PT730587E - 3-aril-2-isoxazolinas como agentes anti-inflamatorios - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "3-ARIL-2-ISOXAZOLINAS COMO AGENTES ANTI-INFLAMATÓRIOS "

Antecedentes do invento

Este invento refere-se a uma série de compostos de 3-fenil-2-isoxazolina que são inibidores selectivos de fosfodiesterase (PDE) do tipo IV e deste modo são úteis no tratamento do SIDA, asma, artrite, bronquite, doença das vias respiratórias obstructiva crónica, psoríase, rinite alérgica, dermatite e outras doenças inflamatórias.

Este invento refere-se também aos sais farmaceuticamente aceitáveis dos referidos compostos; a um método de usar tais compostos na inibição da PDE]V, ao tratamento de condições inflamatórias e ao tratamento do SIDA, asma, artrite, bronquite, doença das vias respiratórias obstructiva crónica, psoríase, rinite alérgica e dermatite em mamíferos, especialmente humanos; e a composições farmacêuticas úteis para este fim.

As "condições inflamatórias" que podem ser tratadas de acordo com este invento incluem, mas não estão limitadas a, doença pulmonar obstructiva crónica, choque séptico, dermatite atópica, bronquite, artrite reuma-tóide e osteoartrite.

Desde o reconhecimento de que o AMP cíclico é um mensageiro intracelular secundário (E. W. Sutherland, e T. W. Rall, Pharmacol. Rev.. 1960, -2- 12,265), a inibição das fosfodiesterases têm sido um alvo para a modulação e, de acordo com isto, para uma intervenção terapêutica numa gama de processos de doenças. Mais recentemente, foram reconhecidas classes distintas de PDE (J. A. Beavo e D. H. Reifsnyder, TiPS. 1990, JJ_, 150). e a sua inibição selectiva conduziu a uma terapia com medicamentos melhorada (C. D. Nicholson, R. A. Chaliss e M. Shahid, TiPS. 1991, 12, 19). Mais particularmente, foi reconhecido que a inibição de PDEjV pode conduzir à inibição da libertação do mediador inflamatório (M. W. Verghese et al.. J. Mol. Cell. Cardiol., 1989, 12 (Suppl.II), S 61) e da relaxação do músculo liso das vias respiratórias (T. J. Torphy em Directions for New Anti-Asthma rugs, ed. S. R. 0'Donnell e C. G. A. Pwersson, 1988, 37, Birkhauser-Verlag). Deste modo, compostos que inibem a PDEiv mas que possuem fraca actividade contra outros tipos de PDE, inibirão a libertação de mediadores inflamatórios e relaxarão o músculo liso das vias respiratórias sem causar efeitos cardiovasculares ou efeitos anti-plaquetas.

Certos compostos de ácido isoxazolinofosfónico são descritos como sendo úteis para o tratamento de doenças do sistema imunitário na patente US-A-5,006,515.

Certos diétercatecóis são descritos como sendo úteis como inibido-res de PDEIV e deste modo são úteis no tratamento de doenças inflamatórias, SIDA, asma, artrite, bronquite, doença obstructiva crónica das vias respiratórias, psoríase, rinite alérgica e dermatite, no pedido de depósito de patente nos Estados Unidos, Série No. 07/984,408 efectuado em 2 Dezembro de 1992, pedido que é cessionado ao cessionário deste.

Certos compostos de pirimidona têm sido descritos como sendo úteis como anti-depressivos por Saccomano et al., na patente EP-A-0247725. Os mesmos compostos de pirimidona têm sido descritos como sendo úteis contra a -3-

asma e certas doenças da pele na patente WO-A-9107178, publicada em 30 de Maio de 1991.

Certos derivados de isoxazolo são descritos na patente WO-A-9203053 e na patente US-A-4889551. Compostos relacionados com estes são descritos nas patentes WO-A-8706576, WO-A-9307141, EP-A-0313997 e US-A-4193926.

Resumo do invento

Este invento refere-se a uma série de compostos 3-fenil-2-isoxazolina e aos sais farmaceuticamente aceitáveis de tais compostos. Estes novos compostos são inibidores selectivos de PDEIV, e como tal são úteis no tratamento de condições inflamatórias, SIDA, asma, artrite, bronquite, doença obstructiva crónica das vias respiratórias, psoríase, rinite alérgica e dermatite em mamíferos, especialmente humanos.

Os compostos do presente invento são de fórmula (I) ORi

as misturas racémicas, racémico-diasterioméricas e isómeros ópticos dos referidos compostos e os sais farmaceuticamente aceitáveis destes em que R1 é cicloalquilo (C3-C7), fenilalquilo possuindo de 1 a 6 átomos de carbono -4- na porção alquilo ou bicicloalquilo tendo de 6 a 9 carbonos; R é hidrogénio ou alquilo (CrC3); R3 é hidrogénio ou alquilo (CrC5); R4 é -CHO, amino, aminoalquilo tendo de 1 a 3 carbonos

X -(CH2)n-N X1 H , mono-hidroxialquilo tendo de 1 a 3 carbonos -COCH3, -(CH2)mC02H, ou hidroxi; em que m é independentemente 0, 1, 2 ou 3; e n é 0 ou 1-3 X1 é alquilo (C]-C4), ou alcoxifenilo possuindo de um a quatro átomos de carbono na porção alcoxi.

Um grupo preferido de compostos ou de sais farmaceuticamente aceitáveis destes são os compostos de fórmula (I) em que R1 é ciclopentilo ou um fenilaquilo possuindo de 4 a 5 carbonos na porção alquilo.

Outro grupo preferido de compostos ou de sais farmaceuticamente aceitáveis destes são os compostos de fórmula (I) em que R1 é 5-fenilpentilo.

Um outro grupo de compostos ainda mais preferido ou de sais farmaceuticamente aceitáveis destes são os compostos de fórmula (I) em que R1 é 5-fenilpentilo e R4 é -(CH2)mC02H, -CHO, -COCH3, hidroxi ou mono-hidroxialquilo tendo de 1 a 3 carbonos.

Um grupo mais preferido de compostos ou de sais farmaceuticamente aceitáveis destes são os compostos de fórmula (I) em que R1 é 5-fenilpentilo; R é hidrogénio, R é hidrogénio ou alquilo(Ci-Cs) e R é -(CH2)mC02H em que m = 0; particularmente em que R3 é hidrogénio, metilo, etilo ou propilo.

Os compostos particularmente mais preferidos deste invento são o ácido (+) ou (-)-5-etil-3-[4-metoxi-3-5(5-fenilpentiloxi)]fenil-2-isoxazolino-5-carboxílico. Dos dois, o ácido (-)-5-etil-3-[4-metoxi-3-5(5-fenilpentiloxi)]fenil-2-isoxazolino-5-carboxílico é o composto mais preferido. O termo alquilo abrange cadeias quer lineares quer ramificadas.

Descrição detalhada do Invento

Os compostos do presente invento possuindo a fórmula (I) compreendem as misturas racémicas, racemico-diasterioméricas e os isómeros ópticos dos referidos compostos e os sais farmaceuticamente aceitáveis destes. Os compostos do presente invento, possuindo a fórmula (I) tal como definida atrás, são rapidamente e geralmente preparados pelos processos reaccionais seguintes.

Os compostos de fórmula (I) em que R4 é um ácido carboxílico podem ser sintetizados misturando uma solução de metanol do éster alquílico correspondente, em que R4 é um éster etílico, com uma solução aquosa de uma base inorgânica tal como o KOH. À mistura é agitada à temperatura ambiente até a reacção estar praticamente completa. A mistura reaccional é trabalhada de acordo com métodos bem conhecidos dos peritos na matéria.

Os compostos de fórmula (I) em que R4 é carboximetilo (-CH2CO2H) são sintetizados por reacção de um composto de fórmula (I) em que R4 é hidroximetilo (-CH2OH) com cloreto de p-toluenossulfonilo na presença de uma amina terciária tal como a trietilamina num solvente inerte a 0 °C a 50 °C para originar um composto de fórmula (I) em que R4 é -CH2OTs, que é feito reagir com cianeto de lítio, sódio ou potássio num solvente inerte tal como o -6- DMSO a 0 °C a 100 °C para originar um composto de fórmula (I) em que R4 é -CH2CN, que é hidrolisado com uma base inorgânica tal como KOH em água e um solvente alcoólico à temperatura ambiente a 100 °C.

Os compostos de fórmula (I) em que R4 é um aldeído podem ser sintetizados por dissolução do correspondente composto de fórmula (I) em que R4 é -CONH-alquilo num solvente inerte seco tal como o tetra-hidrofurano, decrescendo a temperatura da solução até entre -65 °C a -78 °C e adicionando então gota a gota 3 a 5 equivalentes de hidreto de diisobutilalumínio (DIBAL-H) em hexano. A mistura reaccional é mantida a cerca de -78 °C durante cerca de 30 a 60 minutos e então deixa-se a aquecer até à temperatura ambiente. A mistura reaccional é trabalhada de acordo com métodos bem conhecidos dos peritos na matéria. O composto aldeído resultante pode ser opcionalmente reduzido para se obter o álcool correspondente. O composto aldeído é dissolvido num solvente alcoólico e tratado com boro-hidreto de sódio; a mistura é agitada à temperatura ambiente até a reacção estar praticamente completa.

Os compostos de fórmula (I) em que R4 é hidroxi podem ser sintetizados por dissolução do correspondente derivado aciloxi, tal como quando R4 é -OCOCH3, num solvente alcoólico e tratando a solução com aproximadamente 1,1 equivalentes de metóxido de sódio. A mistura reaccional é agitada à temperatura ambiente até a reacção estar praticamente completa, o que demora usualmente cerca de 1 hora.

Os compostos de fórmula (I) em que R4 é mono-hidroxialquilo, são sintetizados por redução do éter correspondente, e quando R4 é um éster alquílico, com hidreto de diisobutilalumínio (DIBAL-H) de acordo com o procedimento seguinte. Um composto de fórmula (I) em que R4 é um metil ou um éster etílico, é dissolvido em THF e arrefecido a cerca de -78 °C.São adicionados -7- aproximadamente 2 a 4 equivalentes de DIBAL-H em hexano à mistura de THF fria. A solução é aquecida a cerca de -30 °C e então terminada com uma solução diluída de HC1.

Altemativamente, os compostos de fórmula (I) em que R4 é hidroximetil, são sintetizados por redução de um composto de fórmula (I) em que R4 é um aldeído. O composto de aldeído é dissolvido num solvente alcoólico e tratado com boro-hidreto de sódio; a mistura é agitada à temperatura ambiente até a reacção estar praticamente completa. Além disso, os compostos de fórmula (I) em que R4 é 1-hidroxialquilo (ou seja, -CH(OH)alquilo) são sintetizados por redução do correspondente composto de fórmula (I) em que R4 é uma porção cetona (ou seja, -COalquilo) de acordo com o procedimento seguinte. O composto cetona de fórmula (I) é dissolvido num solvente alcoólico e arrefecido a cerca de 0 °C, a que se adiciona boro-hidreto de sódio. A mistura é agitada até que o borbulhamento cesse e é então agitada à temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora.

Certos compostos de fórmula (I) são sintetizados de acordo com o procedimento seguinte. A uma mistura de N-clorosuccinimida e piridina num solvente inerte, tal como o cloreto de metileno, é adicionada uma oxima de fórmula em que

R1 é tal como definido atrás para a fórmula (I). A mistura é deixada a agitar durante cerca de 2 a 5 horas, preferencialmente cerca de 2 horas. Um composto de fórmula -8- -8-

R3 R4 em que R2, R3 e R4 são tal como definidos para a fórmula I, é adicionado e segue-se a adição de trietilamina à mistura e a mistura é agitada durante 2 horas ou mais à temperatura ambiente. A reacção desenvolve-se de acordo com métodos bem conhecidos pelos peritos na matéria.

Os compostos de fórmula (I) em que R4 é aminometilo são sintetizados de acordo com o procedimento seguinte. Um composto de fórmula

cf3 O em que R1, R2 e R3 são tal como definidos para a fórmula (I), é dissolvido numa mistura de metanol e água. Uma base inorgânica tal como o KOH é adicionada à mistura e a mistura reaccional é deixada a agitar à temperatura ambiente durante cerca de 12 a 24 horas, preferencialmente 16 horas. A reacção desenvolve-se de acordo com métodos bem conhecidos pelos peritos na matéria.

Os compostos de fórmula (I) em que R3 é -COOH e R4 é um grupo amino são sintetizados de acordo com o procedimento seguinte. Um composto de fórmula -9-

em que R1 e R2 são tal como definidos atrás para a fórmula (I), é feito reagir com bromotrimetilsilano durante cerca de 12 a 24 horas, preferencialmente 16 horas. Adiciona-se acetonitrilo, para solubilizar se necessário, à mistura reaccional e a mistura é aquecida sob refluxo até que a reacção esteja praticamente completa. A reacção desenvolve-se de acordo com métodos bem conhecidos pelos peritos na matéria.

Os métodos sintéticos referenciados atrás, em conjunto com os exemplos seguintes, descrevem os métodos que foram e podem ser empregues para preparar os compostos deste invento.

Tal como verificado pelos peritos na matéria são permitidos por esta descrição, sais de adição de ácidos farmaceuticamente aceitáveis de certos compostos deste invento que incluem os formados com HC1, HBr, HN03, H2SO4, H3PO4, CH3SO3H, P-CH3C6H4SO3H, CH3CO2H, ácido glucónico, ácido tartárico, ácido maleico e ácido succínico. No caso destes compostos de fórmula (I) que contêm ainda uma base de azoto, será com certeza possível formar sais de adição diácidos (p.e. dicloridrato) assim como o usual sal de adição monoácido. Tal como verificado pelos peritos na matéria são permitidos por esta descrição, sais catiónicos farmaceuticamente aceitáveis de certos compostos deste invento que incluem os de sódio, potássio, cálcio, magnésio, amónio, N,N'-dibenzil- - 10- etilenodiamina, N-metilglucamina (meglumina), etanolamina e dietanolamina.

Os materiais de partida e reagentes requeridos para a síntese de compostos do presente invento estão facilmente disponíveis, quer comercialmente, de acordo com métodos da literatura, ou por métodos exemplificados nas Preparações abaixo. A capacidade dos compostos ou sais farmaceuticamente aceitáveis destes inibirem a PDEIV e, consequentemente, a demonstração a sua eficácia no tratamento de doenças inflamatórias é demonstrado pelo ensaio in vitro seguinte.

ENSAIO BIOLÓGICO (PDErv^do pulmão humano)

Trinta e quatro gramas de tecido de pulmão humano são colocados em 50 ml de tampão pH 7,4 fluoreto de trisfenilmetilsulfonilo (PMSF) / sacarose e homogeneiza-se usando um Tekmar Tissumizer® (Tekmar Co. 7143 Kemper Road, Cincinnati, Ohio 45249) com a velocidade máxima durante 30 segundos. O homogenato é centrifugado a 48.000 X g durante 70 minutos a 4°C. O sobrenadante é filtrado duas vezes através de um filtro de 0,22 pm e aplicado numa coluna Mono-Q FPLC (Pharmacia LKB Biotechnology, 800 Centennial Avenue, Piscataway, New Jersey 08854) pré-equilibrado com o tampão de pH 7,4 Tris / PMSF. É usado um caudal de 1 ml / minuto para aplicar a amostra à coluna, seguindo-se um caudal de 2 ml / minuto para subsequente lavagem e eluição. A amostra é eluida usando um gradiente crescente, passo a passo de NaCl, no tampão de pH 7,4 Tris/PMSF. São recolhidas fracções de oito ml. As fracção são ensaiadas relativamente à actividade de PDEiv específica, determinada por hidrólise de [ HJcAMP e relativamente à capacidade de um inibidor conhecido de PDEIV (p.e. rolipram) de inibir essa hidrólise. As fracções apropriadas são - 11 - reunidas, diluídas com etilenoglicol (2 ml de etilenoglicol / 5 ml de preparação de enzima) e armazenadas a -20 °C até uso.

Os compostos são dissolvidos em DMSO até uma concentração de 10 mM e diluídos a 1:25 em água (400 pm composto, 4% DMSO). São efectuadas mais diluições em série em DMSO a 4% para se conseguirem as concentrações desejadas. A concentração de DMSO final no tubo de ensaio é 1%. É adicionado o seguinte em duplicado, por ordem, a um tubo de vidro com 12 x 75 mm (todas as concentrações são dadas como concentrações fmaisno tubo de ensaio). i) 25 μΐ de composto DMSO (1% para controlo e branco) ii) 25 μΐ tampão de pH 7,5 Tris iii) [3H]cAMP (1 μΜ) iv) 25 μΐ de enzima PDEjv (para o branco, o enzima é pré-incubado em água fervente durante 5 minutos)

Os tubos da reacção são agitados e colocados num banho de água (37 °C) durante 20 minutos, tempo após o qual a reacção é parada colocando os tubos num banho de água fervente durante 4 minutos. Adiciona-se tampão de lavagem (0,5 ml, ácido 4-(2.hidroxietil)-l-piperazinoetanossulfónico (HEPES) 0,1 M / NaCl 0.1 M, pH 8,5) a cada tubo num banho de gelo. Os conteúdos de cada tubo foram colocados numa coluna Affi-Gel 601 (Biorad Laboratories, P.O. Box 1229, 85A Marcus Drive, Melville, New York 11747) (gel de afinidade de boronato, 1 ml de volume de leito) previamente equilibrado com um tampão de lavagem. O [ H]cAMP é lavado com um tampão de lavagem 2 x 6 ml, e o [3H]5'AMP é então eluido com 4 ml de ácido acético 0,25 M. Após aplicação de vortex, foi adicionado 1 ml de eluição a 3 ml de um fluido de cintilação num frasco adequado, aplicou-se vortex e mediu-se o [3H], - 12- |AB3QH9E^^^ A % de inibição é determinada pela fórmula: cpm médio (composto de ensaio) - cpm médio (branco) % inibição = 1 - -x 100 cpm médio (controlo) - cpm médio (branco) IC50 é definido como a concentração do composto que inibe 50% da hidrólise específica de [3H]cAMP em [3H]5'AMP.

Para administração em humanos para inibir a PDEIV no tratamento de condições inflamatórias, SIDA, asma, artrite, bronquite, doença obstructiva crónica das vias respiratórias, psoríase, rinite alérgica, dermatite e outras doenças inflamatórias, são usadas doses orais geralmente na gama de 0,1-500 mg por dia para um adulto médio (70 kg). Deste modo, para um doente adulto típico, os comprimidos individuais ou cápsulas contêm de 0,1 a 50 mg de composto activo, num veículo ou portador farmaceuticamente aceitável. Os comprimidos ou cápsulas podem ser administrados em doses múltiplas para se conseguir o doseamento requerido. Os doseamentos para administração intravenosa estão tipicamente na gama de 0,1 a 10 mg por dose única, como requerido. Para administração intranasal ou por inalação, o doseamento é geralmente formulado como uma solução de 0,1 a 1% (p/v). Na prática o médico determinará a dose real que será mais adequada para cada doente individual e variará com a idade, peso e resposta do doente particular. As doses anteriores são exemplos do caso médio mas podem, com certeza, haver casos individuais em que maiores ou menores doses são recomendadas, e tais dosagens estão no domínio deste invento.

Para uso humano, os compostos de fórmula (I) podem ser administrados sós, mas serão geralmente administrados numa mistura com um diluente - 13- farmacêutico ou portador seleccionado tendo em vista a via de administração desejada e a prática farmacêutica corrente. Por exemplo, estes podem ser administrados oralmente sob a forma de comprimidos contendo excipientes, tais como o amido ou a lactose, ou em cápsulas ou formas ovais, quer sós quer em mistura com excipientes, ou sob a forma de elixires ou suspensões contendo agentes de sabor e de cor. Estes podem ser injectados parentericamente; por exemplo, intravenosamente, intramuscularmente ou subcutaneamente. Para administração parentérica, estes são melhor usados sob a forma de uma solução aquosa estéril que pode conter outras substâncias; por exemplo, sais ou glucose suficientes para tomar a solução isotónica. Para administração tópica, estes são melhor usados sob a forma de soluções, loções, unguentos ou bálsamos.

Deste modo ainda noutro aspecto o invento proporciona composições farmacêuticas compreendendo um composto de fórmula (I), ou sais farmaceuticamente aceitáveis deste, em conjunto com um diluente ou portador farmaceuticamente aceitável. O invento proporciona um método de inibição da PDEiv num mamífero que disso necessite método esse que compreende a administração ao referido mamífero de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável deste.

Este invento proporciona ainda um método para o tratamento de uma condição inflamatória num mamífero que disso necessite e que compreende a administração ao referido mamífero de uma quantidade anti-inflamatória de um composto de fórmula (I) ou de um sal farmaceuticamente aceitável deste. - 14-

Para além disto, este invento proporciona ainda um método para o tratamento do SIDA, asma, artrite, bronquite, doença pulmonar obstructiva crónica, psoríase, rinite alérgica, dermatite ou traumatismo num mamífero que disso necessite e que compreende a administração ao referido mamífero de uma quantidade eficaz de um composto ou de um sal farmaceuticamente aceitável deste. O presente invento é ilustrado pelos exemplos seguintes. EXEMPLO 1 Ácido 3-r4-metoxi-3-(5-fenilpentiloxiIlfenil-2-isoxazolina-5-carboxílico A uma mistura de 1,00 g (2,43 mmol) do composto da Preparação 15 e 15 ml de MeOH e 5 ml de água adicionou-se 273 mg (4,86 mmol) de KOH. A mistura foi agitada durante a noite à TA (temperatura ambiente) e foi então parcialmente evaporada para se remover o MeOH. O resíduo foi diluído com água até um volume de 125 ml, acidificou-se com uma solução de HC1 6N, e extraiu-se com EtOAc (2 x 125 ml). Os extractos combinados foram secos (Na2S04) e evaporou-se para originar 729 mg (78%) do composto do título sob a forma de um óleo. ’H RMN (CDC13): δ 1.44-1,94 (6H, m), 2,64 (2H,t), 3,66-3,70 (2H,m), 3,89 (3H,s), 4,02 (2H, q, J = 7), 5,18 (1H, t, J = 10), 6,83 (1H, d, J = 8), 7,02 (lH,dd, J = 8, 2), 7,11-7,31 (6H,m). FABMS (rn/e): 384 (M+ + 1). EXEMPLOS 2-5

Os exemplos seguintes foram preparados praticamente de acordo com o procedimento do Exemplo 1. - 15 -

Exemplo Éster R3 R2 P.f. °C Dados 2 composto da preparação 16 ch3 H 101-103 'H RMN (CDC13): δ 1,40-1,88 (6H,m), 1,72 (3H, s), 2,58 (2H, t, J = 7), 3,23 (1H, d, J = 16), 3,78 (1H, d, J = 16), 3,93 (3H, s), 3,96 (2H, q, J = 7), 6,76 (lH,d, J = 8), 6,93 (1H, dd, J = 8,2), 7,06-7,22 (6H,m). 3 composto da preparação 17 H CH3a 101-104 ’H RMN (CDC13): δ 1,41 (3H,d, J - 7), 1,40-1,88 (6H,m), 3,94 (3H, s), 3,66-4,01 (lH,m), 3,99 (2H,q, J = 7), 5,00-5,07 (1H, m), 6,78 (1H, d, J = 8), 7,04 (1H, d, J = 8), 7,10-7,24 (6H, m), 7,34 (lH,s). FABMS (m/e): 398 (M++l) 4 composto da preparação 18 C2H5 H 138-140b Calc.Anal. para C24H29NO5: C, 70,05; H, 7,10; N, 3,40. Verificado C, 70,11; H, 7,21; N, 3,42 5 composto da preparação 19 c3h7 H 153-155 Calc.Anal. para C2sH31N05: C, 70,56; H, 7,34; N, 3,29. Verificado C, 70,49; H, 7,39; N, 3,33 a estequeometria trans b recristalizado a partir de EtOAc -16- EXEMPLO 6 Ácido (+)-5-etil-3-r4-metoxi-3-(5-fenilpenti1oxiYI-fenil-2-isoxazolino-5-carboxílico

Uma mistura de 1,03 g (2,5 mmol) do composto do Exemplo 4 e 303 mg (2,5 mmol) de (R)-(+)-a-metilbenzilamina foi dissolvida em 50 ml de MeOH e o solvente foi removido. O óleo residual cristalizou ao permanecer do frigorífico durante a noite e foi triturado em éter. O sólido, 1,17 g foi recristalizado quatro vezes a partir de EtOAc para originar 340 mg de um sólido branco fofo, p.f. 144-145°C; [a]D +26,3° (MeOH). O sal foi repartido entre 20 ml de uma solução aquosa de HC1 IN e 40 ml de EtOAc . A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de HC1 1 N adicional (2 x 20 ml), seca (MgS04), e evaporada até se obter 234 mg de um sólido. A recristalização a partir de hexano-EtOAc proporcionou 192 mg do composto do título, pf 122-124°C, [a]D +30,7° (CHC13). Cale. para C24H29N05: C, 70,05; H 7,10; N 3,48. Verificado: C, 70,12; H 6,80; N 3,32. EXEMPLO 7 Ácido (-V5-etil-3-r4-metoxi-3-(fenilpentiloxi)lfenil-2-isoxazolino-5-carboxílico

Todas as águas mãe que derivaram do sal (R)-a-metilbenzilamina descrito no Exemplo 6 foram combinadas, concentradas e repartidas entre EtOAc (100 ml) e uma solução aquosa de HC1 1 N (50 ml). A camada orgânica foi separada, lavada com uma solução aquosa de HC11 N adicional (2 x 50 ml), seca (MgS04), e evaporada até se obter 722 mg (1,75 mmol) de um sólido. O sólido e 212 mg de (S)-(-)-a-metilbenzilamina foram dissolvidos em 30 ml de EtOAc e a - 17- cristalização foi induzida com uma vareta de vidro originando 605 mg de sal. Duas recristalizações a partir de EtOAc originaram 483 mg de sal puro, pf 145-146°C; [<x]D -26,3° (MeOH). O sal foi neutralizado tal como descrito no Exemplo 6 para proporcionar 334 mg do composto do título, pf 122-123°C, [a]d -31,0o (CHC13). Cale. para 0>4Η29Ν05: C, 70,05; H 7,10; N 3,48. Verificado: C, 70,02; H 6,85; N 3,36. EXEMPLO 8 (-V3-r4-metoxi-3-(5-fenilpentiloxi)lfenil-5-metil-2-isoxazolino-5-carboxaldeído A uma solução de 290 mg (0,579 mmol) do composto da Preparação 22 em 20 ml de THF seco a cerca de -78 °C, adicionou-se gota a gota 1,74 ml (1,74 mmol) de uma solução de hidreto de diisobutilalumínio em hexano com um caudal tal que a temperatura reaccional seja mantida abaixo de cerca de -65 °C. Após cerca de 20 min de agitação a reacção foi deixada a aquecer até à TA quando análise por TLC indicou a presença do material de partida. A mistura foi re-arrefecida até cerca de -78 °C, tratada com 0,580 ml de uma solução adicional de hidreto de diisobutilamumínio, e então deixou-se a aquecer até à TA. Foi adicionada uma solução aquosa (6 ml) de HC1 1 N e a camada orgânica foi extractada com EtOAc (2 x 50 ml). Os extractos combinados foram secos (MgS04) e evaporados até se obter 246 mg de um óleo amarelo. Purificação por cromatografia rápida usando como eluente EtOAc-hexano (1:1) originou 137 mg do composto do título sob a forma de um óleo. 'H RMN (CDCI3): δ 1,28-1,93 (6H, m), 1,58 (3H, s), 2,63 (2H, t, J = 7), 3,06 (1H, d, J = 16), 3,66 (1H, d, J = 16), 3,90 (3H, s), 4,03 (2H, t, J = 7), 6,83 (lH,d, J = 8), 7,00 (1H, d, J = 8), 7,15-7,31 (6H,m), 9,65 (1H, s); MS (m/e): 382 (M+ +1), 352; [a]D -35,1° (CHC13). - 18- EXEMPLOS 9-11

Os compostos seguintes foram preparados praticamente de acordo com o procedimento do Exemplo 8 substituindo a amida indicada pela do Procedimento 22.

Exemplo Amida R3 P.f. °C ralD(CHCl3) Dados 9 comp. da prep. 24 ch3 óleo +36,6° MS (m/e): 382 (M++l), 352 10 comp. da prep. 28 c3h7 óleo -29,4° lH RMN (CDC13): δ 0,96 (3H, t), 1,39-1,93 (10H, m), 2,62 (2H, t, J = 8), 3,06 (1H, d, J = 17), 3,59 (1H, d, J = 17), 3,86 (3H, s), 4,00 (3H, t, J = 7), 6,83 (1H, d, J = 8), 7,07 (1H, dd, J = 8,2), 7,23-7,30 (6H, ms), 9,67 (1H, s) 11 comp. da Prep- 27 c3h7 óleo +37,1° MS (m/e): 410 (M++l), 382 EXEMPLO 12 5-Hidroxi-3-í4-metoxi-3-(5-fenilpentiloxi)lfenil-2-isoxazolina A uma solução de 500 mg (1,26 mmol) do composto da Preparação - 19- 29 em 15 ml de MeOH foi adicionado 0,50 ml (1,50 mmol) de uma solução de NaOMe 3M em MeOH. Após agitação durante 1 h à TA, a mistura foi evaporada e o resíduo doi diluido com 10 ml de água gelada. A mistura foi acidificada com uma solução aquosa de HC1 6M, extractada com EtOAc (2 x 50 ml), lavada com água salgada (50 ml), seca (Na2S04), e evaporou-se até se obter 307 mg de um óleo. Purificação por cromatografia rápida usando como eluente EtOAc: hexano (1:1) deu origem a 307 mg do composto do título, pf 89-91 °C. Anal. Cale. para C20H25NO4: C, 70,96; H 7,09; N 3,93. Verificado: C, 70,86; H 7,10; N 3,97. EXEMPLO 13 (+)-5-Hidroximetil-3-[4-metoxi-3-(5-fenilpentiloxi)lfenil-2-isoxazolina A uma solução de 300 mg (0,617) do composto da Preparação 20 em 10 ml de THF seco arrefecido a cerca de -78 °C foi adicionado gota a gota 1,85 ml (1,85 mmol) de uma solução de hidreto de diisobutilalumínio em hexano. Após agitação durante 20 min até cerca de -78 °C, a mistura foi deixada a aquecer até cerca de -20 °C e foi adicionada com 4 ml de uma solução de HC1 IN. A mistura foi concentrada, dissolvida em 30 ml de EtOAc, lavada com água (2 x 30 ml), seca (MgS04), e evaporada até se obterem 200 mg de um óleo castanho.

Uma solução de 184 mg do óleo anterior em 3 ml de MeOH foi tratada com 19 mg (0,50 mmol) de boro-hidreto de sódio, e a mistura foi deixada a agitar à TA durante cerca de 16 h. A mistura foi adicionada com uma solução aquosa de HC1 IN e foi parcialmente evaporada para remover MeOH. O resíduo foi extractado com EtOAc (1 x 50 ml) e a camada orgânica foi separada, lavada com água, seca (MgS04), e evaporada até se obter um óleo castanho. Purificação -20- por cromatografia rápida (10 g de sílica gel) usando como eluente EtOAc:hexano (2:3) deu origem a 96 mg do composto do título sob a forma de um óleo. 'H RMN (CDC13): δ 1,46-1,92 (6H, m), 2,62 (3H, t, J = 8), 3,18-3,39 (2H, m), 3,63-3,90(2H, m), 3,86 (3H, s), 4,80-4,85 (1H, m), 6,83 (1H, d, J = 8), 7,02 (lH,dd, J = 8,2), 7,12-7,33 (6H, m); MS (m/e): 370 (M+ +1); [a]D +58,0° (CHC13). EXEMPLO 14 M-5-Hidroximetil-3-r4-metoxi-3-(5-fenilpentiloxi)lfenil-2-isoxazolina O composto do título foi preparado praticamente de acordo com o procedimento do Exemplo 13 substituindo o composto da Preparação 21 pelo composto da Preparação 20. [a]D -60,0° (CHC13). EXEMPLO 15 (+)-5-Hidroximetil-3-í4-metoxi-3-(5-fenilpentiloxi)lfenil-5-metil-2-isoxazolina

Uma solução de 200 mg (0,524 mmol) do composto do Exemplo 9 em 4 ml de MeOH foi tratada com 18 mg (0,524 mmol) de boro-hidreto de sódio e a mistura foi agitada durante cerca de 16 h à TA. A mistura foi adicionada com uma solução aquosa de HC1 IN e foi parcialmente evaporada para remover o MeOH. O resíduo foi diluído com 50 ml de água, extractado com EtOAc (2 x 50 ml), seco (MgS04), e evaporado até se obter 194 mg de um óleo. Cristalização do óleo a partir de hexano-éter (3:1) deu origem a 131 mg do composto do título, pf 76-78 °C. [a]D +34,7° (CHC13). Anal. Cale. para CzsH^NO^HjO: C, 71,14; H 7,60; N 3,61. Verificado: C, 71,51; H 7,72; N 3,71. EXEMPLO 16 (-V5-Hidroximetil-3-[4-metoxi-3-(5-fenilpentiloxi)lfenil-5-metil-2-isoxazolina O composto do título foi preparado praticamente de acordo com o procedimento do Exemplo 15 substituindo o composto do Exemplo 8 pelo composto do Exemplo 9, pf 86-88 °C. [a]D -38,2° (CHC13). Anal. Cale. para C23H29N04«1/4H20: C, 71,14; H 7,60; N 3,61. Verificado: C, 71,51; H 7,72; N 3,71. EXEMPLO 17 (+/-V5-Hidroximetil-3-[4-metoxi-3-(5-fenilpentiloxi)lfenil-5-metil-2-isoxazolina A uma solução de 200 mg (0,47 mmol) do composto da Preparação 16 em 5 ml de THF arrefecido a cerca de -78 °C foi adicionada gota a gota 1,03 ml (1,03 mmol) de uma solução de hidreto de diisobutilalumínio em hexano 1M. A mistura foi deixada a aquecer até cerca de 0 °C altura em que uma análise por TLC indicava a presença do material de partida. Após novo arrefecimento a cerca de -78 °C, adicionou-se novamente 1,03 ml de uma solução de hidreto de diisobutilalumínio em hexano 1,0 M e a mistura foi deixada a aquecer até cerca de -30 °C. A mistura foi adicionada com uma solução aquosa de HC1 IN e após aquecimento até à TA foi extractada com EtOAc (2 x 25 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas (MgS04) e evaporadas até se obter 199 mg de um óleo amarelo. A purificação do óleo por cromatografia rápida (15 de sílica gel) usando EtOAc-hexano como eluente (3:2) deu origem a 163 mg de um óleo que cristalizava espontaneamente quando em repouso. Trituração com hexano-éter (3:1) deu origem a 69 mg do composto do título, pf 67-69 °C. *H RMN (CDC13): δ 1,39 (3H, s), 1,41-1,94 (6H, m), 2,61 (2H, t, J = 8), 2,96 (1H, d, J = 16), 3,44 (1Η, d, J = 16), 3,49-3,72 (2H, m), 3,85 (3H, s), 4,00 (2H, t, J = 7), 6,82 (1H, d, J = 9), 6,99 (1H, dd, J = 2,9), 7,14 (6H, m); FABMS (m/e): 384 (M+ +1). EXEMPLO 18 (+)-5-Etil-5-hidroximetil-3-r4-metoxi-3-(5-fenilpen- tiloxillfenil-5-metil-2-isoxazolina O composto do título foi preparado sob a forma de um óleo praticamente de acordo com o procedimento do Exemplo 13 substituindo o composto da Preparação 25 pelo composto da Preparação 20. 'H RMN (CDC13): δ 0,98 (3H, t, J = 7), 1,52-1,93 (8H, m), 2,35-2,70 (1H, bd s), 2,65 (2H, t, J = 7), 3,06(1H, d, J = 17), 3,36 (1H, d, J = 17), 3,60 (1H, d, J - 12), 3,75 (1H, d, J = 12), 3,89 (3H, s), 4,04 (2H, t = J = 7), 6,85 (1H, d, J = 8), 7,04 (1H, dd, J = 2,8), 7,18-7,35 (6H, m); MS (m/e): 397, 362, 310, 91 (base); [a]D +20,1° (CHC13). EXEMPLO 19 (-V5-Etil-5-hidroximetil-3-r4-metoxi-3-(5-fenilpentiloxillfenil-2-isoxazolina O composto do titulo foi preparado sob a forma de um óleo praticamente de acordo com o procedimento do Exemplo 13 substituindo o composto da Preparação 26 pelo composto da Preparação 20. [a]D -16,3° (CHC13). EXEMPLOS 20-21

Os compostos seguintes foram preparados como óleos praticamente de acordo com o procedimento do Exemplo 15 substituindo o aldeído indicado pelo composto do Exemplo 9. -23-

Ex. Aldeído Γαΐη (CHC13) ’H RMN (CDC13): 20 Composto do Ex. 11 +8,9° δ 0,93 (3H, t, J = 7), 1,36-1,90 (10H, m), 2,62 (2H, t, J = 8), 3,03 (1H, d, J = 17), 3,34 (1H, d, J = 17), 3,52-3,74 (2H, m), 3,86 (3H, s), 4,01 (2H, t = J = 7), 6,82 (1H, d, J = 8), 7,01 (1H, dd, J = 2,8), 7,15-7,32 (6H,m); 21 Composto do Ex. 10 -9,8° MS (m/e): 412 (M+ +1), 382, 312 EXEMPLOS 22. 23

Os compostos seguintes foram preparados praticamente de acordo com o procedimento da Preparação 15 substituindo a olefina indicada por acrilato de etilo.

-24-

Ex. R4 R3 R2 Olefina Pf°C Dados 22 COCH3 H H CH2=CHCOCH3 óleo 'H RMN (CDCI3): δ 1,46-1,90 (6H, m), 2,35 (3H, s), 2,62 (2H, t J = 8), 3,39-3,62 (2H, m), 3,86 (3H, s), 4,01 (2H, t, J = 7), 4,97 (1H, dd, J = 6,11), 6,83(1H, d, J = 8), 7,03 (1H, dd, J = 2,8), 7,15-7,33 (6H, m) 23 (CH2)2OH H H CH2=CH(CH2)2- OH 84-86 !H RMN (CDCI3): δ 1,40-1,81 (8H, m), 2,59 (2H,-t, J = 7), 3,05 (1H, dd, J = 8,17), 3,43 (1H, dd, J = 10,17), 3,52 (2H, q, J = 5), 3,77 (3H, s), 3,96 (2H, t, J - 6), 4,56 (1H, t, J = 5), 4,70-4,75 (1H, m), 6,98 (1H, d, J = 8), 7,12-7,29 (7H, m); MS (m/e): 384 (M+ +1) 24*A ch2nhc ocf3 H H Preparação 14 91-94 'H RMN (CDCI3): δ 1,39-1,94 (6H, m), 2,56 (2H, t, J = 7), 2,95 (1H, dd, J = 8,16), 3,17(1H, dd, J = 12,16), 3,17-3,48 (1H, m), 3,60-3,68 (1H, m), 3,91 (3H, s), 3,95 (2H, t, J = 7), 4,72-4,82 (1H, m), 6,64 (1H, bd s), 6,75 (1H, d, J = 8), 6,92 (1H, dd, J = 2, 8), 7,07-7,22 (6H, m); FABMS (m/e): 465 (M+ +1) EXEMPLO 24

Cloridrato de 5-Aminometil-3-r4-metoxi-3-('5-fenilpentiloxi)1fenil-2-isoxazolina

Uma mistura de 250 mg (0,538 mmol) do composto do Exemplo -25- 24Α, 5 ml de MeOH, e 1 ml de água foi tratada com 91 mg (1,62 mmol) de KOH e foi deixada sob agitação durante cerca de 16 h à TA. A mistura foi parcialmente evaporada para remover o MeOH e o resíduo foi diluido com EtOAc (50 ml) e uma solução aquosa saturada de NAHCO3 (50 ml). A camada orgânica foi separada e lavada com 50 ml adicionais da olução aquosa saturada de NAHCO3, seca (MgS04), e evaporada até se obter um óleo. Análise por RMN indicou a presença de uma pequena quantidade do material de partida, de modo a que o óleo foi novamente tratado tal como descrito atrás usando 30 mg de KOH. Após isto obtiveram-se 126 mg de um óleo, que foi tratado com HC1 gasoso em 3 ml de CHCI3. O solvente foi evaporado e o resíduo semi-sólido foi triturado em éter para originar 70 mg do composto do título, pf 106-109 °C. Anal. Cale. para C22H28N203 HC1: C, 63,78; H 7,00; N 6,76. Verificado: C, 63,93; H 7,29; N 6,65. EXEMPLO 25

Bromidrato do ácido 5-Amino-3-í4-metoxi-3-('5-fenilpentiloxrilfenil-2- isoxazolino-5-carboxílico

Uma mistura de 50 mg (0,094 mmol) do composto da Preparação 30 e 2 ml de bromotrimetilsilano foi agitada durante cerca de 16 h à TA. Observou-se um precipitado e foi adicionada uma pequena quantidade de acetonitrilo e a mistura foi aquecida sob refluxo. A mistura foi evaporada e o resíduo foi triturado com éter para dar origem a 57 mg do composto do título, p.f. 123-127°C. 'H RMN (CD3OD): δ 1,47-1,88 (6H, m), 2,64 (2H, t, J = 7), 3,82 (1H, dd, J = 17), 3,88 (3H, s), 4,02 (2H, t, J = 8), 4,29 (1H, d, J = 17), 7,03 (1H, d, J = 8), 7,12-7,33 (7H, m). FABMS (m/e): 477, 399. -26- EXEMPLO 26. 27

Diastereómeros racémicos de 5-(l-hidroxietil)-3-[4-metoxi-3-(5-fenilpentiloxi)lfenil-2-isoxazolina A uma solução de 360 mg (0,944 mmol) do composto do Exemplo 24 em 4 ml de MeOH arrefecida até cerca de 0 °C adicionou-se 36,0 mg (0,944 mmol) de NaBH4. Após o borbulhamento ter cessado, o banho de gelo foi removido e continuou-se a agitação durante cerca de 1 h. Foi adicionado um excesso de solução aquosa de HC1 IN e a mistura foi parcialmente evaporada para remover o MeOH. O resíduo foi diluído com 50 ml de água e extractado com EtOAc (2 x 50 ml). Os extractos de EtOAc combinados foram secos (MgS04) e evaporados até se obter 360 mg de um óleo, que foi separado por cromatografia rápida (50 g de sílica gel) usando éter-hexano (7:3) e éter como eluentes. As fracções contendo o diastereómero menos polar (Rf 0,28, éter) foram combinadas e evaporadas até se obter 31 mg de um óleo que foi cristalizado a partir de hexano, pf 102-102°C. Anal. Cale. para C23H29N04: C, 72,04; H 7,62; N 3,65. Verificado: C, 72,22; H 7,57; N 3,41.

As fracções contendo o diastereómero mais polar (Rf 0,23, éter) foram combinadas e evaporadas até se obter 117 mg de um óleo que foi cristalizado a partir de hexano, pf 72-74 °C. Anal. Cale. para C23H29N04: C, 72,04; H 7,62; N 3,65. Verificado: C, 72,26; H 7,57; N 3,50. EXEMPLOS 28-31

Os compostos seguintes foram preparados por saponifícação do éster indicado praticamente de acordo com o procedimento do Exemplo 1. -27-

Ex. R1 R3 Éster P.f. °C Dados 28 ciclopentil H Comp. da Prep. 31 135-137 Anal. Cale. para CirJHiqNOs: C, 62,94; H 6,27; N 4,59. Verificado: C, 62,82; H 6,01; N 4,59. 29 ciclopentil Me Comp. da Prep. 32 149-151 Anal. Cale. para C17H2iN05.1/4 H20: C, 62,99; H 6,64; N 4,32. Verificado: C, 63,22; H 6,38; N 4,32. 30 (CH2)4— H Comp. da Prep. 35 108-110 *H RMN (DMSO-d6): δ 160-1,75 (4H, m), 2,64 (2H, t, J = 6), 3,50-3,72 (2H, m), 3,78 (3H, s), 3,99 (2H, t, J = 6), 5,11 (1H, dd, J = 3,11), 6,99 (1H, d, J = 8), 7,16-7,30 (7H, m) 31 (S)-(+)-exo H Comp. da Prep. 33 óleo lU RMN (CDC13): δ 1,10-1,82 (8H, m), 2,28 (1H, s), 2,49 (1H, d, J = 2), 3,65-3,70 (2H, m), 4,20 (1H, d, J = 4), 5,18 (1H, dd, J = 5,12), 6,82 (1H, d, J = 8), 7,01 (1H, d, J = 8), 7,27 (1H, s) EXEMPLO 32 3-í3-Ciclopentiloxi-4-metoxi)feni1-2-isoxazolino-5-carboxaldeído A uma solução de 250 mg (0,750 mmol) do composto da -28-

Preparação 31 em 5 ml de THF arrefecido a cerca de -78 °C foi adicionado gota a gota 1,88 ml (1,88 mmol) de uma solução de hidreto de diisobutilalumínio 1M em hexano. A mistura foi agitada durante cerca de 30 min a cerca de -78 °C e adicionada com 3 ml de MeOH. A seguir à adição de 10 ml de uma solução aquosa de HC1 IN, a mistura foi deixada a aquecer até à TA e foi parcialmente evaporada para remover o THF e o MeOH. O resíduo foi extractado com EtOAc (2 x 50 ml) e os extractos combinados foram lavados com uma solução aquosa saturada de NaHC03 (2 x 30 ml), secos (Na2S04) e evaporados até se obter 205 mg de um óleo. A purificação do óleo por cromatografia rápida (50 g de sílica gel) usando como eluente EtOAc-hexano (1:1 a 3:1) deu origem a 173 mg do composto do título sob a forma de um óleo. O espectro de RMN indicou uma hidratação parcial do aldeído. ]H RMN (CDCI3): δ 1,50-2,05 (8H, m), 3,20-3,62 (2,5H, m), 3,83 e 3,84 (3H, dois s), 4,66-4,85 (1,5 H, m), 4,98-5,07 (1H, m), 6,84 (1H, d, J = 8), 7,04 (1H, dd, J = 2,8), 7,35 (1H, d, J = 2,8), 9,80 (0,5 H, s). EXEMPLO 33 3-r3-(,S)-(exo)-Biciclor2.2.11hept-2-iloxi-4-metoxil- fenil-5-metil-2-isoxazolina-5-carboxaldeído O composto do título foi preparado sob a forma de um óleo por redução com hidreto de diisobutilalumínio do composto de Preparação 34, praticamente de acordo com o procedimento do Exemplo 8. *H RMN (CDC13): δ 1,10-1,82 (8H, m), 1,56 (3H, s), 2,25-2,50 (1H, m), 2,49 (1H, d, J = 1), 3,06 (1H, d, J = 17), 3,65 (1H, d, J = 17), 3,84 (3H, s), 4,11 (1H, d, J = 6), 6,81 (1H, d, J = 8), 6,98 (1H, dd, J = 2,8), 7,27 (1H, d, J = 2); MS (m/e): 330 (M+ +1). [a]D -24,3° (CHCI3). -29- EXEMPLOS 34 e 35

Os compostos seguintes foram preparados sob a forma de óleos por redução com NaBH4 dos aldeídos indicados, praticamente de acordo com o procedimento do Exemplo 15.

Ex. R1 R3 Aldeído ralD(CHCl3) Dados 34 ciclopentil H Comp. do Exemp.17 'H RMN (CDC13): δ 1,50-2,05 (8H, m), 3,15-3,36 (2H, m), 3,60-3,85 (2H, m), 3,94 (3H, s), 3,73-3,85 (2H, m), 6,79 (1H, d, J = 8), 6,98 (1H, dd, J=2, 8), 7,30 (1H, d, J = 2). FABMS (m/e): 292 (M+ +1) 35 (S)-(+)-ex0 ch3 Comp. do Exemp. 38 -4,8° *H RMN (CDC13): δ 1,10-1,82 (8H, m), 1,39 (3H, s), 1,97 (1H, dd, J = 5, 6), 2,24 - 2,28 (1H, m), 2,49 (1H, d, J = 4), 2,97 (1H, d, J= 17), 3,43 (1H, d, J = 17), 3,52 - 3,73 (2H, m), 3,84 (3H, s), 4,21 (1H, d, J = 7), 7,10 (1H, d, J - 2); FABMS (m/e): 332 (M+ +1) -30- PREPARACÃO 1

Oxima de 4-metoxi-3-f5-fenilpentiloxi')benzaldeído

Uma mistura de 25,0 g (0,164 mol) de isovanilina, 26,9 g (0,164 mol) de 5-fenil-l-pentanol, 64,5 g (0,246 mol) de trifenilfosfina e 250 ml de THF foi tratada gota a gota com 42,8 g (0,246 mol) de azodicarboxilato de dietilo. A mistura foi aquecida a cerca de 90 °C durante cerca de 6 h e então agitada durante a noite à TA. O solvente foi evaporado e o resíduo foi diluido com 500 ml de EtOAc, lavado com água (1 x 400 ml), uma solução de NaOH 1M (2 x 400 ml), água salgada (1 x 400 ml), seca (MgS04) e evaporou-se até se obter 119 g de um óleo castanho. Purificação por cromatografia rápida (750 g de sílica gel) usando como eluente EtOAc-hexano (3:7) deu origem a 29,8 g (61%) do composto do título sob a forma de um óleo. 'H RMN (CDCI3): δ 1,42-1,92 (6H, m), 2,61 (2H, t, J=7), 3,91 (3H, s), 4,03 (2H, t, J = 7), 6,91 (1H, d, J = 8), 7,10-7,40 (7H, m), 9,77 (lH,s). A uma solução de 29,8 g (0,100 mol) do aldeído anterior em 300 ml de etanol a 95% adicionou-se 13,7 g (0,197 mol) de cloridrato de hidroxilamina em 100 ml de água seguindo-se 16,6 g (0,197 mol) de bicarbonato de sódio em pequenas porções (evolução do gás). A mistura foi agitada durante cerca de 4 h à TA e 0 etanol foi removido por evaporação. O resíduo foi diluido em 250 ml de água e extractado com EtOAc (2 x 200 ml). Os extractos combinados foram secos (MgS04) e evaporados até se obter um óleo amarelo que foi cristalizado a partir de hexano/éter para dar origem a 15,0 g do composto do título, pf 65-67 °C. *H RMN (CDCI3): δ 1,46-1,93 (6H, m), 2,62 (2H, t, J=7), 3,88 (3H, s), 4,02 (2H, t, J = 7), 6,99-7,62 (6H, m), 7,49 (1H, s), 8,04 (1H, s). -31 - 2,00 g adicionais do produto foram obtidos como um segunda recolha a partir do filtrado, pf 67-69 °C. Evaporação do filtrado e purificação do resíduo por cromatografia rápida usando EtOAc-hexano (2:3) como eluente também proporcionou 4,18 g adicionais do produto, pf 64-66 °C. PREPARAÇÕES 2-4 A reacção do álcool apropriado com isovanilina e a condensação do aldeído resultante com cloridrato de hidroxilamina, praticamente de acordo com o procedimento da Preparação 1, deu origem aos compostos seguintes sob a forma de óleos.

Prep. # R1 *H RMN (CDC13) 2 (CH2)4Ph (CH2)4—(Q) 1,70-1,90 (4H, m), 2,65 (2H, t, J=7), 3,95 (3H, s), 4,10 (2H, t, J = 7), 6,90 (1H, d, J = 8), 6,94-7,26 (6H, m), 6,97 (1H, dd, J = 2, 8), 7,56 (1H, s), 8,01 (1H, s) 3 ciclopentil 1,50-2,02 (8H, m), 3,94 (3H, s), 4,62-4,80 (1H, m), 6,91 (1H, d, J - 8), 6,97 (1H, dd, J = 8 e 1), 7,17 (1H, d, J = 1), 8,02 (1H, s), 8,16 (1H, s) 4 (S)-(+)-exo 1,10-1,80 (8H, m), 2,26-2,32 (1H, m), 2,47-2,52 (1H, m), 3,84 (3H, s), 4,21 (1H, d, J = 7), 6,82 (1H, d, J = 8), 6,98 (1H, dd, J = 8 e 2) 7,13 (lh, d, J = 2), 7,78 (1H, s), 8,03 (1H, s) PREPARAÇÃO 5 2-Metilenobutirato de etilo

Uma mistura de 5,0 g (0,019 mol) de 2-fosfonobutirato de trietilo, 5,5 g (0,039 mol) de K2C03, 6,2 g (0,076 mol) de uma solução aquosa de formaldeído a 37% e 15 ml de água foi aquecida até cerca de 80 °C durante cerca de 45 min. Após arrefecimento até á TA, adicionou-se 75 ml de éter e a camada orgânica foi separada, lavada com água salgada (1 x 20 ml), seca (MgS04) e filtrada. O éter foi cuidadosamente removido por destilação, originando 2,1 g (87%) do composto do título sob a forma de um óleo claro que foi usado directamente sem mais purificação. *H RMN (CDC13): δ 1,01 (3H, t, J = 7), 1,24 (3H, t, J=7), 2,26 (2H, q, J = 7), 4,14 (2H, q, J = 7), 5,45 (1H, s), 6,06 (1H, s). PREPARAÇÃO 6 2-Metilenopentanoato de etilo A reacção de 2-fosfafopentanoato de trietilo, praticamente de acordo com o procedimento da Preparação 5, deu origem ao composto do título. 'H RMN (CDC13): δ 1,05 (3H, t, J = 7), 1,28 (3H, t, J=7), 1,41-1,53 (2H, m), 2,87 (2H, q, J = 7), 4,18 (2H, q, J = 7), 5,49 (1H, s), 6,11 (1H, s). PREPARAÇÃO 7 Ácido 2-Metilenobutírico A uma solução de 5,08 g (39,6 mmol) do composto da Preparação 5 em 95 ml de EtOH e 40 ml de água, foram adicionados 1,58 g (39,6 mmol) de -33-

NaOH sólido, e a mistura foi agitada durante cerca de 2 h à TA. 0,15 g adicionais de NaOH foram adicionados e a agitação continuou durante 2 h. A mistura foi parcialmente evaporada para se remover o EtOH e o resíduo foi diluido com 20 ml de H20 e acidificada a pH 2 com uma solução aquosa de HC1 6N. Extracção com EtOAc, secagem (MgS04) e evaporação deram origem a 2,49 g (63 %) do composto do título sob a forma de um óleo. 'H RMN (CDCI3): δ 1,11 (3H, t, J = 7), 2,34 (2H, q, J=7), 5,66 (1H, s), 6,30 (1H, s), 11,78 (1H, bd s). PREPARAÇÃO 8 Ácido 2-Metilenopentanóico A reacção do composto da Preparação 6, praticamente de acordo com o Procedimento da Preparação 7, deu origem ao composto do título sob a forma de um óleo. !H RMN (CDC13): δ 0,91 (3H, t, J = 7), 2,40-2,54 (2H, m), 2,26 (2H, q, J = 7), 5,62 (1H, s), 6,27 (1H, s). PREPARAÇÃO 9 (S)-(-V(N-a-Metilbenzil)acrilamida A uma solução de 5,0 g (0,055 mol) de cloreto de acriloilo em 30 ml de CH2C12 arrefecido a cerca de 0 °C adicionou-se gota a gota 7,1 ml (6,7 g, 0,055 mol) de (S)-(-)-a-metilbenzilamina. Após a exotermia se ter dado, adicionou-se gota a gota 8,5 ml (6,2 g , 0,061 mol) de trietilamina e a mistura foi deixada a aquecer até à TA. A seguir a cerca de 2 h de agitação adicional, o solvente foi removido por evaporação e o resíduo foi retomado em 200 ml de EtOAc e lavado com uma solução aquosa de HC1 IN, uma solução aquosa saturada de NaHC03, seca (MgS04), e evaporada até se obter um sólido. Trituração em hexano-éter deu origem a 7,8 g do composto do título sob a forma -34- de um sólido, pf 97-99 °C. *H RMN (CDC13): δ 1,50 (3H, d, J = 7), 5,11-5,21 (1H, m), 5,63 (1H, dd, J = 2,10), 5,77 (1H, bd s), 6,06 (1H, dd, J = 10, 13), 6,26 (1H, dd, J - 1,17), 7,19-7,32 (5H, m). PREPARAÇÃO 10 fS)-(-)-ÍN-g-Metilbenzil)2-metilpropionamida A uma solução de 5,0 g (0,0581 mol) de ácido metacrílico em 100 ml de THF foi adicionado 7,03 g (0,0581 mol) de (S)-(-)-a-metilbenzilamina, 7,84 g (0,0581 mol) de hidroxibenzotriazolo e 11,1 g (0,0581 mol) de cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida. Após agitação durante cerca de 4 h à TA, o solvente foi removido por evaporação e o resíduo foi retomado em 200 ml de EtOAc e lavado com água (2 x 100 ml), solução aquosa de HC1 IN (2 x 100 ml), solução aquosa saturada de NaHC03, seca (MgS04), e evaporada até se obter um sólido. Trituração em hexano-éter (2:1) deu origem a 8,68 g do composto do título sob a forma de um sólido branco, pf 95-98 °C. 'H RMN (CDCI3): δ 1,51 (3H, d, J = 7), 5,09-5,19 (1H, m), 5,29 (1H, s), 5,65 (1H, s), 5,95 (1H, bd s), 7,20-7,34 (5H, m). PREPARAÇÕES 11-13 A reacção do ácido apropriado com (R)-(+)-a-metilbenzilamina, praticamente de acordo com o Procedimento da Preparação 10, deu origem aos compostos seguintes.

-35-

Prep. # Q Ácido P.F. °C ’H RMN (CDC13) 11 ch3 Ácido metacrílico 93-95 δ 1,53 (3H, d, J = 7), 5,10-5,23 (1H, m), 5,23 (1H, s), 5,64 (1H, s), 6,01 (1H, bd s), 7,25-7,37 (5H, m). 12 c2h5 Comp. da prep. 7 óleo δ 1,07 (3H, t, J = 7), 1,53 (3H, d, J = 7), 2,34 (2H, q, J - 7), 5,13-5,25 (1H, m), 5,26 (1H, s), 5,59 (1H, s), 6,06 (1H, bd s), 7,20-7,35 (5H, m). 13 c3h7 Comp. da prep. 8 69-71 δ 0,91 (3H, t, J = 7), 1,29-1,54 (2H, m), 1,53 (3H, d, J = 8), 2,28 (2H, t, J = 8), 5,12-5,22 (1H, m), 5,24 (1H, s), 5,57 (1H, s), 5,95 (1H, bd s), 7,25-7,36 (5H, m). PREPARACAO 14 (N-Trifluoroacetil)alilamina

Uma solução de 9,97 g (0,175 mol) de alilamina em 100 ml de piridina arrefecida até cerca de 0 °C foi tratada gota a gota com 37,2 g (0,175 mol) de anidrido trifluoroacético. Após cerca de 2 h de agitação, o solvente foi removido por evaporação. O resíduo foi retomado em 200 ml de CH2CI2 e lavado com uma solução aquosa de HC1 IN (2 x 100 ml), solução aquosa saturada de NaHC03, seca (Na2SC>4), e evaporada para dar origem a 18,9 g (79%) do composto do título sob a forma de um óleo. *H RMN (CDCI3): δ 3,97 (2H, t, J = 5), 5,20 (1H, s), 5,27 (1H, d, J = 10), 5,74-5,88 (1H, m), 6,57 (1H, bd s). PREPARAÇÃO 15 Éster etílico do ácido 3- Γ4-metoxi-3-(fenilpentiloxi)l -, fenil-2-isoxazolina-5-carboxílico A uma mistura de 1,28 g (9,57 mmol) de N-clorosuccinimida, 200 -36- μΐ de piridina, e 200 ml de CH2C12 adicionou-se 2,00 g (6,38 mmol) do composto da Preparação 1 numa solução de 15 ml de CH2C12. Observou-se um exotermia após cerca de 10 min a seguir a cerca de 2 h de agitação à TA, adicionou-se 644 mg (698 μΐ, 6,38 mmol) de acrilato de etilo seguindo-se 966 mg (1,33 ml, 9,57 mmol) de trietilamina. Depois da exotermia cair, a mistura foi agitada durante cerca de 2 h à TA. A mistura foi diluida com 250 ml de CH2C12 e lavada com uma solução aquosa de HC1 IN, solução aquosa saturada de NaHC03, seca (Na2S04), e evaporada para dar origem a um óleo. Purificação por cromatografia rápida (100 g de sílica gel) usando EtOAc-hexano (2:3) como eluente deram origem a 1,82 g (69%) do composto do título sob a forma de um óleo. 'H RMN (CDC13): δ 1,29 (3H, d, J = 7), 1,40-1,91 (6H, m), 2,60 (2H, t, J = 7), 3,55-3,58 (2H, m), 3,95 (2H, t, J = 7), 4,22 (2H, q, J = 7), 5,05-5,12 (1H, m), 6,79 (1H, d, J = 8), 6,95-7,31 (7H,m). PREPARAÇÕES 16-30

Os compostos seguintes foram preparados praticamente de acordo com o procedimento da Preparação 15 substituindo a olefina indicada por acrilato de etilo.

-37-

Prep # R4 R3 R2 Olefina P.F.°C Dados 16 co2c2h5 ch3 H a-metacrilato de etilo óleo ]H RMN (CDC13): Ô 1,25 (3H, d, J = 7), 1,37-1,90 (6H, m), 1,64 (3H,s), 2,54 (2H, t, J = 7), 3,11 (1H, d, J = 7), 3,77 (1H, d, J = 15), 3,83 (3H, s), 3,95 (2H, q, J = 7), 4,17 (2H, q, J = 7), 6,75 (1H, d,J = 8), 6,90-8,28 (7H, m). 17 co2c2h5 H Me a Crotonato de etilo óleo MS (m/e): 425 (M+), 279, 91 (base) 18 co2c2h5 c2h5 H Comp. da Prep. 5 óleo MS (m/e): 439 (M+), 310, 105 19 co2c2h5 c3h7 H Comp. da Prep. 6 óleo FABMS (m/e): 454 (M+), 380, 310 20 (S)- CONHCH- (Me)Phb H H Comp. da Prep. 9 85-90 Anal. Cale. para C30H34N2O4: C, 74,05; H, 7,04; N, 5,76. Verificado: C, 74,16; H 6,93; N, 5,88. 21 (S)- CONHCH- (Me)Phc H H Comp. da Prep. 9 91-101 Anal. Cale. para C30H34N2O4: C, 74,05; H, 7,04; N, 5,76. Verificado: C, 74,32; H 6,94; N, 5,71. 22 (S)- CONHCH- (Me)Phd ch3 H Comp. da Prep. 10 113-116 Anal. Cale. para C31H36N204: C, 74,37; H, 7,25; N, 5,60. Verificado: C, 74,17; H 6,87; N, 5,53. 23 (R)- CONHCH- (Me)Phe ch3 H Comp. da Prep. 11 97-99 Anal. Cale. para C31H36N204.1/4H20: C, 73,64; H, 7,23; N, 5,55. Verificado: C, 73,83; H 7,35; N, 5,60. -38-

Prep # R4 R3 R2 Olefina P.F.°C Dados 24 (R)- CONHCH- (Me)Phf ch3 H Comp. da Prep. 11 111-113 Anal. Cale. para C31H36N204: C, 74,37; H, 7,25; N, 5,60. Verificado: C, 74,51; H 7,22; N, 5,43. 25 (R)- CONHCH- (Me)Phg c2h5 H Comp. da Prep. 12 126-130 ’H RMN (CDC13): δ 1,06 (3H, t, J = 7), 1,53 (3H, d, J = 7), 1,53-2,21 (8H, m), 2,65 (2H, t, J = 7), 3,23 (1H, d, J= 17), 3,67 (1H, d, J = 17),3,89 (3H, s), 4,02 (2H, t, J - 7),5,02-5,15 (1H, m), 6,85 (1H, d, J = 8), 7,02 (1H, dd, J = 2,8), 7,16-7,32 (12H, m). 26 (R)- CONHCH- (Me)Phg c2h5 H Comp. da Prep. 12 121-123 ’H RMN (CDC13): δ 0,92 (3H, t, J = 7), 1,47 (3H, d, J = 7), 1,47-2,18 (8H, m), 2,66 (2H, t, J = 7), 3,26 (1H, d, J = 17), 3,76 (1H, d, J = 17), 3,90 (3H, s), 4,04 (2H, t, J = 7), 5,02-5,13 (1H, m), 6,87 (1H, d, J = 8), 7,07 (1H, dd, J = 2,8), 7,18-7,36 (12H, m). 27 (R)- CONHCH- (Me)Phh c3h7 H Comp. da Prep. 13 123-125 Anal. Cale. para C33H40N2O4.1/4H20: C, 74,27; H, 7,60; N, 5,25. Verificado: C, 74,44; H 7,50; N, 5,21. -39-

Prep # R4 R3 R2 Olefína | P.F.°C Dados 28 (R)- CONHCH- (Me)Ph' c3h7 H Comp. da Prep. 13 118-120 Anal. Cale. para C33H40N2O4.I/4H2O: C, 74,27; H, 7,60; N, 5,25. Verificado: C, 74,08; H 7,85; N, 5,19. 29 O-COCH3 H H Acetato de vinilo óleo 'H RMN (CDCI3): δ 1,46-1,95 (6H, m), 2,17 (3H, s), 2,62 (2H, t, J = 7), 3,30 (1H, d, J = 18), 3,54-3,60 (1H, m), 3,87 (3H, s), 4,02 (2H, t, J = 7), 5,27 (1H, d, J = 1), 6,82-7,30 (8H, m). 30 CO2CH3 NHC 02Bn H H2C=CH (NHC02Bn) C02Me óleo *H RMN (CDCI3): δ 1,45-1,84 (6H, m), 2,55 (2H, t, J = 7), 3,89 (3H, s), 3,93 (2H, bd, s), 3,94 (2H, t, J = 7), 5,01 (2H, s), 6,30 (1H, bd s), 6,73 (1H, d, J = 8), 6,90-7,33 (12H, m). -CH(Me)Ph - —CH(CH3)—} a estereoquímica transb diastereómero menos polar - Rf 0,23 (1:3 EtOAc-hexano) c diastereómero mais polar - Rf 0,16 (1:3 EtOAc-hexano) d diastereómero mais polar - Rf 0,42 (1:1 EtOAc-hexano) e diastereómero menos polar - Rf 0,48 (1:1 EtOAc-hexano) .p diastereómero mais polar - Rf 0,42 (1:1 EtOAc-hexano) g diastereómeros dos exemplos 25 e 26 foram separados por cristalização fraccionada diastereómero menos polar - Rf 0,30 (3:7 EtOAc-hexano) 1 diastereómero mais polar - Rf 0,26 (3:7 EtOAc-hexano) -40- PREPARACÕES 31-32

Os compostos seguintes foram preparados praticamente de acordo com o procedimento na Preparação 15 substituindo o composto da Preparação 3 pelo composto da Preparação 1 e substituindo a olefina indicada por acrilato de etilo.

Prep # R4 R3 R2 Olefina P.F.°C Dados 31 co2c2h5 H H Acrilato de etilo óleo 'H RMN (CDC13): δ 1,27 (3H, t, J = 7), 1,45-2,00 (8H, m), 3,56 (2H, d, J = 10), 3,82 (3H, s), 4,22 (2H, q, J = 7), 4,72-4,80 (1H, m), 5,09 (1H, t, J = 10), 6,78 (1H, d, J = 8), 6,98 (1H, d, J = 8), 7,32 (1H, s). 32 co2c2h5 ch3 H Metacrilato de etilo 77-79 ‘H RMN (CDC13): δ 1,25 (3H, t, J = 7), 1,50-2,00 (8H, m), 1,63 (3H, s), 3,11 (1H, d, J= 17), 3,91 (3H, s), 4,18 (2H, q, J - 7), 4,68-4,77 (1H, m), 6,75 (1H, t, J = 8), 6,92 (1H, dd, J = 8, 2), 7,27 (1H, d, J = 2). PREPARAÇÕES 33-34

Os compostos seguintes foram preparados praticamente de acordo com o procedimento na Preparação 15 substituindo o composto da Preparação 4 pelo composto da Preparação 1 e substituindo a olefina indicada por acrilato de etilo.

Prep # R4 R3 R2 Olefína P.F.°C Dados 33 CO2C2H5 H H Acrilato de etilo óleo 'H RMN (CDCI3): δ 1,05-1,77 (8H, m), 1,27 (3H, t, J = 7), 2,05 (1H, bd s), 2,43 (1H, bd s), 3,55 (2H, d, J = 10), 3,82 (3H, s), 4,15-4,23 (1H, m), 4,21 (2H, t, J = 10), 6,77 (1H, d, J = 8), 6,95 (1H, d, J = 8), 7,25 (1H, s). 34 (R)- CHNHC H-(Me)Ph ch3 H Composto da Prep 11a 151- 153 'Η RMN (CDCI3): δ 1,ΙΟΙ,75 (8H,m), 1,44 (3H, d, J = 7), 1,65 (3H, s), 2,30 (1H, bd s), 2,50 (1H, bdJ = 4), 3,18 (1H, d, J= 7), 3,81 (1H, d, J = 17), 3,85 (3H, s), 4,21 (1H, d, J = 7), 4,99-5,08 (1H, m), 6,83 (1H, d, J = 8), 7,02 (1H, dd, J = 8, 2), 7,12 (1H, d, J = 9), 7,20-7,26 (6H, m). a diastereómero menos polar - Rf 0.4 (3:7 EtOAc-hexano) -42- PREPARACÃO 35

Ester etílico do ácido 3-r4-metoxi-3(5-fenilbutoxi)l-fenil-2-isoxazolino-5-carboxílico O composto desta Preparação foi preparado sob a forma de um óleo, praticamente de acordo com o Procedimento da Preparação 15, substituindo o composto de Preparação 2 pelo composto de Preparação 1. ’H RMN (CDC13): δ 1,31 (3H, d, J = 7), 1,74-1,94 (4H, m), 2,68 (2H, t, J - 7), 3,57-3,61 (2H, m), 3,87 (3H, s), 4,03 (2H, t, J = 6), 4,25 (2H, q, J = 7), 5,12 (1H, t, J = 8), 6,83 (1H, d, J = 8), 7,03 (1H, d, J = 8), 7,16-7,35 (6H, m).

Lisboa, 14 de Fevereiro de 2000

Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA

Claims (10)

1. - 1 - REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de fórmula ORi

   sendo misturas racémicas, racémico-diasterioméricas e isómeros ópticos dos referidos compostos e os sais farmaceuticamente aceitáveis destes em que R1 é cicloalquilo (C3-C7), fenilalquilo possuindo de 1 a 6 átomos de carbono na porção alquilo ou bicicloalquilo tendo de 6 a 9 carbonos; R é hidrogénio ou alquilo (Ci-C3); R3 é hidrogénio ou alquilo (CrC5); R4 é -CHO, amino, aminoalquilo tendo de 1 a 3 carbonos O

   -(CH2)n-N X' H , mono-hidroxialquilo tendo de 1 a 3 carbonos, -COCH3, -(CH2)mC02H, ou hidroxi; em que m é independentemente 0, 1, 2 ou 3; e n é 0 ou 1-3 X1 é alquilo (C1-C4), ou alcoxifenil possuindo de um a quatro átomos de carbono na porção alcoxi. -2-
2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R1 ser ciclopentilo ou fenilalquilo possuindo de 4 a 5 carbonos na porção alquilo.
3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por R1 ser 5-fenilpentilo.
4. 4. Composto de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por R4 ser -(CH2)mC02H, -CHO, -COCH3, hidroxi ou mono-hidroxialquilo possuindo de 1 a 3 carbonos.
5. 5. Composto de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por R4 ser -(CH2)mC02H.
6. 6. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado porR ser hidrogénio; R ser hidrogénio ou alquilo (C|-C5) e m = 0.
7. 7. Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por R3 ser hidrogénio, metilo, etilo ou propilo.
8. 8. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o composto ser ácido (+) ou (-)-5-etil-3-[4-metoxi-3-(5-fenilpentiloxi)]fenil-2-isoxazolino-5-carboxílico.
9. 9. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o composto ser ácido (-)-5-etil-3-[4-metoxi-3-(5-fenilpentiloxi)]fenil-2-isoxazolino-5-carboxílico. -3-
10. 10. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade de um composto de acordo com a reivindicação 1 e um um diluente ou portador farmaceuticamente aceitável. Lisboa, 14 de Fevereiro de 2000

    JORGE CRUZ Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA