CN114315721A - 一种光亲和连接链及其合成方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种光亲和连接链及其合成方法与应用，涉及分子探针合成技术领域。该方法由1,8‑二氨基‑3,6‑二氧杂辛烷与二碳酸二叔丁酯在氮气保护下得到带Boc保护基的含氧连接链，再与N,N'‑羰基二咪唑活化的4‑[3‑(三氟甲基)‑3H‑双吖丙啶‑3‑基]苯甲酸反应得到带Boc保护基的光亲和连接链中间体，将带Boc保护基的光亲和连接链中间体在盐酸的作用下脱除保护基得到光亲和连接链。本发明的具有连接链的光亲和性分子可与药物小分子进行光交联反应构建活性分子探针，与含有二硫键、碳碳双键的光亲和链接链相比具有良好亲水性和更高的稳定性，可固定于多种基质上并广泛应用于各种合成药物、天然药物和中药小分子及复杂体系。
Description
技术领域
本发明属于分子探针合成技术领域，具体涉及一种光亲和连接链及其合成方法与应用。
背景技术
光亲和标记技术是由基于蛋白质组的分析技术衍生而来的靶标鉴定技术，集合了现代分子生物学、细胞生物学、有机化学等多学科的优势而不断发展成为分子水平上研究配体与受体相互作用的核心技术之一。通过光活性基团在特定波长光照射下产生的高反应性的中间体,可以直接与药物分子特异性结合的蛋白质进行不可逆共价结合从而实现对药物靶标蛋白分子的捕获，常应用于药物新靶点的确定及靶标蛋白与小分子化合物作用模式的探究。
光亲和标记分子探针作为发现蛋白与小分子、生物大分子、蛋白或受体间相互作用的重要工具，一般由活性分子、光亲和交联基团、连接部位及报告基团组成，但应用于中药领域存在诸多限制：①对于结构复杂的天然小分子，化学修饰难度较大且无法进行充分的构效关系研究；②化学标记后的小分子可能因化学性质的改变而与靶蛋白结合造成假阳性结果；③构建的分子探针仅用于单一成分靶点的筛选，对于化学成分多样的中药而言需要极大的工作量等。目前，含二硫键、碳碳双键及支链的光亲和连接链存在亲水性和稳定性较差的问题，且应用范围具有一定的局限性。基于此，需要设计合成一种具有良好亲水性和更高稳定性的普适性光亲和连接链，以固定到不同载体上用于中药复杂成分的靶标筛选。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术不足，提供一种光亲和连接链合成方法，该光亲和连接链具有良好的亲水性和较高的稳定性，可用于构建多种中药活性分子探针从而实现药物靶标的快速筛选。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：一种光亲和连接链，其结构式如下：
本发明提出了一种上述光亲和连接链的合成方法，包括以下步骤：
(1)1,8-二氨基-3,6-二氧杂辛烷与二碳酸二叔丁酯在氮气保护下得到带Boc保护基的含氧连接链；所述1,8-二氨基-3,6-二氧杂辛烷与二碳酸二叔丁酯的投料比为2～10：1；
(2)4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸在N,N'-羰基二咪唑作用下与步骤(1)制得的带Boc保护基的含氧连接链反应得到带Boc保护基的光亲和连接链中间体；所述4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸、N,N'-羰基二咪唑和带Boc保护基的含氧连接链的物质的量比为1：1.0～1.3：1.4～1.6；
(3)将步骤(2)制得的带Boc保护基的光亲和连接链中间体在4M盐酸作用下脱除保护基得到光亲和连接链。
进一步地，所述步骤(1)具体为：将1,8-二氨基-3,6-二氧杂辛烷按质量体积比49.0～126.8mg/mL溶于无水二氯甲烷；冰水浴下充分搅拌至体系温度冷却至0℃，在氮气保护下缓慢滴加浓度为0.036～0.113mol/L的二碳酸二叔丁酯的二氯甲烷溶液；在室温下搅拌反应过夜，反应液经旋蒸浓缩后萃取，取有机相洗涤并干燥，抽滤后旋蒸除去溶剂得到带Boc保护基的含氧连接链。
进一步地，所述步骤(2)具体为：
将4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸按质量体积比12.7～14.6mg/mL溶于无水二氯甲烷，避光、氮气保护、0℃下充分搅拌，加入N,N-羰基二咪唑；氮气保护、0℃下充分搅拌，滴加浓度为0.2150～0.3125mol/L带Boc保护基的含氧连接链的二氯甲烷溶液；滴加完毕后于室温、避光条件下搅拌反应过夜；反应液经萃取后得到有机相，有机相经洗涤干燥、抽滤后旋蒸除去溶剂，得粗品，用硅胶柱色谱分离纯化得到带Boc保护基的光亲和连接链中间体。
进一步地，所述步骤(2)中的硅胶柱色谱条件为DCM:MeOH 99.5:0.5→99:1→98:2。
进一步地，所述步骤(3)的具体过程为：将带Boc保护基的光亲和连接链中间体按质量体积比12.5～20.0mg/mL溶于甲醇，向体系中加入浓度为4M的盐酸溶液，所述带Boc保护基的光亲和连接链中间体与4M盐酸的质量体积比为16.7～30.8mg/mL；室温避光条件下搅拌反应过夜，反应液旋蒸浓缩后加入纯水和乙酸乙酯的混合液进行溶解，所述纯水和乙酸乙酯的体积比为2.5～3:4，室温搅拌下缓慢加入碳酸钾，所述碳酸钾与4M盐酸的质量体积比为0.25～0.46g/mL；充分反应，维持pH＝7-8；反应液经萃取后得到有机相，有机相经洗涤干燥、抽滤后旋蒸除去溶剂，氮气吹干后得到光亲和连接链。
进一步地，所述步骤(3)中的萃取具体为依次用纯水、盐水、二氯甲烷、二氯甲烷与甲醇按体积比4：1混合的萃取剂进行萃取；洗涤所用试剂为饱和NaCl溶液。
本发明提出了上述基于光亲和连接链与中药活性小分子进行光交联反应的应用。
进一步地，所述中药活性小分子为皂苷类、黄酮类、木脂素和糖类等化合物。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明通过将光亲和基团三氟甲基取代的双吖丙啶与含氧连接链连接获得光亲和连接链。该连接链可以与多种中药活性小分子结合构建光交联分子探针，并固定到不同载体上进行活性小分子与靶标蛋白相互作用的研究。本发明的光亲和连接链具有较好的亲水性和稳定性，合成过程中所用的试剂选择毒性相对较小的二氯甲烷和乙醇，降低了对环境和实验人员的危害，制备方法简单，易于实现，反应原料廉价易得，产品易纯化分离且收率较高。
本发明中的光亲和连接链具有良好的稳定性和光交联活性，能够以非选择性的方式交联多种中药活性小分子，只需紫外照射数分钟至数小时即可实现与小分子的结合，无需构效关系研究和相应的化学修饰，活性小分子的结构不受影响，从而可以鉴定到更多可能结合的靶蛋白。光亲和连接链与活性化合物交联构建的分子探针可以固定到载玻片、磁珠等多种载体上，便于对靶标蛋白的捕获及定性表征和富集。这一分子探针中的含氧直链连接链不仅具有较好的亲水性，同时延长了连接链的长度，增加了活性小分子与靶蛋白特异性结合的机率，可改善传统光亲和标记技术应用于研究小分子-靶蛋白相互作用时工作量大、操作繁琐、假阳性等局限，具有操作便捷和适用性强等特点。
附图说明
图1为本发明提供的光亲和连接链合成路线图；
图2为光亲和连接链核磁氢谱图；
图3为本发明提供的光亲和连接链与罗丹明6G光交联反应前后的薄层色谱表征示意图。
具体实施方式
下面结合附图和具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
本发明通过使用1,8-二氨基-3,6-二氧杂辛烷、4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸等设计合成一种光亲和连接链，该连接链可与中药活性小分子结合以构建分子探针。
本发明提供的光亲和连接链，其结构如下：
本发明提供的光亲和连接链名称如下：
N-[2-[2-(2-Aminoethoxy)ethoxy]ethyl]-4-[3-(trifluoromethyl)-3H-diazirin-3-yl]benzamide。
下面结合图1所示的合成路线和具体的合成实例来详细说明本发明提供的光亲和连接链合成方法。
参见图1，图1为本发明提供的光亲和连接链合成路线图。
其中，化合物1为1,8-二氨基-3,6-二氧杂辛烷，化合物2为二碳酸二叔丁酯，化合物3为2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯，化合物4为4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸，化合物5为1,1-Dimethylethyl 12-oxo-12-[4-[3-(trifluoromethyl)-3H-diazirin-3-yl]phenyl]-5,8-dioxa-2,11-diazadodecanoate，化合物6为N-[2-[2-(2-Aminoethoxy)ethoxy]ethyl]-4-[3-(trifluoromethyl)-3H-diazirin-3-yl]benzamide。
试剂与条件：(a)DCM,N2,3h,0℃dropwisert；rt,overnight；(b)CDI,DCM,N2,1h,0℃dropwise；rt,overnight；(c)4M HCl,rt,dropwise；MeOH,EtOAc,K2CO3,rt。
本发明提出的一种光亲和连接链合成方法，包括以下步骤：
(1)1,8-二氨基-3,6-二氧杂辛烷与二碳酸二叔丁酯在氮气保护下得到带Boc保护基的含氧连接链。具体操作为：
将1,8-二氨基-3,6-二氧杂辛烷溶于无水二氯甲烷，冰水浴下搅拌30min至体系温度冷却为0℃后在氮气保护下缓慢滴加二碳酸二叔丁酯的二氯甲烷溶液，控制滴加速度使3h内滴加完毕，室温条件下继续搅拌反应过夜。反应液经旋蒸浓缩后用纯水和二氯甲烷萃取，取有机相分别用饱和NaCl溶液和纯水洗涤一次，无水硫酸钠干燥有机相，抽滤后旋蒸除去溶剂即得带Boc保护基的含氧连接链。
(2)4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸在N,N'-羰基二咪唑作用下与带Boc保护基的含氧连接链反应得到带Boc保护基的光亲和连接链中间体。具体操作为：
将4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸溶于无水二氯甲烷，避光、氮气保护、0℃下搅拌15min，加入N,N-羰基二咪唑。氮气保护、0℃下搅拌反应1h后滴加带Boc保护基的含氧连接链的二氯甲烷溶液，滴加完毕后于室温、避光条件下搅拌反应过夜。反应液用纯水和二氯甲烷萃取，有机相分别用1M柠檬酸水溶液洗涤两次，饱和碳酸氢钠溶液、饱和NaCl溶液洗涤一次，有机相经无水硫酸钠干燥、抽滤后旋蒸除去溶剂，粗产品经硅胶柱色谱(DCM:MeOH 99.5:0.5→99:1→98:2)分离纯化后即得。
(3)将带Boc保护基的光亲和连接链中间体在一定浓度的盐酸作用下脱除保护基得到光亲和连接链。具体操作为：
将带Boc保护基的光亲和连接链中间体溶于甲醇，向体系中加入4M盐酸，室温避光条件下搅拌反应过夜，反应液旋蒸浓缩后加入纯水和乙酸乙酯溶解，室温搅拌下加入碳酸钾，反应完毕，控制pH＝7-8。反应液依次用盐水、二氯甲烷、二氯甲烷与甲醇按体积比4：1混合的萃取剂进行萃取，合并有机相后用饱和NaCl溶液洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥、抽滤后旋蒸除去溶剂，氮气干燥得到光亲和连接链。
实施例1
(1)1,8-二氨基-3,6-二氧杂辛烷与二碳酸二叔丁酯在氮气保护下得到带Boc保护基的含氧连接链。具体为：
将1,8-二氨基-3,6-二氧杂辛烷(0.500g,3.37mmol)溶于10mL无水二氯甲烷，冰水浴下搅拌30min至体系温度冷却至0℃后在氮气保护下缓慢滴加二碳酸二叔丁酯(0.360g,1.65mmol)的二氯甲烷溶液(20mL)，控制滴加速度使3h内滴加完毕，在室温条件下继续搅拌反应过夜，TLC监测反应过程。反应液经旋蒸浓缩后用纯水(30mL)和二氯甲烷(3×25mL)萃取，取有机相分别用饱和NaCl溶液(30mL)和纯水(30mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥有机相，抽滤后旋蒸除去溶剂得到目标化合物，为淡黄色油状物，重0.320g，收率78.10％。
(2)4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸在N,N'-羰基二咪唑作用下与步骤(1)制得的带Boc保护基的含氧连接链反应得到带Boc保护基的光亲和连接链中间体。其具体实施过程如下：
将4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸(0.191g,0.83mmol)溶于15mL无水二氯甲烷，避光、氮气保护、0℃下搅拌15min，加入N,N-羰基二咪唑(0.135g,0.83mmol)，氮气保护、0℃下搅拌反应1h后滴加带Boc保护基的含氧连接链(0.310g,1.25mmol)的二氯甲烷溶液(4mL)，滴加完毕后于室温、避光条件下搅拌反应过夜。反应液用纯水(70mL)和二氯甲烷(2×70mL)萃取，有机相分别用1M柠檬酸水溶液(2×70mL)，饱和碳酸氢钠溶液(70mL)、饱和NaCl溶液(70mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥、抽滤后旋蒸除去溶剂，得粗品，用硅胶柱色谱(DCM:MeOH 99.5:0.5→99:1→98:2)分离纯化得到目标化合物，为黄色油状物，重0.316g，收率82.68％，得到带Boc保护基的光亲和连接链中间体。
LC-MS(ESI，m/z):461.4[M+H]+
(3)将步骤(2)制得的带Boc保护基的光亲和连接链中间体在4M的盐酸作用下脱除保护基得到光亲和连接链。具体实施过程如下：
将带Boc保护基的光亲和连接链中间体(0.134g，0.29mmol)溶于8mL甲醇，向体系中加入4M盐酸(6mL)，室温避光条件下搅拌反应过夜，反应液旋蒸浓缩后加入纯水(6mL)和乙酸乙酯(10mL)溶解，室温搅拌下缓慢加入碳酸钾(1.51g)，反应30min，反应完毕，控制pH＝7-8。反应液依次用盐水(75mL)、二氯甲烷(100mL)、二氯甲烷与甲醇按体积比4：1混合的萃取剂(100mL)进行萃取，合并有机相后用饱和NaCl溶液(175mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥、抽滤后旋蒸除去溶剂，氮气干燥后得到目标化合物，为淡黄色油状物，重0.096g，收率91.86％，核磁氢谱图如图2所示，光亲和连接链。
LC-MS(ESI，m/z):361.2[M+H]+
实施例2
(1)1,8-二氨基-3,6-二氧杂辛烷与二碳酸二叔丁酯在氮气保护下得到带Boc保护基的含氧连接链。具体为：
将1,8-二氨基-3,6-二氧杂辛烷(0.490g,3.31mmol)溶于10mL无水二氯甲烷，冰水浴下搅拌30min至体系温度冷却至0℃后在氮气保护下缓慢滴加二碳酸二叔丁酯(0.159g,0.73mmol)的二氯甲烷溶液(20mL)，控制滴加速度使3h内滴加完毕，在室温条件下继续搅拌反应过夜，TLC监测反应过程。反应液经旋蒸浓缩后用纯水(30mL)和二氯甲烷(3×25mL)萃取，取有机相分别用饱和NaCl溶液(30mL)和纯水(30mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥有机相，抽滤后旋蒸除去溶剂得到目标化合物，为淡黄色油状物，重0.125g，收率68.96％。
(2)4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸在N,N'-羰基二咪唑作用下与步骤(1)制得的带Boc保护基的含氧连接链反应得到带Boc保护基的光亲和连接链中间体。其具体实施过程如下：
将4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸(0.200g,0.87mmol)溶于15mL无水二氯甲烷，避光、氮气保护、0℃下搅拌15min，加入N,N-羰基二咪唑(0.150g,0.92mmol)，氮气保护、0℃下搅拌反应1h后滴加带Boc保护基的含氧连接链(0.320g,1.29mmol)的二氯甲烷溶液(6mL)，滴加完毕后于室温、避光条件下搅拌反应过夜。反应液用纯水(70mL)和二氯甲烷(2×70mL)萃取，有机相分别用1M柠檬酸水溶液(2×70mL)，饱和碳酸氢钠溶液(70mL)、饱和NaCl溶液(70mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥、抽滤后旋蒸除去溶剂，得粗品，用硅胶柱色谱(DCM:MeOH 99.5:0.5→99:1→98:2)分离纯化得到目标化合物，为黄色油状物，重0.334g，收率84.34％，得到带Boc保护基的光亲和连接链中间体。
(3)将步骤(2)制得的带Boc保护基的光亲和连接链中间体在4M的盐酸作用下脱除保护基得到光亲和连接链。具体实施过程如下：
将带Boc保护基的光亲和连接链中间体(0.518g，1.12mmol)溶于35mL甲醇，向体系中加入4M盐酸(24mL)，室温避光条件下搅拌反应过夜，反应液旋蒸浓缩后加入纯水(30mL)和乙酸乙酯(40mL)溶解，室温搅拌下缓慢加入碳酸钾(10.4g)，反应1h，反应完毕，控制pH＝7-8。反应液依次用盐水(100mL)、二氯甲烷(150mL)、二氯甲烷与甲醇按体积比4：1混合的萃取剂(100mL)进行萃取，合并有机相后用饱和NaCl溶液(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥、抽滤后旋蒸除去溶剂，氮气干燥后得到目标化合物，为淡黄色油状物，重0.358g，收率91.56％。
实施例3
(1)1,8-二氨基-3,6-二氧杂辛烷与二碳酸二叔丁酯在氮气保护下得到带Boc保护基的含氧连接链。具体为：
将1,8-二氨基-3,6-二氧杂辛烷(1.990g,13.43mmol)溶于20mL无水二氯甲烷，冰水浴下搅拌30min至体系温度冷却至0℃后在氮气保护下缓慢滴加二碳酸二叔丁酯(0.301g,1.38mmol)的二氯甲烷溶液(20mL)，控制滴加速度使3h内滴加完毕，在室温条件下继续搅拌反应过夜，TLC监测反应过程。反应液经旋蒸浓缩后用纯水(30mL)和二氯甲烷(3×25mL)萃取，取有机相分别用饱和NaCl溶液(30mL)和纯水(30mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥有机相，抽滤后旋蒸除去溶剂得到目标化合物，为淡黄色油状物，重0.310g，收率90.46％。
(2)4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸在N,N'-羰基二咪唑作用下与步骤(1)制得的带Boc保护基的含氧连接链反应得到带Boc保护基的光亲和连接链中间体。其具体实施过程如下：
将4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸(0.657g,2.85mmol)溶于45mL无水二氯甲烷，避光、氮气保护、0℃下搅拌15min，加入N,N-羰基二咪唑(0.482g,2.97mmol)，氮气保护、0℃下搅拌反应1h后滴加带Boc保护基的含氧连接链(1.070g,4.31mmol)的二氯甲烷溶液(20mL)，滴加完毕后于室温、避光条件下搅拌反应过夜。反应液用纯水(140mL)和二氯甲烷(70mL)萃取，有机相分别用1M柠檬酸水溶液(3×100mL)，饱和碳酸氢钠溶液(120mL)、饱和NaCl溶液(2×100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥、抽滤后旋蒸除去溶剂，得粗品，用硅胶柱色谱(DCM:MeOH 99.5:0.5→99:1→98:2)分离纯化得到目标化合物，为黄色油状物，重1.208g，收率92.07％，得到带Boc保护基的光亲和连接链中间体。
(3)将步骤(2)制得的带Boc保护基的光亲和连接链中间体在4M的盐酸作用下脱除保护基得到光亲和连接链。具体实施过程如下：
将带Boc保护基的光亲和连接链中间体(2.000g，4.34mmol)溶于100mL甲醇，向体系中加入4M盐酸(65mL)，室温避光条件下搅拌反应过夜，反应液旋蒸浓缩后加入纯水(55mL)和乙酸乙酯(80mL)溶解，室温搅拌下缓慢加入碳酸钾(30.2g)，反应1h，反应完毕，控制pH＝7-8。反应液静置分层后，水相依次用二氯甲烷(100mL)、二氯甲烷与甲醇按体积比4：1混合的萃取剂(100mL)进行萃取，收集有机相与分层后的乙酸乙酯相合并旋蒸。二氯甲烷(150mL)溶解浓缩液后用饱和NaCl溶液(2×100mL)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥、抽滤后旋蒸除去溶剂，氮气干燥后得到目标化合物，为淡黄色油状物，重1.429g，收率91.42％。
本领域关于光亲和连接链的合成收率较低，本发明所述方法的优势在于放大反应的同时保持收率大于90％，远优于本领域其他方法。
实施例4
本发明方法制得的光亲和连接链能够与皂苷类、黄酮类、木脂素类和糖类等中药活性小分子进行光交联。
本发明的光亲和连接链与小分子发生光交联反应的原理为：光亲和连接链中的三氟甲基苯基双吖丙啶基团在特定波长的紫外光照射下产生高反应性的卡宾，可以与小分子中的C(sp2)-H、C(sp3)-H、O-H、N-H等多种化学键发生反应，以具有荧光特性的小分子罗丹明6G为例的具体实施过程如下：
将合成得到的光亲和连接链、罗丹明6G溶于甲醇中，溶解完全后取样，将反应物真空浓缩得到紫红色浓缩物附着于圆底烧瓶内壁，将其置于365nm UV照射4h，取出后加入等量甲醇溶解，取样进行薄层色谱(展开剂DCM:MeOH＝9:1)分析，罗丹明6G与光亲和连接链发生光交联反应前后在不同光源下的检视结果如图3所示：
图3中的A检视光源为日光，图3中的B检视光源为254nm紫外光，图3中的C检视光源为365nm紫外光，其中1为罗丹明6G与光亲和连接链365nm UV照射前甲醇溶液，3为罗丹明6G与光亲和连接链365nm UV照射后甲醇溶液，2为罗丹明6G与光亲和连接链365nm UV照射前后的甲醇溶液混合点。
试剂与条件:MeOH,365nm UV,4h，展开剂：DCM:MeOH＝9:1，t:25℃，RH:49％。
从图3可以看出，光亲和连接链与罗丹明6G在紫外照射下发生光交联反应后生成多种具有荧光特性的产物，且与反应物相比荧光变浅，同时原罗丹明6G的荧光斑点消失，说明本发明合成的光亲和连接链具有较好的反应活性，且过量时能够与罗丹明6G完全反应。
本发明提出了一种光亲和连接链合成方法，在不影响光反应活性基团三氟甲基苯基双吖丙啶稳定性和反应活性的基础上引入末端为氨基的含氧连接长链，增强其亲水性和稳定性，以便适合于固定到不同载体上与药物活性小分子反应后进行靶标蛋白的捕获和表征，通过含氧连接长链延长光反应基团与载体之间距离，增加活性小分子与更多靶蛋白特异性结合的机率，消除原有靶蛋白鉴定方法步骤繁琐，游离状态下示踪困难的缺点，用于研究小分子与靶蛋白的相互作用，具有操作简单、通量高、速度快和适用性强等特点。
以上所述实施例并非仅限于本发明的保护范围，凡是基于本发明的基本思路而进行的修改或变动均属于本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种光亲和连接链，其特征在于，其结构式如下：
2.一种权利要求1所述的光亲和连接链的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)1，8-二氨基-3，6-二氧杂辛烷与二碳酸二叔丁酯在氮气保护下得到带Boc保护基的含氧连接链；所述1，8-二氨基-3，6-二氧杂辛烷与二碳酸二叔丁酯的投料比为2～10∶1；
(2)4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸在N，N′-羰基二咪唑作用下与步骤(1)制得的带Boc保护基的含氧连接链反应得到带Boc保护基的光亲和连接链中间体；所述4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸、N，N′-羰基二咪唑和带Boc保护基的含氧连接链的物质的量比为1∶1.0～1.3∶1.4～1.6；
(3)将步骤(2)制得的带Boc保护基的光亲和连接链中间体在4M盐酸作用下脱除保护基得到光亲和连接链。
3.根据权利要求2所述的光亲和连接链的合成方法，其特征在于，所述步骤(1)具体为：将1，8-二氨基-3，6-二氧杂辛烷按质量体积比49.0～126.8mg/mL溶于无水二氯甲烷；冰水浴下充分搅拌至体系温度冷却至0℃，在氮气保护下缓慢滴加浓度为0.036～0.113mol/L的二碳酸二叔丁酯的二氯甲烷溶液；在室温下搅拌反应过夜，反应液经旋蒸浓缩后萃取，取有机相洗涤并干燥，抽滤后旋蒸除去溶剂得到带Boc保护基的含氧连接链。
4.根据权利要求2所述的光亲和连接链的合成方法，其特征在于，所述步骤(2)具体为：
将4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸按质量体积比12.7～14.6mg/mL溶于无水二氯甲烷，避光、氮气保护、0℃下充分搅拌，加入N，N-羰基二咪唑；氮气保护、0℃下充分搅拌，滴加浓度为0.2150～0.3125mol/L带Boc保护基的含氧连接链的二氯甲烷溶液；滴加完毕后于室温、避光条件下搅拌反应过夜；反应液经萃取后得到有机相，有机相经洗涤干燥、抽滤后旋蒸除去溶剂，得粗品，用硅胶柱色谱分离纯化得到带Boc保护基的光亲和连接链中间体。
5.根据权利要求4所述的光亲和连接链的合成方法，其特征在于，所述步骤(2)中的硅胶柱色谱条件为DCM∶MeOH 99.5∶0.5→99∶1→98∶2。
6.根据权利要求2所述的光亲和连接链的合成方法，其特征在于，所述步骤(3)的具体过程为：将带Boc保护基的光亲和连接链中间体按质量体积比12.5～20.0mg/mL溶于甲醇，向体系中加入浓度为4M的盐酸溶液，所述带Boc保护基的光亲和连接链中间体与4M盐酸的质量体积比为16.7～30.8mg/mL；室温避光条件下搅拌反应过夜，反应液旋蒸浓缩后加入纯水和乙酸乙酯的混合液进行溶解，所述纯水和乙酸乙酯的体积比为2.5～3:4，室温搅拌下缓慢加入碳酸钾，所述碳酸钾与4M盐酸的质量体积比为0.25～0.46g/mL；充分反应，维持pH＝7-8；反应液经萃取后得到有机相，有机相经洗涤干燥、抽滤后旋蒸除去溶剂，氮气吹干后得到光亲和连接链。
7.根据权利要求2所述的光亲和连接链的合成方法，其特征在于，所述步骤(3)中的萃取具体为依次用纯水、盐水、二氯甲烷、二氯甲烷与甲醇按体积比4：1混合的萃取剂进行萃取；洗涤所用试剂为饱和NaCl溶液。
8.一种如权利要求2-7中任一项方法合成的基于光亲和连接链与中药活性小分子进行光交联反应的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述中药活性小分子为皂苷类、黄酮类、木脂素和糖类等化合物。
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