PT1529777E

PT1529777E - Processo e intermediário oxazolidina para a síntese de taxanos

Info

Publication number: PT1529777E
Application number: PT04022031T
Authority: PT
Inventors: Bruno Gabetta; Ezio Bombardelli; Alessandro Pontiroli
Original assignee: Indena Spa
Priority date: 1999-07-06
Filing date: 2000-07-03
Publication date: 2007-01-31
Also published as: SK12002A3; SI1529777T1; EP1192162B1; ATE277932T1; ES2278254T3; DE60014374T2; DK1192162T3; HK1068879A1; IL147445A0; EP1529777B1; EP1529777A2; CA2676424C; CN1158286C; IL172973A0; PL352278A1; JP4823456B2; HUP0202016A3; CN100418958C; AU771737B2; SK287046B6

Description

DESCRIÇÃO "PROCESSO E INTERMEDIÁRIO OXAZOLIDINA PARA A SÍNTESE DE TAXANOS" A presente invenção refere-se a derivados de taxano com actividade anticancerigena. Mais especificamente, a invenção proporciona um processo para a preparação de um intermediário útil para a sintese de 14-p-hidroxi-l,14-carbonato-bacatinas com um substituinte 13-isosserina.

Os taxanos são uma das classes mais importantes de fármacos anticancerigenos desenvolvidas recentemente. Dois dos membros mais representativos desta classe, o Paclitaxel e o seu análogo Docetaxel, são utilizados no tratamento de vários tumores. Presentemente estão em estudo derivados de taxano com actividade antitumoral aumentada e toxicidade reduzida. 0 documento US 5750562 descreve derivados de 10-desacetilbacatina III e de 10-desacetil-14p-hidroxibacatina III com actividade citotóxica e antitumoral. Os derivados de 14-hidroxi bacatina III substituídos na posição 13 com resíduos de isosserina, em particular um grupo N-Boc-p-isobutilisosserinilo, bem como a sua preparação, estão descritos no documento US 5705508. O composto 14p-hidroxi-l,14-carbonato-bacatina V que tem um substituinte N-Boc-p-isobutilisosserinilo na posição 13, de acordo com a seguinte fórmula (I), 1

e as suas composições antitumorais estão descritos no pedido EP N° 943970.4 (pedido original). O composto (I) difere dos derivados descritos no documento US 5705508 pela configuração do 7-hidroxilo.

Como descrito no pedido de patente EP (943970.4), o composto (I) e o correspondente epimero 7-beta podem ser preparados pelos passos seguintes (processo A): a) transformação de 14p-hidroxi-10-desacetilbacatina III ou V no derivado 7-trietilsililado; b) preparação do derivado 1,14 carbonato a partir do produto do passo (a); c) acetilação selectiva do 10-hidroxilo; d) reacção do produto do passo (c) com ácido (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4-dimetoxifenil)-4-isobutil-l-oxazolidino-5-carboxilico; e) clivagem dos grupos protectores trietilsililo e dimetoxibenzilideno do produto do passo (d). 2 A sequência de passos do processo A pode ser invertida obtendo-se assim o produto final com rendimentos comparáveis, de acordo com o seguinte processo B: a') acetilação selectiva do hidroxilo em C-10 de 14 β -hidroxi-10-desacetilbacatina III ou V; b') preparação do derivado 1,14 carbonato a partir do produto do passo (a'); c') sililação do 7-hidroxilo; d') reacção do produto do passo (c') com ácido (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4-dimetoxifenil)-4-isobutil-l-oxazolidino-5-carboxilico; e') clivagem dos grupos protectores trietilsililo e dimetoxibenzilideno do produto do passo (d').

Os reagentes e condições preferidos utilizados nos processos A e B estão descritos em pormenor no pedido original. Ambos os processos incluem a condensação de 14-p-hidroxi-l, 14-carbonato-bacatina III ou V protegida com o ácido (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4-dimetoxifenil)-4-isobutil-l-oxazolidino-5-carboxílico. A presente invenção proporciona um processo para a preparação do último composto, nomeadamente ácido (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4-dimetoxifenil)-4-isobutil-l-oxazolidino-5-carboxilico, que essencialmente compreende os seguintes passos: a) protecção do grupo amino de leucinol com Boc; b) transformação de N-Boc-L-leucinol em N-Boc-L-leucinal; 3 c) preparação da cianidrina do produto do passo (b); d) transformação do nitrilo da cianidrina no correspondente ácido carboxilico; e) formação do éster metilico do ácido carboxilico; f) purificação do éster metilico do ácido (2R,3S)-3-(N-

Boc)amino-2-hidroxi-5-metil-hexanóico; g) condensação do produto do passo (f) com 2,4-dimetoxibenzaldeido dimetil acetal; h) transformação do éster metilico do ácido (4S,5R)-N-Boc-2- (2,4-dimetoxifenil)-4-isobutil-l-oxazolidino-5-carboxílico no correspondente ácido carboxilico.

Tetrahedron Letters, Vol. 38, N° 24, pp. 4273-4276 (1997) descreve a sintese de análogos C-seco de paclitaxel e docetaxel a partir de 7,9-diTes-10-desidro C-secobacatina III.

Estes análogos foram preparados por condensação de um seu precursor com ácidos N-benzoil e N-Boc(4S;5R)-2-(2,4-dimetoxifenil)-4-fenil-5-oxazolidinocarboxílicos. 0 documento US 5621121 descreve a preparação de derivados de taxano por esterificação de bacatina III ou 10-desacetilbacatina III por meio de um ácido oxazolidino-5-carboxílico, que é obtido por reacção de um aldeído com um derivado de fenilisosserina. O documento US 5476954 descreve a preparação de ácido N-Boc-4-aril-oxazolidino-5-carboxílico que parte da reacção de um éster do ácido beta-fenil-glicídico com azida de sódio, seguida 4 por redução da azida formada para dar um éster de beta-fenil-isosserina. Este éster é então N-protegido e feito reagir com um acetal para dar o éster do ácido oxazolidinona carboxilico que pode ser hidrolisado para dar o ácido. 0 processo da invenção está ilustrado no esquema reaccional seguinte:

ESQUEMA

H,H SocHN v >......y * “Λ OH V - V-u II Hf DqcHN CN w _ ^;> ' OH ) \_/ VI VII OH OH •HC!

Bod-IN

V

CHO

IV

ESocHN \ HSOa < ONs

V

0OCHN OH}—{ COOH vm

IX 8 (2S, 3S) 42350 405.4? Ο,,Η,,ΝΟ,

IX

X

XI

De acordo com uma forma de realização preferida, no passo (a) faz-se reagir leucinol com anidrido Boc, e subsequentemente oxida-se a aldeido em solvente DMSO/CH2CI2 utilizando cloreto de oxalilo a uma temperatura abaixo de -60 °C, neutralizando o ácido 5 formado com trietilamina, ou oxidando-o com hipoclorito de sódio a -2 a -5 °C. A cianidrina do passo (c) é preparada por substituição do grupo sulfónico do intermediário l-hidroxi-2-(N-Boc)amino-4-metilpentanossulfonato pelo ião cianeto. A cianidrina é então hidrolisada ao correspondente ácido carboxilico no passo (d) por aquecimento a refluxo em ácido clorídrico concentrado.

No passo (e), converte-se o ácido (2R/S,3S)-3-(N-Boc)amino-2-hidroxi-5-metil-hexanóico no correspondente éster metilico por reacção com diazometano em solução etérea. No passo (f) , o diastereómero (2R,3S) é purificado por cristalização de ciclo-hexano ou de uma mistura de hexano/tolueno. O passo (g) é realizado em THF na presença de p-toluenossulfonato de piridinio removendo o metanol formado; depois de completada a reacção, o p-toluenossulfonato de piridinio é neutralizado com bicarbonato. No passo (h), o éster é hidrolisado numa mistura de metanol/água com carbonato de potássio. A mistura reaccional é subsequentemente acidificada e o produto final é extraido com cloreto de metileno.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Preparação de ácido (4S,5R)-N-Boc-(2,4- dimetoxifenil)-4-isobutil-l-oxazolidino-5-carboxílico

Preparação de N-Boc-L-leucinol (III);

Dissolveu-se 46,8 g de L-leucinol II (400 mmol) em 300 mL de CH2CI2 num balão de 2 L de fundo redondo com três tubuladuras equipado com agitador mecânico, termómetro e ampola de adição. À solução com agitação adicionou-se então, gota a gota, à temperatura ambiente a solução de anidrido Boc (87,2 g, 400 mmol) em CH2CI2 (100 mL) em 90 minutos. Durante a adição dos primeiros 6 25% do anidrido Boc, a reacção foi exotérmica e atingiu 20-30 °C dando uma suspensão que se tornou límpida após agitação à temperatura ambiente durante mais três horas. A mistura foi deixada à temperatura ambiente de um dia para o outro. O solvente foi evaporado sob alto vácuo para se obter o produto desejado como um óleo espesso com rendimento quantitativo (87 g) . O produto foi subsequentemente tratado sem purificações adicionais.

Preparação de N-Boc-L-leucinal (IV) A uma solução de cloreto de oxalilo (26,274 mL, 300 mmol) em 130 mL de cloreto de metileno pré-arrefecida a -60/-65 °C adicionou-se lentamente DMSO (28,4 mL, 400 mmol). A solução tornou-se límpida quando a adição de DMSO foi completada. Após 20 minutos com agitação à mesma temperatura a mistura reaccional foi subsequentemente tratada com uma solução de álcool III (43,7 g, 200 mmol) em CH2CI2 (200 mL) durante 25 min mantendo a temperatura abaixo de -60 °C. Durante a adição do álcool, a mistura reaccional tornou-se turva, e formou-se um precipitado branco. Após 20-25 minutos de agitação à mesma temperatura adicionou-se, gota a gota, uma solução de trietilamina (112 mL, 800 mmol) em CH2CI2 (100 mL) em 40 minutos mantendo a temperatura entre -68 e -62 °C. A mistura reaccional foi então agitada entre -60 e -65 °C durante mais 50 minutos. A TLC da mistura reaccional realizada utilizando 8% de metanol em CH2CI2 como eluente não detectou produto de partida. A solução fria foi então vertida em 800 mL de uma solução gelada contendo 68 g (0,5 mol) de KHSO4. A camada orgânica foi separada e a fase aquosa extraída com CH2CI2 (100 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com KHSO4 aquoso (5%, 1 x 7 200 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL, 50 mL) e concentrada até metade do volume (~250 mL) . O referido material foi utilizado directamente no passo subsequente.

Derivado composto de bissulfito e aldeído (V) A solução de cloreto de metileno do aldeído (IV) num balão de 2 L de fundo redondo com três tubuladuras equipado com agitador mecânico, termómetro e ampola de adição foi tratada em 10 minutos e a -5 °C com uma solução de bissulfito de sódio (41,7 g, 400 mmol) em água (200 mL) e subsequentemente com n-Bu4NHSC>4 (678 mg, 2 mmol) . A solução foi arrefecida a -5 °C. A mistura reaccional foi agitada a -5 até -0 °C durante 5-6 horas e subsequentemente de um dia para o outro à temperatura ambiente. A fase aquosa contendo o composto V foi separada e lavada com CH2CI2 (2 x 20 mL). (2-Ciano-3-(N-Boc)-amino-5-metil-hexanol (VI)

Adicionou-se à solução aquosa acima referida (-250 mL) CH2CI2 (120 mL) e a mistura reaccional foi arrefecida a 0-5 °C num banho de gelo. Subsequentemente adicionou-se KCN sólido (15 g, 230 mmol) à mistura reaccional e a solução foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com CH2CI2 · As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (1 x 50 mL), secas sobre MgS04 e evaporadas para dar o produto como um líquido viscoso incolor (43 g) . O produto tinha [a] d 51,11 (c=2, MeOH) e era uma mistura cerca de 2:1 dos derivados VI 2(R),3(S) e 2(S),3(S). O rendimento foi de 89% em relação ao L-leucinol de partida. 8 Ácido (2RS,3S)-3-amino-2-hidroxi-5-metil-hexanóico (VII) A mistura do nitrilo VI em bruto acima referida (43 g) foi tratada com 150 mL de HC1 concentrado (37%) (150 mL) e aquecida a refluxo de um dia para o outro para dar o ácido VII* em bruto. O excesso de ácido clorídrico foi removido por evaporador rotativo e o resíduo foi evaporado com água (100 mL) para remover HC1. O resíduo foi então dissolvido em 150 mL de água e adicionou-se 100 mL de acetona, depois foi tratado com 33 mL de uma solução de NaOH 6,25 M para ajustar o pH para 5. Adicionou-se então mais acetona (500 mL) à solução que foi deixada em repouso de um dia para o outro a 4 °C. O sólido precipitado foi subsequentemente filtrado e o bolo sólido foi lavado com acetona e seco sob vácuo para dar ácido VII em bruto (6,5 g) contendo uma mistura cerca de 3:1 de derivados 2(R),3(S) e 2(S),3(S) de composto VI. O filtrado foi evaporado e adicionou-se água para ajustar o volume da solução para 75 mL.

Adicionou-se então acetona (1 L) à solução que foi deixada em repouso de um dia para o outro a 4 °C num frigorífico. O sólido precipitado foi então filtrado e o bolo sólido foi lavado com acetona e seco sob vácuo para dar uma segunda quantidade de produto (18 g) contendo NaCl sólido com uma mistura cerca de 1:1 de derivados 2(R),3(S) e 2(S),3(S) de VII. O primeiro produto VII recuperado (22,5 g) foi aquecido em água (120 mL) sem obtenção de dissolução completa e depois arrefecido em gelo e filtrado para dar 12,5 g de ácido VII ainda contaminado por cerca de 10% de derivado 2(R),3(S) de VII indesejado. Este produto foi seco e misturado com a mistura 1:1 acima referida da segunda colheita de cristais (total ~21 g). 9 (VIII) Ácido (2RS,3S)-3-(N-Boc)-amino-2-hidroxi-5-metil-hexanóico (A) 0 ácido VIII 2 (R) , 3 (S) em bruto, com cerca de 90% de pureza, (2,5g, 77,6 mmol) foi dissolvido numa mistura de água-THF 1:1 (80 mL), depois adicionou-se trietilamina (13,5 mL) e subsequentemente anidrido Boc (18,5 g, 85 mmol) à mistura reaccional, a solução global foi agitada durante 40 horas à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado por evaporador rotativo, adicionou-se 60 mL de água e 60 mL de acetato de etilo mantendo a mistura global com agitação. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (30 mL) . As fases orgânicas combinadas foram extraídas com carbonato de sódio aquoso a 10% (30 mL, 20 mL) . O extracto básico foi então combinado com uma fase aquosa acidificada com ácido clorídrico 2 M (~55 mL) para ajustar o pH da solução para 2. O ácido VIII foi então extraído da fase aquosa com acetato de etilo (3 x 40 mL) e os extractos heteroacéticos foram lavados com água (20 mL), secos (MgSC>4) e evaporados para dar o derivado Boc VIII em bruto como um xarope (20 g, 99%) . (B) O ácido VII 2R,3S em bruto, com uma pureza de cerca de 50%, contaminado por NaCl (27 g), foi dissolvido numa mistura de água-dioxano 1:1 (120 mL) . Adicionou-se então trietilamina (20 mL) à mistura reaccional e depois anidrido Boc (26,16 g, 120 mmol) . A solução foi agitada durante 40 horas à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado por evaporador rotativo e adicionou-se água (100 mL) e acetato de etilo (100 mL) ao resíduo mantendo a agitação durante mais alguns minutos. A fase orgânica foi separada e extraída com carbonato de sódio aquoso a 10% (45 mL, 30 mL) . Os extractos de carbonato de sódio foram então combinados com a fase aquosa, acidificados com ácido clorídrico 1 10 Μ (-165 mL) e extraídos com acetato de etilo (3 x 60 mL) , depois lavados com água (30 mL), secos (MgS04) e evaporados para dar VII Boc em bruto como um xarope (16 g), consistindo numa mistura 1:1 dos isómeros 2R,3S e 2S,3S. Éster metílico do ácido (2R,3S)-3-(N-Boc)amino-2-hidroxi-5-metil-hexanóico (IX)

Preparou-se diazometano a partir de Diazald seguindo o processo descrito em T. H. Black [Aldrichimica Acta, 16, 3 (1983)] . (A) Uma solução do ácido VIII em bruto (20 g, 56,6 mmol) em CH2CI2 (75 mL) foi lentamente adicionada a uma solução etérea de diazometano fria (-77 mmol) e a mistura foi deixada durante duas horas num banho de gelo. A cor da solução nesse passo tornou-se branca indicando assim que a maior parte do diazometano tinha sido consumido. A solução foi então concentrada e o resíduo cristalizado de uma mistura de tolueno (20 mL) e hexano (70 mL) . Após arrefecimento de um dia para o outro num frigorífico a 4 °C, os cristais do derivado IXA 2R,3S puro foram recolhidos por filtração. O rendimento foi de 15 g. As águas mães deram cerca de 5 g de uma mistura isomérica 1:1. (B) Utilizando o mesmo procedimento, uma mistura 1:1 de ácido VIII (16 g) foi transformada numa mistura 1:1 de ésteres IXA e IXB. 0 material das águas mães (5 g do passo A) foi adicionado e 0 material foi combinado e separado por cromatografia em coluna utilizando hexano-acetato de etilo como eluente (9:1 até 7:3). Utilizou-se ninidrina como revelador para as placas de TLC. O composto apoiar, Rf 0,75 (hexano:acetato de 11 etilo: 7:3) foi identificado como o éster IXA desejado (2R,3S), que foi recristalizado de ciclo-hexano para dar IXA como agulhas incolores (8 g) p.f. 95-96°C, [ OC] D 72,4 (c=l, MeOH) . O composto polar, Rf 0,5 (hexano-acetato de etilo 7:3) foi identificado como IXB (2S,3S) e foi recristalizado de ciclo-hexano para dar 10 g de IXB como agulhas incolores. 2,4-Dimetoxibenzaldeido dimetil acetal

Uma mistura de 2,4-dimetoxibenzaldeido (41,25 g, 0,25 mol), ortoformato de trimetilo anidro (50 mL) e nitrato de amónio (2 g dissolvidos em 20 mL de metanol) foi aquecida a refluxo durante 6 horas (o RMN de da mistura reaccional mostrou uma conversão de 65-70%). Primeiro, a mistura reaccional quente era uma solução limpida, mas à medida que a reacção decorreu o sólido precipitou. Adicionou-se uma segunda porção de ortoformato de trimetilo anidro (20 mL) e parte do metanol foi removido por destilação.

Quando a temperatura da mistura reaccional atingiu 95-100 °C, todo o sólido se tinha dissolvido no balão. A solução foi arrefecida até à temperatura ambiente e adicionou-se Na2C03 anidro (5 g) , com agitação durante 30 min. Subsequentemente a solução foi filtrada e o residuo foi destilado por destilação fraccionada sob vácuo a 0,25 mmHg. A primeira fracção de baixa temperatura consistia sobretudo em excesso de ortoformato de trimetilo e a segunda fracção, que destilou como um óleo incolor a 175-180 °C, era o acetal desejado. Rendimento: 37 g (70%). Éster metílico do ácido (4S, 5R)-N-Boc-2-(2,4-dimetoxi-fenil)-4-isobutil-l-oxazolidino-5-carboxilico (X) 12 A uma solução de éster metílico do ácido (2R,3S)-3-(N-Boc)amino-2-hidroxi-5-metil-hexanóico (IXA) (34,375 g, 125 mmol) em THF anidro (150 mL) adicionou-se 2,4-dimetoxibenzaldeido dimetil acetal destilado (30 g, 142 mmol) e subsequentemente p-toluenossulfonato de piridinio (Py.Tos; 400 mg). A solução foi aquecida a refluxo suave num balão de 500 mL com três tubuladuras equipado com um separador de Dean-Stark. Após cerca de 6 horas a refluxo, removeu-se cerca de 50 mL de metanol contendo THF produzido durante a reacção. Retirou-se uma amostra para análise por RNM (em CDCI3). O pico a δ = 1,41 ppm desapareceu (1) e apareceu um novo pico a δ = 1,24 ppm para o éster metilico protegido (2). Após 6 horas a refluxo, a conversão era de cerca de 70-75%.

Adicionou-se uma aliquota fresca de THF anidro (50 mL), depois uma quantidade de 2,4-dimetoxibenzaldeido acetal (5,0 g; 24 mmol). A mistura reaccional foi aquecida a refluxo durante mais 2,5 horas, periodo durante o qual se removeu cerca de 50 mL de THF utilizando o aparelho de Dean-Stark. A análise subsequente por RMN de ^H mostrou a transformação completa do material de partida.

Adicionou-se à mistura reaccional uma solução aquosa saturada de NaHC03 (15 mL) e a mistura foi agitada durante 15 minutos para neutralizar Py.Tos. Subsequentemente adicionou-se éter t-butil metilico (85 mL) e água (15 mL) e a fase orgânica foi separada. A fase aquosa foi extraída com éter t-butil metilico (20 mL) e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (30 mL) e evaporadas até um residuo (66 g) de produto X em bruto. 13

Hidrólise de éster X para dar ácido XI

0 éster X em bruto (22 g, 42 mmol) foi dissolvido em 100 mL de metanol e adicionou-se água (50 mL) contendo 8,7 g de carbonato de potássio. Após agitação de um dia para o outro à temperatura ambiente, a reacção foi considerada completa por monitorização por TLC (tolueno-acetato de etilo: 4,5:1). A análise por TLC foi confirmada por análise por RMN de -*-H, verificando o desaparecimento do pico do éster metilico. O metanol foi evaporado a um temperatura não superior a 40 °C sob vácuo (cerca de 60 g de resíduo) e adicionou-se água (150 mL) ao resíduo. A suspensão aquosa foi extraída com acetato de etilo (5 x 50 mL) para remover o benzaldeído e o excesso de benzaldeído dimetil acetal. Adicionou-se 90 mL de cloreto de metileno à fase aquosa, a mistura foi arrefecida num banho de gelo e o sistema bifásico foi tratado com cerca de 125 mL de NaHS04 1 M (pH = 3) com agitação forte. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com cloreto de metileno (75 mL) . Os extractos de cloreto de metileno combinados foram lavados com água (30 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL) e secos sobre MgS04. A solução foi mantida a -60 °C até à utilização seguinte. O rendimento de produto final como um sólido incolor foi de 16 g, cerca de 93% com base no produto de partida.

Exemplo 2: Síntese de 1,14 Carbonato de 13-(N-Boc-β-isobutilserinil)-14P-hidroxibacatina III

Dissolveu-se 43,26 g de 14p-hidroxi-desacetilbacatina III conjuntamente com 22,3 mL de N-metil-imidazole em 230 mL de DMF num balão de vidro de 500 mL com fundo redondo; a esta solução 14 adicionou-se, com agitação forte à temperatura ambiente em 1 h 14 mL de trietilclorossilano. Quando a reacção estava terminada, a mistura reaccional foi vertida em 2 L de água com agitação forte. Formou-se um precipitado abundante, que foi deixado a 4 °C de um dia para o outro. 0 precipitado foi então filtrado, muito bem lavado com água e subsequentemente com n-hexano. Após secagem sob vácuo obteve-se 48,1 g de 7-Tes-10-desacetilbacatina III (XII) contendo uma pequena percentagem do derivado 7,10, com as seguintes caracteristicas fisico-quimicas: RMN de 1H (CDCI3 200 MHz): δ (ppm) = 0,55 (6H, t, J = 7,8 Hz, 7-OTES CH2), 0,94 (9H, q, J = 7,8 Hz, 7-OTES CH3), 1,18 9 (3H, s, CI6H3), 1,20 (3H, s, C17H3), 1,77 (3H, s, C19H3), 1,90 (1H, ddd, J = 2,4, 10,8, 13,2 Hz, ΟβΗβ) , 2,12 (3H, d, J = 1,6 Hz, C18H3), 2,31 (3H, s, 4-OCOCH3), 2,48 (3H, ddd, J = 14,3, 9,8, 6,5

Hz, C6HCC) , 2,73 (1H, d, J = 5,5 Hz, OH), 3,79 \—1 II Ç) 7,1 Hz, C3H), 4,20 (1H, dd, J = = 1,0, 8,3 Hz, C2ΟΗβ) , 4,31 (1H, d, J = co Hz, C20HCC) , 4,39 (1H, dd, J = 6,4, 10,7 Hz, C7H) , 4,77 (1H, d, J = 5,8 Hz, C14H), 4,94 (1H, dd, J = 2,1, 9,7 Hz, (C5H) , 5, 05 (1H, m, C13H), 5,13 (1H, d, J= 1,9 Hz, C10H) , 6,05 (1H, d, J = 7,3 Hz, C2H), 7,41-8,09 (5H, m, Ph).

Espectro de Massa (NH3, DEP/CI, iões positivos): (m/z) 718 [(M+NH4)+, 100%], 701 [M+H)+, 39%]. O composto resultante foi dissolvido em 300 mL de uma mistura de cloreto de metileno/piridina 3:1 sob atmosfera de azoto; esta solução foi adicionada com agitação a uma solução de fosgénio (214 mL de uma solução 1,9 M em tolueno) pré-arrefecida a -10 °C, mantendo a temperatura desde -5 até -10 °C durante a adição. 15 A mistura reaccional foi agitada durante 30', depois agitada com 700 mL de uma solução saturada de NaHC03 mantendo a temperatura abaixo de ou a 2 °C. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada para remover a piridina. A fase orgânica foi seca sobre MgSC>4 e concentrada até à secura. Obteve-se 46,6 g de 7-Tes-l,14-carbonato de 10-desacetilbacatina III que pode ser utilizado directamente nas reacções seguintes.

Dissolveu-se 31 g do composto em 250 mL de THF anidro absoluto; a solução foi arrefecida a -50 °C e adicionou-se 48 mL de uma solução 1 M de LiHMDS em 2 minutos e agitou-se durante 20 minutos à mesma temperatura. Adicionou-se 3,7 g de cloreto de acetilo durante 40 min, com agitação. Deixou-se que a temperatura da reacção aumentasse para 0 °C agitando durante 2 h. Depois de completada a reacção, a mistura foi tratada com uma solução saturada de NH4CI e diluida com acetato de etilo. As fases foram separadas e a solução aquosa foi diluida com acetato de etilo até esgotado o produto. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água, depois secas sobre MgS04 e concentradas até à secura.

Obteve-se 33 g de 14p-hidroxi-7-Tes-l,14-carbonato-bacatina III, impura devido aos compostos das reacções anteriores. Este composto foi cromatografado em gel de silica eluindo o produto puro com uma mistura de acetato de etilo/CH2Cl2 9:1. Obteve-se 30 g do produto (XIII) desejado, com as seguintes características:

O 16 RMN de !h (CDCI3 200 MHz): δ (ppm) = 0,55 (6H, t, J = 7,8

Hz, 7-OTES CH2), 0,95 (9H, q, J = 7,8 Hz, 7-OTES CH3), 1,16 (3H, s, CI6H3), 1,32 (3H,s, C17H3), 1,77 (3H, s, C19H3), 1,88 (1H, ddd, J = 2,4, 10,8, 13,2 Hz, 06Ηβ), 2,21 (3H, d, J = 1,6 Hz, CI8H3), 2,19 (3H, s, IO-OCOCH3), 2,31 (3H, s, 4-OCOCH3) , 2,48 (3H, ddd, J = 14,3, 9,8, 6,5 Hz, C6HCC) , 2,73 (1H, d, J= 5,5 Hz, OH) 3,72 (1H, d, J = 7,1 Hz, C3H) , 4,20 (1H, d, J= 8,3 Hz, 020Ηβ) , 4,31 (1H, d , J = 8,6 Hz, C20HCC) a \—1 dd, J = 6,4, 10,7 Hz, C7H), 4,79 (1H, d, J =5,8 Hz, C14H), 4,94 (1H, dd, J = 2,1, 9,7 Hz, (C5H) , 5, 02 (1H, m, C10H), 5,05 (1H, m, C13H) , 6,09 (1H, d, J = 7,3 Hz, C2H) , 7,41-8,09 (5H, m, Ph).

Espectro de Massa (NH3, DEP/CI, iões positivos): (m/z) 759 [(M+NH4)+, 19%] , 743 [M+H)+, 100%].

Colocou-se 20 g de 14p-hidroxi-7-Tes-l,14-carbonato-bacatina III juntamente com 300 mL de tolueno anidro absoluto num balão de 1 L com fundo redondo, e adicionou-se 10 g de ácido (4 S,5R)-N-Boc-2-(2,4-dimetoxifenil)-4-isobutil-l-oxazolidino-5-carboxílico e 2 g de N, N-dimetilaminopiridina (DMAP) e 9,5 g de diciclo-hexilcarbodiimida (DCC) dissolvidos em CH2CI2· A mistura reaccional foi aquecida a refluxo durante 3 h, depois foi arrefecida, o produto de ureia separou-se por filtração e as águas mães foram lavadas com solução saturada de NaHCC>3 para remover o ácido que não reagiu, depois com ácido clorídrico diluído para remover a DMAP e finalmente de novo com NaHC03 até à neutralidade. A fase orgânica foi concentrada até à secura para se obter 41,5 g de produto que podia ser utilizado directamente no passo seguinte. 17 40 g deste composto foram desprotegidos em dois passos, por remoção primeiro de Tes e depois de 2,4-dimetoxibenzaldeido. Dissolveu-se 40 g do composto em 100 mL de uma mistura de acetonitrilo/piridina (80:100) sob azoto e arrefeceu-se a 0 °C; adicionou-se 13 mL de fluoreto de piridinio e o conjunto foi deixado com agitação durante 24 h. A solução foi vertida em 2 L de água e o produto foi filtrado e seco sob vácuo. O residuo foi dissolvido em 60 mL de cloreto de metileno e a esta solução adicionou-se 40 mL de HC1 0,6 N em metanol com agitação forte e a 0 °C. A mistura reaccional foi deixada durante 2 h com agitação, depois diluída com 150 mL de cloreto de metileno e agitada com uma solução de NaHC03 ajustando o pH para 6-7. A fase orgânica foi concentrada até à secura e o resíduo foi cristalizado de acetona hexano. Após secagem, obteve-se 16 g de 13-(N-Boc-p-isobutilisosserinil)-14p-hidroxibacatina-l,14-carbonato, com as seguintes características físico-químicas e espectroscópicas: Fórmula: C44H57NO17 Aspecto: pó branco.

Ponto de fusão: 245 °C.

Tabela 1: Desvios químicos (ppm) de RMN de ^-H em solução de CDCI3 (200 mHz) 18

Ppm, multiplicidade H Ppm, (Hz) multiplicidade (Hz) 6,09-d (7,8) 2 ' 4,30-dd (6,4; 3,68-d (7,4) 3 ' 4,08-m 4,91-dd (9,7; 2,5) 4 ' a 1,21-m 2,52-ddd (14,8; 9,8; 6, 9) 4 'b 1,43-m 1,8 6-m 5 ' 1,65-m 4,37-m 6' 0,96-d (6,3) 6,25-s 7 ' 0,95-d (6,3) 6,44-d (largo, 6,9) 4-OCOCH3 2,40-s 4,84-d (6,9) IO-OCOCH3 2,22-s 1,25-s Boc 1,35-s 1,32-s o-benzoil 8,01-m 1,87-d (1,6) m-benzoil 7,4 6-m 1,69-s p-benzoil 7,58-m 4,27-d (8,4) 4,20-d (8,4) 3-NH 4,72-d (9, 0) 19

Tabela 2: Desvios químicos CDCI3 (50,308 MHz) (ppm) de RMN de em solução de c Ppm, multiplicidade (Hz) 9 201,8-s 1' 172,6-s 4-OCOCH3 170,5-s IO-OCOCH3 170,2-s 2-COPh 164,3-s C=0 (Boc) 155,8-s O II o| 151,4-s (carbonato) 12 139,4-s 11 133,1-s (Me)3C(Boc) 80,0-s 5 83,8-d 1 87,7-s 4 80,0-s 2 69,0-d 20 75,5-t 2 ' 73,3-d 7 71,2-d 10 74,3-d 13 74,1-d 14 79, 1-d C Ppm, multiplicidade (Hz) 8 58,2-s 3' 51,2-d 3 44,6-d 15 41,3-s 4 39,9-t 6 34,9-t (CH3)3C Boc 27,7-q 17 25,5-q 16 22 r6-q 4-OCOCH3 22,0-q IO-OCOCH3 20,2-q 5' 24,3-d 6' 22,7-q 7 ' 21,6-q 18 14,6-q 19 9,8-q q-benzoíl 127,5-s o-benzoí1 129,5-d m-benzoí1 128,6-d p-benzoí1 133,7-d

Espectro de Massa: (NH3, dep/CI, iões positivos): <m/z) 889 [(MNH4)+], 832 [(MNH4-(CH3)3c)+]: 772 [(MNH4-BOCNH2)+] 20 (ΝΗ3, DEP/CI, iões negativos): (m/z) 871 (M ), 260 (cadeia lateral)

Espectro no Infravermelho (pastilha de KBr): 3521, 3321, 2971, 2953, 1826, 1762, 1706, 1526, 1366, 1238, 1165, 1072, 723 cm-l

Espectro no UV (MeOH): 231,276 e 284 nm; -Ei% a 231 nm = 180,99 -Ei% a 276 nm = 14,094 -Ei% a 284 nm = 12,182

Exemplo 3: Síntese de 1,14 carbonato de 13-(N-Boc-β-isobutilserinil)-14P-hidroxi-bacatina V

Dissolveu-se 5 g de 1,14 carbonato de 13-(N-Boc-β-isobutilserinil)-14β-ϊιίάηοχ^3θ3ίίη3 III, em 500 mL de tolueno sob atmosfera de árgon, desoxigenando completamente a solução; adicionou-se 80 mg of DBU (diazabiciclo[5,4,0]-7-undeceno) e a mistura reaccional foi aquecida a refluxo durante 1 hora sob atmosfera de árgon. A solução foi diluída com 100 mL de acetato de etilo e lavada com água. A fase orgânica foi evaporada até à secura para se obter 4,5 g de 1,14 carbonato de 13-(N-Boc-β-isobutilserinil)-14p-hidroxibacatina V com as seguintes características físico-químicas e espectroscópicas: 21 Fórmula: C44H57NO17

Aspecto: pó branco Ponto de fusão: 245 °C

Espectro de Massa (TSP+) : (m/z) 872 (MH+) ; 816 (MH+ (CH3)2C=CH2); 772 (8I6-CO2); 756 (816-AcOH); 712 (772-AcOH)

Espectro no Infravermelho (pastilha de KBr): 3450, 2963, 1813, 1740, 1702, 1247, 1091, 710 cm-1

Espectro no UV (MeOH): 200 e 230 nm -Ei% a 200 nm = 370,9 -E]_% a 230 nm = 193,2 22

Tabela 3: Desvios químicos (ppm) de RMN de -*-H em solução de CDCI3 (200 MHz) H Ppm, multiplicidade H Ppm, (Hz) multiplicidade (Hz) 2 6, 18 d (7, 9) 2 ' * 4,75 d (8, 6) 3 3, 80 d (7, 8) 3 ' 4,01 m 5 4, 93 dd (7,8; 4,8) 4 ' a 1,25 m 6 2,23 m 4 'b 1,48 m 7 3,76 m 5 ' 1, 67 m 10 6,79 s 6' 0, 99 d (6,4) 13 6, 44 d (6, 7) 7 ' 0, 97 d (6,4) 14 4,88 d (7, 0) 4-OCOCH3 2,58 s 16 1,29 s IO-OCOCH3 2,20 s 17 1,31 s Boc 1,37 s 18 1,87 d (1,5) o-benzoí1 8,06 m 19 1,71 s m-benzoí1 7,49 m 20 4,38 s p-benzoí1 7, 61 m 3'-NH* 4, 60 d (11,2) *Pode ser invertido 23

Tabela 4: Desvios químicos (ppm) de RMN de em solução de CDCI3 (50,308 MHz) c Ppm, C Ppm, multiplicidade multiplicidade (Hz) (Hz) 9 206, 1 s 8 58,2 s 1 ' 173,1 s 3 ' 52,0 d 4-OCOCH3 172,7 s 3 40,4 d IO-OCOCH3 169,3 s 15 41,5 s 2-COPh 165,1 s 4 ' 40, 6 t C=0 (Boc) 156, 6 s 6 35,2 t O 11 o| 152,1 s (CH3)3C Boc 28,4 q (carbonato) 12 137,6 s 17 25,4 q 11 134,0 s 16 22,4 q (Me)3C (Boc) 81,7 s 4-OCOCH3 22,7 q § 5 82,7 d IO-OCOCH3 18, 6 q 1 8 8,5 s 5 ' 25, 1 d 4§ 80,7 s 6' 23,4 q 2 6 9,9 d 7 ' 20, 9 q 20 77,2 t 18 Λ 15,2 q 2 ' 0 74, 6 d 19Λ 16, 2 q 7° 77, 6 d q-benzoí1 128, 3 s 0 O \—1 74,2 d o-benzoí1 130, 2 d 13° 76, 0 d m-benzoí1 128, 2 d 0 \—1 79, 9 d p-benzoí1 134, 4 d *, §, °, Λ = Podem ser invertidos

Exemplo 4: Preparação de 1,4 carbonato de 14P-hidroxi-7-Tes

bacatina III A uma solução de 11,2 g de 10-desacetil-14-hidroxibacatina III em 50 mL de tetra-hidrofurano seco adicionou-se 0,72 g de CeCl3.7H20 e 7,3 mL de anidrido acético. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas; durante este período a mistura tornou-se homogénea. Adicionou-se 10 g de gelo e a mistura global foi agitada durante 1 hora. O tetra-hidrofurano foi removido por evaporação sob vácuo e o resíduo foi diluído com 200 mL de H2O. O precipitado foi filtrado e seco sob vácuo na presença de P2O5; o produto foi cristalizado de acetato de etilo para dar 10 g de 14-hidroxibacatina III com as seguintes características: P.f.: 236-8 0C; IV (KBr) : 3474, 1739, 1400, 1240, 1090, 1049 cm-l. RMN de !η (CDCI3, 200 MHz) ; 8,07 (d, J = 8 Hz, Bz) , 7,55 (d, J = 8 Hz, Bz), 7,44 (t, J = 8 Hz, Bz), 6,31 (s, H-10), 5,80

(d, J = 7 Hz, H-2), 4,97 (br d, J = 8 Hz, H-5), 4,73 (br, d, J = 4 Hz, H-13), 4,41 (m, H-7), 4,24 (d, J = 4 Hz, H-14), 4,20 (d, J = 7 Hz, H-20a) , 4,06 (d, J = 7 Hz, H20b) , 3,89 (J 0 (Hz, H-3) , 2,29 (s, OAc) , 2,22 (s, OAc) , 2,04 (s, H-18), 1,66 (s, H-19), 1,25, 1,11 (s, H-l6 e H-17).

Num balão de quatro tubuladuras equipado com agitador, ampola de adição, termómetro e condensador de refluxo arrefecido a -12 °C, colocou-se 52,8 mL de uma solução 1,9 M de fosgénio em tolueno. A esta solução adicionou-se gota a gota 11,6 g de 14-hidroxi bacatina III dissolvida em 53 mL de cloreto de metileno e 17,5 mL de piridina com agitação em 30 minutos. A temperatura foi mantida entre -6 e -10 °C. Após 30 minutos adicionou-se 50 mL de 25 solução saturada de NaHC03 com agitação mantendo um controlo apertado da temperatura. Após aquecimento até à temperatura ambiente, as fases foram separadas. A fase aquosa foi re-extraida com cloreto de metileno e as fases orgânicas foram lavadas com 45 mL de HC1 2 N ajustando o pH para cerca de 1. A fase orgânica foi lavada com HC1 0,1 N e depois com NaHC03, depois seca sobre Na2S04 e evaporada até à secura para se obter quantitativamente 11,5 g de 14-hidroxibacatina-l,14 carbonato.

Dissolveu-se 11,5 g de 14-hidroxibacatina-l,14 carbonato em 50 mL de DMF e adicionou-se 1,1 equivalentes de clorotrietilsilano e 3 equivalentes de N-metilimidazole à temperatura ambiente. Depois de completada a reacção, a mistura foi vertida em 500 mL de H2O e o precipitado foi filtrado e bem lavado com H2O, depois seco para se obter 12,8 g de 1,14 carbonato de 14P-hidroxi-7-Tes-baccatina III com as mesmas características que as descritas no exemplo 1.

Exemplo 5: Síntese de 1,14 carbonato de 13-(N-Boc-β-isobutilserinil)-1 iâ -hidroxibacatina III

Partindo de 1,14 carbonato de 1 4β -hidroxi-7-Tes-bacatina III obtido como descrito no exemplo acima, o procedimento foi como se segue. Num balão de 1 L de fundo redondo foram colocados 20 g de 14p-hidroxi-7-Tes-l,14-carbonato-bacatina III juntamente com 300 mL de tolueno anidro absoluto; adicionou-se 10 g de ácido (4 S,5R)-N-Boc-2-(2,4-dimetoxifenil)-4-isobutil-l-oxazolidino-5-carboxílico dissolvido em CH2CI2 e 2 g de N,N-dimetilaminopiridina (DMAP) e adicionou-se 9,5 g de diciclo-hexilcarbodiimida (DCC). A mistura reaccional foi aquecida a refluxo durante 3 h, depois foi arrefecida para o produto de 26 ureia se separar por precipitação e as águas mães foram lavadas com uma solução saturada de NaHCC>3 para remover o ácido que não reagiu, depois com ácido clorídrico diluído para remover a DMAP e finalmente de novo com NaHC03 até à neutralidade. A fase orgânica foi concentrada até à secura para se obter 41,5 g de produto que podia ser utilizado directamente no passo subsequente.

Foram desprotegidos 40 g deste composto em dois passos primeiro por clivagem de Tes e depois de 2,4-dimetoxibenzaldeído. Dissolveu-se 40 g do composto em 100 mL de uma mistura de acetonitrilo/piridina (80:100) sob azoto e a mistura foi arrefecida a 0 °C; adicionou-se 13 mL de fluoreto de piridínio e a mistura foi deixada com agitação durante 24 h. A solução foi vertida em 2 L de água e o produto foi filtrado e seco sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em 60 mL de cloreto de metileno e a esta solução adicionou-se 40 mL de HC1 0,6 N em metanol com agitação forte e a 0 °C. A mistura reaccional foi deixada durante 2 h com agitação, depois foi diluída com 150 mL de cloreto de metileno e agitada com uma solução de NaHC03 ajustando o pH para 6-7. A fase orgânica foi concentrada até à secura e o resíduo foi cristalizado de acetona hexano, depois seco para se obter 16,5 g de 1,14-carbonato de 13-(N-Boc-P-isobutilisoserinil)—14 β— hidroxibacatina III.

Lisboa, 10 de Janeiro de 2007 27

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Processo para a preparação de ácido (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4- dimetoxifenil)-4-isobutil-l-oxazolidino-5-carboxílico, que compreende os seguintes passos: a) protecção do grupo amino de leucinol com Boc; b) transformação de N-Boc-L-leucinol em N-Boc-L-leucinal; c) preparação da cianidrina do produto do passo (b); d) transformação do nitrilo da cianidrina no correspondente ácido carboxilico; e) formação do éster metilico do ácido carboxilico; f) purificação do éster metilico do ácido (2R,3S)-3-(N-Boc)amino-2-hidroxi-5-metil-hexanóico; g) condensação do produto do passo (f) com 2,4-dimetoxibenzaldeido dimetil acetal, para dar éster metilico do ácido (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4-dimetoxifenil)-4-isobutil-l-oxazolidino-5-carboxilico; h) transformação do produto do passo (g) no correspondente ácido carboxilico.
2. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que no passo (a) se faz reagir leucinol com anidrido Boc. 1
3. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que no passo (b) N-Boc-L-leucinol é oxidado a aldeído em solvente DMSO/CH2CI2 utilizando cloreto de oxalilo a uma temperatura abaixo de -60 °C, neutralizando o ácido formado com trietilamina ou oxidando-o com hipoclorito de sódio a -2 a -5 °C.
4. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a cianidrina do passo (c) é preparada por reacção de N-Boc-L-Leucinal com bissulfito seguida por permuta com cianeto.
5. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que no passo (d) a cianidrina é hidrolisada ao correspondente ácido carboxílico por aquecimento a refluxo em ácido clorídrico concentrado, seguido por protecção do grupo amino como derivado Boc.
6. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que no passo (e) o composto ácido (2R/S,3S)-3-(N-Boc)amino-2-hidroxi-5-metil-hexanóico é convertido no correspondente éster metílico por reacção com diazometano em solução em éter.
7. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que no passo (f) o diastereómero (2R,3S) é purificado por cristalização de ciclo-hexano ou de uma mistura de hexano/tolueno.
8. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que o passo (g) é realizado em THF na presença de p-toluenossulfonato de piridínio removendo o metanol formado.
9. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que no passo (h) o éster metílico é hidrolisado ao correspondente ácido carboxílico numa mistura de metanol/água com carbonato. 2 Lisboa , 10 de Janeiro de 2007 3