CZ301764B6 - Taxanové deriváty a zpusob jejich výroby - Google Patents

Abstract

Nový taxanový derivát s protirakovinovým úcinkem, zpusob jeho výroby a zpusob výroby derivátu 14-.beta.-hydroxy-1,14-karbonát-baccatinu III nebo V, které jsou substituované v poloze 13 isoserinovým zbytkem.

Description

Taxanové deriváty a způsob jejich výroby

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká nového taxanu, který je výhodný jako chemoterapeutický prostředek, farmaceutického prostředku, který jej obsahuje, a způsobu výroby 14-p-hydroxy-l,14karbonátových derivátů baccatinu III a V, které jsou substituované v poloze 13 zbytkem izoserinu.

Dosavadní stav techniky

Taxany jsou jedny z nejdúležitějších druhů léčiv proti rakovině vyvinuté v poslední době. Značná 15 účinnost Paclitaxelu a jeho analogu Docetaxelu při léčbě několika nádorů soustředila výzkum na substance s antimikrotubulánií aktivitou. Taxany jsou však charakterizovány zvláště účinným mechanizmem, kterým podporují hromadění mikrotubulů a inhibují depolymerizaci tubulinu. Hlavními nedostatky taxanú používaných v současnosti jsou:

a) nerozpustnost ve vodě, Čímž se určuje použití specifických nosičů, které mohou způsobovat hypersenzitivní reakce,

b) toxicity, které limitují dávky,

c) vývoj rezistentních mechanizmů.

Rezistence buňky na taxany se týkala fenotypu MDR („multiléková rezistence“) způsobená přenašečem P-glykoproteinu, alteracemi (změnami) tubulinu a změnami exprese apoptotických regulačních proteinů.

Aby se nalezly nové účinné molekuly, které mají vyšší rozpustnost a lepší snášenlivost, byly syntetizovány taxanové deriváty Mp-hydroxy-lQ-deacetylbaccatinu III a V.

Některé deriváty 14-hydroxy baccatinu III substituované v poloze 13 zbytky isoserinu jsou uvedeny v US 5 705 508 společně se způsobem jejich výroby.

Podstata vynálezu 40

Nyní bylo zjištěno, že sloučenina podle vzorce I, 14(3-hydroxy-l,14-karbonátový derivát baccatinu V,

(I)

CZ 301764 Bó má značné cytotoxické a protirakovinové účinky a je schopný překonat rezistenci buněčných linií s expresí fenotypu MDR.

Uvedená sloučenina se liší od derivátů popsaných ve výše uvedeném americkém patentu hydro5 xylem v poloze 7, který je v nynějším případě v konfiguraci alfa. 13-(N-Boc-(3-isobutylisoserinyl)-14p-hydroxy baccatin III 1,14-karbonát, který odpovídá derivátu uvedenému v US 5 705 508 jako SB-T-101131, se může použít jako výchozí produkt pro výrobu sloučeniny I. V tomto případě je uvedený derivát baccatinu lil buď zpracován s DBU (diazabicyklo[5,4,0]7-undecen) v methanolu nebo THF, nebo se jednoduše zanechá v roztoku s methylenchloridem io nebo chlorovanými rozpouštědly za přítomnosti alifatických alkoholů jako je methanol, ethanol nebo propanol s bazickou aluminou (allumine) po dobu jedné hodiny až 14 dní. Sloučenina, která má konfiguraci beta na C-7, se převedla pri neutrální nebo mírně bazické hodnotě pH na stabilnější izomer alfa (derivát baccatinu V).

Alternativně se může připravit sloučenina 1 způsobem, který také umožňuje výrobu odpovídajícího epimeru beta na C-7.

Uvedený způsob A zahrnuje následující kroky:

a) transformaci Μβ-hydroxy-l O-deacetylbaccatinu 111 nebo V na derivát s triethylsilylem v poloze 7;

b) výrobu 1,14-karbonátového derivátu z produktu kroku a);

c) selektivní acetylaci 10-hydroxylu;

d) reakci produktu kroku c) s kyselinou (4S,5R)-N-boc-2-{2,4-dimethoxyfenyl)-4-isobutyl1 oxazolidin-5-karboxy lovou;

e) odštěpení ochranných skupin triethyIsily 1 a dimethoxybenzyliden z produktu kroku d).

Podle výhodného provedení způsobu A se triethylchlorosilan používá jako sily lační činidlo v kroku a), zatímco 1,14-karbonátový derivát v kroku b) se připravuje za použití fosgenu v toluenu v roztoku methylenchlorid/pyridin v poměru 3:1 v atmosféře dusíku. V následujícím kroku c) se l4-(3-hydroxy-10-deacetylbaccatin III nebo V 7-Tes-1,14-karbonát převede na sůl LiHMDS v bezvodém THF, přičemž se získá lithiová sůl 10-hydroxy derivátu, který se následně acetyluje acetylchloridem. Kondenzační reakce mezi 14~[3-hydroxy-7-Tes-l,14-karbonátem baccatinu III nebo V a kyselinou (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4-dimethoxyfenyl)-4-isobutyl-l-oxazolidin-5karboxylovou (krok d) se provádí v bezvodém nepolárním organickém rozpouštědle za přítom40 nosti báze a kondenzačního činidla jako je dicyklohexylkarbodiimid (DCC).

Nakonec se v kroku e) odstraní triethy Isily 1 pomocí pyridinium fluoridu v roztoku acetonitril/pyridin v dusíku, zatímco se skupina dimethoxybenzylidenu odstraní v rozpouštědle methylenchloridu za přídavku HC1 v methanolu a následně NaHCO₃.

Sled kroků popsaného způsobu se může tedy obrátit, přičemž se získá konečný produkt ve srovnatelných výtěžcích. Uvedený alternativní způsob B zahrnuje následující kroky:

a) selektivní acetylaci hydroxylu 14(3-hydroxy-10-deacetylbaccatinu III nebo V na C-l 0;

b) přípravu 1,14-karbonátového derivátu z produktu kroku a');

c) silylaci hydroxylu na C-7;

. 9 _

d) reakci produktu kroku c ) s kyselinou (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4-dimethoxyfenyl)-4-isobutyll-oxazolidin-5-karboxylovou;

e) odštěpení ochranných skupin triethylsilyl a dimethoxybenzyliden z produktu kroku d).

Druhý způsob umožňuje řadu výhod jako je možnost získat požadovaný synton (1,14-karbonát7-Tes-baccatin III nebo V) bez chromatografických čištění pouze krystalizací.

Podle výhodného provedení se selektivní acetylace kroku a') provádí anhydridem kyseliny octo10 vé za přítomnosti solí ceru, skandia, ytterbia, výhodně CeCl₃.7H₂O, zatímco zbývající kroky se provádí výše uvedeným způsobem.

Předkládaný vynález také zahrnuje meziprodukty způsoby výroby 14(3-hydroxy-l ,14-karbonátu baccatinu III nebo V jako jsou následující sloučeniny: Ηβ-hydroxy baccatin III nebo V 1,1415 karbonát, 14(3-hydroxy-7-Tes-10-deacetylbaccatin III nebo V, 14~(3-hydroxy-7-Tes-baccatin III nebo V 1,14-karbonát.

Kyselinu (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4-dimethoxyfenyl)-4-isobutyl-l-oxazolidin-5-karboxylovou použitou při přípravě sloučeniny, lze získat podle následujícího schématu:

-3CZ 301764 B6

Schéma

-4Uvedený způsob zahrnuje následující kroky: a) ochranu aminoskupiny leucinolu pomocí Boc;

b) transformaci N-Boc-L-leucinolu na N-Boc-L-leucinal;

c) přípravu kyanhydrinu produktu z kroku b);

d) transformaci kyanhydrin nitrilu na odpovídající karboxylovou kyselinu;

e) vytvoření methylesteru kyseliny karboxylové;

f) čištění methylesteru kyseliny (2R,3S)-3-(N-Boc)amino-2-hydroxy-5-methylhexanové;

g) kondenzaci produktu kroku f) s 2,4-dimethoxybenzaldehyd dimethylacetalem;

h) transformaci methylesteru kyseliny (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4-dimethoxyfenyl)“4-isobutyll-oxazolidin-5-karboxylové na odpovídající karboxylovou kyselinu.

Podle výhodného provedení se kroku a) provádí reakce leucinolu s anhydridem Boc a následně oxidace na aldehyd v roztoku DMSO/CH2CI2 za použití oxalylchloridu při teplotě pod -60 °C, neutralizace vytvořené kyseliny triethylaminem nebo oxidace chlornanem sodným při teplotě -2 až -5 °C. Kyanhydrin kroku c) se vyrobí substitucí sulfonové skupiny meziproduktu 1-hydroxy2-(N-Boc)-amin0-4-methylpentasulfonátu kyanidovým iontem. Kyanhydrin se potom hydroly25 zuje na odpovídající karboxylovou kyselinu v kroku d) při refluxu koncentrované kyseliny chlorovodíkové.

V kroku e) se kyselina (2R/S, 3S)-3-(N-Boc)“amino-2-hydroxy-5-methylhexanová převede na odpovídající methy lester reakcí s diazomethanem v ether ickém roztoku. V kroku f) se diastereo30 mer (2R,3S) čistí krystalizací zcyklohexanu nebo ze směsi hexan/toluen. Krok g) se provedl v THF za přítomnosti pyridinium p-toluensulfonátu, přičemž se odstraní vzniklý methanol; po ukončení reakce se pyridinium p-toluensulfonát neutralizuje kyselým uhličitanem (bikarbonátem). V kroku h) se ester hydrolyzoval ve směsi methanol/voda uhličitanem draselným. Reakční směs se následně okyselí a konečný produkt se extrahuje methy lenchloridem.

Meziproduktem pro syntézu derivátů baccatinu III a V substituovaných v poloze 13 zbytkem N-Boc-fl-isobutylserinyl je kyselina (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4-dimethoxyfenyl)-4-isobutyl-loxazolidin-5-karboxylová.

Nový taxan podle předkládaného vynálezu projevil silný protirakovinový účinek proti rakovinovým buňkám prsu, plic, vaječníku, střeva, prostaty, ledvin, slinivky a také proti buňkám rezistentních ke známým protirakovinovým lékům jako je adriamycin, vinblastin a platinové deriváty.

Proto se vynález týká farmaceutických prostředků, které obsahují účinné množství sloučeniny podle vynálezu společně s farmakologicky přijatelnými nosiči a masťovými základy. Konkrétně se může sloučenina formulovat ve formě tablet, prášků, granulátů, kapslí, injekčních preparátů, roztoků, čípků, emulzí, disperzí a podobně. Pro intravenózní podávání se hlavně používají směsi Chremophor L a ethanol, polysorbát a ethanol nebo liposomní prostředky vyrobené přírodním nebo syntetickým fosfatidylcholinem, nebo směsi přírodních fosfolipidů za přítomnosti choleste50 rolu; pro orální podávání se výhodně vyrábějí měkké želatinové kapsle, ve kteiých je produkt rozpuštěn v polysorbátech, PEG nebo jejich směsích, případně za přítomnosti fosfolipidů. Sloučenina I se může podávat lidem při koncentracích 50 až 500 mg/m².

Následující příklady podrobněji objasňují vynález.

-5CZ 301764 B6

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1:

Syntéza 13-(N-Boc-p-Ísobutylserinyl)-14p-hydroxybaccatinu III 1,14—karbonátu

43,26 g 14p-hydroxy-deacetylbaccatinu lil se rozpustí společně s 22,3 ml N-methyl-imidazolu io ve 230 ml DMF ve skleněné baňce s kulatým dnem o objemu 500 ml; do tohoto roztoku se za silného míchání při pokojové teplotě během 1 hodiny přidalo 14 ml triethylchlorsilanu. Když byla reakce ukončena, reakční směs se při silném míchání nalila do 2 1 vody. Pres noc při teplotě °C se vytvořilo velké množství sraženiny. Sraženina se potom zfíltrovala, důkladně se promyla vodou a následně n-hexanem. Po sušení ve vakuu se získalo 48,1 g 7-Tes-10-deacetylbacca15 tinu III vzorce XII obsahujícího malý procentový podíl 7,10-derivátu, který má následující fyzika! ně-chemické charakteristiky:

Ph^O ^lHNMR(CDCl₃, 200 MHz):

δ (ppm) - 0,55 (6H, t, 7 = 7,8 Hz, 7-OTES CH₂), 0,94 (9H, q, 7= 7,8 Hz, 7-OTES CH₃), 1,18 (3H, s, C16H₃), 1,20 (3H, s,C17H₃), 1,77 (3H, s,C19H₃, 1,90 (IH, ddd, J= 2,4, 10,8, 13,2 Hz, C6Hp), 2,12 (3H, d, 7= 1,6 Hz, C18H₃), 2,31 (3H, s 4-OCOCH₃), 2,48 (3H, ddd, 7= 14,3, 9,8, 6,5 Hz, C6Ha), 2,73 (IH, d, 7= 5,5 Hz, OH), 3,79 (IH, d, 7= 7,1 Hz, C3H), 4,20 (IH, dd, 7 = 1,0, 8,3 Hz, C20HP), 4,31 (IH, d, 7 = 8,6 Hz, C20Ha), 4,39 (IH, dd, 7- 6,4, 10,7 Hz, C7H),

4,77 (IH, d, 7 = 5,8 Hz, C14H), 4,94 (IH, dd, 7= 2,1, 9,7 Hz, (C5H), 5,05 (IH, m CI3H), 5,13 (IH, d, 7= 1,9 Hz, Cl OH), 6,05 (IH, d,7= 7,3 Hz, C2H), 7,41 - 8,09 (5H, m Ph).

Hmotnostní spektrum (NH₃, DEP/CI, kladné ionty):

(m/z) 718 [(M+NH₄)⁺, 100%], 701 [(M+H)⁺, 39%].

Výsledná sloučenina se rozpustila ve 300 ml směsi methylenchlorid/pyridin v poměru 3:1 v atmosféře dusíku; tento roztok se přidal za stálého míchání k předchlazenému roztoku fosgenu (214 ml, 1,9M roztok v toluenu) na -10 °C, přičemž se během přidávání udržovala teplota -5 až

-10 °C.

Reakční směs se míchala 30 minut, potom se třepala se 700 ml nasyceného roztoku NaHCO₃, přičemž se udržovala teplota pod nebo na 2 °C. Fáze se oddělily a organická fáze se promyla, aby se odstranil pyridin. Organická fáze se dehydratovala nad MgSO₄ a zkoncentrovala na sušinu.

Získalo se 46,6 g 10-deacetylbaccatin III 7~Tes-l,14-karbonátu, který se může použít přímo pro následující reakce.

g sloučeniny se rozpustilo ve 250 ml zcela bezvodého THF; roztok se ochladil na -50 °C a během 2 minut přidal ke 48 ml 1M roztoku LiHMDS a míchal 20 minut při stejné teplotě.

Během 40 minut se za míchání přidal acetylchlorid. Reakční teplota stoupla na 0 °C, přičemž se

-6wvi/v-r mv během 2 hodin udržovalo míchání. Po ukončení reakce se směs upravila nasyceným roztokem NH4CI a zředila ethylacetátem. Fáze se oddělily a vodný roztok se zředil ethylacetátem do vyčerpání produktu. Kombinované organické fáze se promyly vodou a potom sušily nad MgSO₄ a zkoncentrovaly na sušinu. Získalo se 33 g 14p~hydroxy-7-Tes-l,14-karbonát baccatinu III, znečištěný sloučeninami z předchozích reakcí. Tato sloučenina se chromatografovala na silikagelu, čistý produkt se eluoval směsí ethylacetátu/CH₂Cl₂ v poměru 9:1. Získalo se 30 g žádaného produktu XIII, který má následující charakteristiky:

‘HNMRÍCDCh 200 MHz): io δ (ppm) = 0,55 (6H, t, 7 = 7,8 Hz, 7-OTES CH₂), 0,95 (9H, q, 7= 7,8 Hz, 7-OTES CH₃), 1,16 (3H, s CI6H3), 1,32 (3H, s, C17H₃), 1,77 (3H, s C19H₃), 1,88 (1H, ddd, 7=2,4, 10,8, 13,2 Hz, Ο6Ηβ), 2,21 (3H, d, 7= 1,6 Hz, C18H₃), 2,10 (2H, s, 10-OCOCH₃), 2,31 (3H, s, 4-OCOCH₃), 2,48 (3H, ddd, 7= 14,3, 9,8, 6,5 Hz, C6Ha), 2,73 (1H, d, 7 = 5,5 Hz, OH), 3,72 (1H, d, 7=

7,1 Hz, C3H), 4,20 (1H, d, 7= 8,3 Hz, C20Hp), 4,31 (1H, d, 7= 8,6 Hz, C20Ha), 4,46 (1H, dd,

7=6,4, 10,7 Hz, C7H), 4,79 (1H, d, 7=5,8 Hz, C14H), 4,94 (1H, dd, 7=2,1, 9,7 Hz, (C5H), 5,02 (1H, m, C10H), 5,05 (1H, m, C13H), 6,09 (1H, d, 7=7,3 Hz, C2H), 7,41 - 8,09 (5H, m, Ph).

Hmotnostní spektrum (NH₃, DEP/C1, kladné ionty):

(m/z) 759 [(M+NHO⁴, 19%], 743 [(M+H)⁺, 100%].

20g 14p-hydroxy-7-Tes-l,14-karbonátu baccatinu III se společně s 300ml zcela bezvodého toluenu vložilo do baňky s kulatým dnem o objemu 1 1, přidalo se 10 g kyseliny (4S,5R)-N-Boc2-(2,4-dimethoxyfeny 1)—4—isobutyl)-l-oxazolidin-5-karboxylové a 2 g N,N-dimethylaminopyridinu (DMAP) a 9,5 g dicyklohexylkarboimidu (DCC) rozpuštěného v CH₂C1₂. Reakční směs se refluxovala 3 hodiny, potom se ochladila, vysrážel se močovinový produkt a matečné louhy se promyly nasyceným roztokem NaHCO₃, aby se odstranila nezreagovaná kyselina, potom se zředil kyselinou chlorovodíkovou, aby se odstranil DMAP, a nakonec opět roztokem NaHCO₃ pro dosažení neutrality. Organická fáze se zkoncentrovala na sušinu, přičemž se získalo 41,5 g produktu, který by se mohl přímo použít v následujícím kroku.

g této sloučeniny se zbavilo ochrany ve dvou krocích nejprve odstraněním Tes a potom 2,435 dimethoxybenzaldehydu. 40 g sloučeniny se rozpustilo ve 100 ml směsi acetonitril/pyridin (80:100) pod dusíkem a směs se ochladila na 0 °C; přidalo se 13 ml pyridinium fluoridu a vše se míchalo 24 hodin. Roztok se nalil do 2 1 vody a produkt se zfiltroval a sušil ve vakuu.

Zbytek se rozpustil v 60 ml methylenchloridu a tento roztok se přidal do 40 ml 0,6M HC1 v methanolu za silného míchání při teplotě 0 °C. Směs se míchala 2 hodiny, potom se zředila 150 ml methylenchloridu a třepala s roztokem NaHCO₃, přičemž se nastavila hodnota pH na 6 až 7. Organická fáze se zkoncentrovala na sušinu a zbytek krystalizoval z acetonhexanu. Po usušení se získalo 16 g 13^(N-Boc-P-ÍsobutylÍ$o$erinyl)-14p-hydroxybaccatin-l,14-karbonátu, který mčl následující íyzikálně-chemické a spektroskopické charakteristiky:

-7CZ 3U1764 B6

Vzorec: C44H57NO17

Vzhled: bílý prášek

Teplota tání: 245 °C

TabuIka 1: Chemické posuny (ppm) ¹H NMR v roztoku CDCb_(200 MHz)

H	ppm, multiplicita (Hz)	H	ppm, multiplicita (Hz)
2	6,09-d (7,8)	2'	4,30 - dd (6,4; 3,3)
3	3,68 - d (7,4)	3r	4,08 - m
5	4,91 - dd (9,7; 2,5)	4'a	1,21 - m
6a	2,52 - dd (14,8; 9,8; 6,9)	4'b	1,43 - m
6β	1,86-m	5'	1,65- m
7	4,37 - m	6'	0,96 -d (6,3)
10	6,25 - s	7'	0,95-d (6,3)
13	6,44 - d (široká, 6,9)	4-OCOCH3	2,40 - s
14	4,84 - d (6,9)	IO-OCOCH3 2,22-s
16	1,25-s	Boc	1,35-s
17	1,32-s	o-benzoyl	8,01 - m
18	1,87-d (1,6)	m-benzoyl	7,46 - m
19	1,69-s	p-benzoyl	7,58- m
20a	4,27-d (8,4)	3-NH	4,72 - d (9,0)
20p	4,20-d (8,4)

8Tabulka 2: Chemické posuny (ppm) ¹³C NMR v roztoku CDCh (50.308 Mhz)

H	ppm, multiplicita	C ppm, multiplicita
9	201,8 -S	8	58,2 - s
1'	172,6 -s	3'	51,2 -d
4-OCOCH3	170,5 -S	3	44,6 -d
10-OCOCH3	170,2 -s	15	41,3 -s
2-COPh	164,3-s	4	39,9 -1
C = 0 (Boc)	155,8 -s	6	34,9 -1
C = 0 (karbonát)	151,4 -s	(CH3)3C Boc	27,7-q
12	139,4 -s	17	25,5 - q
11	133,1 -s	16	22,6 - q
(Me)3C(Boc)	80,0 - S	4-OCOCH3	22,0-
5	83,8 - d	IO-OCOCH3	20,2 - q
1	87,7-s	5'	24,3 - d
4	80,0 - s	6'	22,7 - q
2	69,0 -d	7'	21,6-q
20	75,5 - t	18	14,6-q
2'	73,3 - d	19	9,8-q
1	71,2-d	q-benzoyl	127,5-s
10	74,3 - d	o-benzoyl	129,5-d
13	74,1 -d	m-benzoyl	128,6-d
14	79,1 -d	p-benzoyl	133,7-d

q

Hmotnostní spektra:

(NH₃, DEP/C1, kladné ionty):

(m/z) 889 [(MNH₄)⁺], 832 [(MNHHCH3)3C)⁺], 772 [(MNH4 - BocNH2/] (NH₃, DEP/CI, záporné ionty):

(m/z) 871 (Nf), 260 (postranní řetězec)

-9CZ 3U1764 B6

Infračervené spektrum (KBr disk):

3521,3321,2971,2953, 1826, 1762, 1706, 1526, 1366, 1238, 1165, 1072, 723 cm’¹

UV spektrum (MeOH): 231,276 a 284 nm;

- E|% při 231 nm = 180,99

- Ei% při 276 nm = 14,094 ío - E|%při 284 nm = 12,182

Příklad 2

Syntéza 13-(N-Boc-(3-Ísobutylserinyl)-143-hydroxybaccatin V 1,14 karbonátu

5g 13-(N-Boc-f3-isobutylserinyl)-14p-hydroxybaccatin III 1,14-karbonátu se rozpustilo v 500 ml toluenu v atmosféře argonu, přičemž se zcela deoxygenuje roztok; přidalo se 80 mg DBU (diazabicyklo-[5,4,0]-7-undecen) a reakční směs se refluxovala 1 hodinu v atmosféře argonu, Roztok se zředil 100 ml ethylacetátu a promyl vodou. Organická fáze se odpařila na sušinu, přičemž se získal 13-(N-Boc-pMsobutylserinyl)-14[3-hydroxybaccatin V 1,14-karbonát, který má následující fyzikálně-chemické a spektroskopické charakteristiky:

Vzorec; C44H57NO17

Vzhled: bílý prášek

Teplota tání: 245 °C

- 10Tabulka 3: Chemický posun (ppm) ¹H NMR v roztoku CDCIa (200 MHz)

H	ppm, multiplicita (Hz)	H	ppm, multiplicita (Hz)
2	6,18 d (7,9)	2'*	4,75	d (8,6)
3	3,80 d (7,8)	3'	4,01	m
5	4,93 dd (7,8.4,8)	4'a	1,25	m
6	2,23 m	4'b	1,48	m
7	3,76 m	5'	1,67	m
10	6,79 s	6'	0,99	d (6,4)
13	6,44 d (6,7)	7'	0,97	d (6,4)
14	4,88 d (7,0)	4-OCOCH3		2,58 s
16	1,29 5	10-OCOCHa	2,20 s
17	1,31 s	Boc		1,37 s
18	1,87 d (1,5)	o-benzoyl		8,06 m
19	1,71 s	m-menzoyl		7,49 m
20	4,38 s	p-benzoyl		7,61 m
		3'-NH*		4,60 d (11,2)

může být obráceně

-IICZ 301764 B6

Tabulka 4: Chemicky posun (ppm) ¹³C NMR v roztoku CDCI? (50.308 MHz)

C ppm, multiplicita	C ppm, multiplicita
9	206,1 s	8	58,2 s
1'	173,1 s	3'	52,0 d
4-OCOCH3	172,1 s	3	40,4 d
IO-OCOCH3	169,3 s	15	41,5
2-COPh	165,1 s	4'	40,6 t
C = 0 (Boc)	156,6 s	6	35,2 t
C = 0 (karbonát)	152,1 s	(CH3)3c	28,4 q
12	137,6 s	17	25,4 q
11	134,0 s	16	22,4 q
(Me)3C (Boc)§	81,7 s	4-OCOCH3	22,7 q
5	82,7 d	10-OCOCH3	18,6
1	88,5 s	5'	25,1 d
4§	80,7 s	6'	23,4 q
2	69,9 d	7'	20,9 q
20	77,2 t	18Λ	15,2 q
2'°	74,6 d	19Λ	16,2 q
7°	77,6 d	q-benzoyl	128,3 s
10°	74.2 d	o-benzoyl	130,2 d
13°	76,0 d	m-benzoyl	128,2 d
14	79,9 d	p-benzoyl	134,4d

= může být obráceně

Hmotnostní spektrum (TSP+):

(m/z) 872 (MH⁺); 816 (MH⁺4CH₃)₂C=CH₂); 772 (816-CO₂); 756 (816-AcOH); 712 (772-AcOH);

-12vt ÉhřVi/VT UFV

Infračervené spektrum (KBr disk):

3450,2963,1813,1740, 1702, 1247, 1091,710 cm'¹

UV spektrum (MeOH): 200 e 230 nm

- Ei% při 200 nm - 370,9

-Ei%při 230 nm- 193,2 to

Příklad 3

Příprava kyseliny (4S,5R)-N-Boc-(2,4-dimethoxyfenyl)-4-isobuty 1-1 -oxazolidin-5-karboxy15 love

Příprava N-Boc-L-leucinolu - vzorec HI:

46,8 g L-leucinolu II (400 mmol) se rozpustilo v 300 ml CH₂C1₂ v baňce s kulatým dnem s třemi hrdly o objemu 2 1 vybavené mechanickým míchadlem, teploměrem a kapací nálevkou. Míchaný roztok se potom přidával po kapkách při pokojové teplotě k roztoku anhydridu Boc (87,2 g, 400 mmol) v CH₂C1₂ (100 ml) během 90 minut. Během přidávání prvních 25 % anhydridu Boc byla reakce exotermická a dosáhla 20 až 30 °C, přičemž vznikla kaše, která se po míchání při pokojové teplotě další tři hodiny stala čirou. Vše zůstalo při pokojové teplotě přes noc. Rozpouš25 tědlo se odpařilo pod vysokým vakuem, přičemž se získal požadovaný produkt ve formě hustého oleje v kvantitativním výtěžku (87 g). Produkt se následně zpracoval bez dalšího čištění.

Příprava N-Boc-L-leucinalu - vzorec IV

Roztok oxalylchloridu (26,274 ml, 300 mmol) ve 130 ml methylenchloridu předchlazeného na -60/-65 °C se pomalu přidával k DMSO (28,4 ml, 400 mmol).

Když se přidávání DMSO dokončilo, roztok byl čirý. Po 20 minutách míchání za stálé teploty se reakění směs následně během 25 minut upravila roztokem alkoholu III (43,7 g, 200 mmol) v CH₂C1₂ (200 ml), přičemž se udržovala teplota pod -60 °C. během přidávání alkoholu se reakční směs zakalila a vytvořila se bílá sraženina. Po 20 až 25 minutách míchání za stálé teploty se během 40 minut po kapkách přidával roztok triethylaminu (112 ml, 800 mmol) vCH₂C1₂ (100 ml), přičemž se udržovala teplota mezi -68 a -62 °C. Reakční směs se potom míchala při teplotě mezi -60 a -65 °C dalších 50 minut. TLC reakční směsi provedlo za použití 8% methano40 lu v CH₂C1₂ jako eluentu, který nedetekoval žádný počáteční produkt.

Studený roztok se potom nalil do 800 ml ledového roztoku obsahujícího 68 g (0,5 mol) KHSO4. Organická fáze se oddělila a vodná fáze se extrahovala pomocí CH₂C1₂ (100 ml). Spojené organické fáze se promyly vodným KHSO4 (5%, 1x200 ml), solným roztokem (100 ml, 50 ml) a zkoncentrovaly na poloviční objem (-250 ml). Uvedený materiál se použil v následujícím kroku.

Derivát bisulfitové sloučeniny aldehydu - vzorec V

Methylenchloridový roztok aldehydu IV v baňce s kulatým dnem a třemi hrdly o objemu 2 1 vybavené mechanickým míchadlem, teploměrem a kapací nálevkou se během 10 minut a při teplotě -5 °C zpracoval se sodným roztokem bisulfítu (kyselý siřiěitan) (41,7 g, 400 mmol) ve vodě (200 ml) a následně s n-Bu₄NHSO4 (678 mg, 2 mmol). Roztok se ochladil na -5 °C.

-13CZ 301764 B6

Reakční směs se míchala při -5 až 0 °C po dobu 5 až 6 hodin a následně přes noc při pokojové teplotě. Vodná fáze obsahující sloučeninu V se oddělila a promyla CH2CI2 (2x20 ml).

2-Kyano-3-(N-Boc)-amino-5-methylhexanoI - vzorec VI

Výše uvedený vodný roztok (-250 ml) se přidal kCHjCl^ (120 ml) a reakční směs se ochladila na 0 až 5 °C v ledové lázni. Pevný KCN (15 g, 230 mmol) se následně přidal do reakční směsi a roztok se míchal přes noc při pokojové teplotě. Organická fáze se oddělila a vodná fáze se extrahovala CH2CI2. Spojené fáze se promyly solným roztokem (1x50 ml), sušily nad MgSOí a odpařovaly za vzniku produktu ve formě bezbarvé viskózní kapaliny (43 g). Produkt měl [a]_D 51,11 (c=2, MeOH) a byl směsí derivátů VI 2(R), 3(S) a 2(S), 3(S) v poměru 2:1. Výtěžek byl 89 %, vztaženo na vstupní L-leucinol.

Kyselina (2RS,3S)-3-amino-2-hydroxy-5-methylhexanová - vzorec VII

Směs výše uvedeného surového nitrilu VI (43 g) se zpracovala se 150 ml koncentrované HCI (37%) (150 ml) a refluxovala přes noc za vzniku surové kyseliny VII*. Přebytek kyseliny chlorovodíkové se odstranil rotačním odpařovákem a zbytek se odpařil s vodou (100 ml), přičemž se odstranila HCI. Zbytek se potom rozpustil ve 150 ml vody a přidal ke 100 ml acetonu, potom se zpracoval s 33 ml 6,25M roztokem NaOH, přičemž se upravila hodnota pH na 5. Potom se k roztoku přidalo další množství acetonu (500 ml) a roztok se nechal stát přes noc při teplotě 4 °C. Vysrážená pevná látka se následně zfiltrovala a filtrační koláč se promyl acetonem a sušil ve vakuu za vzniku surové kyseliny VII (6,5 g) obsahující směs derivátů (2(R), 3(S) a 2(S), 3(S) sloučeniny VI v poměru 3:1.

Filtrát se odpařit a přidala se voda, aby se upravil objem roztoku na 75 ml.

Potom se k roztoku přidal aceton (1 1) a roztok se ponechal stát přes noc při teplotě 4 °C v chladničce. Vysrážená pevná látka se potom zfiltrovala a filtrační koláč se promyl acetonem a sušil ve vakuu za vzniku druhého množství produktu (18 g) obsahujícího pevný NaCl se směsí derivátů 2(R),3(S) a 2(S),3(S) produktu VII v poměru 1:1.

První získaný produkt XII (22,5 g) se zahrát ve vodě (120 ml), aniž by se dosáhlo úplného rozpuštění a potom se ochladil v ledu a filtroval za vzniku 12,5 g kyseliny VII dosud kontaminované asi 10 % nežádoucího derivátu 2(R),3(S) produktu VII. Tento produkt se sušil a smíchal s výše uvedenou směsí druhých krystalů v poměru 1:1 (celkem -27 g).

Kyselina (2RS,3S)-3-(N-Boc)~amÍno~2-hydroxy-5“methylhexanová - vzorec VIII

A Surová kyselina VI 2(R),3(S) o 90% čistotě (2,5 g, 77,6 mmol) se rozpustila ve směsi voda/THF v poměru 1:1 (80 ml), potom se do reakční směsi přidal triethylamin (13,5 ml) a následně anhydrid Boc (18,5 g, 85 mmol), celý roztok se míchal 40 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odpařilo rotačním odpařovákem, za stálého míchání se přidalo 60 ml vody a 60 ml ethylacetátu. Vodná fáze se oddělila a extrahovala ethylacetátem (30 ml). Spojené organické fáze se extrahovaly 10% vodným roztokem uhličitanu sodného (30 ml, 20 ml). Základní extrakt se potom spojil svodnou fází okyselenou 1M kyselinou chlorovodíkovou (-55 ml), přičemž se upravila hodnota pH roztoku na 2. Kyselina VIII se potom extrahovala z vodné fáze ethylacetátem (3x40 ml) a heterooctové extrakty se promyly vodou (20 ml), sušily (MgSCh) a odpařovaly za vzniku derivátu Boc surové kyseliny VIII ve formě sirupu (20 g, 99%).

B Surová kyselina VII 2R,3S o čistotě asi 50 %, kontaminovaná NaCl (27 g) se rozpustila ve směsi voda/dioxan v poměru 1:1 (120 ml). Do reakční směsi se potom přidal triethylamin (20 ml), potom anhydrid Boc (26,16 g, 120 mmol). Roztok se míchal 40 hodin při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odpařilo rotačním odpařovákem a ke zbytku se přidala voda (100 ml) a ethylacetat (100 ml) za stálého míchání dalších několika minut. Organická fáze se oddělila

- 14*/νι / v~r a extrahovala 10% vodným roztokem uhličitanu sodného (45 ml, 30 ml). Extrakty uhličitanu sodného se spojily s vodnou fází okyselenou 1M kyselinou chlorovodíkovou (*165 ml) a extrahovaly ethylacetátem (3x60 ml), následně se promyly vodou (30 ml), sušily (MgSO₄) a odpařily za vzniku Boc surové kyseliny VII ve formě sirupu (16 g), který se skládá ze směsi izomerů 2R,3S a2S,3S v poměru 1:1.

Methylester kyseliny (2R,3S)-3-(N-Boc)-amino-2-hydroxy-5-methylhexanové IX

Diazomethan se vyrobil z diazaldu podle způsobu uvedeného v T. H. Black [Aldrichimica Acta, io 16,3(1983)].

A Roztok surové kyseliny VIII (20 g, 56,6 mmol) v CH₂C1₂ (75 ml) se pomalu přidával do etherického roztoku diazomethanu (—77 mmol) a směs se ponechala dvě hodiny v ledové lázni. Barva roztoku se v tomto kroku změnila na bílou, což znamená, že se většina diazomethanu adsorbovala. Roztok se potom zkoncentroval a zbytek krystalizoval ze směsi toluenu (20 ml) a hexanu (70 ml). Po celonočním chlazení v chladničce na 4 ^ĎC se filtrací zachytily krystaly čistého derivátu IXA 2R, 3S. Výtěžek byl 15 g. Matečné louhy obsahovaly 5 g izomerické směsi v poměru 1:1.

B Použitím stejného postupu se směs kyseliny VIII (16 g) v poměru 1:1 transformovala na směs esterů IXA a IXB v poměru 1:1. Přidal se materiál z matečných louhů (5 g z kroku A) a materiál se spojil a separoval kolonovou chromatografií za použití směsi hexan/ethylacetát jako eluentu (9:1 až 7:3), Ninhydrin se použil jako vývojka pro destičky TLC. Nepolární sloučenina, Rf 0,75 (hexan-ethylacetát 7:3) byla identifikována jako požadovaný ester IXA (2R,3S), který rekrystalizoval z cyklohexanu za vzniku IXA ve formě bezbarvých jehliček (8 g), teplota tání 95 až 96 ^ŮC, [a]_D 72,4° (c=l, MeOH).

Polární sloučenina, Rf 0,5 (hexan-ethylacetát 7:3) byla identifikována jako IXB (2S,3S), krystalizovala z cyklohexanu za vzniku 10 g IXB ve formě bezbarvých jehliček.

2,4-Dimethoxybenzaldehyd dimethylacetal

Směs 2,4-dimethoxybenzaldehydu (41,25 g, 0,25 mol), bezvodého trimethyl o-mravenčanu (50 ml) a dusičnanu amonného (2 g rozpuštěné ve 20 ml methanolu) refluxovala 6 hodin (*HNMR reakční směsi ukázala 65 až 70% konverzi). Nejprve byla horká reakční směs čirým roztokem, ale jakmile reakce pokročila, vysrážela se pevná fáze. Přidala se druhá část bezvodého trimethyl o-mravenčanu (20 ml) a oddestilovala se část methanolu.

Když se teplota reakční směsi dosáhla 95 až 100 °C, všechna pevná fáze v baňce se rozpustila.

Roztok se ochladil na pokojovou teplotu a přidal se bezvodý Na₂CO₃ (5 g) a míchal 30 minut. Následně se roztok zfiltroval a zbytek se destiloval frakční destilací ve vakuu při 0,25 mmHg (33 Pa). První frakce při nízké teplotě obsahovala hlavně nadbytek trimethyl o-mravenčanu a druhá frakce, která destilovala jako bezbarvý olej při teplotě 175 až 180 °C, byl požadovaný acetal. Výtěžek: 37 g (70 %).

Methylester kyseliny (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4-Dimethoxyfenyl)-4-Ísobutyl-l-oxazolidin-5karboxylové X

K roztoku methylesteru kyseliny (2R,3S)-3-(N_Boc)-amino-2-hydroxy-5-methylhexanové

IXA (34,375 g, 125 mmol) v bezvodém THF (150 ml) se přidal destilovaný 2,4-dimethoxybenzaldehyd dimethylacetal (3,0 g, 142 mmol) a následně pyridinium p-toluensulfonát (Py.Tos; 400 mg).

Roztok se zahříval pod mírným refluxem v baňce s třemi hrdly vybavené odlučovačem podle

Dean-Sarka. Po asi 6 hodinách se pod refluxem odstranilo 60 ml THF s obsahem methanolu,

-15CZ JO1764 B6 který se vytvořil během reakce. Vzorek se podrobil analýze 'HNMR (v CDC1₃). Pík (I) pri 8=1,41 ppm se ztratil a nový pík (2) se objevil pri 8-1,24 ppm u chráněného methylesteru. Po 6 hodinách refluxu byla provedena konverze ze 70 až 75 %.

Přidala se poměrná Část čerstvého bezvodého THF (50 ml), potom množství 2,4-dimethoxybenzaldehyd acetalu (5,0 g; 24 mmol). Reakční směs se refluxovala další 2,5 hodiny, během kterých se zařízením podle Dean-Starka odstranilo 50 ml THF. Následná analýza H NMR ukázala úplnou transformaci počátečního materiálu.

ίο K reakční směsi se přidal nasycený vodný roztok NaHCO₃ (15 ml) a směs se míchala 15 minut, aby se neutralizoval Py.Tos. Následně se přidal t-butyl(methyl)ether (85 ml) a voda (15 ml) a oddělila se organická fáze. Vodná fáze se extrahovala t-butyl(methyl)etherem (20 ml) a spojené organické fáze se promyly vodou (30 ml) a odpařovaly na zbytek (66 g) surového produktu X.

Hydrolýza esteru X za vzniku kyseliny XI

Surový ester X (22 g, 42 mmol) se rozpustil ve 100 ml methanolu a přidala se voda (50 ml) obsahující 8,7 g uhličitanu draselného. Roztok se míchal přes noc při pokojové teplotě a potom se ukončená reakce monitorovala TLC (toluen-ethyl acetát: 4,5:1). Analýza TLC byla potvrzena analýzou 1H NMR, přičemž se sledovalo zmizení píku methylesteru.

Methanol se odpařil pri teplotě ne vyšší než 40 °C ve vakuu (60 g zbytku) a ke zbytku se přidala voda (150 ml). Vodná suspenze se extrahovala ethylacetátem (5x50 ml), aby se odstranil nadbytek benzaldehydu a benzaldehyd-dimethylacetalu. Do vodné fáze se přidalo 90 ml methylen25 chloridu, směs se ochladila v ledové lázni a dvoufázový systém se za silného míchání upravil 125 ml 1M roztoku NaHSO₄ (pH=3). Fáze se oddělily a vodná fáze se extrahovala methylenchloridem (75 ml). Spojené extrakty methylenchloridu se promyly vodou (30 ml), solným roztokem (30 ml) a sušily nad MgSC>4. Roztok se potom udržoval pri -60 °C do dalšího použití. Výtěžek v konečném produktu ve formě bezbarvé pevné látky byl 16g, asi 93 %, vztaženo na počáteční produkt.

Příklad 4

Příprava 14p-hydroxy-7-Tes baccatinu III 1,4 karbonátu

K roztoku 11,2 g 10-deacetyl-14-hydroxybaccatinu III v 50 ml suchého tetrahydrofiiranu se přidalo 0,72 g CeCI₃.7H₂O a 7,3 ml anhydridu kyseliny octové. Reakční směs se míchala pri pokojové teplotě 5 hodin; během tohoto času se směs homogenizovala. Přidalo se 10 g ledu a vše se míchalo 1 hodinu. Tetrahydrofuran se odpařil ve vakuu a zbytek se zředil 200 ml H₂O. Sraženina se zfiltrovala a sušila ve vakuu za přítomnosti P₂O₅; produkt vykrystalizoval z ethylacetátu, přičemž se získalo 10 g 14-hydroxybaccatinu III, který má následující charakteristiky:

Teplota tání: 236 až 8 °C;

IR (KBr): 3474, 1739, 1400, 1240, 1090, 1049 cm ¹ 'HNMR(CDCI,, 200 MHz):

8,07 (d, J = 8 Hz, Bz), 7,55 (d, J = 8 Hz, Bz), 7,44 (t, J = 8 Hz, Bz), 6,31 (s, H-10), 5,80 (d,

J = 7 Hz, H-2), 4,97 (br, d, J = 8 Hz, H-5), 4,73 (br, d, J = 4 Hz, H-13), 4,41 (m, H-7), 4,24 (d, J = 4 Hz, H-14), 4,20 (d, J = 7 Hz, H-20a), 4,06 (d, J = 7 Hz, H-20b), 3,89 (J 0 (Hz, H-3), 2,29 (s, OAc), 2,22 (s, OAc), 2,04 (s, H-18), 1,66 (s, H-19); 1,25, 1,11 (s, H-16 a H-17).

-16^Vl ř

Do baňky se čtyřmi hrdly vybavené míchadlem, kapací nálevkou, teploměrem a refluxním kondenzátorem chlazeným na -12 °C se vložilo 52,8 ml 1,9M roztoku fosgenu v toluenu. Tento roztok se za míchání během 30 minut po kapkách přidával k 11,6 g 14-hydroxy baccatinu III rozpuštěného v 53 ml methylenchloridu a 17,5 ml pyridinu. Teplota se udržovala mezi -6 a -10 °C. Po 30 minutách se za stálého míchání přidalo 50 ml nasyceného roztoku NaHCO₃, přičemž se udržovala přísná kontrola teploty. Po zahřátí na pokojovou teplotu se fáze oddělily. Vodná fáze se extrahovala methylenchloridem a organická fáze se promyla 45 ml 2M HC1, přičemž se upravila hodnota pH na 1. Organická fáze se promyla 0,lM HC1 a potom NaHCO₃, potom se sušila nad Na₂SO₄ a odpařila na sušinu, přičemž se kvantitativně získalo 11,5 g 14í o hydroxybaccatin-1,14-karbonátu.

11,5 g 14-hydroxybaccatin-l,4-karbonátu se rozpustilo v 50 ml DMF a při pokojové teplotě se přidalo 1,1 ekvivalentů chlortriethylsilanu a 3 ekvivalenty N-methylimidazolu. Po ukončení reakce se směs nalila do 500 ml H₂O a sraženina se zfiltrovala a důkladně promyla H₂O, potom se sušila, přičemž se získalo 12,8 g 14p-hydroxy-7-Tes-baccatin III-1,14-karbonátu se stejnými charakteristikami uvedenými v příkladu 1.

Příklad 5

Syntéza 13-(N-Boc-p-Ísobuty lserinyl)-14(3-hydroxybaccatín III-1,14-karbonátu

Výchozím produktem byl 14p-hydroxy-7-Tes-baccatin III-l,14-karbonát získaný způsobem popsaných ve výše uvedeném příkladu a postup byl následující.

Do baňky s kulatým dnem o objemu 1 1 se vložilo 20 g 14[3-hydroxy-7-Tes-l,14-karbonát-baccatinu III spolu s 300 ml zcela bezvodého toluenu; přidalo se 10 g kyseliny (4S,5R)-N-Boc(2,4-dimethoxyfenyl>-4-isobutyI-l-oxazoÍidin-5-karboxylové rozpuštěné v CH₂C1₂ a 2 g N,Ndimethylaminopyridinu (DMAP) a 9,5 g dicyklohexylkarbodiimidu (DCC). Reakční směs se refluxovala 3 hodiny, potom se ochladila, přičemž se vysrážel močovinový produkt a matečné louhy se promyly nasyceným roztokem NaHCO₃, přičemž se odstranila nezreagovaná kyselina, potom se zředila kyselinou chlorovodíkovou, přičemž se odstranil DMAP a nakonec opět NaHCO₃, přičemž se neutralizovala. Organická fáze se zkoncentrovala na sušinu, přičemž se získalo 41,5 g produktu, který se mohl přímo použít v následujícím kroku.

g této sloučeniny se zbavilo ochrany ve dvou krocích odštěpením nejdříve Tes a potom 2,4dimethoxybenzaldehydu. 40g sloučeniny se rozpustilo ve 100 ml směsi acetonitril/pyridin v poměru 80:100 pod dusíkem a směs se ochladila na 0 °C; přidalo se 13 ml pyridinium fluoridu a vše se nechalo 24 hodin míchat. Roztok se nalil do 2 1 vody a produkt se zfíltroval a sušil ve vakuu. Zbytek se rozpustil v 60 ml methylenchloridu a k tomuto roztoku se za silného míchání a při teplotě 0 ^ŮC přidalo 40 ml 0,6M HC1 v methanolu. Reakční směs se nechala 2 hodiny míchat, potom se zředila 150 ml methylenchloridu a třepala s roztokem NaHCO₃, přičemž se upravila hodnota pH na 6 až 7. Organická fáze se zkoncentrovala do sucha a zbytek vykrystalizoval ze směsi aceton/hexan, potom se sušil, přičemž se získalo 16,5 g 13-(N-Boc-p-isobutyliso45 serinyl}-14p-hydroxybaccatin III-1,14-karbonátu.

Claims (11)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Sloučenina 134N-terc-butoxykarbonyl-p-isobutylisoserinyl)-14p-hydroxybaccatÍn V 5 1,14-karbonát vzorce I:
2. 2. Způsob přípravy 13-(N-terc-butoxykarbonyl-p-isobutylisoserinyl)-14p-hydroxy-baccatin V 1,14-karbonátu podle nároku 1 vzorce 1, vyznačující se tím, žel
3. 3-(N-tercbutoxykarbonyl-p-isobutylisoserinyl)-14(3-hydroxybaccatin III 1,14-karbonát se buď zpracuje io l,8-diazabicyklo[5,4.0]undec-7-enem, DBU, v methanolu nebo tetrahydrofuranu, THF, nebo se alternativně ponechá v roztoku s methy lenchloridem nebo chlorovanými rozpouštědly v přítomnosti alifatických alkoholů zvolených z methanolu, ethanolu nebo propanolu a s bazickou aluminou, po dobu v rozmezí od 1 hodiny do 14 dnů.

   15 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že 13~(N-terc-butoxykarbonyl-J3isobutylÍsoserinyl)-14|3-hydroxy-baccatin III 1,14-karbonát se připravuje způsobem, který zahrnuje následující kroky:

   a) transformaci 14p-hydroxy-l O-deacetylbaccatinu III na triethy Isilylovaný derivát

   20 v poloze 7;

   b) přípravu 1,14 karbonátového derivátu z produktu kroku a;

   c) selektivní acetylaci hydroxylu v poloze 10;

   d) reakci produktu z kroku c s (4S,5R)-N-terc-butoxykarbony 1-2-(2,4-dimethoxyfenyl)-4isobutyl-l-oxazolidin-5-karboxylovou kyselinou;

   e) odštěpení ochranných skupin triethyIsilyl a dimethoxybenzyliden z produktu z kroku d.
4. 4. Způsob přípravy 13-(N-terc-butoxykarbonyΙ-β-isobutylisoseriny 1)-14β-hydroxybaccatin V 1,14-karbonátu vzorce 1, vyznačující se tím, že zahrnuje následující kroky:

   a) transformaci 14p-hydroxy-l O-deacetylbaccatinu V na triethylsilylovaný derivát v poloze 7;

   b) přípravu 1,14 karbonátového derivátu z produktu kroku a;

   c) selektivní acetylaci hydroxylu v poloze 10;

   40 d) reakci produktu z kroku c s (4S,
5. 5 R)-N-terc-butoxykarbony 1-2-(2.4-dimethoxy feny l)-4isobutyl-l-oxazolidin-5-karboxylovou kyselinou;

   e) odštěpení ochranných skupin triethy Isilyl a dimethoxybenzyliden z produktu z kroku d.

   -185. Způsob podle nároků 3a 4, vyznačující se tím, že si ly lační činidlo z kroku a je triethylchlorsilan; 1,14-karbonátový derivát v kroku b se připravuje použitím fosgenu v toluenu v roztoku methylenchlorid/pyridin 3:1 v atmosféře dusíku; redukce v kroku c se provádí hexamethyldisilazidem lithným, LiHMDS, v bezvodém tetrahydrofuranu, THF, a výsledný 105 hydroxyderivát se následně acetyluje acetylchloridem; kondenzační reakce z kroku d se provádí v bezvodém nepolárním organickém rozpouštědle, v přítomnosti báze a kondenzačního činidla dicyklohexylkarbodiimidu, DCC; ochranná skupina triethylsilyl v kroku e se odstraní pyridiniumfluoridem v roztoku acetonitnl/pyridin pod dusíkem, a ochranná skupina dimethoxybenzyliden se odstraní v rozpouštědle methylenchloridu přidáním chlorovodíku, HC1, v methanolu ío a následně hydrogenuhličitanu sodného, NaHCO₃.
6. 6. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že 13-(N-terc-butoxykarbonyl-pisobutylisoserinyt>-14p-hydroxy-baccatin 1U 1,14-karbonát se připravuje způsobem, ktetý zahrnuje následující kroky:

   a') selektivní acetylaci hydroxylu v poloze C—10 14p-hydroxy-lů-deacetylbaccatinu III; b') přípravu 1,14-karbonátového derivátu z produktu z kroku a';

   20 c') silylaci hydroxylu v poloze C-7;

   ď) reakci produktu z kroku c s (4S,5R)-N-terc-butoxykarbonyl-2-(2,4-dÍmethoxyfenyl)-4isobutyl-l-oxazolidin-5-karboxylovou kyselinou;

   25 e') odštěpení ochranných skupin triethylsilyl a dimethoxybenzyliden z produktu z kroku ď.
7. 7. Způsob přípravy 13-(N-terc-butoxykarbonyΙ-β-isobutylisoseriny 1)-14(3-hydroxy-baccatin V 1,14-karbonátu podle nároku 1 vzorce 1, vyznačující se tím, že zahrnuje následující kroky:

   a') selektivní acetylaci hydroxylu v poloze C-l0 14p-hydroxy-l O-deacetylbaccatinu V; b') přípravu 1,14-karbonátového derivátu z produktu z kroku a';

   35 c') silylaci hydroxylu v poloze C-7;

   ď) reakci produktu z kroku c s (4S,5R)-N-terc-butoxykarbony 1—2—(2,4-dimethoxyfenyl)-4isobutyl-l-oxazolidin-5-karboxylovou kyselinou;

   40 e') odštěpení ochranných skupin triethylsilyl a dimethoxybenzyliden z produktu z kroku ď.
8. 8. Způsob podle nároků 6a 7, vyznačující se tím, že selektivní acetylace z kroku a' se provádí acetanhydridem v přítomnosti solí ceru, skandia, yterbia, s výhodou heptahydrátu chloridu čeřitého, CeCl₃.7H₂O, a kroky b' až e^f se provádějí analogicky jako kroky b, a, d a e

   45 podle nároku 5.
9. 9. Meziprodukty syntézy, kterými jsou: 14—β-hydroxy baccatin III, l4-p-hydroxy-7-Tes-10deacetylbaccatin III a 14-p-hydroxy-7-Tes-baccatin III 1,14-karbonát.

   -19CL JU1704 DO
10. 10. Farmaceutické prostředky obsahující 13-(N-terc-butoxykarbonyl-(3-ísobutylisoserinyl)14p-hydroxy-baccatin V 1,14-karbonát podle nároku 1 vzorce I spolu s farmaceuticky přijatelnými nosiči a pomocnými látkami.
11. 11. Použití 13-(N-terc-butoxykarbonyl-p-isobutylisoserinyl)-14p-hydroxybaccatin V 1,14karbonátu podle nároku 1 vzorce i pro přípravu léčiva s protirakovinným účinkem.