DK168994B1 - Fremgangsmåde til fremstilling af en parasiticid macrolidforbindelse - Google Patents

Fremgangsmåde til fremstilling af en parasiticid macrolidforbindelse Download PDF

Info

Publication number
DK168994B1
DK168994B1 DK090393A DK90393A DK168994B1 DK 168994 B1 DK168994 B1 DK 168994B1 DK 090393 A DK090393 A DK 090393A DK 90393 A DK90393 A DK 90393A DK 168994 B1 DK168994 B1 DK 168994B1
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
compounds
group
methyl
derivatives
formula
Prior art date
Application number
DK090393A
Other languages
English (en)
Other versions
DK90393D0 (da
DK90393A (da
Inventor
Takao Okazaki
Shuji Takahashi
Seigo Iwado
Keiji Tanaka
Toshiaki Yanai
Hisaki Kajino
Original Assignee
Sankyo Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sankyo Co filed Critical Sankyo Co
Publication of DK90393D0 publication Critical patent/DK90393D0/da
Publication of DK90393A publication Critical patent/DK90393A/da
Application granted granted Critical
Publication of DK168994B1 publication Critical patent/DK168994B1/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
    • C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N49/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, containing compounds containing the group, wherein m+n>=1, both X together may also mean —Y— or a direct carbon-to-carbon bond, and the carbon atoms marked with an asterisk are not part of any ring system other than that which may be formed by the atoms X, the carbon atoms in square brackets being part of any acyclic or cyclic structure, or the group, wherein A means a carbon atom or Y, n>=0, and not more than one of these carbon atoms being a member of the same ring system, e.g. juvenile insect hormones or mimics thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/22—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces
    • Y10S435/898—Streptomyces hygroscopicus

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

i DK 168994 B1
Den foreliggende opfindelse angår en særlig fremgangsmåde til fremstilling af en hidtil ukendt parasiticid makrolidforbin-delse med formlen (I): i”3 ^CH3
I I 0 R
«3^1 Y
V (i)
JIohT
0—kJL /°¾ I CH0C0ch=c 08 ' \« hvori: •Λ R er en methylgruppe, og
Q
R betegner en methylgruppe eller en ethylgruppe, eller R1 er en ethylgruppe, og R8 betyder en methylgruppe.
2 DK 168994 B1
De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser er macrolidforbindelser, der er kemisk beslægtede med de kendte milbemyciner, avermectiner og lignende forbindelser. Der findes flere klasser af kendte forbindelser med en struktur på basis af en 16-leddet macro!idring. De opnås ved fermentering af forskellige mikroorganismer eller halvsyntetisk ved kemisk derivati-sering af sådanne naturlige fermenteringsprodukter, og de udviser akaricide, insekticide, anthelmintiske og andre antipa-rasitiske virkninger. Mi 1bemycinerne og avermectinerne er eksempler på to sådanne klasser af kendte forbindelser, men forskellige andre klasser eksisterer også og identificeres ved hjælp af forskellige navne eller kodetal. Navnene på disse forskellige macrolidforbindelser er generelt taget fra navnene på eller kodetallene for de mikroorganismer, som producerer de naturligt forekommende medlemmer af hver klasse, og disse navne er derefter blevet udstrakt til at dække de kemiske derivater tilhørende den samme klasse, med det resultat, at der ikke har foreligget nogen standardiseret systematisk nomenklatur til generel anvendelse i forbindelse med sådanne forbindelser.
For at undgå forveksling vil der i den foreliggende patentbeskrivelse blive benyttet navne på basis af d.en hypotetiske stamforbindel se repræsenteret ved formlen (A): 3 DK 168994 B1 CH3 22/^s^CH3 CHp]| V '« s V° JLoh 10 1 il n_L rjlii· u
I TL J
OH u 15 For at undgå tvivl viser formlen (A) også nummerer ingen af nogle carbonatomer, der er mest relevante for forbindelserne fremstil-let ifølge den foreliggende opfindelse. Methyl gruppen i .4-stillingen er blevet nummereret C-26.
20 De naturligt fremstillede milbemyciner danner en række forbindelser. Mi 1 bemycinerne A3 og A4 blev blandt andre vist i US-patentskrift nr. 3.950.360, og milbemycin D blev vist i US-patentskrift nr. 4.346.171, hvor den blev omtalt som "forbindelse B-41D". Disse forbindelser kan betegnes ved hjælp af 25 ovennævnte formel (A), hvori stillingen 25 er substitueret med henholdsvis en methyl gruppe, en ethylgruppe eller en isopropyl gruppe. Den i 25-sti 11 i ngen med en see.-butylgruppe substituerede mi 1bemyci nanal og blev vist i US-patentskrift nr. 4.173.571.
30
Forskellige derivater af de oprindelige milbemyciner er blevet fremstillet, og deres virkninger har været undersøgt. 5-es-terificerede milbemyciner har for eksempel været omhandlet i US-patentskrifterne nr. 4.201.661, 4.206.205, 4.173.571, 35 4.171.314, 4.203.976, 4.289.760, 4,457.910, 4.579.864 og 4.547.491 samt i de europæiske patentskrifter nr. 8184, 102.721, 115.930, 142.969, 180.539 og 184.989, og i de ja panske patentansøgninger Kokai 57-120589 og 59-16894.
DK 168994 B1 4 13-hydroxy-5-ketomi1bemycinderi vater har været omhandlet i US-•patentskr i f t nr. 4.423.209. Mi 1bemycin-5-oximderi vater er omhandlet i US-patentskrift nr. 4.547.520 og i europæisk patent-skrift nr. 203.832. Britisk patentskrift nr. 2.168.345 om-5 handler miIbemycinderivater med en carboxysubstituent eller en esterificeret carboxysubstituent i 13-stillingen i kombination med en hydroxysubstituent eller en ester ificeret hydroxysub-stituent i 5-stillingen.
10 Lige som miIbemycinerne er avermecti nerne baseret på den samme 16-leddede macrolidringforbindelse. Avermecti nerne er for eksempel omhandlet i J. Antimicrob. Agents Chemother., 1979, 15, 361 (1979) og i J. Am. Chem. Soc., 1981, 103, 4216. Disse forbindelser kan være repræsenteret ved ovennævnte formel (A), 15 men med 13-stillingen substitueret med en 4'-(a-L-oleandro-syl)-a-L-oleandrosyloxygruppe. 25-stillingen kan være substitueret med en isopropylgruppe eller en see.-buty1 gruppe, og enten er der en carbon-carbon-dobbeltbi nding mellem stillingerne 22 og 23, eller også er der en hydroxygruppe ved 20 23-sti 11 i ngen.
Avermecti nerne er defineret som følger: avermectin C22~C23 ^25 R23 R5 25
Aja db see.-Bu H OMe
Aib db i-Pr H OMe A2a sb see.-Bu OH OMe A2b sb i-Pr OH OMe
30 B^a db see.-Bu H OH
Bib db i-Pr H OH
B2a sb see.-Bu OH OH
B2b sb i-Pr OH OH
35 i ovennævnte tabel er R25 en substituent ved 25-stillingen, R23 er en substituent ved 23-sti Ilingen, og R5 er en substituent ved 5-stillingen. "db" betegner en dobbeltbinding mellem stillingerne 22 og 23, og "sb" angiver en enkeltbinding mellem stillingerne 22 og 23.
DK 168994 B1 5 23-ketoderivaterne af avermectin A£a, A2b, B2a og E^b kendes fra US-patentskrift nr. 4.289.760. 22,23-dihydroavermecti nerne kan opnås ved reduktion af dobbeltbindingen mellem 22- og 23-sti 11 i ngen og er omhandlet i US-patentskri ft nr. 4.199.569. 5 Aglyclonderivaterne af avermectinerne, som er milbemycinana-loger, er i litteraturen undertiden blevet omtalt som C-076-forbindelser, og forskellige derivater kendes. For eksempel omhandler US-patentskri ft nr. 4.201.861 sådanne derivater, der ved 13-sti11 i ngen er substitueret med en lavere 10 alkanoylgruppe.
Europæisk patentskrift nr. 74.758 omhandler avermecti nforbi n-delser, der er der i vatiseret ved 4-methylgruppen. Omdannelsen af 4-methylgruppen til en hydroxymethyl gruppe er beskrevet 15 tillige med dannelsen af forskellige oxymethylderivater, såsom acetyloxymethyl-, benzoy1oxymethy1 - og andre carbonyloxy-methy1 forbi ndel ser.
Europæisk patentskrift nr. 170.006 omhandler en klasse af ved 20 fermentering producerede biologisk aktive forbindelser, der kollektivt identificeres ved kodetallet LL-F28249. Nogle af disse har en 16-leddet macro!idstruktur svarende til ovennævnte formel (A), der er substitueret med hydroxy ved
23-sti11 ingen og med en l-methy1-1-propeny1 -, 1-methyl-1-bute-25 nyl- eller 1,3-dimethyl-l-butenylgruppe ved 25-sti11 i ngen. I
disse forbindelser kan hydroxygruppen ved 5-sti11 ingen også være erstattet af en methoxygruppe.
Den samme forbindelse eller lignende forbindelser, der identi-30 ficeres som S-541-forbindelser, kendes fra britisk patentskrift nr. 2.166.436. 23-ketoderivaterne og 23-deoxyderi - vaterne af S-541 kendes fra belgisk patentskrift nr. 904.709.
S-541-derivaterne med en carbon-carbon-dobbeltbinding ved stillingerne 22 og 23 er omhandlet i europæisk patentskrift 35 nr. 215.654. 26-hydroxy- og 26-Ci_4-alkanoyloxyderivaterne af S-541 og af 23-keto- og 23-deoxyderivaterne af S-541 kendes fra europæisk patentskrift nr. 237.341.
6 DK 168994 B1
Britisk patentskrift nr. 2.176.182 omhandler en anden gruppe macro!idantibiotika svarende til ovennævnte formel (A) med en hydroxygruppe eller en substitueret hydroxygruppe ved 5-stil-1 ingen, en hydroxy-, substitueret hydroxy- eller ketogruppe ved 23-sti11 i ngen eller en α-forgrenet alkenylgruppe ved 25-sti11 ingen.
Endnu en yderligere gruppe beslægtede macro!idderivater er omhandlet i japansk patentansøgning Kokai 62-29590. Disse har en struktur svarende til ovennævnte formel (A) med en hydroxy-eller methoxygruppe ved 5-sti11 ingen. Ringens 13-stilling kan være substitueret med en 41-(a-L-oleandrosy1)-a-L-oleandrosyl-oxygruppe lige som i avermectinerne, og der kan være en car-bon-carbon-dobbeltbi nding mellem stillingerne 22 og 23, eller alternativt kan 23-sti11 i ngen være substitueret med en hydroxygruppe. Substituenten ved 25-stillingen er af en type, der ikke findes i de naturligt producerede milbemyciner og aver-mectiner, og den indbefatter forskellige α-forgrenede alkyl-, alkenyl-, alkynyl-, alkoxyalkyl-, alkylthioalkyl- og cykloal-kylal kyl grupper eller cykloalkyl-, cykloalkenyl- eller hetero-cykliske grupper. Denne 25-substituent indføres ved at sætte den tilsvarende carboxylsyre eller et derivat deraf til en avermecti nproducerende mikroorganismes fermenteringsvæske.
De ovenfor beskrevne forskellige klasser af mi 1bemycinbeslæg-tede macrolidforbindelser omtales alle som havende en eller flere virkningstyper som antibiotiske, anthelmi ntiske, ectopa-rasiticide, acaricide eller andre pesticide midler. Der findes imidlertid stadig et fortsat behov for tilvejebringelse af forbindelser med modificeret virkning overfor en eller flere parasitklasser.
Den foreliggende opfindelse tager følgelig sigte på fremstilling af parasiticide macrolidforbindelser med modificeret parasiticid virkning.
DK 168994 B1 7
Det har nu vist sig, at virkningen af milbemycinderivater kan modificeres ved indføring af en umættet estergruppe ved 4-stillingen i stedet for 4-methylgruppen. Specifikt angår den foreliggende opfindelse således fremstilling af 26-alkenoyl-oxyderivater af milbemycinerne, hvilke derivater har ovennævnte formel I.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at man fermenterer den produktive mikroorganisme Streptomyces hygro-scopicus subsp aureolacrimosus SANK 60286 (FERM BP-1190) efterfulgt af isolation af den ønskede forbindelse.
|H3 > X i I I J ° R ' ch3^| Y N °vo
IIohT
0-XX /H3 T CHo0C0CH=C -3
V
OH R
(1)
Nr. R1 R8 1 Me CH3 2 Me C2H5 3 Et CH3
Forbindelserne i ovenstående tabel har navne som følger: 1. 26-(3-methyl-2-butenoyloxy)milbemycin A3 2 . 26-(3 -methyl - 2 -pentenoyloxy) milbemycin A3 3. 26- (3-methyl-2-butenoyloxy)milbemycin A^ 8 DK 168994 B1
De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser betegnes heri som milbemyciner arl:L (R1 er en methylgruppe, og R8 er en methyl gruppe), a13 (R1 er en methylgruppe, og R8 er en ethylgruppe) og a14 (R1 er en ethylgruppe, og R8 er en methylgruppe) . De opnås som nævnt ved dyrkning af en produktiv mikroorganisme tilhørende slægten Streptomyces, nemlig stammen SANK 60286 hørende til slægten Streptomyces, som blev isoleret fra jord fra Miura City, Kanagawa præfektur, Japan.
Mi 1 bemycinerne a^, og udgør en del af en række for bindelser, som er blevet isoleret fra fermenter i ngsvæsken for Streptomycesstammen SANK 60286, og som betegnes som milbemyciner ctn til a^5 som vist i nedenstående tabel.
R1 R8 methyl methyl /ch3
α12 methyl isobutyl erstatter gruppen CH=C
\R8 a13 methyl ethyl α14 ethyl methyl /ch3
a-jr ethyl isobutyl erstatter gruppen CH=C
\R8 DK 168994 B1 9
Egenskaber hos Streptomyces SANK 60286
De mykologiske egenskaber hos actinomycetesstammen SANK 60286 er som følger.
1. Morfologiske egenskaber
Denne stamme viser sig mikroskopisk at have forgrenet, bleggult til gulligt brunt, basalt mycelium, hvorfra hvidt til gulligt gråt luftmycelium er forlænget med spira1 endestykker.
I en dyrket sporekæde iagttages 10 eller flere sporer i en linie, og sporerne har vortede-rynkede overflader. Stammen danner i nogle slags medier klart, gyldent slim på overfladen af luftmycelium, og dette slim skifter til gullige pletter under dyrkningsprocessen. Undertiden dannes sortagt ige pletter som følge af fugtighed ved det senere dyrkningstrin.
2. Vækst på forskellige medier
Stammen udviste de nedenfor viste egenskaber efter dyrkning ved 28°C i 14 dage på forskellige medier. De her benyttede farvebetegnelser og numre blev tildelt på basis af "Guide to Color Standard", som er en af Nippon Shikisai Kenkyusho pub-1iceret manual.
DK 168994 B1 10
Medium Egenskab* Karakteristika sucrose-nitratagar G god, grålig hvid (N-9) AM godt, hvidt 5 R gullig grå SP ingen glucose-asparaginagar G meget god, gullig grå (2-9-11) 10 AM godt, gråligt hvidt (N-9) R bleggul (3-9-10) SP ingen glycerol-asparagin- G god, gullig brun (2-9-11) 15 agar (ISP 5) AM godt, hvidt til gulligt gråt (2-9-11) R bleggul (8-9-11) SP ingen 20 uorganisk-stivel se- G meget god, lys oliven saltagar (ISP 4) (6-8-11) AM rigeligt, hvidt til lyst olivengråt (4-8-11) 25 r gullig brun (2-9-11) SP ingen tyrosinagar (ISP 7) G god, lys olivengrå (2-8-11) AM godt, hvidt til bleggult 30 (3 — 9 —10) R bleggul (6-8-10) SP ingen pepton-gærekstrakt- G god, lys gulliggrå (2-9-12) 35 jernagar (ISP 6) AM godt, hvidt R gullig grå (4-9-11) SP ingen DK 168994 B1 11 næringsagar (Difco) G god, gullig grå (1-9-10) AM ringe dannelse, gråt (N-9) R bleggul (3-9-10) SP ingen 5 gærekstrakt-malteks- G meget god, gullig brun traktagar (ISP 2) (2-9-11) AM rigeligt, gråligt hvidt (N-9) 10 R rødlig gul (12-8-9) SP bleggult (8-9-12) havremelsagar (ISP 3) G meget god, bleggul (8-9-12) AM rigeligt, gråligt hvidt 15 (N — 8) R gullig brun (2-9-11) SP lyst olivengråt (4-7-11) vandagar G dårlig, grålig hvid (N-9) 20 AM ringe dannelse, lyst brun ligt gråt (2-8-8) R grålig hvid (N-9) SP ingen 25 kartoffelekstrakt- G dårlig, grålig hvid (N-9) gulerodsekstraktagar AM godt, lyst brunligt gråt (2-8-8) R bleg gullig orange (2-9-9) 30 SP ingen *: G: vækst AM: luftmycelium R: omvendt overflade 35 SP: opløseligt pigment 3. Fysiologiske egenskaber DK 168994 B1 12
Stammen SANK 60286’s fysiologiske egenskaber er vist nedenfor.
hydrolyse af stivelse positiv fordråbning af gelatine positiv (svag) 5 reduktion af nitrat positiv koagulation af mælk (ved 28°C og 37°C) positiv (svag)
peptonisering af mælk (ved 28°C og 37°C) positiv (svag) dyrkningstemperatur interval (medium 1)* 18-37°C
produktion af melanoidpigment 10 (medium 2) negativ (medium 3) negativ (medium 4) negativ *: medium 1: gærekstrakt-maltekstraktagar (ISP 2) 15 medium 2: trypton-gærekstrakt-væske (ISP 1) medium 3: pepton-gærekstrakt-jernagar (ISP 6) medium 4: tyrosinagar (ISP 7)
Efter dyrkning ved 28°C i 14 dage på Pridham-Gottlieb agarme-20 dium udviste SANK stamme 60286 udnyttelse af carbonkilder som vist i nedenstående tabel.
Sukkerart Udnyttelse 25 D-glucose ++ L-arabinose ++ D-xylose + i-inositol ++ D-mannitol ++ 30 D-fructose ++ L-rhamnose ++ sucrose ++ raffinose ++ kontrol 35 ++ godt udnyttet + udnyttet ikke udnyttet 13 DK 168994 B1 4. Cel 1ekomponenter
Cellevæggen hos stammen SANK 60286 blev undersøgt i overensstemmelse med metoden omtalt af B. Becker et al. (Applied Mi-5 crobiology 12, 421 (1964)). Eftersom L,L-diaminopimelinsyre og glycin kunne påvises, viste cellevæggen sig at være cellevægstype I. Sukkerkomponenter i de hele celler blev derpå undersøgt i overensstemmelse med metoden omtalt af M.P. Lechevalier (Journjal of Laboratory & Clinical Medicine 71, 934 (1968)). 10 Intet karakteristisk mønster iagttoges.
Sammenfattet viste stammen sig at høre til slægten Streptomy-ces blandt act inomyceterne.
15 Identifikation af Streptomycesstammen SANK 60286 blev foretaget i overensstemmelse med ISP-standarden (The International Streptomyces Project); Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8. udgave; The Act inomycetes af S.A. Waksman samt andre nylige 1 itteratursteder vedrørende actinomyceter.
20
Ved sammenligning af egenskaberne hos stammen SANK 60286 med egenskaberne hos andre kendte arter tilhørende slægten Streptomyces var de morfologiske og fysiologiske egenskaber næsten identiske med egenskaberne hos Streptomyces hygroscopicus 25 subsp aureolacrimosus (J. Antibiotics 36, 438 (1983)).
Der iagttoges imidlertid en lille forskel i dyrkningsegenskaber mellem de to stammer. Det er velkendt, at actinomyceters egenskaber ændres i nogen grad, endog for den samme stamme, 30 efter successive dyrkninger. Stammer kan derfor ikke altid differentieres taksonomisk på grund af en ringe forskel i dyrkningsegenskaber.
Stammen SANK 60286, som producerer miIbemycinerne o.\\, o>\z· 35 <*13, aj4 og α^ς, er af disse årsager blevet identificeret som
Streptomyces hygroscopicus subsp aureolacrimosus SANK 60286. Denne stamme er i overensstemmelse med bestemmelserne i Buda-pesttraktaten den 20. oktober 1986 blevet deponeret hos the 15 DK 168994 B1 28°C. Fremstilling af mi lbemycinerne an, αχ3 og αχ4 når typisk et maksimum efter 5 til 15 dage, enten ved rystekultur eller tankkultur.
5 Produktionen af mi 1 bemyciner αχχ, θχ3 og αχ4 kan måles ved hjælp af følgende procedure. En milliliter af det dyrkede materiale udtages i et lille rør, 9 ml 80% vandig methanol tilsættes, og røret rystes og centrifugeres. Højtryksvæskekromatografi (såsom en H-2151, ODS omvendt fase-søjle. Senshu Co., 10 6 x 150 mm, og en pumpe, model 655, fra Hitachi) anvendes. Fem μΐ af prøven injiceres og fremkaldes med et blandet opløsningsmiddel af acetonitril og vand (80:20) ved en strømningshastighed på 1,5 ml/minut. Mi lbemycinerne αχχ, αχ3 og αχ4 måles ved hjælp af en UV-detektor (240 nm) og bestemmes ved 15 hjælp af en databehandlingsenhed (såsom en Union Tech. Inst. MCPD-350PC).
Til udvinding af mi 1bemycinerne αχχ, αχ3 og αχ4 fra dyrkningsmediet kan der anvendes en adsorbent, såsom aktivt carbon, 20 aluminiumoxid eller silicagel, en syntetisk adsorbent, såsom "Diaion" HP-20 (Mitsubishi Chem. Ind. Ltd.), en adsorbent såsom "Avicel" (Asahi Chem. Ind. Co. Ltd.) eller filtrerpapir, en jonbytterharpiks eller et jonbyttende gelfi 1 trerings-materiale. Mest effektiv er følgende procedure: : 25
Det dyrkede materiale filtreres under anvendelse af et filterhjælpemiddel, såsom diatomit. Den opnåede kage ekstraheres med methanol til opløsning af de ønskede forbindelser i vandig methanol. Vand tilsættes, og blandingen ekstraheres med hexan. 30 Hexanopløsningen inddampes under formindsket tryk til opnåelse af et olieagtigt materiale, som indeholder mi 1bemycinerne αχχ, αχ3 og αχ4· Det olieagtige materiale indeholdende milbemyci-nerne αχχ, αχ3 og αχ4 adsorberes på en Lobarsøjle Si60 (Merck, størrelse B) og elueres med et blandet opløsningsmiddel af 35 hexan og ethylacetat (8:2) til opsamling af fraktioner, der hver indeholder mi 1bemycinerne αχχ, αχ3 eller αχ4· Hver fraktion indeholdende en hvilken som helst af milbemycinerne inddampes under formindsket tryk til opnåelse af et olieagtige 16 DK 168994 B1 materiale. Olien blandes med en ringe mængde methanol, adsorber es på en Lobarsøjle RP-8 (Merck, størrelse B) og elueres med et blandet opløsningsmiddel af acetonitril og vand (80:20). Fraktionerne, der hver indeholder en af disse forbin-5 delser, opsamles, og efter afdestillation af acetonitril under formindsket tryk ekstraheres de med ethylacetat. Ved hjælp af HPLC (omvendt fasesøjle) kan til slut hver af miIbemycinerne on, α13 °9 a14 opnås som et pulver. Mi 1 bemycinerne 012 og 015 kan også opnås på lignende måde.
10
Forbindelserne med formlen (I) har fortrinlig akaricid virkning overfor voksne og æg af den toplettede edderkopmide (Tetranychus), citrus rød mide (Panonychus), europæisk rød mide (Panonychus) og rustmider, som er parasit-15 tiske overfor frugttræer, grøntsager og blomstrende planter, og overfor Ixodidae, Dermanysside, Sarcoptidae og andre parasitter, der er parastittiske overfor dyr. Forbindelserne har endvidere virkning overfor Oestrus, Lucilia, Hypoderma og Gau-trophilus, lopper og lus blandt andre, som er parasittiske 20 overfor dyr og fugle, boliginsekter, såsom kakerlakker, stuefluer og andre insekter, samt forskellige skadelige insekter indenfor landbrugs- og havebrugsområdet, såsom bladlus, kålmøl og larver af Lepidoptera. Forbindelserne fremstillet ifølge opfindelsen har endvidere virkning overfor Meloidogyne, 25 Bursaphelenchus, Rhizoglyphus og andre arter i jord.
Endvidere har forbindelserne med formlen I fortrinlig pa-rasiticid overfor endoparasitter på dyr og mennesker. Især er forbindelserne effektive ikke alene overfor nematoder, som er 30 parasittiske overfor husdyr, fjerkræ og sådanne husdyr som svin, får, geder, kvæg, heste, hunde, katte og høns, men også overfor parasitter hørende til Filariidae eller Setariidae samt parasitter, der findes i fordøjelseskanalen, blodet og andre væv og organer hos mennesker.
35 Når forbindelserne med formlen I er bestemt til anvendelse til landbrugsmæssige og havebrugsmæssige formål, kan de bringes til at indgå i præparater, der konventionelt anvendes 17 DK 168994 B1 til landsbrugsmæssige kemikalier, såsom puddere, befugtelige •pulvere, emulgerbare koncentrater, vandige eller olieagtige suspensioner og aerosoler, ved blanding af dem med barere eller om nødvendigt hvilke som helst andre hjælpestoffer. Bæ-5 rerne kan være naturlige eller syntetiske og uorganiske eller organiske materialer, som inkorporeres i landbrugspræparater med henblik på at hjælpe den aktive bestanddel til at nå sit målsted og til at gøre det lettere at lagre, transportere og håndtere den aktive bestanddel.
10
Som egnede faste bærere kan nævnes uorganiske materialer, såsom lerarter (for eksempel kaolinit, montmorillonit og atta-pulgit), tale, glimmer, pyrophylit, pimpsten, vermiculit, gips, calciumcarbonat, dolomit, diatoméjord, magnesiumcarbo-15 nat, apatit, zeolit, kiselsyreanhydrid og syntetisk calciumsilikat, vegetabilske organiske materialer, såsom soyabønnepul-ver, tobakspulver, valnøddepulver, hvedemel, træmel, stivelse og krystallinsk cellulose, syntetiske eller naturlige højmolekylære forbindelser, såsom eumaronharpikser, jordolieharpik-20 ser, alkydharpikser, polyvinylchlorid, polyalkylenglycoler, ketonharpikser, estergummi arter, copal gummi arter og dammargum-miarter, voksarter, såsom carnaubavoks og bivoks, og urinstof.
Som egnede flydende bærere kan nævnes paraffiniske eller 25 naphtheniske hydrocarboner, såsom petroleum, paraffinolie, spindelolie og hvid olie, aromatiske hydrocarboner, såsom benzen, toluen, xylen, ethylbenzen, eumen og methylnaphthalen, chlorerede hydrocarboner, såsom carbontetrachlorid, chloroform, trichlorethylen, monochlorbenzen og o-chlortoluen, ethe-30 re, såsom dioxan og tetrahydrofuran, ketoner, såsom acetone, methylethylketon, diisobutylketon, cyklohexanon, acetophenon og isophoron, estere, såsom ethylacetat, amylacetat, ethylgly-colacetat, diethylenglycolacetat, dibutylmaleat og diethylsuc-cinat, alkoholer, såsom methanol, n-hexanol, ethylenglyeol, 35 diethylenglyeol, cyklohexanol og benzyl al kohol, etheralkoho-ler, såsom ethylenglycolethylether, ethylenglycolphenylether, diethylenglycolethylether og diethylenglycolbutylether, polære opløsningsmidler, såsom dimethyl formamid og dimethyl sulfoxid, samt vand.
DK 168994 B1 18
Som egnede gasformige bærere kan nævnes luft, nitrogen, carbondioxid og Freon (varemærke)-gas. Disse gasser kan blandes med henblik på sprøjtning.
5 Med henblik på at forbedre sådanne egenskaber ved præparaterne som dispersion, emulgering, spredning, gennemtrængning og vedhæftning, kan om nødvendigt forskellige slags overfladeaktive midler og højmolekylære forbindelser tilsættes, ved hjælp af hvilke præparaterne befugteligehed, vedhæftning og absorption 10 til dyr og plante kan forstærkes til forøgelse af effekti viteten.
Som overfladeaktive midler, der kan anvendes til emulgering, dispergering, befugtning, spredning, binding, desintegrations-15 styring og stabilisering af de aktive bestanddele, fluiditets-forbedring samt rusthindring kan anvendes hvilke som helst af ikke-ionisk, anionisk, kationisk og amfotér type, men blandt disse anvendes sædvanligvis ikke-ioniske og/eller anioniske overfladeaktive midler. Som egnede ikke-ioniske overflade-20 aktive midler kan for eksempel nævnes polymerisationsadduk- terne af ethylenoxid med højere alkoholer, såsom laurylalko-hol, steraylal kohol og oelylalkohol, polymerisationsaddukterne af ethylenoxid med alkylphenoler, såsom isooctyl phenol og no-nylphenol, polymerisationsaddukterne af ethylenoxid med alkyl-25 naphtholer, såsom butylnaphthol og octylnaphthol, polymerisationsaddukterne af ethylenoxid med højere fedtsyrer, såsom palmi tinsyre, stearinsyre og oliesyre, polymerisationsaddukterne af ethylenoxid med mono- eller dialkylphosphorsyre, såsom steary1phosphorsyre og di 1aury1phosphorsyre, polymerisa-30 tionsaddukterne af ethylenoxid med am i ner, såsom dodecy1 am i n og sterainamid, højere fedtsyreestere af polyalkoholer, såsom sorbitan, og polymerisationsaddukterne af ethylenoxid dermed, og polymerisationsaddukterne af ethylenoxid med propylenoxid. Som egnede anioniske overfladeaktive midler kan for eksempel 35 nævnes alkylsulfat(ester)salte, såsom natriumlaurylsulfat, og aminsalte af oleylalkoholsvovlsyreester, alkylsulfonater, såsom natriumsalt af sulforavsyredioctylester og natrium-2-ethylhexensulfonat, og arylsulfonater, såsom natri umisopropyl- DK 168994 B1 19 naphtha 1ensu1 fonat, natriummethylen-bis-naphthalensulfonat, •natriumligninsulfonat og natriumdodecylbenzensulfonat.
Med henblik på forbedring af præparatets egenskaber og forø-5 gelse af den biologiske virkning kan midlerne , der indeholder forbindelserne fremstillet ifølge opfindelsen, anvendes i kombination med højmolekylære forbindelser og andre hjælpestoffer, såsom kasein, gelatine, albumin, lim, natri'umalginat, carboxymethyl-cellulose, methylcellulose, hydroxyethylcellulose og polyvinylalkohol.
10
De ovenfor nævnte bærere og forskellige hjælpestoffer kan anvendes alene eller i enhver ønsket kombination afhængigt af præparattypen, anvendelsesmålet og lignende faktorer.
15 Puddere kan for eksempel indeholde fra 1 til 25 vægt% aktiv bestanddel i almindelighed samt en fast bærer som resten.
Befugtelige pulvere kan for eksempel indeholde fra 10 til 90 vægt% aktiv bestanddel i almindelighed og en fast bærer samt 20 di spergerende middel og befugtningsmiddel som resten. Om nødvendigt kan et beskyttende kolloidt middel, thixotropt middel og anti skummiddel til sættes.
Emulgérbare koncentrater kan for eksempel indeholde fra 5 til 25 50 vægt% aktiv bestanddel generelt og fra 5 til 20 vægt% emul geringsmiddel samt en flydende bærer som resten. Om nødvendigt kan et antikorrosionsmiddel tilsættes.
Oliepræparater kan for eksempel indeholde fra 0,5 til 5 vægt% 30 aktiv bestanddel generelt og en flydende bærer, såsom petroleum, som resten.
Aerosoler kan for eksempel indeholde fra 0,1 til 5 vægt% aktiv bestanddel generelt og eventuelt en parfume og en olieagtig 35 og/eller flydende bærer som resten. Drivmidler, såsom fordråbet jordoliegas, en f1uorcarbongas og carbondioxid kan være påfyldt.
DK 168994 B1 20
Efter at være sammensat på forskellig vis som ovenfor nævnt kan midlet indeholdende en forbindelse med formlen I effektivt påføres på de afgrøder og husdyr, der er parasitti seret med skadelige insekter eller mider på rismarker, i frugtplantager og på højlandsmarker, ved 5 behandling af afgrøders stængler og blade, jorden eller husdyr ved en koncentration fra 0,5 til 100 ppm af den aktive bestanddel .
Når forbindelserne med formlen I tænkes anvendt til dyr 10 og mennesker som et anthelmintisk middel, kan forbindelserne indgives oralt i form af drikke. Drikken er sædvanligvis en opløsning, suspension eller dispersion med et egnet ikke-toksisk opløsningsmiddel eller vand sammen med et suspenderingsmiddel, såsom bentonit, og et befugtningsmiddel eller en-15 hver anden grundmasse. Almindeligvis indeholder drikken også et antiskumningsmiddel. Drikkesammensætningen indeholder generelt fra omkring 0,01 til 0,5 vægt%, fortrinsvis fra 0,01 til 0,1 vægt% af den aktive bestanddel.
20 Når forbindelserne med formlen I skal gives til dyr i form af foder, kan forbindelserne anvendes ved homogen dis-pergering af dem i foder, som topdressing eller i pilleform. Med henblik på opnåelse af den ønskede anthelmintiske virkning bør den aktive bestanddel generelt være til stede i en mængde 25 fra 0,0001 til 0,02% som slutindholdet.
Forbindelserne med formlen I kan også administreres: pa-renteralt til dyr ved injektion i for-maven, muskler, luftrør eller ved subkutan injektion, opløst eller dispergeret i en 30 flydende bærergrundmasse. Til den parenterale administration kan de aktive forbindelser fortrinsvis blandes med en egnet vegetabilsk olie, såsom jordnøddeolie eller cottonolie. En sådan præparatsammensætning indeholder generelt fra 0,05 til 50 vægt% af den aktive bestanddel.
35
Forbindelserne med formlen I kan også administreres-lokalt ved blanding af dem med en egnet bærer, såsom dimethyl-sulfoxid eller et hydrocarbonopløsningsmiddel. Denne præparat DK 168994 B1 21 type kan påføres direkte på overfladen af dyrekroppen ved anvendelse af en spray eller ved direkte injektion.
Den mest egnede orale dosering til opnåelse af det bedste re-5 sultat afhænger af dyrearten, der skal behandles, og typen og graden af parasittisk infektion. Generelt er dosen fra 0,01 til 100 mg, fortrinsvis fra 0,5 til 50,0 mg per 1 kg af dyrets legemsvægt. Dosen kan gives enkeltvis eller som flere delte doser i et relativt kort tidsrum, såsom fra 1 til 5 dage.
10
Den foreliggende opfindelse illustreres mere detaljeret ved hjælp af de følgende eksempler.
Eksempel 1 15 milbemyciner &ιι, «13 og (forbindelser nr. 1, 2 og 3) 20 I hver af ti 500 ml Erlenmeyerkolber blev 100 ml af et forkulturmedium indeholdende henholdsvis sucrose, polypepton og K2HPO4 (1%, 0,35% eller 0,05%) podet med en øskenfuld Strepto-myces hygroscopicus subsp aureolacrimosus SANK 60286. Efter dyrkning på en rotationsryster i 48 timer ved 28eC blev 1 li-25 ter af kulturvæsken overført til to 30 liter fermenteringsglas, der hver indeholdt 20 liter produktionsmedium (sucrose 8%, soyabønnepulver 1%, skummetmælk 1%, gærekstrakt 0,1%, kødekstrakt 0,1%, CaC03 0,3%, K2HPO4 0,03%, MgS04,7H20 0,1%,
FeS04,7H20 0,005%, pH før sterilisering 7,2).
30
Dyrkningen blev udført ved 28eC i 12 dage i fermenteringsglassene ved en steriliseret luftstrøm på 0,5 vvm, under et indre tryk på 0,5 kg*cm"2f Ved en rotation på 40 til 180 o/min. og ved en DO-værdi på 4 til 7 ppm. 32 liter af det dyr-35 kede materiale blev blandet med 1,8 kg "celite" og filtreret. Myceliumkagen blev vasket med 5 liter vand, og filtratet og vaskevæskerne blev bortkastet. Myceliumkagen blev blandet med 20 liter methanol i 1 time og efter filtrering atter vasket med 5 liter methanol.
DK 168994 B1 22
Filtratet og vaskevæskerne blev opsamlet og inddampet under •formindsket tryk til opnåelse af cirka 2 liter vandig restvæske. Denne væske blev ekstraheret tre gange med 2 liter hexan. Hexanlaget blev vasket tre gange med 1 liter 2% natrium-5 hydroxidopløsning. Hexanlaget blev tørret over vandfrit natriumsulfat og filtreret. Filtratet inddampedes til opnåelse af 38 g af et olieagtigt materiale. 20 g af dette olieagtige materiale opløstes i 500 ml hexan. Opløsningen blev fyldt på en søjle, som var blevet fremstillet ud fra 300 g silicagel 10 (Mal 1inckrodt Inc., silica type 60) i forbindelse med hexanbe-handling, og fremkaldtes med 2 liter hexan og derpå med hexan/ethylacetat (3:1).
Ved måling af eluerede fraktioner under anvendelse af HPLC 15 blev mi lbemycinerne an, a12, «13/ a14 °9 a15 opsamlet som en blanding. Fordampning af opløsningsmidlet resulterede i 1,9 g af et olieagtigt råprodukt. Hele produktet opløstes i 10 ml 50¾ methanol/vand. Opløsningen blev fyldt på en søjle, der var fremstillet ud fra 160 g silaneret silicagel (Merck Co., Art 20 7719), der var behandlet med 50% methanol/vand, og fremkaldtes med 60% methanol/vand og derpå med 70% methanol/vand samt til slut med 80% methanol/vand. Ved måling af de eluerede fraktioner med HPLC blev mi 1 bemycinerne an, aj2, al3* ®14 °9 a15 opnået som en blanding.
25
Fordampning af opløsningsmidlet resulterede i 840 mg af et olieagtigt råprodukt. Hele produktet opløstes i 20 ml aceto-nitril. Acetonitrilopløsningen underkastedes præparativ HPLC under anvendelse af en omvendt fase-søjle (Senshu Co., ODS, 30 H-5251, 20 x 250 mm). 1 ml prøver af opløsningen påfyldtes hver gang og fremkaldtes med 80% aceton i tr i 1/vand ved en strømningshastighed på 9,9 ml/min. Ved måling af fraktionerne under anvendelse af UV ved 240 nm opnåedes de produktholdige fraktioner. Fra hver sådan fraktion afdesti lieredes opløs-35 ningsmidlet. Lyofi 1isering af den vandige restvæske resulterede i 128 mg au, 11,7 mg aj2, 14,8 mg a^, 43 mg 0^4 og 3 mg <X|5 i den eluerede orden, og hvert som et pulveragtigt materiale.
DK 168994 B1 23 milbemycin grundstofanalyse (%): C=68,83, H=8,32 5 molekylvægt: 626 (målt ved elektronbombardement-massespektrum. Det samme gælder i det følgende).
molekylær formel: C3gH5Q0g 10 specifik drejning: [a]22 - + 104,3° (C=l,05, CHClg) (målt ved anvendelse af natrium-D-1inien. Det samme gælder i det følgende) .
UV absorptionsspektrum: Xmax (CH3OH) nm (El%, cm~l): 230 (sh), 15 238 (990), 244 (990), 252 (sh) IR absorptionsspektrum: vmax (KBr) cm"-!: 3450, 2950, 1715, 1650, 1450, 1380, 1330, 1270, 1220, 1180, 1160, 1140, 1090, 1080, 1050, 1020, 990, 940, 850 20 proton-kernemagnetisk resonansspektrum (CDCI3, 270 MHz): 1,90 (3H, singlet, trans-CH3-C(CH3)=CH-C00-) 2,15 (3H, singlet, cis-CH3-C(CH3)=CH-C00-) 25 3,27 (IH, dublet af kvartetter, C25H) 4,00 (IH, dublet, J=6Hz, C6H) 4,65-4,90 (4H, multiplet, 036Η, C27H) elektronbombardement-massespektrum: 30 m/z= 626 (M+), 558, 526, 508, 400, 181, 153 HPLC-retentionstid: 13,4 minutter (ODS, H-2151, 6 x 150 mm,
Senshu Co., fremkaldende opløsningsmiddel 80¾ acetoni-35 tril/vand, strømningshastighed 1,5 ml/min., måling ved UV 240 nm. De samme betingelser gælder i det følgende).
25 DK 168994 B1 e1ektronbombardement-massespektrum: m/z= 628 (M+)f 526, 508, 276, 181, 153 HPLC-retentionstid: 16,4 minutter milbemycin aj4 grundstofanalyse (%)· C=67,62, H=7,84 molekylvægt: 640 molekylær formel: C37H52O9 specifik drejning: [a]23 = + 96,1° (0=1,14, CHC13) UV absorptionsspektrum: Xmax (CH3OH) nm (E1%, cm~l): 230 (sh), 237 (800), 244 (810), 253 (sh) proton-kernemagnetisk resonanspektrum (CDC13, 270 MHz): 3,09 (IH, dublet af tripletter, J=2,4, 9,3 Hz, C25H) 4,00 (IH, dublet, J=6,6 Hz, C6H) 4,64-4,88 (4H, multiplet, C26H# C27H) 5,81 (IH, bred singlet, C3H) IR absorptionsspektrum: vmax (KBr) cm-1: 3450, 2950, 1720, 1650, 1450, 1380, 1340, 1270, 1220, 1180, 1140, 1100, 1060, 1030, 990, 960, 860 elektronbombardement-massespektrum: rn/z- 640, 540, 522, 276, 263, 195, 167 HPLC-retentionstid: 18,0 minutter 26 DK 168994 B1
Eksempel 2
Aktivitetsforsøg: voksne mider
Prøveopløsninger blev fremstillet, der hver indeholdt 0,3 ppm, 1 ppm eller 3 ppm af individuelle forbindelser fremstillet ifølge opfindelsen eller af et af tre kontrolmidler (milbemycin C, en blanding af milbemycin C-^ og milbemycin C2, der er beskrevet i japansk patentskrift nr. 29742-84, 26-acetoxy-milbemycin A4, eller 26-acetoxyavermectin B^), og 0,01% spredemiddel.
Toplettede edderkopmider (Tetranychus urticae), der er følsomme overfor organiske phosphorholdige insekticider, blev podet på foderplanters (Vigna sinensis Savi) primærblad. En dag efter podning blev 7 ml af den ovenfor nævnte prøveopløsning ved hjælp af en rotationssprøjte (Mizuho Seisakusho Co.) sprøjtet til frembringelse af en sprøjtemængde på 3,5 mg/cm2 blad. Efter at være besprøjtet lod man bladet opbevare i et rum, der blev holdt ved 25°C. Efter tre dage blev det ved hjælp af et dobbeltmikroskop undersøgt, om de voksne insekter døde eller ikke døde, og dødeligheden (%) blev beregnet. Nedenstående tabel viser resultaterne.
Forbindelse nummer Dødelighed (%) 3 ppm 1 ppm· 0,3 ppm 1 (a1:l) 100 100 93,0 2 (a13) 100 95,6 77,3 3 (a14) 100 100 100
Ci + C 2 100 100 28 26-acetoxymi1bemyciη A4 92 81 23 26-acetoxyavermectin B^a 83 65 15 27 DK 168994 B1
Eksempel 3
Aktivitetsforsøg: mideæg
Prøveopløsninger blev fremstillet, der hver indeholdt l ppm eller 3 ppm af individuelle forbindelser fremstillet ifølge opfindelsen eller af et af tre kontrolmidler (milbemycin C, en blanding af milbemycin Cj og milbemycin C2, som er beskrevet i japansk patentskrift nr. 29742-84, 26-acetoxymilbemycin A4, eller 26-acetoxyavermectin B^a), og 0,01% spredemiddel.
Voksne toplettede hunedderkoppemider lod man lægge æg på foderplanters primærblad. De voksne mider blev fjernet til opnåelse af forsøgsblade, der hver bar cirka 50 æg.
På lignende måde som den i det foregående eksempel nævnte blev prøveopløsningen påført på forsøgsbladet. Efter opbevaring i to uger i et rum, der blev holdt ved 25°C, blev antallet af uklækkede æg talt, og andelen af uklækkede æg (%) blev beregnet .
Den efterfølgende tabel viser resultaterne.
Forbindelse nummer Ovicidal virkning (%) 3 ppm 1 ppm 1 <αΠ> 94 51 2 (a13> 94 71 3 ^a14) 95 57 C1 + c2 2,7 2,1 26-acetoxymilbemycin A4 31 12 26-acetoxyavermectin Bja 4,2 2,4
Det viste sig således, at de hidtil ukendte milbemyciner fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse udviste en høj akaricid virkning overfor voksne mider i en så lav koncentration som 0,3 ppm og også havde nyttig ovicidal virkning.

Claims (1)

  1. 28 DK 168994 B1 Fremgangsmåde til fremstilling af en parasiticid makrolidfor-bindelse med formlen (I): I I I o R ^H3 li T \ °^0 (I) il ohT 0-liv /CB3 [ CH 0C0CH=c ca 2 - \ R 5 hvori: R1 er en methylgruppe, og R8 betegner en methylgruppe eller en ethylgruppe, eller R1 er en ethylgruppe, og R8 betegner en methylgruppe, kendetegnet ved, at man fermenterer den produktive 10 mikroorganisme Streptomyces hygroscopicus subsp aureolacri-mosus SANK 60286 (FERM BP-1190) efterfulgt af isolation af den ønskede forbindelse.
DK090393A 1986-12-11 1993-08-04 Fremgangsmåde til fremstilling af en parasiticid macrolidforbindelse DK168994B1 (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP29545286 1986-12-11
JP61295452 1986-12-11

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK90393D0 DK90393D0 (da) 1993-08-04
DK90393A DK90393A (da) 1993-08-04
DK168994B1 true DK168994B1 (da) 1994-07-25

Family

ID=17820769

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK653287A DK168488B1 (da) 1986-12-11 1987-12-11 Fremgangsmåde til fremstilling af en parasiticid macrolidforbindelse
DK090393A DK168994B1 (da) 1986-12-11 1993-08-04 Fremgangsmåde til fremstilling af en parasiticid macrolidforbindelse

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK653287A DK168488B1 (da) 1986-12-11 1987-12-11 Fremgangsmåde til fremstilling af en parasiticid macrolidforbindelse

Country Status (23)

Country Link
US (1) US5008191A (da)
EP (1) EP0274871B1 (da)
KR (1) KR960013079B1 (da)
CN (2) CN1020114C (da)
AR (1) AR243528A1 (da)
AT (1) ATE73805T1 (da)
AU (1) AU605218B2 (da)
BR (1) BR8706745A (da)
CA (1) CA1338050C (da)
DE (1) DE3777604D1 (da)
DK (2) DK168488B1 (da)
EG (1) EG18720A (da)
ES (1) ES2033325T3 (da)
GR (1) GR3004882T3 (da)
HU (1) HU198723B (da)
IL (1) IL84801A (da)
NZ (1) NZ222884A (da)
OA (1) OA08698A (da)
PH (1) PH26780A (da)
PT (1) PT86350B (da)
RU (1) RU1836426C (da)
SU (1) SU1604159A3 (da)
ZA (1) ZA879279B (da)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2587241B2 (ja) * 1986-07-24 1997-03-05 ビ−チヤム・グル−プ・ピ−エルシ− 新規化合物、その製法及びそれを含む医薬組成物
US5212322A (en) * 1986-12-11 1993-05-18 Sankyo Company, Limited Macrolide compounds, their preparation and their use
AR243528A1 (es) * 1986-12-11 1993-08-31 Sankyo Co Procedimiento para preparar compuestos de macrolida y un procedimiento para producir con los mismos una composicion parasiticida.
EP0298423A3 (en) * 1987-07-07 1989-10-25 Kumiai Chemical Industry Co., Ltd. Antibiotic ksb-1939 compounds and production process thereof as well as pesticidal agents containing same
NZ233680A (en) * 1989-05-17 1995-02-24 Beecham Group Plc Avermectins and milbemycins and compositions thereof
IT1255135B (it) * 1992-05-05 1995-10-20 Principio attivo a base di avermectine, ceppo e procedimento per la sua preparazione e composizione veterinaria che lo contiene.
US5364623A (en) * 1993-04-30 1994-11-15 Bristol-Myers Squibb Company Antibiotic produced by Bacillus subtilis ATCC 55422 capable of inhibiting bacteria
US5362863A (en) * 1993-09-29 1994-11-08 Merck & Co., Inc. Process for the preparation of 4"-amino avermectin compounds
AU4925100A (en) * 1999-05-26 2000-12-18 Novartis Ag 4-substituted milbemycin derivatives
JP4373080B2 (ja) * 2002-12-24 2009-11-25 三井化学アグロ株式会社 ミルベマイシン類の精製法
EP2886640A1 (en) 2013-12-18 2015-06-24 Riga Technical University Process for isolation of milbemycins A3 and A4
CN103833811A (zh) * 2014-03-25 2014-06-04 武汉大学 一种阿维菌素衍生物及其制备方法
CN106148216B (zh) * 2015-03-27 2019-06-04 浙江海正药业股份有限公司 一种链霉菌及其生产米尔贝霉素a3的方法
CN106148215B (zh) 2015-03-27 2019-06-14 浙江海正药业股份有限公司 一种链霉菌及其生产米尔贝霉素a4的方法
CN104860961B (zh) * 2015-04-10 2017-08-04 新宇药业股份有限公司 一种制备5‑氧（对‑硝基苯甲酰）‑尼莫克汀的方法
CN109516996B (zh) * 2018-11-26 2021-12-17 山东农业大学 一种大环内酯类衍生物、其合成及应用
CN117568205A (zh) * 2023-10-12 2024-02-20 湖北宏中药业股份有限公司 一株米尔贝霉素高产菌株及其应用

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3984564A (en) * 1972-06-08 1976-10-05 Sankyo Company Limited Antibiotic substances B-41, their production and their use as insecticides and acaricides
US4429042A (en) * 1978-09-08 1984-01-31 Merck & Co., Inc. Strain of Streptomyces for producing antiparasitic compounds
US4378353A (en) * 1981-02-17 1983-03-29 Merck & Co., Inc. Novel C-076 compounds
US4412991A (en) * 1981-08-28 1983-11-01 Merck & Co., Inc. 22-Hydroxy derivatives of C-076 compounds, pharmaceutical compositions and method of use
NZ201681A (en) * 1981-09-03 1985-11-08 Merck & Co Inc Avermectin derivatives and parasiticidal compositions
US4415669A (en) * 1981-12-07 1983-11-15 Merck & Co., Inc. Substance and process for its production
US4582852A (en) * 1983-11-02 1986-04-15 Ciba-Geigy Corporation 14- and 15-hydroxy milbemycin derivatives for controlling plant and animal parasites
US4547491A (en) * 1984-07-18 1985-10-15 Merck & Co., Inc. C-8A-Oxo-avermectin and milbemycin derivatives, pharmaceutical compositions and method of use
HUT39739A (en) * 1984-12-04 1986-10-29 Ciba Geigy Ag Process for production of derivatives of 13,3-milbemycin and medical preparatives containing thereof
NZ215917A (en) * 1985-05-02 1989-10-27 Merck & Co Inc 22-oh milbemycin derivatives and parasiticidal compositions
GB8606116D0 (en) * 1986-03-12 1986-04-16 Glaxo Group Ltd Process
GB8606120D0 (en) * 1986-03-12 1986-04-16 Glaxo Group Ltd Process
GB8606123D0 (en) * 1986-03-12 1986-04-16 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
JP2587241B2 (ja) * 1986-07-24 1997-03-05 ビ−チヤム・グル−プ・ピ−エルシ− 新規化合物、その製法及びそれを含む医薬組成物
AR243528A1 (es) * 1986-12-11 1993-08-31 Sankyo Co Procedimiento para preparar compuestos de macrolida y un procedimiento para producir con los mismos una composicion parasiticida.
ES2053797T3 (es) * 1987-02-04 1994-08-01 Ciba Geigy Ag Procedimiento microbiano para la obtencion de derivados de milbemicina.
EP0298423A3 (en) * 1987-07-07 1989-10-25 Kumiai Chemical Industry Co., Ltd. Antibiotic ksb-1939 compounds and production process thereof as well as pesticidal agents containing same
JPH01197488A (ja) * 1988-02-02 1989-08-09 Kumiai Chem Ind Co Ltd 生理活性物質ｋｓｂ−１９３９化合物及びその製造法
JPS6429378A (en) * 1987-07-23 1989-01-31 Kumiai Chemical Industry Co Physiologically active substance and production thereof
JPH01272587A (ja) * 1987-10-09 1989-10-31 Microbial Chem Res Found マクロライド抗生物質ｍｉ１９８物質及びその製造法、並びに線形動物又は節足動物の殺滅剤

Also Published As

Publication number Publication date
ZA879279B (en) 1989-08-30
AR243528A1 (es) 1993-08-31
CN1064866A (zh) 1992-09-30
CN1020114C (zh) 1993-03-17
OA08698A (en) 1989-03-31
CN1028530C (zh) 1995-05-24
DK90393D0 (da) 1993-08-04
EP0274871A1 (en) 1988-07-20
HU198723B (en) 1989-11-28
IL84801A0 (en) 1988-06-30
ATE73805T1 (de) 1992-04-15
PT86350A (en) 1988-01-01
HUT45982A (en) 1988-09-28
BR8706745A (pt) 1988-07-19
DK168488B1 (da) 1994-04-05
RU1836426C (ru) 1993-08-23
DK653287D0 (da) 1987-12-11
DK90393A (da) 1993-08-04
ES2033325T3 (es) 1993-03-16
CA1338050C (en) 1996-02-13
SU1604159A3 (ru) 1990-10-30
NZ222884A (en) 1992-02-25
EP0274871B1 (en) 1992-03-18
EG18720A (en) 1993-12-30
AU605218B2 (en) 1991-01-10
IL84801A (en) 1992-02-16
PT86350B (pt) 1990-11-07
US5008191A (en) 1991-04-16
KR880007740A (ko) 1988-08-29
CN87108339A (zh) 1988-07-13
KR960013079B1 (ko) 1996-09-30
DE3777604D1 (de) 1992-04-23
DK653287A (da) 1988-06-12
GR3004882T3 (da) 1993-04-28
PH26780A (en) 1992-10-13
AU8247987A (en) 1988-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK168994B1 (da) Fremgangsmåde til fremstilling af en parasiticid macrolidforbindelse
AP37A (en) Antiparasitic agents and process of their preparation.
EP0170006A2 (en) Method and compositions for helmintic, arthropod ectoparasitic and acaridal infections with novel agents
BG60520B1 (bg) Макролидни съединения
DK168159B1 (da) Fremgangsmåde til fremstilling af med avermectiner og milbemyciner beslægtede forbindelser
US5702924A (en) Process for preparing antiparasitic agents
US5439934A (en) Method and compositions for helmintic, arthropod ectoparasitic and acaridal infections with novel agents
AU615921B2 (en) Antibiotic ksb-1939 compounds and production process thereof as well as pesticidal agents containing same
US5212322A (en) Macrolide compounds, their preparation and their use
US5198464A (en) Method and compositions for helmintic, arthropod ectoparasitic and acaridal infections with novel agents
CA1337934C (en) Macrolide compounds, their preparation and their use
EP0332216B1 (en) Novel substance for agricultural use and process for its production
JPH06345768A (ja) 新規ミルベマイシン化合物
KR890000405B1 (ko) 아버멕틴 및 밀베마이신 유도체의 제조방법
JPH01272587A (ja) マクロライド抗生物質ｍｉ１９８物質及びその製造法、並びに線形動物又は節足動物の殺滅剤
JP2700028B2 (ja) マクロライド化合物の製造法
JPH078871B2 (ja) 抗生物質ミルベマイシン化合物
JPS62155281A (ja) 抗生物質ミルベマイシン化合物
JPH01193270A (ja) ミルベマイシン化合物、その製法及び用途
JPH032870B2 (da)
JPS63402B2 (da)
IE64520B1 (en) Method for controlling chronic respiratory disease and necrotic enteritis in avian species
MXPA94003509A (en) Procedure for the production of demaccured compounds, product obtained and compositioninsecticide or acaric
JPH0363550B2 (da)
JPH1072469A (ja) 新規ミルベマイシン化合物及びその製法

Legal Events

Date Code Title Description
A0 Application filed
B1 Patent granted (law 1993)
PBP Patent lapsed

Country of ref document: DK