CZ2010230A3 - Efektivní zpusob biotinylace sloucenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie - Google Patents
Efektivní zpusob biotinylace sloucenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2010230A3 CZ2010230A3 CZ20100230A CZ2010230A CZ2010230A3 CZ 2010230 A3 CZ2010230 A3 CZ 2010230A3 CZ 20100230 A CZ20100230 A CZ 20100230A CZ 2010230 A CZ2010230 A CZ 2010230A CZ 2010230 A3 CZ2010230 A3 CZ 2010230A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- derivative
- dmf
- solution
- shaken
- dcm
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 12
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 title claims description 10
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 title abstract description 9
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 title description 10
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 title description 7
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 title description 7
- -1 ethyleneoxy units Chemical group 0.000 claims abstract description 13
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims abstract description 3
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 claims abstract description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 17
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 12
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 12
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 10
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 claims description 10
- GIAFURWZWWWBQT-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminoethoxy)ethanol Chemical compound NCCOCCO GIAFURWZWWWBQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 6
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N methanesulfonyl chloride Chemical compound CS(Cl)(=O)=O QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 claims description 4
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000010933 acylation Effects 0.000 claims description 4
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 claims description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000001615 biotins Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 4
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 claims description 2
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims description 2
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 2
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 claims description 2
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 2
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 claims description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N EtOH Substances CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101100388071 Thermococcus sp. (strain GE8) pol gene Proteins 0.000 claims 1
- 125000004057 biotinyl group Chemical class [H]N1C(=O)N([H])[C@]2([H])[C@@]([H])(SC([H])([H])[C@]12[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 abstract 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract 1
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 123
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 56
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 41
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 41
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 125000004202 aminomethyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])* 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 4
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 4
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 4
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 4
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 4
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 4
- 239000012321 sodium triacetoxyborohydride Substances 0.000 description 4
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012359 Methanesulfonyl chloride Substances 0.000 description 3
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RRSNDVCODIMOFX-MPKOGUQCSA-N Fc1c(Cl)cccc1[C@H]1[C@@H](NC2(CCCCC2)[C@@]11C(=O)Nc2cc(Cl)ccc12)C(=O)Nc1ccc(cc1)C(=O)NCCCCCc1cccc2C(=O)N(Cc12)C1CCC(=O)NC1=O Chemical compound Fc1c(Cl)cccc1[C@H]1[C@@H](NC2(CCCCC2)[C@@]11C(=O)Nc2cc(Cl)ccc12)C(=O)Nc1ccc(cc1)C(=O)NCCCCCc1cccc2C(=O)N(Cc12)C1CCC(=O)NC1=O RRSNDVCODIMOFX-MPKOGUQCSA-N 0.000 description 2
- 101100060915 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) comF gene Proteins 0.000 description 2
- MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N N-Butyllithium Chemical compound [Li]CCCC MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- FPVCVHVTMPCZTH-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-(2-azidoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethanamine Chemical compound NCCOCCOCCOCCN=[N+]=[N-] FPVCVHVTMPCZTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108050001427 Avidin/streptavidin Proteins 0.000 description 1
- XTHCQCZZGRVGTC-UHFFFAOYSA-M C(CO)(=O)[O-].C=C.C=C.C=C.C=C.[Na+] Chemical compound C(CO)(=O)[O-].C=C.C=C.C=C.C=C.[Na+] XTHCQCZZGRVGTC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UQKTZZXUTLATJG-UHFFFAOYSA-M C(CO)(=O)[O-].C=C.C=C.C=C.[Li+] Chemical compound C(CO)(=O)[O-].C=C.C=C.C=C.[Li+] UQKTZZXUTLATJG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WJCCNGXDBPFFSP-UHFFFAOYSA-M C(CO)(=O)[O-].C=C.C=C.[Li+] Chemical compound C(CO)(=O)[O-].C=C.C=C.[Li+] WJCCNGXDBPFFSP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical group 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N tetraethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCO UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCO ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
Imobilizované deriváty biotinu obecného vzorce 7, kde n predstavuje pocet ethylenoxy jednotek a nabývá hodnot 1-5 a symbol Pol predstavuje polystyrenovou pryskyrici tvorenou kopolymerem styrenu a divinylbenzenu, a zpusob jejich prípravy syntézou na pevné fázi.
Description
Efektivní způsob biotinylace sloučenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potřeby afinitní chromatografie.
Oblast techniky:
Vynález se týká přípravy a použití imobilizovaných derivátů biotinu s různě dlouhými řetězci polyethylenglykolu s využitím principu syntézy na pevné fázi. Popsaný koncept syntézy na pevné fázi umožňuje efektivní přípravu daných derivátů a jejich následné použití pro jednoduchou derivatizaci sloučenin obsahujících ve své struktuře karboxylovou skupinu. Takto derivatizované látky mohou být po odštěpení z pevné fáze použity pro zachycení na stacionární fázi pokrvlé avidinem Komplex vzniklý specifickou vazbou avidin-biotin případně streptavidin-biotin je pak metodou afinitní chromatografie využíván především vc farmaceutickém výzkumu při identifikaci molekulárních cílů potenciálních léčiv.
Dosavadní stav techniky
Derivatizace biologicky aktivních sloučenin molekulou biotinu je známý prostředek pro jejich studium za účelem identifikace enzymů, s kterými dané sloučeniny interagují, což výrazně přispívá ke zjištění mechanismu účinku těchto látek v buněčném systému. Biotinylované deriváty lze snadno mobilizovat metodou nekovalentní biospecifické interakce na chromatografické koloně vybavené stacionární fázi pokrytou avidinem/streptavidinem. Při následném použití mobilní fáze obsahující buněčný lyzát dochází k zachycení cílových enzymů na koloně, jejich následné eluci a identifikaci. Tento druh separační metody se nazývá afinitní chromatografie a patří mezi nej frekventovanější metody studia molekulárních cílů nových typů biologicky aktivních sloučenin (tj. potenciálních léčiv).
Za nej vhodnější typ derivátů biotinu používaných pro modifikaci látek za účelem jejich studia afinitní chromatografií jsou považovány deriváty obecné struktury 1, kde lineární řetězec (tzv. raménko) sestávající se z různého počtu ethylenoxy jednotek je na jednom konci derivatizován biotinem, přičemž druhý konec řetězce je zakončen vhodnou funkční skupinou umožňující derivatizaci příslušné látky. Vhodný počet ethylenoxy jednotek (tj. délka raménka) není přesně definován, neboť se jedná o proměnlivou veličinu závislou na způsobu interakce mezi studovanou látkou a cílovým enzymem.
• · > * • ·*· ·« · »
Χ = ΝΗ,0
Y = COOH, NH2 OH, OSO3Me, OSO3Ph...
Pro derivatizaci látek obsahujících ve své struktuře karboxylovou skupinu jsou v literatuře nejčastěji popisovány deriváty 1 (nebo jejich analoga s alternativní strukturou raménka) obsahující terminální primární aminoskupinu. Níže jsou uvedeny některé příklady takových derivátů.
V literatuře je hojně popsána příprava a použití derivátů 2 pomocí syntézy v roztoku. Některé z těchto derivátů jsou i komerčně dostupné.
Znázorněný typ raménka (tj. pouze na bázi uhlíkatého skeletu) však není považován pro účely afmitní chromatografie za zcela vhodný z důvodů jeho efektivního zkrácení způsobeného hydrofobními interakcemi methylenových skupin a nebude mu proto zde věnována další pozornost. Uvedeny budou pouze některé konkrétní příklady derivátů s raménkem na bázi ethylenoxy jednotek nebo deriváty s raménky podobné struktury, která jsou prostá hydrofobních interakcí a jsou obecně považována z pohledu struktury za optimální.
V literatuře je popsána příprava derivátu 3 s dvěma ethylenoxy jednotkami. Sloučenina je připravována pomocí syntézy v roztoku a to biotinylací příslušného mono-Boc chráněného diaminu s výtěžkem až 83%. Derivát 3 byl následně použit pro derivatizaci a studium různých typů látek pomocí afmitní chromatografie (Zhong, Chun-Long; Yao, Zhu-Jun, Huaxue Xuebao 2008, 66(9), 1074-1078; Sekine, Mitsuo; Okada, Kazuhisa; Seio, Kohji; Obata, Tohru; Sasaki, Takuma; Kakeya, Hideaki; Osada, Hiroyuki, Bioorganic & Medicinal Chemistry 2004, 12(24), 6343-6349).
• » » « » • · »
Popsána je rovněž příprava derivátu 4 s třemi ethylenoxy jednotkami připraveného biotinylaci 2-[2-[2-(2-azidoethoxy)ethoxy]ethoxy]-ethanaminu a následnou redukcí terminálního azidu trifenylfosfinem. Syntéza je opět prováděna v roztoku (Fusz, Stefan; Srivatsan, Seergazhi G.; Ackermann, Damian; Famulok, Michael, Journal of Organic Chemistry 2008, 73(13). 5069-5077).
Dále je popsána příprava a použití derivátu 5 s raménkem v kombinací ethylenoxy a propylenoxy jednotek. Daný derivát je připravován biotinylaci odpovídajícího diaminu v roztoku s výtěžkem pouhých 22% (Zhang, Zhidong; Edwards, Patrick J.; Roeske, Roger W.; Guo, Lili, Bioconjugate Chemistry 2005, 16(2), 458-464).
Podobný derivát 6 s kombinací ethylenoxy a propylenoxy jednotek byl rovněž připraven syntézou v roztoku a použit ke studiu derivátů nitrolotrioctové kyseliny (Huang, Zhaohua; Park, Joshua I.; Watson, Douglas S.; Hwang, Peter; Szoka, Francis C., Jr., Bioconjugate Chemistry 2006, 17(6), 1592-1600).
• « e
t
Podstata vynálezu
Předmětem předloženého vynálezu jsou imobilizované deriváty biotinu obecného vzorce 7
kde n přcdsta\'uje počet ethylenoxy jednotek a nabývá hodnot 1-5 a symbol Pol představuje polystyrénovou pryskyřici tvořenou kopolymerem styrenu a divinylbenzenu.
Podstatou vynálezu je dále příprava daných derivátů pomocí syntézy na pevné fázi, přičemž tato syntéza zahrnuje následující kroky (viz. Schéma 1):
• Imobilizaci 2-(2-aminoethoxy)-ethanolu pomocí reduktivní aminace na polymerní pryskyřici obsahující navázaný 4-oxy-2-methoxybenzaldehyd za vzniku derivátu 8 • Derivatizaci mobilizovaného 2-(2-aminoethoxy)-ethanolu fluorcnylmcthoxykarbonylovou protektivní skupinou za vzniku derivátu 9 • Acylaci hydroxyskupiny v derivátu 9 biotinem a následnou deprotekci aminoskupiny za vzniku derivátu 7a • Esterifikaci hydroxyskupiny ve sloučenině 9 pomocí chloridu kyseliny methansulfonové, p-toluensulfonové nebo trifluoromethansulfonanhydridem za vzniku sloučeniny 10 • Reakci esteru sulfonové kyseliny 10 s alkalickými solemi díethylenglykolu, triethylenglykolu nebo tetraethylenglykolu za vzniku sloučeniny 11
Derivatizaci sloučeniny 11 fluorenylmethoxykarbonylovou protektivní skupinou, následnou acylaci hydroxyskupiny bíotinem a deprotekci aminoskupiny za vzniku derivátu 7b-d
Pol /
I, H ~ ,OH
Pol
H 3-5
L ,comF - .OH
Schéma 1
Ve schématu bych přehodil comF za Fmoc - bylo-li by to v ChemDraw, udělal bych to.
Předmětem vynálezu je rovněž způsob použití derivátů 7a-d, kdy jsou tyto deriváty podrobeny reakci se sloučeninou obsahující karboxylovou skupinu za vzniku látek 12 a následně působením kyseliny trifluoroctové je odštěpen polymer za vzniku sloučenin 13 (viz. Schéma 2).
Schéma 2
Syntéza na pevné fází ve srovnání se syntézou v roztoku obecně poskytuje řadu výhod. Mezi největší výhody patří především jednoduché instrumentální vybavení a jednoduché experimentální provedení syntézy, dále snadná příprava malých množství látek (i při mnohastupňových syntézách) a zejména eliminace purifíkace jednotlivých meziproduktů velmi jednoduchá izolace produktů syntézy často bez nutnosti následnéhočištění. Zvláště poslední dvě jmenované výhody mají zásadní význam pro použití syntézy na pevné fázi pro účel popsaný ve vynálezu, neboť biotinylované látky pro studium afinitní chromatografií je často potřeba syntetizovat v omezeném množství, přičemž vlivem nepříznivých vlastností produktů může docházet ke značným ztrátám a obtížím při jejich izolaci, které se zvyšují při nutnosti jejich purifíkace.
To, že biotinylační jednotka je mobilizovaná na pevné fázi, tedy přináší výhody především v jednoduché a rychlé přípravě, snadné manipulaci s připravenými systémy a jednoduché finální izolaci cílových produktů. Vzhledem ktomu, že pouze některé typy biotinylačních jednotek pro derivatizaci látek v roztoku jsou komerčně dostupné a to většinou v malém množství za nepříznivou cenu, představuje popsaný vynález efektivní způsob alternativního řešení dané problematiky.
V neposlední řadě je výhodou popsané metodiky její variabilita. Volbou reaktantů lze měnit sterické parametry cílových derivátů, tj. délku raménka, která může při provedení afinitní chromatografie značným způsobem ovlivňovat kvalitu interakce mezi studovanou látkou a cílovým enzymem. Jednoduchým způsobem tedy lze připravit a kombinovat jednotlivé typy biotinylačních jednotek.
Popsaný koncept syntézy na pevné fázi, který přináší výše uvedené praktické výhody jak při vlastní přípravě, tak při použití derivátů 7, nebyl dosud v literatuře popsán.
Příklady provedení vynálezu
Podstata přípravy a použití derivátů podle vynálezu je blíže objasněna v následujících příkladech. Tyto příklady mají pouze ilustrativní charakter a v žádném případě neomezují rozsah vynálezu.
f,
Postup přípravy derivátů 7:
Příklad 1
Příprava imobilizovaného derivátu 7a (n = 1)
300 mg Aminomethylové pryskyřice vybavené BAL linkerem (loading systému 0.63 mmol/g) bylo suspendováno v roztoku 10% kyseliny octové v suchém ALV-dimethylformamidu (DMF) (3 ml) obsahujícího 1 mmol 2-(2-aminoethoxy)-ethanolu. Reakční směs byla třepána přes noc za laboratorní teploty. Poté byl přidán 1 mmol triacetoxyborohydridu sodného v roztoku 5% kyseliny octové v suchém DMF (1.5 ml). Reakční směs byla třepána 3 hodiny za laboratorní teploty, poté promyta 3 x DMF, následně třepána 10 min. s roztokem 10% piperidinu v DMF (3 ml), promyta 3 x DMF a 3 x dichloromethanem (DCM). Obdržená pryskyřice byla třepána v 0.2M roztoku fluorenylmethoxykarbonyl(hydroxysukcinimidu) (Fmoc-OSu) s ekvivalentem diisopropylethylaminu (DIEA) v DCM (3 ml) 2 hodiny za laboratorní teploty a pak promyta 3 x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v DMF (3 ml) obsahující 1 mmol 1hydroxybenzotriazolu (BtOH), 1 mmol ALV'-diisopropylkarbodiimidu (DIC), 1 mmol biotinu a 1 mmol DIEA přes noc za laboratorní teploty, poté byla pryskyřice promyta 3 x DMF. Tento reakční krok byl následně zopakován za stejných podmínek. Obdržená pryskyřice byla suspendována v roztoku 10% piperidinu v DMF (3 ml), třepána 15 minut za laboratorní teploty, promyta 3 x DMF, 3 x DCM, 3 x MeOH a vysušena v proudu dusíku.
Analýza produktu: 10 mg pryskyřice bylo třepáno v 0.5M roztoku Fmoc-OSu a DIEA v DCM (1 ml) 30 min. za laboratorní teploty, pak byla pryskyřice promyta 3 x DCM a třepána v 50%ním roztoku kyseliny trifluoroctové (TFA) v DCM (0.5 ml). Poté byl vzorek odpařen dosucha v proudu dusíku a odparek analyzován pomocí HPLC-UV-MS. Detekován produkt 7a jako odpovídající Fmoc-derivát, ESI-MS m/z = 554.6, [M+H]+. čistota 98%.
* · a · » » » *
Příklad 2
Příprava imobilizovaného derivátu 7b (n = 3)
300 mg Aminomethylové pryskyřice vybavené BAL linkerem (loading 0.63 mmol/g) bylo suspendováno v roztoku 10% kyseliny octové v suchém DMF (3 ml) obsahujícího 1 mmol 2(2-aminoethoxy)-ethanolu. Reakční směs byla třepána přes noc za laboratorní teploty. Poté byl přidán 1 mmol triacetoxyborohydridu sodného v roztoku 5% kyseliny octové v suchém DMF (1.5 ml). Reakční směs byla třepána 3 hodiny za laboratorní teploty, poté promyta 3 x DMF, následně třepána 10 min. s roztokem 10% piperidinu v DMF (3 ml), promyta 3 x DMF a 3 x DCM. Obdržená pryskyřice byla suspendována v 0.2M roztoku Fmoc-OSu s ekvivalentem DIEA v DCM (3 ml), třepána 2 hodiny za laboratorní teploty a pak promyta 3 x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v 0.2M roztoku methansulfonylchloridu v pyridinu (3 ml) dvě hodiny za laboratorní teploty, pak promyta 3 x DMF. Obdržená pryskyřice byla třepána v 1M roztoku diethylenglykolátu lithného v dimethylsulfoxidu (DMSO) (3 ml) (roztok byl připraven smícháním ekvivalentu BuLi a diethylenglykolu za laboratorní teploty), třepána přes noc za laboratorní teploty, poté promyta 3 x DMF, třepána 10 minut s 20%-ním roztokem kyseliny octové v DMF, 10 minut s 20%-ním roztokem piperidinu v DMF, promyta 3 x DMF a 3 x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v 0.2M roztoku Fmoc-OSu s ekvivalentem DIEA v DCM (3 ml) 2 hodiny za laboratorní teploty a pak promyta 3x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v DMF (3 ml) obsahující 1 mmol BtOH, 1 mmol DIC, 1 mmol biotinu a 1 mmol DIEA přes noc za laboratorní teploty, poté byla pryskyřice promyta 3 x DMF. Tento reakční krok byl následně zopakován za stejných podmínek. Obdržená pryskyřice byla suspendována v roztoku 10% piperidinu v DMF (3 ml), třepána 15 minut za laboratorní teploty, pak promyta 3 x DMF, 3 x DCM, 3 x MeOH a vysušena v proudu dusíku.
Analýza produktu: 10 mg pryskyřice bylo třepáno v 0.5M roztoku Fmoc-OSu a DIEA v DCM (1 ml) 30 min. za laboratorní teploty, pak byla pryskyřice promyta 3 x DCM a třepána v 50%ním roztoku TFA v DCM (0.5 ml). Poté byl vzorek odpařen dosucha v proudu dusíku a
O • * * · • · odparek analyzován pomocí HPLC-UV-MS. Detekován produkt 7b jako odpovídající Fmocderivát, ESI-MS m/z = 642.7, [M+H]+. čistota 95%.
Příklad 3
Příprava mobilizovaného derivátu 7c (n = 4)
300 mg Aminomethylové pryskyřice vybavené BAL linkerem (loading 0.63 mmol/g) bylo suspendováno v roztoku 10% kyseliny octové v suchém DMF (3 ml) obsahujícího 1 mmol 2(2-aminoethoxy)-ethanolu. Reakční směs byla třepána přes noc za laboratorní teploty. Poté byl přidán 1 mmol triacetoxyborohydridu sodného v roztoku 5% kyseliny octové v suchém DMF (1.5 ml). Reakční směs byla třepána 3 hodiny za laboratorní teploty, poté promyla 3 x DMF, následně třepána 10 min. s roztokem 10% piperidinu v DMF (3 ml), promyla 3 x DMF a 3 x DCM. Obdržená pryskyřice byla suspendována v 0.2M roztoku Fmoc-OSu s ekvivalentem DIEA v DCM (3 ml), třepána 2 hodiny za laboratorní teploty a pak promyta 3 x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v 0.2M roztoku methansulfonylchloridu v pyridinu (3 ml) dvě hodiny za laboratorní teploty, pak promyta 3 x DMF. Obdržená pryskyřice byla suspendována v 1M roztoku triethylenglykolátu lithného v DMSO (3 ml) (roztok byl připraven smícháním ekvivalentu BuLi a triethylenglykolu za laboratorní teploty), třepána přes noc za laboratorní teploty, poté promyta 3 x DMF, třepána 10 minut s 20%-ním roztokem kyseliny octové v DMF, 10 minut s 20%-ním roztokem piperidinu v DMF, promyta 3 x DMF a 3 x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v 0.2M roztoku Fmoc-OSu s ekvivalentem DIEA v DCM (3 ml) 2 hodiny za laboratorní teploty a pak promyla 3 x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v DMF (3 ml) obsahující 1 mmol BtOH, 1 mmol DIC, 1 mmol biotinu a 1 mmol DIEA přes noc za laboratorní teploty, poté byla pryskyřice promyta 3 x DMF. Tento reakční krok byl následně zopakován 2x za stejných podmínek. Obdržená pry skyřice byla suspendována v roztoku 10% piperidinu v DMF (3 ml), třepána 15 minut za laboratorní teploty, pak promyta 3 x DMF, 3 x DCM, 3 x MeOH a vysušena v proudu dusíku.
• « « · • *
M t · ·
Analýza produktu: 10 mg pryskyřice bylo třepáno v 0.5M roztoku Fmoc-OSu a DIEA v DCM (1 ml) 30 min. za laboratorní teploty, pak byla pryskyřice promyta 3 x DCM a třepána v 50%ním roztoku TFA v DCM (0.5 ml). Poté byl vzorek odpařen dosucha v proudu dusíku a odparek analyzován pomocí HPLC-UV-MS. Detekován produkt 7c jako odpovídající Fmocderivát, ESI-MS m!z = 686.8, [M+H]+. čistota 95%.
Příklad 4
Příprava imobilizovaného derivátu 7d (n = 5)
300 mg Aminomethylové pryskyřice vybavené BAL linkerem (loading 0.63 mmol/g) bylo suspendováno v roztoku 10% kyseliny octové v suchém DMF (3 ml) obsahujícího 1 mmol 2(2-aminoethoxy)-ethanolu. Reakční směs byla třepána přes noc za laboratorní teploty. Poté byl přidán 1 mmol triacetoxyborohydridu sodného v roztoku 5% kyseliny octové v suchém DMF (1.5 ml). Reakční směs byla třepána 3 hodiny za laboratorní teploty, poté promyta 3 x DMF, následně třepána 10 min. s roztokem 10% piperidinu v DMF (3 ml), promyta 3 x DMF a 3 x DCM. Obdržená pryskyřice byla suspendována v 0.2M roztoku Fmoc-OSu s ekvivalentem DIEA v DCM (3 ml), třepána 2 hodiny za laboratorní teploty a pak promyta 3 x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v 0.2M roztoku methansulfonylchloridu v pyridinu (3 ml) dvě hodiny za laboratorní teploty, pak promyta 3 x DMF. Obdržená pry skyřice byla suspendována v 2M roztoku tetraethylenglykolátu sodného v DMSO (3 ml) (roztok byl připraven smícháním ekvivalentu NaH a tetraethylenglykolu za laboratorní teploty), třepána přes noc za laboratorní teploty, poté promyta 3 x DMF, třepána 10 minut s 20%-ním roztokem kyseliny octové v DMF, 10 minut s 20%-ním roztokem piperidinu v DMF, promyta 3 x DMF a 3 x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v 0.2M roztoku Fmoc-OSu s ekvivalentem DIEA v DCM (3 ml) 2 hodiny za laboratorní teploty a pak promyta 3 x DCM. Obdržená pryskyřice byla třepána v DMF (3 ml) obsahující 1 mmol BtOH, 1 mmol DIC, 1 mmol biotinu a 1 mmol DIEA přes noc za laboratorní teploty, poté byla pryskyřice promyta 3 x DMF. Tento reakční krok byl následně zopakován 3 x za stejných podmínek. Obdržená pryskyřice byla suspendována v roztoku 10% piperidinu v DMF (3 ml), třepána 15 minut za laboratorní teploty, pak promyta 3 x DMF, 3 x DCM, 3 x MeOFI a vysušena v proudu dusíku.
Analýza produktu: 10 mg pryskyřice bylo třepáno v 0.5M roztoku Fmoc-OSu a DIEA v DCM (1 ml) 30 min. za laboratorní teploty, pak byla pryskyřice promyta 3 x DCM a třepána v 50%ním roztoku TFA v DCM (0.5 ml). Poté byl vzorek odpařen dosucha v proudu dusíku a odparek analyzován pomocí HPLC-UV-MS. Detekován produkt 7d jako odpovídající Fmocderivát, ESI-MS m/z = 730.8, [M+H]+. čistota 90%.
Příklad 5
Postup použití derivátů 7:
Obecný postup derivatizace sloučenin s karboxylovou skupinou použitím mobilizovaných derivátů 7:
250 mg Výchozí aminomethylové pryskyřice bylo podrobeno syntéze derivátů 7 dle výše uvedených postupů. Výsledná pryskyřice byla třepána s roztokem 0.5 mmol příslušné karboxylové kyseliny, 0.5 mmol BtOH a 0.5 mmol DIC ve směsi DMF a DCM (1:1, 2.5 ml) přes noc za laboratorní teploty. Obdržená pryskyřice byla promyta 3 x DMF. 3 x DCM a poté třepána v 50%-ním roztoku TFA v DCM (2.5 ml). Poté byla pryskyřice odfiltrována, filtrát odpařen dosucha v proudu dusíku a odparek sonifíkován v diethyletheru. Vvsrážená pevná látka byla odsáta a promyta diethyletherem. V případě, že vzhledem k rozpustnosti látky nebylo možné produkt vysrážet diethyletherem, byl odparek rozpuštěn v chloroformu (5 ml) a protřepán s 5%-ním roztokem hydrogenuhličitanu sodného (5 ml). Organická vrstva byla oddělena, vysušena síranem sodným a zahuštěna dosucha. V obou případech se výtěžky pohybují v rozmezí 70-90% teorie.
Příklady použití:
| Studovaná karboxylová kyselina | Biotinylační jednotka | Sloučenina 13 m/z ([M-H]*) (HPLC-UV-MS) | Sloučenina 13 Čistota (%) (HPLC-UV-MS) |
| Fmoc-L-Ala | 7a | 625.7 | 95 |
| Benzoová kyselina | 7a | 436.2 | 95 |
| Nikotinová kyselina | 7a | 437.4 | 93 |
| Propionová kyselina | 7a | 388.2 | 95 |
| Fmoc-L-Ala | 7b | 713.8 | 92 |
| Benzoová kyselina | 7b | 524.6 | 93 |
| Nikotinová kyselina | 7b | 526.6 | 91 |
| Propionová kyselina | 7b | 490.6 | 92 |
| Fmoc-L-Ala | 7c | 757.8 | 93 |
| Benzoová kyselina | 7c | 568.7 | 90 |
| Nikotinová kyselina | 7c | 569.7 | 89 |
| Propionová kyselina | 7c | 534.6 | 90 |
| Fmoc-L-Ala | 7d | 801.8 | 88 |
| Benzoová kyselina | 7d | 612.7 | 84 |
| Nikotinová kyselina | 7d | 613.7 | 85 |
| Propionová kyselina | 7d | 578.7 | 85 |
Struktura vybraných derivátů 13 byla potvrzena pomocí *H a l3C NMR spektroskopie.
Průmyslová využitelnost
Imobilizované deriváty obecného vzorce 7 jsou vhodné pro efektivní derivatizaci sloučenin obsahujících ve své struktuře karboxylovou skupinu a mohou tak sloužit k rutinní derivatizaci takových sloučenin a následnému studiu jejich vlastností pomocí afinitní chromatografie. To je využitelné zejména ve farmaceutickém výzkumu při určování molekulárního cíle biologicky aktivních látek.
Claims (4)
- Patentové nároky1. Imobilizované deriváty biotinu obecného vzorce 7 vyznačujících se tím, Pol\ /\HL N že n představuje počet ethylenoxy jednotek a nabývá hodnot 1-5 a symbol Pol představuje polystyrénovou pryskyřici tvořenou kopolymerem styrenu a divinylbenzenu.
- 2. Způsob přípravy derivátů podle nároku 1 vyznačující se tím, že sloučeniny obecného vzorce 7 se připravují syntézou na pevné fázi (polymeru).
- 3. Způsob přípravy podle nároku 2 vyznačující se tím, že syntéza zahrnuje kroky:• Imobilizaci 2-(2-aminoethoxy)-ethanolu pomocí reduktivní aminace na polymerní pryskyřici obsahující navázaný 4-oxy-2-methoxybenzaldehyd za vzniku derivátu 8 • Derivatizaci mobilizovaného 2-(2-aminocthoxy)-cthanolu fluorenylmethoxykarbonylovou protektivní skupinou za vzniku derivátu 9 • Acylaci hydroxyskupiny v derivátu 9 biotinem a následnou deprotekci aminoskupiny za vzniku derivátu 7a • Esterifikaci hydroxyskupiny ve sloučenině 9 pomocí chloridu kyseliny methansulfonové, p-toluensulfonové nebo trifluoromethansulfonanhydridem za vzniku sloučeniny 10 • Reakci esteru sulfonové kyseliny 10 s alkalickými solemi diethylenglykolu, triethylenglykolu nebo tetraethylenglykolu za vzniku sloučeniny 11 • Derivatizaci sloučeniny 11 fluorenylmethoxykarbonylovou protektivní skupinou, následnou acylaci hydroxyskupiny biotinem a deprotekci aminoskupiny za vzniku derivátu 7b-d,
- 4. Způsob použití derivátů podle nároku 1 vyznačující se tím, že sloučeniny typu 7 jsou podrobeny reakci se sloučeninou obsahující karboxylovou skupinu za vzniku látek 12 a následně působením kyseliny trifluoroctové je odštěpen polymer za vzniku sloučenin 13.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20100230A CZ302510B6 (cs) | 2010-03-29 | 2010-03-29 | Efektivní zpusob biotinylace sloucenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20100230A CZ302510B6 (cs) | 2010-03-29 | 2010-03-29 | Efektivní zpusob biotinylace sloucenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2010230A3 true CZ2010230A3 (cs) | 2010-09-08 |
| CZ302510B6 CZ302510B6 (cs) | 2011-06-22 |
Family
ID=42676575
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20100230A CZ302510B6 (cs) | 2010-03-29 | 2010-03-29 | Efektivní zpusob biotinylace sloucenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ302510B6 (cs) |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4709037A (en) * | 1987-02-17 | 1987-11-24 | Hoechst Celanese Corporation | Biotinylating agents |
| DE4302241A1 (de) * | 1993-01-27 | 1994-07-28 | Boehringer Mannheim Gmbh | Neues Biotinylierungsreagenz |
| AU2052497A (en) * | 1996-02-08 | 1997-08-28 | Board Of Regents Of The University Of Washington, The | Biotin-containing compounds, biotinylation reagents and methods |
| SE0002287D0 (sv) * | 2000-06-16 | 2000-06-16 | Department Of Radiation Oncolo | Biotinderivat |
| FR2814463B1 (fr) * | 2000-09-22 | 2002-11-15 | Sanofi Synthelabo | Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine |
| EP2013217A1 (en) * | 2006-05-02 | 2009-01-14 | Universita' degli Studi di Roma " Tor Vergata" | Design and synthesis of biotinylated probes for n-acyl-ethanolamines |
-
2010
- 2010-03-29 CZ CZ20100230A patent/CZ302510B6/cs not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ302510B6 (cs) | 2011-06-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5256043B2 (ja) | 複数の置換基を有する抗菌４，５−置換アミノグリコシドアナログ | |
| US20030176670A1 (en) | Multivalent macrolide antibiotics | |
| JP7296396B2 (ja) | アマニチン類抗体複合物 | |
| Shih et al. | Combinatorial approach toward synthesis of small molecule libraries as bacterial transglycosylase inhibitors | |
| CN110407749A (zh) | 一种含有二硫键的光亲和链接体及制备方法和应用 | |
| WO1999061583A2 (en) | Carbohydrate-based scaffold compounds, combinatorial libraries and methods for their construction | |
| Massarenti et al. | Fluorous-tag assisted synthesis of bile acid–bisphosphonate conjugates via orthogonal click reactions: an access to potential anti-resorption bone drugs | |
| Barbie et al. | Total synthesis of desoxycyclomarin C and the cyclomarazines A and B | |
| TR201819440T4 (tr) | Yüklü çapraz bağlayıcıların hazırlanmasına yönelik yöntemler. | |
| US20220251545A1 (en) | Fragment-based screening to identify small molecules that selectively bind rna | |
| EP3137898A2 (en) | Fluorescent molecular sensor for targeting changes in protein surfaces, and methods of use thereof | |
| CA3234324A1 (en) | Peptide | |
| Shaikh et al. | Synthesis of glycocluster peptides | |
| CZ2010230A3 (cs) | Efektivní zpusob biotinylace sloucenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie | |
| Prats-Alfonso et al. | Facile solid-phase synthesis of biotinylated alkyl thiols | |
| CN116217655B (zh) | 一种连接基药物偶联物的中间体的制备方法 | |
| CN110873772B (zh) | 一种探针及其合成方法和应用 | |
| CN110483398A (zh) | 一种含有生物可降解基团的光亲和链接体及制备方法和应用 | |
| Kukielski et al. | Rapid solid-phase syntheses of a peptidic-aminoglycoside library | |
| EP2627634B1 (en) | A new dimedon derivative and a method for the purification of pna and peptide oligomers | |
| CN113924304B (zh) | 四官能性化学探针和使用所述探针鉴定来自于活细胞或活组织的靶膜蛋白的方法 | |
| Sucholeiki et al. | An affinity chromatographic method for the purification of water-insoluble peptides | |
| CZ2010229A3 (cs) | Efektivní zpusob biotinylace aminosloucenin pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie | |
| CN110218228B (zh) | 用于固定蛋白的化合物和固定蛋白的方法 | |
| US20250147030A1 (en) | Peptide-encoded libraries of small molecules for de novo drug discovery |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20160329 |