PT2655378T - Compostos e seu uso como inibidores de bace - Google Patents

Compostos e seu uso como inibidores de bace Download PDF

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Sehgelmeble Fernando
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DESCRIÇÃO "COMPOSTOS E SEU USO COMO INIBIDORES DE BACE" A presente invenção refere-se a compostos e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, suas composições farmacêuticas, e seu uso como medicamentos para tratamento e/ou prevenção de várias doenças. Em particular, algumas formas de realização da invenção referem-se a compostos ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, os quais são inibidores da secretase β e por conseguinte, inibem a formação de péptidos β amiloides (Αβ) e que serão usados para tratamento e/ou prevenção de patologias relacionadas com Αβ tais como doença de Alzheimer, síndrome de Down e angiopatia amiloide β, tal como mas não limitado a angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associados a comprometimento cognitivo, tais como mas não limitados a MCI ("comprometimento cognitivo leve"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associado a doença de Alzheimer, neurodegeneração associada a doenças tais como doença de Alzheimer ou demência incluindo demência de origem mista vascular e degenerativa, demência pré-senil, demência senil e demência associada a doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal.
ANTECEDENTES 0 evento neuropatológico principal que distingue a doença de Alzheimer (DA) é a deposição do resíduo 40-42 de péptido β amiloide (Αβ) no parênquima cerebral e nos vasos cerebrais. Um grande conjunto de dados genéticos, bioquímicos e in vivo apoiam um papel central para Αβ na cascata patológica que eventualmente conduz à DA. Os doentes geralmente apresentam sintomas iniciais (comummente perda de memória) na sexta ou sétima década de vida. A doença progride com demência aumentada e elevada deposição de Αβ. Em paralelo, uma forma hiperfosforilada da proteína tau associada aos microtúbulos acumula-se dentro dos neurónios, levando a uma pletora de efeitos deletérios na função neuronal. A hipótese de trabalho prevalecente quanto à relação temporal entre Αβ e os estados de patologias tau que precedem a deposição de Αβ a agregação de tau em modelos humanos e animais da doença. Dentro deste contexto, vale a pena notar que a natureza molecular exata de Αβ, mediando esta função patológica é atualmente um assunto sob intenso estudo. Muito provavelmente, existe um contínuo de espécies tóxicas que vão desde oligómeros Αβ de ordem inferior até conjuntos supramoleculares tais como fibrilas Αβ.
0 péptido Αβ é um fragmento integral da proteína Tipo I APP (Proteína precursora amiloide Αβ), uma proteína expressa de forma ubíqua em tecidos humanos. Uma vez que Αβ solúvel pode ser encontrado tanto no plasma como no fluído cerebroespinal (CSF), e no meio das células cultivadas, APP tem de sofrer proteólise. Existem três clivagens principais de APP que são relevantes para a patobiologia de DA, as chamadas clivagens α, β, e γ. A clivagem a, a qual ocorre aproximadamente no meio do domínio Αβ em APP é executada pelas metaloproteases ADAM10 ou ADAM17 (o último também conhecido como TACE). A clivagem β, que corre na terminação N de Αβ, é gerada pela transmembrana aspartil protease Beta sítio Enzima de Clivagem APP (BACE1). A clivagem γ, que gera o terminal C de Αβ e subsequente libertação do péptido, é efetuada por uma multissubunidade aspartil protease nomeada secretase γ. A clivagem ADAM10/17 seguida pela clivagem da secretase γ resulta na libertação do péptido p3 solúvel, um fragmento Αβ truncado no N terminal que não formam depósitos amiloides em seres humanos. Esta via proteolitica é comummente referida como a via não amiloidogénica. Clivagens consecutivas por BACE1 e secretase γ geram o péptido Αβ intacto, deste modo, este esquema de processamento foi designado por via amiloidogénica. Com este conhecimento à mão, é possivel imaginar duas vias possiveis de reduzir a produção de Αβ: estimulando o processamento não amiloidogénico, ou inibindo ou modulando o processamento amiloidogénico. Esta aplicação centra-se na última estratégia, inibição ou modulação do processamento amiloidogénico.
As placas amiloidogénicas e a angiopatia amiloide vascular também caracterizam os cérebros de doentes com Trissomia 21 (sindrome de Down), Hemorragia Cerebral Hereditária com Amiloidose do tipo Dutch (HCHWA-D), e outros distúrbios neurodegenerativos. Emaranhados neurofibrilares também ocorrem noutros distúrbios neurodegenerativos incluindo distúrbios que induzem demência (Varghese, J., et al, Journal of Medicinal Chemistry, 2003, 46, 4625-4630). Os depósitos β-amiloides são predominantemente um agregado de péptido Αβ, que por sua vez é um produto da proteólise da proteína precursora amiloide (APP). Mais especificamente, o péptido Αβ resulta da clivagem de APP na terminação C por uma ou mais secretases γ, e na terminação N pela enzima β-secretase (BACE), também conhecida como aspartil protease ou Asp2 ou sítio Beta de Enzima de Clivagem APP (BACE), como parte da via β-amiloidogénica. A atividade BACE é correlacionada diretamente com a geração do péptido Αβ da APP (Sinha, et al, Nature, 1999, 402, 537-540), e os estudos indicam cada vez mais que a inibição de BACE inibe a produção do péptido Αβ (Roberds, S. L., et al, Human Molecular Genetics, 2001, 10, 1317-1324). A BACE é uma membrana ligada à proteína tipo 1 que é sintetizada como uma proenzima parcialmente ativa, e é abundantemente expressa no tecido cerebral. É pensada para representar a atividade principal da secretase β, e é considerada para ser o passo limitante da taxa na produção de péptido-3-amiloide, (Αβ).
Os fármacos que reduzem ou bloqueiam a atividade de BACE devem, portanto, reduzir os níveis de Αβ e os níveis de fragmentos de Αβ no cérebro, ou em qualquer outro local onde ο Αβ ou os seus fragmentos se depositam, e assim abrandar a formação de placas amiloides e a progressão da DA ou outras patologias envolvendo a deposição de Αβ ou dos seus fragmentos. A BACE é portanto um importante candidato para o desenvolvimento de fármacos como um tratamento e/ou profilaxia de Patologias relacionadas com Αβ tais como síndrome de Down, angiopatia amiloide β tal como, mas não limitado a, angiopatia amiloide cerebral ou hemorragia cerebral hereditária, distúrbios associados a comprometimento cognitivo tal como mas não limitado a MCI ("comprometimento cognitivo leve"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associado a doença de Alzheimer, neurodegeneração associada a doenças tais como doença de Alzheimer ou demência incluindo demência de origem mista vascular e degenerativa, demência pré-senil, demência senil e demência associada a doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal. Seria, portanto, útil inibir a deposição de Αβ e porções destes por inibição de BACE através de inibidores tais como os compostos aqui proporcionados. 0 potencial terapêutico de inibição da deposição de Αβ tem motivado muitos grupos para isolar e caracterizar enzimas secretase e identificar os seus potenciais inibidores, como discutido em W02010/105179 A2 e WO2008/076043 AI.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
De acordo com um aspeto da invenção, é disponibilizado um composto que é (lr, l'R, 4R)-4-metoxi-5"-metil-6[5-(prop-l-in-l-il)piridin-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1', 2"-imidazol]-4"-amina:
ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Este aspeto pode também providenciar uma composição farmacêutica compreendendo como componente ativo uma quantidade terapeuticamente eficaz do referido composto, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em associação com pelo menos um excipiente, transportador ou diluente farmaceuticamente aceitável. 0 composto, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, pode ser fornecido para uso como um medicamento. 0 composto, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, pode ser fornecido para uso num método para tratar ou prevenir uma patologia relacionada com Αβ, em que a referida patologia relacionada com Αβ é sindrome de Down, angiopatia amiloide β, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, um distúrbio associado a comprometimento cognitivo, MCI ("comprometimento cognitivo leve"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associado a doença de Alzheimer, neurodegeneração associada a doença de Alzheimer, demência de origem vascular mista, demência de origem degenerativa, demência pré-senil, demência senil, demência associada a doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal. 0 referido uso pode estar em combinação com pelo menos um agente estimulante cognitivo, agente estimulante da memória, ou inibidor da colina esterase. A presente invenção refere-se ao uso do composto presentemente reivindicado assim como a um seu sal. Sais para uso em composições farmacêuticas serão sais farmaceuticamente aceitáveis, mas outros sais podem ser úteis na produção do composto presentemente reivindicado.
As definições definidas nesta invenção destinam-se a clarificar os termos utilizados ao longo deste pedido. 0 termo "aqui" significa toda a aplicação.
Como aqui usada, a frase "grupo de proteção" significa substituintes temporários que protegem um grupo funcional potencialmente reativo de transformações químicas indesejáveis. Exemplos de tais grupos de proteção incluem ésteres de ácidos carboxílicos, ésteres de álcoois silílicos, e acetais e cetais de aldeídos e cetonas respetivamente. 0 âmbito do grupo de proteção químico foi revisto (Greene, T.W.; Wuts, P.G.M. Protective Groups in Organic Synthesis, 3a ed.; Wiley: New York, 1999).
Como aqui usado, "farmaceuticamente aceitável" é aqui empregue para referir aqueles compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem que são, dentro do âmbito da avaliação médica sólida, adequadas para uso em contacto com os tecidos de seres humanos e animais sem excessiva toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação, compatível com uma relação benefício/risco razoável.
Como aqui usado, "sais farmaceuticamente aceitáveis" referem-se a derivados dos compostos divulgados em que o composto parente é modificado, fazendo os sais de ácido ou base dos mesmos. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não são limitados a resíduos básicos de sais de ácidos orgânicos ou minerais tais como aminas; sais alcalinos ou orgânicos de resíduos acídicos tais como ácidos carboxílicos; e afins. Estes sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais não tóxicos ou sais de amónio quaternário do composto parente formados, por exemplo, a partir de ácidos inorgânicos ou orgânicos. Por exemplo, esses sais não tóxicos incluem os derivados de ácidos inorgânicos tais como ácido hidroclórico.
Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser sintetizados a partir do composto parente que contém uma porção básica ou ácida por métodos químicos convencionais. Geralmente, tais sais podem ser preparados reagindo o ácido livre ou formas de base destes compostos com uma quantidade estequiométrica da base ou ácido apropriados em água ou num solvente orgânico, ou numa mistura dos dois; geralmente, são usados meios não aquosos como éter dietilico, acetato de etilo, etanol, isopropanol ou acetonitrilo. 0 aspeto acima inclui ainda todas as formas tautoméricas do composto presentemente reivindicado. Como aqui usado, "tautómero" significa outros isómeros estruturais que existem em equilíbrio resultante da migração de um átomo de hidrogénio. Por exemplo, tautomerismo ceto-enol onde o composto resultante tem as propriedades de uma cetona e de um álcool insaturado. Outros exemplos de tautomerismo incluem 2H-imidazole-4-amina e o seu tautómero 1,2-dihidroimidazol-5-imina, e 2H-imidazol-4-tiol e seu tautómero 1,2-dihidroimidazol-5-tiona. Entende-se que, em representações de compostos ao longo desta descrição, somente um dos possíveis tautómeros do composto é desenhado ou nomeado.
Como aqui usado "composto estável" e "estrutura estável" destinam-se a indicar um composto suficientemente robusto para sobreviver ao isolamento num grau útil de pureza a partir da mistura de reação, e formulação num agente terapêutico eficaz.
Os compostos da invenção incluem ainda hidratos e solvatos. A presente invenção inclui ainda compostos isotopicamente marcados da invenção. Um composto "isotopicamente" ou "radiomarcado" é um composto da invenção onde um ou mais átomos são substituídos por um átomo com uma massa atómica ou número de massa diferente da massa atómica ou número de massa tipicamente encontrado na natureza (i.e., de ocorrência natural). Isótopos adequados que podem ser incorporados nos compostos da presente invenção incluem, mas não são limitados a 2H (também escrito como D para deutério) , 3H (também escrito como T para tritio) , nC, 13C, 14C, 13N, 15N, 150, 170, 180, 18F, 35S, 36C1, 82Br, 75Br, 76Br, 77Br, 123I, 124I, i25j e 1311. 0 radionuclideo que é incorporado nos compostos radiomarcados em questão irá depender da aplicação especifica daquele composto radiomarcado. Por exemplo, para recetor de marcação in vitro e ensaios de competição, os compostos que incorporam 3H, 14C, 82Br, 125I, 131I ou 35S geralmente podem ser os mais úteis. Para aplicações de rádio imagem nC, 1SF, 125I, 123I, 124I, 131I, 75Br, 76Br ou 77Br geralmente podem ser os mais úteis.
Entende-se que um "composto radiomarcado" é um composto que tenha incorporado pelo menos um radionuclideo. Em alguns exemplos o radionuclideo é selecionado a partir do grupo que consiste em 3H, 14C, 125I, 35S e 82Br. 0 composto da presente invenção pode ser administrado oralmente, por via parentérica, bocal, vaginal, rectal, por inalação, insuflação, por via sublingual, intramuscular, subcutânea, tópica, intranasal, intraperitoneal, intratorácica, intravenosa, epidural, intratecal, intracerebroventricular e por injeção nas articulações. A dosagem vai depender da via de administração, a gravidade da doença, idade e peso do doente e outros fatores normalmente considerados pelo médico assistente, quando se determina o regime individual e nível de dosagem como o mais apropriado para um doente específico. A quantidade do composto a administrar variará para o doente a ser tratado e variará de 100 ng/kg de peso corporal para 100 mg/kg de peso corporal por dia. Por exemplo, as dosagens podem ser rapidamente determinadas pelos peritos na técnica a partir desta divulgação e do conhecimento na técnica. Assim, o perito pode prontamente determinar a quantidade de composto e aditivos, veículos, e/ou transportadores opcionais em composições e a administrar.
A invenção refere-se também aos seguintes aspetos. Uma composição farmacêutica compreendendo como componente ativo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em associação com pelo menos um excipiente, transportador ou diluente farmaceuticamente aceitável. O composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso como um medicamento. O composto da invenção ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para uso num método para tratar ou prevenir uma patologia relacionada com Αβ, em que a referida patologia relacionada com Αβ é a síndrome de Down, um (angiopatia 3-amiloide, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, um distúrbio associado a comprometimento cognitivo, MCI ("comprometimento cognitivo leve"), doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associado a Doença de Alzheimer, neurodegeneração associada a Doença de Alzheimer, demência de origem vascular mista, demência de origem degenerativa, demência pré-senil, demência senil, demência associada a doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal. O composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso num método de tratamento de patologia relacionada com Αβ, em que a referida patologia relacionada com Αβ é Doença de Alzheimer. O composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para uso, em que o referido uso é em combinação com pelo menos um agente estimulante cognitivo, agente estimulante da memória, ou inibidor da colina esterase. 0 tratamento de uma patologia relacionada com Αβ selecionada a partir de Doença de Alzheimer, sindrome de Down, angiopatia amiloide β, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, um distúrbio associado a comprometimento cognitivo, MCI ("comprometimento cognitivo leve"), perda de memória, sintomas de défice de atenção associado a Doença de Alzheimer, neurodegeneração associada a Doença de Alzheimer, demência de origem vascular mista, demência de origem degenerativa, demência pré-senil, demência associada a doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva, lesão cerebral traumática e degeneração corticobasal pode ser aplicado como uma mono terapia ou pode envolver, adicionalmente ao composto da invenção, tratamento conjugado com terapia convencional de valor no tratamento de uma ou mais condições de doença aqui referidas. Uma tal terapia convencional pode incluir uma ou mais das seguintes categorias de agentes: inibidores da acetilcolinesterase, agentes anti-inflamatórios, agentes estimulantes cognitivos e/ou da memória ou agentes antipsicóticos atípicos. Agentes estimulantes cognitivos, agente estimulante da memória e inibidores da acetilcolinesterase incluem, mas não são limitados a donepezil (ARICEPT), galantamina (REMINYL ou RAZADYNE) , rivastigmina (EXELON), tacrina (COGNEX) e memantina (NAMENDA, AXURA ou EBIXA). Agentes antipsicóticos atípicos incluem, mas não são limitados a olanzapina (comercializado como ZYPREXA) , aripiprazole (comercializado como ABILIFY) , risperidona (comercializado como RISPERDAL), quetiapina (comercializado como SEROQUEL), clozapina (comercializado como CLOZARIL), ziprasidona (comercializado como GEODON) e olanzapina/fluoxetina (comercializado como SYMBYAX).
Esse tratamento conjugado pode ser atingido por meio da dosagem simultânea, sequencial ou separada dos componentes individuais do tratamento. Esses produtos de combinação empregam os compostos da invenção. A terapia convencional adicional pode incluir uma ou mais das seguintes categorias de agentes: (i) antidepressivos tais como agomelatina, amitriptilina, amoxapina, bupropiona, citalopram, clomipramina, desipramina, doxepina duloxetina, elzasonan, escitalopram, fluvoxamina, fluoxetina, gepirona, imipramina, ipsapirona, maprotilina, nortriptilina, nefazodona, paroxetina, fenelzina, protriptilina, ramelteona, reboxetina, robalzotano, sertralina, sibutramina, tionisoxetina, tranilcipromaina, trazodona, trimipramina, venlafaxina e isómero(s) equivalentes e farmaceuticamente ativos e metabolito(s) destes. (ii) antipsicóticos atípicos incluindo por exemplo quetiapina e isómero(s) farmaceuticamente ativos e metabolito(s) destes. (iii) antipsicóticos incluindo por exemplo amisulprida, aripiprazole, asenapina, benzisoxidilo, bifeprunox, carbamazepina, clozapina, clorpromazina, debenzapina, divalproex, duloxetina, eszopiclona, haloperidol, iloperidona, lamotrigina, loxapina, mesoridazina, olanzapina, paliperidona, perlapina, perfenazina, fenotiazina, fenilbutilpiperidina, pimozida, proclorperazina, risperidona, sertindole, sulpirida, suproclona, suriclona, tioridazina, trifluoperazina, trimetozina, valproato, ácido valpróico, zopiclona, zotepina, ziprasidona e isómero(s) equivalentes e farmaceuticamente ativos e metabolito(s) destes. (iv) ansioliticos incluindo por exemplo alnespirona, azapironas, benzodiazepinas, barbituratos tais como adinazolame, alprazolame, balezepame, bentazepame, bromazepame, brotizolame, buspirona, clonazepame, clorazepato, clordiazepóxido, ciprazepame, diazepame, difenhidramina, estazolame, fenobam, flunitrazepame, flurazepame, fosazepame, lorazepame, lormetazepame, meprobamato, midazolame, nitrazepame, oxazepame, prazepame, quazepame, reclazepame, tracazolato, trepipame, temazepame, triazolame, uldazepame, zolazepame e isómero(s) equivalentes e farmaceuticamente ativos e metabolito(s) destes. (v) anticonvulsivos incluindo por exemplo carbamazepina, clonazepame, etosuximida, felbamato, fosfenitoina, gabapentina, lacosamida, lamotrogina, levetiracetame, oxcarbazepina, fenobarbital, fenitoina, pregabalina, rufinamida, topiramato, valproato, vigabatrina, zonisamida e isómero(s) equivalentes e farmaceuticamente ativos e metabolito(s) destes. (vi) terapias de Alzheimer incluindo por exemplo donepezil, rivastigmina, galantamina, memantina e isómero(s) equivalentes e farmaceuticamente ativos e metabolito(s) destes . (vii) terapias de Parkinson incluindo por exemplo deprenilo, L-dopa, Requip, Mirapex, inibidores MAOB tais como selegina e rasagilina, com inibidores P tais como Tasmar, inibidores A-2, inibidores da recaptação de dopamina, antagonistas de NMDA, agonistas de Nicotina, agonistas de Dopamina e inibidores do óxido nítrico sintase neuronal e isómero(s) equivalentes e farmaceuticamente ativos e metabolito(s) destes. (viii) terapias de enxaqueca incluindo por exemplo almotriptano, amantadina, bromocriptina, butalbital, cabergolina, dicloralfenazona, dihidroergotamina, eletriptano, frovatriptano, lisurido, naratriptano, pergolida, pizotifeno, pramipexole, rizatriptano, ropinirole, sumatriptano, zolmitriptano, zomitriptano e isómero(s) equivalentes e farmaceuticamente ativos e metabolito(s) destes. (ix) terapias de acidente vascular cerebral incluindo por exemplo terapia trombolitica com ativase eg e desmoteplase, abciximab, citicolina, clopidogrel, eptifibatida, minociclina e isómero(s) equivalentes e farmaceuticamente ativos e metabolito(s) destes. (x) terapias da incontinência urinária incluindo por exemplo darafenacina, falvoxato, oxibutinina, propiverina, robalzotano, solifenacina, tolterodina e isómero(s) equivalentes e farmaceuticamente ativos e metabolito(s) destes. (xi) terapias da dor neuropática incluindo por exemplo lidocaina, capsaicina, e anticonvulsivos tais como gabapentina, pregabalina, e antidepressivos tais como duloxetina, venlafaxina, amitriptilina, clomipramina e isómero(s) equivalentes e farmaceuticamente ativos e metabolito(s) destes. (xii) terapias de dor nociceptivas tais como paracetamol, NSAIDS e coxibes, tais como celecoxib, etoricoxib, lumiracoxib, valdecoxib, parecoxib, diclofenac, loxoprofeno, naproxeno, cetoprofeno, ibuprofeno, nabumetona, meloxicam, piroxicam e opioides tais como morfolina, oxicodona, buprenorfina, tramadol e isómero(s) equivalentes e farmaceuticamente ativos e metabolito(s) destes. (xiii) terapias da insónia incluindo por exemplo agomelatina, alobarbital, alonimida, amobarbital, benzoctamina, butabarbital, capurido, cloral, cloperidona, cloretato, dexclamol, etclorvinol, etomidato, glutetimida, halazepame, hidroxizina, mecloqualona, melatonina, mefobarbital, metaqualona, midaflur, nisobamato, pentobarbital, fenobarbital, propofol, ramelteona, roletamida, triclofos, secobarbital, zaleplona, zolpidem e isómero(s) equivalentes e farmaceuticamente ativos e metabolito(s) destes. (xiv) estabilizadores de humor incluindo por exemplo carbamazepina, divalproex, gabapentina, lamotrigina, litio, olanzapina, quetiapina, valproato, ácido valpróico, verapamil e isómero(s) equivalentes e farmaceuticamente ativos e metabolito(s) destes.
Esses produtos de combinação empregam composto desta invenção dentro duma gama de dosagem aqui descrita e o outro composto ou compostos farmaceuticamente ativos dentro das gamas de dosagem aprovadas e/ou a dosagem descrita na referência de publicação.
PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS 0 composto da presente invenção pode ser preparado como uma base livre ou um seu sal farmaceuticamente aceitável através do processo descrito a seguir.
Ao longo da descrição seguinte desses processos entende-se que, onde apropriado, grupos de proteção adequados serão adicionados, e subsequentemente removidos dos vários reagentes e intermediários de um modo que será facilmente compreendido por um perito na técnica de síntese orgânica.
Os procedimentos convencionais para o uso tais grupos de proteção assim como exemplos de grupos de proteção adequados são por exemplo descritos em Protective Groups in Organic Synthesis de T.W. Greene, P.G.M Wutz, 3a Edição, Wiley-Interscience, New York, 1999. Entende-se que as micro-ondas (MW) podem alternativamente ser utilizadas para o aquecimento de misturas de reação. É aqui descrito um processo para a preparação de um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que, a menos que especificado de outro modo, R1-R9, n e A são definidos como para a fórmula (I) acima, ou são grupos que podem ser convertidos em R1-R9, ou A em transformações subsequentes. Um composto de fórmula (XI) pode ser equivalente a um composto de fórmula (I). LG representa um grupo de saída tal como halogéneo (tal como cloro, bromo ou iodo) ou um sulfonado de alquil-, aril- ou alquil-sulfonato (tal como triflato) e PG representa um grupo de proteção. 0 referido processo compreende: Método (i) : Formação de um correspondente composto de fórmula (Ilia):
Esquema. 1
Uma cetona de fórmula (II) é tratada com uma base adequada tal como hidreto de sódio, KOtBu, ou LDA na presença de um halogeneto de alquilo (bissubstituído), triflato ou mesilato para dar um composto de fórmula (Ilia) (Esquema 1). A referida reação pode ser realizada num intervalo de temperatura entre -78 °C e +50 °C, num solvente adequado, tal como tetrahidrofurano ou dimetilformamida. As alquilações poderiam ser realizadas num modo sequencial com os intermediários isolados e purificados ou de forma gradual passo a passo. Se as reações produzem um produto substituído com uma olefina, ciano, sulfona ou afins pode, opcionalmente, ser ainda reagida por ciclização de Dieckman, RCM, substituição nucleofílica ou cicloadição para dar intermediários espirocíclicos altamente substituídos. Método (ii): Formação de um correspondente composto de fórmula (Ilia):
Esquema 2
Uma cetona de fórmula (II), é reagida com um aldeído ou uma cetona tal como formaldeído numa gama de temperatura entre a temperatura ambiente e +100 °C na presença de um qualquer ácido prótico tal como ácido borónico (tal como PhB(OH)2), ou na presença de trifluoroacetato de N-metilanilínio, num solvente adequado tal como benzeno ou tolueno (Esquema 2) . O intermediário (IV), em que Z e Y são definidos tal como, por exemplo, hidrogénio ou alquilo, podem ser reagidos com vários dienos utilizando a reação de Diels-Alder numa gama de temperatura entre a temperatura ambiente e +220 °C opcionalmente num tubo selado. A reação pode ser realizada ou num solvente adequado tal como benzeno, tolueno ou THF. Um ácido de Lewis ou quaisquer outros agentes que podem ajudar a reação podem ser adicionados para produzir enantiómeros ou diastereómeros enriquecidos. 0 anel espirolitico resultante pode opcionalmente conter um ou mais substituintes os quais podem ser adicionalmente convertidos por transformações de grupos funcionais conhecidos. Método (iii): Formação de um composto de fórmula (Ilia) correspondente:
Esquema 3
Um derivado alquilo ou cicloalquilo ou heterocicloalquilo (V) contendo grupos de remoção de eletrões X tais como ciano, ácido carboxilico ou ésteres alquilicos podem ser alquilados com brometos e cloretos de orto-halo-benzilo opcionalmente substituídos (VI) (Y = halogéneo tais como bromo ou cloro) (Esquema 3) . A referida reação é apoiada por uma base tal como LDA, NaH ou LiHMDS num solvente tal como benzeno, THF ou tolueno a temperaturas variando entre -78 °C e 80 °C. Um intermediário alquilado (VII) pode ser isolado e adicionalmente sujeito a uma base tal como BuLi ou LDA em solventes tais como THF para efetuar ciclizações em anel. Em alternativa pode-se também utilizar química de metal de transição tal como Pd, Cu ou Rh contendo agentes quelantes tais como derivados de fosfina ou aminas em solventes tais como DMF, THF ou tolueno na presença de uma base tal como trietilamina ou carbonato de sódio a uma temperatura variando entre a temperatura ambiente e +100 °C. No caso em que o produto (VII) da reação contem um substituinte tal como olefina, sulfona, ciano, e afins, eles podem ser ainda mais manipulados (Esquema 3) por RCM, cicloadição, substituição nucleofilica ou qualquer outra reação conhecida para dar compostos espirociclicos altamente substituídos (Ilia). Método (iv:) Formação de um correspondente composto de fórmula (Xla):
Esquema 4
Uma cetona de fórmula (III), é feito reagir com amoníaco para formar o intermediário (VIII) (Esquema 4) . O composto de fórmula (VIII) é opcionalmente não isolado e pode ser submetido ao próximo passo imediatamente num sistema de recipiente. O composto (VIII) é reagido adicionalmente com 2-oxopropanoato de etilo para formar um composto imidazole de fórmula (IX) . A referida reação pode ser realizada num intervalo de temperatura entre a temperatura ambiente e +160 °C, num solvente adequado, tal como metanol, etanol ou álcool isopropílico. 0 composto amino imidazole (XIa) pode então ser obtido pela formação do intermediário (Xa), reagindo o álcool de fórmula (IX) , com um reagente sulfurante tal como pentassulfureto de fósforo na presença de uma base tal como piridina (Esquema 4) . A transformação num composto de fórmula (Xla) pode ser realizada reagindo o intermediário de fórmula (Xa) com amónia, opcionalmente na presença de um agente de oxidação, tal como hidroperóxido de tert-butilo. Método (v) : Formação de um correspondente composto de fórmula (XI) :
Esquema 5
Uma cetona de fórmula (III), é reagida com etanobis(tioamida) na presença de amónia para formar um composto de fórmula (XIII) (Esquema 5) . A referida reação pode ser realizada num intervalo de temperatura entre a temperatura ambiente e +180 °C, num solvente adequado, tal como metanol, etanol ou álcool isopropilico.
Um agente alquilante, tal como iodeto de metilo e um tioimidazole de fórmula (XIII) são reagidos para formar um composto de fórmula (XIV) (Esquema 5). 0 referido composto (XIV) pode ser adicionalmente transformado num composto de fórmula (XI), em que R1 é um grupo alquilo tal como metilo ou etilo, reagindo-o com um reagente organometálico, tal como brometo de metilmagnésio ou brometo de etilmagnésio, na presença de um catalisador adequado, tal como cloreto de [1,3-bis(difenilfosfino)propano] níquel(II). Em alternativa, o composto de fórmula (XI) (R1 é um alquilo tal como metilo ou etilo) pode ser também obtido por reação do composto de fórmula (XIV) com uma mistura de iodeto de zinco e um reagente Grignard tal como brometo de metilmagnésio, ou brometo de etilmagnésio, na presença de um catalisador adequado tal como cloreto de bis(trifenilfosfino)paládio (II) num solvente adequado tal como THF, 2-metil-tetrahidrofurano ou tolueno. Método (vi) Formação de um correspondente composto de fórmula (XI) :
Esquema 6
Uma imina de fórmula (VIII), é reagida com etanobis(tioamida) para formar um composto de fórmula (XIII) (Esquema 6) . A referida reação pode ser realizada num intervalo de temperatura entre +120 °C e +180 °C, num solvente adequado, tal como metanol, etanol ou álcool isopropílico.
Um agente alquilante, tal como iodeto de metilo e um tioimidazole de fórmula (XIII) é reagido para formar um composto de fórmula (XIV) (Esquema 6) . O referido composto (XIV) pode ser adicionalmente transformado num composto de fórmula (XI), em que R1 é um grupo alquilo tal como metilo ou etilo, reagindo-o com um reagente organometálico, tal como brometo de metilmagnésio ou brometo de etilmagnésio, na presença de um catalisador adequado, tal como cloreto de [1,3-bis(difenilfosfino)propano] níquel(II). Em alternativa, o composto de fórmula (XI) (R1 é um alquilo tal como metilo ou etilo) pode também ser obtido por reação do composto de fórmula (XIV) com uma mistura de iodeto de zinco e um reagente de Grignard tal como brometo de metilmagnésio, ou brometo de etilmagnésio, na presença de um catalisador adequado tal como cloreto de bis(trifenilfosfino)paládio (II) num solvente adequado tal como THF, 2-metil-tetrahidrofurano ou tolueno. Método (vii) Formação de um correspondente composto de fórmula (XV) :
Um composto de fórmula (XV) pode ser obtido por reação de um composto de fórmula (III) com um composto de fórmula (XVI) (Esquema 7), em que R11 é alquilo (tal como por exemplo tert-butilo) . A reação é realizada na presença de um ácido de Lewis adequado, tal como um composto de fórmula (XVII), em que R12 é alquilo (tal como etilo ou isopropilo). A reação é realizada num solvente adequado (tal como diclorometano, 2-metil-tetrahidrofurano ou tetrahidrofurano) a uma temperatura entre a temperatura ambiente e a temperatura de refluxo, opcionalmente com destilação azeotrópica para remover um álcool formado na reação. Método (viii) Formação de um correspondente composto de fórmula (XVIII) :
Um composto de fórmula (XIX) pode ser obtido por reação de um composto de fórmula (III) com cloridrato de hidroxilamina e uma base tal como acetato de potássio num solvente adequado tal como uma mistura de água e um álcool adequado tal como etanol à temperatura de refluxo (Esquema 8) . 0 referido composto (XIX) pode ser adicionalmente transformado num composto de fórmula (XVIII) reagindo-o com um composto de fórmula (XX), em que R13 é alquilo ou arilo. A reação é realizada num solvente adequado tal como diclorometano na presença de trietilamina a uma temperatura entre -78 °C e a temperatura ambiente. Método (ix) Formação de um correspondente composto de fórmula (XXI) :
Um composto de fórmula (XXI) em que R14 é um alquilo tal como metilo, pode ser obtido por reação de um composto de fórmula (III) com um composto de silício tal como LiHMDS num solvente adequado tal como diclorometano, 2-metil-tetrahidrofurano ou tetrahidrofurano (Esquema 9) . Método (x) Formação de um correspondente composto de fórmula (XIa) :
Um composto de fórmula (VIII) pode ser obtido por reação de um composto (XXIII) (em que PG é um grupo de proteção tal como, por exemplo, S(0)Rn (Método (vii), fórmula XV), SiR14 (tal como SiMe3) (Método (ix), fórmula XXI), P(0)(R13)2) (Método (viii), fórmula XVIII), S (0) 2alquilo, C(0)Oalquilo, OH ou Oalquilo usando um método adequado para remover o grupo de proteção PG para formar imina (VIII) (Esquema 10). Um método adequado pode consistir em, mas não está limitado ao tratamento do referido composto XXIII com um ácido tal como ácido hidroclórico sob condições secas num solvente adequado (tal como dioxano ou tetrahidrofurano), ou tratamento com um solvente prótico tal como metanol (quando PG = SiMe3) . 0 composto (VIII) podem ser isolados ou reagidos adicionalmente sem isolamento. Um composto de fórmula (VIII) é adicionalmente reagido com 2-oxopropano tioamida (descrito em Asinger et al. Justus Liebigs Annalen der Chemie 1971, vol 744, p. 51-64) opcionalmente na presença de ortoformato de trietilo, num solvente tal como metanol a uma temperatura entre a temperatura ambiente e a temperatura de refluxo, opcionalmente sob condições Dean-Stark, para produzir um composto de fórmula (Xa) . A transformação num composto de fórmula (Xla) pode ser realizada por reação do intermediário de fórmula (Xa) com amónia, opcionalmente na presença de um agente de oxidação, tal como hidroperóxido de tert-butilo. Se 2-oxopropano tioamida é trocado por 2-oxobutanotioamida no processo descrito pelo Esquema 10, os compostos de fórmula (Xb) e (Xlb) serão obtidos em vez de (Xa) e (Xla).
Método (xi) Formação de um correspondente composto de fórmula (Xla) :
Um composto de fórmula (Xa) pode ser obtido a partir de um composto de fórmula (VIII) (Esquema 11). Uma imina de fórmula (VIII) é reagida com 2-oxopropano tioamida (descrita em Asinger et al. Justus Liebigs Annalen der Chemie 1971, vol 744, p. 51-64) num solvente tal como metanol a uma temperatura entre a temperatura ambiente e a temperatura de refluxo para produzir um composto de fórmula (Xa) . 0 composto (VIII) pode ser obtido a partir de uma cetona de fórmula (III) (Esquema 4) ou preparado por métodos conhecidos do perito na técnica. 0 composto de fórmula (Xa) e em seguida tratado com amónia, para produzir o composto de fórmula (Xla) . Se 2-oxopropano tioamida é trocado por 2-oxobutanotioamida no processo descrito pelo Esquema 11, os compostos de fórmula (Xb) e (Xlb) será obtido em vez de (Xa) e (Xla) (ver acima). Método (xii) Formação de um correspondente composto de fórmula (Xla):
Um composto de fórmula (XXIII) (em que PG é um grupo de proteção tal como por exemplo 3(0)1¾11 (Método (vii), fórmula XV), SiR14 (tal como SiMe3, Método (ix), fórmula XXI), P (0) (R13) 2) (Método (viii), fórmula XVIII), S (0) 2alquilo, C(0)Oalquilo, OH ou Oalquilo é reagido com 2-oxopropano tioamida (descrito em Asinger et al. Justus Liebigs Annalen der Chemie 1971, vol 744, p. 51-64) num solvente tal como acetonitrilo a uma temperatura variando entre +100 °C e +160 °C para produzir um composto de fórmula (Xa) (Esquema 12) . 0 composto de fórmula (Xa) é em seguida tratado com amónia, num solvente adequado tal como metanol, THF, ou 2-metil-tetrahidrofurano opcionalmente na presença de um agente de oxidação, tal como hidroperóxido de tert-butilo, a uma temperatura entre a temperatura ambiente e 150 °C, opcionalmente num sistema fechado, para produzir o composto de fórmula (Xla). Se 2-oxopropano tioamida é trocado por 2-oxobutanotioamida no processo descrito pelo Esquema 12, serão obtidos os compostos de fórmula (Xb) e (Xlb) (ver acima) em vez de (Xa) e (Xla). Método (xiii) Formação de um correspondente composto de fórmula (XI) :
Um composto de fórmula (XXIII), em que PG é um grupo de proteção tal como por exemplo S(0)R1:1 (Método (vii) , fórmula XV), SiR14 (tal como SiMe3) (Método (ix) , fórmula XXI), P (0) (R13) 2) (Método (viii) , fórmula XVIII), S (0) 2alquilo, C(0)Oalquilo, OH ou Oalquilo, é reagido com etanobis(tioamida) para formar um composto de fórmula (XIII) (Esquema 13) . A referida reação pode ser realizada num intervalo de temperatura entre a temperatura de refluxo e +180 °C, num solvente adequado, tal como metanol, etanol ou álcool isopropilico, opcionalmente na presença de amónia. Um agente alquilante, tal como iodeto de metilo e um tioimidazole de fórmula (XIII) é reagido para formar um composto de fórmula (XIV) (Esquema 13) . 0 referido composto (XIV) pode ser adicionalmente transformado num composto de fórmula (XI), em que R1 é um grupo alquilo tal como metilo ou etilo, reagindo-o com um reagente organometálico, tal como brometo de metilmagnésio ou brometo de etilmagnésio, na presença de um catalisador adequado, tal como cloreto de [1,3-bis(difenilfosfino)propano] níquel(II). Em alternativa, o composto de fórmula (XI) (R1 é um alquilo tal como metilo ou etilo) pode também ser obtido por reação do composto de fórmula (XIV) com uma mistura de iodeto de zinco e um reagente de Grignard tal como brometo de metilmagnésio, ou brometo de etilmagnésio, na presença de um catalisador adequado tal como cloreto de bis(trifenilfosfino)paládio (II) num solvente adequado tal como THF, 2-metil-tetrahidrofurano ou tolueno. Método (xiv) Formação de um correspondente composto de fórmula (I):
Um composto de fórmula (I) em que R2 é um arilo ou heteroarilo opcionalmente substituído, pode ser obtido (Esquema 14) a partir de, por exemplo, um composto de fórmula (XXIV), e reagindo o referido composto de fórmula (XXIV) com um ácido borónico ou um éster borónico ou um estanano de fórmula T-R2, em que T é por exemplo B(0H)2, B(0alquil)2, ou SnR3, e R2 é um arilo ou heteroarilo opcionalmente substituído, na presença de um catalisador de metal de transição tal como um catalisador de paládio, tal como cloreto de [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno] paládio(II), tetraquis(trifenilfosfino)-paládio(0), cloreto de difenilfosfinoferroceno paládio, acetato de paládio(II) ou bis(dibenzilideneacetona) paládio (0), ou tetracloropaladato de sódio (II)· Opcionalmente, um ligando adequado tal como trifenilfosfino, tri-tert-butilfosfino ou 2-(diciclohexilfosfino)bifenilo, sulfonato de 3-(di-tert-butilfosfónio)propano, ou trifenilfosfinotrimetasulfonato de zinco e sódio, é usado. A base adequada, tal como fluoreto de césio, uma alquil amina, tal como trietil amina, ou um carbonato ou hidróxido de metal alcalino ou de metal alcalino terroso tal como carbonato de potássio, carbonato de sódio, carbonato de césio, ou hidróxido de sódio, podem ser usados na reação. A referida reação pode ser realizada num solvente adequado, tal como tolueno, tetrahidrofurano, 2-metil-tetrahidrofurano, dioxano, dimetoxietano, água, etanol, N,N-dimetilacetamida, acetonitrilo ou N,N-dimetilformamida, ou misturas destes. Em alternativa um composto de fórmula (I) em que R2 é um arilo ou heteroarilo opcionalmente substituído pode ser preparado a partir do composto (XXIV) por transformação num composto (Ia) em que T é como descrito acima (B(OH)2 ou B(Oalquil)2) (Esquema 14a). O composto (Ia) é depois reagido com um composto R2-LG em que R2 é um arilo ou heteroarilo opcionalmente substituído e LG é um grupo de saída tal como um halogéneo para produzir composto (I).
Método (xv) Formaçao de um correspondente composto de fórmula (I) :
Um composto de fórmula (I), em que R2 é ciano, pode ser obtido (Esquema 14) a partir de, é por exemplo, um composto de fórmula (XXIV), em que LG é um qrupo de saída tal como um halogéneo, (tal como iodo, bromo ou cloro), e reaqindo o referido composto de fórmula (XXIV) com um reaqente ciano metálico tal como cianeto de cobre (I). Método (xvi) Formação de um correspondente composto de fórmula (I):
Um composto de fórmula (I), em que R2 é um grupo alquilo tal como metilo pode ser gerado a partir de um composto de fórmula (XXIV) (Esquema 14), em que LG representa um grupo de saída, tal como um halogéneo, (tal como iodo, bromo ou cloro), por reação com um reagente organometálico gerado a partir de iodeto de zinco e brometo de metilmagnésio sob a influência de um catalisador de metal de transição tal como por exemplo cloreto de bis(trifenilfosfino)paládio (II) . Método (xvii) Formação de um correspondente composto de fórmula (I):
Um composto de fórmula (I), em que R2 é um alcino pode ser gerado a partir de um composto de fórmula (XXIV) (Esquema 14), em que LG representa um grupo de saída, tal como um halogéneo, (tal como iodo ou bromo), por reação com um alcino tal como uma alquiletrina ou uma cicloalquiletrina sob a influência de um catalisador de metal de transição tal como por exemplo tetraquis(trifenilfosfino)paládio(0) na presença de uma base tal como trietilamina e iodeto de cobre (I). 0 alcino é opcionalmente sililado. A referida reação pode ser realizada num intervalo de temperatura entre a temperatura ambiente e a temperatura de refluxo, num solvente adequado, tal como THF ou tolueno. Método (xviii) Formação de um correspondente composto de fórmula (I):
Um composto de fórmula (I) em que R2 é NHC(0)R9 pode ser preparado de acordo com o Esquema 14 por reação de um composto de fórmula (XXIV) com um composto R9C(0)NH2 na presença de um catalisador de paládio adequado tal como acetato de paládio (II), opcionalmente na presença de um ligando adequado tal como Xantfos. A referida reação é realizada na presença de uma base adequada tal como carbonato de césio num solvente adequado tal como THF ou 2-metil-tetrahidrofurano a uma temperatura entre temperatura de refluxo e 160 °C. Método (xix) Formação de um correspondente composto de fórmula (I):
Um composto de fórmula (I) em que R2 é NHC(0)R9 pode ser obtido a partir de um composto de fórmula (XXIV) como mostrado no Esquema 15.
Um composto de fórmula (XXIV) é reagido com amónia na presença de trans-4-hidroxi-L-prolina, carbonato de potássio e iodeto de cobre (I) num solvente tal como DMSO a uma temperatura entre a temperatura ambiente e 150 °C para dar um composto de fórmula (XXV). 0 referido composto de fórmula (XXV) é adicionalmente reagido com um ácido carboxilico de fórmula (XXVI) em que R9 é como definido atrás. A reação é realizada na presença de um agente de acoplamento de amida adequado tal como 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etil-carbodiimida num solvente tal como DMF, opcionalmente na presença de ácido hidroclórico. Método (xx) Formação de um correspondente composto de fórmula (Illb):
Um composto de fórmula (Illb) pode ser obtido por reação de uma cetona de fórmula (XII) com um aldeído ou cetona de fórmula (XXII) na presença de um base tal como pirrolidina, piperidina, prolina, morfolina ou Borax num solvente adequado tal como benzeno, tolueno, metanol ou etanol ou uma mistura de água e um álcool adequado tal como metanol ou etanol numa gama de temperatura entre a temperatura ambiente e +180 °C (Esquema 16). Método (xxi) Formulação de um composto de fórmula (I)
Um composto de fórmula (I) em que R2 é OR8 pode ser preparado por reação de um composto de fórmula (XXIV) , em que LG representa um grupo de saida, tal como a halogéneo, (tal como iodo ou bromo), com um álcool de fórmula (XXVII) na presença de um catalisador de paládio adequado tal como acetato de paládio (II), opcionalmente na presença de um ligando adequado tal como 2-(di-t-butilfosfino)-1,1'-binaftilo (Esquema 17) . A referida reação é realizada na presença de uma base adequada tal como carbonato de césio num solvente adequado tal como THF, 2-metil-tetrahidrofurano ou tolueno a uma temperatura entre 20 °C e 160 °C. Método (xxii) Formulação de um composto de fórmula (II)
Um composto de fórmula (II) em que R2 é OR8 pode ser preparado por reação de um composto de fórmula (XXVIII), com um composto de fórmula (XXIX), em que LG representa um qrupo de saída adequado, tal como halogéneo (tal como cloreto, brometo, ou iodeto), ou trifluorometilsulfonato, na presença de uma base adequada tal como um carbonato alcalino, tal como CS2CO3, K2CO3, Na2CC>3, num solvente adequado tal como THF, 2-metil-THF, DMF, ou DMSO, ou uma mistura destes, a uma temperatura entre 0-150 °C (Esquema 18). Método (xxiii) Formulação de um composto de fórmula (II)
Um composto de fórmula (II) em que R2 é OR8 pode ser preparado por reação de um composto de fórmula (XXVIII), com um composto de fórmula (XXVII), na presença de uma fonte de fosfino adequada tal como trifenil fosfino, na presença de um reagente de ativação adequado tal como azodicarboxilato de dietilo, num solvente adequado tal como THF, 2-metil-THF, ou DMF ou uma mistura destes, a uma temperatura de 0-100 °C (Esquema 19). Método (xxiv) Formulação de um composto de fórmula (XXX)
Um composto de fórmula (Villa) pode ser obtido por exemplo pelo método (vii) e método (x) como mostrado no Esquema 20. O referido composto de fórmula (Villa) pode ser obtido por reação de um composto (XVa) , com um ácido tal como ácido hidroclórico sob condições secas num solvente adequado (tal como dioxano ou tetrahidrofurano). O composto (Villa) pode ser isolado ou reagido adicionalmente sem isolamento. O composto de fórmula (Villa) é adicionalmente reagido com 2-oxopropano tioamida (descrito em Asinger et al. Justus Liebigs Annalen der Chemie 1971, vol 744, p. 51-64) opcionalmente na presença de ortoformato de trietilo, num solvente tal como metanol a uma temperatura entre a temperatura ambiente e a temperatura de refluxo, opcionalmente sob condições de destilação azeotrópica, para produzir um composto de fórmula (Xc) . Um composto de fórmula (Xd) pode ser obtido por reação de um composto de fórmula (Xa) com um agente de fluoração adequado tal como um composto de fórmula (XXXI) sob a influência de iodeto cuproso num solvente adequado, tal como acetonitrilo, a uma temperatura entre a temperatura ambiente e a temperatura de refluxo. A transformação num composto de fórmula (XXX) pode ser realizada por reação do composto de fórmula (Xd) com amónia, opcionalmente na presença de um agente de oxidação, tal como hidroperóxido de tert-butilo.
Compostos de fórmula (II), (III), (V), (VI), (XII), (XVI), (XVII), (XX), (XXII), (XXVI), e (XXVII) são compostos comercialmente disponíveis, ou são conhecidos na literatura, ou são preparados por processos padrão conhecidos na técnica. Métodos Gerais
Todos os solventes usados foram solventes anidros de grau analítico e comercialmente disponíveis foram usados em rotina para as reações. Os materiais de partida usados foram disponibilizados a partir de fontes comerciais, ou preparados de acordo com procedimentos da literatura. A temperatura ambiente refere-se a 20-25 °C. Composições de mistura de solventes são dados como percentagens de volume ou proporções em volume. O aquecimento por micro-ondas foi Biotage Creator, Initiator ou cavidade de micro-ondas modo Smith Synthesizer Single produzindo irradiação continua a 2450 MHz de cavidade de micro-ondas. Entende-se que pode ser usado micro-ondas para aquecer as misturas de reação. A cromatografia de camada fina (TLC) foi realizada em placas de TLC da Merck (Gel de silica 60 F254) e as machas foram visualizadas por UV. Cromatografia de flash em coluna de fase direta ("cromatografia de flash") foi realizada manualmente em Gel de silica 60 da Merck (0,040-0,063mm), ou automaticamente usando um sistema ISCO Combiflash® Companion™ usando colunas de flash de fase normal RediSep™ usando o sistema de solventes indicado. A separação de fase foi opcionalmente realizada num separador de fase Isolute®.
RMN
Os espetros de RMN foram registados num espetrómetro de RMN ajustado a 400-600 MHz com uma sonda de configuração adequada. Os espetros foram registados à temperatura ambiente salvo indicação em contrário. Os desvios químicos são dados em ppm para baixo e para cima da TMS (0,00 ppm) . Os seguintes sinais de referência foram utilizados 1H-RMN: TMS δ 0,00, ou o sinal do solvente residual de DMSO-d6 δ 2,49, CD3OD δ 3,30, acetona-d6 2,04 ou CDCI3 δ 7,25 (salvo indicação em contrário). As multiplicidades de ressonância são anotadas como s, d, t, q, m, br e app para singuleto, dupleto, tripleto, quarteto, multipleto, amplo e aparente, respetivamente. Em alguns casos, são relatados apenas os sinais de diagnóstico.
Análises HPLC, HPLCMS e LCMS: A cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) foi realizada numa coluna de fase reversa (RP). Foi aplicado um gradiente linear usando por exemplo fase móvel A (10 mM NH4OAC em CH3OH a 5% ou CH3CN a 5% (aq. ) , ou NH3 a 0,1% (aq.) ou ácido fórmico 0,1% (aq.)) e B (CH3OH ou CH3CN) . As análises de espetrometria de massa (MS) foram realizadas num modo de ião positivo e/ou negativo usando ionização por eletropulverização (ESI+/-) e/ou ionização química de pressão atmosférica (APCI+/-).
Análise GCFID e GCMS: A cromatografia gasosa (GC) foi realizada num GC equipado com um espetrómetro de massa (MS) ou um detetor de ionização de chama (FID) . A fonte de iões MS foi ou um impacto de eletrões (EI) ou uma ionização química (Cl, gás metano reativo). Para a separação utilizou-se uma coluna capilar por exemplo DB-5MS, (J&W Scientific). Foi aplicado um gradiente de temperatura linear.
Cromatografia preparativa: A cromatografia preparativa foi corrida num sistema Waters FractionLynx com um Coletor de Frações Automático combinado com Auto amostrador (Waters 2767), Bomba de Gradiente (Waters 2525), Comutador de coluna (Waters CFO) e PDA (Waters 2996). Coluna; XBridge® Prep C8 10 pm OBD™ 19 x 300 mm, com coluna de guarda; XTerra® Prep MS C8 10 pm 19 x 10 mm Cartridge. Um gradiente de A (95% de NH4OAC 0,1 M em água MilliQ e MeCN a 5%) em B (100% MeCN) ou um gradientede A (95% NH4OAC 0,1 M em água MilliQ e MeOH a 5%), A (0,2% NH3 em água MilliQ) ou A (ácido fórmico a 0,2% em água MilliQ) em B (MeOH a 100%) foi aplicado para separação de CL à taxa de fluxo de 20 mL/min. A cromatografia quiral preparativa para separação de isómeros foi realizada, por exemplo, num sistema LaPrep® usando a coluna especifica e sistema de fase móvel.
Análise SFC: A Cromatografia de Fluidos Supercríticos (SFC) foi realizada numa coluna de cromatograf ia de fase direta. Um fluxo isocrático foi aplicado usando fase móvel A (CO2) e por exemplo fase móvel B (MeOH, EtOH ou IPA).
Análise de HPLC de fase direta:
Cromatografia liquida de alta pressão (HPLC) foi realizada numa coluna de fase direta. Foi aplicado um fluxo de gradiente linear ou isocrático usando por exemplo a fase móvel A (Heptano) e B (EtOH ou IPA).
Espetrometria de massa de alta resolução (HRMS) para medições precisas de massa foi realizada num espetrómetro de massa Waters Synapt-G2 equipado com uma fonte LockSpray e conectada com um sistema Acquity UPLC com um detetor de PDA e uma coluna Acquity UPLC BEH C18. A massa medida confirmou a composição elementar em 3 ppm.
Abreviaturas ACN acetonitrilo aq aquoso
Atm pressão atmosférica
Boc t-butoxicarbonilo
Borax tetraborato de di-sódio ou borato de sódio ou tetraborato de sódio Cbz benziloxicarbonilo CDI 1,1'-carbonildiimidazole dba dibenzilidenoacetona DCM diclorometano DEA dietilamina DIBAL-H hidreto de diisobutilaluminio DIPEA diisopropiletilamina DME 1,2-dimetoxietano DMF Ν,Ν-dimetil formamida DMSO dimetil sulfdxido dppf 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno
Et20 éter dietilico
EtOAc acetato de etilo
EtOH etanol eq. ou equiv. equivalente h hora(s) HPLC cromatografia liquida de alta eficiência IPA isopropanol LCMS espetrometria de massa de cromatografia liquida
LiHMDS litio bis (trimetilsilil)amida
MeOH metanol min minuto (s) MS espetrometria de massa MW micro-onda(s) NH40A acetato de amónio RMN ressonância magnética nuclear ox oxidação
Psi libras por polegada quadrada quant. quantitativo RCM metátese de fechamento de anel t.a. temperatura ambiente sat. saturada SFC Cromatografia supercrítica de fluidos TFA ácido trifluoracético THF tetrahidrofurano TLC cromatografia de camada fina TMEDA tetrametiletilenediamina UPLC cromatografia liquida de ultra-desempenho 2-Me THF tetrahidrofurano de metilo
Os compostos foram designados utilizando CambridgeSoft MedChem ELN v2.2 ou ACD/Name, versão 10.0, ou 10.06, ou versão 12.01, software da Advanced Chemistry Development, Inc. (ACD/Labs), Toronto ON, Canada, www.acdlabs.com, ou Lexichem, versão 1.9, software da OpenEye.
EXEMPLOS
Abaixo segue uma série de exemplos não limitativos. Intermediário 1 N-(6-Bromocroman-4-ilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida
6-Bromocroman-4-ona (5,0 g, 22 mmol) e 2-metilpropano-2-sulfinamida (2,6 g, 22 mmol) foram dissolvidos em THF seco (80 mL). Adicionou-se etóxido de titânio (10 g, 44 mmol). A mistura resultante foi aquecida a 60 °C durante 2 dias. Uma porção adicional de etóxido de titânio (1,0 g, 8,4 mmol) foi adicionada após 12 h. A mistura foi misturada com heptano e evaporada sobre gel de silica. A cromatografia de flash em sílica (0-50% EtOAc em heptano) deu o composto de título (6,0 g, 83% de rendimento) . ΤΗ RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 1,34 (s, 9 H) 3,26 - 3,32 (m, 1 H) 3,47-3,54 (m, 1 H) 4,28 - 4,40 (m, 2 H) 6,83 (d, 1 H) 7,46 (dd, 1 H) 8,06 (d, 1 H); MS (ES+) m/z 330 [M+H]+.
Intermediário 2 2-Oxopropanotioamida
Uma solução de cianeto de acetilo (140 mL, 1764,24 mmol) em 2-metil-tetrahidrofurano (850 mL) foi agitada a -10 °C como sulfeto de hidrogénio (frasco de pressão Sigma-Aldrich) foi borbulhado através da solução. A adição de sulfeto de hidrogénio foi parada após 15 min e à mistura agitada, trietilamina (1,230 mL, 8,82 mmol) em 2-metil- tetrahidrofurano (13 mL) foi adicionada lentamente durante 30 min (reação exotérmica) . A adição de sulfeto de hidrogénio foi continuada durante 3 h a 5 °C, 3 h a 10 °C e durante a noite a 15 °C. Fez-se borbulhar azoto gasoso através da solução durante 30 min, seguida por evaporação dos voláteis. Ao resíduo adicionou-se uma mistura de heptano (100 mL) e EtOAc (100 mL). Um sólido foi removido por filtração (79 g, 43% de rendimento) e o filtrado foi purificado por cromatografia em gel de sílica de ligação curta, eluindo com acetato de etilo a 50% em heptano para dar 79 g (43% de rendimento) do composto de título. As duas recolhas (no total 158 g, 87% de rendimento) continham o produto de título de pureza adequada de acordo com GC-MS: MS (ES+) m/z 104 [M+H]+.
Intermediário 3 6-Bromo-4'-metilspiro[croman-4,2'-imidazole]-5'(1 Ή)-tiona
Adicionou-se N-(6-bromocroman-4-ilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida (2,0 g, 6,0 mmol, intermediário 1) foi dissolvido em dioxano seco (2 mL) , e HC1 4M em dioxano (15 mL, 60,00 mmol). Um precipitado branco começou a formar-se. A mistura foi agitada à t.a. durante 12 h. A mistura foi diluída com Et2<0 seco (50 mL) e filtrada em vácuo. O bolo do filtro foi lavado com Et20 seco (50 mL) , depois imediatamente dissolvido por agitação em NaHCCb (aq) e CH2CI2. A fase orgânica foi seca (K2CO3) e evaporada para dar 6-bromocroman-4-imina (1,3 g, 5, 7 mmol) . O sólido foi dissolvido em conjunto com 2-oxopropanotioamida (Intermediário 2, 1,7 g, 17 mmol,
Intermediário 2) em metanol seco (5 mL) e a solução resultante foi aquecida a 60 °C durante 12 h. A evaporação sobre sílica e purificação por cromatografia de flash (EtOAc em heptano) deu o composto de título (0,39 g, 21% de rendimento) .ΤΗ RMN (400 MHz, CDCI3) δ ppm 2,18 (m, 1 H) , 2,35 (m, 1 H), 2,42 (s, 3 H) , 4, 35 - 4, 40 (m, 1 H) , 4,60 (m, 1 H), 6,81 (d, 1 H), 6,88 (d, 1 H), 7,33 (dd, 1 H); MS (ES+) m/z 311 [M+H] +.
Intermediário 4 6-Bromo-5'-metilspiro[croman-4,2'-imidazol]-4'-amina
6-Bromo-4'-metilspiro[croman-4,2'-imidazole]-5'(l'H)-tiona (0,10 g, 0,32 mmol, Intermediário 3) foi dissolvido em MeOH (1 mL) e foi adicionada amónia 7M em MeOH (4 mL, 28 mmol) . A solução foi aquecida a 60 °C durante 12 h num frasco selado. A solução foi evaporada in vacuo. O tratamento com amónia 7M foi repetido no mesmo modo uma vez mais. A evaporação in vacuo deu o composto de titulo (73 mg, 77% de rendimento) o qual foi usado sem purificação adicional no passo seguinte. ΤΗ RMN (400 MHz, CDCI3) δ ppm 2,11 (m, 2 H), 2,35 (s, 3 H) , 4,53 (m, 2 H), 4,98 (br s, 2 H), 6,66 (m, 1 H), 6,78 (d, 1 H), 7,22 (m, 1 H); MS (ES+) m/z 294 [M+H]+.
Intermediário 5
6'-Bromo-4-metoxi-spiro[ciclohexano-1,2'-indano]-1'-ona Método A
Passo 1: 6'-Bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3Ή)- diona
Tert-butóxido de potássio (7,50 g, 66,81 mmol) foi adicionado em porções para 6-bromo-2,3-dihidro-lH-inden-l-ona (11,75 g, 55,67 mmol) e acrilato de metilo (11,05 mL, 122,5 mmol) em THF (55 mL) sob arrefecimento num banho de gelo. A mistura foi agitada durante 1,5 h à t.a. Água (80 mL) e KOH (3,12 g, 55,7 mmol) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 75 °C e depois a 60 °C durante a noite. A mistura foi arrefecida a 0 °C, e o precipitado formado foi filtrado e seco in vacuo para dar o composto de titulo (11,69 g, 72% de rendimento). iH RMN (500 MHz, CDC13) δ ppm 1,83 - 1, 92 (m, 2 H), 2,15 - 2,27 (m, 2 H), 2, 40-2,50 (m, 2 H), 2,71 (dt, 2 H) , 3,17 (s, 2 H), 7,39 (d, 1 H), 7,75 (dd, 1 H), 7,92 (d, 1 H); MS (ES+) m/z 293 [M+H]+.
Passo 2: 6'-Bromo-4-hidroxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]- 1'(3'H)-ona
6'-Bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3'H)-diona (Intermediário 5 Passo 1, 6,1 g, 20,8 mmol) foi dissolvido em THF (220 mL) e arrefecido a -65 °C. Adicionou-se
borohidreto de sódio (0,354 g, 9,36 mmol) e o banho de arrefecimento foi removido. A mistura foi deixada atingir 0 °C (aprox. 30 min). Adicionou-se água (10 mL), e a maioria do solvente orgânico foi removido por evaporação. O resíduo foi repartido entre EtOAc (100 mL) , e uma solução aq. de NaCl (50 mL). A fase orgânica foi seca (MgSCb) e evaporada para dar um produto que foi combinado com o produto adicional obtido de um modo similar partindo de 14,6 g de 6'-bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3'H)-diona. A purificação foi feita por cromatografia de flash (120 g de sílica, gradiente de eluição: CH2CI2 para CH2Cl2/MeOH (90:10)) formando 13,6 g (66% de rendimento) do composto de título. 0 material obtido consistiu de uma mistura 80:20 do isómero 1 e isómero 2. As amostras analíticas dos isómeros foram isoladas por cromatografia de flash (gradiente heptano/EtOAc) para produzir:
Isómero 1: (lr,4r)-6'-Bromo-4-hidroxispiro [ciclohexano- 1,2'-inden]-1'(3'H)-ona:
!H RMN (400 MHz, DMSO-de) δ ppm 1,20 - 1,43 (m, 4 H) , 1,49 - 1.62 (m, 2 H), 1, 79 - 1, 89 (m, 2 H), 2,99 (s, 2 H) , 3,39 - 3,50 (m, 1 H), 4,68 (d, 1 H), 7,56 (d, 1 H), 7,76 (d, 1 H), 7,85 (dd, 1 H); MS (ES+) m/z 317 [M+Na]+ e
Isómero 2: (ls,4s)-6'-bromo-4-hidroxispiro [ciclohexano- 1,2'-inden]-1'(3'H)-ona:
!H RMN (400 MHz, DMSO-de) δ ppm 1, 07 - 1,20 (m, 2 H) , 1,51 - 1.63 (m, 2 H) , 1,65 - 1, 76 (m, 2 H) , 1,93 (td, 2 H) , 2,98 (s, 2 H), 3,83 (d, 1 H), 4,45 (d, 1 H) , 7,51 - 7,55 (m, 1 H), 7,76 (d, 1 H), 7,84 (dd, 1 H); MS (ES+) m/z 317 [M+Na]+.
Passo 3: 6'-Bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]- 1'(3'H)-ona
Uma mistura de isómeros de 6'-bromo-4- hidroxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona (Intermediário 5 Passo 2, 12,7 g, 43,0 mmol) foi dissolvido em THF (210 mL) sob N2 e arrefecida a 0 °C. Tert-butóxido de potássio (5,79 g, 51,6 mmol) foi adicionado em porções e a mistura foi agitada a 0 °C durante 25 min. Adicionou-se iodeto de metilo (4,30 mL, 68,8 mmol). O banho de arrefecimento foi removido, e a mistura foi agitada à t.a. Tert-butóxido de potássio adicional (0,483 g, 4,30 mmol) foi adicionado duas vezes, após 2 h e 3 h respetivamente, e então a mistura foi agitada durante 2 h. A água (100 mL) foi adicionada e a solução resultante foi repartida entre solução aq. de NaCl (200 mL) , e EtOAc (200 mL) . A fase aq. foi extraída com outra porção de EtOAc (100 mL) . As fases orgânicas combinadas foram secas (MgS04) e evaporadas para dar 12,5 g (94% de rendimento) de uma mistura (aprox. 80:20) de:
Isómero 1: (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'- inden]-l'(3'H)-ona:
e Isómero 2: (ls,4s)-6'-bromo-4-metoxispiro[ciclohexano- 1,2'-inden]-1'(3'H)-ona:
^ RMN (400 MHz, DMSO-cfe, sinais para Isómero 1) δ ppm 1,20 - 1,32 (m, 2 H), 1,40 - 1,48 (m, 2 H), 1,51 - 1,62 (m, 2 H), 1, 97 - 2,07 (m, 2 H) , 3,00 (s, 2 H) , 3,15 - 3,23 (m, 1 H) , 3,26 (s, 3 H), 7,56 (d, 1 H) , 7,77 (d, 1 H) , 7,86 (dd, 1 H) ; MS (ES+) m/z 309 [M+H]+.
Método B
Passo 1: 6'-Bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3 Ή)- diona
6-Bromo-2,3-dihidro-lH-inden-l-ona (800 g, 3,79 mol) e acrilato de metilo ( 787 mL, 8,72 mol) em 2-metil- tetrahidrofurano (4 L) foram agitados a 28 °C. A solução de tert-pentóxido do potássio em tolueno (1,7 M, 2,68 L, 4,55 mol) foi adicionada gota a gota mantendo a temperatura entre 30 °C e 43 °C. A mistura foi agitada durante 0,5 h a 25 °C. A água (4 L) foi adicionada e após 10 min adicionou—se KOH (383 g, 6,82 mol). A mistura foi aquecida até refluxo e o solvente orgânico foi destilado durante 4 h. A mistura foi arrefecida a 10 °C, e o precipitado formado foi filtrado e seco in vacuo para dar o composto de titulo (837 g, 75% de rendimento) . RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1, 74 - 1, 85 (m, 2 H), 1,94 (m, 2 H) , 2,34 (m, 2 H) , 2,52 - 2,60 (m, 2 H) , 3,27 (s, 2 H), 7,60 (d, 1 H) , 7, 79 - 7, 83 (m, 1 H) , 7,89 (m, 1 H); MS (ES+) m/z 293 [M+H]+.
Passo 2: (lr,4r)-6'-Bromo-4-hidroxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona
A 6'-bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3 Ή)-diona (Intermediário 5 Passo 1, 50,52 g, 172,3 mmol) em DCM (250 mL), complexo tert-butilamina borano (5,70 g, 65,49 mmol) em DCM (50 mL) foi lentamente carregado a 0 °C. Após 40 min foi carregado HC1 concentrado (20 mL) seguido por NaCl a 20% (70 mL) . A mistura foi deixada atingir a t.a. e foi agitada durante 30 min. As fases foram separadas e à fase aquosa foram carregados DCM (40 mL) e H2O (10 mL) . As fases orgânicas foram combinadas, concentradas e secas sob vácuo durante a noite para dar o produto de titulo (52,4 g, 100% de rendimento) como uma mistura do produto de titulo (83% de rendimento) e o outro diastereómero (ls, 4s)-6'-bromo-4-hidroxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3Ή)-ona (17%): XH RMN (500 MHz, CDCI3, sinais para ambos os isómeros) δ ppm ΧΗ RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 1,39-1,50 (m, 3 H), 1,67-1, 85 (m, 3 H) 2,05-2,12 (m, 2 H) 2,96 (s, 0,34 H) , 2,98 (s, 1,68 H) , 3,76 (m, 0,83 H) , 4,04 (m, 0,17 H) , 7,34 (m, 1 H) 7,70 (m, 1 H) 7,88 (d, 1 H); MS (ES+) m/z 295 [M+H]+.
Passo 3: (lr,4r)-6'-Bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona
(lr,4r)-6'-Bromo-4-hidroxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-l'(3'H)-ona (Intermediário 5 Passo 2, 50.9 g, 172 mmol) (contendo 17% de (ls,4s)-6'-bromo-4- hidroxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona), iodeto de metilo (18,33 mL, 293,1 mmol) e 2-Me THF (360 mL) foram aquecidos a 30 °C sob N2. A solução de tert-pentóxido de potássio em tolueno (1,7 M em tolueno, 203 mL, 344 mmol) foi adicionado gota a gota durante 30 min. A mistura foi deixada atingir a t.a. e foi agitada durante 1 h. Adicionou-se água (250 mL) e após 10 min de agitação as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada com água (140 mL), concentrada e seca in vacuo para dar um sólido. 300 mL de MeOH foram adicionados ao sólido e a mistura foi aquecida até refluxo. A água foi adicionada (30 mL) seguida por refluxo durante 5 min. A mistura foi lentamente deixada atingir a t.a. A mistura foi agitada durante a noite à t.a. 0 sólido foi filtrado para dar o composto de titulo como um único isómero (31 g, 58% de rendimento) : 2Η RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 1,38 (m, 2 H) 1,52 (m, 2 H) 1,77 (td, 2 H) 2,16 (m, 2 H) 2,98 (s, 2 H) 3,28 (m, 1 H) 3,40 (s, 3 H) 7,35 (d, 1 H) 7,70 (dd, 1 H) 7,88 (d, 1 H); MS (ES+) m/z 309 [M+H]+.
Método C
Passo 1: 6'-Bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3Ή)- diona
0 acrilato de metilo (6,6 L, 73 mol) foi carregado gradualmente em três porções iguais (cada 2,2 L, 24,6 mol) a uma mistura de 6-bromo-l-indanona (8,00 kg, 37,9 mol), THF (16 L) e tert-butóxido de potássio (210 g, 1,87 mol) a aproximadamente 20-30 °C. Tert-butóxido de potássio adicional (86 g, 0,77 mol), dissolvido em THF (0,39 L), foi adicionado após a primeira porção de acrilato de metilo. Foi carregado mais tert-butóxido de potássio (86 g, 0,77 mol), dissolvido em THF (0,39 L), após a segunda porção de acrilato de metilo. Uma solução adicional de tert-butóxido de potássio (4,64 kg, 41,3 mol) em THF (21 L) foi depois carregada gradualmente a aproximadamente 20-30 °C. O solvente (21,5 L) foi removido por destilação a aproximadamente 65 °C e depois uma mistura de água (49 L) e KOH 50%. aq (2,3 L, 30 mol) foram adicionados durante aproximadamente 10 min. a menos de 60 °C. A reação foi mantida a 60 °C durante aproximadamente 6 h, depois foi arrefecida a 20 °C durante lhe filtrada
depois de mantida a 20 °C durante aproximadamente 12 h. Os sólidos foram lavados com uma mistura de água (8 L) e THF (4 L), e depois secas para dar o composto de titulo (7,47 kg, ensaio RMN a 92% p/p, 23,4 mol, 62% de rendimento) : RMN (500 MHz, DMSO-de) δ ppm 1, 78 - 1, 84 (m, 2 H) , 1,95 (td, 2 H), 2,32 - 2,38 (m, 2 H), 2,51 - 2,59 (m, 2 H), 3,27 (s, 2 H), 7,60 (d, 1 H), 7,81 (m, 1 H) , 7,89 (m, 1 H) .
Passo 2: (lr,4r)-6'-Bromo-4-hidroxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona
6'-bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3'H)-diona (Intermediário 5 Passo 1, 750 g, 2,56 mol) e propan-2-ol (9,855 L) foram aquecidos a refluxo e moídos e adicionou-se NaOH (100 g, 2,50 mol) à mistura em duas porções. A mistura foi aquecida a refluxo durante 2 h. 5 L de solvente foram removidos por destilação em vácuo. Adicionou-se tolueno (2 L) e 2 L de solvente foram removidos por destilação em vácuo. Tolueno (3 L) seguido por HC1 2 M (1,278 L, 2,56 mol) foi adicionado à mistura sob agitação. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com água (2,0 L) . A fase orgânica foi concentrada e o tolueno (2 L) foi adicionado e depois a mistura foi concentrada. Adicionou-se 2-metil-tetrahidrof urano (1 L) e depois 0,5 L do solvente foram removidos por destilação em vácuo, a mistura resultante foi utilizada como tal no passo seguinte. O composto de título era uma mistura com o diastereómero (ls,4s)-6'-bromo-4-hidroxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona na proporção de 7:3 (estabelecida por análise de HPLC e RMN) : i-H RMN (500 MHz, CDCI3, sinais para ambos os isómeros) δ ppm 1,40 - 1,52 (m, 3 Η), 1,70 - 1,84 (m, 3 Η), 2,04-2,11 (m, 2 Η), 2,97 (s, 0,62 Η), 3,00 (s, 1,38 Η), 3,73 - 3,81 (m, 0,7 Η), 4,04 (m, 0,3 Η), 7,31-7,38 (m, 1 Η), 7, 67 - 7, 73 (m, 1 Η) , 7, 89 (m, 1 Η) .
Passo 3: (lr,4r)-6'-Bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'- inden]-1'(3'H)-ona
0 complexo tert-butilamina borano (820 g, 9,4 mol) dissolvido em DCM (3,6 L) foi carregado a uma suspensão espessa de 6'-bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3'H)-diona (Intermediário 5 Passo 1, 7,46 kg, a 92% p/p ensaio RMN, 23,4 mol) em DCM (41 L) a aproximadamente 0-5 °C durante aproximadamente 40 min. Após aproximadamente 1 h, uma solução de NaCl (2,68 kg), água (12,9 L) e foi carregado ácido hidroclórico a 37% (2,5 L, 31 mol). A mistura foi aquecida até aproximadamente 15 °C e as fases separadas após deposição em camadas. A fase DCM, contendo (lr,4r)-6'-Bromo-4-hidroxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1' (3 Ή)-ona (Intermediário 5 Passo 2), foi devolvido ao reator, em conjunto com metanosulfonato de metilo (2,59 L, 30,5 mol) e cloreto de tetrabutilamónio (130 g, 0,47 mol). NaOH 50% Aq. (13 L, 229 mol) foi então carregada à mistura de reação vigorosamente agitada durante aproximadamente lha aproximadamente 20 °C. Após manutenção durante aproximadamente 16 h., adicionou-se água (19 L) e a fase aq. eliminada após a separação. O solvente (34 L) foi destilado à pressão atmosférica e depois mais solvente (20 L) foi removido por destilação durante a adição de EtOH (20 L) em 5 porções iguais. Adicionou-se EtOH (14 L) e a solução foi arrefecida a 25 °C. Foi tomada uma amostra (0,3 L) a 40 °C durante o arrefecimento. A amostra cristalizada espontaneamente e foi recarregada ao reator a 25 °C. Após reaquecimento a aproximadamente 40 °C, a água (14 L) foi carregada durante aproximadamente 20 min. A suspensão espessa foi arrefecida a aproximadamente 20 °C e mantida durante 16 h antes da filtração. Os sólidos foram lavados com uma mistura de água (4,8 L) e EtOH (6,4 L) e depois secas para dar o composto de titulo (contendo 4,6% de Isómero 2: (ls,4s)-6'-bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-l'(3'H)-ona por análise de HPLC) (5,57 kg, a 91% ensaio de RMN, 16,4 mol, 70% de rendimento): ΤΗ RMN (500 MHz, DMSO-de) δ ppm 1,22-1,32 (m, 2 H), 1,41 - 1,48 (m, 2 H) , 1,56 (td, 2 H), 1,99 - 2,07 (m, 2 H), 3,01 (s, 2 H), 3,16 - 3,23 (m, 1 H), 3,27 (s, 3 H), 7,56 (d, 1 H) , 7,77 (d, 1 H) , 7,86 (dd, 1 H) .
Intermediário 10 6-Bromo-2',3',5',6'-tetrahidrospiro[indeno-2,4'-piran]-1(3H)-ona
Uma solução de tert-butóxido de potássio (3,94 g, 35,1 mmol) em t-BuOH (35 mL) foi adicionada gota a gota durante 15 min a uma solução de 6-bromo-l-indanona (3,53 g, 16,73 mmol) em 2-metil-tetrahidrofurano (350 mL) à t.a. sob uma atmosfera de azoto. Após 15 min foi adicionado éter bis(2-bromoetílico) (2,102 mL, 16,73 mmol) e a mistura resultante foi agitada à t.a. durante 5 h. Tert-butóxido de potássio (0,938 g, 8,36 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à t.a. durante a noite. A mistura foi apagada com NH4CI aq saturado (150 mL) e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 50 mL) e Et20 (50 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 mL) , secas sobre MgSCU, filtradas e concentradas. O resíduo resultante foi retomado em DCM, concentrado sobre gel de sílica e purificado numa coluna de gel de sílica eluído com 0-40% EtOAc em heptano para dar 1,14 g (24% de rendimento) do composto de título; MS (ES+) m/z 281 [M+H]+.
Intermediário 11 6'-Bromo-4,4-difluoro-spiro[ciclohexano-1,2'-indano]-1'-ona
Uma solução de 6'-bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1' , 4(3Ή)-diona (Intermediário 5 Método A Passo 1, 2 g, 6,82 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionada a uma solução de trifluoreto de 4-tert-butil-2,6-dimetilfenilenxofre (FLUOLEAD™) (3,24 g, 13,0 mmol) e EtOH (0,159 mL, 2,73 mmol) em DCM (10 mL) a 0 °C. A mistura de reação foi deixada reagir à t.a. e foi agitada durante a noite. A mistura de reação foi vertida numa solução de NaOH 1 M aq. arrefecida (5 mL) e a mistura foi agitada à t.a. durante 60 min. A fase aquosa foi extraída com DCM duas vezes. As fases orgânicas combinadas foram concentradas e o produto bruto foi purificado numa coluna de sílica (gradiente 0-20% de EtOAc/n-heptano) . Foram colhidos dois lotes. O lote 1 deu 2,2 g (purificar por HPLC, deteção de UV 42%) e o lote 2 deu 819 mg (purificada por HPLC, deteção UV 62%) . 0 composto foi usado como tal no passo seguinte. ΧΗ RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 1,57-1,66 (m, 2 H), 1,83 - 1,98 (m, 2 H), 2,00 - 2,08 (m, 2 H), 2,26 - 2,38 (m, 2 H) , 3,01 (s, 2 H) , 7,35 (d, 1 H) , 7, 72 (dd, 1 H) , 7, 89 (d, 1 H) .
Intermediário 12 5-Bromo-4'-metoxi-3H-spiro[benzofuran-2,1'-ciclohexano]-3-ona
Passo 1: 2-(5-Bromo-2-fluorofenil)-2-((trimetilsilil)oxi) acetonitrilo
A uma solução de 5-bromo-2-fluoro-benzaldeido (30,45 g, 150 mmol) em THF (250 mL) , adicionou-se DMAP (0,203 g, 1,73 mmol) seguida por cianeto de trimetilsililo (18,24 g, 183,8 mmol). A mistura de reação foi agitada à t.a. durante 4 h e depois concentrada in vacuo para produzir 45,8 g (rendimento quantitativo) do composto de titulo o qual foi usado diretamente no passo seguinte sem purificação adicional. ΤΗ RMN (400 MHz, CDCI3) : δ ppm 1,71 (m, 6 H) , 2,31 (m, 2 H) , 3,32 (m, 1 H), 3,41 (s, 3 H) , 7,03 (d, J=9,20 Hz, 1 H), 7,36 (t, J=8,80, 2, 00 Hz, 1 H), 7,77 (d, J=2,00 Hz, 1 H) .
Passo 2: (5-Bromo-2-fluorofenil)(l-hidroxi-4- metoxiciclohexil)metanona
LiHMDS (1,0 M, 165 mL, 165 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de 2-(5-bromo-2-fluorofenil)-2-((trimetilsilil)oxi)acetonitrilo (Intermediário 12 Passo 1, 45, 80 g, 150 mmol) em acetonitrilo (250 mL) a -78 °C. A mistura de reação foi agitada durante 1,5 h e uma solução de 4-metoxiciclohexanona (Lee, C. K.; Lee, I.-S. H.; Noland, W. E. Heterocycles, 2007, 71, 419-428) (20,3 g, 150 mmol) em THF (30 mL) foi adicionada lentamente e a agitação a -78 °C foi continuada durante 3 h. HC1 aq. 1M (300 mL) foi adicionado a -78 °C, e a mistura foi deixada aquecer lentamente à t.a. e agitada durante a noite. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 500 mL) . Os extratos combinados foram secos sobre Na2S04, filtrados, e concentrados in vacuo para produzir 57 g do material bruto. Uma porção do produto bruto (30 g) foi purificada por cromatografia de flash usando um gradiente de 0 a 50% EtOAc em EtOAc em hexanos para produzir 9,24 g do composto de título.
Passo 3 : 5-Bromo-4'-metoxi-3H-spiro[benzofuran-2,1'-ciclohexan]-3-ona
Uma mistura de (5-bromo-2-fluorofenil)(l-hidroxi-4-metoxiciclohexil)metanona (Intermediário 12 Passo 2, 1,05 g, 3,17 mmol) e tert-butóxido de potássio (0,445 g, 3,80 mmol) em THF (10 mL) foi aquecida num reator de micro-ondas a 70 °C durante 30 min. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi purificado por cromatografia de flash usando um gradiente de 0 a 15% de EtOAc em hexanos para produzir 388 mg (39% de rendimento) do composto de titulo. ΧΗ RMN (400 MHz, CDCI3) : δ ppm 1,71 (m, 6 H) , 2,31 (m, 2 H), 3,32 (m, 1 H), 3,41 (s, 3 H), 7,03 (d, J=9,20 Hz, 1 H) , 7,36 (t, J=8,80, 2.00 Hz, 1 H), 7,77 (d, J=2,00 Hz, 1 H); MS (ES+) m/z 312 [M+H]+.
Intermediário 14 3-Bromo-5-(prop-l-inil)piridina
3,5-Dibromopiridina (30 g, 127 mmol), cobre(I) iodo (7,24 g, 38.0 mmol) e tetraquis(trifenilfosfino)paládio(0) (4,39 g, 3,80 mmol) foram misturados em tolueno (120 mL) sob atmosfera de azoto. Adicionou-se 1-(Trimetilsilil)-1-propina (26,36 mL, 164,5 mmol), trietilamina (53,0 mL, 380 mmol) e fluoreto de tetra-n-butilamónio (12,66 mL, 12,66 mmol). A mistura foi aquecida a refluxo e agitada sob azoto durante a noite. Adicionou-se água (100 mL) à mistura de reação, que foi filtrada e as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada com HC1 1 M aq. (100 mL) . A fase orgânica foi concentrada e dissolvida em MeOH (200 mL), filtradas e concentradas. A mistura foi dissolvida em DCM e evaporada com gel de silica até à secura, e, em seguida, transferida para uma coluna de gel de sílica (300 g) . O produto foi eluído com um gradiente de EtOAc (0-5%) em heptano. As frações contendo o produto puro foi combinado e evaporado para dar o composto de título (16,39 g, 66% de rendimento): iH RMN (50 0 MHz, CDC13) δ ppm 2,08 (s, 3 H), 7,82 (t, 1 H), 8,52 (d, 1 H), 8,55 (d, 1 H); MS (APCI+) m/z 197,0 [M+H]+.
Intermediário 15 Ácido 5-(Prop-l-inil)piridin-3-il borónico
Foram misturados 3-bromo-5-(prop-l-inil)piridina (Intermediário 14, 25 g, 117 mmol), 2-metil-tetrahidrofurano (60 mL) , tolueno (200 mL) e borato de triisopropilo (33,2 mL, 140,78 mmol). A mistura foi arrefecida a -50 °C. A uma mistura fria adicionou-se n-BuLi (59,8 mL, 149,5 mmol) gota a gota durante 30 min. A mistura foi agitada durante 60 min. a -50 °C. HC1 2M aq. (100 mL). A mistura foi depois deixada para atingir a t.a. e agitada durante 20 min. A fase orgânica e a aquosa foram separadas. A fase orgânica foi extraída com NaOH (2M aq.) (2x100 mL). As fases aquosas foram combinadas e o pH foi ajustado a pH 5. O produto foi extraído com 2- metil-THF (2x100 mL) . A fase orgânica foi seca com Na2SC>4, filtradas e concentradas para dar o composto de título (16,47 g, 87% de rendimento) : ΧΗ RMN (500 MHz, CD3OD) δ ppm 2,11 (s, 3 H) 8,21 (br. s., 1 H) 8,53 (m, 2 H); MS (APCI+) m/z 162,2 [M+H]+.
Intermediário 16 2-Bromo-4-(prop-l-inil)piridina
A uma solução de 2-bromo-4-iodopiridina (2 g, 7,04 mmol), iodeto de cobre(I) (0,080 mL, 2,11 mmol) e tetraquis(trifenilfosfino)paládio(0) (0,407 g, 0,35 mmol) em tolueno (85 mL) adicionou-se 1-(trimetilsilil)-1-propina (1,054 mL, 7,04 mmol), trietilamina (3,24 mL, 23,25 mmol) e fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em THF, 7,04 mL, 7,04 mmol) e a mistura resultante foi agitada sob uma atmosfera de árgon à t.a. durante a noite. A mistura foi concentrada e o resíduo resultante foi repartido entre água (10 mL) e DCM (10 mL) e vertido num separador de fase. A fase orgânica foi recolhida, e a fase aquosa foi extraída uma vez com DCM (10 mL) . Os orgânicos combinados foram concentrados e purificados por cromatografia de flash usando 0% a 30% de EtOAc em heptano para dar o composto de título (1,195 g, 87% de rendimento): ΧΗ RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 2,11 (s, 3 H) , 7,42 (dd, 1 H), 7,65 (s, 1 H), 8,35 (dd, 1 H); MS (ES+) m/z 196 [M+H]+; MS (APCI+) m/z 196 [M+H]+.
Intermediário 17 4-(Prop-l-inil)-2-(trimetilstanil)piridina
O 2-Bromo-4-(prop-l-inil)piridina (Intermediário 16, 1,077 g, 5,49 mmol) foi dissolvido em tolueno (30 mL) e foram adicionados 1,1,1,2,2,2-hexametildistanano (2,278 mL, 10,99 mmol) e tetraquis(trifenilfosfino)paládio(0) (0,635 g, 0,55 mmol) . A reação foi agitada a 80 °C durante a noite sob atmosfera de árgon. A mistura foi arrefecida à t.a. e filtrada através de uma almofada de terra de diatomáceas e concentrada in vacuo. Adicionou-se tolueno (20 mL) e a mistura foi concentrada in vacuo para produzir o composto de título que foi usado como tal no passo seguinte: MS (APCI+) m/z 282 [M+H] + .
Intermediário 18 5-(but-2-iniloxi)picolinato de metilo
A uma solução de but-2-in-l-ol (0,635 mL, 8,49 mmol) em THF (30 mL) adicionou-se 5-hidroxipicolinato de metilo (1,3 g, 8,49 mmol), trifenilfosfino (3,34 g, 12,73 mmol) e azodicarboxilato de diisopropilo (2,507 mL, 12,73 mmol) a 0 °C. A mistura de reação foi depois deixada atingir a t.a. e agitada durante 2 dias. A mistura de reação foi concentrada e o produto foi purificado por cromatografia de flash usando um gradiente heptano/EtOAc para dar 1,42 g (82% de rendimento) do composto de título. ΤΗ RMN (400 MHz, CDCI3) δ ppm 1,87 (t, 3 H) , 4,00 (s, 3 H) , 4,79 (q, 2 H) , 7,41 (dd, 1 H), 8,11 - 8,20 (m, 1 H), 8,49 (d, 1 H) .
Intermediário 19 Ácido 5-(but-2-iniloxi)picolinico
A uma solução de 5-(but-2-iniloxi)picolinato de metilo (Intermediário 18, 1,42 g, 6,92 mmol) em THF (15 mL) adicionou-se hidróxido de litio (0,871 g, 20,76 mmol) dissolvido em água (5 mL) à mistura de reação à t.a. Após 3 dias de agitação a mistura de reação foi repartida entre água e EtOAc. A água foi tornada acidica com solução aq. de HC1 (2M) e extraída com EtOAc. A fase orgânica foi seca através de MgS04 e concentrada para dar 0,60 g (45% de rendimento) do composto de título: 1H RMN (500 MHz, CD3OD) δ ppm 1,84 (t, 3 H) , 4,87 (q, 2 H) , 7,57 (dd, 1 H) , 8,14 (d, 1 H), 8,34 (d, 1 H); MS (ES+) m/z 192 [M+H]+.
Intermediário 26 6-Bromo-5',6'-dihidro-4'H-spiro[cromeno-2,3'-piran]-4(3H) -ona
Uma solução de 1-(5-bromo-2-hidroxifenil)etona (8,2 g, 38,13 mmol), dihidro-piran-3-ona (4,96 g, 49,57 mmol) e pirrolidina (4,12 mL, 49,57 mmol) em tolueno (80 mL) foi agitada a 50 °C durante 1 h. A temperatura foi aumentada a refluxo, e a reação foi refluxada durante 22 h. Adicionou-se mais dihidro-piran-3-ona (0,5 g 5 mmol) e a mistura foi refluxada durante mais 24 h. A mistura foi deixada atingir a t.a., e depois foi adicionada água (50 mL) seguida por EtOAc (100 mL). A camada orgânica foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia de flash usando um gradiente de heptano a 40% de EtOAc em heptano para dar o composto de título (9 g, 79% de rendimento) : ΤΗ RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 1,57 (m, 1 H), 1,72 (ddd, 1 H), 1,96 (m, 1 H), 2,12 (m, 1 H), 2,71 (m, 2 H), 3,51 (d, 1 H), 3,58 (m, 1 H), 3,86 (m, 2 H), 6,96 (d, 1 H), 7,57 (dd, 5 H), 7,97 (d, 4 H) ; MS (ES+) m/z 2 9 7 [M+H] + .
Intermediário 27 6-Bromo-2-tetrahidropiran-3-il-croman-4-ona
Uma solução de 1-(5-bromo-2-hidroxifenil)etona (18 g, 83,70 mmol), tetrahidro-2H-piran-3-carbaldeído (9,55 g, 83,70 mmol) e pirrolidina (6,95 mL, 83,70 mmol) em MeOH (125 mL) foi aquecido até refluxo durante 4,5 h. A mistura foi deixada atingir a t.a. e concentrada. 0 resíduo foi dissolvido em EtOAc (150 mL) e lavada sucessivamente com NaOH 1M (80 mL), HC1 1M (80 mL) , e solução salina de cloreto de sódio (80 mL). A fase orgânica foi concentrada, o resíduo foi purificado por cromatografia de flash com um gradiente de EtOAc a 10% em heptano até EtOAc a 40% em heptano para dar o composto de título (18 g, 69% de rendimento): ΧΗ RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,50 (m, 3 H), 1,79 (m, 0,5 H), 1,94 (m, 1,5 H), 2,67 (m, 1 H) , 2,86 (m, 1 H) , 3,30 (m, 2 H) , 3,78 (m, 1 H), 3,84 (m, 0,5 H) , 4,04 (dd, 0,5 H) , 4,44 (m, 1 H) , 7,05 (dd, 1 Η), 7,71 (m, 1 Η), 7,79 (d, 1 Η); MS (ES+) m/z 311 [M+H]+ .
Intermediário 28 6-Bromo-2-(2,2-dimetiltetrahidropiran-4-il)croman-4-ona
Uma solução de 1-(5-bromo-2-hidroxifenil)etona (13,5 g, 62, 78 mmol), 2,2-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-carbaldeido (9,40 g, 62,78 mmol) e pirrolidina (5,22 mL, 62,78 mmol) em MeOH (125 mL) foi aquecida a refluxo durante 3 h. A mistura foi deixada atingir a t.a. e depois concentrada. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (100 mL) e lavado sucessivamente com NaOH 1M (60 mL), HC1 1M (60 mL), e solução salina de cloreto de sódio (60 mL). A fase orgânica foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia de flash com um gradiente de EtOAc a 10% em heptano até 40% em EtOAc em heptano para dar o composto de título (16,22 g, 76% de rendimento) : ΤΗ RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,15 (m, 6 H), 1,26 (m, 2 H) , 1,52 (m, 1 H) , 1,76 (m, 1 H) , 2,12 (ddd, 1 H) , 2,65 (m, 1 H) , 2,83 (m, 1 H), 3,57 (m, 1 H), 3,66 (m, 1 H), 4,32 (ddd, 1 H), 7,05 (dd, 1 H), 7,70 (dd, 1 H), 7,78 (d, 1 H); MS (ES-) m/z 337 [M-H]-.
Intermediário 29 2-Oxobutanotioamida
0 sulfeto de hidrogénio foi borbulhado através de uma solução de cianeto de propionilo (25 g, 300,88 mmol) em 2-metil-tetrahidrofurano (200 mL) a -10 °C durante 10 min. A adição de sulfeto de hidrogénio foi parada e foi adicionada trietilamina gota a gota (0,419 mL, 3,01 mmol, como uma solução em 2-metil-tetrahidrofurano (4 mL)) durante 10 min. A adição de sulfeto de hidrogénio foi continuada durante 1,5 h a -10 °C antes a adição foi parada e o frasco foi lavado com azoto durante 2,5 h, durante cujo tempo a mistura de reação foi deixada atingir a t.a. A mistura foi concentrada e o resíduo resultante foi retomado em EtOAc:heptano 1:1 e passada através de uma pequena camada de sílica para dar 30,2 g (86% de rendimento) do composto de título. XH RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 0,99 (t, 3 H) , 2,93 (q, 2 H), 9,79 (br. s., 1 H), 10,20 (br. s., 1 H); MS (ES+) m/z 118 [M+H]+.
Intermediário 30 5'-Metilspiro[croman-4,2'-imidazole]-4',6-diamina
Uma mistura de 6-bromo-5'-metilspiro[croman-4,2'-imidazol]-4'-amina (Intermediário 4, 115 mg, 0,39 mmol), trans-A- hidroxi-L-prolina (51 mg, 0,39 mmol), Cul (37 mg, 0,20 mmol), e K2CO3 (162 mg, 1,17 mmol) em DMSO (0,9 mL) foi agitada à t.a. durante 15 min. Amónia, (30-33% em H2O, 0,37 mL, 5,86 mmol) foi adicionada e a mistura foi submetida a irradiação de micro-ondas a 110 °C durante 3 h. A mistura foi diluída com DMSO e água e filtrada através de uma almofada de terra de diatomáceas. Adicionou-se NaCl (s) e a mistura aquosa foi extraída com EtOAc (5x35 mL). As fases orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) e evaporadas para dar um produto bruto que foi purificado por cromatograf ia de flash (4 g de sílica, eluente: gradiente de CHCI3/(MeOH/NH3) ) formando o composto de título (59 mg, 65% de rendimento) . ΧΗ RMN (400 MHz, DMSO-cfc) δ ppm 1, 76 - 1,92 (m, 2 H) , 2,19 (s, 3 H) , 4,18 - 4,34 (m, 2 H), 4,45 (br. s., 2 H), 5,69 (d, 1 H), 6,35 (dd, 1 H), 6,45 (br. s., 2 H), 6,50 (d, 1 H); MS (ES+) m/z 231 [M+H]+.
Intermediário 31 l-Bromo-3-(prop-l-inil)benzeno
A uma solução de l-bromo-3-iodobenzeno (3,0 g, 10,6 mmol), iodeto de cobre(I) (0,61 g, 3,2 mmol) e tetraquis(trifenilfosfino)paládio(0) (0,61 g, 0.53 mmol) em tolueno (20 mL) adicionou-se 1-(trimetilsilil)-1-propina (1,6 mL, 10,6 mmol), trietilamina (4,9 mL, 35,0 mmol) e uma solução 1M de fluoreto de tetrabutilamónio em tetrahidrofurano (10,6 mL, 10,6 mmol). A mistura resultante foi agitada sob uma atmosfera de azoto à t.a. durante a noite. A mistura foi repartida entre água e Et2<0 e a fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio e concentrada in vacuo. O resíduo foi filtrado através de uma camada de sílica e eluido com heptano (4x25 mL) produzindo o composto de título (1,6 g, 80% de rendimento): XH RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 2,05 (s, 3H) , 7,30 (t, 1H) , 7,39 (d, 1H) , 7,52-7,56 (m, 1H), 7,56-7,58 (m, 1H); MS (Cl) m/z 195 [M+H]+.
Intermediário 32 2-Cloro-4-(prop-l-inil)piridina
4-Bromo-2-cloropiridina (1,00 g, 5,20 mmol), 1-(trimetilsilil)-1-propina (0,846 mL, 5,72 mmol), iodeto de cobre(I) (99 mg, 0,52 mmol), e tetraquis(trifenilfosfino)paládio (0) (90 mg, 0,08 mmol) foram tomados em tolueno (14 mL) num frasco micro-ondas. Fluoreto de tetra-n-butilamónio (1M em THF) (6 mL, 6,00 mmol) foi adicionado e o recipiente de reação foi selado e aquecido a 100 °C durante 20 min num reator de micro-ondas. Após arrefecimento, a mistura foi filtrada através de terra de diatomácea, e depois concentrada in vacuo. O produto foi purificado por cromatografia de flash usando um gradiente de EtOAc em heptano (0-50%) para dar o composto de título (530 mg, 67% de rendimento) : ΤΗ RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 2,11 (s, 3 H), 7,38 (dd, 1 H), 7,51 (s, 1 H), 8,37 (d, 1 H).; MS (ES+) m/z 152 [M+H]+.
Intermediário 33 4-Bromo-2-(prop-l-inil)piridina
0 composto de título (0,560 g, 57% de rendimento) foi preparado como descrito para o Intermediário 32 partindo de 4-bromo-2-iodopiridina (1,42 g, 5,00 mmol) : ΤΗ RMN (500 MHz, DMSO-de) δ ppm 2,08 (s, 3 H) , 7,63 (dd, 1 H) , 7,73 (d, 1 H) , 8,39 (d, 1 H); MS (MM-ES+APCI)+ m/z 196 [M+H]+.
Intermediário 34 Ácido 3-(Prop-l-inil)fenilborónico
n-Butil lítio (2,5 M em hexanos, 3,7 mL, 9,4 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de l-bromo-3-(prop-1-inil)benzeno (Intermediário 31, 1,66 g, 8,51 mmol) e borato de triisopropilo (2,2 mL, 9,4 mmol) em tetrahidrofurano (5 mL) e tolueno (15 mL) a -78 °C sob uma atmosfera de árgon. A mistura de reação foi agitada durante 30 min. e depois deixada atingir a t.a. e agitada durante 1 h. A mistura foi arrefecida a -78 °C, e adicionou-se ácido hidroclórico 3M aq. e a mistura foi agitada à t.a. durante 15 min. A mistura foi basifiçada por adição de KOH sólido. Adicionou-se 2-metil-tetrahidrofurano sob agitação e o sólido obtido foi recolhido por filtração produzindo o composto de título 1,0 g (75% de rendimento). ΧΗ RMN (500 MHz, DMSO-de) δ ppm 2,01 (s, 3 H), 6,92 - 7, 03 (m, 1 H) , 7, 09 - 7,20 (m, 1 H) , 7,55 - 7, 79 (m, 2 H) .
Intermediário 35 3-Cloro-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)benzonitrilo
Uma suspensão de 4, 4, 4', 4',5, 5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (665 mg, 2,62 mmol), 3-cloro-5- iodobenzonitrilo (345 mg, 1,31 mmol), e acetato de potássio (386 mg, 3,93 mmol) em dioxano (5 mL) foi desgaseifiçado com uma corrente de árgon durante um par de min. Adicionou-se PdCl2(dppf) CH2CI2 (53,5 mg, 0,07 mmol) e a mistura foi aquecida a refluxo sob N2 durante 4 h. A mistura foi deixada arrefecer e depois foi filtrada. O bolo do filtro foi lavado com EtOAc. O filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de flash (eluente: gradiente heptano/EtOAc) produzindo o composto de título (69 mg, 2 0% de rendimento) . 2Η RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,3 0 (s, 12 H), 7,88 (dd, 1 H) , 7, 90 - 7, 94 (m, 1 H) , 8,19 (dd, 1 H); MS (Cl) m/z 264 [M+H]+.
Nota: o produto não tem resposta a UV mas é visualizado em TLC por um agente de visualização contendo ácido fosfomolíbdico e Ce(SC>4)2.
Intermediário 36 Ácido 5-(But-2-iniloxi)pyrazina-2-carboxilico
A uma suspensão espessa de ácido 5-cloro-pirazina-2-carboxílico (0,79 g, 5,00 mmol) em DMF (35 mL) adicionaram-se 2-butin-l-ol (3,74 mL, 50,0 mmol) e tert-butóxido de potássio (2,24 g, 20,0 mmol). A mistura resultante foi aquecida a 65 °C durante a noite. A mistura de reação foi neutralizada com HC1 2 M e depois concentrada in vacuo. Uma parte (400 mg) do material bruto foi repartida entre NaOH 0,5 Me uma mistura 1:1 de heptano e EtOAc. A fase aquosa foi ligeiramente acidificada (pH-3-4) através da adição de HC1 1 M. À suspensão obtida adicionou-se NaCl (s) e a mistura foi extraída duas vezes com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) e evaporadas para dar 0,11 g do composto de título. ΧΗ RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,84 (t, 3 H), 5,06 (q, 2 H), 8,42 (d, 1 H), 8,82 (d, 1 H), 13,38 (br. s., 1 H); MS (ES+) m/z 193 [M+H]+.
Intermediário 37 1-(4-Bromo-2-iodobenzil)ciclobutanocarbonitrilo
Diisopropilamida de lítio (3,34 mL, 6,68 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de ciclobutanocarbonitrilo (0,417 g, 5,14 mmol) em THF (20 mL) a -78 °C sob uma atmosfera de árgon. A mistura de reação foi agitada a -78 °C durante 30 min, depois foi adicionada, lentamente gota a gota, uma solução de 4-bromo-l-(bromometil)-2-iodobenzeno (ver Caruso, A.; Tovar, J., D. J. Org. Chem. 2011, 76, 2227-2239., 2,51 g, 6,68 mmol) e THF (8 mL) e a reação foi deixada atingir a t.a. A mistura foi agitada durante outras 3 h e depois extinta com água. A mistura de reação foi repartida entre água e EtOAc, a camada orgânica foi seca sobre MgSCh e concentrada para dar um produto bruto que foi purificado por cromatografia de flash (eluente: heptano/acetato de etilo 12:1) para produzir o composto de titulo (1,71 g, 89% de rendimento): ΤΗ RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 2,08 - 2,34 (m, 4 H) , 2,47 - 2,58 (m, 2 H) , 3,18 - 3,23 (m, 2 H) , 7,29 (s, 1 H), 7,49 (dd, 1 H), 8,03 (d, 1 H); GC MS (EI) m/z 375 M+.
Intermediário 38 6'-Bromospiro[ciclobutano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona
Um frasco seco carregado com 1-(4-bromo-2-iodobenzil)ciclobutanocarbonitrilo (Intermediário 37, 2,60 g, 6,91 mmol), foi dissolvido em THF seco (100 mL) sob uma atmosfera de árgon. A mistura resultante foi arrefecida até -78 °C e depois foi adicionado tert-butil litio (1,7 M em pentano, 8,13 mL, 13,83 mmol), gota a gota. A reação foi agitada durante 1,5 h a -78 °C e depois a reação foi extinta com MeOH (0,5 mL), seguida por ácido hidroclórico aq. (2M, 10 mL). A solução resultante foi concentrada para remover o solvente orgânico e depois repartida entre DCM e água. A fase orgânica foi seca sobre MgSCh e concentrada para dar um produto bruto o qual foi purificado por cromatografia de flash (eluente: heptano/EtOAc 20:1-15:1-10:1) para produzir o composto de titulo (1,1 g, 63% de rendimento): ΧΗ RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 1,97 - 2,13 (m, 3 H), 2,13 - 2,24 (m, 1 H), 2,45 - 2,60 (m, 2 H), 3,24 (s, 2 H), 7,31 (d, 1 H), 7,67 (dd, 1 H), 7,88 (d, 1 H); GC MS (El) m/z 250 M+.
Intermediário 39 6'-(Ciclobutilmetoxi)spiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3'H)-diona
A uma solução de 6-hidroxi-2,3-dihidro-lH-inden-l-ona (3 g, 20,3 mmol) em THF (140 mL) adicionaram-se ciclobutilmetanol (2,10 mL, 22,3 mmol), trifenilfosfino (7,97 g, 30,4 mmol) e azodicarboxilato de diisopropilo (5,98 mL, 30,4 mmol). A mistura foi aquecida a 45 °C e deixada agitar durante o fim de semana. O produto bruto foi purificado por cromatografia de flash usando um gradiente de 0-10% EtOAc em heptano para produzir 2,56 g (58% de rendimento) do composto de titulo: !H RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 1,81 - 2,03 (m, 4 H) , 2,11 -2,20 (m, 2 H), 2,69 - 2,74 (m, 2 H), 2,78 (dt, 1 H), 3,04 -3,12 (m, 2 H), 3,96 (d, 2 H) , 7,17 - 7,22 (m, 2 H) , 7,36 (d, 1 H); MS (ES+) m/z 217 [M+H]+.
Intermediário 40 (lr, 4r)-6'-(Ciclobutilmetoxi)-4-hidroxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona
6'-(Ciclobutilmetoxi)spiro[ciclohexano-1, 2'-indeno]-1',4(3'H)-diona (Intermediário 39, 2,35 g, 7,88 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano (40 mL) e MeOH (3,19 mL, 78,76 mmol). Adicionou-se o complexo borano-trimetilamina (1,26 g, 17,3 mmol) e a mistura foi agitada à t.a. durante a noite. Monohidrato de ácido cítrico (23,2 g, 110 mmol) foi adicionado todo de uma só vez, seguido pela adição gota a gota de água (2,84 mL, 157 mmol) . A mistura foi agitada durante 4 h sendo antes diluído com água e extraído duas vezes com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com NaHCCb e solução salina de cloreto de sódio, e concentrada. O produto bruto foi purificado numa coluna de gel de sílica (gradiente de eluição de EtOAc em n-heptano 0-50%) para dar o composto de título (1,84 g, 78% de rendimento, contendo 29% de (ls, 4s)-6(ciclobutilmetoxi)- 4-hidroxispiro [ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona). O composto foi usado como tal no passo seguinte: ΤΗ RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,10 (m, isómero menor), 1,2-1,4 (m, 4H) , 1,57 (m, 2H) , 1,71 (m, isómero menor), 1, 75-1,95 (m, 6H), 2,07 (m, 2H), 2,71 (m, 1H), 2,92 (m, 2H), 3,44 (m, 1H), 3,84 (m, isómero menor), 3,98 (d, 2H), 4,42 (d, isómero menor), 4,66 (d, 1H), 7,07 (d, 1H), 7,26 (m, 1H), 7,44 (m, 1H); MS (ES+) m/z 301,1 [M+H]+.
Intermediário 41 3-Bromo-5-cloro-2-metilpiridina
Adicionou-se 2,3-Dibromo-5-cloropiridina (1,3 g, 4,70 mmol), ácido metilborónico (0,30 g, 5,01 mmol), cloreto de bis(trifenilfosfino)paládio (II) (0,50 g, 0,70 mmol) e dioxano (10 mL). K2CO3 (2 M solução aq., 7,0 mL, 14,0 mmol) foi adicionado e a reação foi colocada sob atmosfera de N2 (g). A reação foi aquecida a refluxo durante 5 h. A reação foi agitada a 50 °C durante a noite e depois aquecida a refluxo durante mais 1 h. Adicionou-se ácido metilborónico (0,14 g, 2,35 mmol) e a reação foi refluxada durante 4 h e deixada arrefecer até à t.a. A mistura foi filtrada através de uma camada de sílica. Adicionou-se EtOAc e água e as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada mais duas vezes com água. A fase orgânica foi seca com MgSCg, filtrada e concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia de flash (12 g SÍO2, 0-20% MeOH contendo 0,1 M NH3 em DCM) . As frações contendo o produto puro foram reunidas e concentradas, rendendo o composto de título (123 mg, 13% de rendimento) : 1H RMN (DMSO-cfe) δ ppm 2,56 (s, 3 H) , 8,29 (d, 1 H), 8,52 (d, 1 H); MS (Cl) m/z 206 [M+H]+.
Intermediário 42 2-(5-bromo-3-cloropiridin-2-il)malonato de dietilo
Maloato de dietilo (0,87 mL, 5,7 mmol) foi adicionado gota a gota a uma suspensão de NaH (55% em óleo mineral, 0,27 g, 6,2 mmol) em DMF (6 mL) a 0 °C. O banho de gelo foi removido e a mistura foi agitada sob N2 à t.a. durante 20 min. Adicionou-se 5-bromo-2,3-dicloropiridina (1,0 g, 4,4 mmol), e a mistura foi agitada a 120 °C durante a noite. A mistura foi deixada arrefecer e foi em seguida repartida entre água contendo NaCl e EtOAc. A fase orgânica foi seca (MgSCg) e evaporada para dar um produto bruto o qual foi purificado por cromatografia de flash (25 g S1O2, gradiente heptano/EtOAc) produzindo o composto de titulo (0,8 g, 2 mmol, 52% de rendimento) contendo um resíduo de éster malónico não reagido. MS (ES + ) m/ z 350 [M+H] + . Uma parte deste material foi usada como tal no passo subsequente.
Intermediário 43 5-Bromo-3-cloro-2-metilpiridina
Uma solução de 2-(5-bromo-3-cloropiridin-2-il)malonato de dietilo impuro (Intermediário 42, 0,41 g, 1,2 mmol) e HC1 conc. aq. (3 mL) foi aquecida a refluxo durante 3 h. Os voláteis foram removidos in vacuo, e o resíduo foi co-evaporados com acetonitrilo. O sólido residual (ácido mono-descarboxilatado) foi dissolvido em dioxano (4,5 mL) e aquecido a refluxo durante a noite. Os voláteis foram removidos in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de flash (4 g S1O2, gradiente heptano/EtOAc) produzindo o composto de título (0,12 g, 51% de rendimento): !H RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 2,60 (s, 3 H) , 7,82 (d, 1 H), 8,46 (d, 1 H); MS (Cl) m/z 206 [M+H]+.
Intermediário 44 3-Cloro-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridina
A suspensão de 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (0,836 g, 3,29 mmol), 5-bromo-3-cloro-2-metilpiridina (Intermediário 43, 0,34 g, 1,65 mmol), e acetato de potássio (0,485 g, 4,94 mmol) em dioxano (5 mL) foi desgaseificado com um fluxo de N2 (g) durante urn par de min. Adicionou-se PdCl2(dppf) CH2CI2 (0,067 g, 0,08 mmol) e a mistura foi aquecida a refluxo sob N2 (g) durante 1,5 h. A mistura foi deixada arrefecer até à t.a. e foi depois filtrada. O bolo do filtro foi lavado com EtOAc. O filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de flash (40 g de SÍO2, gradiente de eluição com 0-80% EtOAc em heptano para produzir o composto de título (0,44 g, rendimento quantitativo): 1H RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 1,35 (s, 12 H) , 2,65 (s, 3 H) , 7, 95 - 8,03 (m, 1 H) , 8,69 (d, 1 H); MS (ES+) m/z 172 [M+H]+ (massa correspondendo ao ácido borónico) .
Intermediário 45 3-Bromo-4-metil-5-(prop-l-inil)piridina
3,5-Dibromo-4-metilpiridina (0,50 g, 2,0 mmol), 1- (trimetilsilil)—1—propina (0,35 mL, 2,4 mmol), iodeto de cobre(I) (0,11 g, 0,60 mmol), tetraquis(trifenilfosfino)paládio (0) (0,023 g, 0,02 mmol) foram misturados em tolueno (2 mL) . A mistura foi desgaseificada com uma corrente de árgon durante urn par de min. Adicionou-se fluoreto de tetra-n-butilamónio (1 M em THF) (2,4 mL, 2,4 mmol), e a reação foi aquecida sob N2 a 70 °C durante a noite. A mistura foi repartida entre água contendo NaHCCb sat aq. e EtOAc. A fase orgânica foi seca (MgSCg) e evaporada para dar a produto bruto que foi purificado por cromatografia de flash (40 g SÍO2, gradiente heptano/EtOAc) produzindo o composto de titulo (0,067 g, 16% de rendimento) : XH RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 2,15 (s, 3 H) , 2,46 (s, 3 H), 8,48 (s, 1 H) , 8,61 (s, 1 H) ; MS (ES+) m/z 210 [M+H] +.
Intermediário 46 (lr, 4r) -6'-(Ciclobutilmetoxi)-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona
(lr,4r)-6'-(Ciclobutilmetoxi)-4-hidroxispiro [ciclohexano-1,2'-inden]-1' (3Ή)-ona (Intermediário 40, contendo 29% de um isómero, 1,84 g, 6,13 mmol) foi dissolvido em 2-Me THF (17 mL) sob uma atmosfera inerte e a solução foi arrefecida a 0 °C. O iodeto de metilo (0, 498 mL, 7,96 mmol) foi adicionado seguido pela adição gota a gota de tert-butóxido de potássio (0,962 g, 8,58 mmol). A mistura resultante foi agitada a 35 °C durante 1 h. Adicionou-se tert-butóxido de potássio (0,962 g, 8,58 mmol) e agitou-se continuadamente.
Após mais 30 min, adicionou-se uma nova porção de tert-butóxido de potássio (0,103 g, 0,92 mmol) e agitou-se continuadamente. Após um total de 4 h, foi obtida a conversão. Adicionou-se água (6 mL) e solução salina de cloreto de sódio (3 mL). As fases foram separadas e a camada orgânica foi seca e concentrada. O produto bruto foi purificado numa coluna de gel de sílica (gradiente de eluição de 0-50% de EtOAc em n-heptano) para dar o composto de título (1,480 g, 77%). O produto contido 29% de (ls,4s)-6'-(ciclobutilmetoxi)-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-l'(3'H)-ona e foi usado como tal no passo seguinte: ΤΗ RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,11 (m, isómero menor), 1,26 (m, 2H), 1,40 (d, 1H), 1,57 (m, 2H), 1,75-1,95 (m, 5H) , 2,0-2,1 (m, 3H), 2,71 (m, 1H), 2,95 (s, 3H), 2,95 (s, isómero menor), 3,19 (m, 1H) , 3,24 (s, isómero menor), 3,26 (s, 3H) , 3,45 (m, isómero menor), 3,99 (d, 2H) , 7,07 (d, 1H) , 7,26 (m, 1H), 7,45 (m, 1H); MS (ES+) m/z 315,1 [M+H]+.
Intermediário 47 6-(3,3,3-trifluoropropoxi)-2,3-dihidro-lH-inden-l-ona
A uma solução de 6-hidroxi-2,3-dihidro-lH-inden-l-ona (3,0 g, 20,3 mmol) em THF (140 mL) foram adicionados trifenilfosfino (7,97 g, 30,4 mmol) e 3,3,3-trifluoropropan-l-ol (1,963 mL, 22,27 mmol). Adicionou-se gota a gota azodicarboxilato de diisopropilo (5,98 mL, 30,4 mmol) e a mistura foi deixada agitar à t.a. durante a noite. Uma vez que havia material de partida, foi adicionado 3,3,3-trifluoro-l-propanol (0,892 mL, 10,1 mmol) gota a gota e a agitação foi continuada. Após 30 min a mistura foi aquecida a 40 °C e 1 h depois a mistura foi concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia de flash (0-12% EtOAc em heptano como eluente) para produzir 1,08 g (22% de rendimento) do composto de titulo (contendo algum azodicarboxilato de diisopropilo) : ΤΗ RMN (500 MHz, CDCI3) δ 2,65 (qt, 2 H), 2,71 - 2,77 (m, 2 H), 3,05 - 3,13 (m, 2 H), 4,23 (t, 2 H), 7,17 - 7,23 (m, 2 H), 7,40 (d, 1 H); MS (ES+) m/z 245 [M+H]+.
Intermediário 48 3-Bromo-5-(but-l-inil)-piridina
But-l-ina (g) foi cuidadosamente borbulhado durante 5 min através de acetonitrilo anidro arrefecido num banho de água gelada. A solução resultante continha cerca de 170 mg de but-l-ina por mL. A solução de but-l-ina (4,57 mL, 14,36 mmol) e diisopropilamina (3,72 mL, 26,11 mmol) foram adicionados sequencialmente a uma mistura de 3,5-dibromopiridina (3,09 g, 13,06 mmol), cloreto de bis(trifenilfosfino)-paládio (II) (0,458 g, 0,65 mmol) e Cul (0,249 g, 1,31 mmol) em acetonitrilo (15 mL) sob uma atmosfera de árgon. A mistura resultante foi agitada à t.a. durante a noite, diluída com EtOAc e passada através de uma pequena camada de sílica. Os solventes foram evaporados e o resíduo foi purificado por cromatografia de flash sobre sílica (gradiente de eluição 0-20% EtOAc em heptano) para dar 2,40 g do composto de título (87% de rendimento): ΧΗ RMN (500 MHz, DMSO-de) δ ppm 1,17 (t, 4 H) , 2,47 (q, 3 H) , 8,11 (t, 1 Η), 8,57 (d, 1 Η), 8,65 (d, 1 Η) ; MS (ES +) m/z 210 [M+H]+.
Intermediário 49 Ácido 5-(But-l-inil)piridin-3-ilborónico
n-BuLi (2,5 M em hexanos, 5,46 mL, 13,7 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de 3-bromo-5-(but-l-inil)piridina (Intermediário 48, 2,39 g, 11,4 mmol) e borato de triisopropilo (3,15 mL, 13,65 mmol) em 2-Me THF (20 mL) a -50 °C. A mistura foi agitada durante 1,5 h enquanto a temperatura foi mantida entre -50 e -40 °C. A mistura foi recuperada por filtração a partir do banho de arrefecimento e adicionou-se HC1 2 M aq. (12 mL, 24 mmol) seguido de agitação durante 20 min. A mistura foi diluída com EtOAc. NaOH aq. (2 M) foi adicionada até ser obtido um pH de cerca de 12 na fase aquosa. As fases foram separadas. A fase orgânica foi extraída com NaOH aq. diluído e com água. As fases aquosas combinadas foram lavadas com EtOAc, acidificado a pH de cerca de 5 pela adição de HC1 conc. e extraídas com DCM. A fase orgânica foi seca sobre Na2S04 e concentrada para dar 1,522 g (76% de rendimento) do composto de título: Ή RMN (500 MHz, CDC13) δ ppm 1,11 - 1,37 (m, 3 H) , 2,26 - 2,58 (m, 2 H) , 7, 46 - 10,34 (m, 3 H) ; MS (ES +) m/z 176 [M+H] + .
Intermediário 50 3-Bromo-5-metilbenzonitrilo
Uma mistura de 1,3-dibromo-5-metilbenzeno (1,0 g, 4,0 mmol), cianeto de cobre (0,179 g, 2,00 mmol), piridina (0,323 mL, 4,00 mmol), e DMF (15 mL) foram aquecidos a 190 °C durante 10 h em reator de micro-ondas. A mistura de reação foi deixada arrefecer à t.a., e depois despejada numa solução de H2O (20 mL) e solução aq. de NH3 (25-35% NH3, 10 mL) e a fase aquosa foi extraída com EtOAc. Os extratos orgânicos combinados foram secos (Mg2S04> , filtrados e concentrados in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de gel de sílica (gradiente de eluição hexano/EtOAc) para produzir o composto de titulo (0,58 g, 74% de rendimento): ^ RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 2,39 (s, 3 H) 7,41 (s, 1 H) 7,58 (s, 1 H) 7,60 (s, 1 H); MS (EI) m/z 195 M+.
Intermediário 51 1-(4-Bromo-2-iodobenzil)ciclopropanocarbonitrilo
O composto de título (2,1 g, 55% de rendimento) foi preparado como descrito por 1-(4-Bromo-2- iodobenzil)ciclobutanocarbonitrilo (Intermediário 37) a partir de ciclopropanocarbonitrilo (1,96 mL, 26,6 mmol) e 4-bromo-1-(bromometil)-2-iodobenzeno (ver Caruso, A.; Tovar, J., D. J. Org. Chem. 2011, 76, 2227-2239) (4,0 g, 10,6 mmol): !H RMN (400 MHz, CDCI3) δ ppm 1, 02 - 1, 07 (m, 2 H), 1,33 - 1,37 (m, 2 Η), 2,98 (s, 2 Η), 7,35 (d, 1 Η), 7,51 (dd, 1 Η), 8,02 (d, 1 Η); MS (Cl) m/z 362 [M+H]+.
Intermediário 52 6'-Bromospiro[ciclopropano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona
Um balão seco foi carregado com 1-(4-bromo-2-iodobenzil)ciclopropanocarbonitrilo (Intermediário 51, 3,29 g, 9,09 mmol) a adicionou-se THF seco (30 mL) sob atmosfera de árgon. A mistura resultante foi arrefecida até -78 °C e n-BuLi (2,5 M em hexanos, 7,27 mL, 18,2 mmol) foi adicionado gota a gota. A solução foi deixada atingir a t.a. A reação foi extinta com MeOH (2 mL) e HC1 (1M, 5 mL). A mistura foi extraída com EtOAc. A fase aquosa foi basificada com NaHCCb sat e extraída duas vezes com EtOAc. As fases orgânicas foram combinadas, secas sobre MgS04, filtradas e concentradas in vacuo. HC1 (1 M, 4 mL) e DCM (5 mL) foram adicionados e a fase orgânica foi recolhida. Isto foi repetido duas vezes. A fase aquosa foi basificada com NaHC03 sat e extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas através de um separador de fases e evaporadas até à secura para dar o composto de título (1,1 g, 51% de rendimento): MS (Cl) m/z 237 [M+H] +.
Intermediário 53 l-Bromo-3-fluoro-5-(metoximetil)benzeno
NaH (dispersão a 60% em óleo mineral, 245 mg, 6,12 mmol) foi adicionada a uma solução de (3-bromo-5-fluorofenil)metanol (1,195 g, 5,83 mmol) em 2-Me THF (20 mL). Após cessação da evolução do gás, Mel (0,455 mL, 7,29 mmol) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada à t.a. durante 16 h. Outra porção de NaH (50 mg, 2,1 mmol) e Mel (0,10 mL, 1,6 mmol) foram adicionados e a mistura foi aquecida a 60 °C durante 2 h. A mistura arrefecida foi diluída com EtOAc, lavada com água, seca sobre MgS04 e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de flash em sílica (gradiente de 0-15% EtOAc em heptano) para dar 0,810 g (63% de rendimento) do composto de título: 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 3,30 (s, 3 H) , 4,38 - 4, 46 (m, 2 H) , 7,18 (m, 1 H) , 7,37 (s, 1 H), 7, 44 - 7,50 (m, 1 H) ; MS (EI) m/z 218 M+.
Intermediário 54 3-Bromo-5-((2,2,2-trifluoroethoxi)metil)piridina
2,2,2-Trifluoroetanol (0,434 g, 4,34 mmol) foi adicionado a uma suspensão de NaH (0,198 g, 4,96 mmol) em THF (10 mL). Quando cessou a evolução do gás, adicionou-se uma solução de (5-bromopiridin-3-il)metanosulfonato de metilo (ver WO2007/076247; 1,10 g, 4,13 mmol) em DMF. A mistura resultante foi agitada durante 2 h à t.a. e em seguida, o solvente volátil foi evaporado. A solução restante foi diluída com água e extraída com EtOAc (3x30 mL). Os extratos combinados foram secos sobre MgS04 e concentrados. O resíduo foi purificado por cromatografia de flash em sílica usando gradiente de eluição com EtOAc em heptano para dar 227 mg do composto de título (20% de rendimento) . ΤΗ RMN (500 MHz, CDC13) δ ppm 3,92 (q, 2 H) , 4,70 (s, 2 H) , 7,87 (m, 1 H) , 8,50 (m, 1 H), 8,66 (d, 1 H); MS (EI) m/z 269 M+.
Intermediário 55 3-(4,4,5,5-Tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)-5-(trifluorometil)benzonitrilo
3-bromo-5-(trifluorometil)benzonitrilo (1,25 mL, 5,00 mmol), 4,4,4^4^5,5,5^51 -octametil-2,2 ' -bi (1,3,2-dioxaborolano) (2,54 g, 10,0 mmol), cloreto de [1,1* — bis(difenilfosfino)ferroceno]-paládio (II) (288 mg, 0,35 mmol), e acetato de potássio (1,47 g, 15,0 mmol) foram misturados em dioxano (15 mL) num balão de fundo redondo. A atmosfera foi trocada por árgon, e a mistura foi aquecida a 110 °C durante 1 h. A mistura de reação foi arrefecida até à t.a., filtrada através de terra de diatomácea, e o bolo do filtro foi lavado com EtOAc. A solução do filtrado foi lavada com solução salina de cloreto de sódio, seca sobre MgS04, e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de flash usando heptano/EtOAc (70/30) como eluente para dar o composto do título (495 mg, 33% de rendimento): 1H RMN (400 MHz, CDC13) δ ppm 1,37 (s, 12 H) , 7,98 (m, 1 H), 8,26 (s, 2 H); MS (ES+) m/z 297 [M+H]+.
Intermediário 56 3-(Difluorometil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan- 2-il)benzonitrilo
Misturaram-se 4,4,4',4',5,5,5',5'-Octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (643 mg, 2,53 mmol), di-p-metoxobis(1,5- ciclooctadieno)diiridio(I) (50,4 mg, 0,08 mmol), e 4,4'-di- tert-butil-2,2'-dipiridilo (82 mg, 0,30 mmol). A atmosfera foi trocada por árgon. Foi adicionado hexano (5 mL) , enquanto a atmosfera de árgon foi mantida. A mistura foi agitada durante 5 min à t.a. Foi adicionada uma solução de 3-(difluorometil)benzonitrilo (776 mg, 5,07 mmol) em hexano (5 mL), e a mistura foi agitada à t.a. durante 16 h. A mistura de reação foi diluída com EtOAc, e lavada com solução salina de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre MgSCh, filtrada, concentrada in vacuo, e purificada por cromatografia de flash usando heptano/EtOAc (85/15) como eluente para dar 192 mg (13% de rendimento) do composto de titulo: !H RMN (400 MHz, CDC13) δ ppm 1,37 (s, 12 H), 6,68 (s, 1 H) 7,86 - 7,91 (m, 1 H) 8,14 (s, 1 H) 8,18 - 8,22 (m, 1 H); MS (ES+) m/z 279 [M+H]+.
Intermediário 57 3-Cloro-2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan- 2- il)benzonitrilo
A suspensão de 5-bromo-3-cloro-2-fluorobenzonitrilo (0,959 g, 4,09 mmol), 4, 4, 4' , 4' , 5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (2,08 g, 8,18 mmol), cloreto de [ 1,1 * — bis(difenilfosfino)-ferroceno]paládio (II) (0,234 g, 0,29 mmol), e acetato de potássio (1,20 g, 12,3 mmol) em dioxano (15 mL) , foi colocado num frasco de micro-ondas. A mistura foi desgaseifiçada com uma corrente de árgon durante um par de min, e a mistura de reação foi então aquecida a 110 °C durante 1 h num reator de micro-ondas. A mistura de reação foi arrefecida até à t.a., filtrada através de terra de diatomácea, e extraída com EtOAc. A fase orgânica foi lavada com solução salina de cloreto de sódio, seca sobre MgSCg e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de flash usando heptano/EtOAc (70/30) como eluente para dar o composto de título (1,22 g, rendimento quantitativo) : GC MS (EI) m/z 282 M+.
Intermediário 58 3- Bromo-5-etilbenzonitrilo
Uma mistura de 1,3-dibromo-5-etilbenzeno (2,7 g, 10,2 mmol), cianeto de cobre (0,916 g, 10,2 mmol), piridina (1,65 mL, 20,5 mmol) em DMF (15 mL) foi aquecida a 150 °C durante 3 h. Após arrefecimento até à t.a., a mistura foi vertida numa solução de H2O (30 mL) e amónia (solução aq. a 25%, 20 mL) e extraída com EtOAc. A camada orgânica combinada foi seca (MgSCU) , filtrada e concentrada in vacuo. 0 produto foi purificado usando cromatografia de flash em gel de sílica, gradiente de eluição de 0-60% de EtOAc em n-heptano. GCMS (Cl) m/z 210 [M+l] + .
Intermediário 59 3-Bromo-5-(metoximetil)benzonitrilo
MeOH (0,088 mL, 2,18 mmol) foi adicionada a uma suspensão espessa de NaH (45 mg, 1,13 mmol) em DMF (2 mL) . Quando cessou a evolução do gás, foi adicionada uma solução de 3-bromo-5-(bromometil)benzonitrilo (ver W02009/100169; 240 mg, 0,87 mmol) em DMF (1 mL). A reação foi extinta com a adição de solução aq. sat de NH4CI. A mistura foi repartida entre tolueno (5 mL) e água (3 mL) . A camada de tolueno foi recolhida, lavada com água, seca sobre Na2SC>4, e concentrada in vacuo. O produto bruto foi seco a pressão reduzida e usada no passo seguinte: GCMS (Cl) m/z 226 [M+H]+.
Intermediário 60 6'-Bromo-4-hidroxi-4-metilspiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1' (3Ή) -ona
Foi adicionado cloreto de metilmagnésio (3 M em THF, 3,41 mL, 10,2 mmol), a -15 °C, e sob Ar, a uma solução de 6'-bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3'H)-diona (Intermediário 5 Método A Passo 1, 3 g, 10,2 mmol) em THF (4 mL) . A reação foi deixada atingir a t.a. A mistura foi arrefecida a -15 °C, adicionou-se cloreto de metilmagnésio (3 M em THF, 3,41 mL, 10,2 mmol) e a mistura foi agitada durante 1 h à t.a. A reação foi extinta com solução aq. sat. de NH4CI, e depois extraído com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada in vacuo. Os produtos isoméricos foram separados usando um SFC Berger Multigram II System equipado com uma coluna Chiralpak DA-H (20*250 mm; 5pm) e a fase móvel consistindo de 40% MeOH (com 0,1% DEA) e 60% CO2 a uma taxa de fluxo de 50 mL/min para dar: Isómero 1: (lr,4r)-6'-Bromo-4-hidroxi-4-metilspiro [ciclohexano-1,2'-inden]-r(3'H)-ona, (114 mg, 11% de rendimento) com tempo de retenção de 3,9 min:
!H RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 1,17 (s, 3 H), 1,48 (m, 4 H), 1,60 (m, 4 H), 2,98 (s, 2 H), 4,39 (s, 1 H) , 7,55 (d, 1 H), 7,75 (d, 1 H) , 7,85 (dd, 1 H) ; MS (ES-) m/z 307 [M-H]-, e
Isómero 2: (ls,4s)-6'-Bromo-4-hidroxi-4-metilspiro [ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona, (164 mg, 16% de rendimento) com tempo de retenção de 9,4 min:
!H RMN (500 MHz, CDC13) δ ppm 1,10 (d, 2 H), 1,14 (s, 3 H) , 1,43 (td, 2 H), 1,56 (d, 2 H) , 1,95 (td, 2 H) , 2,97 (s, 2 H) , 4,11 (s, 1 H), 7,53 (d, 1 H), 7,76 (d, 1 H), 7,85 (dd, 1 H); MS (ES-) m/z 307 [M-H]“.
Intermediário 61 (lr, 4r)-6'-Bromo-4-metoxi-4-metilspiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1' (3'Ji)-ona
(lr,4r)-6'-bromo-4-hidroxi-4-metilspiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona (Intermediário 60, Isómero 1, 0,114 g,
0,37 mmol) e iodeto de metilo (0,046 mL, 0,74 mmol) foram dissolvidos em THF (5 mL). Tert-pentóxido de potássio (1,7 M em tolueno, 0,282 mL, 0,48 mmol) foi adicionado gota a gota, e a mistura foi agitada durante 30 min. Adicionou-se tert-pentóxido de potássio (1,7 M em tolueno, 0,217 mL, 0,37 mmol) e a mistura foi agitada durante 15 min. Uma mistura de água (10 mL) e EtOAc (10 mL) foi adicionada e a mistura resultante foi agitada durante 10 min. A fase orgânica foi recolhida, seca sobre Na2SC>4 e concentrada in vacuo para dar o composto de título (119 mg, 87% de rendimento): ΧΗ RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 1,19 (s, 3 H) , 1,48 (br. s., 4 H) , 1,53 (m, 4 H), 1,66 (m, 2 H), 1,83 (m, 2 H), 2,86 (s, 2 H), 3,17 (s, 3 H), 7,23 (d, 1 H), 7,59 (m, 1 H) , 7,77 (m, 1 H) ; MS (ES+) m/z 323 [M+H]+.
Intermediário 62 6-(3-Fluoropropoxi)-2,3-dihidro-lH-inden-l-ona
[0218] A uma solução de 6-hidroxi-2,3-dihidro-lH-inden-l-ona (3,0 g, 20 mmol) em THF (140 mL) foram adicionados 3-fluoropropan-l-ol (1,67 mL, 22,3 mmol), trifenilfosfino (7,97 g, 30,4 mmol) e azodicarboxilato de diisopropilo (5,98 mL, 30,4 mmol). A mistura foi agitada à t.a. durante dois dias. Adicionou-se mais 3-fluoropropanol (0,5 mL) e a mistura foi aquecida a 45 °C. Após 2 h a mistura foi concentrada, e o produto bruto foi purificado por cromatografia de flash usando 0-20% EtOAc em heptano como eluente, produzindo 3,42 g (81% de rendimento) do composto de titulo: 2Η RMN (500 MHz, CDCls) δ 2,12 - 2,26 (m, 2 H) , 2,68 - 2, 76 (m, 2 H) , 3,04 -3,12 (m, 2 H), 4,14 (t, 2 H), 4,61 (t, 1 H), 4,70 (t, 1 H), 7,17 - 7,22 (m, 2 H), 7,38 (d, 1 H); MS (EI) m/z 208 M+.
Intermediário 63 6'-(3-Fluoropropoxi)spiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1', 4(3'H)-diona
Uma mistura de 6-(3-fluoropropoxi)-2,3-dihidro-lH-inden-l-ona (Intermediário 62, 3, 42 g, 16,4 mmol) e acrilato de metilo (3,26 mL, 36,1 mmol) em 2-Me THF (15 mL) foi arrefecida até 0 °C. Adicionou-se tert-butóxido de potássio (2,21 g, 19,71 mmol) em porções. Após agitação durante 1 h à t.a., adicionou-se água (22,5 mL) e KOH (0,921 g, 16,4 mmol) e a mistura foi aquecida a refluxo durante 4,5 h. A mistura foi deixada arrefecer até à t.a. e adicionou-se solução salina de cloreto de sódio. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas foram secas sobre Na2SC>4, filtradas e concentradas in vacuo para produzir 3,14 g (66% de rendimento) do composto de título o qual foi usado no passo seguinte sem purificação adicional: 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 1,82 - 1,91 (m, 2 H), 2,13 - 2,27 (m, 4 H), 2,41 - 2,52 (m, 2 H), 2,70 (dt, 2 H), 3,16 (s, 2 H), 4,11 - 4,17 (m, 2 H) , 4,60 (t, 1 H) , 4,72 (t, 1 H) , 7,21 - 7,27 (m, 2 H) , 7,39 (dd, 1 H) ; MS (ES+) mf z 291 [M+H] + .
Intermediário 64 6'-(3-Fluoropropoxi)-4-hidroxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona
6'-(3-Fluoropropoxi)spiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3'H)-diona (Intermediário 63, 3,14 g, 10,8 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano (50 mL) e MeOH (4,38 mL, 108 mmol). O complexo borano-trimetilamina (1,74 g, 23,8 mmol) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada durante a noite. Ácido cítrico monohidratado (31,8 g, 151 mmol) foi adicionado de uma só vez e foi seguido pela adição gota a gota de água (3,90 mL, 216 mmol) . A mistura foi agitada durante 3 h antes de ser diluída com água e extraída com EtOAc (x 2). As fases orgânicas combinadas foram secas sobre
MgSC>4 e concentradas in vacuo. 0 produto foi purificado usando cromatografia de flash em gel de silica usando um gradiente de MeOH (0-10%) em DCM para dar 1,94 (61% de rendimento) do composto de titulo o qual foi usado no passo seguinte sem purificação adicional: MS (ES+) m/z 307 [M+H]+.
Intermediário 65 6'-(3-Fluoropropoxi)-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona
6'-(3-Fluoropropoxi)-4-hidroxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1 ' (3 Ή)-ona (Intermediário 64, 1,94 g, 6,64 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano (35 mL) sob árgon e arrefecida a 0 °C. Adicionou-se tert-butóxido de potássio (2,23 g, 19,9 mmol) gota a gota e a mistura foi agitada a 0 °C durante 15 min. Adicionou-se iodeto de metilo (0,83 mL, 13,3 mmol). O banho de arrefecimento foi removido, e a mistura foi agitada à t.a. durante a noite. Adicionou-se água (200 mL) e a solução resultante foi repartida entre água adicional (200 mL) e EtOAc (400 mL) . A fase orgânica foi seca sobre MgSC>4 e concentrada in vacuo. O produto foi isolado usando cromatografia de flash usando um gradiente de EtOAc (0-50%) em heptano para dar 0,611 g (30% de rendimento) do composto de titulo: MS (ES+) m/z 307 [M+H]+.
Intermediário 66 6-Isobutoxi-2,3-dihidro-lH-inden-l-ona
A uma mistura de 6-hidroxi-2,3-dihidro-lH-inden-l-ona (5,0 g, 33,8 mmol) em DMF (170 mL) adicionou-se K2CO3 (9,33 g, 67,5 mmol) e l-bromo-2-metilpropano (5,50 mL, 50,6 mmol). A mistura laranja resultante foi agitada à t.a. durante a noite e foi então aquecida a 60 °C durante 2 dias. A mistura foi arrefecida à t.a., adicionou-se água e a mistura foi extraída com EtOAc (x 4) . As camadas orgânicas foram secas sobre MgSC>4 e concentradas in vacuo. A purificação por cromatografia de flash usando 0-20% EtOAc em heptano como eluente produziu 4,98 g (72% de rendimento) do composto de título: ΤΗ RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 1,03 (d, 6 H), 2,10 (dt, 1 H), 2,69 - 2,75 (m, 2 H), 3,04 - 3,11 (m, 2 H) , 3,75 (d, 2 H) , 7,17 - 7,22 (m, 2 H), 7,37 (d, 1 H); MS (ES +) m/z 205 [M+H] + .
Intermediário 67 6'-Isobutoxispiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3 Ή)-diona
O composto de título (3,02 g, 72% de rendimento) foi preparado usando o método descrito para o Intermediário 63 a partir de 6-isobutoxi-2,3-dihidro-lH-inden-l-ona (Intermediário 66, 3,0 g, 14,7 mmol) e acrilato de metilo (2,92 mL, 32,3 mmol): RMN (400 MHz, CDCI3) δ ppm 1,04 (m, 8 H) 1,86 (m, 2 H) 2,11 (dt, 1 H) 2,21 (m, 2 H) 2,47 (m, 3 H) 2,70 (m, 2 H) 3,15 (s, 2 H) 3,76 (m, 3 H) 7,20 (m, 1 H) 7,25 (m, 1 H) 7,38 (d, 1 H); MS (ES +) m/z 287 [M+H] + .
Intermediário 68 lr,4r)-4-Hidroxi-6'-isobutoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona
0 composto de título (1,20 g, 40% de rendimento, contendo 5% de outro isómero) foi preparado usando o método descrito para 6'-(3-Fluoropropoxi)-4-hidroxispiro [ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona (Intermediário 64) a partir de 6'-isobutoxispiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3'H)-diona (Intermediário 67, 3,02 g, 10,6 mmol) e complexo borano- trimetilamina (1,69 g, 23,2 mmol). O produto foi purificado por cromatografia de flash usando EtOAc 0-100% em heptano como eluente: ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ 1,03 (d, J= 6,82 Hz, 7 H), 1,38 - 1,52 (m, 5 H) , 1, 76 - 1, 87 (m, 2 H) , 2,02 -2,16 (m, 4 H), 2,97 (s, 2 H) , 3, 70 - 3, 82 (m, 4 H) , 7,17 (d, J= 2,53 Hz, 1 H), 7,19 - 7,24 (m, 1 H) , 7,34 (dd, J= 8,34, 0,51 Hz, 1 H); MS (ES+) m/z 289 [M+H]+.
Intermediário 69 (lr,4r)-6'-Isobutoxi-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1' (3 Ή) -ona
(lr,4r)-4-Hidroxi-6'-isobutoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3Ή)-ona (Intermediário 68, 1,2 g, 4,16 mmol) foi dissolvido em 2-Me THF (12 mL) sob uma atmosfera inerte, e a solução foi arrefecida a 0 °C. Adicionou-se iodeto de metilo (0,338 mL, 5,41 mmol) seguido pela adição em porções de tert-butóxido de potássio (0,654 g, 5,83 mmol). A mistura resultante foi agitada a 35 °C durante 1 h. Adicionou-se tert-butóxido de potássio (0,233 g, 2,08 mmol) e agitação continua. Após mais 30 min, uma nova porção de tert-butóxido de potássio (0,070 g, 0,62 mmol) foi adicionada e a agitação continuada. Após um total de 4 h, foi obtida a conversão total e adicionou-se água (6 mL) e solução salina de cloreto de sódio (3 mL). As fases foram separadas e a camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada para produzir 1,23 g (98% de rendimento) do composto de titulo: ΤΗ RMN (400 MHz, CDCI3) δ ppm 1,03 (d, 6 H) 1,38 (m, 2 H) 1,50 (dt, 2 H) 1,78 (m, 2 H) 2,09 (m, 1 H) 2,15 (m, 2 H) 2,96 (s, 2 H) 3,27 (m, 1 H) 3,41 (s, 3 H) 3,75 (d, 2 H) 7,17 (d, 1 H) 7,21 (m, 1 H) 7,34 (dd, 1 H). MS (ES+) m/z 303 [M+H]+.
Intermediário 70 3-Bromo-5- [ (2¾)prop-l-in-l-il]piridina
n-BuLi (2,5 M em hexanos, 0,44 mL, 1,10 mmol) foi adicionado gota a gota, sob Ar e a 0 °C, a uma solução de 3-bromo-5-etinilpiridina (ver W02005/094822, 200 mg, 1,10 mmol) em THF (2 mL) . A mistura foi agitada durante 1 h. Iodometano-d3 (0,56 mL, 1,32 mmol) foi adicionado a 0 °C e a reação foi agitada à t.a. durante 1 h. A reação foi extinta com solução de cloreto de amónio (aq sat, 2 mL) e extraída com DCM (15 mL) . A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada in vacuo. O produto foi purificado por cromatografia de flash com gradiente de eluição de 0-30% de EtOAc em n-heptano para produzir o composto de título (77 mg, 35% de rendimento): 1h RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 7,84 (t, 1 H) , 8,53 (d, 1 H) , 8,56 (d, 1 H); MS (ES +) m/z 199 [M+H] + .
Intermediário 71 6"-Bromodispiro[1,3-dioxolano-2,1'-ciclohexano-4', 2"— inden]-1"(3"H)-ona
Etano-1,2-diol (0,968 mL, 17,4 mmol), 6'- bromospiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3'H)-diona (Intermediário 5 Método A Passo 1, 5,09 g, 17,4 mmol) e monohidrato do ácido p-toluenossulfónico (0,165 g, 0,87 mmol) em tolueno (100 mL), foram aquecidos a refluxo durante a noite. A mistura foi arrefecida à t.a. antes de ser transferida para um funil de separação e lavada com NaHCCb (sat aq) . A fase aquosa foi extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina de cloreto de sódio. O sólido formado foi removido por filtração e o filtrado concentrado. O resíduo filtrado foi dissolvido em EtOAc e lavado com água. Foi formado mais sólido o qual foi recolhido por filtração. Este processo foi repetido mais três vezes até não se formar mais sólido. Os sólidos combinados foram secos durante a noite sob vácuo para produzir 3,76 g do composto de título. A fase orgânica restante foi concentrada para produzir 1,9 g do composto de título. A combinação dos sólidos deu o composto de título (5,66 g, 97% de rendimento): ΧΗ RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 1,50 (dt, 2 H) 1,66 - 1,74 (m, 2 H) 1,92 (dt, 2 H) 2,06 (td, 2 H) 3,01 (s, 2 H) 3,97 - 4, 03 (m, 4 H) 7,34 (d, 1 H) 7,70 (dd, 1 H) 7,89 (d, 1 H); MS (ES +) m/z 337 [M+H] + .
Intermediário 72 6' -Bromo-4- [ (¾) metiloxi] spiro [ciclohexano-1,2 ' -inden] -1' (3' H) -ona
6'-Brorno-4-hidroxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona (Intermediário 5 Passo 2, 3 g, 10,2 mmol) (proporção de isómeros 64:36 (lr,4r) e (ls,4s)) foi dissolvida em 2-Me THF (30 mL) sob uma atmosfera inerte e a solução foi arrefecida a 0 °C. Adicionou-se iodometano-d3 (0,633 mL, 10,1 mmol) seguido por adição de porções de tert-butóxido de potássio (1,60 g, 14,2 mmol). A mistura resultante foi agitada à t.a. durante 1 h. Foi adicionado tert-butóxido de potássio (0,456 g, 4,07 mmol) e agitou-se continuamente. Após outros 30 min, foi adicionado tert-butóxido de potássio (0,342 g, 3,05 mmol) e agitou-se continuamente. Após um total de 4 h, adicionou-se água e solução salina de cloreto de sódio. As fases foram separadas e a camada orgânica foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas foram secas sobre MgSCg e concentradas. A purificação por cromatografia de flash usando 0-15% de EtOAc em heptano como eluente produziu 1,66 g (52% de rendimento) do composto de título como uma mistura de isómeros (lr,4r) maioritário e (ls,4s) minoritário. Isómero maioritário: XH RMN (500 MHz, CDCI3) δ 1,20 - 1,28 (m, 1 H) , 1,32 - 1, 43 (m, 1 H), 1,48 - 1, 64 (m, 3 H) , 1,77 (td, 1 H) , 2,00 - 2,11 (m, 1 H), 2,12 - 2,20 (m, 1 H), 2,98 (s, 2 H), 3,23 - 3,32 (m, 1 H), 7,31 - 7,38 (m, 1 H) , 7, 66 - 7, 73 (m, 1 H) , 7,87 - 7,90 (m, 1 H); MS (ES + ) m/z 312 [M+H] + .
Intermediário 73 3-Bromo-5-(difluorometil)piridina
5-Bromonicotinaldeido (5,0 g, 26,9 mmol) foi dissolvido em DCM (25 mL) . A atmosfera foi mudada para árgon, e foi adicionado trifluoreto de dietilaminoenxofre (4,29 mL, 32,3 mmol). A mistura de reação foi agitada a 21 °C durante 2 h. A reação foi extinta com 15 mL de NaHCCb sat. As fases foram separadas, e a camada orgânica foi recolhida, lavada com solução salina de cloreto de sódio, seca sobre MgSCU, filtrada, e concentrada in vacuo. O residuo foi purificado por cromatografia de flash usando heptano/EtOAc 90/10 como eluente para dar o composto de titulo (3,66 g, 65% de rendimento) : 1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 7,15 (t, 1 H) 8,32 (s, 1 H) 8,80 (s, 1 H) 8,91 (s, 1 H); MS (EI) m/z 207 M+.
Intermediário 74 3-(Difluorometil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)piridina
A suspensão de 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (8,95 g, 35,2 mmol), 3-bromo-5- (difluorometil)piridina (Intermediário 73, 3,67 g, 17,6 mmol), acetato de potássio (5,19 g, 52,9 mmol) em dioxano (70 mL) foi desgaseifiçado com uma corrente de árgon durante um par de min. Adicionou-se PdCl2(dppf) CH2CI2 (0,179 g, 0,22 mmol) e a mistura foi aguecida a refluxo sob N2 durante 4 h. A mistura foi deixada arrefecer e foi filtrada. O bolo do filtro foi lavado com EtOAc e o filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado com cromatografia de flash em gel de sílica, gradiente de eluição com EtOAc em n-heptano. O composto de título (2,0 g) que ainda continha algumas impurezas foi usado como tal no passo seguinte: MS (EI) m/z 207 M+.
Intermediário 75 l-Bromo-2-cloro-3-(prop-l-inil)benzeno
A um balão de micro-ondas adicionou-se 1,3-dibromo-2-clorobenzeno (780 mg, 2,89 mmol), trimetil(prop-l-inil) silano (0,645 mL, 4,33 mmol), iodeto de cobre (28 mg, 0,14 mmol), PdCl2(dppf) CH2CI2 (118 mg, 0,14 mmol), fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em THF, 8,66 mL, 8,66 mmol), diisopropilamina (1,23 mL, 8,66 mmol) e DMF anidro (5 mL) . 0 balão foi tapado e purgado com árgon e a mistura foi irradiada a 100 °C durante 1 h num reator de micro-ondas. A mistura foi diluída com água e extraída com DCM três vezes, seca através de um separador de fase e concentrada in vacuo. 0 produto foi purificado por cromatografia de flash (100% heptanos como eluente) para dar 146 mg (22% de rendimento) do composto de título. 2Η RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 2,13 (s, 3 H) 7,24 (t, J=1, 88 Hz, 1 H) 7,53 (dd, J=7, 57, 1,26 Hz, 1 H) 7,74 (dd, J=8,04, 1,42 Hz, 1 H); MS (Cl) m/z 231 [M+H]+.
Intermediário 76 4-(Trifluorometil)ciclohexanocarboxilato
Ácido 4-(trifluorometil)ciclohexano carboxílico (5,00 g, 25,5 mmol) foi dissolvido em tolueno (100 mL), e foi adicionado ácido sulfúrico (0,014 mL, 0,25 mmol). A mistura de reação foi reagida sob condições Dean-Stark durante 16 h. A mistura de reação foi arrefecida até à t.a., e diluída com EtOAc. A solução foi lavada com NaHCCb sat aq. . A camada orgânica foi lavada com solução salina de cloreto de sódio, e concentrada in vacuo fornecendo o composto de título (5,64 g, 99% de rendimento): 1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 0,96 (d, 1 H) 1,19 - 1,30 (m, 2 H) 1,38 - 1,50 (m, 3 H) 1,83 (d, 2 H) 2,18 (s, 3 H) 2,91 - 3,12 (m, 3 H) 3,20 (s, 3 H) 6,55 (br. s., 2 H) 6,89 (d, 1 H) 7,01 - 7,26 (m, 1 H) 7,43 (d, 1 Η) 7,60 (dd, 1 Η) 8,01 (d, 2 Η) 8,22 (s, 1 Η); MS (ES +) m/ζ 449 [M+H]+ e (ES-) m/z 447 [M-H]-.
Intermediário 77 1-(4-bromo-2-iodobenzil)-4-(trifluorometil) ciclohexanocarboxilato de etilo
4-(trifluorometil)ciclohexanocarboxilato de etilo (Intermediário 76, 1,492 g, 6,65 mmol) foi dissolvido em THF (25 mL). A atmosfera foi mudada para árgon, e a solução foi arrefecida a -78 °C. Diisopropilamida de litio (1,8 M em THF/heptano/etilbenzeno) (4,07 mL, 7,32 mmol) foi adicionado, enquanto a temperatura foi mantida a -78 °C. A solução foi agitada durante 30 min a -78 °C. 4-Bromo-l-
(bromometil)-2-iodobenzeno (ver Caruso, A.; Tovar, J., D. J. Org. Chem. 2011, 76, 2227-2239., 2,50 g, 6,65 mmol) em THF (25 mL) foi adicionado através de uma seringa. A mistura foi deixada atingir a t.a., enquanto agitada durante 2 h. Água (10 mL) foi adicionada e a mistura de reação, seguida pelo EtOAc (40 mL). As fases foram separadas. A camada orgânica foi seca sobre MgSCb, filtrada, e concentrada in vacuo. Ο resíduo foi purificado por cromatografia de flash (eluente: heptano/EtOAc 95/5) para dar o composto de título (2,41 g, 69% de rendimento): XH RMN (400 MHz, CDCI3) δ ppm 1,22 - 1,27 (m, 3 H) 1, 29 - 1,43 (m, 4 H) 1,82 - 1, 90 (m, 2 H) 1,82 -1,90 (m, 3 H) 1,97 (br. s., 2 H) 2,28 - 2,36 (m, 3 H) 3,01 (s, 3 Η) 4,18 (q, 3 Η) 6,91 (m, 1 Η) 7,38 (m, 1 Η) 7,99 (m, 1 Η) ; MS (ES +) m/z 520 [M+H]+.
Intermediário 78 6'-Bromo-4-(trifluorometil)spiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3 Ή)-ona
1-(4-bromo-2-iodobenzil)-4-(trifluorometil) ciclohexano carboxilato de etilo (Intermediário 77, 2,41 g, 4,64 mmol) foi dissolvido em THF (40 mL). A atmosfera foi mudada para árgon, e a solução foi arrefecida a -78 °C. Cloreto de isopropilmagnésio - cloreto de litio (1,3 M em THF) (2,86 mL, 3,71 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura de reação foi agitada a -78 °C durante 15 min. A mistura de reação foi deixada aquecer até à t.a., enquanto agitada durante 30 min. A mistura de reação foi extinta com NH4CI sat.. Adicionou-se solução salina de cloreto de sódio, e as fases foram separadas. A camada orgânica foi lavada com solução salina de cloreto de sódio, seca sobre MgSCM, filtrada, e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia preparativa (XBridge C18 (10pm, 50 x 250mm) coluna com um gradiente de 50-100% MeCN) em (95% 0,05M NH4OAC em água MilliQ e 5% MeCN) durante 15 min a uma taxa de fluxo de 100 mL/min). A purificação forneceu o composto de título (0,849 g, 52% de rendimento): 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ ppm 1,51 - 1,61 (m, 3 H) 1, 75 - 1, 84 (m, 2 H) 1,97 (m, 2 H) 2,18 (m, 2 H) 2,90 (s, 2 H) 7,29 (dd, 1 H) 7,69 (dd, 1 H) 7,84 (d, 1 H); MS (ES+) 346 [M+H]+.
Intermediário 79 2-Fluoro-3-metoxi-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan- 2-il)benzonitrilo
Um balão contendo 2-fluoro-3-metoxibenzonitrilo (302 mg, 2,00 mmol), 4,4'-di-tert-butil-2,2'-dipiridilo (8 mg, 0,03 mmol) e bis(pinacolato)diboro (254 mg, 1,0 mmol) foi lavado com árgon, e depois carregado com hexano (6 mL). A mistura foi depois agitada a 25 °C durante a noite. A mistura de reação foi diluida com EtOAc e lavada com solução salina de cloreto de sódio. A fase orgânica foi concentrada e o produto bruto foi purificado numa coluna de silica (0-50% EtOAc/n-heptano) para dar o composto de titulo (362 mg com 73% de pureza de acordo com HPLC) : 1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 7,63 - 7,55 (m, 2 H), 3,93 (s, 3 H), 1,31 (s, 12 H); MS (EI) m/z 2 77 M+.
Intermediário 80 6'-Bromo-4-etoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3' H) -ona
6'-Bromo-4-hidroxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona como uma mistura 2:1 de isómeros (Intermediário 5 Passo 2, 10,4 g, 34,1 mmol) e iodeto de etilo (3,6 mL, 44,3 mmol) foram dissolvidos em 2-MeTHF (100 mL) sob N2. KOt-Bu (7,65 g, 68,2 mmol) foi adicionado em porções à mistura de reação, mantendo a temperatura interna abaixo de 30 °C. A solução foi agitada à t.a. durante a noite. Adicionou-se água (40 mL) à solução salina de cloreto de sódio (25 mL) e a mistura foi agitada durante mais 5 min. A mistura foi diluída com solução salina de cloreto de sódio e 2-Me-THF até se formarem duas camadas. As fases foram separadas. Foi adicionado carvão ativado a uma camada orgânica a qual foi então agitada durante 10 min. Adicionou-se terra de diatomáceas e a mistura foi agitada durante mais 5 min. A mistura foi filtrada através de uma camada de gel de sílica e terra de diatomáceas, que foi enxaguada com heptano/EtOAc 7:3. O filtrado foi concentrado. A sequência de filtração foi repetida, produzindo 4,0 g (36% de rendimento) do composto de título (como uma mistura 2:1 de isómeros) : ΧΗ RMN (300 MHz, CDCI3) ppm 1,22 (t, 3 H) , 1,32 - 1,45 (m, 2 H), 1,45 - 1,52 (m, 2 H) , 1,77 (dt, 2 H) , 2,07 - 2,16 (m, 2 H) , 2,98 (s, 2 H), 3,30 - 3, 40 (m, 1 H) , 3,57 (q, 2 H) , 7,34 (d, 1 H) , 7,69 (dd, 1 H) , 7,87 (d, 1 H) .
Intermediário 81 6'-(3,3,3-Trifluoropropoxi)spiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-1', 4(3 Ή)-diona
O composto de título (854 mg, 58% de rendimento) foi preparado usando o método descrito por Intermediário 63 a partir de 6-(3,3,3-trifluoropropoxi)-2,3-dihidro-lH-inden-1-ona (Intermediário 47, 1, 08 g, 4,42 mmol) e acrilato de metilo (878 pL, 9,73 mmol): 2Η RMN (500 MHz, CDC13) δ ppm 1, 82 - 1, 92 (m, 2 H) , 2,17 - 2,27 (m, 2 H) , 2, 42 - 2,53 (m, 2 H), 2,60 - 2, 75 (m, 4 H) , 3,14 - 3,20 (m, 2 H) , 4,22 -4,27 (m, 2 H), 7,19 - 7,22 (m, 1 H), 7,25 (dd,1 H), 7,41 (d, 1 H) : MS (ES +) ml z 327 [M+H] + .
Intermediário 82 (lr,4r)-4-Hidroxi-6'-(3,3,3-trifluoropropoxi)spiro [ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona
0 composto de título (357 mg, 51% de rendimento, contendo 16% de outro isómero) foi preparado usando o método descrito para o Intermediário 64 a partir de 6'—(3,3,3— trifluoropropoxi)spiro-[ciclohexano-1,2'-indeno]-1',4(3'H)-diona (Intermediário 81, 689 mg, 2,11 mmol) e complexo borano-trimetilamina (339 mg, 4,65 mmol). O produto foi purificado por cromatografia de flash usando 0-100% EtOAc em heptano como eluente: ΤΗ RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 1,40 - 1,52 (m, 4 H) , 1,82 (td, 2 H) , 2,03 - 2,13 (m, 2 H) , 2,65 (qt, 2 H), 2,99 (s, 2 H), 3,73 - 3,82 (m, 1 H), 4,23 (t, 2
H), 7,16 - 7,20 (m, 1 H), 7,22 (dd, 1 H), 7,38 (d, 1 H); MS (ES+) m/z 329 [M+H]+.
Intermediário 83 ((lr,4r)-4-Metoxi-6'-(3,3,3-trifluoropropoxi)spiro [ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona
0 (lr,4r)-4-Hidroxi-6'-(3,3,3-trifluoropropoxi)spiro [ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3Ή)-ona (Intermediário 82, 357 mg, 1,09 mmol) foi dissolvido em 2-Me THF (7 mL) sob uma atmosfera inerte, e a solução foi arrefecida a 0 °C.
Adicionou-se iodeto de metilo (88 pL, 1,41 mmol) seguido da adição em porções de tert-butóxido de potássio (171 mg, 1,52 mmol). A mistura resultante foi agitada à t.a. durante 1 h. Permaneceu algum álcool por isso adicionou-se mais tert-butóxido de potássio (61 mg, 0,54 mmol) mantendo a agitação. Após 30 min, adicionou-se água e solução salina de cloreto de sódio.
As fases foram separadas e a camada orgânica foi seca sobre MgSCç e concentrada. A purificação por cromatografia de flash usando 0-25% EtOAc em heptano como eluente produziu 201 mg (54% de rendimento) do composto de titulo (contendo 11% de outro isómero): ΤΗ RMN (500 MHz, CDCI3) δ 1,32 - 1,44 (m, 2 H) , 1,51 (d, 2 H), 1,78 (td, 2 H) , 2,12 - 2,21 (m, 2 H) , 2,59 - 2,70 (m, 2 H), 2,97 (s, 2 H), 3,24 - 3,32 (m, 1 H), 3,41 (s, 3 H), 4,23 (t, 2 H) , 7,16 - 7,23 (m, 2 H) , 7,37 (d, 1 H); MS (ES+) m/z 343 [M+H]+.
Intermediário 84 3-(Bromometil)-2-fluorobenzonitrilo
NBS (1,729 g, 9,71 mmol) foi adicionada a uma solução de 2-fluoro-3-metilbenzonitrilo (1,25 g, 9,25 mmol) em acetonitrilo (25 mL). A mistura obtida foi refluxada, e depois adicionou-se peroxianidrido benzóico (0,045 g, 0,18 mmol) . A mistura de reação foi refluxada durante a noite, depois arrefecida até à t.a. e foi adicionada água. A fase aquosa foi eliminada e a fase orgânica foi seca sobre MgSCU e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia de flash usando um gradiente de EtOAc em heptano como eluente para dar o composto de titulo (1,39 g, 70% de rendimento): 2H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 4,75 (s, 2 H) 7,43 (t, 1 H) 7,93 (t, 2 H); MS (EI) m/z 213 M+.
Intermediário 85 2- Fluoro-3-(metoximetil)benzonitrilo
3- (Bromometil)-2-fluorobenzonitrilo (Intermediário 84, 1,39 g, 6,49 mmol) foi dissolvido em MeOH (10 mL) e adicionou-se metóxido de sódio (1,238 mL, 6,49 mmol) . A mistura foi agitada à t.a. durante 2 h. Esta mistura foi concentrada e depois repartida entre água e EtOAc. A camada orgânica foi separada e, em seguida, concentrada in vacuo. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de flash usando EtOAc/heptanos como eluente para dar o composto de título (0, 900 g, 84% de rendimento) : ΧΗ RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 3,32 (s, 3 Η) 4,52 (br. s, 2 H) 7,42 (t, 1 H) 7,77 - 7,84 (m, 1 H) 7, 86 - 7, 92 (m, 1 H); MS (EI) m/z 166 M+.
Intermediário 86 2-Fluoro-3-(metoximetil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-l, 3,2-dioxaborolan-2-il)benzonitrilo
4,4,4',4',5,5,5',5'-Octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (1,15 g, 4,53 mmol), di-p-metoxobis(1,5- ciclooctadieno)diirídio(I) (45 mg, 0,07 mmol), e 4,4'-di- tert-butil-2,2'-dipiridilo (72,9 mg, 0,27 mmol) foram adicionados a um frasco de reação. A atmosfera foi mudada para árgon. O hexano (10 mL) foi adicionado, enquanto a atmosfera de árgon foi mantida. A mistura foi agitada durante 5 min à t.a. A cor da mistura de reação ficou vermelha. Adicionou-se uma solução de 2-fluoro-3- (metoximetil)benzonitrilo (Intermediário 85, 748 mg, 4,53 mmol) em hexano (10 mL), e a mistura foi refluxada durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com EtOAc e lavada com solução salina de cloreto de sódio. A camada orgânica foi recolhida, seca sobre MgSCb, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de flash usando um sistema de eluentes EtOAc/heptano para dar 254 mg (19% de rendimento) do composto de título: MS (EI) m/z 291 M+.
Intermediário 87 4-(Hidroximetil)ciclohexanocarboxilato de metilo
A uma solução de ácido 4-(metoxicarbonil)ciclohexano carboxílico (5,44 g, 29,2 mmol) em THF seco -78 °C, adicionou-se complexo de sulfureto de borano-metilo (19,0 mL, 38,0 mmol) gota a gota durante 20 min. A mistura foi agitada durante 3 h e depois lentamente foi deixada atingir a t.a. A reação foi extinta com água (20 mL) e a mistura foi extraída com EtOAc. A fase orgânica foi lavada uma vez com solução salina de cloreto de sódio, seca sobre MgSC>4 e concentrada in vacuo para dar o composto de título (4,80 g, 95% de rendimento) como uma mistura de dois diastereómeros: MS (EI) m/z 172 M+.
Intermediário 88 4-formilciclohexanocarboxilato de metilo
A uma solução de 4-(hidroximetil)ciclohexanocarboxilato de metilo (Intermediário 87, 4,08 g, 23,7 mmol) em DCM adicionou-se NaHCCb (9,95 g, 118 mmol), seguido por
Periodinano Dess-Martin (12,1 g, 28,4 mmol). A mistura foi agitada à t.a. durante 2,5 h. Adicionou-se Et20 (60 mL) seguido por uma solução aq. de NaHCCb (1 M, 60 mL) e uma solução aq. A 20% de tiossulfato de sódio (40 mL). A mistura resultante foi agitada durante a noite. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com Et2<3. A fase orgânica foi lavada com solução salina de cloreto de sódio e seca sobre MgSCL, filtrada e concentrada in vacuo para produzir o composto de titulo (4,0g, 99% de rendimento): MS (EI) m/z 170 M+.
Intermediário 89 4-(difluorometil)ciclohexanocarboxilato de metilo
4-formilciclohexanocarboxilato de metilo (Intermediário 88, 4,0 g, 23,5 mmol) foi dissolvido em DCM seco (80 mL) . Trifluoreto de bis (2-metoxietil) amino-enxofre (3,42 mL, 25,9 mmol) foi adicionado gota a gota durante 20 min. A mistura de reação foi agitada durante 1,5 h. Foi adicionada água (40 mL) gota a gota e a mistura de reação foi agitada durante 2 min. A fase orgânica foi separada da fase aquosa com um separador de fase e evaporada in vacuo para dar o composto de titulo (4,28 g, 95% de rendimento): MS (Cl) m/z 193 [M+H]+.
Intermediário 90 1-(4-bromo-2-iodobenzil)-4- (difluorometil)ciclohexanocarboxilato de metilo
4-(difluorometil)ciclohexanocarboxilato de metilo
(Intermediário 89, 2,46 g, 12,8 mmol) foi dissolvido em THF (25 mL) . A atmosfera foi trocada por N2 (g) , e a solução foi arrefecida a -78 °C. Adicionou-se diisopropilamida de lítio (1,8 M em THF/heptano/etilbenzeno) (8,51 mL, 15,3 mmol), enquanto a temperatura foi mantida a -78 °C. A solução foi agitada durante 60 min a -78 °C. Uma solução de 4-bromo-l-(bromometil)-2-iodobenzeo (ver Caruso, A.; Tovar, J., D. J. Org. Chem. 2011, 76, 2227-2239., 4,8 g, 12,8 mmol) em THF (5,0 mL) foi adicionado através de uma seringa. A reação foi removida do banho de arrefecimento, e deixada atingir a t.a., durante a agitação durante 2,5 h. Adicionou-se água (30 mL), seguida por DCM (30 mL). A camada orgânica foi recolhida e seca sobre MgSCg, filtrada e evaporada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de flash, (0-100% EtOAc em heptanos, 220 g SÍO2) para dar o composto de título (3,29 g, 53% de rendimento) : ΤΗ RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 1,11 - 1,20 (m, 2 H), 1,39 (td, 2 H), 1,67 - 1,80 (m, 3 H), 2,30 (d, 2 H), 3,01 (s, 2 H), 3,70 (s, 3 H), 5,49 (d, 1 H), 6,89 (d, 1 H), 7,38 (dd, 1 H), 7,99 (d, 1 H), MS (Cl) m/z 487 [M+H]+.
Intermediário 91 6'-Bromo-4-(difluorometil)spiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona
1-(4-bromo-2-iodobenzil)-4-(difluorometil)ciclohexano carboxilato de metilo (Intermediário 90, 2,3 g, 4,72 mmol) foi dissolvido em THF (30 mL). A atmosfera foi trocada por N2 (g) , e a solução foi arrefecida a -20 °C. Cloreto de isopropilmagnésio - cloreto de litio (1,3M em THF, 4,00 mL, 5,19 mmol) foi adicionado gota a gota durante uma h. A mistura de reação foi agitada a -20 °C durante 40 min. A mistura de reação foi removida a partir do banho de arrefecimento, e foi deixada aquecer até à t.a., enquanto agitada durante 1,5 h. A reação foi agitada à t.a. durante a noite e depois aquecida a 40 °C durante 3 h. A reação foi arrefecida até à t.a. e extinguida com NH4CI sat.. A mistura resultante foi agitada durante a noite. A camada orgânica foi recolhida e seca sobre MgSC>4, filtrada, e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de flash (0-10% EtOAc em heptano) seguida por cromatografia preparativa para dar o composto de título (0,562 g, 24% de rendimento): RMN (500 MHz, DMSO-de) δ ppm 1, 46 - 1,65 (m, 4 H) , 1,75 -1,96 (m, 5 H), 2,93 (s, 2 H), 6,00 (dt, 1 H), 7,51 (d, 1 H), 7, 73 (d, 1 H) , 7, 83 (dd, 1 H) .
Exemplo 19 6'-Bromo-4-metoxi-5"-metil-3'Hdispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina
Método A
Passo 1: (N-(5'-Bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'- indeno]-3'(1Ή)-ilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida)
6'-Bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1' (3 Ή)-ona (Intermediário 5 Método A Passo 3, a mistura de isómeros, 1,14 g, 3,69 mmol), 2-metilpropano-2-sulfinamida (0,670 g, 5,53 mmol) e etóxido de titânio (1,519 mL, 7,37 mmol) foram dissolvidos em 2-Me THF (8 mL) e aquecida a refluxo durante 26 h. A reação foi deixada arrefecer até à t.a. e EtOAc (80 mL) e NaHCCh (sat, 15 mL) foram adicionados sob agitação. A mistura foi depois deixada repousar sem agitação durante 15 min. A fase orgânica foi recolhida por filtração, seca sobre MgSC>4 e concentrada. Cromatografia de flash com um gradiente de 0 -20% EtOAc em n-heptano deu o composto de titulo (1,00 g, 66% de rendimento) . ΤΗ RMN (500 MHz, CD3CN, sinais para o isómero principal) δ ppm 0,85 - 0,91 (m, 1 H), 1,27 (s, 9 H), 1,25-1,86 (multipletos, 5 H), 2,01 - 2,10 (m, 2 H), 3,02 (br. s, 2 H), 3,18 - 3,26 (m, 1 H), 3,31 (s, 3 H), 7,37 (d, 1 H), 7,67 (dd, 1 H), 8,59 (br. s., 1 H), MS (ES +) m/z 413 [M+H]+.
Passo 2: 6'-Bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]- 1'(3'H)-imina
A uma solução de N-(5'-bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-3'(1'H)-ilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida (Exemplo 19 Passo 1, uma mistura de isómeros, 2 g, 4,85 mmol) em 1,4-dioxano anidro (25 mL) adicionou-se 4M HC1 em 1,4-dioxano (12,12 mL, 48,50 mmol). Formou-se imediatamente um precipitado branco e a mistura turva resultante foi agitada sob uma atmosfera de azoto à t.a. durante 90 min. Adicionou-se Et20 (30 mL) e o sólido foi removido por filtração e lavado com Et2<0. 0 sólido foi repartido entre DCM (40 mL) e
NaHCC>3 sat. aq. (40 mL) . As fases foram separadas e a camada orgânica concentrada. O composto de título bruto (1,41 g) foi usado diretamente no passo seguinte. MS (EI) m/z 307 M+.
Passo 3: 6'-Bromo-4-metoxi-5"-metil-3'H-dispiro [ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazole]-4"(3"H)-tiona
6'-Bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-imina (Exemplo 19 Passo 2, 1,41 g, 4,57 mmol) e 2- oxopropanotioamida (Intermediário 2, 1.42 g, 13,7 mmol) foram dissolvidos em MeOH seco (30 mL) e a solução resultante foi aquecida a 60 °C sob uma atmosfera de azoto. Após 15 h a reação foi deixada arrefecer até à t.a. Formou-se um precipitado que foi removido por filtração e seco in vacuo, rendendo o composto de título (1,16 g, 64% de rendimento) como uma mistura de isómeros. ΤΗ RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,18 (m, 4 H), 1,47 (m, 2 H), 1,87 (m, 2 H), 2,27 (m, 3 H), 3,03 (m, 3 H), 3,20 (s, 3 H), 6,98 (d, 1 H), 7,34 (d, 1 H), 7,51 (dd, 1 H); MS (APCI+) m/z 394 [M+H]+.
Passo 4: 6'-Bromo-4-metoxi-5"-metil-3'H-dispiro [ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina
6'-Bromo-4-metoxi-5"-metil-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazole]-4"(3"H)-tiona (Exemplo 19 Passo 3, 0,936 g, 2,38 mmol) foi tomada em amónia (7M em MeOH, 10 mL, 70,00 mmol) e a mistura resultante foi borbulhada com árgon e depois aquecido no reator de micro-ondas a 120 °C durante 1 h. O solvente foi evaporado. Foi adicionada amónia (7M em MeOH, 6 mL, 42 mmol) e a reação foi borbulhada com árgon e aquecida novamente usando MW durante 60 min a 120 °C. O solvente foi evaporado e a amónia (7M em MeOH, 10 mL, 70 mmol) foi adicionada. A reação foi borbulhada com árgon e depois aquecida usando MW durante 2 h a 120 °C. O solvente foi evaporado e foi adicionada amónia (7M em MeOH, 15 mL, 105 mmol) e a reação foi aquecida novamente durante 2 h a 120 °C. 0 solvente foi evaporado e a amónia (7M in MeOH, 15 mL, 105 mmol) foi adicionada e a reação foi aquecida novamente durante 2 h a 120 °C. O solvente foi evaporado e foi adicionada a amónia (7M em MeOH, 20 mL, 140 mmol) . A reação foi aquecida novamente usando MW durante lha 120 °C. O solvente foi evaporado e o resíduo resultante foi retomado em DCM (60 mL) e solução salina de cloreto de sódio (x2) e despejada num separador de fase. A fase orgânica foi seca com MgSCh, filtrada e evaporada para dar o composto de título (0, 736 g, 82% de rendimento) como uma mistura de isómeros: ΧΗ RMN (500 MHz, CDCI3) δ ppm 1,09 (td, 1 H), 1,27 - 1,49 (m, 3 H), 1,62 - 1, 74 (m, 2 H), 1,93 - 2,01 (m, 2 H) , 2,37 (s, 3 H), 3,04 - 3,18 (m, 3 H), 3,34 (s, 3 H), 6,90 (d, 1 H), 7,20 (d, 1 H), 7,38 (dd, 1 H) ; MS (MM-ES+APCI) + m/z 376 [M+H]+.
Separação dos isómeros de 6'-bromo-4-metoxi-5"-metil-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina 6'-Bromo-4-metoxi-5"-metil-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina (Exemplo 19 Passo 4, 80 mg, 0,21 mmol) foi purificada usando cromatografia preparativa (Waters FractionLynx system equipada com uma coluna XBridge® Prep C8 10 pm OBD™ 19 x 250 mm e uma Coluna de guarda; XTerra® Prep MS C8 10 pm 19 x 10 mm Cartridge. Um gradiente linear de 35-70% MeOH em 0,2% NH3 em água MilliQ foi aplicada â taxa de fluxo de 20 mL/min) para dar:
Mistura isomérica 1 (ls,4s)-6'-Bromo-4-metoxi-5"-metil-3'H-dispiro [ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina (o primeiro a eluir, isómero minoritário, 2,0 mg, 2,5% de rendimento):
iH RMN (500 MHz, CD3CN) δ ppm 1,15 - 1,25 (m, 2 H), 1,36 (td, 1 H), 1, 45 - 1,59 (m, 2 H) , 1,63 - 1, 74 (m, 3 H) , 2,19 (s, 3 H), 2,98 - 3,06 (dd, 2 H), 3,20 (s, 3 H), 3,32 (t, 1 H), 5,19 - 5,39 (m, 2 H) , 6,75 (d, 1 H) , 7,20 (d, 1 H) , 7,34 (dd, 1 H); MS (ES + ) m/z 378 [M+H] + . e
Mistura isomérica 2 (lr, 4r)-6'-Bromo-4-metoxi-5"-metil-3'H-dispiro [ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina (o segundo a eluir, isómero maioritário, rendimento não determinado):
!H RMN (500 MHz, CDC13) δ ppm 1,09 (td, 3,47 Hz, 1 H), 1,27 - 1,49 (m, 3 H), 1,62 - 1,74 (m, 2 H), 1,93 - 2,01 (m, 2 H), 2,37 (s, 3 H), 3,04 - 3,18 (m, 3 H), 3,34 (s, 3 H), 6,90 (d, 1 H), 7,20 (dl H), 7,38 (dd, 1,73 Hz, 1 H), MS (MM-ES+APCI)+ m/z 378 [M+H]+.
Separação dos isómeros de (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxi-5"-metil-3' H-dispiro-[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina
Os isómeros da mistura isomérica 2 foram separados usando SFC Berger Multigram II, com um LuxC4; 4,6*250 mm; coluna de 5pm, e a fase móvel consistindo de MeOH 15% (contendo 0,1% DEA) e 85% de CO2 a uma taxa de fluxo de 50 mL/min para dar:
Isómero 1: (lr, 1' R, AR) -6 ' -Bromo-4-metoxi-5"-metil-3fí- dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina (9 mg, 11% de rendimento) com tempo de retenção de 6,1 min:
XH RMN (500 MHz, CD3CN) δ ppm 1,05 (dd, 1 H), 1,23 (dt, 2 H), 1,39 (d, 1 H), 1,49 (ddd, 2 H), 1,81 - 1,89 (m, 2 H), 2,17 (s, 3 Η), 2,94 - 3,10 (m, 3 Η), 3,23 (s, 3 Η), 5,32 (br. s., 2 H), 6,75 (d, 1 H), 7,19 (d, 1 H), 7,33 (dd, 1 H), MS (MM-ES+APCI)+ m/z 378 [M+H]+; e
Isómero 2: (lr,1'S,4S)-6'-Bromo-4-metoxi-5"-metil-3'H- dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina (15 mg, 19% de rendimento) com tempo de retenção de 9,5 min:
!H RMN (500 MHz, CD3CN) δ ppm 1,00 - 1,09 (m, 1 H), 1,17 - 1,31 (m, 2 H), 1,39 (td, 1 H), 1,50 (ddd, 2 H) , 1,86 (dt, 2 H), 2,18 (s, 3 H), 2,94 - 3,10 (m, 3 H) , 3,24 (s, 3 H) , 5,32 (br. s., 2 H), 6,76 (d, 1 H), 7,20 (d, 1 H), 7,34 (dd, 1 H), MS (MM-ES+APCI)+ m/z 378 [M+H]+.
Separação dos isómeros de (Is,4s)-6'-bromo-4-metoxi-5"-metil-3 ' íí-dispiro-[ciclohexano-1,2 '-indeno-1', 2"-imidazol]-4"-amina 1,7 g de uma mistura contendo (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxi-5"-metil-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina (maioritário) e (ls,4s)-6'-bromo-4-metoxi-5"-metil-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1', 2"-imidazol]-4"-amina (minoritário) foram purificados por cromatografia preparativa usando as seguintes condições: Coluna: XBridge C18; 50*300 mm; 10pm, Fase móvel: 20-60% MeCN em NH3 0,1% aq. durante 20 min, Taxa de fluxo: 120 mL/min. O isómero minoritário obtido (equivalente à mistura isomérica 1 acima) com tempo de retenção de 15 min, foi depois separada nos seus isómeros através de SFC preparativa usando o seguinte sistema: sistema Berger Multigram II SFC, Coluna: Chiralcel OD-H; 20*250 mm; 5pm, Fase móvel: MeOH a 10% (contendo 0,1% DEA) / 90% CO2, Taxa de fluxo: 50 mL/min resultando em:
Isómero 3 com configuração absoluta indeterminada (77 mg, 5% de rendimento) com tempo de retenção de 6,5 min: ΧΗ RMN (400 MHz, DMSO-de) δ ppm 1,05 - 1,17 (m, 2 H) , 1,24 (td, 1 H) , 1.36 - 1,54 (m, 2 H) , 1,57 - 1, 74 (m, 3 H) , 2,16 (s, 3 H) , 2, 85 - 3,07 (m, 2 H) , 3,12 (s, 3 H) , 3,29 (br. s., 1 H) , 6.58 (s, 2 H), 6,63 (d, 1 H), 7,24 (d, 1 H), 7,33 (dd, 1 H); MS (APCI + ) m/z 376 [M+H]+, e
Isómero 4 com configuração absoluta indeterminada (64 mg, 4% de rendimento) com tempo de retenção de 12 min: ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO-de) δ ppm 1,05 - 1,17 (m, 2 H) , 1,24 (td, 1 H) , 1.36 - 1,55 (m, 2 H) , 1,57 - 1, 74 (m, 3 H) , 2,16 (s, 3 H) , 2, 85 - 3,06 (m, 2 H) , 3,12 (s, 3 H) , 3,29 (br. s., 1 H) , 6.58 (s, 2 H), 6,63 (d, 1 H), 7,24 (d, 1 H), 7,33 (dd, 1 H); MS (APCI + ) m/z 376 [M+H]+.
Método B
Passo 1: N-((lr,4r)-5'-Bromo-4-metoxispiro[ciclohexano- 1,2'-indeno]-3'(1'H)-ilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida
(lr,4r)-6'-Bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-l'(3'H)-ona (Intermediário 5 Método B Passo 3, 31 g, 100 mmol), 2-metilpropano-2-sulfinamida (15,8 g, 130 mmol), 2-metil-tetrahidrofurano (200 mL) e etóxido de titânio (41,3 mL, 200 mmol) foram aquecidos a 100 °C para dar um azeótropo a 74 °C. A destilação azeotrópica foi continuada durante 8 h e depois a mistura foi refluxada durante a noite. A destilação azeotrópica foi continuada durante mais 8 h e, em seguida, a mistura foi refluxada durante a noite. A mistura foi arrefecida à t.a. Um adicional de 2-Me THF foi adicionado para dar a concentração original da mistura. Preparou-se uma solução de ácido sulfúrico (11,14 mL, 200,5 mmol) e Na2SC>4 (35,6 g, 250 mmol) em água (150 mL). A mistura de reação foi depois adicionada durante 20 min a 4/5 do volume da solução acídica. As fases foram separadas, e a fase orgânica foi lavada com a solução acídica restante em água (75 mL) e água (75 mL) . A fase orgânica foi concentrada e seca in vacuo durante a noite para dar o composto de título (40,8 g, 99% de rendimento): MS (ES + ) m/z 412 [M+H] + .
Passo 2: Hidrocloreto de (lr,4r)-6'-Bromo-4- metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3 Ή)-imina
HC1 (2 M em Et20, 99 mL, 197 mmol) foi adicionado gota a gota durante 5 min a N-((lr,4r)-5'-bromo-4- metoxispiro[ciclohexano-1,2'-indeno]-3'(1'H)-ilideno)-2-metilpropano-2-sulfinamida (Exemplo 19 Passo 1, 40,8 g, 98,9 mmol) dissolvido em Et20 (30 mL) e DCM (30 mL) . A mistura foi agitada durante 60 min antes de ter sido filtrada. O bolo do filtro foi lavado com Et20 e seco in vacuo para dar o composto de título (31,3 g, 92% de rendimento) : ^ RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,28 (m, 2 H) 1,70 (d, 2 H) 2,04 (m, 4 H) 3,17 (s, 2 H) 3,23 (m, 1 H) 3,28 (s, 3 H) 7,61 (d, 1 H) 8,04 (dd, 1 H) 8,81 (s, 1 H); MS (EI) m/z 307 M+.
Passo 3: (lr,4r)-6'-Bromo-4-metoxi-5"-metil-3'H- dispiro[ciclohexano-1,2'-inden-1',2'-imidazole]-4"(3"H)-tiona
Hidrocloreto de (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxispiro [ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3Ή)-imina (Exemplo 19 Passo 2, 95 g, 200 mmol) (contendo 30% de hidrocloreto de (ls, 4s)-6'-bromo-4-metoxispiro-[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3 Ή)-imina) foi repartido entre DCM (600 mL) e NaOH 2 M aq. (400 mL). A fase orgânica foi concentrada e adicionou-se 2-propanol (200 mL) e a mistura foi concentrada. A (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxispiro-[ciclohexano-1,2'-inden]-1' (3 Ή)-imina resultante, ortoformato de trimetilo (66 mL, 602 mmol) e 2-propanol (300 mL) foi aquecido a 80 °C. Adicionou-se 2-
oxopropanotioamida (51,5 g, 500 mmol) em 2-propanol (250 mL) durante 40 min, mantendo a temperatura acima de 65 °C. A reação foi agitada a 75 °C durante 2 h. A mistura foi concentrada até ~ ^ do volume e foi deixada a 0 °C durante a noite. Formou-se um sólido o qual foi removido por filtração, e seco numa câmara de vácuo a 40 °C durante 3 h para dar o composto de titulo (61,24 g, 78% de rendimento, contendo 14% de (ls,4s)-6'-bromo-4-metoxi-5"-metil-3Ή-dispiro[ciclohexano-1,2'-inden-1',2'-imidazole]-4"(3"H)-tiona) : MS (EI) m/z 392 M+.
Passo 4: (lr,4r)-6'-Bromo-4-metoxi-5"-metil-3'H- dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina
(lr, 4r)-6'-Bromo-4-metoxi-5"-meti1-3'H-dispiro [ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazole]-4"(3"H)-tiona (Exemplo 19 Passo 3, 22,7 g, 57,7 mmol) e amónia (7 M em
MeOH, 180 mL, 1,26 mol) foi colocado num reator de pressão e aquecido a 74 °C durante a noite. O resíduo foi deixado atingir a t.a. e a mistura foi concentrada. O resíduo foi repartido entre ácido cítrico 2 M (400 mL) e EtOAc (400 mL). Qualquer material insolúvel foi removido por filtração e foi determinado como sendo material de partida não reagido. A fase orgânica (org 1) foi concentrada in vacuo para dar material de partida adicional não reagido. Adicionou-se EtOAc (300 mL) à fase aquosa e depois adicionou-se NaOH a 50% até pH ~ 12, e a mistura foi agitada durante 10 min. A fase orgânica resultante (org 2) foi salva. O resíduo do org 1, e o sólido filtrado foram combinados e suspensos em amónia (7 M em MeOH, 180 mL, 1,26 mmol) e colocado num reator de pressão e aquecido a 100 °C durante a noite. A solução obtida foi concentrada in vacuo. O resíduo foi repartido entre ácido cítrico 2 M (300 mL) e EtOAc (300 mL) . À fase aquosa foi adicionado EtOAc (300 mL) e depois adicionou-se NaOH a 50% até pH ~ 12, e a mistura foi agitada durante 10 min. A fase orgânica foi combinada com org 2 acima. Adicionou-se carvão ativado foi adicionado à fase orgânica e a mistura foi agitada durante 30 min antes de ser filtrada através de terra de diatomácea. A fase orgânica foi concentrada e seca in vacuo durante a noite para dar um sólido. Adicionou-se éter diisopropílico ao sólido (125 mL) e a mistura foi refluxada durante a noite. A mistura foi deixada atingir a t.a. e o sólido foi removido por filtração para dar o composto de titulo (equivalente a Exemplo 19 Mistura isomérica 2 acima) (15 g, 69% de rendimento) : RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 0,93 (m, 1 H) 1,1-1,25 (m, 2 H) 1,35-1,45 (m, 3 H) 1,81 (br. d, 2 H) 2,16 (s, 3 H) 2,87-3,03 (m, 3 H) 3,18 (s, 3 H) 6,59 (br. s., 2 H), 6,64 (d, 1 H), 7,25 (d, 1 H), 7,34 (dd, 1 H); ES+) m/z 376 [M+H]+.
Passo 5: (lr,1'R,4R)—6'—Bromo—4—metoxi—5"metil—3'H— dispiro[ciclohexano-1',2"-indeno-l',2"imidazol]-4"-amina
A um balão de 1 L de fundo redondo adicionou-se (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxi-5"-metil-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina (Exemplo 19 Método B Passo 4, 61 g, 162 mmol), EtOH (99,5%, 600 mL) e água (60 mL) para dar uma mistura homogénea a qual foi aquecida a 70 °C. A mistura foi agitada durante 30 min a temperatura elevada seguida por adição de ácido D(+)-10-camforsulfónico (18,8 g, 81,0 mmol) . A mistura foi agitada a 70 °C durante 3 h e depois deixada atingir 20 °C durante 2 h seguida por agitação a 20 °C durante 12 h. A mistura foi filtrada para dar um sólido que foi seco num forno de vácuo a 50 °C durante 10 h para dar o composto de título como um sal D ( + )-10-camf orsulf ónico (37 g; 37% de rendimento). A razão enantiomérica foi determinada por um sistema de análise SFC Berger Analytix equipado com uma coluna Chiralpak DA-H (4, 6*250 mm; 5pm) e a fase móvel consiste de MeOH a 10% (contendo DEA 0,1%) e CO2 a 90% a uma taxa de fluxo de 3 mL/min. 0 primeiro pico com tempo de retenção de 3,68 min (área 2,5%) correspondeu a (lr, 1'S,4S)-6'-bromo-4-metoxi-5"-metil-3 ' Jí-dispiro [ciclohexano-1,2 ' -indeno-1' , 2"-imidazol] -4"-amina, equivalente ao Isómero 2. 0 segundo pico com tempo de retenção de 4,58 min (área 97,5%) correspondeu ao composto de titulo (lr,1'R,4R)-6'-bromo-4-metoxi-5"metil-3'H- dispiro[ciclohexano-1',2"-indeno-l',2"imidazol]-4"-amina, equivalente ao Isómero 1. A libertação do composto de titulo a partir do sal foi realizado por agitação do sal do ácido camforsulfónico (0,32 g, 0,53 mmol) suspenso em diclorometano (4 mL) com uma solução aquosa de (4 mL) de KOH (0,32g, 5,7 mmol) à t.a. durante 30 min. A fase orgânica foi separada e concentrada in vacuo para dar o composto de titulo quantitativamente com um excesso enantiomérico de 95% (determinado como acima).
Método C
Hidrocloreto de (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-imina
(lr,4r)-6'-Bromo-4-metoxispiro[ciclohexano-1,2'-inden]-1'(3'H)-ona (Intermediário 5 Passo 3 Método C, 19,20 g a 91% ensaio de RMN, 56,5 mmol) é reagida com 2-metilpropano-2-sulfinamida (8,90 g, 73,5 mmol) por aquecimento com etóxido de titânio (IV) (24 mL, 115 mmol) e 2-metil-tetrahidrofurano (44 mL) a aproximadamente 82 °C. Três porções de solvente (aproximadamente 26 mL por porção) foram destilados após períodos de aquecimento de 0,5 h, 7, 5 h e 8 h respetivamente, e mais 2-metil-tetrahidrofurano (26 mL por porção, três porções) adicionado após completar cada destilação. Uma porção adicional de solvente (aproximadamente 26 mL) foi destilada após 17,5 h. A mistura de reação foi arrefecida até à t.a., diluída com DCM (52,5 mL) e depois adicionada gradualmente a uma solução (92 mL, 113 g) preparada a partir de Na2SC>4 (17,9% p/p) , água (72,2% p/p) e ácido sulfúrico (9,9% p/p) durante aproximadamente 4 min. Usou-se DCM (52,5 mL) para lavar um balão de reação e o funil de adição e depois adicionada ao balão de execução. Após separação das camadas, a fase orgânica foi lavada com uma mistura de água (17,5 mL) e uma solução (18,5 mL, 23 g) preparada a partir de Na2SC>4 (17,9% p/p), água (72,2% p/p) e ácido sulfúrico (9,9% p/p) . A mistura foi agitada com Na2SC>4 (8,75 g) durante aproximadamente 6 h. A suspensão espessa foi filtrada e o bolo do filtro lavado com DCM (17,5 mL) . Os filtrados combinados foram concentrados para destilar o solvente (aproximadamente 108 mL) . Um adicional DCM (52,5 mL) foi adicionado e o mesmo volume de solvente (52,5 mL) foi removido por destilação. A solução seca foi arrefecida até aproximadamente 20 °C e diluída com DCM (17,5 mL) e EtOH (8,7 mL). O HC1 (2 M em Et20) (34 mL, 68 mmol), foi depois adicionado gradualmente durante aproximadamente 20 min. A suspensão espessa resultante foi mantida a aproximadamente 20 °C durante cerca de 45 min antes da filtração. O bolo do filtro foi lavado com uma solução (17,5 mL por porção, três porções) preparada a partir de volumes iguais de DCM e Et20 e depois secas in vacuo para dar o composto de título contendo aproximadamente 4% de outro isómero (17,41 g a 88% p/p ensaio RMN, 44,4 mmol, 79% de rendimento) (o DCM residual foi detetado a 6,8% p/p e cloreto de amónio 2,9% p/p no ensaio de RMN): XH RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,30 (m, 2 H), 1,70 (d, 2 H), 1,98 (m, 2 H), 2,10 (m, 2 H) , 3,17 (s, 2 Η), 3,23 (m, 1 Η), 3,29 (s, 3 Η), 7,61 (d, 1 Η), 8,04 (dd, 1 Η), 8,75 (d, 1 Η), 12,90 (br s, 2 Η).
Exemplo 20a
(lr, 4r)-4-Metoxi-5"-metil-6'-(5-prop-l-in-l-ilpiridin-3-il)-3'H-dispiro [ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina
Método A Ácido 5-(Prop-l-inil)piridin-3-il borónico (Intermediário 15, 0,044 g, 0,27 mmol), (lr,4r)-6'-bromo-4-metoxi-5"-metil-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina (Exemplo 19 Método A Passo 4, 0,085 g, 0,23 mmol), cloreto de [1,1'-bis(difenilfosfino)-ferroceno]paládio (II) (9,29 mg, 0,01 mmol), K2CO3 (2M aq., 1,355 mL, 0,68 mmol) e 2-metil-tetrahidrofurano (0,5 mL) foram misturados e aquecidos a 100 °C usando MW durante 2x30 min. 2-metil-tetrahidrof urano (5 mL) e H2O (5 mL) foram adicionados e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi seca com MgSCq e, em seguida, concentrada. O bruto foi dissolvido em DCM e lavado com H2O. A fase orgânica foi separada através de um separador de fase e seca in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia preparativa. O solvente foi evaporado e a fase H2O foi extraída com DCM. A fase orgânica foi separada através de um separador de fase e seca para dar o composto de título (0,033 g, 36% de rendimento), ΧΗ RMN (500 MHz, CD3CN) δ ppm 1,04 - 1,13 (m, 1 H), 1,23 - 1,35 (m, 2 H), 1,44 (td, 1 H), 1,50 - 1,58 (m, 2 H) , 1,84 - 1,91 (m, 2 Η), 2,07 (s, 3 Η), 2,20 (s, 3 Η), 3,00 (ddd, 1 Η), 3,08 (d, 1 Η), 3,16 (d, 1 Η), 3,25 (s, 3 Η), 5,25 (br. s., 2 Η), 6,88 (d, 1 Η), 7,39 (d, 1 Η), 7,49 (dd, 1 Η), 7,85 (t, 1 Η), 8,48 (d, 1 Η), 8,64 (d, 1 Η) , MS (MM-ES+APCI)+m/z 413 [M+H] + .
Separação dos isómeros de (lr,4r)-4-metoxi-5"-metil-6'-(5-prop-l-in-l-ilpiridin-3-il)-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina (lr,4r)-4-Metoxi-5"-meti1-6'-(5-prop-l-in-l-ilpiridin-3-il)-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina (Exemplo 20a, 0,144 g, 0,35 mmol) foi purificada usando cromatografia preparativa (SFC Berger Multigram II, Coluna: Chiralcel OD-H; 20*250 mm; 5pm, fase móvel: MeOH a 30% (contendo 0,1% DEA); CO2 a 70%, Fluxo: 50 mL/min, número total de injeções: 4). Frações que contêm o produto foram combinadas e o MeOH foi evaporado para dar:
Isómero 1: (lr,1'R,4R)-4-metoxi-5"-metil-6'-(5-prop-l-in-l-ilpiridin-3-il)-3'H-dispiro-[ciclohexano-1,2'-indeno-1', 2"-imidazol]-4"-amina (49 mg, 34% de rendimento) com tempo de retenção de 2,5 min:
!H RMN (500 MHz, CD3CN) δ ppm 1,07 - 1,17 (m, 1 H), 1,23 -1,39 (m, 2 H) , 1,47 (td, 1 H) , 1,57 (ddq, 2 H) , 1,86 - 1,94 (m, 2 H), 2,09 (s, 3 H) , 2,23 (s, 3 H) , 2,98 - 3, 07 (m, 1 H), 3,11 (d, 1 H), 3,20 (d, 1 H), 3,28 (s, 3 H), 5,30 (br. s., 2 H), 6,91 (d, 1 H), 7,42 (d, 1 H) , 7,52 (dd, 1 H) , 7,88 (t, 1 Η), 8,51 (d, 1 Η), 8,67 (d, 1 Η), MS (MM-ES+APCI)+ m/z 413,2 [M+H]+; e
Isómero 2: (lr,1'S,4S)-4-metoxi-5"-metil-6'- (5-prop-l-in-l- ilpiridin-3-il)-3 Ή-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina (50 mg, 35% de rendimento) com tempo de retenção de 6,6 min:
!H RMN (500 MHz, CD3CN) δ ppm 1,02 - 1,13 (m, 1 H), 1,20 - 1,35 (m, 2 H), 1,44 (d, 1 H), 1,54 (ddd, 2 H), 1,84 - 1,91 (m, 2 H), 2,06 (s, 3 H), 2,20 (s, 3 H), 3,00 (tt, 1 H), 3,08 (d, 1 H), 3,16 (d, 1 H), 3,25 (s, 3 H), 5,26 (br. s., 2 H) , 6,88 (d, 1 H), 7,39 (d, 1 H), 7,49 (dd, 1 H), 7,84 (t, 1 H), 8,48 (d, 1 H) , 8,63 (d, 1 H) , MS (MM-ES+APCI) + m/z 413,2 [M+H]+.
Método B
Carregou-se um recipiente com (lr, 4r)-6'-bromo-4-metoxi-5"-metil-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina (Exemplo 19 Método B Passo 4, 7,5 g, 19,9 mmol), ácido 5-(prop-l-inil)piridin-3-il borónico (Intermediário 15, 3,37 g, 20,9 mmol), K2CO3 2,0 Maq. (29,9 mL, 59,8 mmol), e 2-metil-tetrahidrofurano (40 mL) . O recipiente foi purgado sob vácuo e a atmosfera foi substituída com árgon. Tetracloropaladato de sódio (II) (0,147 g, 0,50 mmol) e sulfonato de 3-(di-tert-butil fosfónio) propano (0,267 g, 1,00 mmol) foram adicionados e os conteúdos foram aquecidos a refluxo durante um período de 16 h. Os conteúdos foram arrefecidos até 30 °C e as fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída com 2-metil-tetrahidrofurano (2 x 10 mL) , depois os orgânicos foram combinados, lavados com solução salina de cloreto de sódio e tratados com carvão ativado (2,0 g). A mistura foi filtrada através de terra de diatomáceas, e depois lavadas com 2-metil-tetrahidrofurano (20 mL). O filtrado foi concentrado a um volume de aproximadamente 50 mL, depois adicionou-se água (300 pL) , e os conteúdos foram agitados vigorosamente como material de
semente foi adicionado um promotor de cristalização. O produto começou a cristalizar e a mistura foi agitada durante 2 h à t.a., depois 30 min. a 0-5 °C num banho de gelo antes de serem filtrados. O bolo do filtro foi lavado com 10 mL de 2-metil-tetrahidrofurano frio e depois seco no forno de vácuo a 45 °C para dar o composto racémico de título (5,2 g, 12,6 mmol, 63% de rendimento) : MS (ES+) m/z 413 [M+H]+. (Ir,1'R,4R)-4-Metoxi-5"-metil-6'—[5—(prop-l-in-1-il)piridin-3-il]-3'H-dispiro-[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina (isómero 1)
Método C
Uma solução de (lr,4r)-4-metoxi-5"-metil-6'-(5-prop-l-in-l-ilpiridin-3-il)-3'H-dispiro-[ciclohexano-1,2'-indeno-1', 2"-imidazol]-4"-amina (Exemplo 20a método B, 4,85 g, 11,76 mmol) e EtOH (75 mL) foi agitada a 55 °C. Adicionou-se uma solução de ácido (+)-di-p-toluoil-D-tartárico (2,271 g, 5,88 mmol) em EtOH (20 mL) e agitou-se continuadamente. Após 2 min. um precipitado começou a formar-se. A mistura foi agitada durante 2 h antes de ser arrefecida lentamente a 30 °C e depois agitada durante mais 16 h. O calor foi removido e a mistura foi agitada à t.a. durante 30 min. A mistura foi filtrada e o bolo do filtro lavado com EtOH gelado (45 mL). O sólido foi seco no forno de vácuo a 45 °C durante 5 h, depois o material foi carregado a um recipiente e adicionou-se DCM (50 mL) e solução de NaOH 2,0 M aq. (20 mL). A mistura foi agitada a 25 °C durante 15 min. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com 10 mL de DCM. A fase orgânica foi concentrada in vacuo a um resíduo e adicionou-se 20 mL de EtOH. A solução resultante foi agitada à t.a. enquanto a água (15 mL) foi adicionada lentamente ao recipiente. Um precipitado começou a formar-se lentamente, e a mistura resultante foi agitada durante 10 min. antes de se juntar mais água (20 mL) . A mistura foi agitada à t.a. durante lhe depois filtrada. O bolo do filtro foi lavado com água (15 mL) e seco num forno de vácuo a 45 °C durante um período de 16 h para dar o composto de título (1,78 g, 36% de rendimento): MS (ES+) m/z 413 [M+H]+. Este material é equivalente ao Isómero 1 do Exemplo 20a acima.
Método D A um balão de 500 mL de fundo redondo adicionou-se (lr,1'R,4R)-6'-brorno-4-metoxi-5"-meti1-3'H-dispiro [ciclohexano-1,2'-inden-1',2'-imidazole]-4"-amina como o sal do ácido D(+)-10-camforo sulfónico (Exemplo 19 Método B Passo 5, 25,4 g, 41,7 mmol), KOH 2 M aq. (100 mL) e 2-metil-tetrahidrofurano (150 mL) . A mistura foi agitada durante 30 min à t.a. após o que a mistura foi transferida para um funil de separação e deixado assentar. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com K2CO3 2 M aq. (100 mL). A fase orgânica foi transferida para um balão de 500 mL de fundo redondo seguida pela adição de ácido 5-(prop-l-inil)piridin- 3-il borónico (Intermediário 15, 6,72 g, 41,74 mmol), K2CO3 (2,0 M, 62,6 mL, 125,21 mmol). A mistura foi desgaseifiçada por meio de borbulhamento de Ar através da solução durante 5 min. À mistura foi depois adicionado tetracloropaladato de sódio(II) (0,307 g, 1,04 mmol) e sulfonato de 3-(di-tert-butilfosfónio)propano (0,560 g, 2,09 mmol) seguido por aquecimento da mistura a refluxo (80 °C) durante a noite. A mistura de reação foi deixada arrefecer até à t.a. e as fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída com 2-Me-THF (2x100 mL). Os orgânicos foram combinados, lavados com solução salina de cloreto de sódio e tratados com carvão ativado. A mistura foi filtrada sobre terra de diatomáceas e o bolo do filtro foi lavado com 2-Me-THF (2x20 mL), e o filtrado foi concentrado para dar 17,7 g que foram combinados com 2,8 g de outras corridas. O material foi dissolvido em 2-Me-THF sob aquecimento e colocado sobre sílica (-500 g). A eluição com 2-Me-THF/Et3N (100:0-97, 5:2,5) deu o produto. O solvente foi evaporado, depois co-evaporado com EtOH (absoluto, 250 mL) para dar (9,1 g, 53% de rendimento). O sal de HC1 foi preparado para purificar adicionalmente o produto: O produto foi dissolvido em CH2CI2 (125 mL) sob aquecimento suave, adicionou-se HC1 em Et2<0 (-15 mL) em Et20 (100 mL) , seguido por adição de Et2<0 (-300 mL) para dar um precipitado que foi removido por filtração e lavado com Et20 para dar o sal de HC1. CH2CI2 e NaOH 2 M aq. foram adicionados e as fases separadas. A fase orgânica foi concentrada e depois co-evaporada com MeOH. O sólido formado foi seco numa câmara de vácuo a 45 °C durante a noite para dar o composto de título (7.4 g, 43% de rendimento): XH RMN (500 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 0,97 (d, 1 H) 1,12 - 1,30 (m, 2 H) 1,37-1,51 (m, 3 Η) 1,83 (d, 2 Η) 2,09 (s, 3 Η) 2,17 (s, 3 Η) 2,89 - 3,12 (m, 3 Η) 3,20 (s, 3 Η) 6,54 (s, 2 Η) 6,83 (s, 1 Η) 7,40 (d, 1 Η) 7,54 (d, 1 Η) 7,90 (s, 1 Η) 8,51 (d, 1 Η) 8,67 (d, 1 Η) ; HRMS-TOF (ES+) m/ζ 413,2338 [M+H]+ (calculado 413,2341); pureza enantiomérica > 99,5%; força RMN 97,8±0,6% (não incluindo água).
ENSAIOS BIOLÓGICOS O nível de atividade dos compostos foi testado usando os seguintes métodos:
Ensaio de TR-FRET A enzima secretase β usada no TR-FRET é preparada como se segue: O cADN para a parte solúvel da secreção humana β (AA 1 - AA 460) foi clonado usando o vetor de expressão ASP2-FclO-l-IRES-GFP-neoK de mamífero. O gene foi fundido ao domínio Fc de IgGl (etiqueta de afinidade) e clonado estavelmente nas células HEK 293. sBACE-Fc purificado foi armazenado a -80 °C em tampão Tris, pH 9,2 e tinha uma pureza de 40%. A enzima (forma truncada) foi diluída a 6 pg/mL (1,3 mg/mL do stock) e o substrato (Europium)CEVNLDAEFK(Qsy7) a 200 nM (120 μΜ de stock) no tampão de reação (Acetato de Na, chaps, triton x-100, EDTA pH 4,5). Foi usado o sistema robótico Biomek FX e a Velocidade 11 para todos os manuseamentos de líquidos e as soluções de enzima e substrato foram mantidas em gelo até serem colocados no sistema robótico. A enzima (9 pL) foi adicionada à placa depois adicionou-se 1 pL de composto em dimetilsulfóxido, misturado e pré-incubado durante 10 minutos. O substrato (10 pL) foi depois adicionado, misturado e a reação prosseguiu durante 15 minutos à t.a. A reação foi parada com a adição de solução Stop (7 pL, Acetato de Na, pH 9). A fluorescência do produto foi medida numa placa de leitura Victor II com um comprimento de onda de excitação de 3 40nm e um comprimento de onda de emissão de 615nm. O ensaio foi realizado numa placa Costar de 384 poços de fundo redondo, baixo volume, superfície não de ligação (Corning #3676). A concentração final da enzima foi 2,7 pg/mL; a concentração final de substrato foi 100 nM (Km de ~ 250 nM). O controlo de dimetilsulfóxido, em vez do composto de teste, definiu o nível de atividade de 100% e 0% foi definido pelos poços sem enzima (substituída pelo tampão de reação). Um inibidor de controlo foi também usado no ensaio de dose-resposta e teve um IC50 de ~ 150 nM.
Ensaio de TR-FRET Diluído
Os compostos com uma alta afinidade foram adicionalmente testados num ensaio de TR-FRET diluído, as condições como descritas acima para o ensaio de TR-FRET, mas com 50 vezes menos enzima e um tempo de reação longo de 6,5 h à t.a. no escuro.
Ensaio de libertação de βΑΡΡβ
As células SH-SY5Y foram cultivadas em DMEM/F-12 com Glutamax, FCS a 10% e 1% aminoácidos não essenciais e crioperservadas e armazenadas a -140 °C a uma concentração de 7,5-9,5xl06 células por tubo. As células descongeladas e sementes a uma conc. de cerca de 10000 células/poço em DMEM/F-12 com Glutamax, FCS a 10% e 1% de aminoácidos não essenciais a uma placa de 384 poços tratadas com cultura de tecidos, 100 pL de susp de células/poço. As placas de células foram depois incubadas durante 7-24 h a 37 °C, 5% de CO2. O meio celular foi removido, seguido por adição de 30 pL de composto diluido em DMEM/F-12 com Glutamax, FCS a 10%, 1% de aminoácidos não essenciais e 1% de PeSt a uma conc. final de DMSO a 1%. Os compostos foram incubados com as células durante 17 h (durante a noite) a 37 °C, 5% de CO2. Placas Meso Scale Discovery (MSD) foram usadas para a deteção da libertação de εΑΡΡβ. Placas εΑΡΡβ MSD foram bloqueadas em BSA a 1% em tampão de lavagem Tris (40 pL/poço) durante 1 h com agitação à t.a. e lavadas 1 vez em tampão de lavagem Tris (40pL/poço). Foram transferidos 20 pL de meio para as microplacas εΑΡΡβ MSD pré-bloqueadas e lavadas, e as placas de células foram adicionalmente usadas num ensaio ATP para medir a citotoxicidade. As placas de MSD foram incubadas com agitação à t.a. durante 2 h e o meio eliminado. Adicionou-se 10 pL de anticorpo de deteção (1 nM) por poço seguido por incubação com agitação à t.a. durante 2 h e depois eliminado. 40 pL de Tampão de Leitura foram adicionados por poço e as placas foram lidas num SECTOR Imager.
Ensaio de ATP
Como indicado no ensaio de libertação de εΑΡΡβ, após transferir 20 pL de meio das placas de células para deteção de εΑΡΡβ, as placas foram usadas para análise de citotoxicidade usando o kit de proliferação celular/citotoxicidade ViaLightTM Plus da Cambrex BioScience que mede o ATP celular total. O ensaio foi realizado de acordo com o protocolo do fabricante. Resumidamente, 10 pL de reagente de lise celular foram adicionados por poço. As placas foram incubadas à t.a. durante 10 min. Dois min após a adição de 25 pL de reagente ViaLightTM Plus ATP reconstituído, a luminescência foi medida num contador multilabel Wallac Victor2 1420. Um limiar de Tox é um sinal abaixo de 75% do controlo.
Resultados
Valores de IC50 típicos para os compostos exemplo incluindo formas de realização da presente invenção são na gama de cerca de 0,1 até cerca de 100, 000 nM. Os dados biológicos nos compostos finais exemplificados são dados abaixo na Tabela 2.
Tabela 2
Lisboa,15 de maio de 2017

Claims (6)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Um composto que é (lr, 1'R,4R)-4-metoxi-5"-metil-6'-[5-(prop-l-in-l-il)piridin-3-il]-3'H-dispiro[ciclohexano-1,2'-indeno-1',2"-imidazol]-4"-amina:
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  2. 2. Uma composição farmacêutica compreendendo como componente ativo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em associação com pelo menos um excipiente, transportador ou diluente farmaceuticamente aceitável.
  3. 3. Um composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso como um medicamento.
  4. 4. Um composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a reivindicação 1, para uso num método para tratar ou prevenir uma patologia relacionada com Αβ, em que e referida patologia relacionada com Αβ é sindrome de Down, uma angiopatia amiloide β, angiopatia amiloide cerebral, hemorragia cerebral hereditária, um distúrbio associado a comprometimento cognitivo, MCI ("comprometimento cognitivo leve"), Doença de Alzheimer, perda de memória, sintomas de défice de atenção associado a Doença de Alzheimer, neurodegeneração associada a Doença de Alzheimer, demência de origem vascular mista, demência de origem degenerativa, demência pré-senil, demência senil, demência associada a doença de Parkinson, paralisia supranuclear progressiva ou degeneração corticobasal.
  5. 5. Composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para uso, de acordo com a reivindicação 4, em que a referida patologia relacionada com β é Doença de Alzheimer.
  6. 6. Composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para uso, de acordo com a reivindicação 4 ou 5, em que o referido uso é em combinação com pelo menos um agente estimulante cognitivo, agente estimulante da memória, ou inibidor da colina esterase.
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