PT1322673E - Polissacáridos com actividade antitrombótica compreendendo, pelo menos, uma ligação covalente com a biotina ou com um derivado da biotina - Google Patents

Polissacáridos com actividade antitrombótica compreendendo, pelo menos, uma ligação covalente com a biotina ou com um derivado da biotina Download PDF

Info

Publication number
PT1322673E
PT1322673E PT01972171T PT01972171T PT1322673E PT 1322673 E PT1322673 E PT 1322673E PT 01972171 T PT01972171 T PT 01972171T PT 01972171 T PT01972171 T PT 01972171T PT 1322673 E PT1322673 E PT 1322673E
Authority
PT
Portugal
Prior art keywords
methyl
glucopyranosyl
tri
sulfonate
group
Prior art date
Application number
PT01972171T
Other languages
English (en)
Inventor
Maurice Petitou
Jean-Marc Herbert
Pierre Savi
Philippe Duchaussoy
Original Assignee
Sanofi Aventis
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanofi Aventis filed Critical Sanofi Aventis
Publication of PT1322673E publication Critical patent/PT1322673E/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Description

DESCRIÇÃO "POLISSACÁRIDOS COM ACTIVIDADE ANTITROMBÓTICA COMPREENDENDO, PELO MENOS, UMA LIGAÇÃO COVALENTE COM A BIOTINA OU COM UM DERIVADO DA BIOTINA" A presente invenção refere-se a novos oligo e polissacáridos de síntese, apresentando, pelo menos, uma ligação covalente com a biotina ou um derivado da biotina e possuindo as actividades farmacológicas anticoagulante e antitrombótica da heparina. A heparina catalisa, nomeadamente, via antitrombina III (AT III), a inibição de duas enzimas que intervêm na cascata da coagulação do sangue, nomeadamente, o factor Xa e o factor lia (ou trombina). As preparações de heparinas de baixo peso molecular (HBPM) contêm cadeias formadas por 4 a 30 monossacáridos e têm a propriedade de actuarem mais selectivamente sobre o factor Xa do que sobre a trombina. É conhecido que a inibição do factor Xa necessita de uma fixação de heparina à AT III, via domínio de ligação à antitrombina (Domínio-A) e que a inibição do factor lia (trombina) necessita de uma fixação à AT III, via Domínio-A, assim como à trombina, via um domínio de ligação menos bem definido (Domínio-T). São conhecidos os oligossacáridos de síntese, correspondentes ao domínio Domínio-A da heparina. Estes são 1 descritos, por exemplo, nas patentes EP 84999 e EP 529715, no pedido de patente publicada sob o número WO 99/36428 e na publicação Bioorg.
Med. Chem. 1998, 6, 1509-1516. Estes oligossacáridos de síntese têm a propriedade de inibirem, selectivamente, via antitrombina III, o factor Xa da coagulação, sem qualquer actividade sobre a trombina. Estes manifestam uma actividade antitrombótica na trombose venosa.
Os oligossacáridos de síntese capazes de inibir a trombina e o factor Xa, via activação da AT III, foram descritos nos pedidos de patente publicados sob os números WO 98/03554 e WO 99/36443.
Nestes pedidos de patente são descritos novos derivados polissacarídicos sulfatados e alquilados, biologicamente activos. Estes são, em particular, anticoagulantes e antitrombóticos. Foi demonstrado, em particular, que estes polissacáridos sulfatados e alquilados podem ser antitrombóticos e anticoagulantes poderosos, de acordo com a disposição dos grupos alquilo e dos grupos sulfato contidos na estrutura glucídica. De um modo mais geral, foi verificado que, pela realização de sequências polissacarídicas, é possível a modular, com precisão, as actividades do tipo GAG, na obtenção de produtos muito activos, apresentando as propriedades farmacológicas anticoagulantes e antitrombóticas da heparina. Em relação à heparina, estes apresentam a vantagem de terem uma estrutura determinada e não reagirem com o factor 4 plaquetário, causa dos efeitos trombocitopénicas da heparina. 2
No entanto, a utilização em terapêutica humana de determinados produtos descritos nos pedidos de patente publicados sob os números WO 98/03554 e WO 99/36443 e na patente EP 529715 pode revelar ser delicada, em particular, se estes produtos tiverem uma semi-vida longa. No domínio da prevenção ou do tratamento da trombose com os produtos acima, deve ser restabelecida ou mantida a fluidez do sangue, evitando provocar uma hemorragia. É, de facto, bem conhecido que uma hemorragia pode começar num doente sob tratamento, por qualquer causa acidental. É, igualmente, possível que se verifique a necessidade de intervenção cirúrgica num doente sob tratamento antitrombótico. Além disso, durante determinados actos cirúrgicos, os anticoagulantes podem ser utilizados em grandes quantidades, de forma a impedir a coagulação do sangue e é necessária a sua neutralização no final da intervenção. Consequentemente, é interessante possuir agentes antitrombóticos neutralisáveis, para inactivar a actividade anticoagulante em qualquer momento. No entanto, os oligossacáridos de síntese conhecidos, descritos anteriormente, não podem ser facilmente neutralizados pelos antídotos conhecidos da heparina ou dos HBPM, incluindo o sulfato de protamina. A presente invenção refere-se a novos polissacáridos de síntese, de estrutura próxima da dos compostos descritos nos pedidos de patente publicados sob os números WO 98/03554 e WO 99/36443 e na patente EP 529715: as estruturas dos oligossacáridos de síntese objecto da invenção são modificadas, no sentido em que estas apresentam uma ligação covalente com a biotina (ácido hexa-hidro-2-oxo-lff-tieno [3, 4-d] imidazole-4-pentanóico) ou com um derivado da biotina. De um modo 3 surpreendente, é aparente que a introdução de biotina ou de um derivado da biotina não modifica a actividade farmacológica dos polissacáridos. De facto, os novos polissacáridos, objecto da invenção, têm uma actividade antitrombótica comparável à dos oligossacáridos da técnica anterior. Mas estes, além disso, possuem a vantagem de poderem ser neutralizados rapidamente por um antidoto especifico, numa situação de urgência. Este antidoto especifico é a avidina (The Merck Index, Décima Segunda edição, 1996, Μ. N. 920, páginas 151-152) ou a estreptavidina, duas proteínas tetraméricas com as massas iguais a respectivamente, cerca de 66000 e 60000 Da, que possuem uma afinidade muito forte para a biotina.
De uma forma geral, a invenção refere-se a polissacáridos sintéticos com actividade antitrombótica apresentando, pelo menos, uma ligação covalente com a biotina ou com um derivado da biotina.
Como derivados da biotina, podem ser referidos os derivados da biotina indicados no catálogo Pierce 1999-2000 páginas 62 a 81, por exemplo, o hexanoato de 6-biotinamida,
ou o 6-hexanoato de (6-biotinamida-hexanamida), 4 ο
ou, ainda, o etanotiolato de 2-biotinamida
ou compostos de fórmulas seguintes:
5
νη2
Em particular, a presente invenção tem como objecto os polissacáridos de fórmula (I): 6
Pe (i) na qual: o traço ondulado designa uma ligação localizada abaixo ou acima do plano do anel piranósico,
Po designa um polissacárido, contendo n unidades monossacarídicas, idênticas ou diferentes, ligado pelo seu carbono anómero a Pe,
é uma representação esquemática de uma unidade monossacarídica com estrutura piranósica, seleccionada de entre as hexoses, as pentoses e os desoxi-açúcares correspondentes, estando esta unidade ligada pelo seu carbono anómero a uma outra unidade monossacarídica e 7 estando os grupos hidroxilo desta unidade substituídos por grupos Ri idênticos ou diferentes, sendo Ri tal como definido abaixo,
Pe representa um pentassacárido de estrutura:
n é um número inteiro e pode assumir qualquer valor de 0 a 25,
Ri representa a ligação -T-Biot, um grupo alcoxilo(Ci—Ce) ou um grupo -0S03~, R2 representa a ligação -T-Biot, um grupo alcoxilo(Ci—C6) ou um grupo -0S03”, R3 representa ligação -T-Biot, um grupo alcoxilo(Ci—C6), R4 representa a ligação -T-Biot, um grupo alcoxilo(Ci—Ce) ou um grupo -0S03~ ou R4 constitui uma ponte -0-CH2-, estando o grupo —CH2— ligado ao átomo de carbono portador da função carboxílica no mesmo anel; sendo entendido que, pelo menos, um dos substituintes R4, R2, R3 ou R4 representa um grupo -T-Biot, W representa um átomo de oxigénio ou um grupo metileno, 8
T representa uma das ligações seleccionadas de entre: NH 0
NH
NH ou
NH
nas quais, j e k, idênticos ou diferentes, são números inteiros, podendo assumir qualquer valor de 1 a 10; - Biot representa o grupo:
ΗΝ^,ΝΗ
Y o assim como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Como indicado anteriormente, será tido em consideração que, de um modo geral, na presente descrição um traço ondulado designa uma ligação localizada, abaixo ou acima do plano do anel piranósico. 9
Os monossacáridos contidos em Po podem ser idênticos ou diferentes entre si, podendo as ligações interglicosidicas ser do tipo α ou β.
Estes monossacáridos são, vantajosamente, seleccionados de entre as hexoses D ou L alose, altrose, glucose, manose, galose, idose, galactose, talose (neste caso, h = 2) ou de entre as pentoses D ou L ribose, arabinose, xilose, lixose (neste caso, h = 2) . Podem ser, igualmente, utilizados outros monossacáridos, tais como, por exemplo, desoxi-açúcares (h = 1 e/ou -CH2Ri = CH3) . A parte polissacaridica Po pode ser constituída por 0 a 25 unidades monossacarídicas alquiladas e di- ou trissulfatadas. A parte polissacaridica Po pode ser, igualmente, constituída por 0 a 25 unidades monossacarídicas alquiladas e mono- ou dissulfatadas. A parte polissacaridica Po pode ser constituída por 0 a 25 unidades monossacarídicas alquiladas não-carregadas, parcialmente carregadas e/ou completamente carregadas.
As unidades carregadas ou não carregadas podem ser distribuídas ao longo da cadeia ou estas podem, pelo contrário, ser agrupadas em domínios sacarídicos carregados ou não carregados.
As ligações entre as unidades podem ser 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; e do tipo α ou β. 10
Na presente descrição, foi escolhido representar as conformações :04 para o ácido L-idurónico, 4C4 para o ácido D-glucurónico, mas é evidente que, de um modo geral, a conformação em solução das unidades monossacaridicas é flutuante.
Deste modo, o ácido L-idurónico pode ter a conformação 4C4, 2S0 ou 4Ci.
De acordo com um dos seus aspectos, a invenção refere-se a polissacáridos de fórmula (1.1):
nos quais:
designa uma família particular de polissacáridos Po, ligado pelo seu carbono anómero a Pe, tal como definido para (I) 11 ο Ο <R,)„ é tal como definido para (I), os grupos Ri são tais como definidos para (I) e, para um mesmo monossacárido, podem ser idênticos ou diferentes, o monossacárido contido em []m é repetido m vezes, o monossacárido contido em []t é repetido t vezes, o monossacárido contido em []p é repetido p vezes, m é um número inteiro variando de 1 a 5, t é um número inteiro variando de 0 a 24 e p é um número inteiro variando de 0 a 24, sendo entendido que l<m+t+p^ 25, assim como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
De entre estes polissacáridos de fórmula (1.1), os polissacáridos nos quais apenas um dos substituintes Ri, R2, R3 ou R4 representa a ligação T-Biot, sendo T e Biot, tais como definidos para (I), assim como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, constituem um outro aspecto da invenção.
De acordo com um aspecto particular, a invenção refere-se a hexadecassacáridos de fórmula (1.2):
12 na qual: T representa uma das ligações seleccionadas de entre: NH, νη^[οη|ΝΗ
OU
nas quais, j e K, idênticos ou diferentes, são números inteiros, podendo assumir qualquer valor de 1 a 10;
Biot representa o grupo:
Pe representa um pentassacárido de estrutura:
13 no qual:
Ri representa um grupo alcoxilo(Ci-C6) ou um grupo -0S03~ R2 representa um grupo alcoxilo (Ci-C6) ou um grupo -0S03“, R3 representa um grupo alcoxilo(Ci-C6), R4 representa um grupo alcoxilo (Ci-C6) ou um grupo -0S03~ ou R4 constitui uma ponte -0-CH2-, estando o grupo -CH2- ligado ao átomo de carbono portador da função carboxilica no mesmo anel, W representa um átomo de oxigénio ou um grupo metileno, assim como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
De acordo com um outro dos seus aspectos, a invenção refere-se aos pentassacáridos de fórmula (1.3):
‘3 (1.3) nos quais R4, R2, R3, R4 e W são tais como definidos para (I), assim como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
De entre estes pentassacáridos de fórmula (1.3), os pentassacáridos nos quais apenas um dos substituintes R4, R2, R3 14 ou R4 representa a ligação -T-Biot, sendo T e Biot tal como definidos para (I), assim como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, constituem um outro aspecto da invenção.
De entre estes pentassacáridos de fórmula (1.3), a invenção tem, igualmente, como objecto os pentassacáridos de fórmula (1.4) :
Biot
na qual: T representa uma das ligações seleccionadas de entre: NH,
ou nas quais, j e K, idênticos ou diferentes, são números inteiros, podendo assumir qualquer valor de 1 a 10;
Biot representa o grupo: 15 s. -(CH,)
—c-II 0
HN
NH
O
Ri representa um grupo alcoxilo (C^-Cg) ou um grupo -0S03“ R2 representa um grupo alcoxilo(Ci-Cô) ou um grupo -0S03“ R3 representa um grupo alcoxilo(Ci-C6), R4 representa um grupo alcoxilo (Ci-C6) ou um grupo -0S03~ ou R4 constitui uma ponte -0-CH2-, estando o grupo -CH2- ligado ao átomo de carbono portador da função carboxilica no mesmo anel, W representa um átomo de oxigénio ou um grupo metileno, assim como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
De acordo com um outro dos seus aspectos, a invenção refere-se aos polissacáridos seguintes:
Sal de sódio de (2,3, 4, β-tetra-O-sulfonato-a-D-glucopiranosil) - (l->4) -(2,3,6-tri-0-sulf onato-a-D-glucopiranosil) - (l->4) -(2,3, 6-tri-0-sulf onato-β-ϋ-glucopiranosil)-(1—»4)-6-biotinamida-6-desoxi-2,3-di-0-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3,6-tri-0-metil-p-D-glucopiranosil) - (l->4) -[(2,3, 6-tri-O-metil-a-D-glucopiranosil) - (l->4) -0- (2,3, 6-tri-0-metil-p-D-glucopiranosil)- (1^4)]3-(6-0-sulfonato-2, 3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(ácido 2,3-di-0-metil-p-D- 16 glucopiranosilurónico) - (l->4) -(2,3, 6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1—4)-(ácido 2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosilurónico) - (1-+4)-2,3,6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranósido de metilo,
Sal de sódio de (2,3, 4,6-tetra-O-sulfonato-a-D-glucopiranosil) - (l->4) -(2,3,6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil) - (l->4) -(2,3,6-tri-0-sulfonato-β-ϋ-glucopiranosil) - (l->4) - (6- [6- (6-biotinamida-hexamida) hexamida]-6-desoxi-2, 3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3,6-tri-0-metil-p-D-glucopiranosil) — (1—»4) — [(2,3,6-tri-O-metil-a-D-glucopiranosil) - (l->4) -0- (2,3,6-tri-0-metil-β-D-glucopiranosil)-(1—>4)]3-(6-0-sulfonato-2,3-di-0-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(ácido 2,3-di-0-metil-p-D-glucopiranosilurónico)-(1—»4)-(2,3,6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil) - (l->4) - (ácido 2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosilurónico) - (1—4 )-2,3,6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranósido de metilo,
Sal de sódio de (2,3,4,6-tetra-O-sulfonato-a-D-glucopiranosil) - (1—4) -(2,3,6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1—+4)-(2,3,6-tri-0-sulfonato-β-ϋ-glucopiranosil) - (1—4) - (6- [6- (6-biotinamida-hexamida) hexamida]-6-desoxi-2, 3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1-4)-(2,3,β-tri-0-metil-β-D-glucopiranosil)-(1-4)-[(2,3,6— tri-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1—»4)-0-(2,3,6-tri-0-metil-β-D-glucopiranosil)-(1—»4)]3-(6-0-sulfonato-2,3-di-0-metil-a-D-glucopiranosil) - (1—4) - (ácido 2,3-di-0-metil^-D-glucopiranosilurónico)-(1—»4)-(2,3,6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1—+4)-(ácido 2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosilurónico) - (1—4 )-2,3,6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranósido de metilo, 17
Sal de sódio de (2-biotinamida-2-desoxi-3,4-di-0-metil-6-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1—>4)-(ácido 2,3-di-0-metil-p-D-glucopiranosilurónico) - (l-»4) - (2,3, 6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(l->4)-(ácido 2, 3-di-O-metil-a-L-idopiranosilurónico) - (l->4 )-2,3, β-tri-O-sulf onato-a-D-glucopiranósido de metilo,
Sal de sódio de (2-[N-(6-biotinamida-hexanoil)]-2-desoxi-3, 4-di-0-metil-6-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil) - (l-»4) -(ácido 2, 3-di-0-metil-p-D-glucopiranosilurónico) - (l->4) -(2, 3, 6-tri-O-sulfonato-a-D-glucopiranosil) - (l->4) - (ácido 2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosilurónico) - (l->4 )-2,3,6-tri-0-sufonato-a-D-glucopiranósido de metilo
Sal de sódio de (2-[6-(6-biotinamida-hexamida) hexamida]-2-desoxi-3,4-di-0-metil-6-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(l->4) - (ácido 2,3-di-0-metil-p-D-glucopiranosilurónico) -(1^4) -(2,3, 6-tri-O-sulfonato-a-D-glucopiranosil) - (l->4) -(ácido 2, 3-di-O-metil-a-L-idopiranosilurónico) - (l->4) -2, 3, 6-tri-O-sulfonato-a-D-glucopiranósido de metilo. A invenção inclui os polissacáridos sob a sua forma ácida ou sob a forma de qualquer um dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Na forma ácida, as funções -COO- e -S03" estão, respectivamente, sob a forma -COOH e -SO3H.
Por sal farmaceuticamente aceitável entende-se os polissacáridos da invenção, um polissacárido no qual uma ou mais das funções -COO- ou/e -S03~ estão ligadas de um modo iónico a um catião farmaceuticamente aceitável. Os sais preferidos, de acordo com a invenção, são aqueles cujo catião é seleccionado de 18 entre os catiões de metais alcalinos e, de um modo ainda mais preferido, aqueles em que o catião é Na+ ou K+.
Os compostos de fórmula (I), acima compreendem, igualmente, aqueles em que um ou mais átomos de hidrogénio ou de carbono foram substituídos pelo seu isótopo radioactivo, por exemplo, tritio ou carbono-14. Esses compostos marcados são úteis em trabalhos de investigação, metabolismo ou farmacocinética, ensaios bioquímicos e como ligandos.
Como princípio, o método de preparação de compostos de acordo com a invenção utiliza sintões de base di- ou oligossacarídica, preparados como anteriormente descrito na literatura. É feita referência, nomeadamente, às patentes ou aos pedidos de patente EP 300099, EP 529715, EP 621282 e EP 649854, assim como aos documentos C. van Boeckel, M Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1993, 32, 1671-1690. Estes sintões são, seguidamente, ligados entre si, para proporcionar um equivalente inteiramente protegido de um polissacárido de acordo com a invenção. Este equivalente protegido é, em seguida, transformado num composto de acordo com a invenção.
Um dos sintões base referidos acima contém uma função particular protegida, permitindo a introdução ulterior da biotina ou de um derivado da biotina, por exemplo, uma função amina latente, sob a forma de grupo azida ou protegida sob a forma de N-ftalimida.
Nas reacções de ligação referidas acima, um di- ou oligossacárido "dador", activado no seu carbono anómero, reage com um di- ou oligossacárido "receptor", possuindo um hidroxilo livre. 19 A presente invenção refere-se a um processo para a preparação de compostos de fórmula (I) caracterizado por: numa primeira etapa, ser sintetizado um equivalente completamente protegido do polissacárido (I), pretendido, contendo um precursor protegido do domínio Pe, prolongado na sua extremidade não-redutora por um precursor protegido do polissacárido sulfatado Po, contendo um destes precursores, nomeadamente, uma função amina, convenientemente protegida, para a introdução ulterior da biotina ou de um derivado de biotina; numa segunda etapa, são introduzidos e/ou revelados grupos carregados negativamente; numa terceira etapa, a função amina é desprotegida é, depois introduzida a biotina ou o derivado de biotina. A síntese de Pe é, em particular realizada de acordo com os métodos descritos, nos pedidos de patente publicados sob os números WO98/03554 e W099/36443, assim como na literatura (citada acima). A síntese da parte polissacarídica, precursora de Po é realizada de acordo com as reacções bem conhecidas do especialista na técnica, utilizando os métodos de síntese de oligossacáridos (G. J. Boons, Tetrahedron, 1996, 52, 1095-1121, documentos WO98/03554 e W099/36443) ou um oligossacárido, quando um oligossacárido dador de ligação glicosídica é ligado com um oligossacárido aceitador de ligação glicosídica, para originar outro oligossacárido, cujo tamanho é igual à soma dos tamanhos das duas espécies reactivas. Esta sequência é repetida até à obtenção do composto de fórmula (I) pretendido. A natureza e o 20 perfil da carga do composto final pretendido determinam a natureza das entidades quimicas utilizadas nas diferentes etapas da síntese, de acordo com as regras bem conhecidas do especialista na técnica. Poderá ser feita referência, por exemplo, a C. van Boeckel, M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1993, 32, 1671-1690 ou, ainda, a H. Paulsen, "Advances in selective Chemical syntheses of complex oligosaccharides" Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 21, 155-173 (1982).
Os compostos da invenção são obtidos a partir dos seus precursores polissacarídicos, completamente protegidos, utilizando a seguinte sequência de reacções: as funções álcool, devem ser transformadas num grupo O-sulfo e os ácidos carboxílicos são desprotegidos, por eliminação dos grupos protectores utilizados durante z elaboração da estrutura, depois, são, em seguida, introduzidos os grupos sulfo, é desprotegida a função amina permitindo a introdução da biotina ou do derivado da biotina, a biotina ou o derivado da biotina são introduzidos através de uma reacção normal de ligação amina/ácido.
Os compostos da invenção podem ser, naturalmente, preparados utilizando várias estratégias conhecidas do especialista na técnica da síntese dos oligossacáridos. O processo descrito acima é o processo preferido da invenção. No entanto, os compostos de fórmula (I) podem ser 21 preparados por outros métodos bem conhecidos da química dos açúcares descritos, por exemplo, em Monosaccharides, Their chemistry and their roles in natural products, P. M. Collins e R. J. Ferrier, J. Wiley & Sons, 1995 e em G. J. Boons, Tetrahedron, 1996, 52, 1095-1121.
Os pentassacáridos Pe podem ser, consequentemente, obtidos a partir de sintões dissacarídicos da forma descrita na publicação de C. van Boeckel, M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1993, 32, 1671-1690.
Os grupos protectores utilizados no processo de preparação dos compostos (I) são os normalmente utilizados na química dos açúcares, por exemplo, em Protectíve Groups in Organic Synthesis, TW Greene, John Wiley & sons, Nova Iorque, 1981.
Os grupos protectores são, vantajosamente, seleccionados, por exemplo, de entre os grupos acetilo, halogenometilo, benzoílo, levulinilo, benzilo, benzilo substituído, tritilo eventualmente substituído, tetra-hidropiranilo, alilo, pentenilo, terc-butildimetilsililo (tBDMS) ou trimetilsilitetilo.
Os grupos activadores são os normalmente utilizados na química dos açúcares, de acordo com, por exemplo, G. J. Boons, Tetrahedron, 1996, 52, 1095-1121. Estes grupos activadores são seleccionados, por exemplo, de entre imidatos, tioglicósidos, pentenilglicósidos, xantatos, fosfitos ou halogenetos.
No que se refere à forma como a biotina está ligada ao oligossacárido, assim como à natureza do derivado da biotina, a literatura química oferece outras possibilidades que é possível 22 realizar, através de conjuntos de grupos protectores bem conhecidos do especialista na técnica. Será utilizada, de um modo preferido, uma função amina ou, ainda, uma função tiol ou, ainda, uma função ácido carboxilico ou, ainda, uma função aldeído, a qual será feita reagir com um derivado da biotina contendo um grupo reactivo do tipo éster activado, maleimida, iodoacetil ou amina primária, realizando a reacção de acordo com as condições descritas na literatura (ver Savage et al., Avidin-Biotin Chemistry : A Handbook, Pierce Chemical Company, 1992) . 0 processo descrito acima permite a obtenção dos compostos da invenção sob a forma de sais. Para a obtenção dos ácidos correspondentes, os compostos da invenção, sob a forma de sais, são colocados em contacto com uma resina permutadora de catiões sob a forma ácida.
Os compostos da invenção sob a forma de ácidos podem ser, em seguida, neutralizados por uma base para a obtenção do sal pretendido. Para a preparação dos sais dos compostos de fórmula (I), pode ser utilizada qualquer base mineral ou orgânica, originando, com os compostos de fórmula (I), sais farmaceuticamente aceitáveis. De um modo preferido, são utilizados como base, hidróxido de sódio, de potássio, de cálcio ou de magnésio. Os sais preferidos são os sais de sódio e de cálcio dos compostos de fórmula (I).
Os compostos de acordo com a invenção foram o objecto de estudos bioquímicos e farmacológicos. A actividade antitrombótica global destes produtos e a sua neutralização foram estudadas num modelo da trombose venosa, constituída por uma injecção de factor tecidular, seguida por 23 uma estase da veia cava de ratos, tais como descritos por J-M. Herbert et al., Blood, 1998, 91, 4197-4205. Neste modelo, é obtida uma inibição de 60% da trombose, após a injecção intravenosa de 0,1 a 30 mmol/kg dos compostos. A injecção de avidina, numa proporção molar de 1 para 1000, reduz fortemente o efeito antitrombótico destes compostos, podendo a redução obtida ser superior a 50%. Paralelamente, a actividade pró-hemorrágica dos compostos é neutralizada pela injecção de avidina nas doses anteriormente referidas. Do mesmo modo, a actividade circulante dos oligossacáridos, medida pela actividade anti-Xa e/ou pela actividade anti-IIa, é neutralizada pela injecção de avidina.
Assim, a presente invenção tem, igualmente, como objecto um processo utilizando avidina ou estreptavidina, caracterizado por este permitir a neutralização dos polissacáridos de acordo com a invenção. A avidina ou a estreptavidina podem ser utilizadas na preparação de medicamentos destinados à neutralização dos polissacáridos de acordo com a presente invenção.
Devido à sua actividade bioquímica e farmacêutica, os oligossacáridos da presente invenção constituem medicamentos muito interessantes. A sua toxicidade é perfeitamente compatível com esta utilização. Estes são, igualmente, muito estáveis e são, consequentemente, particularmente adequados para constituir o princípio activo de especialidades farmacêuticas.
Estes podem ser utilizadas em várias patologias consequentes de uma modificação da homeostasia do sistema da coagulação que ocorrem, em particular, como consequência de distúrbios do sistema cardiovascular e vascular cerebral, como 24 os distúrbios tromboembólicos associados à arterosclerose e à diabetes, tais como a angina instável, acidente cerebral, restenose após angioplastia, endarterectomia, colocação de próteses endovasculares; ou distúrbios tromboembólicos associados à retrombose após trombólise, enfarte, demência de origem isquémica, doenças arteriais periféricas, hemodiálise, fibrilhações auriculares ou durante a utilização de próteses vasculares de derivações aorto-coronárias.
Estes produtos podem ser, além disso, utilizados no tratamento ou na prevenção de patologias tromboembólicas de origem venosa, tais como as embolias pulmonares. Estes podem ser utilizados na prevenção ou no tratamento das complicações trombóticas, observadas, por exemplo, após operações cirúrgicas, desenvolvimentos tumorais ou desregulações da coagulação, induzidos por activadores bacterianos, virais ou enzimáticos. No caso da sua utilização durante a colocação de próteses, os compostos da presente invenção podem revestir as próteses e torná-las, deste modo, hemocompativeis. Em particular, estes podem ser fixados a próteses intravasculares (stents). Neste caso, estes podem, eventualmente, ser modificados quimicamente, pela introdução de uma extensão apropriada na extremidade não-redutora ou redutora, como descrito de acordo com o documento EP 649854.
Os compostos da presente invenção podem ser, igualmente, utilizados como adjuvantes, durante a endarterectomia realizada com balonetes porosos.
Os compostos de acordo com a invenção podem ser utilizados na preparação de medicamentos destinados ao tratamento das doenças acima. 25
De acordo com um outro dos seus aspectos, a presente invenção tem, consequentemente, como objecto uma composição farmacêutica contendo, como principio activo, um polissacárido de síntese, de acordo com a invenção ou um dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis, eventualmente em associação com um ou mais excipientes inertes e adequados.
Os referidos excipientes são seleccionados de acordo com a forma farmacêutica e o modo de administração pretendidos: oral, sublingual, subcutâneo, intramuscular, intravenoso, transdérmico, transmucosal, local ou rectal. 0 princípio activo pode estar, igualmente, presente sob a forma de um complexo com uma ciclodextrina, por exemplo, α, β ou γ ciclodextrina, 2-hidroxipropil^-ciclodextrina ou metil-β-ciclodextrina. 0 princípio activo pode ser, igualmente, libertado por um balonete que o contenha ou por um extensor endovascular introduzido nos vasos sanguíneos. A eficácia farmacológica do princípio activo não é, deste modo, afectada.
Em cada unidade de dosagem, o princípio activo está presente nas quantidades adaptadas às doses diárias visadas, de forma a obter o efeito profiláctico ou terapêutico pretendido. Cada unidade de dosagem pode conter de 0,1 a 100 mg do princípio activo, de um modo preferido de 0,5 a 50 mg. Estas doses de compostos anticoagulantes poderão ser neutralizadas por doses de avidina ou de estreptavidina, indo de 1 a 1000 mg em injecção iv (intravenosa) de bólus ou perfusão. 26
Os compostos de acordo com a invenção podem ser, igualmente, utilizados em associação com um ou mais de outros princípios activos, úteis na terapia pretendida, tais como, por exemplo, antitrombóticos, anticoagulantes, antiagregantes plaquetários, tais como, por exemplo, dipiridamole, aspirina, ticlopidina, clopidogrel ou antagonistas do complexo da glicoproteina Ilb/IIIa.
Os métodos, as preparações e os esquemas seguintes ilustram a síntese de vários intermediários úteis à obtenção de polissacáridos de acordo com a invenção. São utilizadas as abreviaturas seguintes:
Bn: benzilo; Bz: benzoílo; CCM: cromatografia em camada fina; Ts: tosilo; Lev: levulinilo; E: etilo; Ph: fenilo;
Me: metilo; Ac: acetilo; SE: trimetilsililetilo; ESI: é a sigla inglesa para Electron Spray Ionization; Biotina: Ácido hexa-hidro-2oxo-l/í-tieno [3, 4—d] imidazole-pentanóico; Z: benziloxicarbonilo.
Em seguida, são detalhados exemplos de síntese dos compostos da invenção, a título de ilustração. 27
Ph ESQUEMA 1 - síntese do trissacárido 9
. O OSE 00¾^ “ HO-^ OH
____.0V OSE - MeO"^ MeO OBn ,0.
OSE HO MeO' OMe 1 2 3
28 PREPARAÇÃO 1 2-(Trimetilsilil)etil 4, 6-0-benzilideno-2,3-di-O-metil-O-D-glucopiranósido (2) É adicionado hidreto de sódio em pequenas quantidades (18 g), a uma solução do composto 1 (15,8 g, 42,8 mmol) (preparado de acordo com K. Jansson et al., J. Org. Chem., 1988, 53, 5629-5647) e iodeto de metilo (20 mL, 319 mmol) em tetra-hidrofurano (350 mL) a 0 °C. A mistura de reacção é agitada durante 4 horas à temperatura ambiente. O excesso de hidreto de sódio é destruído com metanol e a mistura de reacção é vertida para água gelada (1,5 L) . Após extracção com acetato de etilo, a fase orgânica é lavada com uma solução saturada de cloreto de sódio, água, é seca sobre sulfato de sódio e, depois, concentrada sob vácuo. A purificação do resíduo é realizada por cromatografia em coluna de sílica gel (ciclo-hexano/acetato de etilo 15/1 (v/v)), para originar 16,8 g do composto 2.
[a]D =-41° (C = 0,69, diclorometano). PREPARAÇÃO 2 2-(Trimetilsilil)etil 6-0-benzil-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (3) São adicionados, sucessivamente, crivo molecular 3Á em pó (82 g), laranja de metilo (indicador colorido), cianoboro-hidreto de sódio (34 g, 526 mmol) e, depois, gota a gota, uma solução saturada de ácido clorídrico em éter dietílico, a uma solução do composto 2 (16 g, 40,3 mmol) em tetra-hidrofurano (600 mL) até a 29 obtenção de uma coloração rosa. Após filtração e extracção com acetato de etilo, a fase orgânica é lavada com uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio, água, é seca sobre sulfato de sódio e, depois, concentrada sob vácuo. Uma cromatografia em coluna de sílica gel (tolueno/acetato de etilo 3/1 (v/v)) permite a obtenção de 12,5 g do composto 3.
[a] d = -42° (C = 1,2, diclorometano). PREPARAÇÃO 3 2- (Trimetilsilil)etil (2,3-di-0-benzoil-4,6-O-benzilideno-a-D-glucopiranosil) - (1^4) - (2,3, 6, -tri-O-benzoil-fi-D-glucopiranosil)-(1^4)-6-0-benzil-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (5) É agitada uma mistura de tioglicósido 4 (16,52 g, 16,60 mmol) (obtido de acordo na preparação 1 do pedido de patente publicado sob o número WO 99/36443), do composto 3 (6,0 g, 15,05 mmol) e do crivo molecular 4 Á em pó (16,7 g), em tolueno (300 mL), sob atmosfera de árgon, durante 1 hora. Depois, a mistura é arrefecida a -20 °C. É adicionada uma solução de W-iodossuccinimida (3,9 g, 17,4 mmol) e de ácido trifluorometanossulfónico (0,17 mL, 1,97 mmol), numa mistura de diclorometano/dioxano 1/1 (v/v) (86 mL), gota a gota, à mistura de reacção. Após 10 minutos, a mistura de reacção é filtrada, é diluída com diclorometano e é, sucessivamente, lavada com uma solução de tiossulfato de sódio 1 M, uma solução de hidrogenocarbonato de sódio a 10% e água, seca sobre sulfato de sódio e, depois, concentrada sob vácuo. A purificação do resíduo é realizada por cromatografia em coluna de sílica gel 30 (tolueno/acetato de etilo 6/1 (v/v)), para originar 18,8 g do trissacárido 5.
[a] d = +34° (C = 1,26, diclorometano). PREPARAÇÃO 4 2- (Trimetilsilil) etil (4, 6-0-benzilideno-<x-D-glucopiranosil) -(1^4) - ($-D-glucopiranosil)- (1-+4) -6-0-benzil-2, 3-di-O-metil-β-D-glucopiranósido (6) É adicionado terc-butilato de potássio (3,15 g) a uma solução do composto 5 (18,7 g, 14 mmol) numa mistura metanol- dioxano 1/1 (v/v) (140 mL). É agitado durante 2 horas, à
temperatura ambiente. A mistura de reacção é neutralizada com a resina Dowex® 50WX4 H+, filtrada e concentrada sob vácuo. A purificação do resíduo é realizada por cromatografia em coluna de sílica gel (diclorometano/metanol 20/1 (v/v)), para originar 10,0 g do composto 6.
[a]D = +29° (C = 1,11, diclorometano). PREPARAÇÃO 5 2- (Trimetilsilil) etil (4, 6-0-benzilideno-2,3-di-0-metil-<x-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2, 3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(l->4) -6-0-benzil-2, 3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (7) É adicionado hidreto de sódio, em pequenas quantidades, (5,2 g, 216 mmol), sob atmosfera de árgon, a uma mistura 31 arrefecida (0 °C) do composto 6 (9,93 g, 12,24 mmol), de iodeto de metilo (9,0 mL, 138 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (100 mL) . A mistura é agitada durante 20 horas à temperatura ambiente. O excesso de hidreto de sódio é destruído com metanol e a mistura de reacção é vertida em água gelada (500 mL). Após a extracção com acetato de etilo, a fase orgânica é lavada com uma solução saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio e, depois, concentrada sob vácuo para originar 11 g do composto 7, que é utilizado na etapa seguinte sem purificação. CCM: Rf = 0,38, sílica gel, tolueno/acetato de etilo 3/2 (v/v) PREPARAÇÃO 6 2- (Trimetilsilil) etil (2,3-di-0-metil-a.-D-glucop±ranosil) -(l->4) - (2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil) - (1^4) -6-O-benzil-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (8) É dissolvido o composto 7 (11 g) em ácido acético a 60% (180 mL) e é agitado durante 1 hora e 30 a 80 °C. A mistura é concentrada e é co-evaporada com tolueno. O resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (tolueno/acetona 2/1 (v/v)), para originar 8,46 g do composto 8. CCM: Rf = 0,36, sílica gel, tolueno/acetona 1/1 (v/v) 32 PREPARAÇÃO 7 2- (Trimetilsilil) etil (6-0-benzoil-2,3-di-0-metil-<x-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2, 3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-6-0-benzil-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (9) São adicionados 1-benzoiloxi-lfí-benzotriazole (5,36 g, 22,4 mmol) e trietilamina (3,32 mL), a uma solução do composto 8 (8,41 g, 10,6 mmol) em diclorometano (110 mL) . A mistura é agitada durante 20 horas à temperatura ambiente e, depois, diluida com diclorometano, lavada com uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio e água, é seca sobre sulfato de sódio e, depois, concentrada sob vácuo. O residuo é purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (ciclo-hexano/acetato de etilo/etanol 5/0,5/0,25 (v/v/v)), para originar 8,40 g do composto 9.
[a] d = +15° (C = 2, diclorometano). 33 ESQUEMA 2 - Síntese do pentassacárido 14
34 PREPARAÇÃO 8 2- (Trimetilsilil) etil (2,3-di-0-benzoil-4, 6-0-benzilideno-<x-D-glucopiranosil) - (1^4)- (2,3, 6, -tri-0-benzoil-$-D-glucopiranosil) -(1^4) - (6-0-benzoil-2,3-di-O-metil-oi-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3,6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-6-0-benzil-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (10) 0 composto 9 é transformado no composto 10, de acordo com o modo de operação descrito na PREPARAÇÃO 3.
[a] D = +42° (C = 2, diclorometano). PREPARAÇÃO 9 2- (Trimetilsilil) etil (4, 6-Q-benzilideno-oL-D-glucopiranosil) - (1^4) - (β-D-gluco-piranosil) - (1^4) - (2, 3-di-O-metil-(x-D-glucopiranosil) - (1^4) - (2, 3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-6-Q-benzil-2, 3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (11) O composto 10 é transformado no composto 11, de acordo com o modo de operação descrito na PREPARAÇÃO 4. CCM: Rf = 0,35, sílica gel, diclorometano/metanol 10/1 (v/v) 35 PREPARAÇÃO 10 2-(Trlmetilsilil)etil(4, 6-0-benzilideno-2,3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4) - (2,3, 6-tri-0-metil-OL-D-glucop±ranosil) - (1^4)- (2,3, 6-tri-O-metil-^-D-glucopiranosil)-(1^4)-6-0-benzil-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (12) O composto 11 é transformado no composto 12, de acordo com o modo de operação descrito na preparação 5. CCM: Rf = 0,11, sílica gel, ciclo-hexano/acetato de etilo 1/2 (v/v) PREPARAÇÃO 11 2- (Trimetilsilil) etil (2,3-di-O-metil-OL-D-glucopiranosil) -(1^4) -2, 3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil) - (1^4) - (2, 3, 6-tri-O-metil-(x-D-glucopiranosil) - (1^4) - (2, 3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-6-0-benzil-2, 3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (13) O composto 12 é transformado no composto 13, de acordo com o modo de operação descrito na PREPARAÇÃO 6. CCM: Rf = 0,33, sílica gel, ciclo-hexano/acetato de etilo/etanol 2/0,5/0,5 (v/v/v) 36 PREPARAÇÃO 12 2- (Trimetilsilil) etil (6-0-benzoil-2,3-di-0-metil-<x-D-glucopiranosil) ~(l->4) - (2,3, 6-tr±-0-met±l-$-D-glucopiranosil) -(1^4) - (2, 3, 6-tri-0-metil-(x-D-glucopiranosil) - (l->4)- (2,3, 6-tri-O-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-6-0-benzil-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (14) 0 composto 13 é transformado no composto 14, de acordo com o modo de operação descrito na preparação 7. CCM: Rf = 0,16, sílica gel, ciclo-hexano/acetato de etilo/etanol 3/0,5/0,5 (v/v/v) 37 ESQUEMA 3 - Síntese do heptassacárido 19
38 PREPARAÇÃO 13 2-(Trimetilsilil)etil(2, 3-di-0-benzoil-4,6-O-benzilideno-a-D-glvcopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-O-benzoil-fi-D-glucopiranosil) - (1^4) - (6-0-benzoil-2,3-di-O-metil-<x-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-O-metil-fi-D-glucopiranosil)-(1^4) - (2, 3, 6-tri-O-metil-a-D-glucopiranosil) - (1^4) - (2, 3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4) -6-0-benzil-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (15) A reacção de ligação do composto 14 com o dissacárido 4 é realizada, de acordo com o modo de operação descrito na PREPARAÇÃO 3, para proporcionar o composto 15.
[a] D = +52° (C = 1,1, diclorometano). PREPARAÇÃO 14 2- (Trimetilsilil) etil (4, 6-0-benzilideno-<x-D-glucopiranosil) -(1^4) - φ-D-gluco-piranosil) - (1^4) - (2, 3-di-O-metil-OL-D-glucopiranosil) - (1^4)- (2, 3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-6-0-benzil-2,3-di-O-metil-p-D-glucopiranósido (16) 0 composto 15 é transformado no composto 16, de acordo com o modo de operação descrito na PREPARAÇÃO 4. 39 CCM: Rf = 0,31, sílica gel, diclorometano/metanol 10/1 (v/v) PREPARAÇÃO 15 2- (Trlmetilsilil) etil (4, 6-0-benzilideno-2,3-di-0-metil-<x-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3,6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-[ (2,3, 6-tri-O-metil-a-D-glucopiranosil)- (1^4)- (2,3, 6-tri-O-metil-^-D-glucopiranosil)-(1^4)]2-6-0-benzil-2, 3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (17) O composto 16 é transformado no composto 17, de acordo com o modo de operação descrito na PREPARAÇÃO 5. CCM: Rf = 0,46, sílica gel, diclorometano/metanol 10/1 (v/v) PREPARAÇÃO 16 2- (Trlmetilsilil) etil (2,3-di-O-metil-OL-D-glucopiranosil) -(1^4) - (2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil) - (1^4)- (2,3, 6-tri-O-metil-cL-D-glucopiranosil) - (1^4)- (2, 3, 6-tri-Q-metil-^-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2, 3, 6-tri-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3,6-tri-O-metil-p-D-glucopiranosil)-(1^4)-6-O-Benzil-2,3-di-O-metil-^-D-glucopiranósido (18) O composto 17 é transformado no composto 18, de acordo com o modo de operação descrito na PREPARAÇÃO 6. 40 CCM: Rf = 0,42, sílica gel, ciclo-hexano/acetato de etilo/etanol 1/0,5/0,5 (v/v/v) PREPARAÇÃO 17 2-(Trimetilsilil)etil(6-0-benzoil-2,3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)- (2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4) - (2, 3, 6-tri-O-metil-u-glucopiranosil) -(1^4) - (2, 3, 6-tri-O-metil-$-D-glucopiranosil) - (1^4) - (2, 3, 6-tri-0-metil-<x-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(l->4) -6-0-benzil-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (19) O composto 18 é transformado no composto 19, de acordo com o modo de operação descrito na PREPARAÇÃO 7. CCM: Rf = 0,25, sílica gel, ciclo-hexano/acetato de etilo/etanol 3/0,5/0,5 (v/v/v) 41 ESQUEMA 4 - Síntese do nonassacárido 23
42 PREPARAÇÃO 18 2- (Trlmetilsilil) etil (2,3-di-0-benzoil-4, 6-O-benzilideno-oL-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-O-benzoil-p-D-glucopiranosil) - (1^4) - (6-0-benzoil-2,3-di-0-metil-cx-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucop±ranosil)-(1^4)-[ (2,3, 6-tri-0-metil-OL-D-glucoplranosil) - (1^4) - (2,3, 6-tri-O-metil-^-D-glucopiranosil) - (1^4) ]2-6-0-benzil-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (20) É agitada uma mistura do tioglicósido 4 (5,2 g, 5,23 mmol), heptassacárido 19 (4,72 g, 2,75 mmol) e crivo molecular 4Á em pó, em tolueno, sob atmosfera de árgon, durante 1 hora. É, então, adicionada, gota a gota, a 0 °C, uma solução de N-iodossuccinimida (1,36 g, 5,85 mmol) e de ácido trifluorometanossulfónico (0,140 mL, 1,56 mmol) em diclorometano/dioxano 1/1 (v/v) (32 mL) . Após 15 minutos, a mistura de reacção é filtrada, diluida com diclorometano, é lavada, sucessivamente, com uma solução de tiossulfato de sódio 1 M, solução de hidrogenocarbonato de sódio a 10% e água, é seca sobre sulfato de sódio e, depois, concentrada sob vácuo. A purificação do resíduo é realizada por cromatografia em coluna de silica gel (ciclo-hexano/acetato de etilo/etanol 3/0,5/0,5 (v/v/v)), para originar 7,13 g do composto 20.
[oí] d = +65° (C = 1,4, diclorometano). 43 PREPARAÇÃO 19 2- (Trimetilsilil) etil (4, 6-0-benzilideno-<x-D-glucopiranosil) -(1^4) - ($-D-glucopiranosil) -(1^4) - (2, 3-di-O-metil-CL-D-glucopiranosil) - (1^4)- (2, 3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil) -(1^4) -[ (2, 3, 6-tri-0-metil-(x-D-glucopiranosil) -(1^4) -(2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil) - (1^4) ] 2-6-0-benzil-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (21) 0 composto 20 é transformado no composto 21, de acordo com o modo de operação descrito na PREPARAÇÃO 4. CCM: Rf = 0,27, sílica gel, diclorometano/metanol 10/1 (v/v) PREPARAÇÃO 20 2-(Trimetilsilil)etil(4, 6-0-benzilideno-2,3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1-^4)-[(2,3, 6-tri-O-metil-OL-D-glucopiranosil) - (1^4)- (2, 3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil) - (1^4) ]3-6-0-benzil-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (22) O composto 21 é transformado no composto 22, de acordo com o modo de operação descrito na PREPARAÇÃO 5. CCM: Rf = 0,31, sílica gel, ciclo-hexano/acetato de etilo/etanol 5/1/1 (v/v/v) 44 PREPARAÇÃO 21 2-(Trimetilsilil)etil(2, 3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2, 3, 6-tri-0-metil-$-D-glucop±ranosil)-(1^4)-[ (2,3, 6-tri-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil) - (1^4) ]3-6-0-benzil-2, 3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (23) 0 composto 22 é transformado no composto 23, de acordo com o modo de operação descrito na PREPARAÇÃO 6. CCM: Rf = 0,35, sílica gel, ciclo-hexano/acetato de etilo/etanol 2/1/1 (v/v/v) 45 ESQUEMA 5 - Síntese do nonassacárido 29 23 ''
PREPARAÇÃO 22 2-(Trimetilsilil)etil (2, 3-di-0-metil-6-0-tosil-aL-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-O-metil-O-D-glucopiranosil)-(1^4)-[ (2, 3, 6-tri-O-metil-a-D-glucopiranosil) - (l->4)~ (2, 3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil) - (1^4) ] 3-6-0-benzil-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (24) 0 composto 23 (1,09 g) é dissolvido em piridina (10 mL), em seguida, é adicionado cloreto de tosilo (1,03 g), sob atmosfera de árgon. Após 2 horas de agitação, é diluído com diclorometano (100 mL) . A fase orgânica é lavada, sucessivamente, com uma solução de hidrogenossulfato de potássio a 10%, depois, com água, seca e evaporada até à secura. Após cromatograf ia em coluna de sílica gel (tolueno/acetona 2,3/2 (v/v)), são obtidas 1,77 g do composto 24. CCM: Rf = 0,5, sílica gel, ciclo-hexano/acetato de etilo/etanol 3/1/1 (v/v/v) PREPARAÇÃO 23 2-(Trimetilsilil)etil(6-desoxi-2,3-di-0-metil-6-ftalimida-(x-D-glucopiranosil) - (1^4)- (2,3, 6-tri-O-metil-fh-D-glucopiranosil) -(1^4) -[ (2, 3, 6-tri-O-metil-oi-D-glucopiranosil)-(l->4) - (2, 3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil) - (l->4) ]3-6-O-benzil-2, 3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (25) É adicionada ftalimida de potássio (225 mg, 1,38 mmol), depois por éter de coroa 18-crown-6 (121,5 mg, 0,46 mmol), a uma 47 solução do composto 24 (500 mg, 0,23 mmol) em N,N-dimetilformamida anidra (11 mL), contendo crivo molecular 4 Â em pó. A mistura é agitada durante 4 horas a 80 °C. Após ter sido arrefecida, a mistura de reacção é diluída com diclorometano, filtrada através de Celite e concentrada. O residuo é purificado por cromatografia em gel Sephadex® LH20 (3 x 100 cm) (diclorometano/etanol 1/1 (v/v)), seguida por cromatografia em coluna de silica gel (tolueno/etanol 11/2 (v/v)), para originar 417,4 mg do composto 25 . CCM: Rf = 0,38, silica gel, tolueno/etanol 11/2 (v/v) PREPARAÇÃO 24 2-(Trlmetilsilll)etil(2,3, 4, 6-tetra-O-acetil-a-D-glucopiranosil) -(1^4) - (2,3, 6-tri-O-acetil-oL-D-glucopiranosil)-(1^4) - (2,3, 6-tri-0-acetil-$-D-glucopiranosil)- (1^4)- (6-desoxi-2,3-di-0-metil-6-ftalimida-oL-D-glucopiranosil) - (1^4)- (2,3, 6-tri-O-metil-fi-D-glucopiranosil)-(1^4)-[(2,3, 6-tri-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-O-metil-O-glucopiranosil) -(1^4)]3-6-0-benzil-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (27) É agitada uma mistura de tioglicósido 26 (1,515 g, 1,564 mmol) (preparada de acordo com o composto 41, preparação 36 da patente WO 99/36443), do aceitador 25 (840 mg, 0,391 mmol) e do crivo molecular 4 Á em pó (2,15 g), em tolueno (33 mL), sob atmosfera de árgon, durante 1 hora. A mistura de reacção é arrefecida a 0 °C e é ai introduzida uma solução de N-iodossuccinimida (387 mg) e de ácido trifluorometanossulfónico (55,4 pL) em diclorometano/dioxano 1/1 (v/v) (7 mL). Após 10 minutos, a mistura é filtrada, diluída com tolueno, lavada, 48 sucessivamente, com uma solução de tiossulfato de sódio 1 M, uma solução de hidrogenocarbonato de sódio a 10% e água, é seca sobre sulfato de sódio e, depois, concentrada sob vácuo. A purificação do resíduo é realizada por cromatografia em gel Sephadex® LH20 (diclorometano/etanol 1/1 (v/v)), seguida por cromatografia em coluna de sílica gel (tolueno/acetona 5/4 (v/v)) e origina 887 mg do composto 27.
[a] D = +70° (C = 0,35, diclorometano). PREPARAÇÃO 25 2-(Trimetilsilil)etil(2,3, 4, 6-tetra-O-acetil-a-D-glucopiranosil) -(1^4) - (2,3, 6-tri-0-acetil-aL-D-glucop±ranosil)-(1^4)-(2, 3, 6-tri-0-acetil-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-(6-desoxi-2,3-di-0-metil-6-ftalimida-oL-D-glucopiranosil) - (1^4)- (2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil) - (1^4) -[ (2,3, 6-tri-O-metil-oi-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4) ]3—2, 3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (28) É tratada uma solução do composto 27 (750 mg, 0, 245 mmol) em ácido acético (37 mL), sob pressão de hidrogénio (5 bar), na presença de paládio sobre carvão a 10% (750 mg), durante 2 horas e 30. Após filtração, a solução é concentrada e a purificação do resíduo é realizada por cromatografia em coluna de sílica gel (tolueno/etanol 6/1 (v/v)), para originar 728 mg do composto 28. CCM:Rf = 0,32, sílica gel, tolueno/etanol 6/1 (v/v) 49 PREPARAÇÃO 26 2-(Trimetilsilil)etil(2,3, 4, 6-tetra-O-acetil-a-D-glucopiranosil) - (1-^4) - (2,3, 6-triO-acetil-<x-D-glucopiranosil)-(1^4) - (2,3, 6-tri-0-acetil-$-D-glucopiranosil) - (1-^4)- (6-desoxi-2, 3-di-0-metil-6-ftalimida-a-D-glucopiranosil) - (l->4)~ (2, 3, 6-tri-O-metil-fi-D-glucoplranosll) - (l-*4)-[ (2,3, 6-tri-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-O-metil-p-D-glucopiranosil)-(1-^4) ]3-6-Oacetil-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranósido (29) São adicionados trietilamina (51,1 pL, 0,368 mmol), anidrido acético (32,5 pL, 0,344 mmol) e dimetilaminapiridina (6,0 mg, 0, 049 mmol), a uma solução do composto 28 (728 mg, 0,245 mmol) em diclorometano (10 mL). Após 1 hora de agitação, é diluida com diclorometano, lavada, sucessivamente, com solução de hidrogenossulfato de potássio a 10%, água, uma solução saturada de hidrogenocarbonato sódio e água, é seca sobre sulfato de sódio e, depois, concentrada sob vácuo. A purificação do resíduo, realizada por cromatografia em coluna de sílica gel, permite a obtenção de 0,618 mg do composto 29. CCM: Rf = 0,37, sílica gel, tolueno/etanol 6/1 (v/v) 50 ESQUEMA 6 - Síntese do oligossacárido 31 29
PREPARAÇÃO 27 (2, 3, 4, 6-Tetra-0-acetil-a.-D-glucopiranosil) - (1^4) - (2,3, 6-tri-O-acetil-oL-piranosil) - (1^4)-(2,3, 6-tri-0-acet±l-$-D-glucopiranosil) - (1^4) -(6-desoxi 2,3-di-0-metil-6-ftalimida-<x-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-[ (2, 3, 6-tri-O-metil-a-D-glucopiranosil)- (1^4)- (2,3, 6-triO-metil-p-D-glucopiranosil) - (1^4) ]3-6-0-acetil-2,3-di-O-metil-D-glucopiranose (30) É agitada uma solução do composto 29 (579 mg, 0,192 mmol), numa mistura de ácido trifluoroacético/diclorometano 2/1 (v/v) (11,5 mL), durante 1 hora. É diluída com uma mistura de tolueno/acetato de n-propilo 2/1 (v/v) (69 mL), concentrada e co-evaporada com tolueno. O residuo é purificado por 51 cromatografia em coluna de sílica gel (tolueno/etanol 5/1 (v/v)), para a obtenção de 523 mg do composto 30. CCM: Rf = 0,31, sílica gel, tolueno/etanol 5/1 (v/v) PREPARAÇÃO 28
Tricloroacetimidato de (2,3,4,6-tetra-0-acetil-o.-D- glucopiranosil) - (1^4) - (2,3, 6-tri-O-acetil-oi-D-glucopiranosil) -(l->4) - (2,3, 6-tri-0-acetil-$-D-glucopiranosil)- (1^4)- (6-desoxi-2,3-di-0-metil-6-ftalimida-aL-D-glucopiranosil) - (1^4)- (2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-[ (2,3, 6-tri-O-metil-a-D-glucopiranosil) -(1^>4) -(2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil) -(1^4) ]3-6-0-acetil-2,3-di-O-metil-D-glucopiranose (31) São adicionados tricloroacetonitrilo (65,5 pL, 0,85 mmol) e carbonato de césio (88,4 mg, 0,27 mmol), a uma solução de composto 30 em diclorometano (3 mL). Após agitação durante 2 horas, a mistura é filtrada, concentrada. O resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (tolueno/etanol 6/1 (v/v) + 0,1% de trietilamina), para originar 477 mg do composto 31. CCM: Rf = 0,35, sílica gel, tolueno/etanol 6/1 (v/v) 52 ESQUEMA 7 - Síntese do hexadecassacárido 35
53 PREPARAÇÃO 29 (2, 3, 4, 6-Tetra-0-acetil-OL-D-glucopiranosil) - (1^4)- (2, 3, 6-tri-O-acetil-u-D-glucopiranosil)- (1^4)- (2,3, 6-tri-0-acetil-$-D-glucopiranosil) -(1-^4) - (6-desoxi-2,3-di-0-metil-6-ftalimida-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2, 3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil) -(1^4)-[ (2,3, 6-tri-O-metil-a-D-glucopiranosil) - (1^4) -O- (2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil) - (1^4) ]3- (6-0-acetil-2,3-di-Q-metil-cL-D-glucopiranosil) - (1^4) - (benzil 2, 3-di-0-metil-$-D-glucopiranosiluronato) - (1^4) - (3, 6-di-0-acetil-2-0-benzil-oL-D-glucopiranosil) - (1-+4) - (benzil 2,3 .di-0-metil-OL-L-idopiranosiluronato) - (1^4) -2,3, 6-Tri-O-benzil-oi-D-glucopiranósido de metilo (33) É dissolvido imidato 31 (370 mg, 0,121 mmol) e o composto 32 (336 mg, 0,242 mmol), (obtido de acordo com P. Westerduin et al. BioOrg. Med. Chem, 1994, 2, 1267) numa mistura de diclorometano/éter dietilico 1/2 (v/v) (5,5 mL). Após a adição de crivo molecular 4 Á em pó, a mistura é arrefecida a -20 °C e é adicionada uma solução de trifluorometanossulfonato de trimetilsililo 0,1 M em diclorometano (181,5 pL) . Após 25 minutos, a mistura é neutralizada pela adição de hidrogenocarbonato de sódio sólido. Após filtração e concentração, o residuo é purificado por cromatografia em gel Sephadex® LH20, seguida por uma cromatografia em coluna de silica gel (tolueno/acetona 6/5 (v/v)), para originar 302 mg do composto 33.
[a] d = +86° (C = 1, diclorometano). 54 PREPARAÇÃO 30 (2,3, 4, 6-Tetra-0-acetil-(x-D-glucopiranosil)- (1^4)- (2, 3, 6-tri-O-acetil-oL-D-glucopiranosil)- (1^4)- (2,3, 6-tri-O-acetil-β-D-glucopiranosil) - (1^4) -(6-desoxi 2,3-di-0-metil-6-ftalimida-a-D-glucopiranosil) ~(l->4) -(2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil) -(1^4)-[ (2,3, 6-tri-0-metil-<x-D-glucopiranosil) - (1^4)-0- (2,3, 6-tri-Q-metil-$-D-glucopiranosil) - (1^4) ]3- (6-0-acetil-2,3-di-O-metil-OL-D-gluco-piranosil) - (1^4) - (ácido 2, 3-di-0-metil-$-D-glucopiranosilurónico)-(1^4)-(3, 6-di-O-acetil-ct-D-glucopiranosil) - (l-*4) - (ácido 2,3-di-O-metil-oL-L-idopiranosilurónico) - (l->4) -<x-D-glucopiranósido de metilo (34) É tratada uma solução do composto 33 (104 mg, 0, 024 mmol) em ácido acético (5 mL), sob pressão de hidrogénio (4 bar), na presença de paládio sobre carvão a 10% (104 mg), durante 4 horas. Após filtração, a solução é liofilizada, para originar o composto 34 (87 mg,), que é utilizado na etapa seguinte sem purificação. 55 PREPARAÇÃO 31 (a-D-Glucopiranosil) - (1^4) - (oi-D-glucopiranosil) - (1^4)- (β-D-glucopiranosil)-(1^4)-(6-desoxi-2,3-dl-0-metil-6-ftalim±da-a-D-glucopiranosil) - (l->4) -(2,3, 6-tri-O-metil-^-D-glucopiranosil) -(1^4)-[ (2, 3, 6-tri-O-metil-ct-D-glucopiranosil) - (1^4)-0- (2, 3, 6-tri-O-metil-p-D-glucopiranosil) - (1^4) ]3- (2,3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4) - (ácido 2,3-d±-0-metil-$-D-glucopiranosilurónico) - (1^4) - (α-D-glucopiranosil) - (1^4)-(ácido 2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosilur6nico) - (1^4) -ol-D-glucopiranósido de metilo (35) É adicionada uma solução molar de metilato de sódio em metanol (140 pL), a uma solução do composto 34 (80 mg, 0,021 mmol) em metanol anidro (6,9 mL), na presença de crivo molecular 3 Á em pó (875 mg) . Após 20 horas à temperatura ambiente, filtra-se e neutraliza-se com ácido acético. A solução é concentrada para metade e colocada numa coluna de Sephadex® G-25 fina (3 x 92 cm) . Após eluição com água e liofilização, é obtido o composto 35 (66 mg). 56 ESQUEMA S - Síntese do oligossacárido 37 35
PREPARAÇAO 32
Sal de sódio de (2,3,4,6-tetra-O-sulfonato-a-D-glucopiranosil) - (1^4) - (2,3, 6-tri-O-sulfonato-oi-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-0-sulfonato-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-(6-desoxi-2, 3-di-0-metil-6-ftalimida-a-D-glucopiranosil)-(1^4)- (2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-[ (2,3, 6-tri-O-metil-oL-D-glucopiranosil)- (l~*4)-0- (2,3, 6-tri-O-metil-fi-D-glucopiranosil) - (1^4) ]3- (6-0-sulfonato-2,3-di-O-metil-oL-D-glucopiranosil) - (1^4)- (ácido 2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranosilurónico) - (1^4) - (2,3, 6-tri-0-sulfonato-OL-D-glucopiranosil) - (1^4) - (ácido 2,3-di-O-metil-aL-L-idopiranosilurónico) - (1^4) - (2,3, 6-tri-O-sulfonato-cn-D-glucopiranósido de metilo (36) É dissolvido o poliol 35 (66,4 mg, 0,021 mmol) em N,N-dimetilformamida (1,8 mL) . É adicionado o complexo de trióxido de enxofre-trietilamina (320 mg, 1,77 mmol) e a mistura é agitada durante 20 horas a 55 °C. A solução é colocada numa 57 coluna de Sephadex® G-25 fina (3 x 92 cm), eluída com cloreto de sódio 0,2 M. São concentradas as fracções contendo o produto e são dessalinizadas, utilizando a mesma coluna eluida com água.
Após liofilização, são obtidas 83 mg do composto 36.
Massa: método "ESI", modo negativo: massa quimica = 4968,92; massa experimental = 4966,52 ± 0,16 u. m. a. PREPARAÇÃO 33
Sal de sódio de (2,3,4,6-tetra-0-sulfonato-<x-D-glucopiranosil)-(1^4)- (2,3,6-tri-O-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-0-sulfonato-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-(6-amina-6-desoxi-2,3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)- (2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil-)-(1^4) -[ (2, 3, 6-tri-O-metil-a-n-glucopiranosil) - (1^4) -O-(2, 3, 6-tri-O-metil-^-D-glucopiranosil) - (1^4) ]3-(6-0-svlfonato-2,3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil) - (1^4) - (ácido 2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranosilurónico) - (1^4)- (2, 3, 6-tri-O-sulfonato-oí-D-glucopiranosil) - (1^4) - (ácido 2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosilurónico)-(1^4)-2,3, 6-tri-O-sulfonato-a-D-glucopiranósido de metilo (37) É dissolvido o composto 36 (83 mg, 0,017 mmol) numa mistura etanol/água 2/1 (v/v) (1,67 mL) . É adicionado hidrato de hidrazina (81, pL, 1,67 mmol) e a mistura é levada ao refluxo durante 20 horas. A solução é colocada numa coluna de Sephadex® G-25 fina (3 x 92 cm) eluida com água. Após a concentração das fracções contendo o produto, o residuo é dissolvido em etanol/água 2/1 (v/v) (5,00 mL) e é, novamente, tratado como nas 58 condições anteriores, com hidrato de hidrazina (81,2 pL), para originar 71 mg do composto 37.
Massa: método "ESI", modo negativo: massa química = 4838,32; massa experimental = 4814,6 + 0,70 u. m. a.
39 PREPARAÇAO 34 (6-0-Acetil-2-azida2-desoxi-3, 4-di-O-metil-a-D-glucopiranosil) - (1^4) - (benzil 2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranosiluronato) - (1-^4)- (3, 6-di-0-acetil-2-0-benzil-oi-D-glucopiranosil) - (1^4) - (benzil 2,3-di-O-metil-oL-L-idopiranosiluronato) - (1^4)-2,3, 6-tri-O-benzil a-D-glucopiranósido de metilo (39) São dissolvidos o composto tricloroacetimidato de 6-O-acetil- 2-azida- 2- desoxi- 3,4- di- O- metil-Oi, β- D-glucopiranose 38 (265 mg, 0,631 mmol) (obtido de acordo 59 com J Basten et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. (1992), 2(9), 901) e o composto 32 (584 mg, 0,420 mmol) (obtido de acordo com P.
Westerduin et ai., BioOrg. Med. Chem, 1994, 2, 1267) numa mistura de diclorometano/éter dietilico 1/2 (v/v) (28,5 mL).
Após a adição de crivo molecular 4 Á em pó, a mistura é arrefecida a -20 °C e É adicionado uma solução de trifluorometanossulfonato de trimetilsililo 0,1 M em diclorometano (94,6 pL) novamente, imidato (53, trifluorometanossulfonato diclorometano (19,2 pL)
Após 10 minutos, é adicionado, mg) e, depois, uma solução de de trimetilsililo 0,1 M em
Após 10 minutos, a mistura é neutralizada pela adição de hidrogenocarbonato de sódio sólido. Após filtração e concentração, o resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (tolueno/acetato de etilo 3/1 (v/v)), para originar 499 mg do composto 39.
[a]D = +66° (C = 1,07, diclorometano). 60 ESQUEMA 10 - Síntese do pentassacárido 44 (Processo I) 39
61 PREPARAÇAO 35 (6-0-acetil-2-amina-2-desoxi-3,4-dí-O-metíl-a-D-glucopiranosil) - (1^4) - (ácido 2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranosilurónico) - (l->4)~ (3, 6-di-O-acetil-ci-D-glucopiranosil) -(1^4) - (ácido 2,3-di-O-metil-fx-L-idopiranosilurónico)-(1^4)-a-D-glucopiranósido de metilo (40) É tratada uma solução do composto 39 (552,6 mg, 0,335 mmol) numa mistura de terc-butanol/acetato de etilo 5/1 (v/v) (16 mL), sob pressão de hidrogénio (10 bar), na presença de paládio sobre carvão a 10% (1,10 g) e ácido clorídrico 1 M (0,336 mL), durante 4 horas e 30. Após filtração, a solução é concentrada e origina o composto 40, que é utilizado na etapa seguinte, sem purificação. PREPARAÇÃO 36 (2-Amina-2-desoxi-3,4-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(ácido 2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranosilurónico) - (1^4) - (ol-D-glucopiranosil) - (1^4) - (ácido 2,3-di-0-metil-<x-L-idopiranosilurónico) - (l->4) -a-D-glucopiranósido de metilo (41) É dissolvido o composto 40 (324 mg, 0,300 mmol) em metanol (8,8 mL) . É adicionada uma solução de hidróxido de sódio 5 M (2,2 mL) e agita-se à temperatura ambiente, durante 16 horas. É neutralizada com uma resina Dowex® 50 H+ e filtrada. A solução é passada através de uma coluna de Sephadex® G-25 fina, eluida com água. São concentradas as fracções contendo o produto e são obtidas 254,2 mg do composto 41. Neste passo é verificado, por 62 RMN que os agrupamentos protectores (benzilo e acetilo) foram removidos. CCM: Rf = 0,26, sílica gel, acetato de etilo/piridina/ácido acético/água 5/5/1/3 (v/v/v/v) PREPARAÇÃO 37 (2-(Benziloxicarbonil)amina-2-desoxi-3, 4-di-O-metil-a-D-glucopiranosil) -(1^4) - (ácido 2,3-di-O-metil-^-D-glucopiranosilurónico) - (1^4)- (α-D-glucopiranosil) - (1^4)-(ácido 2,3-di-O-metil-oL-L-idopiranosilurónico) - (1^4) -a-D-glucopiranósido de metilo (42) É dissolvido o composto 41 (241,1 mg, 0,253 mmol) em água (12,4 mL) e é adicionado hidrogenocarbonato de sódio (63,7 mg) e, depois, gota a gota, cloroformato de benzilo (41 pL) . Após 12 horas de agitação, a mistura de reacção é passada através de uma coluna de Sephadex® g-25 fina, eluída com água. São concentradas as fracções contendo o produto. A purificação por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de etilo/piridina/ácido acético/água 21/17/3,6/10 v/v/v/v) origina 221 mg do composto 42. CCM: Rf = 0,63, sílica gel, acetato de etilo/piridina/ácido acético/água 5/5/1/3 (v/v/v/v) 63 PREPARAÇÃO 38
Sal de sódio de (2-(benziloxicarbonil)amina-2-desoxi-3,4-di-O-metil-6-O-sulfonato-oL-D-glucopiranosil) - (1^4)- (ácido 2, 3-di-0-metil-$-D-glucopiranosilurónico)-(1^4)-(2, 3, 6-tri-O-sulfonato-α-D-glucopiranosil) - (1^4) - (ácido 2, 3-di-O-metil-ct-L-idopiranosilurónico) - (1^4) -2,3, 6-tri-O-sulfonato-oi-D-glucopiranósido de metilo (43) É dissolvido o poliol 42 (19,6 mg, 0,018 mmol) em N, 17-dimetilformamida (1,62 mL) . É adicionado o complexo de trióxido de enxofre-trietilamina (114 mg) e a mistura é agitada durante 20 horas a 55 °C, no escuro. A solução é colocada numa coluna de Sephadex® G-25 fina, eluida com cloreto de sódio O, 2 M. As fracções contendo o produto são concentradas e são dessalinizadas, utilizando a mesma coluna eluida com água. Após liofilização, são obtidas 28,5 mg do composto 43.
[oí] D = +48° (C = 2,75, água). PREPARAÇÃO 39
Sal de sódio de (2-amina-2-desoxi-3, 4-di-O-meti1-6-0- sulfonato-dL-D-glucopiranosil) -(1^4) - (ácido 2,3-di-0-metil-$-D-glcopiranosilurónico) - (1^4)- (2,3, 6-tri-0-sulfonato-(x-D-glucopiranosil) - (l->4) - (ácido 2,3-di-O-metil-OL-L-idopiranosiurónico) - (1^4) —2,3, 6-tri-0-sulfonato-ct.-D-glucopiranósido de metilo (44) É tratada uma solução do composto 43 (27,5 mg, 0,015 mmol) numa mistura de terc-butanol (333 pL)-água (500 pL), sob pressão 64 de hidrogénio (5 bar), na presença de paládio sobre carvão a 10% (8,25 mg), durante 16 horas. Após filtração, a solução é concentrada e o resíduo é colocado numa coluna de Sephadex® G-25 fina (3 x 92 cm) . Após eluição com água e liofilização, são obtidas 23,7 mg do composto 44.
[a] D = +58° (C = 1, água). 65 ESQUEMA 11 - Síntese do tetrassacárido 48
48 66 PREPARAÇÃO 40 (Ácido 4-0-levul±n±l-2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranosilurónico) - (l->4) - (3, 6-dl-O-acetil-oL-D-glucopiranosil) -(1^4) - (ácido 2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosilurónico)-(1^4)-α-D-glucopiranósido de metilo (46) É tratada uma solução do composto 45 (4,50 g, 3,02 mmol) (obtido de acordo com P. Westerduin et al. BioOrg. Med. Chem. 1994, 2, 1267), numa mistura de acetato de etilo/terc-butanol (72 mL, 1/1, v/v), sob pressão de hidrogénio (4 bar), na presença de paládio sobre carvão a 10% (9,0 g), durante 6 horas. Após filtração e concentração, o composto 46 obtido é utilizado, directamente na etapa seguinte, sem purificação. CCM: Rf = 0,54, acetato de etilo/piridina/ácido acético/água 26/22/4,6/17 v/v/v/v. PREPARAÇÃO 41 (Metil 4-0-levulinil-2, 3-di-0-metil-$-D-glucopiranosiluronato) - (1^4)- (2,3, 6-tri-0-acetil-<x-D-glucopiranosil) -(1^4) - (metil-2,3-di-0-metil-(x-L-ido-piranosil-uronato)-(l->4)-2,3,6-tri-O-acetil-a-D-glucopiranósido de metilo (47) E adicionado hidrogenocarbonato de potássio (2,71 g), seguido por iodeto de metilo (3,4 mL), a 0 °C, a uma solução do composto 46 (2,57 g, 2,71 mmol) em N, N-dimetilf ormamida anidra (35 mL). Após 16 h de agitação à temperatura ambiente, o meio de reacção é arrefecido a 0 °C. São, então, adicionados, 67 sucessivamente, dimetilaminapiridina (132 mg) e, depois, anidrido acético 1,5 mL). A mistura é agitada durante 16 h. Após a neutralização do excesso de anidrido acético é diluída com acetato de etilo. A fase orgânica é lavada, sucessivamente, com uma solução de hidrogenossulfato de potássio a 10% e água e, depois, com uma solução de hidrogenocarbonato de sódio saturado e água, é seca sobre sulfato de sódio, é filtrada e, depois, evaporada até à secura. O resíduo é purificado por cromatografia em coluna de sílica gel [ciclo-hexano/(acetato de etilo/etanol 1/1) 9/5], para originar 2,51 g do composto 47. CCM: Rf = 0,41, tolueno/acetona 2/1 v/v. PREPARAÇAO 42 (Metil 2, 3-di-0-metil-$-D-glucopiranosiluronato)- (1^4)-(2, 3, 6-tri-0-acetil-OL-D-glucopiranosil) - (1^4) - (metil 2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosiluronato)- (1^4)-2,3,6-tri-O-acetil-a-D-glucopiranósido de metilo (48) É dissolvido o composto 47 (2,5 g, 2,56 mmol) numa mistura de tolueno/etanol 1/1 v/v (500 mL) . É adicionado o acetato de hidrazina (1,01 g). Após 2 h de agitação à temperatura ambiente, o meio de reacção é concentrado até à secura. O resíduo é dissolvido em diclorometano. A fase orgânica é lavada, sucessivamente, com uma solução de hidrogenocarbonato de sódio a 2% e água, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e, depois, evaporada até à secura. Após cromatografia em coluna de sílica gel (tolueno/acetato de etilo 1/4 v/v), são obtidas 2,01 g do composto 48. 68 CCM: Rf = 0,37, tolueno/acetona 2/1 v/v. ESQUEMA. 12 - Síntese do pentassacárido 49
Preparação 43 (6-0-acetil-2-azida-2-desoxi-3,4-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)- (1^4)- (metil 2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranosiluronato) - (1^4) - (2,3, 6-tri-O-acetil-cL-D-glucopiranosil)- (1^4)- (metil 2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosiluronato) - (1^4) -2,3, 6-tri-0-acet±l-(x-D-glucopiranósido de metilo (49) É dissolvido imidato 38 (1,18 g, 2,81 mmol) (obtido de acordo com J. Basten et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. (1992), 2 (9), 901) e o composto 48 (1, 83 g, 1,75 mmol), numa mistura de diclorometano/éter dietílico 1/2 (v/v) (126 mL). Após a adição do crivo molecular 4 Ã em pó, a mistura é arrefecida a -20 °C e é adicionada uma solução de trifluorometanossulfonato de terc-butilidimetilsililo 1 M em diclorometano (421 pL) . Após 69 30 minutos, adicionam-se uma nova quantidade de imidato (266 mg), assim como uma solução de trifluorometanossulfonato de terc-butildimetilsililo 1 M em diclorometano (168 pL) . Após 10 minutos, a mistura é neutralizada pela adição de hidrogenocarbonato de sódio sólido e é filtrada. É retomada com diclorometano e é, sucessivamente, lavada com uma solução de hidrogenocarbonato de sódio a 2% e água, é seca sobre sulfato de sódio e, depois, concentrada sob vácuo. O resíduo obtido é purificado por cromatografia em coluna de silica gel (diclorometano/acetato de etilo 4/3, seguida por 1/1 v/v), para originar 1,814 g do composto 49. CCM: Rf = 0,57, tolueno/acetato de etilo 3/1 v/v.
[a] D = +93° (C = 1,15, diclorometano). 70 ESQUEMA 13 - Síntese do pentassacárido 44 (Processo II)
49
50
44 71 PREPARAÇÃO 44 (2-Azida-2-desoxi-3, 4-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(ácido 2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranosilurónico) - (1^4)- (ol-D-glucopiranosil) -(1^4) - (ácido 2, 3-di-O-metíl-a-L-idopiranosilurónico) - (l->4) -α-D-glucopiranósido de metilo (50) É adicionada água oxigenada a 30% (42 mL), a -5 °C, a uma solução do composto 49 (845,3 mg) em tetra-hidrofurano (104 mL). Após 5 minutos de agitação, adiciona-se, gota a gota, uma solução aquosa de hidróxido de litio 0,7 M (19,2 mL) . A mistura de reacção é agitada durante 1 h a -5 °C, seguidamente, durante 4 h a 0 °C e, finalmente, durante 16 h à temperatura ambiente. É neutralizada com uma solução de ácido clorídrico 1 M. A solução é colocada numa coluna de Sephadex® G-25 fina (5 x 1000 cm) eluida com água. As fracções contendo o composto esperado são reunidas, concentradas e colocadas numa coluna de resina Dowex AG 50 WX4 H+ (50 mL) . O composto é recolhido a 0 °C e concentrado, para a obtenção de 618 mg do composto 50. CCM: Rf = 0,56, acetato de etilo/piridina/ácido acético/água 26/22/4,6/17 v/v/v/v. 72 PREPARAÇÃO 45
Sal de sódio de (2-azida-2-desoxi-3,4-di-0-metil-6-Q-sulfonato-OL-D-glucopiranosil)- (l->4) - (2, 3-di-0-metil-$-D-glucopiranosiluronato) - (1^4) - (2,3, 6-tri-0-sulfonato-<x-D-gluco-piranosil) -(1^4)- (2, 3-di-O-metil-a-L-idopiranosiluronato) - (1^4) -2,3, 6-tri-O-sulfonato-aL-D-glucopiranósido de metilo (51) 0 composto 50 é co-destilado com N, N-dimetilformamida (3X29 mL), imediatamente antes da sua utilização. É adicionado complexo de trióxido de enxofre-trietilamina (3,84 g), a uma solução de composto 50 (612 mg, 0,624 mmol) em N, N-dimetilformamida (58 mL). A mistura é agitada durante 16 horas a 55 °C, no escuro. A mistura arrefecida a 0 °C adiciona-se, gota a gota, a uma solução de hidrogenocarbonato de sódio (5,33 g) em água (200 mL) . É agitada durante 16 h à temperatura ambiente e é concentrada à secura. 0 residuo é dissolvido em água e a solução é colocada numa coluna de Sephadex® G-25 fina, eluida com cloreto de sódio 0,2 M. As fracções contendo o produto são concentradas e são dessalinizadas, utilizando a mesma coluna eluida com água. Após liofilização, são obtidas 1,06 g do composto 51. CCM: Rf = 0,5, acetato de etilo/piridina/ácido acético/água 3/5/1/3 v/v/v/v. 73 PREPARAÇÃO 46
Sal de sódio de (2-amina-2-desoxi-3,4-di-0-metil-6-0- sulfonato-ai-D-glucopiranosil)- (l->4)~ (ácido 2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranosilurónico)-(1^4)-(2,3, 6-tri-O-sulfonato-a-D-gluco-piranosil) -(1^4) - (ácido 2, 3-di-0-metil-OL-L-idopiranosilurónico) -(1^4)-2, 3, 6-tri-0-sulfo-nato-a-D-glucopiranósido de metilo (44)
Esta hidrogenólise foi realizada por duas vezes e, de cada vez, sobre 534,4 mg do composto 51. É tratada uma solução de composto 51 (534,4 mg) numa mistura de terc-butanol (6,7 mL, 12,6 mL/g)-água (10 mL, 19 mL/g) sob pressão de hidrogénio (5 bar), na presença de paládio sobre carvão a 10% (160 mg), a 40 °C, durante 4 horas. Após filtração (filtro Millipore® LSWP 5 pm), a solução é concentrada até à secura, para originar 530 mg do composto 44. CCM: Rf = 0,49, acetato de etilo/piridina/ácido acético/água 3/5/1/3 v/v/v/v. EXEMPLO 1
74 EXEMPLO 2
EXEMPLO 3
EXEMPLO 4
EXEMPLO 5
75 EXEMPLO 6
EXEMPLO 1
Sal de sódio de (2, 3, 4, 6-tetra-O-sulfonato-a-D-glucopiranosil) - (1^4) - (2,3, 6-tri-O-svlfonato-QL-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-0-sulfonato-$-D-glucopiranosil) -(1^4) - (6-biotinamida-6-desoxi-2,3-di-O-metil-OL-D-glucopiranosil) - (l->4) -(2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-[ (2, 3, 6-tri-O-metil-oi-D-glucopiranosil) - (1^4)-0- (2, 3, 6-tri-O-metil-^-D-glucopiranosil) - (1^4) ]3- (6-0-sulfonato-2,3-di-O-metil-cL-D-glucopiranosil) - (1^4)- (ácido 2,3-di-0-metil-3-glucopiranosilurónico) - (1^4) - (2,3, 6-tri-O-sulfonato-oi-D-glucopiranosil) - (1^4) - (ácido 2,3-di-O-metil-OL-L-idopiranosilurónico)-(1^4)-2, 3, 6-tri-O-sulfonato-D-glucopiranósido de metilo É adicionada sulfossuccinimida de biotina (16,5 mg) a uma solução do composto 37 (18 mg, 3,7 pmol) em hidrogenocarbonato de sódio a 0,5% (1,5 mL) .
Após 16 horas de agitação à temperatura ambiente, a mistura de reacção é colocada numa coluna de Sephadex® G-25 fina, eluida com cloreto de sódio. 76
As fracções contendo o produto são concentradas e são dessalinizadas na mesma coluna, elulda com água.
Após liof ilização, são obtidas 15,9 mg do composto do EXEMPLO 1.
[a] D = +59° (C = 0,78, água).
Massa: método "ESI", modo negativo: massa química = 5065,12; massa experimental = 5064,18 ± 1,04 u. m. a. EXEMPLO 2
Sal de sódio de (2,3,4,6-tetra-0-sulfonato-o.-D-glucopiranosil) - (1^4) - (2, 3, 6-tri-0-sulfonato-(x-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2,3, 6-tri-0-sulfonato-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-(6-[6-(biotinamida)hexamida]-6-desoxi-2,3-di-O-metil-oL-D-glucopiranosil) - (1^4)- (2, 3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil) -(1^4) -[ (2, 3, 6-tri-0-metil-<x-D-glucopiranosil) -(1^4)-O-(2, 3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4)]3- (6-0-sulfonato-2, 3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(ácido 2,3-di-O-metil-^-D-glucopiranosilurónico)- (1^4)- (2,3, 6-tri-O-sulfonato-(x-D-glucopiranosil) - (1^4) - (ácido 2, 3-di-O-metil-ct-L-idopiranosilurónico) - (1^4) -2,3, 6-tri-0-sulfonato-<x-D-glucopiranósido de metilo É adicionado hexanoato de 6-(biotinamida) (16,5 mg) a uma solução do composto 37 (18 mg, 3,72 pmol) em hidrogenocarbonato de sódio a 0,5% (1,5 mL). Após 16 horas de agitação à 77 temperatura ambiente, a mistura de reacção é colocada numa coluna de Sephadex® g-25 fina eluida com cloreto de sódio.
As fracções contendo o produto são concentradas e são dessalinizadas na mesma coluna eluida com água.
Após liofilização, são obtidas 17,9 mg do composto do EXEMPLO 2. M=+60° (C = 1,0, água).
Massa: método "ESI", modo negativo: massa química = 5178,28; massa experimental = 5176,3 ± 0,77 u. m. a. EXEMPLO 3
Sal de sódio de (2,3,4,6-tetra-O-sulfonato-a-D-glucopiranosil) -(1^4) - (2,3, 6-tri-O-sulfonato-oL-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2, 3, 6-tri-0-sulfonato-$-D-glucopiranosil)-(1^4)-(6-[(6-(6-biotinamida-hexamida)hexamida]-6-desoxi-2,3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1^4)-(2, 3, 6-tri-O-metil-$-D-glucopiranosil) - (1^4)-[ (2,3, 6-triO-metil-oL-D-glucopiranosil)-(1^4)-0-(2,3, 6-tri-0-metil-$-D-glucopiranosil)-(1^4) ]3~ (6-0-sulfonato-2, 3-di-O-metil-OL-D-glucopiranosil) - (1^4) -(ácido 2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranosilurónico) - (1^4) - (2,3, 6-tri-0-sulfonato-<x-D-glucopiranosil) - (1^4)- (ácido 2, 3-di-O-metil-α-L-idopiranosilurónico) -(1^4) -2, 3, 6-tri-0-sulfonato-a.-D-glucopiranósido de metilo de (6-biotinamida-hexamida) de a uma solução do composto 37 É adicionado 6-hexanoato sulfossuccinimidilo (23,6 mg), 78 (17 mg, 3,51 μιηοΐ) em hidrogenocarbonato de sódio a 0,5% (1,4 mL) .
Após 16 horas de agitação à temperatura ambiente, a mistura de reacção é colocada numa coluna de Sephadex® g-25 fina, eluida com cloreto de sódio. As fracções contendo o produto são concentradas e dessalinizadas na mesma coluna eluida com água.
Após liof ilização, são obtidas 17,4 mg do composto do EXEMPLO 3.
[a]D = +64° (C = 1,0, água).
Massa: método "ESI", modo negativo: massa quimica = 5291,44; massa experimental = 5292,1 ± 0,83 u. m. a. EXEMPLO 4
Sal de sódio de (2-biotinamida-2-desoxi-3,4-di-0-metil-6-0-sulfonato-oL-D-glucopiranosil) -(1^4) - (ácido 2,3-di-0-metil-$-0-glucopiranosilurónico) - (1^4)- (2,3, 6-tri-O-sulfonato-CL-D-glucopiranosil) -(1^4) - (ácido 2,3-di-O-metil-oL-L-idiopiranosilurónico) - (1^4)-2,3, 6-tri-0-sulfonato-<x-D-glucopiranósido de metilo É adicionada uma solução de N-hidroxissuccinimida de biotina (42 mg) em 17,N-dimetilformamida (750 pL), a uma solução do composto 44 (21,2 mg, 0,012 mol) em hidrogenocarbonato de sódio a 0,5% (750 pL) . Após 16 horas de agitação à temperatura ambiente, a mistura de reacção é colocada numa coluna de Sephadex® g-25 fina. 79
Após eluição com água e liofilização, são obtidas 22,3 mg do composto do exemplo 4.
[a]D = +38° (C=0,15, água).
Massa: método "ESI", modo negativo: massa química = 1938,48; massa experimental = 1937,48 0,11 ± u. m. a. EXEMPLO 5
Sal de sódio de (2-[N-(6-biotinamida hexanoil)]-2-desoxi-3, 4-di-0-metil-6-0-sulfonato-oL-D-glucopiranosil) - (1^4)-(ácido 2,3-di-O-metil-fi-D-glucopiranosilurónico) - (1^4)- (2,3, 6-tri-0-sulfonato-OL-D-glucopiranosil) - (1^4) - (ácido 2, 3-di-O-metil-(x-L-idopiranosilurónico) - (1^4) -2,3, 6-tri-0-sulfonato-(x-D-glucopiranósido de metilo
Esta reacção foi realizada por duas vezes e, de cada vez, sobre 494,5 mg do composto 44. É dissolvido composto 44 (494,5 mg, 0,289 mmol) numa solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio a 0,5% (116 mL). É adicionada, gota a gota, uma solução de 6-(biotinamida)hexanoato de sulfossuccinimida (1,46 g, 2,63 mmol), a uma solução de hidrogenocarbonato de sódio a 0,5% (12 mL) . Após 16 horas de agitação à temperatura ambiente, é adicionada uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1 M e é agitada durante 1 h. A mistura de reacção é colocada numa coluna de Sephadex® G-25 fina (5 x 1000 cm), eluida com cloreto de sódio. 80 São reunidas as fracções contendo o produto e provenientes das duas reacções.
Após liofilização, são obtidas 999,2 mg do EXEMPLO 5. CCM: Rf = 0,42, acetato de etilo/piridina/ácido acético/água 3/5/1/3 v/v/v/v.
Massa: método "ESI", modo negativo: massa química = 2051,64; massa experimental: 2051,60 ± 0,43 u. m. a. EXEMPLO 6
Sal de sódio de (2-[6-(6-biotinamida-hexamida) hexamida]-2-desoxi-3, 4-di-0-metil-6-sulfonatO-oL-D-glucopiranosil) - (1^4)-(ácido 2,3-di-0-metil-$-D-glucopiranosilurónico) - (l->4) - (2,3, 6-tri-O-sulfonato-ci-D-glucopiranosil) - (l->4)- (ácido 2, 3-di-O-metil-οί-L-idopiranosilurónico) -(1^4) -2,3, 6-tri-O-sulfonato-oi-D-glucopiranósido de metilo. É dissolvido o composto 44 (30,1 mg, 17,6 pmol) numa solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio a 0,5% (7 mL) . É adicionada, gota a gota, uma solução de 6-(6-biotinamida- hexamida) de sulfossuccinimidilo (118 mg, 176 pmol), numa solução de hidrogenocarbonato de sódio a 0,5% (1 mL) . Após 16 horas de agitação à temperatura ambiente, é adicionada uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1 M e é agitada durante 1 h. A mistura de reacção é colocada numa coluna de Sephadex® G-25 fina (2 x 85 cm), eluída com cloreto de sódio. 81
As fracções contendo o produto são reunidas, concentradas e dessalinizadas numa coluna de Sephadex® G-25 fina (2 x 85 cm), eluida com água. composto do o: massa u. m. a.
Após liofilização, são obtidas 26,5 mg do EXEMPLO 6.
Massa: método "ESI", modo negativ química = 2164,48; massa experimental: 2164,29 ± 0,38
Lisboa, 20 de Novembro de 2007 82

Claims (16)

    REIVINDICAÇÕES 1. Polissacáridos sintéticos com actividade antitrombótica e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, caracterizado por apresentarem, pelo menos, uma ligação covalente com a biotina ou com um derivado da biotina.
  1. (1.3) nos quais Ri, R2, R3, R4 e W são tais como definidos para (I), assim como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
  2. 2. Polissacáridos de acordo com a reivindicação 1, de fórmula: " <R’n ^Pe (R1>h n (i) na qual - o traço ondulado designa uma ligação localizada abaixo ou acima do plano do anel piranósico, <Rl (Po) XX (Rl)h Po designa um polissacárido, contendo n unidades monossacaridicas idênticas ou diferentes, ligado pelo seu carbono anómero a Pe, 1
    é uma representação esquemática de uma unidade monossacaridica com estrutura piranósica, seleccionada de entre hexoses, pentoses e desoxi-açúcares correspondentes, estando esta unidade ligada pelo seu carbono anómero a uma outra unidade monossacaridica e estando os grupos hidroxilo desta unidade substituídos por grupos Ri idênticos ou diferentes, sendo Ri tal como definido abaixo,
    - Pe representa um pentassacárido de estrutura: h é igual a 1 ou 2, n é um número inteiro e pode assumir qualquer valor de 0 a 25, Ri representa a ligação -T-Biot, um grupo alcoxilo(Ci Ce) ou um grupo -0S03~, R2 representa a ligação -T-Biot, um grupo alcoxilo(Ci-C6) ou um grupo - 0S03", 2 ligação -T-Biot - r3 alcoxilo(Ci—C6), R4 representa a ligação -T-Biot, um grupo alcoxilo(Ci-C6) ou um grupo - OSO3” ou R4 constitui uma ponte -0-CH2-, estando o grupo —CH2— ligado ao átomo de carbono portador da função carboxílica no mesmo anel; sendo entendido que, pelo menos, um dos substituintes Rx, R2, R3 ou R4 representa um grupo -T-Biot, W representa um átomo de oxigénio ou um grupo metileno, T representa uma das ligações seleccionadas de entre: NH, representa um grupo
    ou
    O nas quais, j e k, idênticos ou diferentes, são números inteiros, podendo assumir qualquer valor de 1 a 10; - Biot representa o grupo: 3
    assim como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
  3. 3 (1.4) na qual: T representa uma das ligações seleccionadas de entre: NH, 0
    3. Polissacáridos de acordo com uma das reivindicações 1 ou 2 de fórmula (1.1):
    designa uma família particular de polissacáridos Po, ligados pelo seu carbono anómero a Pe, tal como definido para (I), 4 ο l'h <R,> é tal como definido para (I), os grupos Ri são tais como definidos para (I) e, para um mesmo monossacárido, podem ser idênticos ou diferentes, o monossacárido contido em []m é repetido m vezes, o monossacárido contido em []t é repetido t vezes, o monossacárido contido em []p é repetido p vezes, m é um número inteiro variando de 1 a 5, t é um número inteiro variando de 0 a 24 e p é um número inteiro variando de 0 a 24, sendo entendido que 1 < m + T + p ^ 25, assim como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
  4. 4. Polissacáridos de acordo com a reivindicação 3, caracterizados por, apenas um dos substituintes Ri, R2, R3 ou R4 representar a ligação -T-Biot, sendo T e Biot tal como definidos para (I).
  5. 5. Hexadecassacáridos de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, de fórmula (1.2): 5
    na qual: T representa uma das ligações seleccionadas de entre: NH, O .NH NH j ou
    nas quais, j e k, idênticos ou diferentes, são números inteiros, podendo assumir qualquer valor de 1 a 10; Biot representa o grupo:
  6. 6 Pe representa um pentassacárido de estrutura:
    na qual: Rlr representa um grupo alcoxilo (Ci~C6) ou um grupo —0S03- R2 representa um grupo alcoxilo (Ci-Cg) ou um grupo -OSO3-, R3 representa um grupo alcoxilo (Ci-C6), R4 representa um grupo alcoxilo (Ci-C6) ou um grupo -OSO3” ou R4 constitui uma ponte -0-CH2-, estando o grupo —CH2- ligado ao átomo de carbono portador da função carboxílica no mesmo anel, W representa um átomo de oxigénio ou um grupo metileno, assim como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Pentassacáridos de acordo com uma das reivindicações 1 ou 2 de fórmula (1.3) : 7 ‘3 ‘3 R
  7. 7. Pentassacáridos de acordo com a reivindicação 6 caracterizados por um único dos substituintes Ri, R2, R3 ou R4 representar a ligação -T-Biot, sendo T e Biot tais como definidos para (I).
  8. 8 ou
    nas quais, j e k, idênticos ou diferentes, são números inteiros, podendo assumir qualquer valor de 1 a 10; Biot representa o grupo:
    HN NH
    O Ri representa um grupo alcoxilo (Ci-C6) ou um grupo -OSCV R2 representa um grupo alcoxilo (Ci-Cô) ou um grupo -oso3~ R3 representa um grupo alcoxilo(Ci-C6), R4 representa um grupo alcoxilo (Ci-C6) ou um grupo -0S03~ ou R4 constitui uma ponte -0-CH2-, estando o grupo —CH2— ligado ao átomo de carbono portador da função carboxilica no mesmo anel, W representa um átomo de oxigénio ou um grupo metileno, 9 assim como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
    8. Pentassacáridos de acordo com uma das reivindicações 6 ou 7 de fórmula (1.3) de fórmula (1.4): Biot
  9. 9. Polissacáridos de acordo com uma das reivindicações 1 ou 2 seleccionados de entre: Sal de sódio de (2,3, 4, 6-tetra-O-sulfonato-a-D-glucopiranosil) - (1-4) -(2,3, 6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil) - (1-4) -(2,3,6-tri-0-sulfonato-β-ϋ-glucopiranosil)-(1-4)-6-biotinamida-6-desoxi-2,3-di-0-metil-a-D-glucopiranosil)-(1-4)-(2,3,6-tri-0-metil-p-D-glucopiranosil)-(1-4)-[(2,3,6-tri-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-metil-p-D-glucopiranosil)-(l->4)]3-(6-0-sulfonato-2,3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1—4)-(ácido 2,3-di-0-metil-p-D-glucopiranosilurónico)-(1-4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1-4)-(ácido 2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosilurónico)-(1-4)-2,3,6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranósido de metilo, Sal de sódio de (2,3, 4,6-tetra-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1-4)-(2,3,6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1-4)-(2,3,6-tri-0-sulfonato-β-ϋ-glucopiranosil)-(1-4)-(6-[6-(biotinamida)hexamida]-6-desoxi-2,3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1-4)-(2,3,6-tri-O-metil^-D-glucopiranosil)-(1—4)-[(2,3,6-tri-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(1—4)-0-(2,3,6-tri-0-metil-p-D-glucopiranosil)- (1-4)]3-(6-0-sulfonato-2, 3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil) - (1—4) - (ácido 2,3-di-0-metil^-D-glucopiranosilurónico)-(1—4)-(2,3,6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1—4)-(ácido 2,3-di-O-metil-a-L- 10 idopiranosilurónico) - (l->4 )-2,3,6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranósido de metilo, Sal de sódio de (2,3,4,6-tetra-0-sulfonato-a-D- glucopiranosil) - (l->4) -(2,3,6-tri-0-sulf onato-a-D-glucopiranosil)-(l->4)-(2,3,6-tri-o-sulfonato-β-ϋ-glucopiranosil) - (l->4) - (6- [6- (6-biotanamida-hexamida) hexamida]-6-desoxi-2, 3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil)-(l->4) -(2,3, 6-tri-0-metil-p-D-glucopiranosil) - (l->4) - [ (2,3,6 — tri-O-metil-a-D-glucopiranosil) - (l-*4) -O- (2,3,6-tri-O-metil-β-D-glucopiranosil)-(1—>4)]3-(6-0-sulfonato-2,3-di-O-metil-a-D-glucopiranosil) - (l->4) - (ácido 2,3-di-0-metil-p-D-glucopiranosilurónico)-(1—»4)-(2,3,6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1—»4)-(ácido 2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosilurónico) - (l->4) -2,3,6-tri-O-sulfonato-a-D-glucopiranósido de metilo, Sal de sódio de (2-biotinamida-2-desoxi-3,4-di-0-metil-6-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil) - (l->4) - (ácido 2, 3-di-O-metil-p-D-glucopiranosilurónico)-(1—»4)-(2,3,6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1—»4)-(ácido 2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosilurónico) - (l-»4) -2,3, 6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranósido de metilo, Sal de sódio de (2-[6-(6-biotinamida-hexamida) hexamida]-2-desoxi-3,4-di-0-metil-6-O-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1—»4)-(ácido 2,3-di-0-metil-p-D-glucopiranosilurónico)-(1—»4)-(2,3,6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1—»4)-(ácido 2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosilurónico) - (l->4 )-2,3,6-tri-0-sulfonato-a-D-glucopiranósido de metilo. 11 Sal de sódio de (2-[N-(6-biotinamida-hexanoil)]-2-desoxi-3,4-di-0-metil-6-0-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(l->4) - (ácido 2,3-di-0-metil-p-D-glucopiranosilurónico) -(1—»4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1—»4)-(ácido 2, 3-di-O-metil-a-L-idopiranosilurónico) - (l->4)-2,3,6-tri-O-sulfonato-a-D-glucopiranósido de metilo
  10. 10. Composições farmacêuticas contendo, como principio activo, um polissacárido de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, eventualmente, em associação com um ou mais excipientes inertes e adequados.
  11. 11. Utilização de composições farmacêuticas de acordo com a reivindicação 10, para a produção de um medicamento útil no tratamento de patologias consequentes de uma modificação da homeostasia do sistema da coagulação que ocorrem como consequência de distúrbios do sistema cardiovascular e vascular cerebral, como os distúrbios tromboembólicos associados à arterosclerose e à diabetes, tais como a angina instável, acidente cerebral, restenose após angioplastia, endarterectomia, colocação de próteses endovasculares; ou distúrbios tromboembólicos associados à retrombose após trombólise, enfarte, demência de origem isquémica, doenças arteriais periféricas, hemodiálise, fibrilhações auriculares ou durante a utilização de próteses vasculares de derivações aorto-coronárias, no tratamento ou na prevenção de patologias tromboembólicas de origem venosa, tais como as embolias pulmonares, na prevenção ou no tratamento das complicações trombóticas, observadas após operações cirúrgicas, desenvolvimentos tumorais ou desregulações da coagulação, induzidas por activadores bacterianos, virais ou enzimáticos. 12
  12. 12. Utilização de um polissacárido de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, para o revestimento das próteses.
  13. 13. Utilização de um polissacárido de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, como adjuvantes durante a endarterectomia realizada com balonetes porosos.
  14. 14. Processo utilizando a avidina ou a estreptavidina, caracterizado por este permitir a neutralização dos polissacáridos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9.
  15. 15. Utilização de avidina ou de estreptavidina para a preparação de medicamentos destinados à neutralização dos polissacáridos de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9.
  16. 16. Polissacárido de acordo com uma das reivindicações 1 ou 2 de fórmula:
    Lisboa, 20 de Novembro de 2007 13
PT01972171T 2000-09-22 2001-09-20 Polissacáridos com actividade antitrombótica compreendendo, pelo menos, uma ligação covalente com a biotina ou com um derivado da biotina PT1322673E (pt)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0012094A FR2814463B1 (fr) 2000-09-22 2000-09-22 Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine

Publications (1)

Publication Number Publication Date
PT1322673E true PT1322673E (pt) 2007-12-03

Family

ID=8854579

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PT01972171T PT1322673E (pt) 2000-09-22 2001-09-20 Polissacáridos com actividade antitrombótica compreendendo, pelo menos, uma ligação covalente com a biotina ou com um derivado da biotina

Country Status (40)

Country Link
US (3) US6844329B2 (pt)
EP (1) EP1322673B1 (pt)
JP (2) JP5016778B2 (pt)
KR (2) KR20080049139A (pt)
CN (1) CN1235914C (pt)
AR (1) AR030774A1 (pt)
AT (1) ATE374215T1 (pt)
AU (2) AU2001291960C1 (pt)
BG (1) BG66191B1 (pt)
BR (1) BR0114007A (pt)
CA (1) CA2418815C (pt)
CY (1) CY1108076T1 (pt)
CZ (1) CZ300856B6 (pt)
DE (1) DE60130669T2 (pt)
DK (1) DK1322673T3 (pt)
EA (1) EA005133B1 (pt)
EC (1) ECSP034514A (pt)
EE (1) EE05202B1 (pt)
ES (1) ES2292625T3 (pt)
FR (1) FR2814463B1 (pt)
GE (1) GEP20053616B (pt)
HK (1) HK1053316A1 (pt)
HR (1) HRP20030219B1 (pt)
HU (2) HUP0303551A3 (pt)
IL (2) IL154848A0 (pt)
IS (1) IS2550B (pt)
ME (2) ME00080B (pt)
MX (1) MXPA03002483A (pt)
NO (2) NO332905B1 (pt)
NZ (1) NZ524472A (pt)
PE (1) PE20020471A1 (pt)
PL (1) PL206727B1 (pt)
PT (1) PT1322673E (pt)
RS (1) RS50730B (pt)
SI (1) SI1322673T1 (pt)
SK (2) SK287218B6 (pt)
TW (1) TWI308153B (pt)
UA (1) UA79736C2 (pt)
WO (1) WO2002024754A1 (pt)
ZA (1) ZA200301692B (pt)

Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2814463B1 (fr) * 2000-09-22 2002-11-15 Sanofi Synthelabo Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine
FR2874924B1 (fr) * 2004-09-09 2006-12-01 Sanofi Aventis Sa Hexadecasaccharides biotinyles, leur preparation et leur utilisation therapeutique
TWI403334B (zh) * 2004-12-23 2013-08-01 Merck Sharp & Dohme 包含生物素殘基之抗血栓雙重抑制劑
TWI376234B (en) * 2005-02-01 2012-11-11 Msd Oss Bv Conjugates of a polypeptide and an oligosaccharide
ES2362011T3 (es) * 2005-10-10 2011-06-27 N.V. Organon Inhibidores duales antitrombóticos anticoagulantes que comprenden una marca de biotina.
BRPI0617215A2 (pt) * 2005-10-10 2011-07-19 Organon Nv composto anti-trombótico, composição farmacêutica, e, uso do composto
CN1317035C (zh) * 2005-10-24 2007-05-23 天津大学 基于酰肼基的微粒表面多重生物功能因子组装方法
EP1886696A1 (en) * 2006-08-03 2008-02-13 Endotis Pharma Conjugates of antithrombin binding oligosaccharide derivatives and therapeutic proteins
FR2912409B1 (fr) * 2007-02-14 2012-08-24 Sanofi Aventis Heparines de bas poids moleculaire comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine leur procede de preparation,leur utilisation
TW201006479A (en) * 2008-07-18 2010-02-16 Sanofi Aventis Use of idrabiotaparinux for decreasing the incidence of bleedings during an antithrombotic treatment
EP2233143A1 (en) 2009-03-24 2010-09-29 Sanofi-Aventis Use of idrabiotaparinux for decreasing the incidence of bleedings during an antithrombotic treatment
EP2145624A1 (en) 2008-07-18 2010-01-20 Sanofi-Aventis Use of idrabiotaparinux for decreasing the incidence of bleedings during an antithrombotic treatment
FR2935386B1 (fr) 2008-08-26 2010-09-10 Sanofi Aventis Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant une liaion covalente avec une chaine amine
EP2323605A4 (en) * 2008-09-10 2014-02-05 Syneron Medical Ltd TRANSDERMAL RELEASE OF OLIGOSACCHARIDES
CA2746509C (en) 2008-12-19 2018-11-20 Supernus Pharmaceuticals, Inc. Use of molindone for the treatment of impulsive agression
FR2952935B1 (fr) * 2009-11-20 2011-12-02 Sanofi Aventis Procede de preparation du n-biotinyl-6-aminocaproate de n succinimidyle
AU2010332797B2 (en) 2009-12-18 2015-05-28 Catalent Pharma Solutions Gmbh Pharmaceutical oral dosage form containing a synthetic oligosaccharide
CZ302669B6 (cs) * 2010-03-29 2011-08-24 Univerzita Palackého v Olomouci Efektivní zpusob biotinylace aminosloucenin pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie
CZ302510B6 (cs) * 2010-03-29 2011-06-22 Univerzita Palackého v Olomouci Efektivní zpusob biotinylace sloucenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie
AU2011235222B2 (en) 2010-03-31 2014-09-25 Supernus Pharmaceuticals Inc. Stabilized formulations of CNS compounds
FR2964660B1 (fr) * 2010-09-10 2012-09-28 Sanofi Aventis Nouveaux polysaccharides biotinyles a activite antithrombotique et presentant une stabilite metabolique amelioree
JP2013537181A (ja) * 2010-09-10 2013-09-30 サノフイ 抗血栓活性及び改善された代謝安定性を有するビオチン化多糖類
EP2484366A1 (en) 2011-02-07 2012-08-08 Sanofi Idrabiotaparinux for the treatment of pulmonary embolism and for the secondary prevention of venous thromboembolic events
ES2560467T3 (es) 2011-06-17 2016-02-19 Carbomimetics Pentasacáridos sintéticos que tienen vida media corta y alta actividad
EP3524251A1 (en) * 2012-11-13 2019-08-14 Supernus Pharmaceuticals, Inc. Method of treatment of aggression
WO2015195404A1 (en) 2014-06-20 2015-12-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Methods for detection of an analyte by movement of tethered microparticles
WO2016205239A1 (en) 2015-06-15 2016-12-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Non-hormonal mammalian sperm decoy contraception based on the n-terminus of the zp2 protein
JP7492826B2 (ja) 2016-10-21 2024-05-30 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ 分子ナノタグ
CN108976318B (zh) * 2017-06-01 2021-03-30 首都医科大学 单-6-(生物素酰胺基)-6-脱氧-β-环糊精及其制备方法和应用
WO2019133727A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Universal influenza virus probe set for enrichment of any influenza virus nucleic acid
BR112022000255A8 (pt) 2019-07-09 2022-03-22 Optimvia Llc Métodos para sintetizar polissacarídeos anticoagulantes
WO2021075165A1 (ja) * 2019-10-17 2021-04-22 株式会社オートネットワーク技術研究所 配線モジュール
WO2022056078A1 (en) 2020-09-11 2022-03-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Rnase h-assisted detection assay for rna (radar)
WO2024191684A1 (en) 2023-03-10 2024-09-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Detection of hepatitis c virus ribonucleic acid from whole blood using reverse transcription loop-mediated isothermal amplification

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3960884A (en) * 1974-04-24 1976-06-01 Sergei Ivanovich Zavyalov Method of preparing racemic biotin
AU563351C (en) * 1982-01-15 2003-06-19 Glaxo Group Limited Synthesis of oligosaccharides
IL102758A (en) * 1991-08-23 1997-03-18 Akzo Nv Glycosaminoglycanoid derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
US20010023288A1 (en) * 1999-07-07 2001-09-20 Wilbur D. Scott Trifunctional reagent for conjugation to a biomolecule
FR2751334B1 (fr) * 1996-07-19 1998-10-16 Sanofi Sa Polysaccharides synthetiques, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant
FR2773801B1 (fr) * 1998-01-19 2000-05-12 Sanofi Sa Nouveaux pentasaccharides, procedes pour leurs preparations et compositions pharmaceutiques les contenant
FR2773804B1 (fr) * 1998-01-19 2000-02-18 Sanofi Sa Polysaccharides de synthese, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques le contenant
GB2335490B (en) * 1998-03-20 2003-05-14 Ortho Clinical Diagnostics An assay surface that permits an analyte releasiing step
AU8366398A (en) * 1998-07-07 2000-01-24 Department Of Radiation Oncology University Of Washington Trifunctional reagent for conjugation to a biomolecule
WO2000006608A1 (fr) 1998-07-31 2000-02-10 Seikagaku Corporation Nouveau glycosaminoglycan et compositions medicamenteuses le contenant
FR2814463B1 (fr) * 2000-09-22 2002-11-15 Sanofi Synthelabo Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine

Also Published As

Publication number Publication date
NO20031295D0 (no) 2003-03-20
AU9196001A (en) 2002-04-02
DK1322673T3 (da) 2008-01-14
EP1322673A1 (fr) 2003-07-02
CA2418815A1 (en) 2002-03-28
PL206727B1 (pl) 2010-09-30
EP1322673B1 (fr) 2007-09-26
HRP20030219A2 (en) 2003-06-30
ZA200301692B (en) 2004-03-01
IL154848A (en) 2010-11-30
HUP0303551A3 (en) 2004-03-29
HRP20030219B1 (en) 2011-10-31
US6844329B2 (en) 2005-01-18
MXPA03002483A (es) 2004-05-24
EE200300114A (et) 2005-02-15
CY1108076T1 (el) 2014-02-12
SK287054B6 (sk) 2009-10-07
SK287218B6 (sk) 2010-03-08
CN1466594A (zh) 2004-01-07
BG107650A (bg) 2003-11-28
WO2002024754A1 (fr) 2002-03-28
EE05202B1 (et) 2009-08-17
NO20110401L (no) 2003-05-22
US7943595B2 (en) 2011-05-17
US20060160768A1 (en) 2006-07-20
US20040024197A1 (en) 2004-02-05
EA005133B1 (ru) 2004-12-30
FR2814463B1 (fr) 2002-11-15
CA2418815C (en) 2011-05-10
SK3562003A3 (en) 2003-11-04
TWI308153B (en) 2009-04-01
BG66191B1 (bg) 2011-12-30
ATE374215T1 (de) 2007-10-15
YU19703A (sh) 2006-05-25
BR0114007A (pt) 2003-08-12
HK1053316A1 (en) 2003-10-17
GEP20053616B (en) 2005-09-26
JP5016778B2 (ja) 2012-09-05
KR20080049139A (ko) 2008-06-03
NO20031295L (no) 2003-05-22
PL363368A1 (en) 2004-11-15
ME00080B (me) 2010-10-10
DE60130669T2 (de) 2008-07-17
WO2002024754A8 (fr) 2003-07-03
NO332905B1 (no) 2013-01-28
NZ524472A (en) 2004-10-29
EA200300237A1 (ru) 2003-08-28
CZ300856B6 (cs) 2009-08-26
IL154848A0 (en) 2003-10-31
IS6733A (is) 2003-02-28
CN1235914C (zh) 2006-01-11
ECSP034514A (es) 2003-04-25
JP2004509902A (ja) 2004-04-02
PE20020471A1 (es) 2002-06-01
CZ2003814A3 (cs) 2003-06-18
AU2001291960B2 (en) 2007-03-01
JP2012131809A (ja) 2012-07-12
ES2292625T3 (es) 2008-03-16
FR2814463A1 (fr) 2002-03-29
HU1400034D0 (hu) 2004-03-01
AR030774A1 (es) 2003-09-03
KR20030055269A (ko) 2003-07-02
HUP0303551A2 (hu) 2004-03-01
DE60130669D1 (de) 2007-11-08
SI1322673T1 (sl) 2008-02-29
IS2550B (is) 2009-10-15
US20110144042A1 (en) 2011-06-16
US8318696B2 (en) 2012-11-27
AU2001291960C1 (en) 2009-10-08
KR100891388B1 (ko) 2009-04-02
RS50730B (sr) 2010-08-31
UA79736C2 (uk) 2007-07-25
MEP23608A (en) 2010-06-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PT1322673E (pt) Polissacáridos com actividade antitrombótica compreendendo, pelo menos, uma ligação covalente com a biotina ou com um derivado da biotina
US8703738B2 (en) Biotinylated hexadecasaccharides, preparation and use thereof
US20110212907A1 (en) Hexadecasaccharides with antithrombotic activity, including a covalent bond and an amino chain