoportot, a 23helyzetben adott esetben helyettesített hidroxilcsoportot vagy oxocsoportot és a 25-helyzetben alfa-elágazó alkenilcsoport ot tartalmazva.
A rokon makrolid-származékok egy további csoportját ismertetik a 62 — 29590. számú publikált japán szabadalmi bejelentésben. Ezeknek a vegyületeknek a szerkezete megfelel a fenti (A) szerkezetnek, az 5-heIyzetben hidroxi- vagy metoxicsoportot tartalmazva. A gyűrű 13-helyzetében 4’-(alfa-Loleandrozil)-aífa-L-oleandrozi]-oxi-csoporttal van helyettesítve, miként az avermektineknél, továbbá a 22- és a 23-helyzetek között szén-szén kettőskötés lehet vagy pedig alternatív módon a 23-helyzet hidroxilcsoporttal lehet helyettesítve. A 25-helyzetű helyettesítő olyan típusú, amely nem található meg a természetes úton előállítható avermektineknél és miibe micineknél. így például ez a helyettesítő különböző alfa-elágazó alkilcsoport, alkenilcsoport, alkinilcsoport, alkoxi-alkilcsoport, alkil-tio-alkilcsoport és cikloalkil-alkil-csoport, illetve cikloalkilcsoport, cikloalkenilcsoport vagy heterociklusos csoport lehet. Ezt a 25-helyzetű helyettesítőt úgy viszik be a molekulába, hogy az avermektint termelő mikroorganizmussal végzett tenyésztés útján kapott fermentléhez hozzáadják a megfelelő karbonsavat vagy az utóbbi valamelyik reakcióképes származékát.
A fentiekben ismertetett, milbemicinekkel rokon makrolid vegyületek mind-mind arról ismertek, hoy antibiotikus, féregirtó, ektoparaziticid, akaricid vagy más peszticíd hatások közül eggyel vagy többel rendelkeznek. Mindazonáltal folyamatosan fennáll az igény olyan vegyületekre, amelyek a kártevők egy vagy több osztálya vonatkozásában módosított hatást mutatnak.
Felismertük, hogy a milbemicin-származékok aktivitása módosítható, ha a 4-helyzetben a 4-metilcsoport helyére telítetlen észtercsoportot juttatunk be, és így a milbemicinek és rokon makrolidok 26-alkenil-oxi-származékait állítjuk elő.
A találmány tárgya tehát eljárás az (I) általános képletü makrolid-vegyületek — a képletben
-X-Y- jele-X-Y- jelentése -CH2-CH2- vagy CH2-CH0H- csoport,
R1 jelentése metil-, etil-, izopropil-, szek-butil- vagy 'C(CHj) =CHR5 csoport, és az utóbbiban R3 jelentése metil-, etil- vagy izopropilcsoport,
R2 jelentése -(CH2)n-C)R6) = C(R7)(R8) általános képletü csoport, és ebben a képletben n értéke 0, 1 vagy 2, R6 és R7 egymástól függetlenül hidrogénatomot vagy metilcsoportot jelent és R8 jelentése hidrogénatom vagy 1 - 4 szénatomot tartalmazó alkilcsoport, vagy adott esetben halogénatommal helyettesített fenilcsoport, azzal a megkötéssel, hogy ha R8 jelentése 1—4 szénatomos alkilcsoport, akkor az -(CH2)n-C(R6) = C(R7)(R8) általános képletü alkenilcsoport legfeljebb 8 szénatomot tartalmaz,
R3 jelentése hidrogénatom, 2 — 5 szénatomot tartalmazó alkanoil-, 2 — 5 szénatomot tartalmazó alkoxi-karbonil- vagy tri(l — 4 szénatomot tar(almazó)alkil-szililcsoport és
R4 jelentése hidrogénatom vagy alfa-L-oleandrozil-alfa-L-oleandrozil-oxicsoport, azzal a megkötéssel, hogy R4 jelentése hirogénatom, ha R1 jelentése metil-, etil- vagy -C(CH3) “CHR3
-3HU 198723 Β csoport és az utóbbiban RJ jelentése metil-, etilvagy izopropilcsoport — előállítására.
A találmány tárgya továbbá eljárás olyan parazitaelleni készítmények előállítására, amelyeknek például féregirtó, atkairtó vagy rovarirtó hatása van. A készítmények az (I) általános képletű hatóanyagon kívül gyógyászatilag, mezőgazdaságilag, állatorvosi célokra vagy kertgazdálkodási célokra hasznosítható hordozó- vagy hígítóanyagot és egyéb segédanyagot tartalmazhatnak.
A találmány szerinti eljárással előállítható készítmények felhasználhatók tehát emberek, állatok és növények kezelésére vagy megvédésére paraziták, például atkák, férgek és rovarok okozta károsodás megszüntetésére, illetve megelőzésére, például úgy, hogy a fertőzött emberre, állatra, növényre vagy növényi magra vagy ezek környezetébejuttathatjuk a készítményt.
Visszatérve az (I) általános képletre, ha R2 jelentése -C(CHj) = CHR5 általános képletű csoport, akkor R2 közelebbről l-metil-1-propenil-,
1-metil-l-butenil- vagy 1,3-dimetil-l-butenilcsoportot jelenthet.
Ha R3 jelentése trialkil-szililcsoport, akkor példaképpen az ilyen szililcsoportokra megemlíthetjük a trimetil-szilil-, trietil-szilil-, tripropil-szilil-, triizopropil-szilil-, diizopropil-metil-szilil- és a terc-butil-dimetil-szililcsoportot. Ezek közül a csoportok közül a trimetil-szilil-, trietil-szilil- és a terc-butil-dimetil-szililcsoport az előnyös.
Előnyösek azok az (I) általános képletű vegyületek, amelyek képletében (a) -X-Y- jelentése -CH2-CH2- vagy -CH2-CHOH képletű csoport, (b) (i) R‘ jelentése metil-, etil- vagy izopropilcsoport, és R4 jelentése hidrogénatom, vagy (b) (ii) R1 jelentése izopropil- vagy szek-butil10 csoport és R4 jelentése alfa-L-oleandrozil-alfa-L-oleandrozíl-oxicsoport, vagy (b) (iü) R1 jelentése -C(CH3) = CHR5 általános képletű csoport (ebben a képletben R5 jelentése a korábban megadott) és R4 hidrogén15 atomot jelent, (c) R2 jelentése -CH = C(CH3)(R10) általános képletű csoport, amelyben R10 metil- vagy etilcsoportot jelent, (d) R3 jelentése hidrogénatom, 2 — 4 szénato20 mot tartalmazó alkanoilcsoport (így például acetil- vagy propionilcsoport) vagy 2 — 5 szénatomot tartalmazó alkoxi-karbonilcsoport (így például etoxi-karbonilcsoport).
Különösen előnyösek azok a vegyületek, amelyek (I) általános képletében -X-Y- jelentése CH^-CH2-, R1 jelentése metil- vagy elilcsoport, R2 jelentése 2-metil-l-propenilcsoport, továbbá R3 és R4 jelentése hidrogénatom.
Az (I) általános képletű vegyületek közül előnyös vegyületeket sorolunk fel a következő táblázatban:
A vegyület sorszáma X-Y R1 r2 r3 r4
1. -ch2-ch2 Me -CH = C(CH3)2 H H
2. -ch2-ch2 Me — CH = C(CH3)(C2H5) H H
3. -ch2-ch2 Et -CH = C(CH3)2 H H
4. -ch2 ch2 Et — CH = C(CH3)(C2H5) H H
5. -ch2-ch2 Et -ch=chch3 H H
6. -ch2-ch2 Et -ch = ch3)=chch3 H H
7. -ch2-ch2 Et -CH==CH(CH2)2CH3 H H
8. -ch2-ch2 Et -CH = CHC(CH3)2 H H
9. -ch2-ch2 Et -ch2ch=chc2h5 H H
10. -ch2-ch2 Et -ch2ch2ch=ch2 H H
11. -ch2-ch2 Et — CH = CH-Fenil H H
12. -ch2-ch2 Et - CH *= CH-4-klór-fenil H H
13. -ch2-ch2 Et —CH = C(CH3)2 BMS H
14. -ch2-ch2 Et — CH = C(CH3)2 COC2H5 H
15. -ch2ch2 Et -CH = C(CH3)2 COOC2H3 H
16. -ch2-ch2 izo-Pr -CH = C(CH3)2 H H
17. -ch2-ch2 szek-Bu -CH»C(CH3)2 H alfa
18. -CH = CH- szek-Bu -CH = C(CH3)2 H alfa
19. -CH2-CH2 DMB -CH-C(CH3)2 H H
20. -ch2-choh- DMB -CH“C(CH3)2 H H
21. -CH2-C(»O)- DMB -CH«C(CH3)2 H H
HU 198723 Β
Ebben a táblázatban:
BMS: terc-butil-dimetil-szililcsoport, alfa: alfa-L-oleandrozil-alfa-L-oleandrozil-oxicsoport,
DMB; 1,3-dimetil-l-butenílcsoport.
A táblázatban felsorolt vegyületeket a következőképpen nevezzük:
1. 26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin A3
2. 26-(3-Metil-2-pentenoil-oxi)-mÍlbemicin A3
3. 26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin A3
4. 26-(3-MetÍl-2-pentenoil-oxi)-milbemicÍn A3
5. 26-(2-Butenoil-oxi)-mÍlbemicin A4
6. 26-(2-Metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin A4
7. 26-(2-Hexenoil-oxi)-milbemicin A4
8. 26-(4-Metil-2-pentenoÍl-oxi)-milbemicin A4
9. 26-(3-Hexenoil-oxi)-milbemicin A4
10. 26-(4-Pentenoil-oxi)-milbemicin A4
11. 26-(Cinnamoil-oxi)-milbemicin A4
12. 26-(4-Klór-cinnamoil-oxi)-milbemicin A4 • 13, 5-(O-terc-Butil-dimetil-szilil)-2-(3-metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin A4
14. 5-(0-Propionil)-2-(3-metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin A4
15. 5-(O-Etoxi-karbonil)-2-(3-metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin A4
16. 26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin D
17. 26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-ivermektin Bla
18. 26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-avermektin Bla
19. 23-Dezoxi-26-(3-metil-2-butenoil-oxi)-S-541A
20. 26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-S-541A
21. 23-Oxo-26-(3-metil-2-butenoil-oxi)-S-541A.
Ezek közül a vegyületek közül előnyösek az 1„ 2„ 3., 4., 7, 8., 10., 11, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20. és 21. számú vegyületek és különösen előnyösek az 1, 2, 3, 4, 16, 17, 18, 19, 20. és 21. számú vegyületek.
Az (I) általános képletű vegyületek az 1. reakcióvázlatban bemutatott módon, az A. és B lépésben állíthatók elő. Az 1. reakcióvázlatban -XY és R1 — R4 jelentése a korábban megadott.
Az A. lépésben tehát a 4-metilcsoportot, azaz a milbemicin-molekuia 4-helyzetében kapcsolódó metilcsoportot szelektív oxidálásnak vetjük alá és így 4-hidroxi-metilcsoporttá alakítjuk át. Ez a reakció nunt Sharpless reakció vagy Sharpless oxidáció ismeretes, és szelén-dioxiddal és terc-butil-hidroperoxiddal végrehajtott allil-oxidációként fogható fel. A Sharpless reakciót már korábban is alkalmazták a (II) általános képletű makrolidok mint típus esetében. Ilyen vonatkozásban utalunk a 74758. számú európai szabadalmi leírásra és a 237.341. számú európai szabadalmi leírásra. Az A. lépés tehát az ezekben a leírásokban ismertetett körülményekhez hasonló körülmények között hajtható végre.
Az A. lépésben tehát valamely (II) általános képletű vegyület 4-metilcsoportját terc-butilhidroperoxiddal oxidáljuk katalitikus mennyiségi szelén-dioxid jelenlétében, amely vegyület oxidálja a 4-metilcsoportot 4-hidroxi-metilcsoporttá és maga redukálódik. A terc-butil-hidroperoxid visszaoxidálja a redukálódott szelénvegyületet szelén-dioxiddá további oxidálás céljából. Ilyen módon csak csekély, katalitikus menynyiségű szelén-dioxidra van szükség.
A reagáltatást olyan közömbös oldószerben hajtjuk végre, amely nem érzékeny oxidációra. Előnyösen metílén-kloridot használunk, bár használhatunk etil-acetátot, tetrahidrofuránt és más oldószereket is. A reakcióhőmérséklet nem lényeges, például 0 °C és 50 °C közötti lehet. Előnyösen szobahőmérsékleten dolgozunk. A reakció általában 1 — 48 órán belül teljes, és az előnyös reakciókörülmények között jellegzetesen mintegy 24 órás reakció elégségesnek bizonyul
A (II) általános képletű vegyületeknél az R3 csoport előnyösen metilcsoport, hidroxi-védőcsoport vagy észterképző karbonsav vagy szénsav maradéka, amely mint védőcsoport funkcionál. Ha a (II) általános képletű vegyületben és ezáltal a (III) általános képletű köztitermékben R3 hidrogénatomot jelent, akkor előnyösen ezt a hidrogénatomot az említett csoportok valamelyikévé alakítjuk át a B. lépés végrehajtását megelőzően, a korábbiakban ismertetett módszerek valamelyikével.
A B lépés során a (III) általános képletű köztitermék 26-helyzetű hidroxilcsoportját valamely R2COOH általános képletű karbonsavval — a képletben R2 jelentése a korábban megadott — vagy ennek valamelyik reakcióképes származékával észterezzük önmagában ismert módon.
Az R2COOH általános képletű karbonsavak reakcióképes származékaiként használhatunk például savhalogenideket, így például savkloridot, savbromidot vagy savjodidot; savanhidrideket; vegyes savanhidrideket; reakcióképes észtereket, így például pentaklór-fenilésztereket vagy
4-nitro-fenilésztereket; és reakcióképes savamidokat.
A B. lépést előnyösen oldószer jelenlétében hajtjuk végre. Az oldószer minősége nem lényeges, feltéve, hogy a reakciót nem befolyásolja károsan. Az alkalmazhaló oldószerek közé tartoznak alifás vagy aromás, adott esetben halogénezett szénhidrogének, így például hexán, petroléter, benzol, toluol, xilol, kloroform, metilénklorid vagy klór-benzol; éterek, így például dietií-éter, tetrahidrofurán vagy dioxán és észterek, így például a metil-acetát vagy az etil-acetát. A reakció széles hőmérséklettartományban végbemegy, a konkrét esetben alkalmazott hőmérséklet nem lényeges jellemző. Célszerűen 0 ’C és 100 ’C, előnyösen 20 ’C és 50 ’C között dolgozhatunk' A reakcióidő számos tényezőtől függően változhat, általában azonban 30 perc és 3 óra közötti idő elégségesnek bizonyulhat.
Egy mól (III) általános képletű vegyületre vonatkoztatva általában 1 — 10 mólekvivalens, előnyösebben 1,5—4 mólekvivalens savat vagy ennek reakcióképes származékát használjuk.
HU 198723 Β
Ha magát a savat használjuk, akkor a reagáltatást előnyösen egy dehidratálószer, például diciklohexil-karbodiimid (DCC), etil-polifoszfát (PPE), mezitilén-szulfonil-triazolid (MST), ptoluol-szulfonsav vagy kénsav, különösen előnyösen DCC jelenlétében hajtjuk végre. A dehidratálószer mennyisége rendszerint 1 — 5 mólekvivalens, előnyösen 1,5 — 4 mólekvivalens. Ha DCC-t használunk, akkor a reagáltatást célszerűen katalitikus mennyiségű bázis, például piridin vagy
4-pirrolidino-piridin jelenlétében hajtjuk végre.
Ha a sav reakcióképes származékát használjuk, akkor a reagáltatást előnyösen egy bázis, különösen előnyösen egy szerves bázis, például trietil-amin, Ν,Ν-dimetil-anilin, piridin, 4-(dimetilamino)-piridin, l,5-diaza-biciklo/4.3.0/non-5-én (DBN) vagy l,8-diaza-biciklo/5.4.0/undec-7-én (DBU) jelenlétében hajtjuk végre. A bázist rendszerint 2-8 mólekvivalens mennyiségben használjuk.
Ha a B. lépésben kapott reakciótermék szililcsoportot hordoz mint védőcsoportot, könnyen eltávolítható az 5-hidroxilcsoporttá való visszaalakítás céljából. Az eltávolítást végezhetjük egy híg ásványi savat, például híg hidrogén-kloridot vagy híg kénsavat; egy szerves savat, például hangyasavat vagy ecetsavat; p-toluol-szulfonsav és letrabutil-ammónium-fluorid keverékét vagy hidrogén-fluorid és piridin keverékét használva. Ezek közül a híg sósav, továbbá a hidrogén-fluorid és a piridin elegye előnyös. A savat rendszerint fölöslegben használjuk, előnyösen 2-100 mólekvivalens mennyiségben.
A védőcsoport lehasítását előnyösen oldószer jelenlétében hajtjuk végre. Az oldószer minősége nem lényeges, feltéve, hogy a reakcióra nem hat károsan. A célszerűen alkalmazható oldószerek közé tartoznak alifás vagy aromás és adott esetben halogénezett szénhidrogének, például a hexán, petroléter, benzol, toluol, kloroform, metilén-klorid vagy diklór-etán; éterek, például dictil-éter, tetrahidrofurán, dioxán vagy dimetoxietán; alkoholok, például metanol vagy etanol; nitrilek, például acetonitril vagy propionitril; és ezeknek az oldószereknek az elegyei.
A reakció széles hőmérséklettartományban végbemegy és így a pontos hőmérséklet nem lényeges jellemző. Általában azonban célszerűen — 20 °C és +70 °C közötti hőmérsékleten, előnyösebben —10 °C és + 30 °C közötti hőmérsékleten dolgozunk. A reakcióidő számos tényezőtől függően változhat; általában azonban 30 perc és 24 óra, előnyösen 30 perc és 6 óra közötti idő elegendő lehet.
Az R3 helyén hidrogénatomot hordozó (I) általános képletű vegyületek kívánt esetben utólagosan észterezhetők egy karbonsavval vagy szénsavval vagy ezek valamelyik reakcióképes származékával az 5-hclyzetben észterezett termék előállítása céljából.
A reakciósorozat lépéseinek befejezése után a képződött terméket a reakcióelegyből szokásos módon különítjük el és kívánt esetben hagyományos módon további tisztításnak vetjük alá, például különböző kromatográfiás módszerekkel, elsősorban oszlopkromatografálással. Egyes esetekben az (I) általános képletű vegyületeket termékelegyek formájában kapjuk, nincs azonban mindig szükség az egyes vegyületek elkülönítésére.
A kiindulási (II) általános képletű vegyületek ismert vegyületek vagy pedig a szakirodalomból ismert módon állíthatók elő. Vonatkozó szakirodalmi publikációként utalunk az 1.390.336. számú brit szabadalmi leírásra, a 57 — 120589. számú japán közrebocsátási iratra (kokai), a J. Am. Chem. Soc., 103. 4216 (1981) számú szakirodalmi helyre, a 4.199.569. és 4.289.760. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokra, a 2.166.436. számú brit szabadalmi leírásra, a 215.654. számú európai szabadalmi leírásra, a 904.709. számú belga szabadalmi leírásra, a 32.034. számú amerikai újra kiadott szabadalmi leírásra (reissue), a 4.457.920. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásra és a 2615. számú európai szabadalmi leírásra.
Az R3 helyén hidrogénatomot tartalmazó vegyületeknek R3 helyén a fentiekben említett csoportok valamelyikét tartalmazó vegyületekké való átalakítására szokásos módszereket alkalmazhatunk. Az átalakítást előnyösen az A. és B. lépések végrehajtását megelőzően foganatosítjuk. Az 5-hidroxilcsoport metilezését például a 237.341. számú európai szabadalmi leírásban ismertetett módon hajthatjuk végre.
Az 5-hidroxilcsoporlnak egy védőcsoporttal, például szililcsoporttal való megvédését úgy hajthatjuk végre, hogy egy szilil-halogeniddel oldószerben és előnyösen egy bázis jelenlétében hajtjuk végre a reagáltatást.
A szililezéshez használt oldószer vonatkozásában nincs megkötés feltéve, hogy a reakció során közömbösen viselkedik. Az e célra előnyösen használható oldószerek közé tartoznak szénhidrogének, például a hexán vagy a benzol; klórozott szénhidrogének, például a metilén-klorid vagy a kloroform; éterek, például a dietil-éter; és poláros oldószerek, például a tetrahidrofurán, acetonitril, dimetil-formamid, dimetil-acetamid, dimetil-szulfoxid vagy a piridin.
Az előnyös sziülezőszerekre példaképpen az Si(R’)(R”)(R”’)Z általános képletű vegyületeket - a képletben R’, R” és R’” egymástól függetlenül 1 - 4 szénatomot tartalmazó alkil-, benzil- vagy fenilcsoportot jelent és Z jelentése halogénion vagy más alkalmas kation - említhetjük. Az előnyös sziülezőszerekre példaképpen a trialkil-szilil-kloridokat, triaril-sziül-kloridokat és a szilil-trifluor-metán-szulfonátokat említhetjük. A sziülezést jellegzetesen bázis jelenlétében hajtjuk végre. A bázis milyensége nem lényeges, de általában a szerves bázisok előnyösebbek a szervetlen bázisoknál. A hasznosítható bázisokra példaképpen megemlíthetjük a lítium-szulfidot, imidazolt, piridint, trietil-amint és dimetil-amino-piridint, különösen az imidazolt.
Egyes szililezőszerek, például a hexametil-diszilazán és a dietil-lrimetil-sziül-amin egyidejűleg mint szililezőszer hatnak és saját maguk bázist is képeznek, így jó eredményekkel használhatók.
-6HU 198723 Β
Az 5-hidroxilcsoportnak karbonsavval vagy szénsavval való észterezését a fenti B. lépésnél ismertetett módon hajthatjuk végre.
Az -X-Y- általános képletű csoport korábban megadott jelentésén belül az egyik csoportnak 5 egy másik csoporttá alakítására is ismertek módszerek, így például a 74758. számú európai szabadalmi leírásból.
A természetben előforduló kiindulási anyagok 10 lehetnek egyetlen izolált vegyületek vagy két vagy több vegyület elegyei, amelyeket elkülönítés nélkül felhasználhatunk. Minthogy például a milbemicin A3 és A4 elegyei könnyen hozzáférhetők és könnyen felhasználhatók, az ilyen ele- 15 gyekkel a találmány szerinti eljárást végrehajthatjuk előzetes elkülönítés nélkül.
Az (I) általános képletű vegyületek közül egyesek előállíthatók fermentációs úton is.
így tehát a találmány tárgya továbbá fermen- 20 tációs eljárás olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, amelyek képletében -X-Y- jelentése -CH2-CH2- csoport, R3 és R4 hidrogénatomot jelent, és (i) R1 jelentése metilcsoport és R2 jelentése 2-metil-1-propenilcsoport; (ii) R1 25 jelentése metilcsoport és R2 jelentése 2-metil-lbutenilcsoport vagy (iii) R1 jelentése etilcsoport és R2 jelentése 2-metil-1-propenilcsoport.
Az ilyen vegyületeket a továbbiakban miibe- 30 micin i»n (lásd a fenti (i) lehetőséget), ,i13 (lásd a fenti (ii) lehetőséget), és a]4 (lásd a fenti (iii) lehetőséget) vegyületeknek fogjuk nevezni. Ezek a vegyületek egy, a Streptomyces hygroscopicus speciesz.be tartozó produktív mikroorganizmus 35 tenyésztése útján állíthatók elő. Például ilyen mikroorganizmus a Streptomyces hygroscopicus specieszhez tartozó SANK 60286 törzs, amely talajból lett izolálva Miura városánál (Kanagawa prefektura, Japán), illetve mutánsai és variánsai. 40
A milbemicin ajj, oj3 és a14 vegyületek egy részét képezik a SANK 60286 törzs fermentációja úiján kapott fermentléből elkülöníthető vegyületeknek, amelyeket milbemicin ajj — vegyületeknek nevezünk és a következő táblázatban azonosítunk.
R, R2
11 metil 2-metil-l-propenil
12 metil izobutil
13 metil 2-metil-l-butenil
14 etil 2-metil-l-propenil
15 etil izobutil
A Streptomyces SANK 60286 jellemzői
Az actinomycetes típusú SANK 60286 törzs mikológiái tulajdonságai a következők.
1. Morfológiai jellemzők
A törzs mikroszkóp alatt elágazó, halványsárga és sárgásbarna közötti színű bazális micéliumokat mulat, amelyekből fehér és sárgásszürke közöl ti színű légmicélumok nyúlnak ki spirális végekkel. Egy spóralelepen vagy spóraláncban 10 vagy több spóra figyelhető meg egy vonalban, és a spóráknak bibircsókos-barázdált felületük van. Bizonyos típusú táptalajokban a törzs a légmicéliumok felületén tiszta aranyszínű nyálkát képez, és ez a nyálka sárgás foltokká alakul át a fermentálás során. A tenyésztés egy későbbi szakaszában néha feketés foltok képződnek nedvesség következtében.
2. Növekedés különböző táptalajokon
Különböző táptalajokon 14 napon át 28 ’C-on végzett tenyésztést követően a törzs a következőkben ismertetett jellemzőket mutatja. A szinmegnevezéseket és kódszámokat a Nippon Shikisai Kenkyusho japán cég által publikált Guide to Color Standard című kézikönyv alapján adjuk meg.
Táptalaj Tulajdonság1^
Jellemző
szacharóz-nitrát G
agar AM
R SP
glükóz-aszpargin G
agar AM R SP
glicerin-aszparagin G
agar (ISP 5) AM R SP
szervetlen keményítő (i
só agar (ISP 4) AM R SP
tirotin agar (ISP 7) G AM R SP
jó, szürkésfehér (N — 9) jó, fehér sárgásszürke nincs igen jó, sárgásszürke (2—9— 11) jó, szürkésfehér, (N-9) halványsárga (3-9-10) nincs jó, sárgásbarna (2-9-11) jó, fehér-sárgás szürke (2-9-11) halványsárga (8-9-11) nincs igen jó, halvány olívzöld (6-8-11) bőséges, fehér-halvány olívzöld-szürke (4-8-11) sárgásbarna (2-9-11) nincs jó, halvány olívzöld szürke (2-8-11) jó, fehér-halvány sárga (3-9-10) halványsárga (6-8-10) nincs
HU 198723 Β
Táptalaj Tulajdonságé Jellemző
pepton-élesztőextraktum- G
-vas agar (ISP 6) AM R SP
nutriens agar (difco G
cég terméke AM R SP
élesztőkivonat-maláta- G
kivonat agar (ISP 2) AM R SP
zabliszt agar G
(ISP 3) AM R SP
víz agar G AM SP
burgonyakívonat-répa- G
kivonat agar AM SP
jó, sárgásszürke (2-9-12) jó, szürke sárgásszürke (4-9-11) nincs jó, sárgásszürke (1-9-10) gyenge képződés, szürke (N-9) halványsárga (3-9-10) nines igen jó, sárgásbarna (2-9-11) bőséges, szürkésfehér (N-9) vörössárga (12-8-9) halványsárga (8-9-12) igen jó, halványsárga (8-9-12) bőséges, szürkésfehér (N-9) sárgásbarna (2-9-11) halvány olívzöld szürke (4-7-11) gyenge, szürkésfehér (N-9) gyenge képződés, halvány barnásszürke (2-8-8) nincs gyenge, szürkésfehér (N-9) jó, halvány barnásszürke (2-9-9) nincs
1) G: növekedés; AM: légmicélium; R: fordí- 35 tott felület; SP: oldható pigment
3) Fiziológiai tulajdonságok A SANK 60286 törzs fiziológiai tulajdonságai
a következők:
keményítő hidroiizálás pozitív
zselatin elfolyósítása pozitív
nitrát redukálása (gyenge) pozitív
tej koagulálása (28 ’C és 37 ’C-on) pozitív
tej peptonizálása (28’Cés 37’C-on) (gyenge) pozitív
növekedési hőmérséklet tartománya (gyenge) 18-37 ’C
(1. táptalaj)1) melanoid pigmens termelése
(2. táptalaj) negatív
(3. táptalaj) negatív
(4. táptalaj) negatív
2) 1. táptalaj: élesztő-
kivonat-malátakivonat agar (ISP 2)
2. táptalaj: tripton-
-élesztőkivonat táptalaj (ISP 1)
3. táptalaj: pepton-
-élesztőkivonat-vasagar (ISP 6)
4. táptalaj:tirozin agar (ISP 7)
°C-on 14 napon át Pridhem-Gottlieb agar táptalajon végzett tenyésztés után a SANK 60286 törzs szénforrásokat az alábbi táblázat szerint hasznosít.
-8HU 198723 Β cukor hasznosítás
D-glükóz + +
L-arabínóz + +
D-xilóz +
izo-inozit + +
D-mannit 4- +
D-fruktóz + +
L-ramnóz + +
szacharóz + +
raffinóz + +
kontroll —
+ + jó hasznosítás; + hasznosítás; - nincs hasznosítás.
4. Sejtkomponensek
A SANK 60286 törzs sejtfalát Becker, B. és munkatársai által az Applied Microbiology, 12. 421 (1964) szakirodalmi helyen ismertetett módszerrel vizsgálatnak vetettük alá. Minthogy L,L-diamino-pimelinsavat és glicint ki tudtunk mutatni, a sejtfal 1. típusú sejtfalnak tekinthető. Ezután a teljes sejtek cukor-komponenseit vizsgáltuk a Lechevalier, Μ. P. által a Journal of Laboratory and Clinical Medicine, 71. 934 (1968) szakirodalmi helyen ismertetett módszerrel. Nem találtunk jellegzetes eloszlást.
Összefoglalóan megállapítható volt, hogy a törzs az Actinomycetesekhez tartozó Slreplomyces genuszba tartozik.
A SANK 60286 törzs azonosítását az ISP (The International Streptomyces Project); Bergey’s Manual of Determinative bacteriology,
8. kiadás; Waksman, S. A. The Actinomycetes c. könyve és más, az Actinomycetesekkel foglalkozó legújabb publikációk alapján végeztük.
Ha a SANK 60286 törzs tulajdonságait összehasonlítjuk a Streptomyces genuszhoz tartozó más ismert spccieszek tulajdonságaival, akkor megállapítható, hogy a morfológiai és fiziológiai tulajdonságai csaknem azonosak a J. Antibiotics, 36. 438 (1983) szakirodalmi helyen ismertetett Streptomyces hygroscopicus subsp. aureolacrimosus tulajdonságaival.
A két törzs tenyésztési tulajdonságai között azonban kisebb különbség volt megfigyelhető. Jól ismert, hogy az Aelinornycelesek tulajdonsá gai változnak bizonyos mértékben néhány egymást követő tenyésztés után. ezért a törzsek nem mindig különböztethetők meg taxonómiaiig tenyésztési tulajdonságokban jelentkező kisebb különbségekre tekintettel. Ilyen okokból a milbemicin αμ, «π» “13· “14 “15 anyagokat termelő
SANK 60286 törzset Streptomyces hygroscopicus subsp. aureolaerimosus SANK 60286 törzsként azonosítottuk. A Budapesti Megállapodás előírásaival összhangban a törzset 1986. október 20-án deponáltuk a Fermentation Research Institute japán törzsgyűjteménynél, ahol az a FERM BP-1190 deponálási számot kapta. A törzs mintái a Budapesti Megállapodás vonatkozó előírásai értelmében hozzáférhetők lesznek.
Az Actinomycetesek, beleértve a Streptomyces hygroscopicus subsp aureolacrimusos SANK
60286 törzset, hajlamosak mutációt szenvedni mind természetes okokból, mind mesterséges kezelés, például ibolyántúli sugárzás, röntgensugárzás vagy kémiai kezelés hatására. A találmány oltalmi körébe tartozónak tekintjük a SANK 60286 törzs összes termelőképes mutánsát. Ezek közé a mutáns törzsek közé tartoznak a génmanipulációval, így például rekombinálással, transzdukcióval és transzformálással kapott mutánsok. Más szavakkal, a találmány oltalmi körébe tartozik minden olyan törzs, amely a milbemicin <jr i [, a J3 és a [4 közül egy vagy több előállítására képes, és különösen az olyan törzsek, amely nem különböztethetők meg egyértelműen a SANK 60286 törzstől vagy annak mutánsaitól.
A milbemicin «μ, a π és a]4 előállítható a SANK 60286 törzset egy alkalmas közegben tenyésztve és a közegből a milbemicineket elkülönítve. A Streptomyces genuszba tartozó mikroorganizmusok tenyésztésére szokásosan használt anyagok használhatók fel tápanyagként, így például szcnforráskénl használhatunk glükózt, szacharózt, keményítőt, glicerint, sűrű malátaszirupol, melaszt vagy szójaolajat. Nitrogénforráskenl megemlíthetjük például a szójalisztet, búzacsírát, húskivonatot, peptont, élesztősejteket, kukoricalekvárt, ammónium-szulfátot és a nátriumnitrátot. Kívánt esetben használhatók a mikroorganizmusok növekedéséi elősegítő és milbemicin an, «π cs «j4 makrolidok képződését aktiváló szervetlen és szerves adalékok megfelelő kombinációban, továbbá szervetlen sók, így például kalcium-karbonát, nátrium-klorid, kálium-klorid és foszfátok.
Az antibiotikumok előállítására hagyományosan alkalmazott módszerekhez hasonlóan a találmány szerinti mikroorganizmust is folyékony táptalajon, a leginkább célszerűen szubmerz tenyésztéssel tenyésztjük, aerób körülmények közölt. A tenyésztés célszerű hőmérséklete 22 °C és 30 °C közötti, a legtöbb esetben 28 °C körüli hőmérsékleten dolgozunk. Rázatásos tenyésztés vagy tartályos tenyésztés esetében a milbemicin «11, «13 és «|4 termelése jellegzetesen 5 — 15 nap elteltével ér el maximumot.
A milbemicin «μ, «13 és «ι4 termelése a következőképpen követhető. A tenyészetből vett 1 ml-es mintát belöltjük kis méretű kémcsőbe, majd 9 ml 80%-os vizes metanolt adunk hozzá. A kémcsövet rázatjuk, majd centrifugáljuk. Ezután nagynyomású folyadékkromatografálást végzünk, e célra például a Senshu Co. japán cég által H-2151 ODS márkanév alatt szállított, 6 mm · 150 mm méretű, fordított fázisú oszlopot és a Hitachi japán cég által Model 655 márkanév alatt forgalmazott szivattyút használva. A mintából 5 jul-t injektálunk az oszlopba, majd 1,5 ml/peré átfolyási sebességgel acetonitril és víz 80:20 térfogatarányú elegyével futtatást végzünk. A milbemicin «μ, «13 és u14 megjelenését 240 nm-en dolgozó ibolyántúli detektorral érzékeljük és a mennyiségét például a Union Techn. Inst. cég MCPD - 350PC márkanevű adatfeldolgozó egységével határozzuk meg.
-9HU 198723 Β
A tenyészetből a milbemicin «u, «13 és aj4 összegyűjtésére különböző adszorbenseket, így például aktívszenet, alumínium-oxidot vagy a szilikagélt; szintetikus adszorbenst, így például a Diaion HP —20 márkanevű anyagot (Mitsubishi Chem. Ind. Ltd. japán cég terméke): olyan adszorbenseket, mint az Avicel (az Asahi Chem. Ind. Co., Ltd.) vagy a szűrőpapír: ioncserélő gélen alapuló szűrőanyagokat használhatunk. A leginkább hatékonyan a következőképpen járunk el:
A tenyészetet szűrési segédanyag, például diatomit segítségével szűrjük. A kapott szűrőlepényt metanollal extraháljuk, hogy az előállítani kívánt vegyületeket vizes metanolban oldjuk. A kapott extraktumhoz vizet adunk, majd a vizes elegyet hexánnal extraháljuk. A hexános oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk, amikor olyan olajos anyagot kapunk, amely tartalmazza a milbemicin ajj, a i3 és aj4 anyagokat. Ezt az olajos anyagot ezután Lobar Si60 márkanevű oszlopon (B méret, a Merck amerikai egyesült államokbeli cég gyártmánya) adszorbeáltatjuk, majd hexán és etil-acetát 8:2 térfogatarányú elegyével eluálást végzünk, olyan frakciókat szedve, amelyek egyegy terméket tartalmaznak a milbemicin £»n, aj3 vagy a14 közül. A milbemicinek valamelyikét tartalmazó frakciókat ezután csökkentett nyomáson bepároljuk, olajos anyagot kapva. Az olajos anyaghoz kis mennyiségű metanolt adunk, majd a kapott keveréket Lobar RP — 8 márkanevű oszlopra (B méret, a Merck amerikai egyesült államokbeli cég gyártmánya) felvisszük. Az eluálást acetonitril és víz 80:20 térfogatarányú elegyével végezzük. Az egyes vegyületeket tartalmazó frakciókat ezután elkülönítjük, majd az acetonitril csökkentett nyomáson végzett elpárologtatását követően etil-acetáttal extrahálást végzünk. Végül nagynyomású folyadékkromalografálással, fordított fázisú oszlopot használva külön-külön por formájában megkapjuk a milbemicin ajj, Q]3 és a14 anyagokat. A milbemicin qjj és aj3 hasonló módon állíthatók elő.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek erős akaricid hatást fejtenek ki például a Tetranychus, Panonychus (például Panonychus ulmi és Panonychus citri) és üszögatkák kifejlett egyedei és petéi ellen, mely kártevők elsősorban a gyümölcsfákat, zöldségféléket és a virágzó növényeket pusztítják. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek hatásosak az Ixodidae, Dermanyssidae ^s Sarcoptidae családokkal szemben is, mely kártevők állatok parazitái. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek aktívak továbbá ún. exoparazilákkal, például Oestrus, Lucilia, Hypoderma, Gautrophilus, tetvek és bolhafélékkel szemben, mely fajták állatokon és madarakon, különösen háziállatokon és baromfiféléken parazita életmódot folytatnak. A találmány szerinti eljárással előállítható vegyületek hatásosak továbbá házkörüli rovarfélékkel, például csótánnyal és háziléggyel, továbbá a mezőgazdasági és kertgazdálkodási területeken élősködő káros rovarfélékkel, így például levéltetvekkel és lárvaállapotú Lepidoptera-fajtákkal szemben. Hatásosak továbbá a talajban élő különböző fajokkal, például Meloidogyne, Bursaphelencus és Rhizoqlyphus-félékkel szemben.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek továbbá kiváló parazitaelleni hatásúak embereken és állatokon élősködő endoparazitákkal szemben. Közelebbről a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek nemcsak háziállatoknál, így például sertésnél, juhnál, kecskénél, szarvasmarhánál, lónál, kutyánál, macskánál vagy szárnyasoknál élősködő nematódákkal szemben, hanem a Filariidae és Setariidae nemzetségekhez tartozó, a belső szövetekben és szervekben, így például az emésztő szervrendszerben vagy a vérben élősködő parazitákkal szemben is hatékonyak.
Ha a találmány szerinti eljárással előállított vegyületet tartalmazó készítményt mezőgazdasági vagy kertgazdálkodási célra kívánjuk hasznosítani, akkor a legkülönbözőbb formák és készítmények elképzelhetők. így például a készítmény elkészíthető porozószerek, durva porozószerek, oldható porok, mikrogranulátumok, finom mikrogranulátumok, nedvesíthető porok, hígítható emulziók, emulgeálható koncentrátumok, vizes vagy olajos szuszpenziók, diszperziók vagy oldatok (amelyek közvetlenül permetezhetők vagy csak hígítás után), aeroszolok vagy kapszulák formájában, például az utóbbiakat polimer anyagokkal készítve. Az alkalmazható hordozóanyag jellegét illetően természetes vagy szintetikus és szerves vagy szervetlen lehet, általában azért használjuk hogy a hatóanyagnak a kezelendő szubsztrátra való jutását elősegítse, illetve a hatóanyag tárolását, szállítását vagy kezelését megkönnyítse. Alkalmazhatók szilárd, folyékony gázalakú hordozóanyagok, az ilyen típusú kompozíciókhoz szokásosan használt hordozóanyagok közül.
Az alkalmazható szilárd hordozóanyagok közé tartoznak szervetlen anyagok, így agyagfélék (például kaolinit, montmorrilonit és az attapulgil), talkum, csillám, pirofilit, horzsakő, vermikulit, gipsz, kalcium-karbonát, dolomit, diatómaföld, magnézium-karbonát, apatit, zeolit, kovasavanhidrid és szintetikus kalcium-szilikát; növényi eredetű szerves anyagok, így például a szójababliszt, dohánypor, búzaliszt, dióhéjpor, faliszt, keményítő és kristályos cellulóz; szintetikus vagy természetes nagy molekulasúlyú anyagok, így például kumarongyanták, petróleumgyanták, alkidgyanták, polivinil-klorid, polialkilén-glikolok, ketongyanták, észtergyanták, kopálgyanták és dammargyanták; viaszok, például a karnaubaviasz és a méhviasz; és a karbamid.
Az alkalmazható folyékony hordozóanyagokhoz tartoznak a paraffinos vagy nafténes szénhidrogének, például a kerozin, ásványolaj, orsóolaj és a fehérolaj; aromás szénhidrogének, például a benzol, toluol, xilol, etil-benzol, kumén és a metil-naftalin; klórozott szénhidrogének, például a szén-tetraklorid, kloroform, triklór-etilén, monoklór-benzol és a 2-klór-toluol; éterek, például a dioxán és a tetrahidrofurán; ketonok, pél10
-101
HU 198723 Β dául az aceton, metil-etil-keton, diizobutil-keton, ciklohexanon, acetofenon és az izoforon; észterek, például az etil-acetát, amil-acetát, etilén-glikol-acetát, dietilén-glikol-acetát, dibutilmaleát és a dietil-szukcinát; alkoholok, például a metanol, n-hexanol, etilén-glikol, dietilén-glikol, ciklohexanol és a benzilalkohol; éter-alkoholok, például az etilén-glíkol-fenil-éter, dielilén-glikol-etil-éter és a dietilén-glikol-butil-éter; poláros oldószerek, például a dimetil-formamid és a dimetil-szulfoxid; és a víz.
Az alkalmazható gáz halmazállapotú hordozóanyagok közé tartozik például a levegő, nitrogén, szén dioxid és a freon. Ezek a gázok keverve is alkalmazhatók spray jellegű készítményekhez.
A készítmények egyes tulajdonságainak, így például diszpergálhatóságának, emulgeálhatóságának, szétterülésének, áthatolásának és tapadásának fokozására kívánt esetben különböző felületaktív anyagokat és nagy molekulasúlyú vegyületeket adagolhatunk, mely adagolás eredményeképpen a készítménynek a nedvesíthetősége adhéziója és abszorpciója az állat és a növény által javul és így a hatékonyság fokozódik.
Emulgeálás, diszpergálás, nedvesítés, a szétterülés elősegítése, megkötés, a bomlás ellenőrzése, a hatóanyagok stabilizálása, a fluiditás fokozása és a rozsdaképződés megelőzése céljából adagolt felületaktív anyagok lehetnek nemionos, anionos, kationos és amfoter típusúak, amelyek közül általában a nem-ionos és/vagy anionos felületaktív anyagokat használjuk. A célszerűen használható nem-ionos felületaktív anyagok közé tartoznak például a hosszú szénláncú alkoholok, így például a laurilalkohol, sztearilalkohol vagy oleilalkohol etilén-oxiddal alkotott polimerizációs adduktjai; alkil-fenolok, például az izooktilfenol vagy nonil-fenol etilén-oxiddal alkotott polimerizációs adduktjai; alkíl-naftolok, például a butil-naftol vagy oktíl-naftol etilén-oxiddal alkotott polimerizációs adduktjai; hosszú szénláncú zsírsavak, például a palmitinsav, sztearinsav vagy oleinsav etilén-oxiddal alkotott polimerizációs adduktjai; mono- vagy dialkil-foszforsavak, például a sztearil-foszfonsav vagy dilauril-foszforsav etilén-oxiddal alkotott polimerizációs adduktjai; aminok, például a dodecil-amin vagy sztearinamin etilén-oxiddal alkotott polimerizációs adduktjai; polialkoholok, például szorbitán hosszú szénláncú zsírsavakkal képzett észterei és ezeknek az észtereknek etilén-oxiddal alkotott polimerizációs adduktjai; és propilén-oxidnak etilén-oxiddal alkotott polimerizációs adduktjai. A célszerűen felhasználható anionos felületaktív anyagok közé tartoznak például az alkil-szulfát (észter) sók, például a nátrium-lauril-szulfát vagy az oleilalkohol kénsawal képzett észterének aminsói; alkil-szulfonálok, például a szulfoborostyánkősav-dioktil-észter-nátriumsó vagy 2-etíl-hexén-szulfonsav-nátriumsó; és aril-szulfonátok, például az izopropil-naftalin-szulfonsavnátriumsó, met ilén-bisz-naftalin-szulfonsav-nátriumsó, lignin-szulfonsav-nátriumsó és dodecilbenzol-szulfonsav-nátriumsó.
Az említett készítmények tulajdonságainak javítása és a biológiai hatás fokozása céljából a készítmények nagy molekulatömegű vegyületekkel vagy más segédanyagokkal kombinációban, például kazeinnel, zselatinnal, albuminnal, enywel, nátrium-algináttal, karboxi-metil-cellulózzal, metíl-cellulózzal, hidroxi-etil-cellulózzal vagy polivinil-alkohollal kombinációban alkalmazhatók.
A fentiekben ismertetett hordozóanyagok és különböző segédanyagok önmagukban vagy a legkülönbözőbb kombinációban hasznosíthatók, például a készítmény típusától és az alkalmazás céljától függően, sok egyéb tényező mellett.
A porozószerek általában például 1 — 25 tömeg% hatóanyagot és a 100 tömeg%-hoz szükséges mennyiségben szilárd hordozóanyagot és diszpergáló- és nedvesítőszert tartalmaznak. Ha szükséges, adagolhatunk védő kolloidot, tixotróp ágenst és habzásgátlót.
Az emulgeálható koncentrátumok általában például 5-50 tömeg% hatóanyagot, 5 — 20 tömeg% emulgeálószert és a 100 tömeg%-hoz szükséges mennyiségben folyékony hordozóanyagot tartalmaznak. Ha szükséges, adagolhatunk korróziógátlót is.
Az olajos készítmények általában például 0,5-5 tömeg% hatóanyagot és a 100 tömeg%hoz szükséges mennyiségben folyékony hordozóanyagot, például kerozint tartalmaznak.
Aeroszol általában például 0,1—5 tömeg% hatóanyagot, adott esetben szagosítót és a 100 tömeg%-hoz szükséges mennyiségben olajos és/vagy folyékony hordozóanyagot tartalmaz. Hajlógázként például cseppfolyós szénhidrogéneket, fluor-karbon gázokat és szén-dioxidot használhatunk.
A fentiekben ismertetett módon végzett kikészítés után a találmány szerinti készítmények jó hatásfokkal hasznosíthatók olyan haszonnövényeken és háziállatokon, amelyeken kártékony rovarok vagy atkák élősködnek. A növények kezelése történhet árasztásos területeken, felföldi területeken és gyümölcskertekben a haszonnövények szárát és leveleit, illetve körülöttük a földet kezelve. Mind a növények, mind az állatok kezelésénél a hatóanyag koncentrációja 0,5-100 ppm lehet.
Ha a találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket állatoknál és embereknél antelmintikumokként kívánjuk hasznosítani, akkor beadhatjuk ezeket a vegyületeket, orálisan ital formájában. Az ital rendszerint olyan oldat szuszpenzió vagy diszperzió, amely egy alkalmas nemtoxikus oldószerrel vagy vízzel és egy alkalmas szuszpendálószerrel, például bentonittal és egy nedvesítőszerrel vagy más segédanyaggal készül. Általában az ital tartalmaz egy habzásgátlót is. Az ital általában 0,01-0,5 tömeg%, előnyösen 0,01 — 0,1 tömeg% hatóanyagot tartalmaz.
Ha a találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket állatoknak kívánjuk beadni takarmány formájában, akkor a vegyületeket homogén módon diszpergáljuk a takarmányban, top-dressing”-ként vagy pellett formájában. A kfvánt
-111
HU 198723 Β antelmintikus hatás biztosítása céljából a hatóanyag mennyisége a takarmányban 0,0001 ---0,02 tömeg%.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek beadhatók parenterálisan is állatoknak az előgyomorba, izomzatba vagy a légcsőbe, vagy pedig szubkután injektálással, folyékony hordozóanyagban feloldva vagy diszpergálva. Parenterális beadás céljából a hatóanyagokat előnyösen egy alkalmas növényi olajjal, például földimogyoróolajjal vagy gyapotmagolajjal keverjük össze. Az ilyen típusú készítmények általában 0,05 — 50 tömeg% mennyiségben tartalmaznak hatóanyagot.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek alkalmazhatók helyileg is, miután öszszekevertük őket egy alkalmas hordozóanyaggal, például dimetil-szulfoxiddal vagy egy szénhidrogén típusú oldószerrel. Az ilyen típusú készítményt közvetlenül az állat testfelületére juttathatjuk ki spray formájában vagy direkt injektálással.
A legkedvezőbb eredmények biztosításához szükséges orális dózis számos tényezőtől, például a kezelendő állat típusától és a parazita fertőzés típusától és mértékétől függ. Általában a dózis 0,01 -100 mg, előnyösen 0,5-50 mg lesttömegkilogrammonként. A dózis beadható egyetlen alkalommal vagy több alkalommal viszonylag rövid időn, például 1-5 napon belül.
A találmányt közelebbről a következő példákkal kívánjuk megvilágítani.
1. példa
Milbemicin au, a13 és βι4 (1., 2. és 3. vegyület)
Tíz darab 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban 1% szacharózt, 0,35% polipeptont és 0,05% dikálium-hidrogén-foszfátot tartalmazó előtenyésztési táptalajból 100 — 100 ml-t beoltunk egy oltókacsnyi Streptomyces hygroscopicus subsp. aureolaerimosus SANK 60286 törzzsel, majd 28 ’C-on forgó rázatóberendezésben 48 órán át tenyésztést végzünk. Az így kapott 1 liternyi tenyészfolyadékot két 30 literes fermentorba bemérjük. Mindegyik 20 — 20 liter olyan táptalajt tartalmaz, amely 8% szacharózt, 1% szójababport, 1% fölözött tejet, 0,1% élesztőkivonatot, 0,1% húskivonatot, 0,3% kahium-karbonátot, 0,03% dikálium-hidrogén-foszfátot, 0,1% magnézium-szulfát-heptahidrátot és 0,005% vas(Il)-szulfát-heptahidrátot tartalmaz, továbbá sterilizálás előtt pH-értéke 7,2.
A tenyésztést 28 ’C-on 12 napon át végezzük fermentorokban 0,5 térfogat/lömeg (wm) sterilizált levegőárammal 0,5 kg · cnr belső nyomáson, 40-180 fordulat/perc keverési sebességgel és 4 —7 ppm. DO értéknél. A fermentléből 32 litert összekeverünk a tenyésztés után 1,8 kg Cellte márkanevű szűrési segédanyaggal, majd szűrést végzünk. Micéliális szűrőlepényt 5 liter vízzel mossuk, majd a szűrletet és a mosófolyadékot elöntjük. A micéliális szűrőlepényt 20 liter metanollal 1 órán át keverjük, majd szűrés után ismét 5 liter metanollal mossuk.
A szűrletet és a mosófolyadékot elegyítjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk, közel 2 liter vizes maradékot kapva. Ezt a vizes folyadékot 2-2 liter hexánnal háromszor extraháljuk, majd az egyesített extraktumot vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk szűrjük és bepároljuk, így 38 g mennyiségben olajos anyagot kapunk. Ebből az olajos anyagból 20 g-ot feloldunk 500 ml hexánban, majd a kapott oldatot olyan oszlopra visszük fel, amelyet 300 g, a Mallinckrodt Inc. amerikai egyesült államokbeli cég által Siliea Type 60 márkanéven forgalmazott szilikagélből hexános kezeléssel készítettünk. Az eluálást 2 liter hexánnal, majd hexán és etil-acetát 3:1 térfogatarányú elegyéből 2 literrel végezzük.
Az eluálódott frakciókat nagynyomású folyadékkromatográfiás módszerrel analizálva a milbcmiéin αμ, <*^2, Q13> ** 14 és ,J!15 anyagokat keverékként különítjük el. Áz oldószer elpárologtatásakor 1,9 g mennyiségben olajos nyers terméket kapunk. Ennek teljes mennyiségét feloldjuk 10 ml 50%-os vizes metanolban, majd a kapott oldatot olyan oszlopra visszük fel, amelyet 160 g, a Merck Co. amerikai egyesült államokbeli cég által Art 7719 márkanéven forgalmazott, szilánozoll szilikagélből 50%-os vizes metanollal végzett kezeléssel készítettünk. Az eluálást 60%, majd 70%, majd 80%. metanolt tartalmazó vizes ekgyekkel végezzük. Az eluálódott frakciókat nagynyomású folyadékkromatografálással analizáljuk, a milbemicin un, αι2, «13, a14 és 045 anyagok elegyét elkülönítve.
Az eluálószer elpárologtatásakor 840 mg mennyiségben olajos nyers terméket kapunk. Ennek teljes mennyiségét feloldjuk 20 ml acetonitrilben, majd a kapott oldatot preparatív nagynyomású folyadékkromatografálásnak vetjük alá fordított fázisú oszlopon, éspedig a Senshu Co. japán cég ODS H —5251 márkanevű, 20 mm 250 mm méretű oszlopán. Az oldatból minden esetben 1 ml-es mintákat juttatunk az oszlopra. Az eluálást 80% acetonitrilt tartalmazó vizes eleggyel 9,9 ml/perc átfolyási sebességgel végezzük. A frakciókat 240 mm-nél ibolyántúli fénxynyel analizáljuk, és így az egyes termékeket tartalmazó frakciókat elválasztjuk egymástól. Minden egyes frakcióból azután az eluálószert ledesztilláljuk, majd a visszamaradó vizes maradékot liofilizáljuk. így az eluálás sorrendjében minden esetben por formájában 128 mg milbemicin ojj t, 11,7 mg milbemicin «i2-t, 14,8 mg milbemicin t»]3.( 43 mg milbemicin a14‘l és 3 mg milbemicin α 15-t kapunk.
milbemicin α η
Elemzési eredmények (%): C = 68,83, H = 8,32.
Molékulatömeg: 626 (elektronbombázásos tömegspektrum alapján: a továbbiakban is ez a módszer kerül alkalmazásra).
Összegképlet: C3()H50Oi>
Fajlagos forgatóképesség: |a|23« +104,3’ (c= 1,05, kloroform) (a nátrium D-vonalára vonatkoztatva itt és a továbbiakban).
-121
HU 193723 Β
UV abszorpciós spektrum: Amex (CH3OH) nm (E1%, cm·'): 230 (váll), 238 (990), 252 (váll).
IR abszorpciós spektrum: vmax (KBr) cm'1: 3450, 2950, 1715, 1650, 1450, 1380, 1330, 1270, 1220, 1180, 1160, 1140, 1090, 1080, 1050, 1020, 990,940,850.
Proton magmágneses rezonancia spektrum (CDC13, 270 MHz): 1,90 (3H, szinglett, transz-CH3-C(CH3) = CH-COO), 2,15 (3H, szinglett, cisz-CH3-C(CH3) = CH-COO ), 3,27 (IH, kvartettek dubblettje, C25H), 4,00 (IH, dublett, J=6Hz, C6H), 4,65-4,90 (4H, multiplett, C26H,C27H).
Elektronbombázásos tömegspektrum: m/Z = 626 (M + ), 558, 526, 508, 400,181,153.
Nagynyomású folyadékkromatográfia (továbbiakban: HPLC) retenciós idő: 13,4 perc (a Senshu Co. ODS H-2151 márkanevű 6.150 mm méretű oszlopa: eluálószer 80% acetonitril és 20% víz elegye: átfolyási sebesség 1,5 ml/perc detektálás ibolyántúli fénnyel 240 nm-nél. A továbbiakban is ezeket a körülményeket alkalmazzuk), milbemicin m?
Elemzési eredmények (%): C = 67,04,
H = 8,01.
Molekulatömeg: 628Ősszegképlet: ^36Η52θ9
Fajlagos forgatóképesség [u]23= +118,3’ (c= 1,0, kloroform)
UV abszorpciós spektrum: Amax (CH3OH) nm (E1%, cm'): 238 (750), 244 (810), 253 (váll)
IR abszorpciós spektrum j/max (KBr) cm'1: 3500, 2950, 1740, 1710, 1450, 1380, 1330, 1290, 1180,1120,1090,1050,990.
Elektronbombázásos tömegspektrum: m/Z = 628, 556, 548, 525, 400, 382, 329,181,153.
HPLC retenciós idő: 14,6 perc milbemicin on
Elemzési eredmények (%): C = 67,41,
H=8,12.
Molekulatömeg: 640
Összegképlet: C57H52O9
Fajlagos forgatóképesség [a]23= +91,6’ (c = 0,89, CHC13)
UV abszorpciós spektrum: Amax (CH3OH) nm (E1%, cm’'): 230 (váll), 237 (805), 245 (795), 253 (váll).
ÍR abszorpciós spektrum: j/max (KBr) cm1: 3500, 2950, 1720, 1650, 1450, 1380, 1340, 1310, 1270, 1210, 1180, 1140, 1115, 1095, 1050, 990, 960,940, 860.
Proton magmágneses rezonancia spektrum (CDC13, 270 MHz): 1,07 (3H, triplett, CH3CH2-C(CH3) = CH-COO ), 2,16 (3H, szinglett, CH3-C(C2H5) = CH-COO-), 3,27 (lH, kvartettek dublettje, C^H), 4,00 (IH, dublett, J = 6Hz, C6H), 4,65 - 4,90 (4H, multiplett, C26H, C27H).
Elektronbombázásos tömegspektrum: m/Z=» 640 (M +), 526, 508, 276,181,153.
HPLC retenciós idő: 16,4 perc. milbemicin α π
Elemzési eredmények (%): C »=67,62, H-7,84
Molekulatömeg: 650 összegképlet: C37HJ2O9
Fajlagos forgatóképesség [aj23*= +96,1’ (c = 1,14, CHC13)
UV abszorpciós spektrum: Amax (CH3OH) nm (E1%, cm): 230 (váll), 237 (800), 244 (810), 253 (váll).
Proton magmágneses rezonancia spektrum (CDC13, 270 MHz): 3,09 (IH, triplettek dublettje, J = 2,4, 9,3Hz, C25H), 4,00 (IH, dublett, J = 6,6Hz, C6H), 4,64-4,88 (4H, multiplett, C2óH, C27H), 5,81 (IH, széles szinglett, C3H).
IR abszorpciós spektrum: vmax (KBr) cm'1: 3450, 2950, 1720, 1650, 1450, 1380, 1340, 1270, 1220, 1180,1140,1100,1060,1030,990,960, 860.
Elektronbombázásos tömegspektrum: m/Z = 640, 540, 522, 276, 263,195,167.
HLPC retenciós idő: 18,0 perec. milbemicin ακ Molekulatömeg: 642 Összegképlet: C^H^C^
Elektronbombázásos tömegspektrum: m/Z =
642, 555, 540, 414, 396, 385, 256, 314, 264, 245, 195,167.
HPLC retenciós idő: 19,6 perc.
2. példa
5-(O-terc-butil-dimetil-sziliI)-milbemicin a34 (13. vegyület)
319,3 mg 26-hidroxi-5-(O-terc-butíl-dimetil-szilil)-milbemicin /¾ 10 ml metilén-kloriddal készült, 0 ’C-ra lehűtött oldalához hozzáadunk 150 μΙ piridint és 200 μΐ 3-metil-2-butenoil-kloridol, majd az így kapott reakcióelegyet 30 percen ál keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldatba öntjük, majd metilén-kloriddal extrahálást végzünk. Az extraktumot vízmentes magnéziumszulfát fölött szárítjuk, majd bepároljuk.
A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, fgy 326,2 mg (91%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk.
Tömegspektrum (ΕΙ-módszer, m/z): 754 (M + ), 736, 715, 697,654, 636, 597, 589.
Proton magmágneses rezonancia spektrum (270 MHz, CDCI3, S ppm): 0,11 (3H, szinglett, SíCH3), 0,13 (3H, szinglett, SiCH3), 3,07 (IH, triplettek dublettje, J = 2,4, 9,3Hz, C25H), 3,85 (IH, dublett, J=5,6Hz, CÓH), 5,78 (IH, színglett, C3H).
3. példa
Milbemicin <» 14 (3. vegyület)
302,8 mg 5-(O-terc-butil-dimetil-szilil)-milbetnicin d|4 15 ml acetonitrillel készült, 0’C-ra lehűtött oldalához hozzáadunk 2,5 ml 68%-os, piridinnel készült hidrogén-fluorid-oldatot, majd az így kapott reakcióelegyet 2,5 órán át keverjük és ezután mintegy 300 mg kálium-karbonátot és vizet adunk hozzá a megadott sorrendben. Ezt követően kloroformmal extrahálást végzünk, majd az extraktumot vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk,
232,2 mg (90%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapva, amelynek tulajdonságai az 1. pél13
-131
HU 198723 Β da szerint előállított milbemicin a14 tulajdonságaival megegyezőéit.
4. példa
26-(2-Butenoil-o»)-milbemicin Aj (5. vegyület)
150 mg 26-hidroxi-5-(O-terc-butil-dimetil-szilil)-milbemicin Aj 2 ml metilén-kloriddal készült, 0 ’C-ra lehűtött oldatához hozzáadunk 24 μΐ piridint és 39 μΐ 2-butenoil-kloridot, majd az így kapott reakcióelegyet szobahőmérsékleten 3 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet jeges vízbe öntjük, majd etil-acetáttal extrahálást végzünk. Az extraktumot vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk, majd bepároljuk. A maradékot feloldjuk 4 ml acetonitrilben, majd a kapott oldatot 0 ’C-ra lehűtjük. Az oldathoz ezután hozzáadunk 0,5 ml 68%-os, piridinnel készült hidrogén-fluorid-oldatot, majd az így kapott reakcióelegyet szobahőmérsékleten 1,5 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet jeges vízbe öntjük, majd etil-acetáttal extrahálást végzünk. Az extraktumot telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk, vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. A maradékot preparatív vékonyrétegkromatográfiásan tisztítva 66,5 mg mennyiségben (48%) a cím szerinti vegyületet kapjuk.
Tömegspektrum (El-módszer, m/z): 626 (M + ), 540, 522, 414, 264, 245,191,167,151.
Proton magmágneses rezonancia spektrum 8270 MHz, CDC13, 6 ppm): 1,99 (3H, dublettek dublettje, J = 6,9, 1,6Hz, CH-CH3 = CH-COO-), 3,08 (IH, triplettek dublettje, J = 2,4,9,3Hz, C25H), 4,84 (IH, dublett, J = 13,3Hz, C26H), 5,87 (IH, dublettek kvartettje, J = 1,6, 15,3Hz, CH-CH3 = CH-COO ), 7,03 (IH, dublettek kvartettje, J - 6,9,15,3Hz, CH-CH3 = CH-COO-).
5. példa
26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin D (16. vegyület)
177,3 mg 26-hidroxi-5-(O-terc-butil-dÍmetilszilil)-milbemicin O és 0,1 ml piridin 15 ml metilén-kloriddal készült oldatához 0 ’C-on hozzáadunk 0,15 ml 3-metil-2-butenoil-kloridot, majd az így kapott reakcióelegyet 2 órán át keverjük. A reakcióelegyet ezt követően telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldatba öntjük, majd metilén-kloriddal extrahálást végzünk. Az extraktumot vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. A maradékot feloldjuk 10 ml acetonitrilben, majd a kapott oldatot 0 ’C-ra lehűtjük és hozzáadunk 1 ml 68%-os, piridinnel készült hidrogén-fluorid-oldatot. Az így kapott reakcióelegyet 2 órán át keverjük, majd telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldatba öntjük. Etil-acetáttal végzett extrahálás után az extraktumot vízmentes magnézium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, 144,7 mg (86%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapva.
Tömegspektrum (El-módszer, m/z): 654 (M + ), 618,554, 428,410,356.
Proton magmágneses rezonancia spektrum (270 MHz, CDC13, í ppm): 3,07 (IH, széles, dublett, J = 7,7Hz, C^H), 4,48 (IH, széles dublett, J ·=4,0Ηζ, C5H), 4,68 (IH, dublett, J - 14,7Hz, C26H), 4,79 (IH, dublett, J - 14,7Hz, c2(,h).
A következőkben felsorolt vegyületeket a
2-5. példákban ismertetett módszerek szerint állíthatjuk elő.
6. példa
26-(2-Metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin Aj (6. vegyület)
Tömegspektrum (El-módszer, m/z): 640 (M+ ),604,540, 522,414.
Proton magmágneses rezonancia spektrum (270 MHz, CDC13, S ppm): 1,80 (3H, dublett, J = 7,2Hz, CH3-CH = C(CH3)-COO-), 1,85 (3H, singulett, CH3-CH = C(CH3)-COO-), 3,08 (IH, triplettek dublettje, J = 2,4, 9,3Hz, CjjH), 4,73 (IH, dublett, J -13,7Hz, C26H).
7. példa
26-(2-Hexenoil-oxi)-milbemicin A4 (7. vegyület)
Tömegspektrum (El-módszer, m/z): 654 (M +),618, 522, 504, 414, 396.
Proton magmágneses rezonancia spektrum (270 MHz, CDC13, S ppm): 0,93 (3H, triplett', J = 7,3Hz, CH-CH3CH2CH = CH2-COO-), 4,02 (IH, dublett, J = 13,3Hz, C26H), 4,86 (IH, dublett, J = 13,3Hz, C26H), 7,01 (IH, dublettek triplettje, J - 6,9,15,7Hz, C3HrCH = CH-COO-)
8. példa
26-(4-Metil-2-pentenoil-oxi)-milbemicin Aj (8. vegyület)
Tömegspektrum (El-módszer, m/z): 654 (M+ ),618, 522,414, 396.
Proton magmágneses rezonancia spektrum (270 MHz, CDC13, 6 ppm): 1,07 (6H, dublett, J = 6,9Hz, (CH3)2CH-CH = CH-COO), 3,08 (IH, triplettek dublettje, J = 2,4, 9,3Hz, C^H), 4,72 (IH, dublett, J = 13,3Hz, C26H), 4,86 (IH, dublett, J = 13,3Hz, C26H), 6,99 (IH, dublettek triplettje, J = 6,5, 15,7Hz, (CH3)2CH-CH-CH-COO-).
9. példa
26-(3-Hexanoil-oxi)-milbemicin Aj (9. vegyület)
Tömegspektrum (El-módszer, m/z): 654 (M + ), 414,279,195,167.
Proton magmágneses rezonancia spektrum (270 MHz, CDC13, í ppm): 3,07 (2H, dublett, J-6,4Hz, CH-C), 4,68 (IH, dublett, J-12,9Hz, C26H), 4,79 (IH, dublett, J - 12,9Hz, C26H)
-141
HU 198723 Β
10. példa
26-(4-Pentenoil-oxi)-milbemicin A4 (10. vegyület)
Tömegspektrum (El-módszer, m/z): 640 (M + ), 604, 522, 264,195,167.
Proton magmágneses rezonancia spektrum (270 MHz, CDCI3, 6 ppm): 3,07 (IH, triplettek dublettje, J = 2,4, 9,3Hz, C25H), 4,69 (IH, dublett, J = 13,7Hz, C26H), 4,79 (IH, dublett, J = 13,7Hz, C26H), 4,99-5,10 (2H, multiplett, CH2 = CH-CH2CH2-COO-).
11. példa
26-(Cinnamoil-oxi)-milbemicin A4 (11. vegyület)
Tömegspektrum (El-módszer, m/z): 688 (M +), 652, 522, 276,195,167.
Proton magmágneses rezonancia spektrum (270 MHz, CDCB, Á ppm): 3,07 (IH, triplettek dublettje, J = 2,4, 9,7Hz, C25H), 4,81 (IH, dublett, J = 13,3Hz, C26H), 4,89 (IH, dublett, J = l3,3Hz, C26H), 6,47 (IH, dublett,
J = 16,1Hz, Ph-CH = CH-COO), 7,72 (IH, dublett, J = 16,1Hz, Ph-CH = CH-COO-).
12. példa
26-(4-Klór-cinnamoil-oxi)-milbemicin A4 (12. vegyület)
Tömegspektrum (El-módszer, m/z): 722 (M+ ),704, 540, 522,504.
Proton magmágneses rezonancia spektrum (270 MHz, CDC13, ppm): 3,07 (IH, triplettek dublettje, J = 2,4, 8,9Hz, C25H), 4,81 (IH, dublett, J = 13,3Hz, C26H), 4,93 (IH, dublett, J = 13,3Hz, C26H), 6,44 (IH, dublett,
J = 16,1Hz, 4-Cl-Ph-CH-CH-COO-), 7,67 (IH, dublett, J = 16,1Hz, 4-Cl-Ph-CH = CH-COO).
13. példa
5-(Ó-PropioniI)-2-(3-metiI-2-butenoiI-oxi)-milbemicin A4 (14. vegyület)
Tömegspektrum (Εϊ-módszer, m/z): 696 (M +), 604, 504, 414, 396, 356, 264, 195,167,151.
Proton magmágneses rezonancia spektrum: (270 MHz, CDCI3, 6 ppm): 1,15 (3H, triplett, j-7,6Hz, CH3CH2CO-), 2,40 (2H, kvartett, J = 7,6Hz, CH3CH2CO-), 3,07 (IH, széles triplett, J = 8,0Hz, C25H), 4,11 (IH, dublett, J = 6,OHz, CéH)k, 4,50 — 4,76 (4H, multiplett, C26H, C27H), 5,6. -5,95 (5H, multiplett, C3H, C5H, C9H, C10H, (CH3)2C-CH-COO).
14. példa
5-(O-Etoxi-karbonil)-2-(3-metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin A4 (15. vegyület)
Tömegspektrum: (El-módszer, m/z): 712, (M + ), 414, 396, 264,195,167,151.
Proton magmágneses rezonancia spektrum (270 MHz, CDCI3, 6 ppm): 1,31 (3H, triplett, J = 7,1Hz, CH3CH2OCOO-), 3,07 (IH, triplcttek dublettje, J = 2,4, 8,9Hz, C25H), 4,14 (IH, dublett, J=6,lHz, C6H), 4,19 (2H, kvartett,
J = 7,1Hz, CH3CH2OCOO-), 4,57-4,76 (4H, multiplett, C2éH, C27H), 5,54 (IH, dublettek dublettje, J = 1,6,6,1Hz, C5H).
15. példa
26-(3-Metíl-2-butenoíl-oxi)-ivermektín Bta (17. vegyület)
Tömegspektrum (FAB-módszer, trietanolamin adagolva, m/z): 1014, 992, 978, 962, 934, 878,830, 299,194.
Proton magmágneses rezonancia spektrum (270 MHz, CDCI3, S ppm): 3,07-3,29 (3H, multiplett, C4H, C/H, C25H), 3,35 (IH, singulett, C2H), 3,48 (6H, singulett, 2-OCH3), 3,97 (IH, dublett, J = 6,1 Hz, C6H), 4,49 (IH, széles singulett, C5H), 4,69 (2H, széles singulett, C27H),
4,97 (IH, széles dublett, J = 7,3Hz, C15H).
16. példa
26-(3-Metil-2-butenoil-oxi) S-541A (20. vegyület)
Tömegspektrum (El-módszer, m/z): 710 (M +), 592, 523, 468, 448, 423, 375.
Proton magmágneses rezonancia spektrum (270 MHz, CDCI3, 6 ppm): 3,75 (IH, dublett, J = 10,9Hz, C25H), 4,67 (IH, dublett, J = 13,3Hz, C26H), 4,82 (IH, dublett, J = 13,3Hz, C26H), 5,20 (IH, dublett, J = 8,9Hz, C32H).
17. példa
Aktivilásvizsgálat kifejlett atkákon
0,3, 1 vagy 3 ppm. koncentrációjú vizsgálati oldatokat készítünk a találmány szerinti vegyületekből és a következőkben említett három referenciavegyület valamelyikéből: milbemicin Cj és C2 elegye, amely a 29742/84. számú japán közrebocsátás! iratból ismert; 26-acetoxi-milbemicin A4; és 26-acetoxi-avermektin-B]a. Az oldatok 0,01% mennyiségben szétterülést elősegítő szert Is tartalmaznak.
Tehénborsó növények (Vigna sinensis Savi) szikleveleit beoltjuk szerves foszforvegyület típusú inszekticid hatóanyagokra érzékeny kétfoltos takácsatkával (Tetranychus urticae). A beoltás után egy nappal a fentiekben említett kísérleti oldatok valamelyikéből 7 ml-t permetezünk ki a Mizuho Seisakusho Co. japán cég által gyártott forgó permetezővel, a levél felületére vonatkoztatva 3,5 mg/cm2 felhasználási arányt biztosítva. A permetezés után a leveleket 25 °C hőmérsékleten tartott helyiségben állni hagyjuk. 3 nap elteltével megállapítjuk binokuláris mikroszkóppal, hogy a kifejlett rovarok elpusztultak-e vagy sem, és a százalékos mortalitást kiszámítjuk. A kapott eredményeket az alábbi táblázatban adjuk meg.
A vegyület száma 3 ppm mortalitás 1 ppm 0,3 ppm
1 («ll) 100 100 93,0
2 M 100 95,6 77,3
3 (a 14) 100 100 100
5 100 100 54
6 100 100 55
7 100 100 61
-151
HU 198723 Β
8 100 100 51
9 100 100 50
10 100 100 44
11 100 100 40
12 100 100 55
14 100 100 65
15 100 100 60
16 100 100 57
17 100 100 53
20 100 100 59
18. példa
Aktivitásvizsgálat atka-petéken
A 17. példában ismertetett módon, az ott említett referenciavegyületeket is használva 1 vagy 3 ppm koncentrációjú kísérleti oldatokat készítünk.
Tehénborsó sziklevelein nőstény kifejlett takácsatkákat petézni hagyunk, majd a kifejlett atkákat eltávolítjuk olyan kísérleti leveleket kapva, amelyek mintegy 50 — 50 petét hordoznak.
A 17. példában ismertetett módon ezután a kísérleti oldatot a levelekre juttatjuk. 25 °C hőmérsékleten tartott helyiségben két héten át tartó tárolást követően a ki nem kelt peték számát megállapítjuk és a ki nem kelt peték százalékos arányát kiszámítjuk.
A kapott eredményeket a következő táblázatban adjuk meg.
A vegyület ovicid aktivitás (%) száma 3 ppm 1 ppm
1 («ll) 94 51
2 (an) 94 71
3 (a i4) 95 57
5 94 45
6 62 33
7 77 50
8 55 23
10 53 23
14 82 41
15 63 20
16 67 21
19 43 20
Ci+C2 2,7 2,1
26-Acetoxi- 31 12
-milbemicin A4 26-Acetoxi- 4,2 2,4
-averraektin Bla
A fenti táblázatokból látható, hogy a találmány szerinti új milbemicinek igen erős akaricid hatásúak kifejlett atkákkal szemben már olyan alacsony koncentrációban is, mint a 0,3 ppm, ugyanakkor értékes ovicid hatásúak is.
A találmány szerinti növényvédőszerek az e célra szokásosan használt formájúak lehetnek, szokásos hordozó- és egyéb segédanyagokat tartalmazhatnak, illetve szokásos módon - például a következő összetételben - állíthatók elő.
tömegrész
Nedvesíthető porkészítmény
3. példa szerinti vegyület 95 nátrium-lignin-szulfonát 3 nátrium-metilén-bisz-naftalin-szulfonát 2
Emulgeálható koncentrátum 1, példa szerinti vegyület 40 xilol polioxietilén-nonil-fenil-éter 10 kalcium-dodecil-benzol-szulfonál 5
Olajos készítmény
20. példa szerinti vegyület 5 kerozin 80 metil-naftalin 15
Porozószer
16. példa szerinti vegyület 3 agyag 60 talkum 36,5 izopropil-hidrogén-foszfát 0,5

Claims (14)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás az (I) általános képletű új makrolid vegyületek — a képletben
    -X-Y- jele-X-Y- jelentése -CH2-CH2- vagy CH2-CH0H- csoport,
    R1 jelentése metil-, etil-, izopropil-, szek-butil- vagy -C(CH3) =CHR5 csoport, és az utóbbiban R3 jelentése metil-, etil- vagy izopropilcsoport,
    R2 jelentése -(CH2)n-C)R6) =C(R7)(R8) általános képletű csoport, és ebben a képletben n értéke 0, 1 vagy 2, R6 és R7 egymástól függetlenül hidrogénatomot vagy metilcsoportot jelent és R8 jelentése hidrogénatom vagy 1 — 4 szénatomot tartalmazó alkilcsoport, vagy adott esetben halogénatommal helyettesített fenilcsoport, azzal a megkötéssel, hogy ha R8 jelentése 1 — 4 szénatomos alkilcsoport, akkor az -(CH2)nC(R6) = C(R7)(R8) általános képletű alkenilcsoport legfeljebb 8 szénatomot tartalmaz,
    R3 jelentése hidrogénatom, 2 — 5 szénatomot tartalmazó alkanoil-, 2 — 5 szénatomot tartalmazó alkoxi-karbonil- vagy tri( 1-4 szénatomot tartalmazó)alkil-szililcsoport és
    R4 jelentése hidrogénatom vagy alfa-L-oleandrozil-alfa-L-oleandrozil-oxicsoport, azzal a megkötéssel, hogy R4 jelentése hirogénatom, ha R1 jelentése metil-, etil- vagy -C(CH3)=CHR5 csoport és az utóbbiban R5 jelentése metil-, etilvagy izopropilcsoport — előállítására, azzal jellemezve, hogy
    a) valamely (III) általános képletű vegyületet - a képletben -X-Y-, R1, R3 és R4 jelentése a tárgyi körben megadott — valamely R2COOH általános képletű savval — a képletben R2 jelentése a tárgyi körben megadott - vagy ennek valamelyik reakcióképes származékával reagáltatunk, vagy
    b) az (1) általános képlet alá eső milbemicin aj|, milbemicin a;3 vagy o14 előállítására a Strcptomyees hygroscopicus specieszhez tartozó termelő mikroorganizmust tenyésztésnek vetünk alá és a kívánt terméket elkülönítjük.
    -161
    HU 198723 Β
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás, azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként olyan (111) általános képletű vegyületet használunk, amelynek képletében -X-Y- jelentése -CH2-CH2-, -CH2CHOH- vagy -CH2-C( = O)- csoport, míg R1, R3 és R4 jelentése az 1. igénypontban megadott.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti a) vagy a 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként olyan (111) általános képletű vegyületet használunk, amelynek képletében Rl jelentése metil-, etil- vagy izopropilcsoport, míg R4 jelentése hidrogénatom.
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti a) vagy a 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként olyan (III) általános képletű vegyületet használunk, amelynek képletében R1 jelentése izopropil- vagy szekbutilcsoport, míg R4 jelentése alfa-L-oleandrozil-alfa-L-oleandrozil-oxicsoport.
  5. 5. Az 1. igénypont szerinti a) vagy a 2. igénypont szerinti eljárás; azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként olyan (III) általános képletű vegyületet használunk, amelynek képletében R1 jelentése -C(CCH3) = CHR5 általános képletű csoport, ebben R5 jelentése az 1. igénypontban megadott és R4 jelentése hidrogénatom.
  6. 6. Az 1. igénypont szerinti a) vagy a 2 —5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás az R2 helyén -CH = C(CH3)(R10) általános képletű csoportot — ebben a képletben R10 jelentése metil- vagy etilcsoport — tartalmazó (I) általános képletű vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő R2COOH általános képletű karbonsavat vagy ennek reakcióképes származékát alkalmazzuk.
  7. 7. Az 1. igénypont szerinti a) vagy a 2-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, ahol R3 jelentése hidrogénatom vagy 2 — 5 szénatomot tartalmazó alkanoil- vagy 2 — 5 szénatomot tartalmazó alkoxi-karbonil-csoport, azzal jellemezve, hogy a megfelelő (III) általános képletű kiindulási vegyületet alkalmazzuk.
  8. 8. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás olyan (1) általános képletű vegyületek előállítására, amelynek képletében -X-Y- jelentése -CH2-CH2 csoport, R‘ jelentése metil- vagy etilcsoport, R2 jelentése 2-melil-l-propenilcsoport, míg R3 és R4 jelentése hidrogénatom, azzal jellemezve, hogy megfelelő kiindulási vegyületeket használunk.
  9. 9. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás az (I) általános képlet alá eső következő vegyületek előállítására:
    26-(3-Metil-2-butenoil-oxÍ)-milbemicin A3
    26-(3-Metil-2-pentenoil-oxi)-milbemicin Á3
    26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-milbemicÍn Aj
    26-(3-Metil-2-pentenoil-oxi)-milbemicin Á43
    26-(2-Butenoil-oxi)-milbemicin A4
    26-(2-Meiil-2-butenoil-oxÍ)-mílbemicin A4
    26-(2-Hexenoil-oxi)-milbemicin A4
    26-(4-Mctil-2-pentenoil-oxi)-mÍlbemÍcin A4
    26-(3-Hexenoil-oxi)-milbemicin A4
    26-(4-Pentenoil-oxi)-milbemicÍn A4
    26-(Cinnamoil-oxi)-milbemicin A4
    26-(4-Klór-cinnamoil-oxi)-milbemicin A4
    5-(O-terc-Butil-dimetil-szilil)-2-(3-metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin A4
    5-(O-Propionil)-2-(3-metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin A4
    5-(O-Etoxi-karbonil)-2-(3-metil- 2-butenoil-oxi) milbemicin A4
    26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin D
    26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-ivermektin Bla
    26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-avermektin Bla
    23-Dezoxi-26-(3-metil-2-butenoil-oxi)-S-541A
    26-(3-Melil-2-bulenoil-oxi)-S-541A
    23-Oxo-26-(3-metil-2-butenoil-oxi)-S-541A, azzal jellemezve, hogy megfelelő kiindulási vegyületeket használunk.
  10. 10. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás az (I) általános képlet alá eső következő vegyületek előállítására:
    26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-milbemÍcÍn A3
    26-(3-Metil-2-pentenoil-oxi)-milbemicin A3
    26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin A4
    26-(3-Metil-2-pentenoil-oxi)-milbemicin A4
    26-(2-Hexenoil-oxi)-milbemicin A4
    26-(4-Metil-2-pentenoil-oxi)-milbemicin A4
    26-(Cinnamoil-oxi)-milbemicin A4
    5-(()-Propionil)-2-(3-metil-2-buienoil-oxi)- milbemicin z\4
    5-(O-Etoxi-karbonil)-2-(3-metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin A4
    26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin D
    26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-ivermektin Bla
    26-(3-Melil-2-buienoil-oxi)-avermektín Bja
    23-Dezoxi-26-(3-metiI-2-butenoil-oxi)-S-541A
    26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-S-541A
    23-Oxo-26-(3-metiI-2-butenoil-oxi)-S-541A, azzal jellemezve, hogy megfelelő kiindulási vegyületeket használunk.
  11. 11. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás az (I) általános képlet alá eső következő vegyületek előállítására:
    26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin A3
    26-(3-Metil-2-pentenoil-oxi)-milbemicin A3
    26-(3-MetÍl-2-butenoiI-oxi)-miIbemicin A4
    26-(3-Metil-2-pentenoil-oxi)-milbemicin A4
    26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-milbemicin D
    26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-ivermektin Bja
    26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-avermektin Bja
    23-Dezoxi-26-(3-metil-2-butenoil-oxi)-S-541A
    26-(3-Metil-2-butenoil-oxi)-S-541A
    23-Oxo-26-(3-metil-2-butenoil-oxi)-S-541A, azzal jellemezve, hogy megfelelő kiindulási vegyületeket használunk.
  12. 12. Az 1. igénypont szerinti b) eljárás, azzal jellemezve, hogy termelő mikroorganizmusként Streptomyces hygroscopicus subsp. aureolacrimosus SANK 60286 (deponálási szám: FERM BP —1190) törzset használunk.
  13. 13. Eljárás parazitaelleni gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely az 1. igénypont szerinti eljárással előállított (I) általános képletű makrolid-vegyületet — a képletben a helyettesítők jelentése az 1. igénypontban megadott — a humán vagy állati gyógyszergyártásban szokásosan használt hordozó- és adott esetben egyéb adalékanyagokkal összekeverünk és parazitaelleni készíténnyé alakítunk.
    -171
    HU 198723 Β
  14. 14. Parazitaellenes növényvédőszer, azzal jellemezve, hogy 0,3 ppm - 95 tömeg% mennyiségben valamely (I) általános képletű makrolid-vegyületet — a képletben
    -X-Y- jele-X-Y- jelentése -CH2-CH2- vagy CHi-CHOH- csoport,
    R1 jelentése metil-, etil-, izopropil-, szek-butil- vagy -C(CH3) = CHR5 csoport, és az utóbbiban jelentése metil-, etil- vagy izopropilcsoport.
    R7 jelentése -(CH2)n-C)R6) = C(R7)(R8) általános képletű csoport, és ebben a képletben n értéke 0, 1 vagy 2, R6 és R7 egymástól függetlenül hidrogénatomot vagy metilcsoportot jelent és R8 jelentése hidrogénatom vagy 1 — 4 szénatomot tartalmazó alkilcsoport, vagy adott esetben halogénatommal helyettesített fenilcsoport, azzal a megkötéssel, hogy ha R8 jelentése 1 — 4 szénatomos alkilcsoport, akkor az -(CH2)n-C(R6) = C(R7)(R8) általános képletű alkenilcsoport legfeljebb 8 szénatomot tartalmaz,
    R3 jelentése hidrogénatom, 2 — 5 szénatomot tartalmazó alkanoil-, 2-5 szénatomot tartalma5 zó alkoxi-karbonil- vagy tri(l — 4 szénatomot tartalmazó)alkil-szililcsoport és
    R4 jelentése hidrogénatom vagy alfa-L-oleandrozil-alfa-L-oleandrozil-oxicsoport, azzal a megkötéssel, hogy R4 jelentése hirogénatom, ha
    10 R1 jelentése metil-, etil- vagy -C(CH3) = CHR5 csoport és az utóbbiban R5 jelentése metil-, etilvágy Í7opropilcsoport — , valamint a 100 tömeg%-hoz szükséges mennyiségben szilárd vagy folyékony, szerves vagy szervetlen eredetű, ter15 mészetes vagy mesterséges, közömbös hordozóanyagot, előnyösen agyagot, talkumot, xilolt, kerozint és anionos és/vagy nemionos felületaktív anyagot, előnyösen emulgeáló-, diszpergálóvagy szuszpendálószert tartalmaz.
HU875602A 1986-12-11 1987-12-11 Process for producing macrolide compounds and pharmaceutical compositions comprising such compounds as active ingredient, and plant protectives comprising such compounds HU198723B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP61295452 1986-12-11

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT45982A HUT45982A (en) 1988-09-28
HU198723B true HU198723B (en) 1989-11-28

Family

ID=17820769

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU875602A HU198723B (en) 1986-12-11 1987-12-11 Process for producing macrolide compounds and pharmaceutical compositions comprising such compounds as active ingredient, and plant protectives comprising such compounds

Country Status (23)

Country Link
US (1) US5008191A (hu)
EP (1) EP0274871B1 (hu)
KR (1) KR960013079B1 (hu)
CN (2) CN1020114C (hu)
AR (1) AR243528A1 (hu)
AT (1) ATE73805T1 (hu)
AU (1) AU605218B2 (hu)
BR (1) BR8706745A (hu)
CA (1) CA1338050C (hu)
DE (1) DE3777604D1 (hu)
DK (2) DK168488B1 (hu)
EG (1) EG18720A (hu)
ES (1) ES2033325T3 (hu)
GR (1) GR3004882T3 (hu)
HU (1) HU198723B (hu)
IL (1) IL84801A (hu)
NZ (1) NZ222884A (hu)
OA (1) OA08698A (hu)
PH (1) PH26780A (hu)
PT (1) PT86350B (hu)
RU (1) RU1836426C (hu)
SU (1) SU1604159A3 (hu)
ZA (1) ZA879279B (hu)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2587241B2 (ja) * 1986-07-24 1997-03-05 ビ−チヤム・グル−プ・ピ−エルシ− 新規化合物、その製法及びそれを含む医薬組成物
AR243528A1 (es) * 1986-12-11 1993-08-31 Sankyo Co Procedimiento para preparar compuestos de macrolida y un procedimiento para producir con los mismos una composicion parasiticida.
US5212322A (en) * 1986-12-11 1993-05-18 Sankyo Company, Limited Macrolide compounds, their preparation and their use
EP0298423A3 (en) * 1987-07-07 1989-10-25 Kumiai Chemical Industry Co., Ltd. Antibiotic ksb-1939 compounds and production process thereof as well as pesticidal agents containing same
NZ233680A (en) * 1989-05-17 1995-02-24 Beecham Group Plc Avermectins and milbemycins and compositions thereof
IT1255135B (it) * 1992-05-05 1995-10-20 Principio attivo a base di avermectine, ceppo e procedimento per la sua preparazione e composizione veterinaria che lo contiene.
US5364623A (en) * 1993-04-30 1994-11-15 Bristol-Myers Squibb Company Antibiotic produced by Bacillus subtilis ATCC 55422 capable of inhibiting bacteria
US5362863A (en) * 1993-09-29 1994-11-08 Merck & Co., Inc. Process for the preparation of 4"-amino avermectin compounds
EP1180106A1 (en) * 1999-05-26 2002-02-20 Novartis AG 4-substituted milbemycin derivatives
JP4373080B2 (ja) * 2002-12-24 2009-11-25 三井化学アグロ株式会社 ミルベマイシン類の精製法
EP2886640A1 (en) 2013-12-18 2015-06-24 Riga Technical University Process for isolation of milbemycins A3 and A4
CN103833811A (zh) * 2014-03-25 2014-06-04 武汉大学 一种阿维菌素衍生物及其制备方法
CN106148216B (zh) * 2015-03-27 2019-06-04 浙江海正药业股份有限公司 一种链霉菌及其生产米尔贝霉素a3的方法
CN106148215B (zh) * 2015-03-27 2019-06-14 浙江海正药业股份有限公司 一种链霉菌及其生产米尔贝霉素a4的方法
CN104860961B (zh) * 2015-04-10 2017-08-04 新宇药业股份有限公司 一种制备5‑氧（对‑硝基苯甲酰）‑尼莫克汀的方法
CN109516996B (zh) * 2018-11-26 2021-12-17 山东农业大学 一种大环内酯类衍生物、其合成及应用
CN117568205B (zh) * 2023-10-12 2024-08-16 湖北宏中药业股份有限公司 一株米尔贝霉素高产菌株及其应用

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3984564A (en) * 1972-06-08 1976-10-05 Sankyo Company Limited Antibiotic substances B-41, their production and their use as insecticides and acaricides
US4429042A (en) * 1978-09-08 1984-01-31 Merck & Co., Inc. Strain of Streptomyces for producing antiparasitic compounds
US4378353A (en) * 1981-02-17 1983-03-29 Merck & Co., Inc. Novel C-076 compounds
US4412991A (en) * 1981-08-28 1983-11-01 Merck & Co., Inc. 22-Hydroxy derivatives of C-076 compounds, pharmaceutical compositions and method of use
NZ201681A (en) * 1981-09-03 1985-11-08 Merck & Co Inc Avermectin derivatives and parasiticidal compositions
US4415669A (en) * 1981-12-07 1983-11-15 Merck & Co., Inc. Substance and process for its production
US4582852A (en) * 1983-11-02 1986-04-15 Ciba-Geigy Corporation 14- and 15-hydroxy milbemycin derivatives for controlling plant and animal parasites
US4547491A (en) * 1984-07-18 1985-10-15 Merck & Co., Inc. C-8A-Oxo-avermectin and milbemycin derivatives, pharmaceutical compositions and method of use
HUT39739A (en) * 1984-12-04 1986-10-29 Ciba Geigy Ag Process for production of derivatives of 13,3-milbemycin and medical preparatives containing thereof
NZ215917A (en) * 1985-05-02 1989-10-27 Merck & Co Inc 22-oh milbemycin derivatives and parasiticidal compositions
GB8606120D0 (en) * 1986-03-12 1986-04-16 Glaxo Group Ltd Process
GB8606116D0 (en) * 1986-03-12 1986-04-16 Glaxo Group Ltd Process
GB8606123D0 (en) * 1986-03-12 1986-04-16 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
JP2587241B2 (ja) * 1986-07-24 1997-03-05 ビ−チヤム・グル−プ・ピ−エルシ− 新規化合物、その製法及びそれを含む医薬組成物
AR243528A1 (es) * 1986-12-11 1993-08-31 Sankyo Co Procedimiento para preparar compuestos de macrolida y un procedimiento para producir con los mismos una composicion parasiticida.
EP0277916B1 (de) * 1987-02-04 1994-05-25 Ciba-Geigy Ag Mikrobielles Verfahren zur Herstellung von Milbemycin-Derivaten
JPH01197488A (ja) * 1988-02-02 1989-08-09 Kumiai Chem Ind Co Ltd 生理活性物質ｋｓｂ−１９３９化合物及びその製造法
EP0298423A3 (en) * 1987-07-07 1989-10-25 Kumiai Chemical Industry Co., Ltd. Antibiotic ksb-1939 compounds and production process thereof as well as pesticidal agents containing same
JPS6429378A (en) * 1987-07-23 1989-01-31 Kumiai Chemical Industry Co Physiologically active substance and production thereof
JPH01272587A (ja) * 1987-10-09 1989-10-31 Microbial Chem Res Found マクロライド抗生物質ｍｉ１９８物質及びその製造法、並びに線形動物又は節足動物の殺滅剤

Also Published As

Publication number Publication date
CN1064866A (zh) 1992-09-30
DK90393D0 (da) 1993-08-04
CN87108339A (zh) 1988-07-13
CN1028530C (zh) 1995-05-24
KR880007740A (ko) 1988-08-29
IL84801A0 (en) 1988-06-30
EG18720A (en) 1993-12-30
CN1020114C (zh) 1993-03-17
HUT45982A (en) 1988-09-28
ES2033325T3 (es) 1993-03-16
DK90393A (da) 1993-08-04
EP0274871B1 (en) 1992-03-18
AR243528A1 (es) 1993-08-31
RU1836426C (ru) 1993-08-23
PH26780A (en) 1992-10-13
OA08698A (en) 1989-03-31
SU1604159A3 (ru) 1990-10-30
DE3777604D1 (de) 1992-04-23
ZA879279B (en) 1989-08-30
DK168994B1 (da) 1994-07-25
US5008191A (en) 1991-04-16
DK653287D0 (da) 1987-12-11
PT86350A (en) 1988-01-01
PT86350B (pt) 1990-11-07
EP0274871A1 (en) 1988-07-20
DK168488B1 (da) 1994-04-05
GR3004882T3 (hu) 1993-04-28
CA1338050C (en) 1996-02-13
ATE73805T1 (de) 1992-04-15
IL84801A (en) 1992-02-16
KR960013079B1 (ko) 1996-09-30
AU605218B2 (en) 1991-01-10
DK653287A (da) 1988-06-12
BR8706745A (pt) 1988-07-19
AU8247987A (en) 1988-06-23
NZ222884A (en) 1992-02-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0214731B1 (en) Antiparasitic avermectin and milbemycin derivatives and process for their preparation
CA1313155C (en) Antibiotic compounds and their preparation
HU198723B (en) Process for producing macrolide compounds and pharmaceutical compositions comprising such compounds as active ingredient, and plant protectives comprising such compounds
EP0342710A1 (en) Macrolide compounds, their preparation and their use
US5510372A (en) Antiparasitic macrolide antiobiotics
IE871496L (en) Macrolide compounds
CA2021894C (en) Antiparasitic agent
AU603956B2 (en) Avermectin and milbemycin derivatives from streptomyces avermitiosis ATCC 31267, 31271 and 31272
CA1321965C (en) Macrolide compounds
US5212322A (en) Macrolide compounds, their preparation and their use
EP0345078A2 (en) Macrolide compounds
CA1337934C (en) Macrolide compounds, their preparation and their use
AU647265B2 (en) Anthelmintic milbemycin analogs from streptomyces hygroscopicus strains
JP3147321B2 (ja) 新規ミルベマイシン化合物
EP0341974B1 (en) Macrolide compounds
KR890000405B1 (ko) 아버멕틴 및 밀베마이신 유도체의 제조방법
JP3170268B2 (ja) 新規マクロライド化合物
JPH01193270A (ja) ミルベマイシン化合物、その製法及び用途
IE54813B1 (en) Microorganism actinomadura yumaense sp.nov. and use thereof to prepare antibiotics ll-c23024 alpha, beta and iota
JPH1072469A (ja) 新規ミルベマイシン化合物及びその製法

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HPC4 Succession in title of patentee

Owner name: SANKYO AGRO COMPANY LIMITED, JP

MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees