CN106946959B - 合成5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-d-葡萄糖醛酸有关物质及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明以5,6,4’‑三乙酰氧基黄酮‑7‑O‑D‑三乙酰氧基葡萄糖醛酸甲酯(结构式如式Ⅱ所示)为原料,经选择性消除和水解两步反应,成功制备得到5,6,4’‑三羟基黄酮‑7‑0‑D‑葡萄糖醛酸有关物质b,并进一步纯化,最终获得5,6,4’‑三羟基黄酮‑7‑0‑D‑葡萄糖醛酸有关物质b单体,进行确证后得出该有关物质化学结构。该方法合成路线短、成本低、操作简单,结果准确,产品纯度高,反应收率高,产品易于纯化,可用于合成5,6,4’‑三羟基黄酮‑7‑0‑D‑葡萄糖醛酸样品的杂质分析控制,有利于合成5,6,4’‑三羟基黄酮‑7‑0‑D‑葡萄糖醛酸的质量控制,更好的保障了产品质量。
Description
技术领域
本发明涉及药物化学技术领域,尤其涉及一种合成5,6,4'-三羟基黄酮 -7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质及其制备方法和应用。
背景技术
5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸,又名灯盏花乙素、野黄芩苷,是从菊科飞蓬属植物短亭飞蓬(Eriger0n breviscapus)的全草(又名灯盏细辛) 中提取的黄酮类混合物的主要有效成分,分子式为C21H18012,分子量为462.37,其结构式如式Ⅳ所示:
临床研究表明5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸对高血压、脑出血、脑血栓形成,脑栓塞多发性神经炎,慢性蛛网膜炎及其后遗症具有较好疗效,并对风湿病、冠心病也有一定疗效。此外大量的研究证实5,6,4'-三羟基黄酮 -7-0-D-葡萄糖醛酸具有抗炎、抗氧化、蛋白激酶抑制剂作用,还具有对糖尿病、肾病、风湿类风湿等疾病的治疗作用。因此,目前5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D- 葡萄糖醛酸临床上广泛用于治疗脑血栓、脑梗塞、多发性神经炎、慢性蛛网膜等脑血管意外所致瘫痪以及冠心病、心绞痛、治疗痛风性关节炎等症。
目前除了植物提取的合成5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸,合成 5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸作为改良型创新原料药,具有良好的市场前景。但是合成5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸杂质谱不同于目前上市的植物提取5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸,对于合成5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸的有关物质目前尚无研究。杂质的存在将影响产品使用的安全性,按照新药开发过程中杂质控制的相关指导原则的要求,应对样品中杂质进行彻底研究,严格控制。
发明内容
有鉴于此,本发明要解决的技术问题在于提供一种合成5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质及其制备方法和应用。
本发明提供的合成5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质或其盐,结构如式(Ⅰ)所示:
本发明所述的合成5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸是指通过化学合成的方法制备的5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸。具体制备方法参照昆药集团申请号分别为CN201210114758.9,CN201210114894.8, PCT/CN2012/086543的专利申请。
所述合成5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸含量大于99%,其中含有微量的合成5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质,含量低于0.5%。
本发明还提供了上述合成5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质的制备方法,包括以下步骤:
1)式(Ⅱ)所示化合物在催化剂的作用下,进行选择性消除反应,生成式(Ⅲ)所示化合物;所述催化剂为1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)、吡啶和4-二甲氨基吡啶(DMAP)中的任意一种或几种;
2)式(Ⅲ)所示化合物进行水解反应,得到式(Ⅰ)所示化合物;
其反应方程式如下:
本发明首先以1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)、吡啶和4-二甲氨基吡啶(DMAP)中的任意一种或几种作为催化剂,式(Ⅱ)所示化合物在催化剂的作用下,进行选择性消除反应,选择性的脱去一分子水,生成式(Ⅲ)所示化合物。上述催化剂有助于提高选择性消除反应的速率和选择性。
所述选择性消除反应优选在溶剂中进行,在本发明的某些具体实施例中,所述溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、甲苯、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的任意一种或几种。
在本发明的某些具体实施例中,所述式(Ⅱ)所示化合物与催化剂的摩尔比为1:(0.1~5),在某些实施例中为1:(0.2~3),在一些实施例中为1:1。
所述选择性消除反应的温度为10~30℃,反应时间为3~20h,在某些实施例中为4~6h,在一些实施例中为8h,在一些实施例中为10h。
优选的,所述步骤2)具体为:式(Ⅲ)所示化合物在无机碱催化下进行水解反应,然后加入无机酸调节体系pH值至2~3,进行中和反应,得到式(Ⅰ) 所示化合物。
在本发明的某些具体实施例中,所述无机碱选自氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾、碳酸钾和碳酸钠中的任意一种或几种。
所述无机酸选自盐酸、硫酸、乙酸、甲酸、硝酸和磷酸中的任意一种或几种。
所述水解反应的溶剂选自丙酮、水、甲醇、乙醇、二氯甲烷、二甲基亚砜、四氢呋喃和二氧六环中的任意一种或几种。
所述水解反应的温度优选为-10~40℃,在某些实施例中为-8~0℃,在一些实施例中为-5℃;反应时间优选为1~10h,在某些实施例中为2~4h,在一些实施例中为3h,在一些实施例中为2h,在一些实施例中为4h。
所述式(Ⅲ)所示化合物与无机碱的摩尔比优选为1:(0.1~50),在某些实施例中为1:(10~30),一些实施例中为1:25,一些实施例中1:15,一些实施例中1:20。
所述中和反应的温度优选为-10℃~40℃,在一些实施例中为-5℃。
在本发明的某些具体实施例中,可以进一步采用常规方法如重结晶进行提纯,得到符合要求纯度的杂质对照品。
本发明通过HPLC法、UV吸收法、核磁共振、MS谱分析对上述合成5,6,4' -三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质进行了结构验证。
本发明所述5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质的结构确证包括以下步骤:
步骤1、HPLC法证实制备所得5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b与昆药集团股份有限公司合成5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸中有关物质(杂质)b的保留时间完全一致。
步骤2、UV谱图证实制备所得5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b与昆药集团股份有限公司合成5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸中有关物质b特征峰完全一致。
步骤3、核磁共振氢谱、碳谱对制备所得5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b的化学结构进行了确证。
步骤4、经MS谱分析,证实昆药集团股份有限公司合成5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸中有关物质b,与制备所得5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b,具有相同的分子离子信号。
本发明所述结构确证方法步骤1中,色谱条件流动相和体积比为:流动相A:Water/TFA=1000/1(v/v),流动相B:Acet0nitrile/TFA=1000/1(v/v),样品溶剂:Acetonitrile/DMSO=50/50(v/v)。
本发明所述结构确证方法步骤3和步骤4证实了5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D- 葡萄糖醛酸杂质b的化学结构如式Ⅰ所示。
本发明还提供了上述合成5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质或其盐或上述制备方法制备的合成5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质,在合成5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸或其制剂有关物质检测时,作为对照品的应用。
具体的,可应用于合成5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸或其制剂的杂质分析控制、药理毒理研究等。
本发明以5,6,4’-三乙酰氧基黄酮-7-O-D-三乙酰氧基葡萄糖醛酸甲酯(结构式如式Ⅱ所示)为原料,经选择性消除和水解两步反应,成功制备得到5,6,4’- 三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b,并进一步纯化,最终获得5,6,4’- 三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b单体,进行确证后得出该有关物质化学结构。该方法合成路线短、成本低、操作简单,结果准确,产品纯度高,反应收率高,产品易于纯化,可用于合成5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸样品的杂质分析控制,有利于合成5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸的质量控制,更好的保障了产品质量。
附图说明
图1是实施例1制备的5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b (批号:20140913)的HPLC分析谱图;
图2是昆药集团股份有限公司合成的5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸(批号20140424-1)的HPLC分析谱图;
图3是实施例1制备的5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b (批号20140913)以5%质量分数加入到5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸(批号20140424-1)的HPLC分析谱图;
图4是昆药集团股份有限公司合成的5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸(批号20140424-1)中5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b的 UV谱图;
图5是实施例1制备的5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b (批号20140913)的UV谱图;
图6是实施例1制备的5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b (批号20140913)的HPLC分析谱图;
图7是合成5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸(批号20140424-1)+实施例1制备的5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b(20140913) 的MS谱图;
图8是实施例1制备的5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸杂质b (20140913)的MS谱图;
图9是合成5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸(批号20140424-1)的 MS谱图。
具体实施方式
为了进一步说明本发明,下面结合实施例对本发明提供的合成5,6,4'- 三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质(以下简称5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D- 葡萄糖醛酸有关物质b)及其制备方法和应用进行详细描述。
实施例1
(1)化合物Ⅲ的制备
20g(27.4mmol)5,6,4’-三乙酰氧基黄酮-7-O-D–三乙酰氧基葡萄糖醛酸甲酯溶解于200mL甲苯中,然后搅拌下缓慢滴加入1,8-二氮杂二环十一碳-7- 烯(DBU)4.1g(27mmol),30℃下搅拌反应约8小时反应完全。反应混合物搅拌下加入约500ml乙酸乙酯,用500ml水洗两次。分出水层后的有机层中加入适量无水硫酸钠干燥,减压蒸干。硅胶柱层析并用石油醚:乙酸乙酯=5:1(v/v)的洗脱剂洗脱,得15g白色固体化合物Ⅲ,色谱纯度98.00%以上,收率为82%。
1H-NMR(400MHz,DMS0),δ(ppm):7.95(2H,d,J=8.6Hz),7.51(1H,s), 7.32(2H,d,J=8.6Hz),6.78(1H,s),6.15(1H,d,J=7.8Hz),5.57(1H,d,J=10Hz), 5.38(1H,m),4.94(1H,m),3.67(3H,s),2.34(3H,s),2.31(3H,s),2.25(3H,s), 2.02(3H,s),2.01(3H,s).
(2)5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b的制备
13.4g(20mmol)化合物Ⅲ中加入200mL丙酮和200mL水的混合溶剂,在 -5℃搅拌下缓慢滴加10%的NaOH水溶液200mL,搅拌反应约三小时后,经 TLC监测反应已完全。-5℃下缓缓向反应液中滴加2mol/L盐酸水溶液中和反应液至PH为2~3,持续搅拌一小时并逐渐升至室温,反应液中渐渐有黄色固体5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸析出。室温下静置过夜,过滤,滤饼用适量水和丙酮洗,干燥后用乙醇重结晶得到8g 5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b,批号记为20140913,收率为89%。HPLC检测,纯度为98.88%,HPLC检测的色谱图和统计结果见图1和表1,表1是图1的数据汇总。
1H-NMR(400MHz,DMS0),δ(ppm):12.78(1H,s),10.51(1H,s),8.71(1H, s),7.93(2H,d,J=8.8Hz),7.11(1H,s),6.94(2H,d,J=8.8Hz),6.83(1H,s),5.99 (1H,d,J=3.6Hz),5.81(1H,d,J=5.6Hz),5.74(1H,s),5.28(1H,s),4.14(1H, dd,J=4.0,4.5Hz),3.84(1H,dd,J=4.5,6.0Hz).
表1图1的数据汇总
实施例2
(1)化合物Ⅲ的制备
20g(27.4mmol)5,6,4’-三乙酰氧基黄酮-7-O-D–三乙酰氧基葡萄糖醛酸甲酯溶解于200mL二氯甲烷中,然后搅拌下缓慢加入4-二甲氨基吡啶 (DMAP)1.7g(13.7mmol,0.5eq),25℃下搅拌反应约10小时反应完全。反应混合物搅拌下加入约300ml乙酸乙酯,用500ml水洗两次。分出水层后的有机层中加入适量无水硫酸钠干燥,减压蒸干。硅胶柱层析并用石油醚:乙酸乙酯=5:1(v/v)的洗脱剂洗脱,得14.3g白色固体化合物Ⅲ,色谱纯度98.00%以上,收率为78%。核磁鉴定结果与实施例1结果一致。
(2)5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b的制备
13.4g(20mmol)化合物Ⅲ中加入200mL丙酮和200mL水的混合溶剂,在 0℃搅拌下缓慢滴加10%的氢氧化钾水溶液220mL,搅拌反应约四小时后,经 TLC监测反应已完全。0℃下缓缓向反应液中滴加乙酸中和反应液至PH为 2~3,持续搅拌一小时并逐渐升至室温,反应液中渐渐有黄色固体5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b析出。室温下静置过夜,过滤,滤饼用适量水和丙酮洗,干燥后用乙醇重结晶得到7.4g 5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b,收率为83%。HPLC检测,纯度达98.00%以上,核磁鉴定结果与实施例1结果一致。
实施例3
(1)化合物Ⅲ的制备
20g(27.4mmol)5,6,4’-三乙酰氧基黄酮-7-O-D–三乙酰氧基葡萄糖醛酸甲酯溶解于200mL四氢呋喃中,然后搅拌下滴加入吡啶6.5g(82.2mmol),25℃下搅拌反应约6小时反应完全。反应混合物搅拌下加入约200ml乙酸乙酯,用500水洗两次。分出水层后的有机层中加入适量无水硫酸钠干燥,减压蒸干。硅胶柱层析并用石油醚:乙酸乙酯=5:1(v/v)的洗脱剂洗脱,得14.7g 白色固体化合物Ⅲ,色谱纯度98.00%以上,收率为80%。核磁鉴定结果与实施例1结果一致。
(2)5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b的制备
13.4g(20mmol)化合物Ⅲ中加入200mL丙酮和200mL水的混合溶剂,在 5℃搅拌下缓慢滴加10%的氢氧化锂水溶液190mL,搅拌反应约两小时后,经 TLC监测反应已完全。5℃下缓缓向反应液中滴加2mol/L硫酸水溶液中和反应液至PH为2~3,持续搅拌一小时并逐渐升至室温,反应液中渐渐有黄色固体5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b析出。室温下静置过夜,过滤,滤饼用适量水和丙酮洗,干燥后用乙醇重结晶得到7.6g 5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b,收率为85%。HPLC检测,纯度达98.00%以上,核磁鉴定结果与实施例1结果一致。
实施例4结构确证
1、HPLC确证合成制备所得化合物为合成5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸中的5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b:
HPLC色谱条件如下:
HPLC系统:Waters Alliance 2695四元泵
Waters Alliance 2998PDA检测器
Waters Alliance 2695自动进样器
Waters Alliance 2695柱温箱
Empower 2网络版工作站
色谱柱:Agilent Zorbax SB-C8,5um,250x 4.6mm PN:880975-906
流速:1.0mL/min.
检测波长:UV 254nm
进样体积:10ul
柱温:30℃
自动进样器温度:5℃
流动相A:Water/TFA=1000/1(v/v)
流动相B:Acetonitrile/TFA=1000/1(v/v)
样品溶剂:Acetonitrile/DMS0=50/50
样品浓度:1.0mg/ml
实施例1合成制备获得的5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b (批号:20140913),与合成5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸(批号 20140424-1)中含有的杂质b的等同性验证:
分别对合成制备所得5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b、合成5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸进行HPLC分析(谱图如图1、图2所示),表2是图2的数据汇总。再将约5%的5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b标准品,加入昆药集团股份有限公司合成的5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸样品(批号20140424-1),进行HPLC分析(谱图如图3所示),表3 是图3的数据汇总。
分析结果显示,合成制备获得的5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b标准品出峰位置与5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸中本身含有的 5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b完全吻合。
对二者的UV吸收进行检测,谱图如图4、图5所示,结果表明两者的UV 吸收图谱完全一致。因此它们的等同性可以得到确认。
表2图2的数据汇总
表3图3的数据汇总
2、质谱和LC/MS解析
测试条件:
质谱:Waters SQD
软件:Waters Empower2网络版
Source:120℃ Desolvati0n:300℃ Capilary:3.5KV
LC-MS:
流动相A:超纯水(Millipore ultra pure water system,resistivity: 18.2MΩ.CM)+0.1%甲酸
Pump B:色谱纯乙腈(MerckKGaA 64271,hypergrade for LC-MS)+0.1%甲酸
柱温:30℃
检测波长:λ=254nm,230nmand 218nm/PDA
流速:1.0mL/min
谱图见图6、图7、图8和图9。
由上述谱图可知,对5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸(批号 20140424-1)中含有的杂质b,以及合成制备的5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸杂质b(批号201409132)进行LC/MS分析,均显示其分子量为444 ([M-H]-443)(见图8和图9)。由其分子量可以推测,杂质b应该是5,6,4’ -三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸脱一分子水后的产物。并且,5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸中本身含有的杂质b,与合成制备的杂质b,具有相同的分子离子信号。
3、5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸杂质b的核磁共振谱图解析
核磁共振氢谱:
仪器型号:BrukerAvance III 400spectrometer(Z115310,SN10032129)
溶剂:[D6]DMSO(D,99.9%)+0.03%V/V TMS,10*0.6mL ampoule, CambridgeIsotope Laboratories,Inc.,Lot 12A-029
温度:25℃
测试数据见表4。
表4核磁共振氢谱数据汇总
核磁共振13C谱:
仪器型号:BrukerAvance III 400spectrometer(Z115310,SN10032129)
溶剂:[D6]DMSO(D,99.9%)+0.03%V/V TMS,10*0.6mL ampoule, CambridgeIsotope Laboratories,Inc.,Lot 12A-029
温度:25℃
结果见表5。
表5 5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸杂质b的核磁共振碳谱分析
由以上结果可知,MS一级谱给出了杂质准确的分子量信息:m/z 442.7, 与5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸脱一分子水后所得的5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b分子量一致。HPLC谱确证了制备所得 5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b与合成5,6,4’-三羟基黄酮 -7-0-D-葡萄糖醛酸中5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b的保留时间完全一致,且UV谱证实了二者的特征吸收峰完全一致。核磁共振氢谱和碳谱,证实了5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质(杂质)b化学结构如式(Ⅰ)所示:
由上述实施例可知,本发明证实了上述5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸有关物质b的结构,并成功制备得到该化合物,且具有较高的纯度,可以直接用于合成5,6,4’-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸的杂质分析控制,以此基础制订了严格的杂质限度,为将来产品的安全使用提供了理论依据。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以对本发明进行若干改进和修饰,这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (9)
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述选择性消除反应的溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、甲苯、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的任意一种或几种。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述式(Ⅱ)所示化合物与催化剂的摩尔比为1:(0.1~5)。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述选择性消除反应的温度为10~30℃,反应时间为3~20小时。
5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述水解反应的溶剂选自丙酮、水、甲醇、乙醇、二氯甲烷、二甲基亚砜、四氢呋喃和二氧六环中的任意一种或几种。
6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤2)具体为:式(Ⅲ)所示化合物在无机碱催化下进行水解反应,然后加入无机酸调节体系pH值至2~3,得到式(Ⅰ)所示化合物。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述无机碱选自氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾、碳酸钾和碳酸钠中的任意一种或几种。
8.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述无机酸选自盐酸、硫酸、硝酸和磷酸中的任意一种或几种。
9.一种权利要求1~8任一项所述的制备方法制备的5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸的杂质,在合成5,6,4'-三羟基黄酮-7-0-D-葡萄糖醛酸或其制剂有关物质检测时,作为对照品的应用。
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