CZ302510B6 - Efektivní zpusob biotinylace sloucenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie - Google Patents
Efektivní zpusob biotinylace sloucenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie Download PDFInfo
- Publication number
- CZ302510B6 CZ302510B6 CZ20100230A CZ2010230A CZ302510B6 CZ 302510 B6 CZ302510 B6 CZ 302510B6 CZ 20100230 A CZ20100230 A CZ 20100230A CZ 2010230 A CZ2010230 A CZ 2010230A CZ 302510 B6 CZ302510 B6 CZ 302510B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- derivative
- dmf
- solution
- shaken
- dcm
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 title claims abstract description 9
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 title claims description 8
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 title abstract description 9
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 title description 5
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 title description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 18
- -1 ethylenoxy units Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 claims abstract description 4
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 4
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Natural products C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims abstract 2
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 18
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 10
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 10
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 9
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- GIAFURWZWWWBQT-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminoethoxy)ethanol Chemical compound NCCOCCO GIAFURWZWWWBQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 150000001615 biotins Chemical class 0.000 claims description 6
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 6
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims description 4
- QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N methanesulfonyl chloride Chemical compound CS(Cl)(=O)=O QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 4
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims description 2
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 claims description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 230000010933 acylation Effects 0.000 claims 2
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 claims 2
- 238000009795 derivation Methods 0.000 claims 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N (2S,3R)-N-[(2S)-3-(cyclopenten-1-yl)-1-[(2R)-2-methyloxiran-2-yl]-1-oxopropan-2-yl]-3-hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-2-[[(2S)-2-[(2-morpholin-4-ylacetyl)amino]propanoyl]amino]propanamide Chemical compound C1(=CCCC1)C[C@@H](C(=O)[C@@]1(OC1)C)NC([C@H]([C@@H](C1=CC=C(C=C1)OC)O)NC([C@H](C)NC(CN1CCOCC1)=O)=O)=O GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N 0.000 claims 1
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 claims 1
- 229940125797 compound 12 Drugs 0.000 claims 1
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 claims 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 abstract description 9
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 2
- 125000004057 biotinyl group Chemical class [H]N1C(=O)N([H])[C@]2([H])[C@@]([H])(SC([H])([H])[C@]12[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 abstract 2
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 123
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 41
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 41
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 10
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 8
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical class OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000004202 aminomethyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])* 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 4
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 4
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 4
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 4
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 4
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 4
- 239000012321 sodium triacetoxyborohydride Substances 0.000 description 4
- RRSNDVCODIMOFX-MPKOGUQCSA-N Fc1c(Cl)cccc1[C@H]1[C@@H](NC2(CCCCC2)[C@@]11C(=O)Nc2cc(Cl)ccc12)C(=O)Nc1ccc(cc1)C(=O)NCCCCCc1cccc2C(=O)N(Cc12)C1CCC(=O)NC1=O Chemical compound Fc1c(Cl)cccc1[C@H]1[C@@H](NC2(CCCCC2)[C@@]11C(=O)Nc2cc(Cl)ccc12)C(=O)Nc1ccc(cc1)C(=O)NCCCCCc1cccc2C(=O)N(Cc12)C1CCC(=O)NC1=O RRSNDVCODIMOFX-MPKOGUQCSA-N 0.000 description 3
- 239000012359 Methanesulfonyl chloride Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N N-Butyllithium Chemical compound [Li]CCCC MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N tetraethylene glycol Chemical class OCCOCCOCCOCCO UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol Chemical class OCCOCCOCCO ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.C=CC1=CC=CC=C1C=C CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPVCVHVTMPCZTH-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-(2-azidoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethanamine Chemical compound NCCOCCOCCOCCN=[N+]=[N-] FPVCVHVTMPCZTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 108050001427 Avidin/streptavidin Proteins 0.000 description 1
- XTHCQCZZGRVGTC-UHFFFAOYSA-M C(CO)(=O)[O-].C=C.C=C.C=C.C=C.[Na+] Chemical compound C(CO)(=O)[O-].C=C.C=C.C=C.C=C.[Na+] XTHCQCZZGRVGTC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WJCCNGXDBPFFSP-UHFFFAOYSA-M C(CO)(=O)[O-].C=C.C=C.[Li+] Chemical compound C(CO)(=O)[O-].C=C.C=C.[Li+] WJCCNGXDBPFFSP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KBZVVQCXAZXEFO-UHFFFAOYSA-N C(COCCOCCO)O.[Li] Chemical compound C(COCCOCCO)O.[Li] KBZVVQCXAZXEFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical group 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 150000003459 sulfonic acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
Imobilizované deriváty biotinu obecného vzorce 7, kde n predstavuje pocet ethylenoxy jednotek a nabývá hodnot 1 až 5 a symbol Pol predstavuje polystyrenovou pryskyrici tvorenou kopolymerem styrenu a divinylbenzenu, zpusob jejich prípravy a jejich použití pro efektivní derivatizaci sloucenin obsahujících ve své strukture karboxylovou skupinu pro potreby afinitní chromatografie, cehož se využívá zejména ve farmaceutickém výzkumu pri urcování molekulárního cíle biologicky aktivních látek.
Description
Oblast techniky
Vynález se týká přípravy a použití imobilizováných derivátů biotinu s různě dlouhými řetězci polyethylenglykolů s využitím principu syntézy na pevné fázi. Popsaný koncept syntézy na pevné fázi umožňuje efektivní přípravu daných derivátů ajejich následné použití pro jednoduchou deri10 vatizaci sloučenin obsahujících ve své struktuře karboxylovou skupinu. Takto deri váti zo vane látky mohou být po odštěpení z pevné fáze použity pro zachycení na stacionární fázi pokryté avidinem. Komplex vzniklý specifickou vazbou avidin-biotín případně streptavidm biotin je pak metodou afinitní chromatografíe využíván především ve farmaceutickém výzkumu pri identifikaci molekulárních cílů potenciálních léčiv.
Dosavadní stav techniky
Derivatizace biologicky aktivních sloučenin molekulou biotinu je známý prostředek pro jejich
2o studium za účelem identifikace enzymů s kterými dané sloučeniny interagují, což výrazně přispívá ke zjištění mechanismu účinku těchto látek v buněčném systému. Biotinylované deriváty lze snadno imobilizovat metodou nekovalentní biospecifické interakce na chromatografíeké koloně vybavené stacionární fází pokrytou avidinem/streptavidinem. Pri následném použití mobilní fáze obsahující buněčný lyzát dochází k zachycení cílových enzymů na koloně, jejich následné elucí a identifikaci. Tento druh separační metody se nazývá afinitní chromatografíe a patří mezi nej frekventovanější metody studia molekulárních cílů nových typů biologicky aktivních sloučenin (tj. potenciálních léčiv).
Za nejvhodnější typ derivátů biotinu používaných pro modifikaci látek za účelem jejich studia .io afinitní chromatografií jsou považovány deriváty obecného struktury 1, kde lineární řetězec (tzv. raménko) sestávající se z různého počtu ethylenoxy jednotek je na jednom konci derivatizován biotinem, přičemž druhý konec řetězce je zakončen vhodnou funkční skupinou umožňující derivatizací příslušné látky. Vhodný počet ethylenoxy jednotek (tj. délka raménka) není přesně definován, neboť se jedná o proměnlivou veličinu závislou na způsobu interakce mezi studovali 5 nou látkou a cílovým enzymem.
X - NH, O
Y - COOH, ΝΗχ OH, OSO3Me, OSO3Ph...
(O
Pro derivatizaci látek obsahujících ve své struktuře karboxylovou skupinu jsou v literatuře nej40 častěji popisovány deriváty typu 1 (nebo jejich analoga s alternativní strukturou raménka) obsahující terminální primární aminoskupinu. Níže jsou uvedeny některé příklady takových derivátů.
V literatuře je hojně popsána příprava a použití derivátů 2 pomocí syntézy v roztoku. Některé z těchto derivátů jsou i komerčně dostupné.
- 1 C7. 30251« B6
Znázorněný typ raménka (tj. pouze na bázi uhlíkatého skeletu) však není považován pro účely afínitní chromatografie za zcela vhodný z důvodů jeho efektivního zkrácení způsobeného hydro5 fobnímí interakcemi methylenových skupin a nebude mu proto zde věnována další pozornost. Uvedeny budou pouze některé konkrétní příklady derivátů s raménkem na bázi ethylenoxidy jednotek nebo deriváty s raménky podobné struktury, která jsou prostá hydrofobních interakcí a jsou obecně považována z pohledu struktury za optimální.
κι V literatuře je popsána příprava derivátu 3 s dvěma ethylenoxy jednotkami. Sloučenina je připravována pomocí syntézy v roztoku, a to biotinylací příslušného mono Boc chráněného diaminu s výtěžkem až 83 %. Derivát 3 byl následně použit pro derivatizaci a studium různých typů látek pomocí afínitní chromatografie (Zhong, Chun-Long; Yao, Zhu-Jun, Huaxue Xuebao 2008, 66(9), 1074 až 1078; Sekine, Mitsuo; Okada, Kazuhisa; Seio, Kohji; Obata, Tohru; Sasaki, Taku15 ma; Kakeya, Hideaki; Osada, Horoyuki, Bioorganic Medicinal Chemistry 2004, 12(24), 6343 až 6349).
(3)
2o Popsána je rovněž příprava derivátu 4 s třemi ethylenoxy jednotkami připraveného biotinylací 2[2-[2-(2-azidoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethanaminu a následnou redukcí terminálního azidu trífenylfosfinem. Syntéza je opět prováděna v roztoku (Fusz, Stefan; Srivatsan, Seergazhi G.; Ackermann, Damian; Famulok, Michael, Journal of Organic Chemistry 2008, 73(13), 5069 až 5077).
(4)
Dále je popsána příprava a použití derivátu 5 s raménkem v kombinaci ethylenoxy a propylenoxy jednotek. Daný derivát je připravován biotinylací odpovídajícího diaminu v roztoku s výtěžkem pouhých 22 % (Zhang, Zhídong; Edwards, Patrick, J.; Roeske, Roger W., Guo, Lili, Bioconjugate Chemistry 2005, 16(2), 458 až 464).
Podobný derivát 6 s kombinací ethylenoxy a propylenoxy jednotek byl rovněž připraven syntézou v roztoku a použit ke studiu derivátů nitroltrioctové kyseliny (Huang, Zhaohua; Park, s Joshua I.; Watson, Douglas S.; Hwang, Peter; Szoka, Francis C., Jr., Bioconjugate Chemistry
2006, 17(6), 1592 až 1600).
Podstata vynálezu
Předmětem předloženého vynálezu jsou imobilizované deriváty biotinu obecného vzorce 7
kde n představuje počet ethylenoxy jednotek a nabývá hodnot 1 až 5 a symbol Pol představuje polystyrénovou pryskyřici tvořenou kopolymerem styrenu a divinylbenzenu.
Podstatou vynálezu je dále příprava daných derivátů pomocí syntézy na pevné fázi, přičemž tato syntéza zahrnuje následující kroky (viz Schéma 1):
• Imobilizaci 2-(2 arninoethoxyj- ethanolu pomocí reduktivní aminace na polymemí pryskyřici obsahující navázaný 4-oxy-2-methoxybenzaIdehyd za vzniku derivátu 8
- j CZ 302510 B6 • Derivatizaci imobilizovaného 2-(2-aminoethoxy)ethanolu fluorenylmethoxykarbonylovou protektivní skupinou za vzniku derivátu 9 • Aeylaci hydroxyskupiny v derivátu 9 hiotínem a následnou deprotekei aminoskupiny za vzniku derivátu 7a • Esterifíkaci hydroxyskupiny ve sloučenině 9 pomocí chloridu kyseliny methansu lionové, ptoluensulfonové nebo trifluormethansulfonanhydridem za vzniku sloučeniny 10 • Reakci esteru sulfonové kyseliny 10 s alkalickými solemi diethylenglykolu, triethylenglykolu nebo tetraethylenglykolu za vzniku sloučeniny I 1 • Derivatizaci sloučeniny 11 fluorenylmethoxykarbonylovou protektivní skupinou, následnou aeylaci hydroxyskupiny biotinem a deprotekei aminoskupiny za vzniku derivátu 7b-d
Pol
-OH
Pol
Pol (8) (9)
Fmoc ✓k í >OH
Pol ''L^O
Pol o
(10)
NH ίΛ (12)
Schéma 1
Předmětem vynálezu je rovněž způsob použití derivátů 7a-d, kdy jsou tyto deriváty podrobeny reakci se sloučeninou obsahující karboxylovou skupinu za vzniku látek 12 a následně působením kyseliny trifluoroetové je odštěpen polymer za vzniku sloučenin 13 (viz Schéma 2).
Pol
HN·
R^O «
NH Η θ (12) (13)
Schéma 2
Syntéza na pevné fázi ve srovnání se syntézou v roztoku obecně poskytuje řadu výhod. Mezi největší výhody patří především jednoduché instrumentální vybavení a jednoduché experimentální provedení syntézy, dále snadná příprava malých množství látek (i pri mnohastupňových syntézách) a zejména velmi jednoduchá izolace produktů syntézy často bez nutnosti následného čištění. Zvláště poslední dvě jmenované výhody mají zásadní význam pro použití syntézy na pevné fázi pro účel popsaný ve vynálezu, neboť biotinylované látky pro studium afinitní chroma-4CZ 302510 B6 tografíí je často potřeba syntetizovat v omezeném množství, přičemž vlivem nepříznivých vlastností produktů může docházet ke značným ztrátám a obtížím při jejich izolaci, které se zvyšují při nutnosti jejich purifikace.
To, že biotinylační jednotka je imobilizovaná na pevné fázi, tedy přináší výhody především v jednoduché a rychlé přípravě, snadné manipulaci s připravenými systémy a jednoduché finální izolaci cílových produktů. Vzhledem ktomu, že pouze některé typy biotinylačních jednotek pro derivatizaci látek v roztoku jsou komerčně dostupné, a to většinou v malém množství za nepříznivou cenu, představuje popsaný vynález efektivní způsob alternativního řešení dané problematiky.
V nespolední řadě je výhodou popsané metodiky její variabilita. Volbou reaktantů lze měnit sterické parametry cílových derivátů, tj. délku raménka, která může při provedení afinitní chromatografie značným způsobem ovlivňovat kvalitu interakce mezi studovanou látkou a cílovým enzymem. Jednoduchým způsobem tedy lze připravit a kombinovat jednotlivé typy biotinylaě15 nich jednotek.
Popsaný koncept syntézy na pevné fázi, který přináší výše uvedené praktické výhody jak při vlastní přípravě, tak při použití derivátů 7, nebyl dosud v literatuře popsán.
Příklady provedení vynálezu
Podstata přípravy a použití derivátů podle vynálezu je blíže objasněna v následujících příkladech. Tyto příklady mají pouze ilustrativní charakter a v žádném případě neomezují rozsah vynálezu.
Postup přípravy derivátů 7:
Příklad 1
Příprava imobilizovaného derivátu 7a (n = 1)
300 mg Amínomethylové piyskyřice vybavené BAL linkerem (loading systému 0,63 mmol/g) bylo suspendováno v roztoku 10% kyseliny octové v suchém AfY-dimethylfonnamidu (DMF) (3 ml) obsahujícího 1 mmol 2-(2-aminoethoxy)ethanolu. Reakční směs byla třepána přes noc za teploty místnosti. Poté byl přidán 1 mmol tríacetoxyborohydridu sodného v roztoku 5% kyseliny octové v suchém DMF (1.5 ml). Reakční směs byla třepána 3 hodiny za teploty místnosti, poté promyta 3x DMF, následně třepána 10 min s roztokem 10% piperidinu v DMF (3 m), promyta 3x DMF a 3x dichlormethanem (DCM). Obdržená pryskyřice byla třepána v 0,2M roztoku fluorenylmethoxykarbonyl(hydroxysukcinimidu) (Fmoc-OSu) s ekvivalentem diisopropylethylaminu (DIEA) v DCM (3 ml) 2 hodiny za teploty místnosti a pak promyta 3x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v DMF (3 ml) obsahující 1 mmol 1-hydroxybenzotriazolu (BtOH),
1 mmol jV,?V'-diisopropylkarbodiimidu (DiC), 1 mmol biotinu a 1 mmol DIEA přes noc za teploty místnosti, poté byla pryskyřice promyta 3x DMF. Tento reakční krok byl následně zopakován za stejných podmínek. Obdržená pryskyřice byla suspendována v roztoku 10% piperidinu v DMF (3 ml), třepána 15 minut za teploty místnosti, promyta 3x DMF, 3x DCM, 3x MeOH a vysušena v proudu dusíku.
-5 CZ 302510 B6
Analýza produktu: 10 mg pryskyřice bylo třepáno v 0,5M roztoku Fmoc-OSu a DIEA v DCM (1 ml) 30 min za teploty místnosti, pak byla pryskyřice promyta 3x DCM a třepána v 50% roztoku kyseliny trifluoroctové (TFA) v DCM (0,5 ml). Poté byl vzorek odpařen dosucha v proudu dusíku a odparek analyzován pomocí 11PLC-IJV—MS, přičemž byl detekován produkt 7a jako odpovídající Fmoc-derivát, FSI-MS m/z = 554,6, [M+H]'; čistota 98 %.
Příklad 2
Příprava ímobtlizovaného derivátu 7b (n - 3)
Pol
300 mg Aminomethylové pryskyřice vybavené BAL linkerem (loading 0,63 mmol/g) bylo suspendováno v roztoku 10% kyseliny octové v suchém DMF (3 ml) obsahujícího l mmol 2-(2aminoethoxy)ethanolu. Reakční směs byla třepána přes noc za teploty místnosti. Poté byl přidán 1 mmol triacetoxyborohydridu sodného v roztoku 5% kyseliny octové v suchém DMF (1,5 ml). Reakční směs byla třepána 3 hodiny za teploty místnosti, poté promyta 3x DMF, následně třepána 10 min s roztokem 10% piperidinu v DMF (3 ml), promyta 3x DMF a 3x DCM. Obdržená pryskyřice byla suspendována v 0,2M roztoku Fmoc-OSu s ekvivalentem DIEA v DCM (3 ml), třepána 2 hodiny za teploty místnosti a pak promyta 3x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v 0,2M roztoku methansulfonylchloridu v pyridinu (3 ml) dvě hodiny za teploty místnosti, pak promyta 3x DMF. Obdržená pryskyřice byla třepána v IM roztoku diethylenglykolátu lithného v dimethylsulfoxidu (DMSO) (3 ml) (roztok byl připraven smícháním ekvivalentu BuLÍ a diethylenglykolu za teploty místnosti), třepána přes noc za teploty místnosti, poté promyta 3x DMF, třepána 10 minut s 20% roztokem kyseliny octové v DMF, 10 minut s 20% roztokem piperidinu v DMF, promyta 3x DMF a 3x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v 0,2M roztoku Fmoc-OSu s ekvivalentem DIEA v DCM (3 ml) 2 hodiny za teploty místnosti a pak promyta 3x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v DMF (3 ml) obsahující 1 mmol BtOH, 1 mmol DIC, 1 mmol biotinu a 1 mmol DIEA přes noc za teploty místnosti, poté byla pryskyřice promyta 3x DMF. Tento reakční krok byl následně zopakován za stejných podmínek. Obdržená pryskyřice byla suspendována v roztoku 10% piperidinu v DMF (3 ml), třepána 15 minut za teploty místnosti, pak promyta 3x DMF, 3x DCM, 3x MeOH a vysušena v proudu dusíku.
Analýza produktu: 10 mg pryskyřice bylo třepáno v 0,5M roztoku Fmoc-OSu a DIEA v DCM (1 ml)30minza teploty místnosti, pak byla pryskyřice promyta 3x DCM a třepána v 50% roztoku TFA v DCM (0,5 ml). Poté byl vzorek odpařen dosucha v proudu dusíku a odparek analyzován pomocí HPLC-UV-MS, přičemž byl detekován produkt 7b jako odpovídající Fmoc-derivát, ESI-MS m/z - 642,7, [M+H]+; čistota 95 %.
Příklad 3
Příprava imobilizovaného derivátu 7c (n = 4)
Pol
NH
-6CZ 302510 B6
300 mg Aminomethylové pryskyřice vybavené BAL linkerem (loading 0,63 mmol/g) bylo suspendováno v roztoku 10% kyseliny octové v suchém DMF (3 ml) obsahujícího 1 mmol 2-(2aminoethoxy)ethanolu. Reakční směs byla třepána přes noc za teploty místnosti. Poté byl přidán I mmol triacetoxyborohydridu sodného v roztoku 5% kyseliny octové v suchém DMF (1,5 ml).
Reakční směs byla třepána 3 hodiny za teploty místnosti, poté promyta 3x DMF, následně třepána 10 min s roztokem 10% piperidinu v DMF (3 ml), promyta 3x DMF a 3x DCM. Obdržená pryskyřice byla suspendována v 0,2M roztoku Fmoc-OSu s ekvivalentem DIEA v DCM (3 ml), třepána 2 hodiny za teploty místnosti a pak promyta 3x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v 0,2M roztoku methansulfonylchloridu v pyridinu (3 ml) dvě hodiny za teploty místnosti, pak promyta 3x DMF. Obdržená pryskyřice byla třepána v IM roztoku triethylenglýkolátu lithného v DMSO (3 mi) (roztok byl připraven smícháním ekvivalentu BuLi a triethylenglykolu za teploty místnosti), třepána přes noc za teploty místnosti, poté promyta 3x DMF, třepána 10 minut s 20% roztokem kyseliny octové v DMF, 10 minut s 20% roztokem piperidinu v DMF, promyta 3x DMF a 3x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v 0,2M roztoku Fmoc-OSu s ekvivalentem DIEA v DCM (3 ml) 2 hodiny za teploty místnosti a pak promyta 3x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v DMF (3 ml) obsahující 1 mmol BtOH, 1 mmol DIC, 1 mmol biotinu a 1 mmol DIEA přes noc za teploty místnosti, poté byla pryskyřice promyta 3x DMF. Tento reakční krok byl následně zopakován 2x za stejných podmínek. Obdržená pryskyřice byla suspendována v roztoku 10% piperidinu v DMF (3 ml), třepána 15 minut za teploty místnosti, pak promyta 3x DMF, 3x DCM, 3x MeOH a vysušena v proudu dusíku.
Analýza produktu: 10 mg pryskyřice bylo třepáno v 0,5M roztoku Fmoc-OSu a DIEA v DCM (1 ml) 30 min za teploty místnosti, pak byla pryskyřice promyta 3x DCM a třepána v 50% roztoku TFA v DCM (0,5 ml). Poté byl vzorek odpařen dosucha v proudu dusíku a odparek analyzován pomocí HPLC-UV-MS, přičemž byl detekován produkt 7c jako odpovídající Fmoc-derivát, ESI-MS m/z = 686,8, [M+Hf; čistota 95 %.
Příklad 4
Příprava imobilizovaného derivátu 7d (n = 5)
300 mg Aminomethylové pryskyřice vybavené BAL linkerem (loading 0,63 mmol/g) bylo suspendováno v roztoku 10% kyseliny octové v suchém DMF (3 ml) obsahujícího 1 mmol 2-(2aminoethoxy)ethanolu. Reakční směs byla třepána přes noc za teploty místnosti. Poté byl přidán mmol triacetoxyborohydridu sodného v roztoku 5% kyseliny octové v suchém DMF (1,5 ml).
Reakční směs byla třepána 3 hodiny za teploty místnosti, poté promyta 3x DMF, následně třepána 10 min s roztokem 10% piperidinu v DMF (3 ml), promyta 3x DMF a 3x DCM. Obdržená pryskyřice byla suspendována v 0,2M roztoku Fmoc-OSu s ekvivalentem DIEA v DCM (3 ml), třepána 2 hodiny za teploty místnosti a pak promyta 3x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v 0,2M roztoku methansulfonylchloridu v pyridinu (3 ml) dvě hodiny za teploty místnosti, pak promyta 3x DMF. Obdržená pryskyřice byla suspendována v 2M roztoku tetraethylenglykolátu sodného v DMSO (3 ml) (roztok byl připraven smícháním ekvivalentu NaH a tetraethylenglykolu za teploty místnosti), třepána přes noc za teploty místnosti, poté promyta 3x DMF, třepána 10 minut s 20% roztokem kyseliny octové v DMF, 10 minut s 20% roztokem piperidinu v DMF, promyta 3x DMF a 3x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v 0,2M roztoku Fmoc-OSu s ekvivalentem DIEA v DCM (3 ml) 2 hodiny za teploty místnosti a pak promyta 3x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána vDMF (3ml) obsahující 1 mmol BtOH, 1 mmol DIC, 1 mmol biotinu a 1 mmol DIEA přes noc za teploty místnosti, poté byla pryskyřice promyta 3x
-7 CZ 302510 B6
DMF. Tento reakční krok byl následně zopakován za stejných podmínek. Obdržená pryskyřice byla suspendována v roztoku 10% piperidinu v DMF (3 ml), třepána 15 minul za teploty místnosti. pak promyta 3x DMF, 3x DCM, 3x MeOH a vysušena v proudu dusíku.
Analýza produktu: 10 mg pryskyřice bylo třepáno v 0,5M roztoku Fmoc-OSu a DIEA v DCM (I ml) 30 min za teploty místnosti, pak byla pryskyřice promyta 3x DCM a třepána v 50% roztoku TFA v DCM (0,5 ml). Poté byl vzorek odpařen dosucha v proudu dusíku a odparek analyzován pomocí HPLC-UV-MS, přičemž byl detekován produkt 7d jako odpovídající Fmoc-derivát, ES1-MS m/z - 730,8, [M+H]'; čistota 90 %.
Příklad 5
Postup použití derivátů 7;
Obecný postup derivatizace sloučenin s karboxylovou skupinou použitím imobilizovaných derivátů 7:
250 mg výchozí aminomethylové pryskyřice bylo podrobeno syntéze derivátů 7 dle výše uvedených postupů. Výsledná pryskyřice byla třepána s roztokem 0,5 mmol příslušné karboxylové kyseliny, 0,5 mmol BtOH a 0,5 mmol D1C ve směsi DMF a DCM (1:1,2,5 ml) přes noc za teploty místnosti. Obdržená pryskyřice byla promyta 3x DMF, 3x DCM a poté třepána v 50% roztoku TFA v DCM (2,5 ml). Poté byla pryskyřice odfiltrována, filtrát odpařen dosucha v proudu dusíku a odparek sonifikován v diethyletheru. Vysrážená pevná látka byla odsáta a promyta diethyletherem. V případě, že vzhledem k rozpustnosti látky nebylo možné produkt vysrážet diethyletherem, byl odparek rozpuštěn v chloroformu (5 ml) a protřepán s 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného (5 ml). Organická vrstva byla oddělena, vysušena síranem sodným a zahuštěna dosucha. V obou případech se výtěžky pohybují v rozmezí 70 až 90 % teorie.
Příklady použití
| Studovaná karboxylová kyselina | Biotiny lační jednotka | Sloučenina 13 m/z ([M+H]) (HPLC-UV-MS) | Sloučenina 13 Čistota (%) (HPLC-UV-MS) |
| Fmoc-L-Ala | 7a | 625,7 | 95 |
| Benzoová kyselina | 7a | 436,2 | 95 |
| Nikotinová kyselina | 7a | 437,4 | 93 |
| Propionová kyselina | 7a | 388,2 | 95 |
| Fmoc-L-Ala | 7b | 713,8 | 92 |
| Benzoová kyselina | 7b | 524,6 | 93 |
| Nikotinová kyselina | 7b | 526,6 | 91 |
| Propionová kyselina | 7b | 490,6 | 92 |
| Fmoc-L-Ala | 7c | 757,8 | 93 |
| Benzoová kyselina | 7c | 568,7 | 90 |
| Nikotinová kyselina | 7c | 569,7 | 89 |
-8CZ 302510 B6
| Propionová kyselina | 7c | 534,6 | 90 |
| Fmoc-L-Ala | 7d | 801,8 | 88 |
| Benzoová kyselina | 7d | 612,7 | 84 |
| Nikotinová kyselina | 7d | 613,7 | 85 |
| Propionová kyselina | 7d | 578,7 | 85 |
Struktura vybraných derivátů 13 byla potvrzena pomocí ]H a l3C NMR spektrometrie.
Průmyslová využitelnost
Imobilizované deriváty obecného vzorce 7 jsou vhodné pro efektivní derivatizaci sloučenin obsahujících ve své struktuře karboxylovou skupinu a mohou tak sloužit k rutinní derivatizaci takových sloučenin a následnému studiu jejich vlastností pomocí afinitní chromatografie. To je využitelné zejména ve farmaceutickém výzkumu při určování molekulárního cíle biologicky aktivních látek.
Claims (3)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Imobilizované deriváty biotinu obecného vzorce 7 kde n představuje počet ethylenoxy jednotek a nabývá hodnot 1 až 5 a symbol Pol představuje polystyrénovou pryskyřici tvořenou kopolymerem styrenu a divinylbenzenu.
- 2. Způsob přípravy derivátů podle nároku 1, vyznačující se tím, že sloučeniny vzorce 7a až 7d se připravují pomocí syntézy na pevné fázi, která zahrnuje následující kroky:• Imobilizaci 2~(2-aminoethoxy)ethanolu pomocí reduktivní aminace na polystyrénovou pryskyřici obsahující navázaný 4-oxy-2~methoxybenzaldehyd za vzniku derivátu 8-9CZ 302510 B6PolI-OH (8)Derívatizaci ímobilízovaného 2-(2- atninocthoxy) ethanolu Huorenylmethoxykarbonylovou protektivní skupinou za vzniku derivátu 9 • Acylací hydroxyskupiny v derivátu 9 biotinem a následnou deprotekci aminoskupiny za vzniku derivátu 7aEsterifikaci hydroxyskupiny ve sloučenině 9 pomocí chloridu kyseliny methansulfonové, p~ toluensulfonové nebo trifluormethansulfonanhydridem za vzniku sloučeniny 10 (10) • Reakci esteru sulfonové kyseliny 10 s alkalickými solemi diethylenglykolu, triethylenglykolu nebo tetraethylenglykolu za vzniku sloučeniny 11H 3-5 (11)Derívatizaci sloučeniny 11 fluorenylmethoxykarbonylovou protektivní skupinou, následnou acylací hydroxyskupiny biotinem a deprotekci aminoskupiny za vzniku derivátu 7b-d- 10CZ 302510 B6Z^NH (7b-d)
- 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že se sloučeniny vzorce 7a až 7d podrobí reakci se sloučeninou obsahující karboxylovou skupinu za vzniku sloučeniny 12 a následně působením kyseliny trifluoroctové se odštěpí polymer za vzniku sloučenin 13.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20100230A CZ302510B6 (cs) | 2010-03-29 | 2010-03-29 | Efektivní zpusob biotinylace sloucenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20100230A CZ302510B6 (cs) | 2010-03-29 | 2010-03-29 | Efektivní zpusob biotinylace sloucenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2010230A3 CZ2010230A3 (cs) | 2010-09-08 |
| CZ302510B6 true CZ302510B6 (cs) | 2011-06-22 |
Family
ID=42676575
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20100230A CZ302510B6 (cs) | 2010-03-29 | 2010-03-29 | Efektivní zpusob biotinylace sloucenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ302510B6 (cs) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4709037A (en) * | 1987-02-17 | 1987-11-24 | Hoechst Celanese Corporation | Biotinylating agents |
| DE4302241A1 (de) * | 1993-01-27 | 1994-07-28 | Boehringer Mannheim Gmbh | Neues Biotinylierungsreagenz |
| WO1997029114A1 (en) * | 1996-02-08 | 1997-08-14 | Board Of Regents Of The University Of Washington | Biotin-containing compounds, biotinylation reagents and methods |
| US20020159994A1 (en) * | 2000-06-16 | 2002-10-31 | Sandberg Bengt E.B. | Biotin derivatives |
| US20040024197A1 (en) * | 2000-09-22 | 2004-02-05 | Phillppe Duchaussoy | Polysaccharides with antithrombotic activity comprising at least a covalent bond with biotin or a biotin derivative |
| WO2007128344A1 (en) * | 2006-05-02 | 2007-11-15 | Universita' Degli Studi Di Roma 'tor Vergata' | Design and synthesis of biotinylated probes for n-acyl-ethanolamines |
-
2010
- 2010-03-29 CZ CZ20100230A patent/CZ302510B6/cs not_active IP Right Cessation
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4709037A (en) * | 1987-02-17 | 1987-11-24 | Hoechst Celanese Corporation | Biotinylating agents |
| DE4302241A1 (de) * | 1993-01-27 | 1994-07-28 | Boehringer Mannheim Gmbh | Neues Biotinylierungsreagenz |
| WO1997029114A1 (en) * | 1996-02-08 | 1997-08-14 | Board Of Regents Of The University Of Washington | Biotin-containing compounds, biotinylation reagents and methods |
| US20020159994A1 (en) * | 2000-06-16 | 2002-10-31 | Sandberg Bengt E.B. | Biotin derivatives |
| US20040024197A1 (en) * | 2000-09-22 | 2004-02-05 | Phillppe Duchaussoy | Polysaccharides with antithrombotic activity comprising at least a covalent bond with biotin or a biotin derivative |
| WO2007128344A1 (en) * | 2006-05-02 | 2007-11-15 | Universita' Degli Studi Di Roma 'tor Vergata' | Design and synthesis of biotinylated probes for n-acyl-ethanolamines |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2010230A3 (cs) | 2010-09-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20030176670A1 (en) | Multivalent macrolide antibiotics | |
| EP0321353A1 (fr) | Cryptates de terres rares, procédés d'obtention, intermédiaires de synthèse et application à titre de marqueurs fluorescents | |
| CN101880290B (zh) | 头孢孟多酯钠的制备方法 | |
| Soomro et al. | CuAAC synthesis of resorcin [4] arene-based glycoclusters as multivalent ligands of lectins | |
| Massarenti et al. | Fluorous-tag assisted synthesis of bile acid–bisphosphonate conjugates via orthogonal click reactions: an access to potential anti-resorption bone drugs | |
| JPH07502045A (ja) | 新規なビオチン化試薬 | |
| Zhou et al. | Structure and stereochemistry of a novel bioactive sphingolipid from a Calyx sp. | |
| TR201819440T4 (tr) | Yüklü çapraz bağlayıcıların hazırlanmasına yönelik yöntemler. | |
| Shih et al. | Combinatorial approach toward synthesis of small molecule libraries as bacterial transglycosylase inhibitors | |
| Honcharenko et al. | Capping of oligonucleotides with “clickable” m 3 G-CAPs | |
| WO2007092847A2 (en) | Solid phase synthesis of acridinium derivatives | |
| Shaikh et al. | Synthesis of glycocluster peptides | |
| CZ302510B6 (cs) | Efektivní zpusob biotinylace sloucenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie | |
| CN116217655B (zh) | 一种连接基药物偶联物的中间体的制备方法 | |
| CN110873772B (zh) | 一种探针及其合成方法和应用 | |
| CN113924304B (zh) | 四官能性化学探针和使用所述探针鉴定来自于活细胞或活组织的靶膜蛋白的方法 | |
| CN116337567A (zh) | 一种快速高效的化学蛋白质组学样品制备方法 | |
| VanderMeijden et al. | Synthesis and application of photoproline-a photoactivatable derivative of proline | |
| CN114057827A (zh) | 一种标记蛋白的方法 | |
| CN114315721A (zh) | 一种光亲和连接链及其合成方法与应用 | |
| EP2627634B1 (en) | A new dimedon derivative and a method for the purification of pna and peptide oligomers | |
| CZ2010229A3 (cs) | Efektivní zpusob biotinylace aminosloucenin pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie | |
| Yang et al. | High-affinity recognition of the human C-reactive protein independent of phosphocholine | |
| CN111748089A (zh) | 一种生物素标记化合物以及确定化合物结合靶标蛋白的方法 | |
| Robillot et al. | Synthesis of bifunctional saxitoxin analogues by biotinylation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20160329 |