TWI308153B

TWI308153B - Novel polysaccharides with antithrombotic activity comprising at least one covalent bond with biotin or a biotin derivative

Info

Publication number: TWI308153B
Application number: TW090123340A
Authority: TW
Inventors: Duchaussoy Philippe; Herbert Jean-Marc; Petitou Maurice; Savi Pierre
Original assignee: Sanofi Aventis
Priority date: 2000-09-22
Filing date: 2001-09-21
Publication date: 2009-04-01
Also published as: SK3562003A3; ME00080B; IS2550B; US6844329B2; UA79736C2; EE200300114A; EE05202B1; NO20031295L; ZA200301692B; WO2002024754A8; NO20110401L; US7943595B2; CZ300856B6; CY1108076T1; IS6733A; GEP20053616B; CA2418815C; MXPA03002483A; EA200300237A1; BR0114007A

Description

1308153 A7 B7 五、發明説明-(1 ) 本發明係關於具有至少一與生物素或生物素衍生物共價鍵結之新穎合成寡-及多醋，其具有肝素之抗凝血與抗i 栓的醫藥活性3 肝素催化（特別是經由抗凝血酶III (AT III)之催化）二種包含在血液凝集階式效應中，名爲因子X a和因子Ila (或凝血酶）之酵素的抑制作用。含低分子量肝素（LMWHs)之製劑包括形成4至30個單醣之鏈，並且其具有對因子Xa 比對凝血酶更有選擇性作用之特質。已知抑制因子Xa須要經由抗凝血酶-結合功能部位 (domain)(功能部位-A)使肝素與AT III連結，而且抑制因子Ila (凝血酶）須要經由功能部位-A與AT III連結，及經由較不被確定之結合功能部位（功能部位-T )與凝血酶連結。已知關於肝素之功能部位-A之合成寡醣。其揭示在，例如，歐洲專刹84 999和歐洲專利529 715 ，專利申請公開號 WO 99/36428 及發表在 Bioorg. Med. Chem.，1998，6, 1509-1516之論文。這些合成寡醣經抗凝血酶III而具有選擇性抑制凝集因子Xa之特性，而沒有任何關於凝血酶之活性。其在靜脈栓塞中展現出抗血栓活性。在專利申請公開號WO 98/03554及WO 99/36443中已揭示合成寡醋經活化AT III而能抑制凝血酶和因子Xa。具新穎生物活性之硫酸化及烷基化多醣衍生物已揭示在這些專利申請案中。其特別是抗凝血劑及抗血栓劑。其中已特別顯示，這些硫酸化及烷基化之多醣係仰賴糖精骨架本泜張尺度通用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1308153

所權帶之坑基或硫酸基的排列’而有強力抗血栓性及抗凝皿性。更一般&之，傾發現經製備多酷序列，可能可精確調整GAGs型式之活性以得到顯現肝素之抗凝血及抗血栓醫藥特質之非常具有活性的產物。相較於肝素，其具有特別結構及不與血小板因子4反應（此爲肝素之血小板減少症效應之原因）的優點。然而，在專利申請公開號WO 98/03554和WO 99/36443 及故洲專利案529 715中，揭示某些產品在人體治療上之用途已註明.其有問題，特別是假使這些產物具有長半衰期時更疋如此。上述產物在血检預防或治療範_中，於預防出i發生的同時，要再穩定或維持血液流動性3 因爲已知道病患在治療時經任何意外皆可能促使出血發生。而且病人在接受抗血栓治療下也可能須要介入外科手衛。再者，在某些手術過程中，會使用高劑量之抗凝血劑以預防血液凝集’並在手術結束後須要中和。因此最好具有能在任何時間中和阻斷抗凝血活性之抗凝血劑s以此事實’已知上述合成寡糖不容易被任何針對肝素或LMWHs 之·已知解毒劑，包括魚精蛋白瑞酸鹽來中和3 本發明係關於新穎合成多醣，其結構類似揭示在專利申請公開號WO 98/03554和WO 99/36443及歐洲專利案529 715之化合物；衣發明標的之合成寡糖之結構經變更而具有一與生物素（六氫-2-氧-1H-嘍吩并[3,4-d]咪唑-4-戊酸）或生物素衍生物之共價鍵結。令人驚訝地，a生物素或生物素衍生物之加入並不會變更多醣之醫藥生物活性。事實 -5 - 本紙浪尺度適财ϋ a家揉準(CNS) A4規格(21GX 297公董) " " ' 1308153 A7 B7 五、發明説明_( 3 ) 上，本發明標的之新穎多醣具有相當於先前技術之多醣的抗血栓活性。然而，在緊急狀況下其增添了可經由特殊解毒劑快速中和之優點。此特殊解毒劑是抗生物素蛋白（The Mercklndex，12 版，1996，M.N. 920，頁數 151-152)或抗生物素蛋白鏈菌素，此二種四單體蛋白之各自分子量約爲66 000與60 000道耳吞，對生物素具有非常高親和力。一般來説，本發明係關於具有抗血栓活性之合成多醣，其具有至少一與生物素或生物素衍生物之共價鍵結3 所指之生物素衍生物是在皮爾斯（Pierce)目錄中，1999-2000，頁數62至81，所列之生物素衍生物，例如6-生物素胺基己酸，

裝 Ο

或6- [ 6-生物素胺基己驢胺基]己酸，〇

玎

線或2-生物素胺基乙硫醇本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐) 1308153 A7

本紙張又度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 1308153 A 7

本紙張尺度適用中國國家揉準(CNS) A4規格（2l〇X 297公釐）

裝訂

k 1308153 A 7 B7 五、發明説明（6 上圖是一單醣單元之圖式表示，其具有一選自己醣、戊醣及相關去氧之糖類之哌喃糖結構，該單元經由其變旋異構碳_键結至另一單酷單元，此單元之經基可被相同的或不同的Ri基取代，R!如下列定義， -P e表示伍醋之結構··

(Pe) -h等於是1或2， -η是整數並且可爲任何0至25數値， -Ri表示-T-Biot鍵聯、（(：厂(：6)烷氧基或-0S03·基， -R2表示-T-Biot键聯、（Q-Q)烷氧基或-0S03_基， -R〇表不Biot鍵聯或（Ci-C§)境氧基， -R4表示-T-Biot鍵聯' (CrCs)烷氧基或-0S03·基，或者 R 4組成-0-CH2-橋，該-CH2-基可鍵結至在相同環上帶有幾基之後原子；已知道至少有一 R!、R2、R3或R4取代基表示-T-Biot 基， -W表示氧原子或是亞T基， -τ表是一鍵聯，其係選自： NH 、本紙張又度通用中國國家標準(CNS) A4规格（210X297公釐） 1308153 A 7 B7

五、發明説明（7 )

NH

.NH ch2

其中j和k可相同或不同，其爲取自1至ι〇之任何整數· -Biot表示下列基團： •ς

及其醫藥可接受鹽。如上述，應該注意的是，一般在本發明中之波形線表示化學鍵在哌喃糖環平面之下或上。在Ρο中單酷可爲相同或彼此不同，並且在糖芬間的鍵結可爲〇?或/3型式。這些早醣_較好選自D或L己醣異構糖' 阿卓糖 (altrose)、葡萄糖、甘露糖、加洛糖（gal〇se)、艾杜糖 (idose) '丰乳糖或塔羅糖（talose)(此例h=2 )或自D或L戊酷核糖、阿拉伯糖、木糖或來蘇糖（此例h=2 )。也可使用其匕卓醋’如，例如，去氧糖（和/或-CHzRfCH^)。 -10- 本成朵尺度通用中國画家揉準(CNS) A4规格（210 X 297公蛩） 1308153 五 A7 B7、發明説明（8 ) 多醣部分Po可包含0至25個烷基化和二-或三硫酸化之早姆早7L。多醣部分Ρο亦可包含0至25個烷基化和一-或二硫酸化之單醣單元多醣部分Ρο可包含0至25個未帶電和/或部分帶電和/ 或完全帶電之烷基化單醣單元。帶電或未帶電單元可沿著鏈分散，或是，其可群聚成爲帶電或未帶電醣類功能部位。在這些單元之間鍵結可以是1，2 ; 1，3 : 1，4 ; 1，5 ; 1,6 ;及α或型式。在本文中，已選擇L-艾杜糖醛酸之lC4構形及D-葡萄糖搭酸之4C t構形，但已明確知道，一般該單酷單元在溶液中之構形會變動。因此，L-艾杜糖醛酸可具有lC4、2S〇或構形。根據其態樣中之一，本發明係關於下式（U)之多醣：

其中 -11 - 本紙浪尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1308153

Π

—Ρ 表示特別多醣Ρο族，其經由變旋異構碳與如（Ι)所定義之 pe鍵結，

如⑴之定義， ~ K基如（I)之定義，且在相同單醣中，其可相同或不同， '在[k中單酷:重複m次，在[]t中單醣重複t次，及在⑴ 中單醣重複P次，是1至5之整數，ts〇至24之整數及p是〇至24之整數，已知lSm+t+pS25，及其醫藥可接受鹽類。在這些式（1.1)多醣中，其中只有Ri、Ra、心或&取代基之一表示-T-B1〇t鍵聯（其T和Bl〇t定義如⑴）之多醣，' 及其醫藥可接受鹽，形成本發明另—態樣。根據一特殊態樣，本發明係關於式（〗2)之十六醣：本泜乐尺度適用中國國家搮準(CMS) Α4规格(210Χ 297公董)-~~---- 1308153 A 7 B7 五、發明説明.（ι〇 )

其中 -T表示選自以下鍵聯之一： NH 、

NH

其中j和k可相同或不同，其爲選自1至1〇之整數； -Biot表示下基團： ,ς

-Pe表示伍醋結構：

本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格（210 X 297公釐） 1308153 A7 一 —__B7 五 '^説明.（U ) ' ~--- 其中 -Ri表示（CrCd烷氧基或-0S03·基， -R2表示（CrCs)淀氧基或~〇S03，基， -R3表示（CrC6)烷氧基，〜R4表示（q-C6)烷氧基或-os〇3·基，或者R4成爲—〇_CH2_ 橋，該-CHr·基可鍵結至在相同環上帶有羧基之碳原子； ' ~ W表示氧原子或是亞甲基，及其醫藥可接受鹽。根據其另一態樣，本發明係關於式（ϊ 3)伍酷：

其中Rl、R2、：R3、RAW定義如⑴，及其醫藥可接受鹽類。這些式（1.3)之伍聽中，其中僅有R〖、I、心、或心取代基之一代表-T-B1〇t鍵聯（其中τ和历加定義如（1))之伍醣，及其醫藥可接受鹽，形成本發明另一態樣。 e些式（I.j)之伍醣中，本發明另—標的是式^ 4)之伍醣：

Biot

本紙張尺度適用_國國家搮準(CNS) A4^格(210X297公着 1 1308153 A 7 B7 五、發明説明_( 12 其中： -T表示選自以下鍵聯之一 NH 、

其中j和k可相同或不同，其爲選自1至10之整數； -Biot表示下列基團：

-R!表示（C〖-C6)烷氧基或-0S03·基， -R2表示（Ct-C6)烷氧基或-0SCV基， -R3表示（Ci-Cg)燒氧基’ -R4表示（(^-(：6)烷氧基或-0S(V基，或者R4成爲-0-CH 橋，該-CH2-基可連至在相同環上帶有羧基之碳原子： -W表示氧原子或是亞甲基，及其醫藥可接受鹽。 -15 - 本紙伕尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(2i〇x 297公董) 1308153

AT B7 五、發明説明」13 根據其另一態樣，本發明係關於下列多醣： -曱基（2,3 74,6-四-0-績酸根基-π -D-葡萄3瓜喃撼基）-(1 — 4)— ( 2,3,6-三-0—績酸根基-α -D—葡萄成喃糖基）-(1—^4)一 (2,3,6—三-〇—續酸根基-0 -D-葡萄峰喃糖基）~(1 — 4)~ ( 6-生物素胺基-6-去氧-2,3-二~0-甲基-a -D-葡萄。底喃糖基）-（1 — 4)— ( 2,3,6-三-〇—曱基—/? -D—葡萄旅喃糖基）-（1 —4)-[(2,3,6-三-〇-甲基一α-D-葡萄哌喃糖基）一(1 — 4)一 0— ( 2,3，6—二—0—曱基—/? —D—葡萄 7瓜喃糖基）一(1 — 4) ] 3 — (6-0-磺酸根基-2,3-二-0-曱基-a，D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)一（2,3—二-0—甲基-/5-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸）-(1 —4)- ( 2,3，6-三-0-績酸根基-α -D-葡萄派喃撼基）-(1 — 4)_ ( 2,3-二-0—甲基-or -L-艾杜峰17南糖基糖趁酸）-(1 — 4)一 2,3，6~三-〇-績酸基-a -D-葡萄峰7南糖芬，鋼鹽， -〒基（2,3,4,6-四-0-續酸根基-以-0-葡萄:7底喃糖基）-(1 —> 4)- ( 2,3,6—三-0-續酸根基-a -D—葡萄成喃糖基）-(1 — 4)-(2,3,6-三-0-磺酸根基-/5 -D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-（ 6- [ 6-(生物素胺基）-己醯胺基]-6-去氧-2,3-二-0-甲基-a -D—葡萄旅喃糖基）-(1 — 4)— ( 2,3，6—三—〇—甲基― /3 —D—葡萄來 σ南糖基）—(1 —> 4)— [ ( 2，3，6-三—0—甲基—α —D— 葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)一0-（2,3,6-三-〇—甲基-/?-D-葡萄, 旅喃糖基）-(1 — 4) ] 3 - ( 6-0-續酸根基-2,3-二，〇-曱基-α —D—葡萄成喃糖基）一(1 — 4)— ( 2,3,二一〇—甲基—/5 -D—葡萄喊喃糖基糖趁酸）-(1 — 4)- (2,3,6 -二-0 -續酸根基-a —D- 衝萄瓜喃糖基）一(1 —4)— ( 2，j —二，0—甲基—α —L-艾 -ιό - 本紙張尺度適用中國國家梯準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐） 1308153 A7 _______Β7 __ 五、發明説明_( w ) 杜哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-2,3,6-三-0-磺酸根基-α -D-葡萄成喃糖茹，鈉鹽，甲基（2,3，4,6—四-0—績酸根基-or -D—葡萄瓜喃糖基）_(1 — 4)"~ ( 2,3,6—三—0—績酸根基-α —D—葡萄♦ π南糖基）_(1 —' 4)- ( 2，〇，6—三-0-續酸根基-/3 -D-葡萄旅喃糖基）_(1 4)~ ( 6- [ 6- ( 6-生物素胺基己醯胺基）己醯胺基]-6-去氧-2，J~ 二-〇—甲基 -D—葡萄》瓜》南糖基）_(1 — 4)一（ 2，），6-二 —0—甲基一卢一D—葡萄s底σ南糖基）_(ι _> 4)— [(2,3,6-二_〇_甲基-a -D-葡萄派喃糖基）-(1 — 4)-〇- (2,3,6-三-0-甲基-/3-D-葡萄!J底喃糖基）-(l—4)]3-(6-0-碎酸根基-2,3-二〇~'曱基—α —D—葡萄旅β南糖基）—(1 —»· 4)— ( 2,3—二一〇—甲基 -召葡萄喊喃糖基糖路酸）_(ι —句―（2,3,6_三磺酸根基-e-D-葡萄哌喃糖基）-(1 -> 4)-( 2,3-二-0-甲基-α _ L~人杜》瓜喃糖基糖遂酸）-(1 —> 4)-2,3，6-三-0-確酸根基_ α-D-葡萄哌喃糖甞，鈉鹽， -甲基（2-生物素胺基-2-去氧-3,4-二-〇 -甲基-6 - 0-磺酸根基一泛-D-葡萄旅喃糖基）-(1 一 4)-(2,3-二-〇-甲基葡萄派喃糖基糖膝酸）-(1 — 4)- ( 2,3,6-三-〇-績酸根基 — α-D —葡萄哌喃糖基）一(1一4) 一（2,3-二一〇_甲基一沈一L-艾杜旅喃糖基糖趁酸）-(1 — 4)-2,3,6-三-〇-確酸根基-葡萄成喃糖荅，鈉鹽， -曱基（2-[N-(6-生物素胺基己醯基）]-2-去氧-3,4-二-〇~曱基-6—0—碌酸根基-a -D—葡萄<»底喃糖基）_(1 —· 4)— (2，j— — -0—甲基—/5 -D—朝萄旅β南糖基糖膝酸（1 —* 4)— -17- 本鼠張尺度逋用中國國家標準(CNS) Α4规格(210X297公釐) 1308153 A7 B7 五、發明説明_( 15 ) (2,3，6~三.績酸根基_ α 葡萄成喃糖基）-(1 一 4)-(2,3-二-〇-甲基-a -L-艾杜哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-2,3,6—三-〇—靖酸根基—α -0—續酸根基--D—葡萄峰喃糖芬，納鹽， -甲基（2- [ 6- ( 6-生物素醯胺基己醯胺基）己醯胺基]-2 -去氧-3，4-二-〇—曱基-6-0-續酸根基-β -D—葡萄《底喃糖基）-(1 —> 4) - ( 2,3—二-0—甲基-/? -D-葡萄成17南糖基糖越酸）-(1 — 4) - ( 2,3,6-三-0-磺酸根基-α -D-葡萄哌喃糖基）-(1 —> 4)- ( 2,3-二-0-甲基-a -L-艾杜a底喃糖基糖趁酸）-(1 _> 4)-2,3,6-三-0-磺酸根基-a -D-葡萄哌喃糖，納鹽。

本發明包含多醣之酸型式或任一其醫藥可接受鹽型式。在酸型式中，-C00·和-S〇3_官能基分別是-C00H及-S03H 型式。專有名詞··本發明多醣之醫藥可接受鹽"表示多醣其中一或多個-C0CT和/或-s〇3·官能基以離子鍵結至醫藥可接受陽離子。根據本發明之較佳鹽類爲選自鹼金屬之陽離子，而其中更較佳之陽離子是Na+或κ+。上式（I)之化合物也包含其中一或多個氫原子或碳原子被其故射性同位素所取代’例如氚或碳_14 。此被標定之化合物可用在研究、代謝或藥物動力學研究上及生化測試 (當爲配位子）3 馬製備根據本發明之化合物，製程原理包括使用二或寡醣爲基體的合成單位（synthon)，其製法如上述文獻。參考 IX 297公釐〉 1308153 A7 B7 五、發明説明—（Μ ) 文獻特別是專利或專利申請案中歐洲專利案300 099 、歐洲專利案529 715 、歐洲專利案621 282及歐洲專利案6的 854 及文獻 C. van Boeckel, M. Petitou，Angew. Chem. Int. Ed. Engl.，1993, 32, 1671-1690 。這些合成單位將接續著與另一個偶合以提供根據本發明多醣之被完全保護之同等物。此被保護之同等物接著將轉變成根據本發明之化合物。上述所指之基體合成單位之一包含一特別被保護之官能基，其使接續引入生物素或生物素衍生物變得可能，例如以疊氮基型式之潛在胺官能基或以N -酞醯亞胺基受到保護。在上述偶合反應中，一在其變旋異構碳上活化之"予體" 雙或寡醣，與具有一自由羥基之"受體"雙或寡醣反應。本發明係關於製備式（I)化合物之製程，其特徵爲：在第一階段，合成一所希望多醣（I)之被完全保護之同等物，其包含經保護之Pe功能部位先驅物，其經由一經保護之硫酸化多醣Po先驅物而延長其非還原端，特別言之，這些先驅物之一包含適當經保護之胺官能基以接續加上生物素或生物素衍生物；在第二階段，導入和/或露出負電基團：在第三階段，對胺官能基去保護，再加上生物素或生物素衍生物。：

Pe之合成特別是根據專利申請案W0 98/03554和W0 99/36443及文獻（上述所列）之方法進行。合成p〇先驅物之多si部分是根據熟知此項技藝者已熟知用來合成寡醋所使用之方法（G.J. Boons, Tetrahedron, 1996, -19 - 衣紙浪尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210x 297公釐）

裝

1308153 A 7 B7 五、發明説明J 17 52，1095-1121，WO 98/03554 和 WO 99/36443 )或一爲糖荅鍵予體之寡醣與糖苷鍵受體之寡醣偶合產生另一寡醣，其尺寸等於二個反應物尺寸總合3這序列將一直重複直至得到所希望之式（I)化合物。根據熟知此項技藝者熟知之法則，所希望之最終化合物電荷之性質及模式將決定用在不同合成階段之化學體特性。可使用之參考文獻，例如C. van Boeckel 和 M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1993, 32, 1671-1690,或 H. Paulsen, "Advances in selective chemical syntheses of complex oligosaccharides", Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 21，155-173 (1982)。本發明化合物可經以下一系列反應，從完全經保護之多醣先驅物得到： -醇官能基必須轉化成0-磺酸基，及在製造骨架時經去除保護基將羧基去保護，然後， -靖酸基接續ΐίσ入， -將可能加入生物素或生物素衍生物反應之胺官能基去保護， -以習知之胺基酸偶合反應加入生物素或生物素衍生物。可使用熟知此項枝藝者所熟知用於合成寡醣之不同策略自然地製備本發明化合物。 *·' 上述製程是較佳的本發明製程3然而，可使用在糖化學上其它熟知之方法製備式（I)化合物，例如敘述在 Monosaccharides, their chemistry and their roles in natural products，P.M. Collins 和 R.J. Ferrier, J. Wiley & Sons, 1995, -20- 本紙張尺度通用中画國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公釐） 1308153 A7 __B7 五、發明説明.（18 ) 及在 G.J. Boons, Tetrahedron, 1996，52，1095-U21。因此可從雙酷合成單位得到伍醋Pe，該方法敘述在C. van Boeckel 及 M Petitou，Angew. Chem. Int. Ed. Engl.，1993, 32， 1671-1690 ° 製備化合物（I)之製程中使用一般用於糖化學之保護基，例如在有機合成中之保護基（Protective Groups in Organic Synthesis)，T.W. Greene, John Wiley & Sons，New York，1981。保護基較好選自’例如，乙酿基’ έ甲基、苯甲感基’ 乙酷两驢基、+基、經取代之节基、視須要經取代之二本· 曱基、四氫哌喃基、晞丙基、戊烯基、第三丁基二曱基單矽烷基（tBDMS)或三甲基單矽烷基乙基。這些習知用在糖化學之活性基團是根據，例如，G.J. Boons, Tetrahedron, 1996，52, 1095-1121 » 這些活性基團選自，例如，醯亞胺鹽、硫糖甞、戊烯基糖甞 '黃嘌呤酸鹽、亞磷酸鹽或鹵鹽。端視生物素結合至寡醣之方式和生物素衍生物性質，化學文獻提供其它可能性，以用來建立熟知此項技藝者熟知之保護基。較佳將使用胺官能基、或是硫醇官能基、或是羧酸官能基' 或是醛官能基，其可與包含活化酯之反應基、順丁晞二醯亞胺、碘乙醯基或第一胺型式之生物素衍，生物反應’該反應可根據文獻（對照Savage等，Avidin-Biotm Chermstry: A Handbook :皮爾斯化學公司（Pierce

Chemical Company), 1992 )所述之絛件進行。上述製裎可能得到本發明化合物之鹽類型式。爲得到對 -21 - 各紙張尺度適用中國圉家樣準(CNS) A4規格（210 X 297公釐）

装訂

k 1308153

應酸’將鹽類型式之本發明化合物與酸型陽離子〜交換樹脂接觸。鹽類型式之本發明化合物接著以鹼中和得到所希望之鹽類。可得到式⑴化合物之醫藥可接受鹽之任何無機或有機驗將可用在製備式⑴化合物之鹽類上。氫氧化鈉、氫氧化 .甲氫氧化每或氫氧化鎂是較佳驗。式⑴化合物之納和弼鹽是較佳鹽類。根據本發明之化合物已形成生化及醫藥之研究主題。這些產物之完整抗血栓活性與其中和特性已在靜脈血栓模土中研九，包含組織因子之注射，接著大鼠腔靜脈之齋血，其已敘述在 j._M. Herbert 等，Blood，1998, 91，4197-4205 。在此模型中，在靜脈内注射〇丨至3〇毫莫耳/公斤义化合物後得到60%血栓抑制作用。抗生物素蛋白之注射在1比1000之莫耳比率時可大爲降低這些化合物之抗血栓效應，所得到降低效果可能大於5〇%。同樣地，化合物之前出血活性也會被注射上述劑量之抗生物性蛋白所中和。叩且，寡醣之循環活性（以測量抗_Xa活性和/或抗_11&活性得知）也受到注射抗生物素蛋白中和。因此，其它本發明標的是使用抗生物素蛋白或抗生物素蛋白鏈菌素之方法，其特徵在於可中和根據本發明之多醣。抗生物素蛋白或抗生物素蛋白鏈菌素可用來製備將中·‘ 和根據本發明之多醣的藥劑。由於其生化和醫藥活性，本發明之寡醣可組成高度有效藥齋卜其毒性可完全被其用途所包容。其非常穩定因此特

1308153 A 7 B7 五、發明説明_( 別適合當作專利醫藥產物之活性成分3 可用在由於體内恆定之凝集系統變更所造成之不同病理狀態，該病理狀態特別是出現在心血管與腦血管疾病，如與動脈硬化及耱尿病有關之金栓性栓塞症，包括不穩定性絞痛病、中風、血管造形術後再狹窄、動脈内膜切除術或嵌入血管内假體（prostheses)，或與血栓溶解後再栓塞、梗塞、缺血性病原之癡呆、周邊動脈疾病、血透析或血耳纖維顫動有關之企检性插塞疾病，或在冠狀動脈緩道使用血管假體時。再者，這些產品也可用來治療或預防靜脈源之血栓性插塞病原，如肺插塞。也可用來預防或治療所觀察之栓塞併發症，例如，術後、腫瘤生長或由細菌、病毒或酵素活化劑引起之凝固障礙。至於在假體嵌入期間使用，本發明之化合物可覆蓋假體，因此使之有血液相容性。尤其，其可與血管内假體（支架）連接。在此情沉中，可在適當非還原端或還原端給予選擇性化學修飾，如根據歐洲專利案649 854所揭示。本發明化合物在以多孔性氣球進行動脈内膜切除術時也可用來當作佐劑。根據本發明之化合物也可用來製備藥劑以治療上述疾病之藥物3 . 根據其另一態樣，因此本發明之標的是包含根據本發明之合成多醣或其醫藥可接受鹽之一（當作活性成分），並視須要結合一或多種惰性與適當之P武形劑的醫藥組合物。可根據所希望醫藥型式及所希望投藥方法（口服、舌 -23 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1308153 A 7 B7 五、發明説明_( 21 下皮下、肌肉内、靜脈内、經皮、經黏膜、局部或直腸）來選擇該賦形劑。涊活性成分也可以與環糊精結合之複合物型式來呈現，孩環糊精係例如、々_或丫_環糊精、八羥丙基—環糊精或曱基-/?-環糊精。 °亥'舌性成分也可經包含該活性成分之氣球釋放或經由血官内擴張器導入血管中，因此該活性成分之藥效不受影響。在每劑量單位中，活性成分含量適合每日預定劑量以達到所希望之預防或治療效果。每劑量單位可包含0.1至 1 00念克之洽性成分，較佳是〇 5至50毫克。這些抗凝血化合物I劑量可被抗生物素蛋白或抗生物素蛋白鏈菌素所中和’ 1¾抗生物素蛋白或抗生物素蛋白鏈菌素係經i V (靜脈内）注射、藥丸或輸液給予從1至1000毫克之劑量。根據本發明之化合物也可與一或多種其它可達到所希望療政（活性成分結合使用’如，例如，抗血栓劑、抗凝血内】血·小板集抑制劑’如，例如，潘生丁（dipyridamole) 阿斯匹林、梯可吡啶（ticl〇pidilie)或克羅匹多（cl〇pid〇grei) 或糖蛋白Ilb/IIIa複合物结抗劑。下列方法、製備和流程圖説明了在製備根據本發明多醣時不同中間體之合成。 ' 广列縮寫用來表示：Bn :芊基：Bz :笨甲酿基； TLC :薄層色層分析法：:芴磺醯基；Lev :乙醯丙醯基’ Et:乙基；ph:苯基：Me :甲基：Ac :乙酿基； -24- 本成張尺度適用十國國家橾筚(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1308153 A7 B7 五、發明説明乂 22 SE :三甲基單矽烷基乙基；ESI :電子散射離子化：生物素：六氫-2-氧-1H-嘍吩并[3,4-d]咪唑-4-戊酸；Z :芊氧羧基3 接續地，以本發明化合物之合成實例來詳細説明。流程圖1-參醣9之合成

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OSS ®〇 Me〇 0M« j 製備1 2-(二甲基早珍燒基）乙基4,6—0—亞卞基—2,3—二—0—曱基― /5 -D-葡萄哌喃糖:y： (2) 將氫化鈉（18克）在0 °C逐步加至化合物1 ( 15.8克， -25 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格（210X 297公*) 1308153 A? B7 五、發明説明（23 428 毫莫耳）（根據 K，Jansson 等人 ’ J_ 〇rg. Chem.，1988, 53, 5629-5647製備）和碘甲烷（2〇毫升，319毫莫耳）之四氫呋喃（350毫升）溶液中。在周圍溫度下攪拌反應混合物4小時。過量氫化鈉以甲醇破壞，並將反應混合物倒入冰冷水 (1.5升）中。在乙酸乙酯萃取後’有機層用飽和氣化鈉溶液和水清洗，在硫酸鈉上乾燥，然後在眞空下濃縮3剩餘物在矽膠管柱中層析（15/1 (體積/體積）環己烷/乙酸乙酯）純化，得到16.8克化合物2 » [α]£) = -41。（c=0.69，二氣甲烷）製備2 2-(三曱基單矽烷基）乙基6-0-笮基-2,3〜二_〇_甲基一 D-葡萄派υ南糖:y： (3) 將3 A分子篩粉末（82克）、f基澄（呈色指示劑）、氰基氫硼化鈉（34克’ 526毫莫耳）及通後滴知的鹽酸飽和乙醚溶液連續地加皇化合物（2) ( 16克’ 40.3毫莫耳）的四氫呋砂膠管柱中層析 ~到12.5克化合物喃（ 600毫升）溶液中’直至得到粉紅色。在過濾與用乙酸乙酯萃取後，有機層用飽和碳酸氫鈉溶咬和水^青&，在硫酸鈉上乾燥，然後在眞空下濃縮。在 (3/1(體積/體積）曱苯/乙酸乙酯） [a]D=- 42。（c=1.2 ，二氣甲燒）製備3 2-(三甲基單碎坑基）乙基（2,3_二-〇-篆甲酶基_4 6一〇一亞 -基-a -D-葡萄♦喃檐基）-(1 — 4)- (2,3，6〜三—〇—苯f酿基— -26. 木紙張尺度通用中國繭家無準(CNS) A4規格(21〇χ297公董） 1308153 A 7 ___B7 五、發明説明_( 24 ) 点—D-葡萄哌喃糖基卜(1〜4)一6_〇一苄基、2 3一二甲基一点 -D-葡萄哌喃糖苷（5) 石庇糖甞4 ( 16.52克，16.60毫莫耳）（根據專利公開號 WO 99/36443之製備1而得）、化合物3(6 〇克，丨5 〇5毫莫耳）及4人分子篩粉末（16.7克）之甲苯（3〇〇毫升）混合物在氬氣下攪拌1小時。然後將混合物冷卻至_2〇。將N_ 碘琥珀醯亞胺（3.9克，17.4毫莫耳）和三氟甲磺酸（〇17毫升，1.97耄莫耳）之1/1 (體積/體積）二氣曱規/二^哥烷（86 毫升）溶液以滴加方式加至反應昆合物中。在1 〇分鐘後，過渡反應；昆合物’以二氣甲燒稀釋，以1莫耳硫代硫酸納落、10%碳酸氫鈉溶液和水大量清洗，在硫酸鈉上乾燥，然彳交在眞2下濃縮。剩餘物在碎膠管柱中層析（g/ι (禮積/ 體積）甲苯/乙酸乙酯）純化，得到18.8克參糖5。〇]D=+34°(c=1.26 ’ 二氣甲烷）。製備4 2-(二甲基早碎坑基）乙基（4,6-0-亞爷基_ π 葡萄派嚼糖基）-(1 — 4)-(々-D-葡萄哌喃糖基）-(ι — 4)-6-0-;基— 2,3-二_〇-甲基-々_D-葡萄喊喃糖苷（6) 將第三丁醇鉀（3.15克）加至化合物5 (18.7克，14毫莫耳）之1/1 (體積/體積）甲醇/二崎烷混合物（140毫升）溶液中。在周圍溫度下攪拌反應混合物2小時。以杜溫克斯®’ (Dowex®) 50WX4 H+樹脂中和，過濾並在眞空下濃縮。剩餘物在矽膠管柱中層析（20/1 (體積/體積）二氣曱烷/甲醇）純化’得到10.0克化合物6。 27- 未紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4現格(210 X 297公釐） 1308153 A 7

[a]D=+29°(c=l.U ，二氣曱烷）。製備5 一甲基— n葡 5 〜葡萄 2-（三甲基單矽烷基）乙基（4,6-0-亞苄基-2 - λ-D-葡萄。底喃糖基）_(ι — 4)-(2,3,6-三-〇-甲展萄哌喃糖基）-(1 — 4)-6-0-芊基-2,3-二-〇-甲基1 哌喃糖苷（7) 在氬氣下將氩化鈉（5.2克，216毫莫耳）逐步加至化入 6 (9.93克，12.24毫莫耳）及碘甲烷（9.0毫升，^立 i 毫莫耳）之無水四氫呋喃（1〇〇毫升）冰冷混合物（〇、φ ;甲。在周園溫度下檀拌昆合物20小時。過量氫化納以甲醇破壞：將反應混合物倒入冰冷水（5〇〇毫升）中。在乙欧乙萃取後’有機層用飽和氣化鈉溶液清洗，在硫酸鈉上乾， • · w 後在眞空下濃縮，得到11克化合物7 ，其不須純化即可用在下列步驟》 TLC:Rf=0.38，矽膠’ 3/2(體積/體積）曱苯/乙酸乙酯。製備6 2_(二曱基单碎燒•基）乙基（2,3—二-〇-甲基—α —D—葡萄〇底喃糖基）-(1 — 4)-(2,3,6-三-0-甲基-/?—D-葡萄哌喃糖基）_ (1 — 4)-6_0-苄基-2,3-二-0-甲基-/? -D-葡萄成喃糖苷（8) 將化合物7 ( 11克）溶在60%乙酸（180毫升）中，並在80; X攪拌1小時30分鐘。混合物和曱苯濃縮及共蒸發。剩餘物在矽膠管柱中層析（2/1 (體積/體積）甲苯/丙酮）純化，得到8.46克化合物8。 TLC:Rf=0.36，矽膠，1/1 (體積/體積）曱苯/丙酮。 -23- _ 本紙痕疋度適用中國國家標準(CNS) A4规格（210X297公釐) " ' 五 1308153 A7 B7 、發明説明-(26 ) 製備7 2-(三甲基單矽烷基）乙基（6-0-苯甲醯基-2, 3 -二-0-甲基-α-D-葡萄被喃糖基）-(1 一 4)-(2,3,6-三-0-甲基-々-D-葡萄11 瓜11南糖基）—(1 — 4)—6—0—字基—2,3—二—0—甲基——D—葡萄σ底喃糖替（9) 將1-苯甲醯氧基-1Η-苯幷三唑（5.36克，22.4毫莫耳）和三乙胺（3.32毫升）加至化合物8 (8.41克，10.6毫莫耳）之二氣甲烷（110毫升）溶液中a在周圍溫度下將混合物攪拌20小時，然後用二氣曱烷稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液和水清洗，在硫酸鈉上乾燥，然後在眞空中濃縮。剩餘物在矽膠管柱中層析（5/0.5/0.25 (體積/體積/體積）環己烷/乙酸乙酯/乙醇）純化，得到8.4〇克化合物9。 1> ]〇=+15。（ c=2，二氣甲坑）。

装 -29- 訂

線本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格（210 X 297公釐〉 1308153 A7 B7

本紙朵尺度適用中國國家橾準(CNS) A4規格（21〇x 297公釐） 1308153 A7 ___ B7___ 五、發明説明，（28 ) 製備8 2-(三曱基單矽烷基）乙基（2,3-二-〇-苯甲醯基亞芊基—λ -D—葡萄旅π南糖基）—（1 —4)一（ 2,3,6—三—本·甲酿基—点 -D-葡萄哌喃糖基）-(1 -> 4)-( 6-0-苯甲醯基_2,3-二-〇-甲基D-葡萄喊喃撼基）一(1 — 4)一（2,3,6—三_〇—甲基―卢一D-葡萄哌喃糖基）-(1 一 4)-6-〇—苄基-2,3-二-0-甲基-/? -D-葡萄哌喃糖荅（10) 根據製備3所述之程序將化合物9轉化成化合物1〇。 |>]d=+42。（c=2，二氣甲烷）。製備9 2-(三甲基單矽烷基）乙基（4,6-0-亞苄基-立-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)- ( /? -D-葡萄旅 ί南糖基）-(1 — 4)- ( 2,3- 二-〇-甲基-a -D-葡萄承σ南糖基）-(1 4 4)- ( 2,3,6-三-0-甲基_ D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-6-0-笮基-2,3-二-0_甲基-点-D-葡萄哌喃糖:#(11) 根據製備4所述之程序將化合物1〇轉化成化合物11。 TLC:Rf=0.35，矽膠，10/1 (體積/體積）二氣甲烷/甲醇。製備10 2_(三甲基單矽烷基）乙基（4,6-0-亞芊基-2,3-二-0-甲基-α-D-葡萄旅喃糖基）_(1 — 4)-(2,3,6-三-0-甲基葡,, 萄派喃糖基）-(1 — 4)-(2,3,6-三-0-曱基葡萄旅喃糖基）-(1 4)-(2,3,6-三-0-甲基葡萄旅喃糖基）-(1 — 4)-6-0-;基_2,3-二-0-甲基葡萄哌喃糖荅Ο2) 恨據製備5所述之程序將化合物11轉化成化合物12 a _ -31 - _ 本故張足度適用中画國家搮準(CNS) A4現格(210 X 297公釐） 1308153 五 '發明説明^Γ"^一'-S——- TLC’Rf=o n ’碎膠’ 1/2 (體積/體積）環己烷/乙酸乙酷3 製備u **(二甲基單矽烷基）乙基（2,3-二-0-甲基-α-D-葡萄哌喃糖基）一(1 — 4)一（2,36__三—〇_甲基u—葡萄哌喃糖基）一 (1 4)~(2，J，6一三—〇_甲基—《 —D-葡萄哌喃糖基）~(1〜4)一一〇甲基~D~葡萄底喃糖基）-(1 — 4)-6~〇_爷基 2,〇-__0_甲基_卢_〇_葡萄哌喃糖苷（13) 根據製備6所述之程序將化合物12轉化成化合物13 3 TLC.R产〇.33 ，矽膠，2/〇 5/〇 $ (體積/體積/體積）環己烷/ 乙酸乙酯/乙醇。製備12 2-(二曱基單矽烷基）乙基（6_〇_苯甲醯基_2,3_二—〇一甲基_ α-D-葡萄哌喃糖基卜(1 — 4)_(2,3,6一三_0_甲基u_葡萄喊味糖基）_(1—4H2,3,6_三_0_甲基_α_D_葡萄哌痛糖基）-(1 — 4)-(2,3,6-三-〇一甲基_々一D_葡萄哌喃糖基）_(1 — 4) 6 〇~下基_2’J_二一〇-甲基葡萄哌喃糖甞Q4) 根據製備7所述之程序將化合物13轉化成化合物14。 TLC:R产0.16 ，矽膠，3/〇5/〇5 (體積/體積/體積）環己烷/ 乙酸乙酯/乙醇。 -32- 1308153 A7 B7

本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1308153 A7 __ B7 五、發明説明:（Μ ) 製備13 2_(三曱基單碎燒基）乙基（2,3_二-0-苯甲酿基-4,6-0-亞草基-a -D-葡萄成喃糖基）-(1 — 4)- ( 2,3,6-三-〇-笨甲酿基 -/? -D-葡萄旅痛糖基）-(1 —»· 4)- ( 6-0-苯甲酿基一 2,3-二_〇-甲基-a -D-葡萄旅南糖基）-(1 —» 4)- ( 2，3，6-三-〇-甲基-卢一 D-葡萄!^底喃糖基）-(1 — 4)- ( 2,3,6-三-0-甲基-α —D-葡萄成 σ南糖基）-(1 4)- ( 2,3,6-三-〇-甲基-/? -D-葡萄7底喃糖基）_ (1 -> 4)-6-0-节基-2,3-二-〇甲基-/5 -D-葡萄旅喃糖芬（15) 根據製備3所述之程序進行化合物14與雙醣4偶合反應，以得到化合物15。 [泛]D=+52。（c=l.l，二氣甲烷）。製備14 2_(三甲基單石夕娱：基）乙基（4,6-0-亞+基-a -D-葡萄3底福糖基）-(1 — 4)-( 々-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-(2,3-二-0-甲基-α-D-葡萄哌喃糖基）-(l-4)-(2,3,6-三-0-曱基-/3-D-葡萄哌喃糖基）-(l—4)-(2,3,6-三-0-甲基-α-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)一（.2,3,6—三-0—甲基-D—葡萄旅喃糖基）-(1 —*· 4)—6—0—辛基—2,3—二—0-甲基—/? —D—葡萄 β底喃糖备（16) 根據製備4所述之程序將化合物15轉化成化合物16 ^ TLC:Rf=0.31，矽膠，10/1 (體積/體積）二氣甲烷/甲醇。製備15 2-(三甲基單矽烷基）乙基（4,6-0-亞苄基-2,3-二-0-曱基-λ-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-(2,3,6-三-〇-甲基-/5-D-葡萄17底17南糖基）-(1 — 4)— [(2 ,3,6 -三-0—甲基-a -D—葡萄派喃 -34- 本紙伕尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格（210 X 297公釐^ ~ 装 η

!308153 A7 B7 五發明說明（32 糖基）-(1 4 4)_(2,3,6_三一〇—甲基一冷-D-葡萄哌喃糖基）_(1 4)]2~6-〇_辛基-2,3-二-〇-甲基-/5 一 D-葡萄·»瓜喃糖菩 (17) 根據製備5所述之程序將化合物16轉化成化合物17。 TLC:Rf=〇.46，矽膠，10/1 (體積/體積）二氣甲烷/甲醇。製備16 2-(三甲基單矽烷基）乙基（2,3_二_0_甲基_ α _D_葡萄哌喃塘基）-(1 — 4)-(2,3,6-三-〇-甲基-/?-0-葡萄哌喃糖基）-(1 4)— ( 2,3,6—三—0—甲基—α —D—葡萄喊喘糖基）—(1 — 4)— (2,3,6-三-〇-甲基-々-D-葡萄哌喃糖基）-(1 -> 4)-(2,3,6-三 -〇-甲基-〇:-0-葡萄哌喃糖基）-(1一4)-(2,3,6-三-0-甲基-冷-D-葡萄9瓜喃糖基）-(1 — 4)一6-0-芊基-2,3-二-0-曱基-/? -D-葡萄咏喃糖茹（18) 根據製備6所述之程序將化合物17轉化成化合物18。 TLC:Rf=0.42 ，矽膠，1/0.5/0.5(體積/體積/體積）環己烷/ 乙酸乙酯/乙醇。製備17 2-(三甲基單矽烷基）乙基（6-0 -苯甲醯基- 2,3 -二-0-甲基-a -D-葡萄，底痛糖基）-(1 — 4)— ( 2,3,6—三-〇-曱基-D— 葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-(2,3,6-三-0-甲基-α-D-葡萄哌喃. 糖基）-(1 — 4)- ( 2,3,6-二一 0-甲基一葡萄峰喊糖基）一(1 —4)一（ 2,3，6-三甲基—α —D—葡萄喊喃糖基）一 (1 — 4)一 (2,3，6 -三-〇-甲基-/5 葡萄♦ 17南糖基）-(1 — 4)一6-0- 辛基一2,3-二-〇-甲基-/5 -D-葡萄派喃糖芬（19)

裝訂

-35- 本紙浪尺度適用中國國家標準(CNS) Α4规格（210 X 297公釐） Οθζ

1308153 A 7 B7 五、發明説明.（33 ) 根據製備7所述之程序將化合物18轉化成化合物19。 TLC:Rt-0.25 ，矽膠，3/0.5/0.5 (體積/體積/體積）環己烷/ 乙酸乙酯/乙醇。流程圖4-玖醣23之合成 19 0 3ζΟ 8:0

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製備18 2-(三甲基單矽烷基）乙基（2,3-二-0-苯甲醯基-4,6-0-亞芊基-a -D-葡萄哌喃糖基）-(1 -> 4)- ( 2,3,6-三-0 -苯曱酷 -36- 本紙柒尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格（210X297公釐）

1308153 A 7 B7

五、發明説明（34 基-/5 -D-葡萄"底喃糖基）_(ι — 4)- ( 6-0-苯曱酿基—2,3-二〇-甲基-a -D-葡萄威喃糖·基）_(i — 4)- ( 2,3,6-三甲農一 /5-0-葡萄峰喃糖基）_(1 — 4)-[(2,3,6-三-〇-甲基~0^1：|__葡萄哌喃糖基）-(1 4)-(2,3,6-三-0-曱基-/?-D〜葡萄哌喃糖基）_(1 — 4)]2 —6—〇—爷基—2,3—二—0—甲基_点~*D~葡萄喊喃糖苷（20) 在氬氣下將硫糖甞4 (5.2克，5.23毫莫耳）、染酶19 (4.72克，2.75毫莫耳）和4A分子篩粉末之甲笨混合物授拌1小時。然後在0 aC下以滴加方式加入N-碘琥珀酶亞胺（1.36克，5.85毫莫耳）和三氟甲磺酸（0.140毫升，156 毫莫耳）之1/1 (體積/體積）二氣甲烷/二哼烷（32毫升）溶液3 15分鐘後，過濾反應混合物，以二氣甲烷稀釋，用1 莫耳丨展度硫代硫納溶液、1 0 %竣酸氮納溶液和水接續地清洗，在硫酸鈉上乾燥，並在眞空下濃縮3剩餘物在矽膠管柱中層析（3/0.5/0.5 (體積/體積/體積）環己燒/乙酸乙酯/ 乙醇）純化，得到7.13克化合物20。〇]d=+65。（c=1.4，二氣曱烷）。製備19 2-(三甲基單矽烷基）乙基（4,6-0-亞苄基_泛_D_葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)- ( /? -D-葡萄 I»底 π南糖基）一(1 4)- ( 2,3-二 .f 甲基-α-D-葡萄旅喘糖基）-(1 — 4)-(2,3,6-三-〇-甲基-点一 D-葡萄旅喃糖基）-(1 —*· 4)- [ ( 2,3,6-三甲基一 a -D-葡萄 σ展喃糖基）-(1 一 4)- ( 2,3,6-三-0-甲基-β 葡萄旅喃糖基）_( 1 —* 4) ] 2 -6-0-辛基-2,3-二-0-甲基—卢一£)一葡萄成喃 -37- 本紙張尺度通用中國國家搮準(CNS) A4规格(210X297公爱)

裝

1308153 A7 _ __ B7 __ 五、發明説明、（35 ) 糖苷（21) 根據製備4所述之程序將化合物20轉化成化合物21。 TLC:Rf=0.27，矽膠，10/1 (體積/體積）二氣甲烷/甲醇。製備20 2-（三甲基單矽烷基）乙基（4,6-0-亞芊基-2,3-二-〇-甲基-α-D-葡萄哌喃糖基）一〇 — 4)_(2,3 6_三_〇_甲基_ρ-葡萄派喊糖基）一(1 — 4)-[(2,3,6-三-0-曱基-江-0-葡萄哌喃糖基）-(1~>4)-(2,3,6-三-0-甲基-/5-0-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4) ] 3 -6~〇_字基_2,3_二_〇一甲基_d_葡萄ο底喊糖备（22) 根據製.備5所述之程序將化合物21轉化成化合物22。 TLC:Rf=0.3l，矽膠’ 5/1/1 (體積/體積/體積）環己烷/乙酸乙酯/乙醇。製備21 2 一（三甲基單矽烷基）乙基（2,3-二-0 -甲基-α-D-葡萄哌喃糖基）-(1 -> 4)-(2,3,6-三-〇-甲基-卢-D-葡萄哌喃糖基）_ (1 -> 4)- [ ( 2,3,6-三-〇-甲基-葡萄旅喃糖基）-(1 4)一 (2,3,6-三~〇-甲基葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)]3-6-0-芊基一 2,3_二-〇-甲基-/5-D-葡萄哌喃糖苷（23) 根據製備6所述之程序將化合物22轉化成化合物23。 TLC:Rf=0.35，矽膠，2/1/1 (體積/體積/體積）環己烷/乙酸. 乙酯/乙醇。 .' .— ... -38 * 本紙張尺度_ t㈣w#(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1308153 AT B7

衣紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 x 297公釐） 1308153

AT B7 五、發明説明（37 ) 製備22 2一（三甲基單矽烷基）乙基（2,3-二-Ο-甲基-6-0-芴磺醯基_ α 葡萄旅喃糖基）-(1 — 4)一（ 2,3,6-三-0-甲基-卢-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)- [ ( 2,3,6-三-〇-甲基—a_D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)- ( 2,3,6-三-0-甲基-々-D-葡萄u底喃糖基 —4) ] 3 -6-0-芊基一2,3-二-0-曱基-/? -D_葡萄喊喃糖嘗（24) 在氬氣下將化合物23 ( 1.09克）溶在吡啶（10毫升）中，然後加入苟續睡氯（1.03克）。揽拌2小時後，用二氣甲虎 (1 〇〇毫升）稀釋反應混合物。有機層接續地用10%疏酸氫鉀溶液和水清洗，乾燥及蒸發。在矽膠管柱中層析（2.3/2 (體積/體積）甲苯/丙酮）後，得到1.77克化合物24。 TLC:Rf=0.5 ，矽膠，3/1/1 (體積/體積/體積）環己烷/乙酸乙酯/乙醇。製備23 2-(三曱基單欢坑基）乙基（6-去氧-2,3-二-〇 -甲基-6- §太酿亞胺基-α-D-葡萄哌喃糖基）-(1 4)-(2,3,6-三-0-甲基-卢 -D-葡萄π瓜喃糖基）-(1 — 4)- [ ( 2,3,6-三-〇-甲基-(ar-D-葡萄口底味糖基）-(1 — 4)- ( 2，3，6 -三-〇-甲基_d-葡萄喊喃糖基）-(1 — 4) ] 3 -6-0-辛基-2,3-二-〇-甲基一点_D-葡萄α底喊糖芸（25) · 將Si;醯亞胺钾（225毫克，1.38毫莫耳）和之後的18-冠-6冠链（121.5毫克，0.46耄莫耳）加至含4A分子篩粉末之化合物24( 500毫克，0.23毫莫耳）的無水n，N-二曱基甲醯胺（U毫升）溶液中。在80 3C攪拌混合物4小時。冷卻 -40- 本紙張尺度通用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐〉 1308153 A7 __________B7 _ 五、發明説明（38 ) 後’以二氣曱烷稀釋反應混合物，經硅藻土過濾並濃縮。刴餘物在西砝迷克斯® (Sephadex®) LH20膠管柱（3x100公分）中層析（1/1 (體積/體積）二氣甲烷/乙醇）純化後，接著在矽膠管柱中層析（丨1/2 (體積/體積）曱笨/乙醇），得到 417.4毫克化合物25。 TLC:Rf=0.38 ’矽膠，u/2 (體積/體積）甲苯/乙醇。製備24 2-（二甲基單碎燒基）乙基（2,3,4,6-四-0-乙酿基-a -D-葡萄17底喃糖基）-(1 — 4)- ( 2,3,6-三-0-乙酿基-α -D-葡萄1^瓜喃糖基）-(1 — 4)-(2,3,6-三-0-乙醯基-々-0-葡萄哌喃糖基）_ (1 — 4)- ( 6-去氧_ 2，3 _二_〇一甲基-6-酞醯亞胺基—a -D-葡萄哌喃糖基）-(1 句_ ( 2,3,6-三-0-甲基-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-[(2,3,6-三-0-曱基-“-0-葡萄哌喃糖基）-(1_> 4)_(2,3,6-三甲基-/5 -D-葡萄派喃糖基）-(1 — 4) ] 3-6-〇-芊基-2,3-二-〇-曱基一点-D-葡萄哌喃糖苷（27) 在氬氣下將硫糖苷26(1.515克，1.564毫莫耳）（根據專利WO 99/S6443之製備36的化合物41製備）、受體25 ( 840 毫克’ 0.391毫莫耳）和4Α分子篩粉末（2.15克）之甲笨（33 毫升）混合物攪拌1小時。冷卻反應混合物至〇。〇，並加入Ν-碘琥珀醯亞胺（ 387毫克）和三氟甲磺酸（55.4微升）之. 1/1 (體積/體積）二氣甲烷/二哼烷（7毫升）溶液。1〇分鐘後，過濾反應混合物，以甲苯稀釋，連續地以1莫耳硫代硫酸鈉溶液，10%碳酸氫鈉溶液與水清洗，在硫酸鈉上乾燥：，然後在眞空下濃縮。剩餘物在西姑迪克斯® LH20膠中 -41 - ^紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) ~~ 1308153 A7 _ ___B7 五、發明説明（39 ) 層析（1/1 (體積/體積）二氣甲烷/乙醇）純化，接著在矽膠管柱中層析（5/4 (體積/體積）甲笨/丙酮），得到887毫克化合物27 » [a ]D=+70。（ c=0_35，二氣甲淀）° 製備25 2-（二甲基單石夕坑基）乙基（2,3,4,6-四—〇—乙酷基—a —D—葡萄11底喃糖基）-(1 — 4)- ( 2,3，6-三-〇-乙酿基-α -D-葡萄ar底喘糖基）-(1 — 4)- ( 2,3,6-三-0-乙酿基-/? -D-葡萄旅喘糖基）一 (1 — 4)- ( 6-去氧-2,3-二-0-曱基-6- S太酿亞胺基-a _D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-(2,3,6-三-〇-甲基-θ-D-葡萄哌喃糖基）-(1 -> 4)- [(2,3,6-三-0-甲基-a-D-葡萄派喃糖基）一q — 4)- ( 2,3,6-三-0-甲基-/5 -D-葡萄喊喘糖基）一(1 — 4) ] 3 -2,3— 二-0-曱基-々-D-葡萄哌喃糖苷（28) 化合物27 ( 750毫克’ 0.245毫莫耳）之乙酸（37毫升）溶液在氫壓力（5_巴）下，在含10%披免木炭（750毫克）中處理 2小時30分。過濾後，濃縮溶液，剩餘物在矽膠管柱中層析（6 / 1 (體積/體積）甲苯/乙醇）純化，得到728毫克化合物 2 8 〇 TLC:Rf=0.32，矽膠，6/1 (體積/體積）甲苯/乙醇。製備26 1: 2_ (二曱基早石夕燒•基）乙基（2,3,4,6—四—0-乙酷基—α —D—葡萄17展喃糖基）-(1 — 4)— ( 2，3,6-二-0-乙酿基-α -D—葡萄0展喃糖基）-(1 — 4)-(2,3,6-三-0-乙醯基葡萄哌喃糖基）-(1 -> 4)- ( 6-去氧-2,3-二-0-甲基-6-酞醯亞胺基-a -D-葡 __ -42- 本紙張尺度適用中國围家揉準(CNS) Α4規格(21〇x 297公釐）

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線 I308l53

1308153 A7 ___ B7 五、發明説明（) (2,3,6-三-0-乙醯基-α-D-葡萄派喃糖基）_(! — 4)-( 2,3,6-三-0-乙醯基-D-葡萄旅喃糖基）一(1 — 4)- ( 6-去氧-2,3- 二- 0-甲基-6- S太酿亞胺基-α 葡萄底喃糖基）_(1 — 4)-(2,3,6-三-0-曱基-/5 -D-葡萄旅喃糖基）— 4)- [ ( 2,3,6- 三- 0—曱基-a -D-葡萄水喃糖基）一(1 — 4)- ( 2,3,6-三_0-甲基-/? -D-葡萄旅喃糖基）-(1 — 4) ] 3 -6-0-乙酿基-2,3-二一〇-甲基-D-葡萄哌喃糖甞（30) 將化合物29 ( 579毫克，0.192毫莫耳）之2/1 (體積/體積）三氟乙酸/二氯甲烷混合物（11.5毫升）溶液境拌1小時。反應混合物以2/1 (體積/體積）甲苯/乙酸正丙酯混合為（69毫升）稀釋’濃縮及與曱本共备發a剩餘物在碎膠管柱中層析（5/1 (體積/體積）甲苯/乙醇）純化，得到523毫克化合物30。 TLC:Rf=0.31，矽膠，5/1 (體積/體積）甲苯/乙醇。製備28 (2,3,4,6-四-0-乙酿基-a -D-葡萄喊喘糖基）_(1 — 4)~ (2，3，6 -三-0-乙酿基-λ -D-葡萄咬喃糖基）一(1 -> ΐ 2 ， 3 ， 6 - 三 _0_ 乙酿基 - /5 葡萄旅喃糖基） _(ι — 4)- ( 6-去氧-2,3-二-Ο -甲基-6- g太酿亞胺基一 a -D-葡萄°底喃糖基）-(1 — 4)- ( 2,3,6-三-0-曱基-/3 -D-葡萄 9瓜喃糖基）-(1~^. 4)- [ ( 2,3,6-三-0-甲基-σ -D-葡萄喊喃糖基）-(1 — 4)~ (,6—三—0—甲基—/5 —D—葡萄底喊糖基）—(1 _> 4) ] 3 _6_〇—乙 SS基-2,3-二-0-甲基-D-三氣乙Si；亞胺葡萄υ底喃糖（3 1) 將三氣乙腈（65.5微升，0.85毫莫耳）和竣酸絶（88.4毫 -44 - 本紙張尺度通用t1國國家揉準(CNS) A4規格(210X297公釐) "" '

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y 1308153 A 7 B7 五、發明説明（42 ) 克，0.27毫莫耳）加至化合物30之二氣甲烷（3毫升）溶液中。攪拌2小時後，過濾及濃縮混合物。剩餘物在矽膠管柱中層析純化（6/1 (體積/體積）甲苯/乙醇+0.1 %三乙胺），得到477毫克化合物3 1。 TLC:Rf=0.35，矽膠，6/1 (體積/體積）甲苯/乙醇。 -45 - 本紙張尺度適用中國國家橾準(CNS) A4規格（210 X 297公釐）

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線 1308153 A7 B7 五、發明説明（43

3λ

ο .0 όΜ'-5

33

"^37— + .49135 ~ 吩洚 46 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐) 1308153 A 7 B7 五、發明説明（44 製備29 甲基（2,3，4,6-四—〇-乙酷基—α —D—葡萄β底喃糖基）—（1 .—* 4)— (2,3,6-三-0—乙酿基- α- D-葡萄派17南糖基）-(1 -> 4)-(2,3,6-三-0-乙磁基-/5 -D—葡萄底11南糖基）-(1 —> 4)— ( 6-去氧-2,3-二-0-甲基-6-酞醯亞胺基-a -D-葡萄哌喃糖基）-(1 —4)— ( 2,3,6—三—〇-甲基-/J -D—葡萄 I»底〇南糖基）_(ι — 4)— [(2,3,6-三-0-甲基-a -D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-0-(2,3,6-三-0-曱基-冷-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)]3-(6-〇-乙酿基-2,3-二-0-甲基-a -D-葡萄旅喘糖基）-(1 -> 4)—(字基2,3-二-0-曱基-/3 -D-葡萄旅喊糖基糖趁酸鹽）-(1-> 4)-(3，6_二一 0_乙睡基-2-0-字基-a -D-葡萄喊喃糖基）-(1 — 4)-(芊基2,3-二-0-甲基-α -L-艾杜》底喃糖基糖搭酸鹽-(1 將醯亞胺3 1 ( 370毫克，0.121毫莫耳）和化合物32 (336 毫克，0.242 毫莫耳）（根據 p. Westerduin 等人，BioOrg. Med. Chem.，1994, 2, 1267 取得）溶在 1/2 (體積 / 體積）二氣甲烷/乙醚混合物（5.5毫升）。添加4A分子篩粉末後，將混合物冷卻至-20 X： ’並添加〇. 1莫耳濃度三氣甲續酸三甲基單矽烷基酯之二氣甲烷（181.5微升）溶液。25分鐘後’以添加固禮碳酸氫鈉中和;’昆合物3在過遽及農縮後，- ( 剩餘物在西砝迪克斯® LH20膠中層析純化，接著在發膠管柱中層析（6/5 (體積/體積）甲笨/丙酮），得到3〇2毫克化合物3 3。 [a]D=+86° (c=l ’ 二氣甲烷）。 -47- 本紙狀度朝巾8 g家料(CNS) A4規格(2ΐ〇χ 297公爱)

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線 1308153 A7 B7____ 五、發明説明（45 ) 製備30 甲基（2,3,4,6-四-〇-乙醯基-α-D-葡萄哌喃糖基）一（1 — 4)_ (2,3,6-三-0-乙 S| 基-a -D-葡萄來 a南糖基）一G — 4)一（ 2，J，6_ 三一〇-乙醯基-冷-D-葡萄哌喃糖基）一(1 一 4)—(6一去氧-2’3_ 二一〇一甲基-6-酞醯亞胺基-a -D-葡萄哌喃糖基）-。—4)-(2,3,6-三-0-甲基-々-D-葡萄成喃糖基）_(1 — 4)_ [ (2,3,6一三-0-曱基-a -D-葡萄旅喃糖基）-(1 — 4)_〇一（ 2,3，6-二-〇-甲基-/? -D-葡萄σ底喊糖基）-(1 —· 4) ] 3 - ( 6-0-乙酿基-2，j-二-0-甲基-α-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-(2,3-二-0-甲基一葡萄喊喃糖基糖醛酸）_(1 — 4)一（3,6—二一0-乙醯基一 a -D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)- ( 2，3 -二-0—甲基_ a -L-艾杜哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)- a -D-葡萄旅喃糖甞（34) 在氫壓力（4巴）下，於含10%披鈀木炭（1〇4毫克）t處理化合物33 ( 104毫克，0.024毫莫耳）之乙酸（5毫升）溶液 4小時。過濾後，將溶液冷凍乾燥得到化合物34 ( 87毫克），其可用在下列步驟不須純化。製備31 曱基（a -D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)- ( a -D-葡萄哌喃糖基）-(1 —^ 4)- ( /5 -D-葡萄喊 1南糖基）-(1 — 4)- ( 6-去氧-2,3- 二- 0-曱基-6-酞醯亞胺基-a -D-葡萄旅喃糖基）-(1 — 4)-. .f (2,3,6—三〜0-甲基-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4卜[(2,3,6 - 三- 0—甲基-a -D-葡萄喊17南糖基）-(1 — 4)—0-（ 2,3，6-二-〇— 甲基—D-葡萄峰喃糖基）一(1 — 4) ] 3 — ( 2,3—二-〇-甲基—α — D—葡萄11 瓜17南糖基）—（1 — 4)— ( 2,3—二—〇—曱基—/5 —D—葡萄成 -48 - 各紙張尺度適用中國國家搮準(CNS) Α4規格（210 X 297公釐） 1308153 A7 B7 五、發明説明（奶) 喃糖基糖遂酸）-(1 一 4)- ( a -D-葡萄11底喃糖基）-(1 —♦ 4)-(2,3-二-0—甲基-〇 -L-艾杜7底喃糖基糖搭酸）-（1 — 4)— α -D— 葡萄哌喃糖苷（35) 將1莫耳濃度甲醇鈉之甲醇（140微升）溶液在含3Α分子篩粉末（875毫克）下，加至化合物34( 80毫克，0.021毫莫耳）之無水曱醇（6.9毫升）溶液。在周圍溫度下20小時後，過:；慮反應混合物，並用乙酸中和遽液。將該溶液濃縮一半並在西砝迪克斯® G-25 Fine管柱（3 χ92公分）中沈積。用水溶析及冷凍乾燥後，得到化合物35 ( 66毫克）。 _~49~ 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1308153 A7 B7 五、發明説明（47 37

35 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐) 1308153 A7 B7 __丁· 丨丨_.____^__麵丨_ 五、發明説明（48 ) 製備32 甲基（2,3,4,6-四-0-磺酸根基-a -D-葡萄哌喃糖基）-(1 一 4)一（2,3,6-三-0-磺酸根基-“-〇-葡萄哌喃糖基）一（1 — 4)-(2,3,6-三-0_磺酸根基-/?-〇-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-(6-去氧-2,3-二-0-甲基-6 -酞醯亞胺基-a - D -葡萄哌喃糖基）-(1 -> 4)- ( 2,3,6-三-0-甲基-D-葡萄喊喃糖基）-(1 — 4)- [ ( 2,3,6-三-0-甲基-a -D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-0-(2，3，6—三-0—甲基—々—D—葡萄 9底喃糖基）~(1 —^ 4)]3-（ 6—0— 磺酸根基-2,3-二-0-甲基-α-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-(2,3-二-0-甲基-々-D-葡萄喊喃糖基糖兹酸）-(1 -> 4) (2,3,6-三-0-磺酸根基-α-D-葡萄哌喃糖基）-(1 -> 4)-(2,3-二-0-甲基-a -L-艾杜哌喃糖基糖趁酸）-(1 4)- 2,3,6-三-0-磺酸根基-α-D-葡萄來喃糖苷，鈉鹽（36) 將多元醇35 ( 66.4毫克，0.021毫莫耳）溶在N，N-二甲基甲醯胺（1.8毫升）。將三氧化硫-三乙胺複合物（320毫克， 1.77毫莫耳）加入，並在55 °C攪拌混合物20小時。溶液在西砝迪克斯® G-25 Fine管柱（3x92公分）中沉積並用〇.2莫耳濃度氣化鈉溶析。濃縮含產物之部份’並在相同管柱以水溶析進行去鹽。冷凍乾燥後，得到83毫克化合物36 ° 質量：ESI方法，陰性方式：化學質量=4968.92 ;實驗質.. 量= 4966.52 ± 0.16 a.m.u. 製備33 曱基（2,3,4,6-四-〇-磺酸根基-α-D-葡萄來喃糖基）-(1 4)-(2,3,6-三-〇-磺酸根基-〇i-D-葡萄涞喃糖基M1 — 4)- 本紙張尺度通用中画國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） -51 - _____ 1308153 A7 B7 五、發明説明（49 ) (2,3,6-三-0-磺酸根基葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-(6-胺基—6—去氧-2,3—二-0—甲基—π -D—葡萄3瓜σ南糖基）-(1 —»· 4)-(2,3,6-三-0-甲基-/? -D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-[(2,3,6-三-0-甲基-a -D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-0-(2,3,6—三—0—曱基—/5 —D—葡萄 σ瓜 σ南糖基）—(1 — 4)]3 — ( 6—0— 績酸根基_2,3-二-0-甲基--D-葡萄11瓜喃糖基）-（1 ~>4)— (2,3-二-0-甲基-/5 -D-葡萄成喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-(2,3,6-三-0-磺酸根基-7-0-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-(2,3-二-〇-甲基-α-L-艾杜哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-2,3,6-三-0-磺酸根基-α-D-葡萄哌喃糖苷，鈉鹽（37) 將化合物36 ( 83毫克，0.017毫莫耳）溶在2/1 (體積/體積）乙醇/水混合物（1.67毫升）中。加入聯胺水合物（81.2 微升，1.67毫莫耳），並將混合物回流達20小時。溶液在西砝迪克斯® G-25 Fine管柱（3x92公分）中沉積並用水溶析。濃縮含產物之部份，將剩餘物溶在2/1 (體積/體積）乙醇/水（5.00毫升），並用聯胺水合物（81.2微升）依先前條件再處理一次，得到71毫克化合物3 7。。質量：ESI方法，陰性方式：化學質量=4838.32 ;實驗質量= 4814.6 ± 0.70 a.m.u. ___- 52 - 本紙張尺度逋用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1308153 A 7 B7 五、發明説明（50 ) 流程圖9 -伍醣3 9之合成

OAc NH

製備34 曱基（6-0-乙醢基-2-疊氮基-2-去氧-3,4-二-Ο-曱基-α -D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-(芊基2,3-二-0-甲基葡萄哌喃糖基糖醛酸鹽）-(1 — 4)- ( 3,6-二-0-乙醯基-2-0-苄基—α -D—勤萄派喃糖基）—(1 — 4)—(卞基2,3—二-0—甲基—α — 艾杜 17瓜喃糖._基糖趁酸）-(1 —· 4)-2,3，6-二-0 —^基-a -D— 葡萄哌喃糖荅（39) 將化合物6-0-乙醯基-2-疊氮基-2-去氧-3,4-二-0-曱基葡萄哌喃糖三氣乙醯亞胺38 ( 265毫克，0.631 毫莫耳）（根據 J. Basten 等人，Bioorg. Med. Chem.， Lett.(1992)，2(9)，901 而得）和化合物 32 ( 584 毫克，0.420 毫莫耳）（根據 P. Westerduin 等人；Bioorg. Med. Chem.，1994，2, 1267而得）溶在1/2 (體積/體積）二氣曱烷/乙醚混合物 (28.5毫升）。在添加4A分子篩粉末後，將混合物冷卻至 -20 °C，並加入0.1莫耳濃度三氟甲磺酸三甲基單矽烷酯 -53 - 本紙張尺度通用中國國家揉準(CNS) A4規格（210 X 297公釐）

装訂

線 1308153 A7 B7 五、發明説明（5l ) I二氣甲纪（94.6微升）溶液。1〇分鐘後，再次添加醯亞胺 (W.8毫克）’接著再添加〇丨莫耳濃度三氟甲磺酸三曱基單矽烷酯之二氣甲烷（19 2微升）溶液。1〇分鐘後，以加入固體碳酸氫鈉來中和混合物。過濾及濃縮後，剩餘物在矽膠管柱中層析（3/1 (體積/體積）甲苯/乙酸乙酯）純化，得到499毫克化合物39。 U]D=+66。（c=l.〇7，二氣甲坑）。 -54- 本紙浪尺度遴用f國國家操準(CNS) A4規格(210X 297公:t) 1308153 A7 B7

本紙浪尺度適用甲國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1308153

製備35 曱基（6-Ο—乙酿基—2-胺基-2-去氧—3 - 一一 ~甲基—a -D— 匍匄哌喃糖基）-(1 — 4)- ( 2,3〜二-〇—甲1 盆址暴-万~D-葡萄哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-(3,6-二_〇_乙醯其逆、暴—α〜D-葡萄哌喃糖基）-(l —4)-(2,3-二-0-曱基一乙一艾杜说土 ^ 人杜喊喃糖基糖醛酸）- (l->4)-a_D-葡萄哌喃糖苷（40) 將化合物39 ( 552.6毫克，0.335蒡莖甘、，畏耳）之5/1 (體積/ 眩積）第三丁醇/乙酸乙酯混合物（16臺笔升）落液在氫壓力 (10巴）下，於含10%披鈀木炭（11〇克 r η _ 〜莫耳濃度鹽酸 (U耄升）下處理4小時30分鐘。過、.虎作, 、屢後，農縮溶液，件到化合物40 ’其不須純化即可用在下列步碟。製備36 甲基（2-胺基_2_去氧一3’4_二_〇_甲基1 一葡萄哌喘糖基）-(144)_(2,3_二_〇_甲基+〇_葡萄喊喃糖基糖搭酸卜 (1 — 4)-( α-D-葡萄哌喃糖基）-(ι _> 4)_(2 3一 _ 〇甲基 -L-艾杜哌喃糖基糖醛酸）一(1 — 4)_ Λ _D_葡萄哌喃糖苷0 〇將化合物40 (324毫克，〇」00毫莫耳）溶在甲醇（88毫升）中。加入5莫耳濃度氫氧化鈉溶液（22毫升），並在周圍溫度下攪拌反應混合物16小時。以杜溫克斯® (D〇wex® ) 50 H+樹脂中和及過濾。溶液通過西砝迪克斯® G_)5 管柱並用水溶析。濃縮含產物之部份，得到254.2毫克化人: 物41。在此階段，以NMR確定保護基（苄基和乙醯基）已去除。 TLC:Rf=0.26，碎膠’ 5/5/1/3 (體積/體積/體積/體積）乙酸 -56- 本紙蒗尺度適用中國國家搮準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) Ϊ308153 A7 ____________B7 五、發明説明（54 ) 乙酉旨/ 〇比淀/乙酸/水。製備37 甲基（2-(苄氡羰基）胺基-2-去氧-3,4-二-〇-甲基-α-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-(2,3-二-〇-曱基-0-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-( α-D-葡萄〇底喃糖基）_(ι — 4)-( 2,3-二-〇-甲基-a -L-艾杜哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)- a -D-葡萄嘁喃糖苷（42) 將化合物41 (241.1毫克，0.253毫莫耳）溶在水（12.4毫升）中並加入竣酸氫納（63.7毫克），接著以滴加方式加入氣曱酸芊酯（41微升）。攪拌12小時後，反應混合物通過西砝边克斯® G-25 Fine管柱並用水溶析。將含產物之部份濃縮。在矽膠管柱中層析（21/17/3.6/10體積/體積/體積/醴積乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水）純化，得到221毫克化合物 42 ° TLC :厌产0.63 ’矽膠，5/5/1/3 (體積/體積/體積/體積）乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水製備38 甲基（2-(芊氧羰基）胺基-2-去氧-3,4-二-0-甲基-6-0-磺酸根基-a-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-( 2,3-二-0-甲基一冷-1)-葡萄哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-(2,3,6-三-〇-磺酸根基一; a 葡萄乘南糖基）—(1 — 4)— ( 2,3—二—0—甲基一 α —L—又杜哌喃糖基糖醛酸）-（1 -> 4)-2,3,6-三-〇-磺酸根基-α-D-葡萄17展3南糖芬，鈉鹽（43) 將多元醇42 ( 19.6毫克，0.018毫莫耳）溶在N，N-二甲基 _-57-______ 本紙法尺度適用中國國家櫺準(CNS) A4規格(210 X 297公釐）

装訂

線 1308153 A7 _________B7________ 五、發明説明（55 )· 甲酶胺（1.62毫升）中。將三氧化碟_三乙胺複合物（114毫克）加入並在55 eC避光攪拌20小時。將該溶液在西站迪克斯® G-25 Fine管柱中沈積，並用〇.2莫碎·濃度氣化納溶析。濃縮含產物之部份，並在相同管柱中用水溶析去鹽。在冷凍乾燥後，得到28.5毫克化合物43 s [e]D=+48° (c=2.75，二氯甲烷卜製備39 甲基（2_胺基-2-去氧_3,4_二甲基-6-〇-磺酸根基_ α 一 D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)一（ 2,3-二-0-甲基一D_葡萄旅喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-(2,3,6-三-0-磺酸根基"^*°_葡萄口底喃糖基）-(1 — 4)- ( 2，3 -二-〇-甲基-λ -L-艾杜口底喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-2,3,6-三-0-磺酸根基-α-D-葡萄旅喊糖荅，鈉鹽（44) 在氫壓力（5巴）下，於含10%披鈀木炭（8.25毫克）中’ 將化合物43 (27.5毫克，0.015毫莫耳）之第三丁醇（333微升）/水（500微升）混合物溶液處理16小時》過濾後’濃縮溶液，剩餘物在西砝迪克斯® G-25 Hue ( 3x92公分）管柱中沈積。用水溶析並冷凍乾燥後，得到23.7毫克化合物 44 <= [戊]〇=+58。（c=l ，水）。 -58- 本紙蒗尺度適用中画國家揉準(CNS) A4规格(210 X 297公釐) 1308153 A7 B7 五、發明説明（56 流程圖11-肆醣48之合成

MeO BnO BnOOC LevO MeO

MeO OAc OBn

0 \ OMe 〇Me BnO

AcO, HOOC LevO MeO*

MeO 〇 HOOC-^ OMe HO OAc

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LsvO MeO

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MeO \ ° MeOOC一-"" OMe AcO OAc OAc

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v、 Ο X/ \ OMe 0 MeOOC^ OMe AcQ-^^ AcO 製備40 f 曱基（4-0-乙醯丙醯基-2,3-二-0-甲基-/? -D-葡萄哌喃糖基糖路· fe)—(1 ~^ 4)— (3，6-二—0—乙縫基—〇 —D—薄萄s瓜喃糖基）-(1 —· 4)-(2,3-二-0-甲基-a -L-艾杜3瓜喃糖基糖趁酸）-(1 一 4)- a -D-葡萄哌喃糖：y： (46) -59- 本紙法尺度通用中國國家標準(CNS) A4规格(210X297公釐) 1308153

AT B7 在氫壓力（4巴）下，於含10%彼免木炭（μ克）中，將化合物45 ( 4.50克’ 3.02毫莫耳）（根據p Westerdum等人， B1〇〇rg. Med. Chem.，1994, 2, 1267 而得）之乙酸乙醋 / 第三丁醇（72毫升，1/1，體積/體積）混合物溶液處理6小時。在過遽及漢縮後’所得之化合物46可直接用於接下步驟中而不須純化3 TLC : Rf=0.54，26/22/4.6/17 (體積/體積/體積/體積）乙睃乙酯/吡啶/乙酸/水製備41 曱基（曱基4-0-乙醯丙醯基-2,3-二-〇·_甲基-点_D_葡萄养喃糖基糖趁酸酯）-(1 — 4)-(2,3,6-三-〇_乙醯基_a_D_葡萄旅味糖基）-(1 — 4)-(曱基2,3-二-〇-曱基一 Λ _L一艾杜哌喃糖基糖兹·酸酯）-(1 — 4)-2,3,6-三-〇-乙酶基_a_D_葡萄參喃糖苷（47) 在〇 C下’先將竣酸氫钾（2.71克）之後再將琪甲统（3.4 毫升）加至化合物46 ( 2.57克，2.71毫莫耳）之無水N,N_二甲基甲醯胺（35毫升）溶液中。在周圍溫度下攪拌小時後’將反應混合物冷卻至0 °C。接續先加入二甲胺p比在 (132毫克），之後再加入醋酸酐（15毫升）^攪拌遇合物達 16小時。在中和過量醋酸酐後，用乙酸乙酯稀釋混合物。；將有機層接續用10%硫酸氫钾溶液和水清洗，然後再用I包和碳酸氫鈉溶液和水清洗，在硫酸納上乾燥，過遽然後蒸發至乾燥。剩餘物在矽膠管柱中層析（9/5環己烷"ιη乙乙酯/乙醇））純化，得到2.51克化合物47。 -60 本紙張尺度適用中國國家揉準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1308153 A7 B7 五、發明説明（58 ) TLC : Rf=0.41 ，2/1(體積/體積）曱笨/丙酮製備42 甲基（曱基2,3-二-0-甲基-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸酯）-(1 ~^ 4)— (2,3,6—三—0—乙隨基—α —D—葡萄峰南糖基）一(1 — 4)-(曱基2,3-二-0-曱基-a -L-艾杜哌喃糖基糖醛酸酯）-(1 4)—2,3,6—二—0—乙酿基—α —D—葡萄1底喃糖芬（48) 將化合物47 (2.5克，2.56毫莫耳）溶在1/1甲苯/乙醇混合物（5 00毫升）中。加入乙酸聯胺醋（1.01克）。在周圍溫度下攪拌2小時後，濃縮反應混合物至乾燥。剩餘物溶在二氯甲炫中。有機層接續用2%碳酸氫納溶液和水清洗，在硫酸鈉上乾燥，過濾然後蒸發至乾燥。在矽膠管柱中層析（1Μ體積/體積曱苯/乙酸乙酯）後，得到2.01克化合物 48。 TLC : Rf=0.37，2/1(體積/體積）甲苯/丙酮。流程圖12-伍醣49之合成

製備43 曱基（6—0—乙酿基-2—叠氣基—2—去乳—3,4—二—0—甲基—α — -61 - 本紙伕尺度通用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐) 1308153 A7 ___Β7 五、發明説明（59 ) D-葡萄成喃糖基）-(1 — 4)-(曱基2,3-二-〇、甲基—点_D_葡萄哌喃糖基糖醛酸酯）-(1—4)-(2,3,6-三〜〇〜乙酿基_^_1：)_ 葡萄7瓜喃糖基）-(1 — 4)-(甲基2,3-二-0·_曱基—J _L_艾杜成喃糖基糖遂酸酉旨）-（1 — 4)-2,3,6-三-〇~乙酶某一。—d_葡萄哌喃糖芸（49) 將臨亞胺38 (1.18克，2.81毫莫耳）（根據；Basten等人，Bioorg. Med. Chem. Lett_(1992)，2(9)，901 而得）和化合物 48 ( 1.83克，1.75毫莫耳）溶在1/2 (體積/體積）二氣甲坑/ 乙醚混合物（126毫升）。在添加4A分子篩粉末後，將;.昆合物冷卻至-20 C ’並加入1莫耳濃度三氟甲續酸第三丁基二甲基單矽烷酯之二氣曱烷（421微升）溶液中。3〇分鐘後，進一步添加酿亞胺（266毫克）及1莫耳濃度三氟甲續酸第三丁基二甲基單矽烷酯之二氣甲烷（168微升）溶液。在10分鐘後，以加入固體竣酸氫鈉中和昆合物並過濾。用二氯甲炫•增加溶液，接續以2%後酸氫納溶液和水清洗，在硫酸鈉上乾燥並在眞空下濃縮。剩餘物在矽膠管柱中層析（4/3然後1/1體積/體積二氣甲烷/乙酸乙酯）純化，得到1.814克化合物49。 TLC : Rf=〇.57，3/1體積/髏積甲苯/乙酸乙酯。 [a]D=+93。（c=1.15，二氯甲烷）。 -62- 本紙法尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐) 1308153 A7 B7 五、發明説明..（6〇 ) 流程圖13-伍醣44之合成（製程II)

OSOj' 44 製備44 甲基（2-疊氮基-2-去氧-3,4-二-0-甲基-α-D-葡萄哌喃糖基）-（1 ~^ 4)— ( 2,3-二-0—甲基-/5 -D-葡萄0底17南糖基糖赵故）-(1 — 4)— ( α —D—朝萄’底 σ南糖基）—(1 — 4)— ( 2,3—二—0—曱基—α -L-艾杜哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-α-D-葡萄哌喃糖苷（50) 在-5 °C，將30%過氧化氫水溶液（42毫升）加至化合物 49 ( 845.3毫克）之四氫呋喃（104毫升）溶液中，在攪拌5分鐘後，以滴加方式加入0.7莫耳濃度氫氧化鋰水溶液（19.2 毫升）。 -63 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1308153 A7 _________B7 五、發明説明（μ ) 在_5 c下攪拌混合物達1小時’然後在〇 »c攪拌4小時’最後在周圍溫度下攪拌16小時。以1莫耳濃度鹽酸容液中和。浴液在西站速克斯® 0-25 Hne管柱（5x1000公分）中沈積並用水溶析。結合含所希望化合物之部份，將之濃縮及再沉積於杜溫（Dowex) AG 50 WX4 H+樹脂管柱中（50毫升）。在0 °C收集化合物並濃縮產生618毫克化合物5〇。 TLC : R产0.56，26/22/4.6/17體積/體積/體積/體積乙酸：乙酯/»比咬/乙酸/水3 製備45 甲基（2-疊氮基-2-去氧-3，4-二-〇-曱基—6-0-靖酸根基-α -D-葡萄哌喃糖基）-(ι — 4)_(2,3_二_〇一甲基一D-葡萄哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-（2,3,6-三-〇-磺酸根基-α-D-葡萄喊喃糖基）-(1 — 4)-(2,3-二-〇-甲基-α-L-艾杜哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-2,3,6-三-〇一磺酸根基_ α _D_葡萄哌喃糖苷，鈉鹽（51) 使用前’將化合物50與N，N-二甲基曱醯胺（3x29毫升）共蒸餾。將三氧化硫-三乙胺複合物（3.84克）加至化合物 50 ( 612毫克，0.624毫莫耳）之N，N_二甲基甲醯胺毫升）溶液中。在55 X：避光攪拌混合物達16小時。該混合物冷. 卻至0 °C，將之滴加至锬酸氫鈉（5.33克）之水（200毫升）溶液中3在周圍溫度下搜拌混合物達16小時並濃缩至乾燥。將剩餘物溶在水中，此溶液在西砝迪克斯® G-25 Fine管 _____ -64· 木紙張又度通用中國國家標单(CNS) Μ规格(21〇 X 297公爱）

裝訂

1308153 A 7 ____ B7____ 五、發明説明（62 ) 柱中沈積並用〇.2莫耳濃度氣化鈉溶析3濃縮含產物之部份，並在相同管柱用水溶析以進行去键3在冷凍乾燥後’ 得到1.06克化合物51。 TLC : Rf=〇.5 ，3/5/1/3體積/禮積/體積/體積乙酸乙酯比啶/乙酸/水。製備46 甲基（2-胺基-2-去氧-3,4-二-〇-甲基-6-0-磺酸根基—α — D-葡萄哌喃糖基— 4)一（2,3-二-0-甲基-/5 -D-葡萄哌喃糖基糖趁酸）-(1 -> 4)-(2,3,6-三-0-續酸根基-α-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)- ( 2,3-二-0-甲基-立-L-艾杜哌喃糖基糖搭酸）-(1 — 4)-2,3,6-三-0-續酸根基- α -D-葡萄峰喃糖茹，鈉鹽（44) 此氫解進行二次，每次用534.4毫克化合物51 = 在氫壓力（5巴）下，於含10%披鈀木炭（160毫克）中，將化合物51( 534.4毫克）之第三丁醇（6.7毫升，12.6毫升/ 克）/水（10毫升，19毫升/克）混合物溶液在4CTC下處理4 小時3過濾（密理博® (MilUpore®) LSWP 5微米）後，將溶液濃縮至乾燥，得到530毫克化合物44。 TLC ： Rf=0.49 ，3/5/1/3體積/體積/體積/體積乙酸乙酯/ 叶匕咬/乙酸/水3 本紙張尺度遴用中國國家標準(CMS) A4規格(210 X 297公釐）

装訂

線 1308153 A 7 B7 五、發明説明（63

66 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1308153 A7 B7 五、發明説明（64 丨67 -

67 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1308153 A7 B7 五、發明説明（65 Ο — 6°°-

k 8 6 衣汍伕尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公*) 1308153 A7 B7 五、發明説明（66 ) 實例1 甲基（2,3,4,6-四-0-磺酸根基-a -D-葡萄哌喃糖基）-（1 — 4)— ( 2,3，6—三-0—續酸根基-a -D—葡萄峰喃糖基）-(1 — 4)-(2,3，6—三—0—績酸根基——D—葡萄17底喃糖基）-（1 — 4)— ( 6— 生物素胺基-6-去乳-2,3-二-〇-甲基- -D-葡萄17瓜喃糖基）-(1 -> 4)一（2,3,6-三-0-曱基-/5-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)— [ ( 2，3 , 6 -二—0—甲基—α —D—氣萄 17底喃糖·基）一(1 —^ 4)一0— (2,3,6-三-0-甲基一/3-0-葡萄旅喃糖基）一(1 — 4)]3-（6-0-磺酸根基-2,3-二-0-甲基-α-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-(2,3-二-0-甲基-/? —D—葡萄旅17南糖基糖遂酸）—(1 — 4)一 (2,〇，6-二—〇—確故根基一以—D—葡萄17展喃糖基）—(1 — 4)一（ 2,3-二-0-甲基-泛-L-艾杜峰喃搪基糖搭酸）-(1 —> 4)-2,3,6-三-0-績酸根基-or -D-葡萄瓜7南糖穿，鋼鹽將生物素磺酸基琥珀醯亞胺（16.5毫克）加至化合物37 (18毫克，3.72微莫耳）之0_5%碳酸氫鈉（1.5毫升）溶液中。在周圍溫度下攪拌16小時，反應混合物在西砝边克斯® G-25 Fine管柱中沈積並用氣化鈉溶析。濃縮含產物之部份，並在相同管柱用水溶析以進行去鹽。在冷凍乾燥後，得到15.9毫克實例1化合物。 [α]υ=+59。（c=0.78，水）。質量：ESI方法，陰性方式：化學質量=5065.12 ;實驗質量=5064.18 ±1.04&.111.11. -69- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1308153 A7 B7 五、發明説明（67 ) 實例2 甲基（2,3,4,6-四-0-磺酸根基-a -D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)- ( 2,3,6-三-0-績酸根基-a -D-葡萄5展11南糖基）-(1 — 4)-(2,3,6-三-0-確酸根基-/5 -D-葡萄成喃糖基）-(1 — 4)- ( 6-[6-(生物素胺基）己酿胺基]-6-去氧-2,3-二-0-曱基-〇·-〇-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-(2,3,6-三-0-甲基-/5-0-葡萄哌 σ南糖基）一(1 — 4)— [ ( 2,3,6—三—0—甲基—λ —D—葡萄σ底喃糖基）-(1 — 4)一0— ( 2,3，6—三—0—甲基—/3 —D—葡萄 α底喃糖基）—(1 —4) ] 3 — ( 6—0—靖酸根基—2,3—二—0—曱基—a —D—葡萄旅喘糖基）-(1 -> 4)-(2,3-二-0-甲基葡萄哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-(2,3,6-三-0-磺酸根基-α-D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)- ( 2,3-二-0—曱基-a -L-艾杜成喊糖基糖趁酸）-(1 —> 4)— 2，3,6—三—0—績酸根基—a —D—葡萄派喘糖菩，納鹽將6-(生物素胺基）己酸（16.5毫克）加至化合物37 (18毫克，3.72微莫耳）在0.5°/。碳酸氫鈉（1.5毫升）之溶液。在周圍溫度下攪拌16小時，反應混合物在西砝迪克斯® G-25 Fine管柱中沈積並用氣化鈉溶析。濃縮含產物之部份，並在相同管柱用水溶析以進行去鹽。在冷凍乾燥後，得到17.9克實例2。 [<2]d=+60。（c=1.0，水）。質量：ESI方法，陰性方式：化學式質量=5178.28 ;實驗性質量=5176.3 土 0.77 a.m.u. -70- 表紙浪尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1308153 A7 B7 五、發明説明（68 實例3 甲基（2,3,4,6-四-0-磺酸根基-a -D-葡萄哌喃糖基）-(丨〜 4)— ( 2,3,6—三—0—績酸根基-α —D—葡萄11底喃糖基）-(1 —> 4)— (2,3,6-三-0-磺酸根基-/? -D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)- [6-(6-生物素胺基己酿胺基）己酿胺基]-6-去氧-2,3-二-〇一甲基~-<^-0—葡萄3瓜喃糖基）_(1 — 4)—(2,3,6-二-0—甲基-々_]^-葡萄17底喊糖基）-(1 — 4)- [( 2,3,6-三-0-甲基--D-葡萄乘喃糖基）一(1 — 4)-0- ( 2,3,6-三-0-甲基-/5 -D-葡萄旅嚼糖基）—(1 — 4)]3_( 6—0—碌酸根基—2,3—二-0—曱基-〇 -D—葡萄 B辰喘糖基）-(1 — 4)- ( 2,3-二-0-甲基-/? -D-葡萄喊喃糖基糖趁酸）-(1 一 4)- ( 2,3,6-三-0-續酸根基-a -D-葡萄u底喃糖基）-(1 — 4)- ( 2,3-二-0-甲基-or -L-艾杜1^瓜鳴糖基糖越·酸）_ (1 —4)-2,3,6-三-0-磺酸根基-α-D-葡萄哌喃糖苷，鈉鹽將續酸基號始亞酿胺基-6- (6-生物素胺基-己酿胺基）己酸（23_6毫克）加至化合物37 ( 17毫克，3.51微莫耳）之 0.5%碳酸氫鈉（1.4毫升）溶液中。在周圍溫度下擾掉16小時後’反應混合物在西姑速兄· 斯® G-25 Fine管柱中沈積並用氣化鈉溶析。滚縮含產物之部份，並在相同管柱用水溶析以進行去鹽。在冷凍乾燥後’得到17.4毫克實例3化合物〇]d=+64。（c=1-0，水）3 質量：ESI方法，陰性方式：化學質量=5291.44 :實驗質量= 5292.1 ± 0.83 a.m.u. -71 - 本泜張尺度通用中國画家標準(CNS) A4规格(210 X 297公釐） 1308153 A7 一.._____B7_____ 五、發明説明（69 ) 實例4 甲基（2-生物素胺基一2-去氧-3,4-二-0-曱基-6-0-磺酸根基— D_葡萄略喃糖基）_(1 —句”㈠一一二一^甲基一点^一葡萄哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-( 2,3,6-三-〇-磺酸根基-a-D-葡萄派喃糖基）-(1 — 4)- ( 2，3 -二_〇-甲基-π -L-艾杜哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)_2,3,6-三-〇-磺酸根基-α-D-葡萄哌喃糖苷，鈉鹽將生物素N-羥琥珀醯亞胺（42毫克）之N，N-二曱基甲醯胺（ 750微升）溶液加至化合物44 (21.2毫克，0.012毫莫耳）之0.5%碳酸氫鈉（750微升）溶液中。在周圍溫度下境拌16 小時，反應ϊ昆合物在西站迪克斯* G-2 5 Fine管柱中沈積。在用水溶析及冷凍乾燥後，得到22,3毫克實例4化合物3 [<ar]D=+38o(c=0.15，水）。質量：ESI方法’陰性方式：化學質量=1938.48 ;實驗質量=1937.48 ± 0.11 a.m.u. 實例5 甲基（2-[N-(6-生物素胺基己醯基）]-2,去氧_3,4~二-0-甲基-6—0—續故根基_ α —D—葡萄s底喃糖基）—(1 — 4)—( 2,3—二一 0-甲基葡萄哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-(2,3,6-三-〇- ' 靖酸根基葡萄派喃糖基）-(1 — 4)-(2,3-二-〇-甲基-α -L-艾杜旅喃糖基糖链酸）-(1 — 4)-2,3,6-三-〇—續酸根基-α -D-葡萄哌喃糖苷，鈉鹽此反應進行二次，每次使用494.5毫克化合物44。 -72- 本紙浪尺度適用中國ϋ家標利CNS) Α4规格(21〇χ 297公董]

装訂

線 1308153 A7 B7 — -—---—--------------- . 五、發明説明（7〇 ) 將化合物44 (4·94.5毫克，0.289宅莫耳）溶在0.5%後酸氫鈉水溶液（116毫升）。將6-生物素胺基己酸磺酸基琥珀醯亞胺酯（1.46克， 2.63毫莫耳）之0.5°/。碳酸氫鈉溶液（12毫升）溶液以滴狀加入3在周圍溫度下攪拌16小時後，加入1莫耳濃度氫氧化鈉水溶液並擾掉混合物丨小時。反應混合物在吞姑連克斯® G-25 Fine管柱（5 X 1 000公分）中沈積並用氣化鈉溶析。合併二次反應中含產物之部份。在冷凍乾燥後，得到999.2毫克實例5化合物。 TLC ： Rf=0.42 ，3/5/1/3體積/體積/體積/體積乙酸乙酷/ »比咬/乙酸/水。質量：ESI方法，陰性方式：化學質量=2051.64 ;實驗質量= 2051,6 ± 0.43 a.m.u. 實例6 〜4)-->4)- 曱基（2- [ 6- ( 6-生物素胺基己醯胺基）己醯胺基]-2-去氧_ J，4-二-〇—甲基-6—0-績酸根基-or -D—葡萄I»底喃糖基）一(1 — 4)- ( 2,3-二-0-曱基-/3 -D-葡萄®底喃糖基糖链酸）-(ι 斗卜 (2，3，6-三-0—績酸根基-a -D—葡萄旅喃糖基）-(ι (2，3 -二-〇-甲基-a -L-艾杜旅°南糖基糖趁酸）_(1 2,3,6-三續酸根基-α-D-葡萄略喃糖苷，鈉鹽將化合物44( 30.1毫克’ 17.6微莫耳）溶在〇 5%琰酸氮納水溶液（7毫升）。將6-(6-生物素胺基己醯胺基）己酸續酸基琥珀醯亞胺酯（118毫克，176微莫耳）之0 5%硬酸氯 -73- 本纸張尺度逋用中國國家搮準(CNS) A4规格（210 X 297公釐) '~~' 1308153 A 7 ________B7 五、發明説明（7丨) 鈉落液（1毫升）落液以滴狀加入。在周圍溫度下擾拌1 6小時後，加入1莫耳濃度氫氧化鈉水溶液，並攪掉混合物i 小時。反應混合物在西砝迪克斯® G_25 Fine管柱（2x85公分）中沈積並用氣化鈉溶析。合併含產物之部份，濃縮並在西砝迪克斯® G_25 Fine管柱（2x55公分）中沈積並用水溶析。在冷凍乾燥後’得到26.5毫克實例6之化合物。質量：ESI方法’陰性方式：化學質量=2164.48 :實驗Λ 量= 2164.29 ± 0.38 a.m.u. -74- 本紙張尺度通用中國國家標举(CNS) A4規格（21〇x 297公董）

Claims

1308If_23·號專利中轉a — 中文申請專利範圍替換伞备7矣巧宵f 申請專利範園 1. 一種具有抗血栓活性之合成心。成夕醣或其醫藥可受鹽，其特徵在具有至少一與生物素切I次生物素衍生物之共價鍵結，其中該多醣具式（1)結構：

其中： -波形線表示化學鍵在喊喃糖環平面之下戈上

(R丄 P〇表示包含！！個相同的或不相同的單醣單元之多醣經變旋異構碳鍵結至pe，

上圖表示一單醣單元，其具有一選自己醣、戊醣及相關去氧糖類之哌喃糖結構’該單元經由其變旋異構碳鍵結至另一單醣單元，此單元之羥基可被相同的或不同的R!基取代，R!如下定義， 73636-971215.DOC ABCD 1308153 申請專利範圍 -Pe表示伍SI之結構

〇 R3 (Pe) -h等於是1或2， -η是整數並且可為任何0至25數值， —R〗表不—T—Biot鍵聯、（Ci—C6)烧氧基或-OSO3基， -R2表不-T—Biot鍵聯、（C!-Cs)烧氧基或-OSO3基， -R3表不-T-Biot鍵聯或（C】-C6)统氧基， -R4表不—T—Biot鍵聯、（Ci-C6)烧氧基或—OSO3基，或者R4組成-0-CH2-橋，該-CH2 -基可連至在相同環上帶有羧基之碳原子；已知道至少有一 Ri、R2、R3或R4取代基表示-T-Biot 基， -W表示氧原子或是亞曱基， -T表示一鍵聯，其係選自： NH、 NH, Ο vNH UK CH” 或 kCH NH^ 〇 73636-971215.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐）. 8 8 8 8 ABCD 1308153 六、申請專利範圍其中j和k可相同或不同，為取自1至10之整數； -Biot表示以下基團： •ς

2.根據申請專利範圍第1項之合成多醣或其醫藥可接受鹽，其具有式（I · 1 )結構：

表示特別的多醣Ρο族，經由其變旋異構碳與如（I)所定義之Pe鍵結， 73636-971215.DOC -3- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐）. 8 8 8 8 ABCD 1308153 申請專利範圍 R

0 係如對（I)之定義， -R!基係如對（I)之定義，且對相同單醣，其可相同或不同， -在[]m中單醣重複m次，在[]t中單醣重複t次，及在[]p中單醣重複P次， -m是一自1至5之整數，t是一自0至24之整數及 p是一自0至24之整數，已知l<m+t+p<25。 3. 根據申請專利範圍第2項之合成多醣或其醫藥可接受鹽，其特徵為僅有R!、R2、R3、或R4取代基之一代表-T-Biot鍵聯（其中T和Biot定義如（I))。 4. 根據申請專利範圍第1項之合成多醣或其醫藥可接受鹽，其中多醣係為式（1.2)之十六醣：

其中： -T表示一鍵聯，其係選自 NH、 -4- 73636-971215.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐）. 1308153 申請專利範園 0 CH. 8 8 8 8 ABCD

Λι NH 』CH, · NH CH. ΪΪΓ^ΝΗ O 其中j和k可相同或不同，為取自1至10之任一整數； -Biot表示以下基團：

〇 -Pe表示伍醣結構：

〇 / / so； so,· 其中： —R]表不（C丨—C6)炫·乳基或-OS〇3基， —R_2表不（C丨—Cg)烧乳基或—OS〇3基， -R3表示（Ci—C6)烧氧基’ -R4表不（Ci—Cg)烧氧基或—OSO3基，或者R4組成一〇-CH2-橋，該-CH2-基可連至在相同環上帶有羧基之礙原子； 73636-971215.DOC -5- 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐）. 8 8 8 8 ABCD 1308153 •申請專利範圍 -W表示氧原子或是亞甲基。 5.根據申請專利範圍第1項之合成多醣或其醫藥可接受鹽，其中多醣為式（1.3)之伍醣： so,· so; so3 '〇 0 COO' 〇〇 R, 0 ooc，〇 S03x 。入< 、/ ~\〇·ρ 0 0 ο" FT Λ o R3 (1.3) 其中R!、R2、R3、R4及W定義如（I)。裝 6. 根據申請專利範圍第5項之合成多醣或其醫藥可接受鹽，其特徵為僅有R!、R2、R3、或取代基之一代表-T-Biot鍵聯（其中丁和Biot定義如（I))。 π 7. 根據申請專利範圍第5或6項之合成多醣或其醫藥可接受鹽，其中伍醣係具式（1.4)結構： Biot

(1-4) # 其中 - T表示一鍵聯，其係選自： NH、 NH Ο

NH CH. 或 73636-971215.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐) 1308153 申請專利範圍 ABCD 0 NH. rCH, CH ΪΓ~ΝΗ Ο 其中j和k可相同或不同，為取自1至10之任一整數； -Biot表示以下基團：

—R!表示（CrCO烷氧基或-0S03_基，一 R2表示（C!—C6)烷氧基或-oso3-基， -R3表示（C〗-C6)烷氧基， -R>4表不（C丨—C6)烧氣基或—〇S〇3基，或者R4組成_〇_ CH2-橋，該-CH2-基可連至在相同環上帶有羧基之碳原子； -W表示氧原子或是亞曱基。 8.根據申請專利範圍第1項之合成多醣或其醫藥可接受鹽，其係選自： -曱基（2,3,4,6-四-0-磺酸根基-α-D-葡萄哌喃糖基）-(l—4)-(2,3,6-三-0-磺酸根基-α-D- 葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)- ( 2,3,6-三-0-磺酸根基-/3 -D-葡萄哌喃糖基）-(l->4)_(6_ 生物素胺基—6-去氧-2,3—二一 0— 曱基— α— 73636-971215.DOC -7- 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐) A BCD 1308153 六、申請專利範圍〇-葡萄哌喃糖基）一(1 — 4)—(2,3,6-三-0-曱基—/3—〇— 葡萄哌喃糖基）-(1 —4)—[(2,3,6-三-0-曱基—α-D-葡萄 p辰喃糖基）—(1 —·4)—Ο— (2,3,6—二—0—甲基—/5 —D—葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)]3-（6-0-磺酸根基-2,3-二-0-甲基一α-D—葡萄哌喃糖基）一(1 —4)—(2,3—二一0-曱基一/ίο— 葡萄 ρ泉喃糖基糖酸酸） —(1 — 4)— ( 2,3,6- 二 —0— 續酸根基一α-D—葡萄哌喃糖基）—(1-^4)—(2,3—二—0—曱基— <2 -L-艾杜ρ辰喃糖基糖酿酸）-(1 — 4)-2，3，6-二-0-續酸根基-a -D-葡萄喊喃糖甞，鈉鹽， -曱基（2,3,4,6-四-0-磺酸根基-a-D-葡萄哌喃糖基）-(1 —4)—(2,3,6—三—0 —磺酸根基-α -D-葡萄哌喃糖基）-(1 —4)一（ 2,3,6-三—0-磺酸根基-/3 —D-葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-(6-[6-（生物素胺基）-已醯胺基]-6-去氧-2,3-二-0—曱基—α —D—葡萄哌喃糖基）-(1->4)— (2,3,6—三—0—曱基-/5 -D-葡萄喊喃糖基）-(1 —4)— [(2,3,6—三—0—曱基-α-D-葡萄哌喃糖基>-(1 —4)—0-(2,3,6—三—Ο-曱基-冷-D-葡萄味喃糖基）-(1 —4)]3-(6-0-磺酸根基-2,3-二-0-曱基-a -D-葡萄哌喃糖基）—(1 —4)-(2,3-二一0—甲基一召-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸）—(1 — 4)-(2,3,6-三-0-磺酸根基-〇;-0-葡萄哌喃糖基）-(l —4)-(2,3-二-0—曱基—α-L—艾杜哌喃糖基糖醛酸）-(1— 4)-2,3,6—三—0—磺酸根基-α -D-葡萄哌喃糖苷，鈉鹽， ―曱基（2,3,4,6—四—0—續酸根基—-D—勤萄喊0南糖基）— 73636-971215.DOC -8- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210Χ 297公#). 8 8 8 8 A BCD 1308153 六、申請專利範圍 (1 —4)-(2,3,6-三-0-磺酸根基-a-D-葡萄哌喃糖基 ο—4)— ( 2,3,6- 三-0- 磺酸根基-召 -D- 葡萄哌喃糖基）-(1 — 4)-(6-[6-(6-生物素胺基已醯胺基）已醯胺基]-6—去氧—2,3-二—0-曱基—a -D-葡萄哌喃糖基）—(1 — 4)—(2,3,6—三—0-甲基一厶―D—葡萄味喃糖基）-(1-4)-[(2,3,6-三—0—曱基——D-葡萄略喃糖基）—（1 — 4 )— 0-(2,3,6 -三-0-曱基—/3—D —葡萄哌喃糖基）—（1 —4 ) ] 3- ( 6-0-磺酸根基—2,3- 二—0—曱基-a -D—葡萄哌喃糖基）—(1->4)-(2,3-二-0-甲基—冷一0—葡萄哌喃糖基糖醛酸）-(1 —4)-(2,3,6-三-0-磺酸根基-a-D-葡萄哌喃糖基）-(l —4)-(2,3—二一0-曱基-a-L-艾杜哌喃糖基糖路酸）_(1 ~^ 4)-2，3，6-二-0-續酸根基-α -D-葡萄ρ农喃糖嘗，納鹽， -甲基（2-生物素胺基-2-去氧-3,4-二-0-曱基-6-0-磺酸根基-α-D-葡萄哌喃糖基）-(1 ^4)-(2,3-二-0-曱基-/3—0—葡萄哌喃糖基糖醛酸）一(1 — 4)-(2,3,6-三—0-石黃酸根基—a _D—葡萄ρ采喃糖基）—(1 —^ 4)- ( 2,3—二—0— 曱基-a -L-艾杜哌喃糖基糖醛酸）-(1 — 4)-2,3,6-三-0-磺酸根基-a -D-葡萄哌喃糖苷，鈉鹽， -曱基（2- [ Ν- ( 6-生物素胺基己醯基）]-2-去氧-3,4-二-〇-曱基-6-0—磺酸根基-a -D-葡萄哌喃糖基）-(1 —^4)— ( 2,3—二—0—曱基—/3 —D—葡萄喊喃糖基糖搭酸）— (1 —4)—(2,3,6-三一 0-磺酸根基—a—D-葡萄哌喃糖基）-(1->4)—(2,3-二-0-曱基-a -L-艾杜哌喃糖基糖醛 73636-971215.DOC -9- 本紙張尺度通用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐） 1308153 - C8 D8 六、申請專利範圍酸）-(1 — 4)-2,3，6-二-Ο-石黃酸根基-α -D- f].萄喊喃糖苷，鈉鹽， -曱基（2- [ 6- ( 6-生物素胺基己酿胺基）己酿胺基]-2-去氧I —3,4—二—0—甲基—6—0—石黃酸根基—α —D— ij萄喊喃糖基）一(1 —4)-( 2,3-二-0—曱基— 召-D-葡萄哌喃糖基糖醛酸）-(1—4)-（2,3,6-三-0-磺酸根基-α-D-葡萄哌 α南糖基）-(1 — 4)- ( 2,3—二—0-甲基—α -L—艾杜17底喃糖基糖醛酸）-(1 —4)-2,3,6-三—0-磺酸根基-α-D—葡萄喊π南糖芬，鈉鹽。 9.根據申請專利範圍第1項之合成多醣或其醫藥可接受鹽，其具有下式：

10. 根據申請專利範圍第1項之合成多醣或其醫藥可接受鹽，其係用於覆蓋假體。 11. 一種用於治療或預防血·管系統之病症之醫藥組合物，其包含作為活性成分之一種根據申請專利範圍第1項之合成多醣或其醫藥可接受鹽，並視需要結合一或多種惰性與適當之賦形劑。 12. 根據申請專利範圍第1 1項之醫藥組合物，其中該血管疾病係： 73636-971215.DOC -10- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐） A8 B8 C8 1308153 申請專利範圍與—及糖尿病有關之血拾性栓塞症，包括不 :絞痛病血管造形術後再狹窄或被入血管内假 ’或與梗塞、周邊動脈疾病或血耳纖維顫動有關之血栓性插塞疾病；靜脈病原之血栓性插塞病理，如肺插塞；及術後或腫瘤生長後所觀察到之栓塞併發症。物素蛋白或抗生物素蛋白鏈菌素之用途，其係用於製造用來中和根據申請專利範圍第"員之具有栓活I·生之合成多醣或其醫藥可接受鹽之製劑。 14. 一種用以中和根㈣請專㈣圍S 1項之具有抗血栓活性之合成多聽或其醫藥可接受鹽之組合物，其包括抗生物素蛋白或抗生物素蛋白鏈菌素。 -11 - 73636-971215.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)