BG107650A - Полизахариди с антитромболитична активност, коитосъдържат поне една ковалентна връзка с биотин илипроизводно на биотин - Google Patents

Полизахариди с антитромболитична активност, коитосъдържат поне една ковалентна връзка с биотин илипроизводно на биотин Download PDF

Info

Publication number
BG107650A
BG107650A BG107650A BG10765003A BG107650A BG 107650 A BG107650 A BG 107650A BG 107650 A BG107650 A BG 107650A BG 10765003 A BG10765003 A BG 10765003A BG 107650 A BG107650 A BG 107650A
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
methyl
glucopyranosyl
tri
group
sulfonato
Prior art date
Application number
BG107650A
Other languages
English (en)
Other versions
BG66191B1 (bg
Inventor
Philippe Duchaussoy
Jean-Marc Herbert
Maurice Petitou
Pierre Savi
Original Assignee
Sanofi-Aventis
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanofi-Aventis filed Critical Sanofi-Aventis
Publication of BG107650A publication Critical patent/BG107650A/bg
Publication of BG66191B1 publication Critical patent/BG66191B1/bg

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

Изобретението се отнася до нови синтетични полизахариди, които съдържат поне една ковалентна връзкас биотин или производно на биотин и имат антикоагулантна и антитромболитична фармакологична активност, както и до метод, при който се използва авидини стрептавидин за неутрализиране на тези полизахариди.

Description

ПОЛИЗАХАРИДИ С АНТИТРОМБОЛИТИЧНА АКТИВНОСТ , КОИТО СЪДЪРЖАТ ПОНЕ ЕДНА КОВАЛЕНТНА ВРЪЗКА С БИОТИН ИЛИ ПРОИЗВОДНО НА БИОТИН
Настоящето изобретение се отнася до нови синтетични олиго- и полизахариди, които съдържат поне една ковалентна връзка с биотин или производно на биотин, които притежават антикоагулантната и антитромболитична фармакологична активност нахепарин.
Хепаринът катализира именно чрез антигромбин III (AT III) инхибирането на два ензима, които участват в разпадането на коагулацията на кръвта, а именно факторът Ха и факторът Па ( или тромбин). Хепариновите препарати с ниско молекулно тегло (НВРМ) съдържат вериги, образувани от 4 до 30 монозахарида и имат свойството да действат селективно повече върху фактор Ха, отколкото върху тромбина.
Известно е че инхибирането на фактор Ха изисква фиксиране на хепарин върху АТ III посредством област на свързване с антитромбина (Домен-А), и че инхибирането на фактора Па (тромбин) изисква фиксиране на АТ Ш чрез Домен-А, както и към тромбин посредством област на свързване по-малко добре дефинирана (домен-Т). Синтетичните олигазахариди, отговарящи на областта домен-А на хепарина са известни. Те са описани например в патенти ЕР 84999 и ЕР 529715, патентна заявка, публикувана под номер WO 99/36428 и публикацията Bioorg. Med. Chem., 1998, 6, 1509-1516. Тези синтетични олигазахариди имат свойството да инхибират • · • · »· • ♦ · ·
селективно посредством антитромбин III фактора Ха на коагулацията, без да проявява никаква активност върху тромбина. Те проявяват антитромболитична активност при венозна тромбоза.
Синтетичните олигозахариди, способни да инхибират тромбина и фактора Ха чрез активиране на AT III са описани в заявки за патент, публикувани под номера WO 98/03554 и WO99/36443.
В тези патентни заявки са описани нови производни на сулфатни и алкидни полизахариди, които са биологически активни. По-специално те са антикоагуланти и антитромболитици. В частност беше показано, че тези сулфатни и алкидни полизахариди могат да бъдат силни антитромболитици и антикоагуланти в зависимост от разположението на алкидните групи и сулфатните групи, носени от глициновия скелет. В по-общ план беше намерено, че чрез осъществяване на полизахаридната последователност е възможно много внимателно да се модулират активностите от вида GAGs, за да се получат силно активни продукти, които проявяват фармакологичните антикоагулантни и антитромболитични свойства на хепарина. В сравнение с хепарина те имат преимуществото, че представляват определена структура и не реагират с тромбоцитния фактор 4, който е причина за тромбоцитопениантния ефект на хепарина.
Все пак използването в хуманната медицина на някои продукти, описани в заявките за патенти, подликувани под номер WO 98/03554 и WO99/36443 и в патент ЕР 529715 може да се окаже затрудняващо, по-специално ако тези продукти притежават дълъг период на полуразпад. В областта на профилактиката или на лечението на тромбоза с горепосочените продукти, трябва да се възстановява или да се поддържа течливостта на кръвта, като се избягва предизвикването на хеморагия.
В действителност добре известно е, че поради някаква допълнителна причина винаги може да се получи хеморагия при даден пациент по време на лечението.
Също така може да се наложи необходимостта от хирургическа интервенция при някой болен, подложен на антитромболитично третиране. Нещо повече, в процеса на някои хирургични намеси антикоагулантите могат да бъдат използвани в силни
ЛОЗИ, за да се избегне коагулацията на кръвта, и при това е необходимо те да бъдат неутрализирани в края на интервенцията. Следователно поради това интерес представлява възможността да притежаваме неутрализиращи антитромболитични агенти, за да може да се спре антикоагулантната активност във всеки момент. Обаче • · ·· ···· · • · · · · · ····· · · · · · · ·· »♦ ·· ·· ·· /·*'
СИе известно, че синтетичните олигозахариди, описани в нивото на техниката, не могат лесно да бъдат неутрализирани чрез известните антидота на хепарина или на НВРМ, включително и сулфата на протамин.
Настоящето изобретение се отнася до нови синтетични полизахариди, чиято структура е близка до тази, на съединенията, описани в патентни заявки, номера WO 98/03554 и WO99/36443 и в патент ЕР 528715: структурите на синтетичните олигозахариди, които са обект на настоящето изобретение, са модифицирани по такъв начин, че те притежават ковалентна връзка с биотин (хексахидро-2-оксо-1(Нтиено[3,4]имидазол-4-пентанова киселина) или с производно на биотин. По изненадващ начин бе установено, че въвеждането на биотин или на негово производно не променя фармакологичната активност на полизахаридите. Действително новите полизахариди, които са обект на изобретението, притежават антитромболитична активност, сравнима с тази на олигозахаридите от нивото на техниката. Но освен това те притежават предимството да могат в спешни случаи бързо да се неутрализират чрез специфичен антидот. Такъв специфичен антидот е авидин ( The Merc Index, Twelfth edition, 1996, M.N. 920, стр. 151-152) или стрептавидин, два тетраметрични протеини с тегло съответно равно на около 66000 и 60000 Da, които притежават много силен афинитет към биотин.
Най-общо изобретението се отнася до синтетични полизахариди, които показват антитромболитична активност, и които съдържат поне една ковалентна връзка с биотин или производно на биотин.
В качеството на проиизводни на биотин могат да бъдат цитирани съединенията на биотин, посочени в каталога Pierce 1999-2000, стр. 62 до 81, например хексаноат на
6-биотинамид с формула, както е посочено по-долу:
• · « · ·· • · · ·
или също съединенията със следващите формули:
··*·
По-специално настоящето изобретение има за предмет полизахаридите с формула (I):
в която: - начупената линия означава връзка, разположена или над, или под f
Чййй*г равнината на пиранозиновия пръстен,
(Ро)
Ро означава полизахарид, съдържащ η еднакви или различни монозахаридни единици, свързани чрез техния аномерен въглероден атом към Ре,
горната формула е схематично представяне на една монозахаридна единица с пиранозинова структура, избрана между хексози, пентози и съответните дезокси захари, като тази единица е свързана чрез нейния аномерен въглерод за друга монозахаридна единица, и хидроксилните групи на тази единица са субституирани с групи Ri, които са еднакви или различни, и Rj е такова, както е дефинирано подолу,
R
W h е равно на 1 или 2, η е цяло число и може да има всички стойности между 0 и 25,
Ri представлява веригата -T-Biot, група (С1-Сб)алкокси или група -OSO3 _
R2 представлява веригата -T-Biot, група (С|-С6)алкокси или група -OSO3,
R3 представлява веригата -T-Biot, група (С1-С6)алкокси,
R4 представлява веригата -T-Biot, група (СгС6)алкокси или група -OSO3~, или пък
R4 създава мост -О-СН2-, групата -СН2-, която е свързана с въглеродния атом, носещ карбоксилната функция в същия пръстен;
G като се подразбира, че поне един от заместителите Rj, R2, R3 или R4 представлява групата -T-Biot;
W представява кислороден атом или метиленова група;
Т представлява някоя група на свързване, избрано между NH,
в които j и к са еднакви или различни и са единици, които могат да имат всички стойности от 1 до 10;
-Biot представлява групата
както и техните фармацевтично приемливи соли.
Както беше посочено първоначално, трябва да се отбележи най-общо, че в настоящето описание с начупената линия се означава връзката, разположена или под, или над плоскостта на пиранозиновия пръстен.
Монозахаридите, които се съдържат в Ро могат да бъдат еднакви или различни едни от други, и междугликозидните връзки могат да бъдат от вида а или β.
Тези монозахариди са избрани предимно между хексозите D или L алоза, алтроза, глюкоза, маноза, галоза идоза, галактоза, талоза (в този случай h=2), или между пентозите D или L рибоза, арабиноза, ксилоза, ликсоза (в този случай h=2). Други монозахариди като дезокси захарите могат също да бъдат използвани (когато h =1 и/или -CH2Ri = СН3).
Полизахаридната част Ро може да се състои от 0 до 25 единици алкилирани и диили три-сулфатирани монозахариди.
Полизахаридната част Ро също може да се състои от 0 до 25 единици алкилирани и моно- или дисулфатирани монозахариди.
Полизахаридната част Ро може да се състои от 0 до 25 единици алкилирани монозахариди, които са незаместени със сулфат.
Субституираните или несубституираните захарни единици могат да бъдат разположени по дължината на веригата или могат също да бъдат групирани в субституираните или несубституираните захаридни домени.
Връзките между захарните единици могат да бъдат 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6 и от вида а или β.
В настоящето описание беше избрано да се представят структурите *С4 за Lидуроновата киселина, 4Ci за D-глюкуроновата киселина, но е известно, че найобщо в разтвор структурата на монозахаридните единици е променлива.
Така L-идуроновата киселина може да бъде със структура ^So или 4Сь
В зависимост от един от тези аспекти, изобретението се отнася до полизахариди с формула (1.1):
означава специална фамилия полизахариди Ро, свързани чрез техния аномерен въглерод към Ре, както е дефинирано за формула (I).
/ат.
4w е както е дефинирано за формула (I).
-групите Ri са такива, както са дефинирани във формула (I), и за един и същи монозахарид могат да бъдат еднакви или различни,
-съдържанието на монозахарид в [ ]т се повтаря m пъти, съдържанието на монозахарид в [ ]t се повтаря t пъти, съдържанието на монозахарид в [ ]р се повтаря р пъти;
-ш е цялост, която варира от 1 до 5, t е цялост, която варира от 0 до 24, и р е цялост, която варира от 0 до 24, като се има пред вид, че 1 < m +1 + р > 25, както и техните фармацевтично приемливи соли.
Измежду тези полизахариди с формула (1.1), полизахаридите, в които един от заместителите Rb R2, R3 или R4 представлява връзката T-Biot, където Т и Biot са такива, както са дефинирани при формула (I), както и техните фармацевтично приемливи соли, представляват друг аспект на изобретението.
Съгласно един особен аспект, изобретението се отнася до хексадеказахаридите с формула (1.2)
в която:
Т представлява връзка, избрана между:
NH,
в които j и к, които са еднакви или различни, са целости, които могат да имат всички стойности от 1 до 10;
Biot представлява групата
Ре представлява пентазахарид със структура:
в която:
Ri представлява група (CrC6) или група -OSO3~,
R2 представлява група (СгСб) или група -OSO3,
R3 представлява група (CrC6);
R4 представлява група (С[-Сб) или група -OSO3, или R4 съдържа мост -О-СН2-, групата -СН2- е свързана с въглеродния атом, носещ карбоксилната функция в същия пръстен, W представлява кислороден атом или метиленова група, както и техните фармацевтично приемливи соли.
Съгласно друг вариант на тези аспекти изобретението се отнася до пентазахариди с формула (1.3):
в която R], R2, R3, R4 и W са както са дефинирани в (I), както и техните фармацевтично приемливи соли.
Между тези пентазахариди с формула (1.3) пентазахаридите, в които само един от заместителите Rb R2, R3 или R4 представлява връзката -T-Biot, като Т и Biot са такива, каквито са дефинирани във формула (I), както и техните фармацевтично приемливи соли, съставлява друг аспект на изобретението.
Освен тези пентазахариди с формула (1.3) изобретението има също така за обект и пентазахириди с формула (1.4):
О
(1.4) • ♦· ·· ···· ·· ·»·· • · « ♦ ·· · ·· е • · · · · · · ·· ·· · · в която:
Т представлява някоя от връзките, избрани между: NH,
или
в които j и к са еднакви или различни и представляват целости, които могат да имат всички стойности между 1 и 10;
Biot представлява групата:
в която:
Ri представлява група (СГС6) или група -OSO3-,
R2 представлява група (СрСб) или група -OSO3”,
R3 представлява група (СГС6);
R4 представлява група (Ci-Сб) или група -OSO3”, или R4 съдържа мост -О-СН2-, групата -СН2- е свързана с въглеродния атом, към който е прикачена карбоксилната функция в същия пръстен,
W представлява кислороден атом или метиленова група, както и техните фармацевтично приемливи соли.
Съгласно друг аспект изобретението включва следните полизахариди:
Метил (2,3,4,6-тетра-О-сулфонато-а-О-гликопиранозил)-( 1 —>4)-(2,3,6-три-Осулфонато-а-О-глюкопиранозил )-(1-> 4)-( 2,3,6-три-О-сулфонато-р-Оглюкопиранозил)-( 1 —> 4)-(6-биотинамидо-6-дезокси-2,3 -ди-О-метил-а-D- • · · · · ···· «· е· · · • · · · ·· · · · · • · · · · · · ·«· · · • · · · · · »··· • · · · · ·· · · · · « 9 глюкопиранозил)-(1 —> 4)-(2,3,6-три-О-метил-р-О-глюкопиранозил-( 1 —> 4)-((2,3,6три-О-метил-3-О-глюкопиранозил)-(1 —> 4)-( 2,3,6-три-О-метил-р-О-глюкопиранозил)-( 1 —* 4)]3-(6-О-сулфонато-2,3-ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)(2,3 - ди-О-метил-Р-О-глюкопиранозилуронова киселина)-( 1 —> 4)-(2,3,6-три-Осулфонато-а-О-глюкопиранозил)-( 1 —* 4)-(2,3-ди-О-метил-а-L-идопиранозилуронова киселина)-(1 —> 4)-2,3,6-три-О-сулфонато-а-О-глюкопиранозид, натриева сол,
Метил (2,3,4,6-тетра-О-сулфонато-а-О-гликопиранозил)-(1 —»4)-(2,3,6-три-Осулфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1 —> 4)-( 2,3,6-три-0-сулфонато-р-0глюкопиранозил)-(1—> 4)-(6-[6-(биотинамидохексамидо)хексамидо]-6-дезокси-2,3ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-( 1 —* 4)-(2,3,6-три-О-метил-р-О-глюкопиранозил(1—> 4)-[(2Д6-три-О-метил-Р-О-глюкопиранозил)-(1—> 4)-( 2,3,6-три-О-метил-р-Оглюкопиранозил)-( 1 —> 4)]3-(6-О-сулфонато-2,3-ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)(1—> 4)-(2,3-ди-О-метил-р-О-глюкопиранозилуронова киселина)-(1—» 4)-(2,3,6-триО-сулфонато-а-О-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-(2,3 -ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуронова киселина)-(1—> 4)-2,3,б-три-О-сулфонато-а-О-глюкопиранозид, натриева сол,
Метил (2,3,4,6-тетра-О-сулфонато-а-О-гликопиранозил)-( 1 ->4)-(2,3,6-три-О-сулфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1—* 4)-( 2,3,6-три-О-сулфонато-Р-О- глюкопиранозил)(1—>4)-(6-[6-(6-биотинамидохексамидо)хексамидо]-6-дезокси-2,3-ди-О-метил-а-Оглюкопиранозил )-(1 —»4)-(2,3,6-три-О-метил-р-О-глюкопиранозил-(1 —»4)-[(2,3,6три-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-( 2,3,6-три-О-метил-р-О-глюкопиранозил)-(1—> 4)]з-(6-0-сулфонато-2,3-ди-0-метил-а-0-глюкопиранозил )-(1-* 4)-(2,3ди-О-метил-р-О-глюкопиранозилуронова киселина)-( 1 —* 4)-(2,3,6-три-О-сулфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1 —> 4)- (2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуронова киселина)-(1—>4)-2,3,б-три-О-сулфонато-а-О-глюкопиранозид, натриева сол, Метил (2-биотинамидо-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-О-сулфонато-а-О-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-(2,3-ди-О-метил-р-О-глюкопиранозилуронова киселина)-
• · · · · · · ··· · · • · ···· «··· • · · · · · · ·· ·« ·· (1—> 4)-(2,3,6-три-О-сулфонато-а-О-глюкопиранозил)- (1—* 4)-(2,3-ди-О-метил-а-Lидопиранозил-уронова киселина)-(1—> 4)-2,3,6-три-О-сулфонато-а-Оглюкопиранозид, натриева сол,
Метил (2-[К-(6-биотинамидо хексаноил)]-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-Осулфонато-а-О-глюкопиранозил)-( 1 4)-(2,3-ди-О-метил-З-О-глюкопиранозилуронова киселина)-(1—> 4)-(2,3,6-три-О-сулфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1—> 4)(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуронова киселина)- (1—> 4)-2,3,6-три-Осулфонато-а-О-глюкопиранозид, натриева сол,
Метил (2-[6-(6-биотинамидохексамидо) хексамидо]-(2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-Осулфонато-а-О-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-(2,3-ди-О-метил-р-О-глюкопиранозилуронова киселина)-(1—> 4)-(2,3,б-три-О-сулфонато-а-D-rn юкопиранозил )-(1 —» 4)(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозил-уронова киселина)-( 1 —> 4)-2,3,6-три-Осулфонато-а-D- глюкопиранозид, натриева сол.
Изобретението включва полизахаридите под форма на киселина или под форма на някоя от техните фармацевтично приемливи соли. Под формата на киселина функциите -СОО и -SO3” съответно имат вида -СООН и -SO3H.
Под фармацевтично приемлива сол на полизахарид от изобретението се разбира полизахарид, в който една или повече от функциите -СОО или/и -SO3 _ са свързани чрез йонна връзка е фармацевтично приемлив катион. Предпочитани соли съгласно изобретението са тези, чиито катион е избран между катионите на алкални метали и по-специално тези, чийто катион е Na+ или К+.
Съединенията с горепосочената формула (I) включват също и тези, в които един или повече водородни атоми или въглеродни атоми са заменени е тяхната изотопна радиоактивна форма, например тритий или въглерод-14. Такива маркирани съединения са полезни под формата на лиганди за изследване на метаболизма или фармакокинетиката при биохимичните изпитвания.
По принцип методът за получаване на съединенията от изобретението използва синтони на базата на ди- и олигозахариди, получени чрез известни методи, описани в нивото на техниката. Може да бъдат цитирани именно патенти или заявки за
патенти ЕР 300099, ЕР 529715, ЕР 621282 и ЕР 649854, както и публикациите:С. van Boeckel, М. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1993, 32,1671-1690. Тези синтони след това се свързват едни с други, по такъв начин,че да се получи напълно защитен еквивалент на полизахарид от изобретението. Този защитен еквивалент после се трансформира в съединение съгласно изобретението.
Един от основните синтони, цитирани по-горе, съдържа защитена функция, която по-специално позволява последващо въвеждане на биотина или на производно на биотина, например латентна амино функция под формата на азидо група или защитена под формата на N-фталимидо.
В посочените по-горе реакции на съчетаване ди- или олигозахарид, който е “донор” активиран при неговия аномерен въглерод, реагира с ди- или олигозахарид “акцептор”, притежаващ свободна хидроксилна група.
Настоящето изобретение се отнася до метод за получаване на съединенията с формула (I), характеризиращ се с това, че. в първия етап се синтезира един еквивалент от желания напълно защитен полизахарид, който съдържа защитаващ прекурсор на домена Ре, удължен в частта, която не се редуцира, чрез защитен прекурсор на сулфатен полизахарид Ро, и един от тези прекурсори именно съдържа амино функция, подходящо защитена за по-нататъшното прикачване на биотин или производно на биотина; във втория етап отрицателно натоварените групи се прикачват и/или демаскират; в третия етап се депротектира амино функцията, после се въвежда биотин или производно на биотин.
Синтезът на Ре се осъществява съгласно известни методи, по-специално описаните в патентни заявки, публикувани като WO98/03554 и WO99/364443, както и в цитираната по-горе публикация.
Синтезът на прекурсорната полизахаридна част на Ро се осъществява чрез добре известни методи от нивото на техниката, като се използват методи за синтез на олигозахариди, (G.J. Boons, Tetrahedron, 1996, 52,1095-1121, WO98/03554 и WO99/36443), или олигозахарид, когато донорен олигозахарид с гликозидна връзка се свързва с акцепторен олигозахарид с гликозидна връзка, за да се стигне до друг олигозахарид, който по големина е равен на сумата от стойностите на двата • · · · реактивни вида. Тази последователност се повтаря до получаване на желаното съединение с формула (I). Естеството и профила на товара на желаното крайно съединение определят природата на химическите същности, използвани в различните етапи на синтеза, в зависимост от изискванията, известни от нивото на техниката. Могат да бъдат цитирани например C.van Boeckel, М. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1993,32,1671-1690, и също H. Paulsen, “Advances in selective chemical syntheses of complex oligosaccharides” Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 21,155173(1982).
Съединенията от изобретението се получават от техните полизахаридни прекурсори, които са напълно защитени, като се осъществява свързване чрез следните реакции:
-алкохолните функции се трансформират в О-сулфо група и карбоксилните киселини се депротектират чрез отстраняване на защитните групи по време на образуването на скелета,
-после се въвеждат сулфо групите,
-депротектира се амино функцията, която позволява да се вкара биотин или производно на биотина,
-биотин или производно на биотин се въвеждат чрез класическа реакция на свързване амино/киселина.
Съединенията от изобретението естествено могат да бъдат получени като се използват различни известни подходи, известни от нивото на техниката за синтез на олигозахариди.
Описаният по-горе метод е предпочитан съгласно изобретението. Но съединенията с формула (I) могат да бъдат получени и чрез други методи, добре известни от химията на захарите, описани например в Monosaccharides, Their chemistry and their roles in natural products, P.M. Collins и R J.Femier, J. Wiley & Sons, 1995, и в G.J. Boons, Tetrahedron, 1996,52,1095-1121.
Пентазахаридите Ре могат да се получат като се излиза от дизахаридни синтони, по описания метод в публикация на C.van Boeckel, M.Petitou, Angew. Chem. Int. Ed.
Engl. 1993,32,1671-1690.
Използваните защитни групи в метода за получаване на съединенията с формула (I) са тези, които редовно се използват в химията на захарите, например описани в Protective Groups in Organic Synthesis, TW Greene, John Wiley & Sons, New-York, 1981.
Предпочитани защитни групи са например избрани между групите ацетилни, халогенометилни, бензоилни, левулинилни, бензилни, субституирани бензилни, тритилни, евентуално субституирани групи на тетрахидропиран, алил, пентенил, трет-бутилдиметилсилил (tBDMS) или триметилетилсилил.
Активиращите групи са тези, които класически се използват в химията на захарите, съгласно описаните например в G.J.Boons, Tetrahedron, 1996, 52,1095-1121. Тези активиращи групи са избрани между групите на имидати, тиогликозиди, пентенилгликозиди, ксантани, фосфити или халогениди.
Що се отнася до начина, по който биотин се свързва с олигозахаридите, както и естеството на производното на биотин, в химическата литература се предлагат и други възможности, които могат да се използват чрез комбиниране на добре известни от нивото на техниката защитни групи. За предпочитане може да се използва амино функцията или тиолната функция, или също функцията на карбоксилната киселина, също така и алдехидната функция, която се поставя да реагира с производно на биотин, съдържащо реактивна група от вида активиран естер, малеимид, йодоацетил или първичен амид, като реакцията се провежда при условията, описани в литературата (Savage et al., Avidin-Biotin Chemistry. A Handbook; Pierce Chemical Company, 1992)
По-горе описаният процес позволява да се получат съединенията според изобретението под формата на соли. За да се получат съответните киселини, съединенията от изобретението под форма на соли се поставят да реагират с катионна йонообменна смола под форма на киселина.
Съединенията от изобретението, които са под форма на киселини, след това могат да бъдат неутрализирани с основа, за да се получи желаната сол. За да се получат соли на съединенията с формула (I) могат да се използват всички органични или неорганични основи, които могат да дадат фармацевтично приемливи соли със ····· · ··· · · • · · · · 4 9 9 9 9 ····· · · ·· · · ·· съединенията с формула (I). За предпочитане като основи се използват натриев хидроксид, калиев хидроксид, калциев хидроксид или магнезиев хидироксид. Предпочитани соли са солите на съединенията с формула (I) с натрий или калий. Съединенията с формула (I) се подлагат на биохимични и фармакологични изследвания.
Общата антитромболитична активност на тези продукти и тяхната неутрализация е изследвана при модел на тромбоза на вена, предизвикана с инжектиране на тъканен фактор, последвано от стазис на горната куха вена на плъх, както е описано от J.-M. Herbert et al., Blood, 1998, 91,4197-4205. При този модел се получава инхибиране 60% на тромбозата след интравенозна инжекция на 0,1 до 30 mmol/kg от съединението. Инжекция с авидин в моларно съотношение от 1 до 1000 силно намалява антитромболитичния ефект на тези съединения, като полученото редуциране може да е по-високо от 50%. Успоредно с това, про хеморагичната активност на съединенията се неутрализира чрез инжектиране на авидин в горепосочените дози. Също така циркулационната активност на олигозахаридите, измерена чрез анти Ха активността и/или анти-Па активността се неутрализира чрез инжектиране на авидин.
Също така изобретението има за предмет и метод, при който се използва авидин или стрептавидин, и който се характеризира с това, че позволява да се неутрализират полизахаридите съгласно изобретението. Авидин или стрептавидин могат да се използват за получаване на лекарства, предназначени да неутрализират действието на полизахаридите от настоящето изобретение.
Благодарение на тяхната фармацевтична и биохимична активност олигозахаридите от настоящето изобретение могат да представляват лекарствени средства с голям интерес. Тяхната токсичност е отлично съвместима с тяхното използване. Те също така имат добра стабилност и са напълно подходящи като активни съставки за съответните фармацевтични препарати.
Те могат да бъдат използвани при различни патологични състояния, в следствие на модификация на хомеостазията на коагулационната система, които се появяват поспециално в процеса на смущения на кардиоваскуларната и церебро-васкуларната система, като тромбоемболични смущения, дължащи се на атеросклероза и диабет, каквито са нестабилна стенокардия, мозъчен удар, рестеноза след ангиопластия, ендартеректомия, поставяне на ендоваскуларни протези, или тромбоемболични смущения, свързани с ретромбоза след тромболиза, инфаркт, деменция с исхемичен произход, на заболявания на периферните артерии, на хемодиализа, на аурикуларни фибрилации или също по време на използването на съдови протези за аортокоронарен понтаж. Освен това тези продукти могат да бъдат използвани за лечение или профилактика на тромбоемболични патологии с венозен произход, като белодробна емболия. Те могат да бъдат използвани или за профилактика или за лечение на тромболитични усложнения, наблюдавани например след хирургически операции, при развитие на тумори или при смущения в коагулацията, предизвикани от бактериални, вирусни или ензимни активатори. В случай на използването им по време на поставяне на протези, съединенията от изобретението могат да покриват протезите и да ги правят също хемосъвместими. По-специално те могат да бъдат фиксирани като се въвеждат в нередуцируемия или редуцируемия край на подходящо разклонение, както е описано в ЕР 649854.
Съединенията от настоящето изобретение могат също да бъдат използвани като адюванти по време на ендартеректомия, която се осъществява чрез порьозни балонети.
Съединенията от изобретението също могат да бъдат използвани за приготвяне на лекарства, предназначени за лечение на горните заболявания.
Съгласно друг от тези аспекти настоящето изобретение също има като обект фармацевтичен състав, съдържащ като активен компонент синтетичен полизахарид от изобретението или негова фармацевтично приемлива сол, евентуално в комбинация с един или повече инертни ексципиенти и подходящи пълнители. Споменатите ексципиенти се избират в зависимост от фармацевтичната форма и желания начин на приложение: орален, сублингвален, подкожен, интрамускулен, интравенозен, трансдермален, трансмукозен, локален или ректален.
OBz
СХЕМА 1- синтез на тризахарид 9 • ·
Активната субстанция може да бъде представена и под форма на комплекс с циклодекстрин, например α, β или γ циклодекстрин, 2-хидроксипропил-3циклодекстрин или метил-β-циклодекстрин.
Активната съставка също може да се освобождава чрез балонет, който я съдържа, или чрез ендоваскуларен екстензор, който се вкарва в кръвоносните съдове. При това фармакологичната ефективност на активното вещество не се нарушава. Във всяка единична дозировка активното вещество присъства в количества, пригодени за предвидените дневни дози, така че да се получи желаният профилактичен или терапевтичен ефект. Всяка единична дозировка може да съдържа от 0,1 до 100 mg от активното вещество, за предпочитане 0,5 до 50 mg. Тези дози от антикоагулантните съединения могат да бъдат неутрализирани чрез дози от авидин или стрептавидин между 1 и 1000 mg в инжекционни iv (интравенозни) болуси или перфузия.
Съединенията от изобретението могат също да се използват в комбинация с едно или повече активни вещества, които са подходящи за желаната терапия, каквито са например антитромболитици, антикоагуланти, тромбоцитни антиагреганти, например дипиридамол, аспирин, тиклоридин, клопидогрел или антагонисти на комплекса на гликопротеин ПЬ/Ша.
Следващите методи, получаване и схеми илюстрират синтеза на различни полезни междинни продукти, необходими за получаването на полизахаридите от изобретението.
Използвани са следните съкращения:
Вп: бензил; Bz: бензоил; ССМ: тънкослойна хроматография; TS: тозил; Lev: левулинил; Et: етил; Ph: фенил; Ме: метил; Ас: ацетил; SE: триметилсилилетил;
ESI: Electron Spray Ionisation; Биотин: хексахидро-2-оксо-1Н-тиено[3,4-б]имидазол4-пентанова киселина; Z: бензоилоксикарбонил.
Представените по-нататък примери за синтез на съединенията от изобретението илюстрират в подробности получаването им.
* ·· ·· ·«·· ·« ··«* ······ ·*· · ··· · · · · · · • · · · · · · ··· · · • · ···· ···· • · · · · · · · · ·· ··
ПРИМЕР 1
2-(Триметилсилил)етил 4,6-О-бензилиден-2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозид (2) Към разтвор на съединение 1 (15,8 g, 42,8 mmol) (получено според К. Jansson et al., J.Org. Chem., 1988, 53, 5629-5647) и 20ml, 319 mmol метилйодид в 350 mL тетрахидрофуран при 0°C се прибавя на малки количества 18 g натриев хидрид. Реакционната смес се разбърква в продължение на 4h при температура на околната среда. Излишъкът от натриев хидрид се разлага с метанол и реакционната смес се излива в 1,5 L ледена вода. След екстракция с етил ацетат органичната фаза се *** промива с наситен разтвор на натриев хлорид, вода, суши се над натриев сулфат, после се концентрира под вакуум. Остатъкът се пречиства чрез хроматография върху колона от силикагел (циклохексан/етил ацетат 15:1 (об/об) и се получават 16,8 g от съединение 2 [а]о = -41° ( с = 0,69, дихлорометан).
ПРИМЕР 2
2-(триметилсилил)етил 6-О-бензил-2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозид (3) Към разтвор на съединение 2 (16 g, 40,3 mmol) в 600 mL тетрахидрофуран се прибавя последователно 82 g молекулярно сито ЗА на прах, метил оранж (оцветен индикатор), 34 g, 526 mmol натриев цианоборохидрид, после се прикапва наситен разтвор на хлороводородна киселина в диетилов етер до получаване на розово оцветяване. След филтриране и екстракция с етил ацетат органичната фаза се промива с наситен разтвор на натриев хидрогенкарбонат, вода, суши се над натриев сулфат и се концентрира под вакуум. След хроматография върху колона силика гел (толуен/етил ацетат 3:1 (об/об) се получават 12,5 g от съединение 3.
[а]о = -42° (с = 1,2, дихлорометан).
ПРИМЕР 3
2-(Триметилсилил)етил(2,3-ди-О-бензоил-4.6-О-бензилиден-а-Р-глюкопиранозил)(1—»4)-(2,3 .б-три-О-бензоил-б-Р-глюкопиранозил)-(1—»4)-6-О-бензил-2,3-ди-Ометил-В-Р-глюкопиранозид (5)
Смес от 16,52 g, 16,60 mmol тиогликозид 4 (полечен съгласно пример 1 на патентна заявка, публикувана с номер WO 99/36443), 6,0 g, 15,05 mmol съединение 3 и 16,7 g • « » * · · · ·
молекулярно сито 4А на прах в 300 ml толуен се разбърква под атмосфера от аргон в продължение на 1 h. После сместа се охлажда до -20°С. Към реакционната смес се прибавя на капки разтвор на 3,8 g, 17,4 mmol N-йодосукцинимид и 0,17 ml, 1,97 mmol трифлуорометансулфонова киселина в смес от 86 mL дихлорометан/диоксан 1/1 (об/об). След 10 min реакционната смес се филтрира, разрежда се с дихлорометан, последователно се промива с 1М разтвор на натриев тиосулфат, 10%-ов разтвор на натриев хидрогенкарбонат, и вода, после се суши над натриев сулфат и се концентрира под вакуум. Остатъкът се пречиства чрез хроматография върху силика гел колона (толуен/етил ацетат 6/1 (об/об) и се получават 18,8 g тризахарид 5.
[α]η = +34° ( с = 1,26, дихлорометан).
ПРИМЕР 4
2-(Триметилсили)етил (4,6-О-бензилиден-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-( β-Ρглукопиранозил)- (1—> 4)-6-О-бензил-2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозид (6) Към разтвор на 18,7 g, 14 mmol от съединение 5 в 140 mL смес от метанол-диоксан 1/1 (об/об) се прибавят 3,15 g калиев трет-бутилат. Разбърква се в продължение на 2h при температура на околната среда. Реакционната смес се неутрализира със смола Powex™ 50WX4 Н+, филтрира се и се концентрира под вакуум. Остатъкът се пречиства чрез хроматография върху силика гел колона (хлорометан/метанол 20/1 (об/об) и се получават 10,0 g от съединение 6.
[а]о = +29° ( с = 1,11, дихлорометан).
ПРИМЕР 5
2-(Триметилсилил)етил (4,6-О-бензил иден-2,3 -ди-О-метил-а-Р-глюко- пиранозил)(1—»4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(!—» 4)-6-О-бензил-2,3-ди-Ометил-В-Р-глюкопиранозид (7)
Към охладена до 0°С смес на 9,93 g, 12,24 mmol от съединението 6, и 9,0 ml 138 mmol метил йодид в 100 mL безводен тетрахидрофуран се прибавят на малки количества 5,2 g, 216 mmol натриев хидрид под атмосфера от аргон. Сместа се • ·· »9 ···· ····· ····«· · · · ·
• · · · · · · · · · 9· • · · · · · ··«· • · · · 4 «· « ·♦· ·· разбърква в продължение на 20h при температура на околната среда. Излишъкът от натриев хидрид се разлага с метанол и реакционната смес се излива в 500 mL ледена вода.След екстракция с етил ацетат, органичната фаза се промива с наситен разтвор на натриев хлорид, суши се над натриев сулфат и после се концентрира под вакуум. Получават се 11 g от съединението 7, което се използва в следващия етап без пречистване.
ССМ: Rf= 0,38, силика гел, толуен/етил ацетат 3/2 (об/об)
ПРИМЕР 6
2-(Триметилсилил)етил (2,3-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4 )-(2,3,6-три-Ометил-В-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)-6-О-бензил-2,3-ди-О-метил-В-Рглюкопиранозид (8)
Съединението 7(11 g) се разтваря в 180 mL 60% оцетна киселина и сместа се разбърква в продължение на l,30h при 80°С. Получената смес се концентрира и се изпарява заедно с толуен. Остатъкът се пречиства чрез хроматография върху колона силика гел (толуен/ацетон 2/1 (об/об) и се получават 8,46 g от съединение 8.
ССМ: Rf= 0,36, силика гел, толуен/ацетон 1/1 (об/об).
ПРИМЕР 7
2-(Триметилсилил)етил (6-О-бензоил-2,3-бензоил-2,3-ди-О-метил-а-Рглюкопиранозил)-(1—> 4)-(2,3,6- три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1—> 4)-6-0бензил-2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозид (9)
Към разтвор на 8,41 g, 10,6 mmol от съединението 8 в 110 mL дихлорометан се прибавят 5,36 g, 22,4 mmol 1-бензоилокси-1Н-бензотриазол и 3,32 mL триетииламин. Сместа се разбърква в продължение на 20h при температура на околната среда, после се разрежда с дихлорометан, промива се с наситен разтвор на натриев хидирогенкарбонат, вода, суши се над натриев сулфат и се концентрира под вакуум. Остатъкът се пречиства чрез хроматография върху колона силика гел (циклохексан/етил ацетат/етанол 5/0,5/0,25 (об/об/об) и се получават 8,40 g от съединение 9.
[α]ϋ = +15° ( с = 2, дихлорометан).
• ·· ·· · · ·· • • »··· • • • · • »·· •
• ·· · • · • • • · · •
• · • • • · • · • ·
··· ·* ·· ·· л·
СХЕМА 2- Синтез на пентазахарид 14
OBz 9
Н
• · • · · · • · • · · ·
ПРИМЕР 8
2-(Триметилсилил) етил (2,3-ди-О-бензоил-4,6-О-бензилиден-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —» 4)-(2,3.6-три-О-бензоил-р-Р-глюкопиранозил)-( 1 4 )-6-0бензоил-2,3-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2,3,6-три-0-метил-В-РглюкопиранозилН 1 —» 4)-6-О-бензил-2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозид (10) Съединението 9 се трансформира в съединение 10 съгласно метода за получаване, описан в пример 3.
[a]D = +42° (с = 2, дихлорометан).
с
ПРИМЕР 9
2-(Триметилсилил) етил (4,6-О-бензилиден-а-Р-глюкопиранозил)-(1—»4)-(β-Ρглюкопиранозил)-(1 —> 4)-(2,3-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил )-(1 —» 4)-(2,3,6-три0- метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)-6-О-бензил-2,3-ди-О-метил-3-Рглюкопиранозид (11)
Съединение 10 се трансформира в съединение 11 съгласно метода за получаване, описан в пример 4
ССМ: Rf= 0,35, силика гел, дихлорометан/метанол 10/1 (об/об).
ПРИМЕР 10
2-(Триметилсилил)етил (4,6-О-бензилиден-2,3-ди-О-метил-а-Рглюкопиранозил)-(1 —»4)-(2,3,6-тр и-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1 —> 4)-(2,3,6три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —» 4)-(2,3,б-три-О-метил-β-Ρглюкопиранозил)-( 1 —»4)-6-О-бензил-2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозид (12) Съединение 11 се трансформира в съединение 12 съгласно метода за получаване, описан в пример 5
ССМ: Rf = 0,11, силика гел, циклохексан/етил ацетат 1/2 (об/об).
ПРИМЕРИ
2-(Триметилсилил) етил (2,3-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил )-(!—> 4)-(2,3,6-три0-метил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2,3.6-три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)• · • ·
(1—> 4)-(2,3.6- три-О-метил-3-Р-глюкопиранозил)-(1—> 4)-6-О-бензил-2,3-ди-Ометил-В-Р-глюкопиранозид (13)
Съединение 12 се трансформира в съединение 13 съгласно метода за получаване, описан в пример 6
ССМ: Rf= 0,33, силика гел, циклохексан/етил ацетат/етанол 2/0,5/0,5 (об/об/об).
ПРИМЕР 12
2-(Триметилсилил)етил (6-О-бензоил-2,3-бензоил-2,3-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —> 4)-(2,3,6- три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(!—»4)-(2,3,6- три-Ометил-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —> 4)-(2,3,6- три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил )(1—» 4)-6-О-бензил-2,3-ди-О-метил-3-Р-глюкопиранозид (14)
Съединение 13 се трансформира в съединение 14 съгласно метода за получаване, описан в пример 7
ССМ: Rf= 0,16, силика гел, циклохексан/етил ацетат/етанол 3/0,5/0,5 (об/об/об).
/*· • · • · · · • · • ·
СХЕМА 3- Синтез на хептазахарид 19
ПРИМЕР 13
2-(Триметилсилил) етил (2,3-ди-О-бензоил-4,6-О-бензилиден-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —» 4)-(2.3. 6-три-О-бензоил-В-Р-глюкопиранозил )-(1 —»4)-6-0бензоил-2,3-ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил )-(1-^ 4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Рглюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2.3,6-три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-(2.3,6три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-6-О-бензил-2,3-ди-О-метил-В-Рглюкопиранозид (15)
Реакцията на свързване на съединението 14 с дизахарида 4 се осъществява съгласно метода за получаване, описан в пример 3, при което се получава съединението 15. [a]D = +52° ( с = 1,1, дихлорометан).
ПРИМЕР 14
2-(Триметилсилил) етил (4,6-О-бензилиден-а-Р-глюкопиранозил)-(1—»4)-(В-Оглюкопиранозил)-(1 —» 4)-(2,3-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил )-(!—> 4)-(2,3,6-триО- метил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2,3,6-три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)(1—»4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1—»4)-6-О-бензил-2,3-ди-Ометил-В-Р-глюкопиранозид (16)
Съединение 15 се трансформира в съединение 16 съгласно метода за получаване, описан в пример 4
CCM:Rf=0,31, силика гел, дихлорометан/метанол 10/1 (об/об).
ПРИМЕР 15
2-(Триметилсилил)етил (4,6-О-бензилиден-2,3-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)(1 —» 4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-[(2,3,6-три-О-метил-а-Рглюкопиранозил)-(!—»4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)- (1—»4)12-6-0бензил-2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозид (17)
Съединение 15 се трансформира в съединение 16 съгласно метода за получаване, описан в пример 4
CCM:Rf=0,46, силика гел, дихлорометан/метанол 10/1 (об/об).
ПРИМЕР 16
2-(Триметилсилил) етил (2,3-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-Н—> 4)-(2,3,6-триО-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)-(2,3,6-три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил )(1—»4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(!—»4)-(2,3,6-три-О-метил-а-Рглюкопиранозил)-( 1 —>4)-(2,3 ,б-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-6-0бензил-2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозид (18)
Съединение 17 се трансформира в съединение 18 съгласно метода за получаване, описан в пример 6
ССМ: Rf= 0,42, силика гел, циклохексан/етил ацетат/етанол 1/0,5/0,5 (об/об/об).
ПРИМЕР 17
2-(Триметилсилил) етил (6-О-бензоил-2,3-бензоил-2,3-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-(!—»4)-(2,3,6- три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(!—»4)-(2,3,6- три-Ометил-а-Р-глюкопиранозил)-(!—»4)-(2,3,б-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)(1 —»4)-(2,3,6-три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —>4)-(2,3 ,6-три-О-метил-В-Рглюкопиранозил)-( 1 —»4)-6-О-бензил-2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозид (19) Съединение 18 се трансформира в съединение 19 съгласно метода за получаване, описан в пример 7
ССМ: Rf= 0,25, силика гел, циклохексан/етил ацетат/етанол 3/0,5/0,5 (об/об/об).
• · • · ♦ · • · • · · ·
СХЕМА 4- Синтез на ноназахарид 23
• ♦ · · · · · 9 · « · ···· • · · · · · · ·· β ··· ··· ··» • ····· · v * е · · • · ···· ···« • · · · · ·· · · ·· ··
ПРИМЕР 18
2-(Триметилсилил)етил (2,3-ди-О-бензоил-4,6-О-бензилиден-а-Р-глюкопиранозил)-(!—»4)-(2,3,6-три-О-бензоил-р-О-глюкопиранозил)-(1 —> 4)-6-0бензоил-2,3-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-(1—>· 4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Рглюкопиранозил)-(!—» 4)-((2,3,6-три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил )-(1 —»4)-(2,3,6три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1—»4)12-6-О-бензил-2,3-ди-О-метил-В-Рглюкопиранозид (20)
Смес от 5,2 g, 5,23 mmol тиогликозид 4,4,72 g, 2,75 mmol хептазахарид 19 и молекулярно сито 4А на прах в толуен се разбърква под атмосфера от аргон в продължение на lh. После се прикапва при 0°С 1,36 g, 5,85 mmol N-йодосукцинимид и 0.140 mL, 1.56 mmol трифлуорометансулфонова киселина в 32 mL дихлорометан/диоксан 1/1 (об/об). След 15 min реакционната смес се филтрира, разрежда се с дихлорометан, промива се последователно с 1М разтвор на натриев тиосулфат, 10%-ов разтвор на натриев хидрогенкарбонат, вода, после се суши над натриев сулфат, концентрира се под вакуум. Остатъкът се пречиства чрез хроматография върху силика гел колона (циклохексан/етил ацетат/етанол 3/05/0.5 (об/об) и се получават 7,13 g от съединение 20.
[a]D = +65° (с = 1,4, дихлорометан).
ПРИМЕР 19
2-(Триметилсилил)етил (4,6-О-бензилиден-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —> 4)-(β-Ρглюкопиранозил)-( 1 —> 4)-(2,3 -ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2,3,6-триО-метил-р-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-((2,3,6-три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)(1—> 4)-(2,3,6- три-О- метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1—»4))2-6-О-бензил-2,3-ди-Ометил-р-Р-глюкопиранозид (21)
Съединение 20 се трансформира в съединение 21 съгласно метода за получаване, описан в пример 4
ССМ: Rf= 0,27, силика гел, дихлорометан/метанол 10/1 (об/об).
* ♦· ·· ··♦· >· ···· • · · · ·· · ·· · • · · ··· «·· • ····· · ··· · · • · ··♦· ···· • ·· ·· ·· ·· · « ··
ПРИМЕР 20
2-(Триметилсилил) етил (4,6-О-бензилиден-2,3-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)(1 —»4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-((2,3,6-три-О-метил-а-Рглюкопиранозил)-(1 —»4)-(2,3,б-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил )-(1 —> 4)L-6-Oбензил-2,3 -ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозид (22)
Съединение 21 се трансформира в съединение 22 съгласно метода за получаване, описан в пример 5
CCM:Rf=0,31, силика гел, циклохексан/етил ацетат/етанол 5/1/1 (об/об/об).
ПРИМЕР 21
2-(Триметилсилил)етил (2,3-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-(2,3,6-три-Ометил-В-Р-глюкопиранозил )-(!—> 4)-1(2,3, б-три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)(1 —> 4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 —» 4)Ъ-6-О-бензил-2,3 -ди-Ометил-В-Р-глюкопиранозид (23)
Съединение 21 се трансформира в съединение 22 съгласно метода за получаване, описан в пример 5
ССМ: Rf= 0,35, силика гел, циклохексан/етил ацетат/етанол 2/1/1 (об/об/об).
СХЕМА 5 -Синтез на ноназахарид 29 w'
ПРИМЕР 22
2-(Триметилсилил)етил (2,3-ди-О-метил-6-О-тозил-а-Р-глюкопи19анозил)-(1 —> 4)(2,3 ,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 —» 4)-((2,3,6-три-О-метил-а-Рглюкопиранозил)-(1—> 4)-(2,3,6- три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)К-6-Обензил-2,3-ди-О-метил-р-Р-глюкопиранозид (24)
Под атмосфера от аргон 1.09 g от съединение 23 се разтварят в 10 mL пиридин, после се прибавят 1,03 g тозил хлорид. След разбъркване в продължение на 2h сместа се разрежда с 100 mL дихлорометан. Органичната фаза се промива последователно с 10%-ов разтвор на калиев хидрогенсулфат, с вода, после се суши и се изпарява до сухо. След хроматография на колона силика гел (толуен/ацетон 2,3/2 (об/об) се получават 1,77 g от съединение 24.
CCM:Rf=0,5, силика гел, циклохексан/етил ацетат/етанол 3/1/1 (об/об/об).
ПРИМЕР 23
2-(Триметилсилил)етил (6-дезокси-2,3-ди-О-метил-6-фталимидо-а-Рглюкопиранозил)-(1 —»4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-((2,3,6три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —» 4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)Ъ-6-О-бензил-2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозид (25)
Към разтвор на 500 mg, 0.23 mmol от съединение 24 в 11 mL Ν,Ν-диметилформамид анхидрид, съдържащ молекулярно сито 4А на прах, се прибавят 225 mg, 1,38 mmol калиев фталимид и после 121,5 mg, 0.46 mmol етер -крона 18-краун-6. Сместа се разбърква в продължение на 4h при 80°С. След като се охлади, реакционната смес се разрежда с дихлорометан, филтрира се върху Целит и се концентрира. Остатъкът се пречиства чрез хроматография върху гел Sephadex® LH20 (3x100) (дихлорометан/етанол 1/1 (об/об), последвано от хроматография върху силика гел колона (толуен/етанол 11/2 (об/об), и се получават 417,4 mg от съединение 25. ССМ: Rf= 0,38, силика гел, толуен/етанол 11/2 (об/об).
ПРИМЕР 24
2-(Триметилсилил)етил (2,3,4,6-тетра-О-ацетил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)(2,3,6-три-О-ацетил-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —> 4)-(2,3,6-три-О-ацетил-В-Рглюкопиранозил)-( 1 —»4)-(6-дезокси-2,3-ди-О-метил-6-фталимидо-а-Р• ·· · · ···· ♦ · · · · ······ ··· · • · · ··· ··· • ····· · ··· * « • · · · · · ···· • · · · · ·· · · ·· ·· глюкопиранозил)-(!—»4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1—»4)- [(2,3,6три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2,3,6- три-О-метил-В-Рглюкопиранозил)-( 1 —» 4)]3-6-О-бензил-2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозид (27) Смес от 1,515 g, 1,564 mmol тиогликозид 26 (получен аналогично на съединение 41, от пример 36 на патент WO 99/36443), 840 mg, 0.391 mmol акцептор 25 и 2.15g молекулярно сито 4А на прах в 33 mL толуен се разбърква под атмосфера от аргон в продължение на lh. Реакционната смес се охлажда до 0°С и се прибавя разтвор на 387 mg N-йодосукцинимид и 55.4 pL трифлуорометансулфонова киселина в 7 mL дихлорометан/диоксан 1/1 (об/об). След 10 min сместа се филтрира, разрежда се с толуен, промива се последователно с 1М разтвор на натриев тиосулфат, 10%-ов разтвор на натриев хидрогенокарбонат и вода, суши се над натриев сулфат и после се концентрира под вакуум. Остатъкът се пречиства чрез хроматография върху Sephadex® LH20 (дихлорометан/етанол 1/1 (об/об), последвано от хроматография върху силика гел колона (толуен/ацетон 5/4 (об/об), и се получават 887 mg от съединение 27.
[a]D = +70° (с = 0,35, дихлорометан).
ПРИМЕР 25
2-(Триметилсилил)етил (2,3,4,6-тетра-О-ацетил-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)(2,3,6-три-О-ацетил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2,3,6-три-О-ацетил-В-РглюкопиранозилН 1 —>· 4)-(6-дезокси-2,3-ди-О-метил-6-фталимидо-а-Рглюкопиранозил)-(1 —* 4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1—»4)-Г(2,3,6три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —» 4)-(2,3,6- три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1—> 4)13-2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозид (28)
Разтвор на 750 mg, 0,245 mmol от съединение 27 в 37mL оцетна киселина се обработва под налягане от 5 bars водород в присъствие на 750 mg 10%-ов паладий/въглерод в продължение на 2,30 h. След филтриране разтворът се концентрира и остатъкът се пречиства чрез хроматография върху колона силика гел (толуен/етанол 6/1 (об/об), и се получават 728 mg от съединение 28. CCM:Rf=0,32, силика гел, толуен/етанол 6/1 (об/об).
ПРИМЕР 26
2-(Триметидсилил)етил (2,3,4,6-тетра-О-ацетил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —» 4)(2,3,6-три-О-анетил-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)-(2,3,6-три-О-ацетил-В-Рглюкопиранозил)-(1 —»4Н6-дезокси-2,3 -ди-О-метил-6-фталимидо-а-Рглюкопиранозил)-(1—> 4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1—» 4)- [(2,3,6три-О-метид-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2,3,6- три-О-метил-В-Р-глюкопиранозилН! —»4)]уб-0-ацетил-2,3-ди-0-метил-В-Р-глюкопиранозид (29) Към разтвор на 728 mg, 0.245 mmol съединение 28 в 10 mL дихлорометан се прибавят 51,1 pL, 0.368 mmol триетиламин, 32,5 pL, 0.344 mmol оцетен анхидрид и 6,0 mg, 0.049 mmol диметиламинопиридин. След като се разбърква в продължение на lh, разрежда се с дихлорометан, промива се последователно с 10%-ов разтвор на калиев хидрогеносулфат, вода, наситен разтвор на натриев хидрогенокарбонат и вода, суши се върху натриев сулфат и после се изпарява под вакуум. Остатъкът се пречиства чрез хроматография върху/ силика гел колона и се получават 0,618 mg от съединение 29.
CCM: Rf= 0,37, силика гел, толуен/етанол 6/1 (об/об).
СХЕМА 6- Синтез на олигозахарид 31.
ОМе • · · · *·
9
9 9 9 9 · ··· ·· • 4·«· 9 9 99
9 9 9 9 9 · ·» ·
ПРИМЕР 27 (2,3,4,6-Тетра-О-ацетил-а-Р-глюкопиранозил)-(!—»4)-(2,3,6-три-О-ацетил-а-Рглюкопиранозил)-(1 —»4)-(2,3,6-три-О-ацетил-В-Р-глюкопиранозил)-(1—»4)-(6дезокси-2,3-ди-О-метил-6-фталимидо-а-Р-глюкопиранозил)-(!—»4)-(2,3,6-три-Ометил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-((2,3.6-три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил ΙΟ—> 4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1—> 4)Ъ-6-О-ацетил-2,3-ди-Ометил-В-Р-глюкопираноза (30)
В продължение на lh се разбърква разтвор на 579 mg, 0.192 mmol от съединението 29 в 11,5 mL смес трифлуорооцетна киселина/дихлорометан 2/1 (об/об). Разрежда се с 69 mL смес от толуен/п-пропилов ацетат 2/1 (об/об), концентрира се и после се изпарява заедно с толуен. Остатъкът се пречиства чрез хроматография върху колона от силика гел (толуен/етанол 5/1 (об/об) и се получават 523 mg от съединение 30. ССМ: Rf== 0,31, силика гел, толуен/етанол 5/1 (об/об).
ПРИМЕР 28 (2,3,4,6-Т етра-О-ацетил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-(2,3,6-три-О-ацетил-а-Рглюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2,3,6-три-О-ацетил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 -+ 4)-(6дезокси-2,3-ди-О-метил-6-фталимидо-а-Р-глюкопиранозил)-(1—»4)-(2,3,6-три-Ометил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-((2,3,6-три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)(1—> 4)-(2,3,6- три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1—> 4)Ь-6-О-ацетил-2,3-ди-Ометил-В-Р-глюкопираноза трихлороацетамид (31)
Смес от 65,5 mL, 0.85 mmol трихлороацетамид и 88,4 mg, 0.27 mmol цезиев карбонат се прибавя към разтвор на съединението 30 в 3 mL дихлорометан. След като сместа се разбърква в продължение на 2h, тя се филтрира и концентрира. Остатъкът се пречиства чрез хроматография върху колона от силика гел (толуен/етанол 6/1 (об/об) + 0,1% триетиламин) и се получават 477 mg от съединение 31.
CCM:Rf=0,35, силика гел, толуен/етанол 6/1 (об/об).
9 9999 • “ 9 · · ·
СХЕМА 7 Синтез на хексадеказахарид 35
ПРИМЕР 29
Метил (2,3,4,6-тетра-О-ацетил-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —» 4)-(2,3,6-три-О-ацетил-аР-глюкопиранозил)-(1—»4)-(2,3, 6-три-О-ацетил-В-Р-глюкопиранозил )-(1 —»4)-(6дезокси-2,3 -ди-О-метил-6-фталимидо-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2,3,6-три-Ометил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-((2,3,6-три-О-метил-а-Р-глюко-пиранозил)(1—> 4)-0-(2,3,6- три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1—> 4)l-^-6-O-aцeτил-2,3-ди-Oмeτил-β-P-глюκoπиpaнoзил-( 1 —»4)-(бензилов 2,3 -ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозилуронат)-( 1 —»4)-(3,6-ди-О-ацетил-2-О-бензил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)(бензилов 2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуронат)-(1 —»4)-2,3,6-три-О-бензил-аР-глюкопиранозид (33)
Разтварят се 370 mg, 0.121 mmol имидат 31 и 336 mg, 0.242 mmol от съединението 32 (получено съгласно P.Westerduin et. al., BioOrg. Med. Chem., 1994,2, 1267), в 5.5 mL смес от дихлорометан/диетилетер 1/2 (об/об). След прибавяне на молекулярно сито 4А на прах сместа се охлажда до -20°С и се прибавя 0,1 М разтвор на триметилсилилов трифлуорометансулфонат в 181,5 pL дихлорометан. Сместа престоява 25 min и после се неутрализира чрез прибавяне на твърд натриев хидрогенокарбонат. След филтриране и концентрация, остатъкът се пречиства чрез хроматография върху гел Sephadex® LH20, последвано от хроматография върху колона от силика гел (толуен/ацетон 6/5 (об/об) и се получават 302 mg от съединение 33.
[а]о = +86° ( с = 1, дихлорометан).
ПРИМЕР 30
Метил (2,3,4,6-тетра-О-ацетил-а-Р-глюкопиранозил)-(1—»4)-(2,3,6-три-О-ацетил-аР-глюкопиранозил)-(1 —»4)-(2,3,6-три-О-ацетил-В-Р-глюко-пиранозил)-( 1 —> 4)-(6дезокси-2,3 -ди-О-метил-6-фталими до-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2,3,6-три-Ометил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-((2,3,6-три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)(1—»4)-0-(2,3,6- три-О-метил-В-Р-глюко-пиранозил)-(1—»4)]з-6-О-ацетил-2,3-ди-Ометил-а-Р-глюкопиранозил-( 1 —»4)-(2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозилуронова • ·
киселина)-/1 4)-(3,6-ди-О-ацетил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-(2,3-ди-О-метил g-L-идопиранозил-уронова киселина)-/1-^ 4)-а-Р-глюкопиранозид (34)
Разтвор на 104 mg, 0.024 mmol от съединение 33 в 5 mL оцетна киселина се обработва под налягане от 4 bars водород в присъствие на 104 mg 10%-ов паладий/ въглерод в продължение на 4h. След филтриране разтворът се лиофилизира и се получават 87 mg от съединение 34, което се използва в следващия етап без пречистване.
ПРИМЕР 31
Метил (а-Р-глюкопиранозил)-(1—»4)-/а-Р-глюкопиранозил)-/1—» 4)-(6-дезокси-2,3ди-О-метил-6-фталимидо-а-Р-глюкопиранозил)-/1 —» 4)-/2,3,6-три-О-метил-В-Рглюкопиранозил)-/!—» 4)-(/2,3,6-три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)- (1—> 4)-О(2,3 ,б-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-/1 —> 4)1 ^-(2,3 - ди-О-метил-а-Рглюкопиранозил-/1 —»4)-(2,3 -ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозилуронова киселина)(1 —»4)-(а-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуронова киселина)-/1 —»4)-а-Р-глюкопиранозид (35)
Към разтвор на 80 mg, 0.021 mmol съединение 34 в 6,9 mL безводен метанол в присъствие на 875 mg молекулярно сито ЗА на прах се прибавят 140 pL моларен разтвор на натриев метилат в метанол. След разбъркване 20 h при температура на околната среда сместа се филтрира и неутрализира с помощта на оцетна киселина. Разтворът се концентрира до половин обем и се утаява върху колона Sephadex® G25 (3 х 92 cm). След елуиране с вода и лиофилизация, се получават 66 mg от съединението 35.
СХЕМА 8- Синтез на олигозахарид 37
······ ··· • ····· · ··· · · • · ···♦ ···· •·· ·· ·· ·· ··
ПРИМЕР 32
Метил (2,3,4,6-тетра-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозил)-(!—»4)-(2,3,6-три-Осулфонато-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2,3,6-три-О-сулфонато-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(6-дезокси-2,3-ди-О-метил-6-фталимидо-а-Р-глюкопиранозил)(1—»4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1—> 4)-[(2,3,6-три-О-метил-а-Рглюкопиранозил)-(1—» 4)-0-(2,3,6- три-О-метил-В-Р-глюко-пиранозил)-(1—»4)]3-(6О-сулфонато-2,3-ди-О-метил-а-Р-глюко-пиранозил)-(1—> 4)-(2,3-ди-О-метил-В-Рглюкопиранозилуронова киселина)-(1—»4)-(2,3,6-три-О-сулФонато-а-Рглюкопиранозил)-(1—> 4)-(2,3-ди-О-метил- a-L-идопиранозилуронова киселина)(1—> 4)-2,3,6-три-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозид, натриева сол (36) Разтварят се 66,4 mg, 0.021 mmol полиол 35 в 1,8 mL Ν,Ν-диметилформамид. Прибавят се 320 mg, 1.77 mmol триоксиден комплекс на серен триетиламин и сместа се разбърква в продължение на 20h при 55°С. Разтворът се утаява върху колона Sephadex® G-25 ( 3 х92 cm), елуира се с 0,2 М натриев хлорид. След това фракциите, които съдържат продукта се концентрират, и се обезсолва като се използва същата колона, елуирана с вода. След лиофилизация се получават 83 mg от съединение 36.
Тегло: метод “EST’, негативна форма: химическо тегло= 4968,92; експериментално тегло= 4966,52 ±0.16 u.m.a.
С ПРИМЕР 33
Метил (2,3,4,6-тетра-0-сулфонато-а-В-глюкопиранозил)-(1 —> 4)-(2,3,6-три-Осулфонато-а-В-глюкопиранозил)-(1—* 4)-(2,3,б-три-О-сулфонато-р-В-глюкопиранозил)-(1—> 4)-(6-амино-6-дезокси-2,3-ди-0-метил-6-фталимидо-(х-Вглюкопиранозил)-(1—> 4)-(2,3,6-три-0-метил-р-В-глюкопиранозил)-(1—> 4)[(2,3,6-три-О-метил-а-В-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-0-(2,3,6- три-О-метил-β-Βглюко-пиранозил)-(1—* 4)]3-(6-0-сулфонато-2,3-ди-0-метил-а-В-глюкопиранозил-(1—> 4)-(2,3-ди-0-метил-Р-В-глюкопиранозилуронова киселина)(1—> 4)-(2,3,6-три-0-сулфонато-а-В-глюкопиранозил)-(1—» 4)-(2,3-ди-О-метил- • ····· Λ ··· ·· • 9 · · · ····« • ••99 99 ·· · ·· « a-L-идопиранозилуронова киселина)-(1—» 4)-2,3,б-три-О-сулфонато-a-Dглюкопиранозид, натриева сол (37)
Разтварят се 83 mg, 0.017 mmol съединение 36 в 1,67 mL смес етанол/вода 2/1 (об/об). Прибавят се 81,2 pL, 1,67 mmol хидразин хидрат и сместа се кипи на обратен хладник в продължение на 20 h. Разтворът се утаява върху колона с фин Sephadex® G-25 (3 х 92 cm), елуирана с вода.След това фракциите, които съдържат продукта се концентрират, остатъкът се разтваря в 5.00 mL етанол/вода 2/1 (об/об) и отново се третира както в предишните условия с 81,2 pL хидразин хидрат, и се получават 71 mg от съединение 37.
Тегло: метод “ESF’, негативна форма: химическо тегло= 4838,32; експериментално тегло= 4814,6 ± 0.70 u.m.a.
СХЕМА 9 - Синтез на пентазахарид 39
ПРИМЕР 34
Метил (6-О-ацетил-2-азидо-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил-(1 —> 4)(бензилов 2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозилуронат)-( 1 —» 4)-(3,6-ди-О-ацетил-2О-бензил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(бензилов 2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуронат)-(1 —» 4)-2,3,6-три-О-бензил-а-Р-глюкопиранозид (39)
Разтварят се 265 mg, 0.631 mmol от съединението 6-О-ацетил-2-азидо-2-дезокси3,4-ди-О-метил-а, β, Р-глюкопираноза трихлороацетамидат 38 (получено съгласно J. Basten et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 1992,2(9), 901) и 584 mg, 0.420 mmol съединение 32 (получено съгласно P. Westerduin et al., Bioorg. Med. Chem, 1994,2, 1267) в 28,5 mL смес от дихлорометан/диетилетер 1/2 (об/об). След прибавяне на молекулярно сито 4А на прах, сместа се охлажда до -20°С и се прибавят 94,6 gL 0,1 М разтвор на триметилсилил трифлуорометансулфонат в дихлорометан. След 10 min отново се прибавят 53,8 mg имидат, после 19,2 pL 0,1 М разтвор на триметилсилил трифлуорометансулфонат в дихлорометан. След 10 mm сместа се неутрализира чрез прибавяне на твърд натриев хидрогенокарбонат. После се филтрира и концентрира, остатъкът се пречиства чрез хроматография върху силика гел колона (толуен/етил ацетат 3/1 (об/об), и се получават 499 mg от съединение 39. [a]D = +66° (с = 1,07, дихлорометан).
• ·· ·♦ ···♦ ·· ···· ···· ·· · · β · ······ ··· • ····· · ··· · · ··· 47 ·· ··* ’··’ *··’
СХЕМА 10 -Синтез на пентазахарид 44 (Процес I)
ПРИМЕР 35
Метил (6-О-ацетил-2-амино-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил(1—»4)-(2.3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозилуронова киселина)-! 1—» 4)-(3,6-ди-Оацетил-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)-(2,3 -ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуронова киселина)-! 1—» 4)-2,3,6-три-О-бензил-а-Р-глюкопиранозид (40)
Разтвор на 552,6 mg, 0.335 mmol съединение 39 в 16 mL смес трет-бутанол/етил ацетат 5/1 (об/об) се третира под налягане 10 bars водород в присъствие на 0,336 mL 1М хлороводородна киселина в продължение на 4,30 h. След филтриране разтворът се концентрира и се получава съединение 40, което се използва в следващия етап без пречистване.
ПРИМЕР 36
Метил (2-амино-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил-(1—> 4)-( 2,3-ди-Ометил-В-Р-глюкопиранозилуронова киселина)-! 1 4)-(а-Р-глюкопиранозил)(1—»4)-! 2,3-ди-О-метил-а-Н-идопиранозилуронова киселина)-!!—» 4)-а-Рглюкопиранозид (41)
Разтварят се 324 mg, 0.300 mmol от съединение 40 в 8,8 mL метанол. Прибавят се
2.2 mL 5М разтвор на натриев хидроксид и при температура на околната среда се разбърква в продължение на 16 h. Неутрализира се със смола Dowex ® 50Н и се филтрира. Разтворът се пропуска през колона с фин Sephadex® G-25, която се елуира с вода. Фракциите, съдържащи продукта се концентрират и се получават
254.2 mg съединение 41. На този етап се проверява чрез NMR дали защитните бензилни и ацетилни групи са премахнати.
ССМ: Rf= 0,26, силика гел, етил ацетат/пиридин/оцетна киселина/вода 5/5/1/3 (об/об/об/об).
ПРИМЕР 37
Метил (2-(бензилоксикарбонил)амино-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-а-Рглюкопиранозил-!!—»4)-( 2,3-ди-О-метил-Р-Р-глюкопиранозилуронова киселина)(1 —> 4)-(а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуронова киселина)-! 1—»4)-а-Р-глюкопиранозид (42) • ·· ·· ···· ·· · · ·· ······ ··· · ······ ··· • ····· · ··· · · • · ♦··· · · · · • ·· · · · · · · 9 9 99
Разтварят се 241,1 mg, 0.253 mmol съединение 41 в 12,4 mL вода и се прибавят 63,7 mg натриев хидрогенокарбонат, после се прикапват 41 mL бензилов хлороформиат. След това се разбърква в продължение на 12 h, реакционната смес се пропуска през колона фин Sephadex® G-25, която се елуира с вода. Фракциите, които съдържат продукта, се концентрират. Пречистват се чрез силика гел колонна хроматография (етил ацетат/пиридин/оцетна киселина/вода 21/17/3,6/10 (об/об/об/об) и се получават 221 mg съединение 42.
CCM: Rf= 0,63, силика гел, етил ацетат/пиридин/оцетна киселина/вода 5/5/1/3 (об/об/об/об).
ί*»*
ПРИМЕР 38
Метил (2-(бензилоксикарбонил)амино-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-О-сулфонато-аР-глюкопиранозил-( 1 —»4)-( 2,3 -ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозилуронова киселина)-(1—-> 4)-(2,3,6-три-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозил)-(!—»4)-( 2,3-ди-Ометил- a-L-идопиранозилуронова киселина)-(1—» 4)-2,3,6-три-О-сулфонато-а-Рглюкопиранозид, натриева сол (43)
Разтварят се 19,6 mg, 0.018 mmol полиол 42 в 1.62 mL Ν,Ν-диметилформамид. Прибавят се 114 mg триоксиден комплекс на серен триетиламин и сместа се разбърква в продължение на 20h при 55°С в отсъствие на светлина. Разтворът се отлага върху фина колона Sephadex® G-25, която се елуира с 0,2М натриев хлорид. Фракциите, които съдържат продукта, се концентрират и се обезсолват с помощта на същата колона, като се елуира с вода. След лиофилизация се получават 28,5 mg съединение 43.
[a]D = +48° (с = 2,75, вода).
ПРИМЕР 39
Метил (2-амино-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозил(1—»4)-( 2,3-ди-О-метил-б-Р-глюкопиранозилуронова киселина)-(1—> 4)-(2,3,6-триО-сулфонато-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —» 4)-( 2,3-ди-О-метил-а-Е-идопиранозил • · • · · · • · · · уронова киселина)-(1—» 4)-2.3.6-три-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозид. натриева сол (44)
Разтвор на 27,5 mg, 0.015 mmol съединение 43 в смес от 333 pL трет-бутанол /500 pL вода се третира под налягане 5 bars водород в присъствие на 8,25 mg 10%-ов паладий/въглерод в продължение на 16h. След филтриране разтворът се концентрира и остатъкът се отлага върху колона с фин Sephadex® G-25 (3 х 92ст). След това се елуира с вода, лиофилизира се и се получават 23,7 mg съединение 44. [a]D = +58°(c = 1, вода).
СХЕМА 11- Синтез на тетразахарид 48
• · ··
ПРИМЕР 40
Метил (4-О-левулинил-2,3-ди-О-метил-б-Р-глюкопиранозилуронова киселина)(1—» 4)-( 3,6-ди-О-ацетил-а-Р-глюкопиранозил)-(1—»4)-( 2.3-ди-О-метил-а-Ьидопиранозилуронова киселина)-! 1—»4)-а-Р-глюкопиранозид (46)
Разтвор на 4,50 g, 3.02 mmol съединение 45 (получено според Р. Westerduin et al., BioOrg. Med.Chem. 1994,2,1267) в 72 mL смес от етил ацетат/трет-бутанол 1/1 (об/об) се третира под налягане 4 bars водород в присъствие на 9,0 g 10%-ов паладий/въглерод в продължение на 6h. След филтриране и концентриране, полученото съединение 46 директно се използва в следващите етапи без пречистване.
ССМ: Rf= 0,54, етил ацетат/пиридин/оцетна киселина/вода 26/22/4,6/17 (об/об/об/об).
ПРИМЕР 41
Метил (4-О-левулинил-2,3 -ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозилуронова киселина)(1—>4)-(2,3,6-три-О-ацетил-а-Р-глюкопиранозил)-(1—»4)-(метил 2,3-ди-О-метил-аС-идопиранозилуронат)-(1 —»4)-2,3,6-три-О-ацетил-а-Р-глюкопиранозид (47) Към разтвор на 2,57 g, 2,71 mmol съединение 46 в 35mL Ν,Ν-диметилформамид при 0°С се прибавят 2,71 g калиев хидрогенокарбонат, после 3,4 mL метил йодид.
Разбърква се 16 h при температура на околната среда и после реакционната смес се охлажда до 0°С. След това се прибавя последователно 132 mg диметиламинопиридин и после 1,5 mL оцетен анхидрид. Сместа се разбърква в продължение на 16 h. След неутрализиране на излишъка от оцетен анхидрид, разрежда се с етил ацетат. Органичната фаза се промива последователно с 10%-ов разтвор на калиев хидрогеносулфат, вода, наситен разтвор на натриев хидрогено карбонат, вода, и се суши над натриев сулфат, филтрира се и се изпарява до сухо. Остатъкът се пречиства чрез хроматография върху силика гел колона [ циклохексан /етил ацетат/етанол 1/1) 9/5], и се получават 2,51 g съединение 47.
ССМ: Rf= 0,41, толуен/ацетон 2/1 (об/об).
• · * · •ч ··
ПРИМЕР 42
Метил (метил 2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозилуронат)-(1—» 4)-(2, 3,6-три-Оацетил-а-Р-глюкопиранозил )-(!—> 4)-(метилов 2,3-ди-О-метил- g-L-идопиранозилуронат)-(1—»4)2,3,6-три-О-ацетил-а-Р-глюкопиранозид (48)
Разтварят се 2,5 g, 2,56 mmol от съединение 47 в 500 mL смес толуен/етанол 1/1 об/об. Прибавят се 1,01 g хидразин ацетат. Разбърква се 2h при температура на околната среда, и после реакционната смес се концентрира до сухо. Остатъкът се разтваря в дихлорометан. Органичната фаза се промива последователно с 2%-ов разтвор на натриев хидрогено карбонат, вода, суши се над натриев сулфат, филтрира се и се изпарява до сухо. След хроматография върху силика гел колона (толуен/етил ацетат 1/4 об/об), получават се 2,01 g съединение 48.
ССМ: Rf= 0,37, толуен/ацетон 2/1 (об/об).
·· · · ···♦ · ·«·· • · · · · * ·· • · · · · · · · · ·· • ···· « · ·t • · ·· ·· · · ··
СХЕМА 12 -Синтез на пентазахарид 49
ПРИМЕР 43
Метил (6-0-ацетил-2-азидо-2-дезокси-3,4-ди-0-метил-а-И-глкжопиранозил(1—> 4)-(метил 2,3-ди-0-метил-р-0-глюкопиранозилуронат)-(1—> 4)-(2,3,6-три-Оацетил-а-0-глюкопиранозил)-(1—> 4)-(метил 2,3-ди-О-метил- a-L-идопиранозилуронат)-(1—* 4)-23»6-три-0-ацетил-а-В-глюкопиранозид (49)
Разтварят се 1,18 g, 2,81 mmol съединение 38 (получено според J. Basten et al., Med. Chem. Lett. 1992,2(9), 901), и 1,83 g, 1,75 mmol съединение 48 в 126 mL смес от дихлорометан/диетилетер 1 /2 (об/об). След това се прибавя молекулярно сито 4А на прах и сместа се охлажда до -20°С и се прибавят 421 pL 1М разтвор на трифлуоро метансулфонат на трет-бутилдиметилсилил в дихлорометан. След 30 min се прибавя ново количество от 266 mg имидат и 168 pL 1М разтвор на трифлуорометансулфонат в дихлорометан. След 10 min сместа се неутрализира чрез прибавяне на твърд натриев хидрогенкарбонат и се филтрира. Извлича се с дихлорометан, промива се последователно с 2%-ов разтвор на натриев хидрогенкарбонат, вода, суши се над натриев сулфат, после се концентрира под вакуум.
Полученият остатък се пречиства чрез хроматография на силика гел колона (дихлорометан/етил ацетат 4/3, после 1/1 об/об) и се получават 1,814 g от съединение 49. ССМ: Rf= 0,57, толуен/етил ацетат 3/1 (об/об).
[а]о = +93°(с= 1,15 вода).
• · ··
СХЕМА 13-Синтез на пентазахарид 44 (процедура II)
····
ПРИМЕР 44
Метил (2-азидо-2-деокси-3,4-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-2,3-ди-Ометил-В-Р-глюкопиранозилуронова киселина)-! 1 —»4)-(а-Р-глюкопиранозил)(1 —»4)-(2,3-ди-О-метил-а-Е-идопиранозилуронова киселина)-! 1 »4)-а-Рглюкопиранозид (50)
Към 42 mL 30%-на кислородна вода при -5°С се прибавя разтвор на 845,3 mg съединение 49 в 104 mL тетрахидрофуран. След като се разбърква 5h прикапват се 19,2 mL 0,7 М воден разтвор литиев хидроксид. Реакционната смес се разбърква в продължение на lh при -5°С, после още 4h при 0°С и на края в продължение на 16h при температура на околната среда. Неутрализира се с 1М разтвор на хлороводородна киселина.
Разтворът се утаява върху колона Sephadex® G-25 (5 xlOOO cm), елуирана с вода. Фракциите, които съдържат желаното съединение се обединяват, концентрират се и се утаяват върху колона със смола Dowex AG 50 WXA Н+ (50 mL). Съединението се получава при 0°С и после се концентрира, за да се получат 618 mg от съединение 50.
ССМ: Rf= 0,56, етил ацетат/пиридин/оцетна киселина/вода 26/22/4,6/17 (об/об/об/об).
с ПРИМЕР 45
Метил (2-азидо-2-деокси-3,4-ди—О-метил-6-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозил)(1 -+4)-2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозилуронат)-( 1 -+4)-(2,3, 6-три-О-сулфонатоа-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)-(2,3 -ди-О-метил-а-Е-идопиранозилуронат)-( 1 —>4)2.3,6-три-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозид. натриева сол (51)
Непосредствено преди употреба съединение 50 се дестилира едновременно с Ν,Νдиметилформамид (3 х 29 mL). Към 612 mg, 0.624 mmol от съединение 50 в 58 mL Ν,Ν-диметилформамид се прибавят 3,84 g триоксиден комплекс на серен триетиламин. Сместа се разбърква в продължение на 16 h при 55°С, като се предпазва от светлина. След това тази смес се охлажда до 0°С и се прибавя на капки * · · · с · към 5,33 g разтвор на натриев хидрогенокарбонат в 200 mL вода. Разбърква се в продължение на 16h при температура на околната среда и се концентрира до сухо. Остатъкът се разтваря във вода и разтворът се утаява върху колона от фин Sephadex® G-25, елуирана с 0,2 М натриев хлорид. Фракциите, съдържащи желания продукт се концентрират и се обезсолват като се използва същата колона, елуирана с вода. След лиофилизация се получават 1,06 g от съединение 51.
ССМ: Rf= 0,5, етил ацетат/пиридин/оцетна киселина/вода 3/5/1/3 (об/об/об/об).
ПРИМЕР 46
Метил (2-амино-2-деокси-3,4-ди-О-метил-6-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозил)(1 ^4)-2,3-ди-О-метил-З-Р-глюкопиранозилуронова киселина)-(1—»4)-(2.3,6-три-Осулфонато-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2,3-ди-О-метил-а-С-идопиранозилуронова киселина)-! 1—»4)-2,3,6-три-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозид, натриева сол (44) Тази хидрогенолиза се осъществява на два пъти и всеки път на базата на 534,4 mg от съединение 51.
Разтвор на 534,4 mg съединение 51 в смес от 6,7 mL, 12,6 mL/g трет-бутанол /10 mL, mL/g вода се третира под налягане от 5 bars водород в присъствие на 160 mg
10%-ов паладий/въглерод при 40°С в продължение на 4 h. След филтриране (филтър Millipore® LSWP 5 pm) разтворът се концентрира до сухо и се получават 530 mg от съединение 44.
ССМ: Rf= 0,49, етил ацетат/пиридин/оцетна киселина/вода 3/5/1/3 (об/об/об/об).
Г w
ОПИТ1
СЧ H s e o
φ Ξ
Е
ОПИТ 3
ОПИТ 5
Η s е ο • · « · • · ··
• · • · ♦ · ·
ОПИТ1
Метил (2,3,4,6-тетра-О-сулФонато-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2,3,6-три-ОсулФонато-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2,3.6-три-О-сулФонато-В-Р-глюкопиранозил)-(1—» 4)-(6-биотинамидо-6-дезокси-2,3-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозилМ 1 4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)-((2,3,6-три-Ометил-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)-0-(2,3,6- три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)(1 —»4)13-(6-О-сул Фонато-2,3 -ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1 -» 4)-(2,3 -ди-Ометил-В-Р-глюкопиранозилуронова киселинаН 1 —»4 )-(2,3,6-три-О-сулфонато-а-Dглюкопиранозил)-(!—»4)-(2,3-ди-О-метил- a-L-идопиранозилуронова киселина)(1—»4)-2,3,6-три-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозид, натриева сол
Към разтвор на 18 mg, 3.72 μιηοΐ съединение 37 в 1,5 mL 0,5%-ов натриев хидрогено карбонат се прибавят 16,5 mg биотинов сулфосукцинимид. След като се разбърква в продължение на 16 h при температура на околната среда, реакционната смес се утаява върху колона с фин Sephadex® G-25, която се елуира с натриев хлорид. Фракциите, които съдържат желания продукт се обезсолват върху същата колона, елуирана с вода. След лиофилизация се получават 15,9 g от съединението, посочено в заглавието на опит 1.
[a]D = +59° (с = 0,78 вода).
Тегло: метод “ESI”, негативна форма: химическо тегло= 5065,12; експериментално тегло= 5064,18 ± 1.04 u.m.a.
ОПИТ 2
Метил (2,3,4,6-тетра-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозил)-(!—»4)-(2,3,б-три-Осулфонато-α-Р-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-(2,3,6-три-О-сулфонато-В-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)-(6-[6-(биотинамидо) хексамидо1-6-дезокси-2,3-ди-О-метил-а-Рглюко-пиранозил)-(1—»4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-(1—>4)-[(2,3,6три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —» 4)-0-(2,3,6- три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)-( 1 4)Ъ-(6-О-сулфонато-2,3 -ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)-(2,3 ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозилуронова киселинаН 1 —»4)-(2,3,6-три-Осулфонато-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —>4)-(2,3-ди-О-метил-q-L-идопиранозил rf*»уронова киселина)-(1—> 4)-2,3,6-три-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозид, натриева сол
Към разтвор на 18 mg, 3,72 μιποί съединение 37 в 1,5 mL 0,5%-ов натриев хидрогенокарбонат се прибавят 16,5 mg б-(биотинамидо) хексаноат. Реакционната смес се разбърква в продължение на 16 h при температура на околната среда, и след това сместа се утаява върху колона с фин Sephadex® G-25, елуирана с натриев хлорид. Фракциите, съдържащи продукта, се концентрират върху същата колона, която се елуира с вода. След лиофилизация се получават 17,9 mg от съединението цитирано в заглавието на опит 2.
[a]D = +60° (с = 1,0 вода).
Тегло: метод “ESP’, негативна форма: химическо тегло= 5178,28; експериментално тегло= 5176,3 ± 0.77 u.m.a.
опитз
Метил (2,3,4,6-тетра-0-сулфонато-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)-(2,3,6-три-Осулфонато-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(2,3,6-три-О-сулфонато-В-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)-(6-[6-(6-биотинамидохексамидо) хексамидо]-6-дезокси-2,3-диО-метил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —>4)-(2,3,6-три-О-метил-В-Р-глюкопиранозил)(1 —» 4)-Г(2,3,6-три-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-0-(2,3,б-три-О-метил-βР-глюкопиранозил)-( 1 4)]з-(6-О-сулфонато-2,3-ди-О-метил-а-Р-глюкопиранозил)-(1--» 4)-(2,3-ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозилуронова киселина)-! 1—»4)(2,3,6-три-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —»4)-(2,3-ди-О-метил- q-Lидопиранозилуронова киселина)-! 1—» 4)-2,3,6-три-О-сулфонато-а-Рглюкопиранозид, натриева сол
Към разтвор на 17 mg, 3,51 mmol от съединение 37 в 1,4 mL 0,5%-ов натриев хидрогенокарбонат се прибавят 23,6 mg сулфосукцинимидил 6-(6-биотинамидохексамидо). След като се разбърква в продължение на 16 h при температура на околната среда, реакционната смес се утаява върху колона с фин Sephadex G-25, елуирана с натриев хлорид. Фракциите, които съдържат желания продукт се концентрират и се обезсолват върху същата колона, която се елуира с вода.
·· · · • · · • · · · • · ·· · · ·
След лиофилизация се получават 17,4 mg от съединението цитирано в заглавието на опит 3.
[a]D = +64° ( с = 1,0 вода).
Тегло: метод “ESI”, негативна форма: химическо тегло= 5291,44; експериментално тегло= 5292,1 ± 0.83 u.m.a.
ОПИТ 4
Метил (2-биотинамидо-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозилН 1 —> 4)-(2,3-ди-О-метил-З-Р-глюкопиранозилуронова киселина)(1—»4)-(2,3,6-три-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозил )-(!—> 4)-(2,3-ди-О-метил- q-Lидопиранозилуронова киселина)-(1—»4)-2,3,6-три-О-сулфонато-а-Рглюкопиранозид, натриева сол
Към разтвор на 21,2 mg, 0.012 mmol съединение 44 в 750 pL 0,5%-ов натриев хидрогенокарбонат се прибавя разтвор на 42 mg биотин N-хидроксисукцинимид в 750 mL Ν,Ν-диметилформамид. След това се разбърква в продължение на 16 h при температура на околната среда и реакционната смес се утаява върху колона с фин Sephadex® G-25. След като се елуира с вода и лиофилизира, получават се 22,3 mg от съединението от заглавието на опит 4.
[а]о = +3 8° (с = 0,15 вода).
Тегло: метод “EST’, негативна форма: химическо тегло= 1938,48; експериментално С тегло= 1937,48 ±0.11 u.m.a.
ОПИТ 5
Метил (2-ГМ-(6-биотинамидо хексаноил)]-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-Осулфонато-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —» 4)-(2,3-ди-О-метил-р-Р-глюкопиранозилуронова киселина)-(1 —> 4)-(2,3,6-три-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозил)(1—» 4)-(2,3-ди-О-метил-а-Е-идопиранозилуронова киселина)-( 1 —»4)-2,3,6-три-Осулфонато-а-Р-глюкопиранозид, натриева сол
Тази реакция се осъществява на два пъти, като всеки път се излиза от 494,5 mg от съединение 44.
Разтварят се 494,5 mg, 0.298 mmol от съединение 44 в 116 mL 0,5%-ов натриев хидрогенокарбонат. Прибавят се на капки 1,46 g, 2,63 mmol б-(биотинамидо) • · · ·
V • · • · • · · • · • · хексаноат на сулфосукцинимид в 12 mL 0,5%-ов разтвор на натриев хидрогенокарбонат. След разбъркване в продължение на 16 h при температура на околната среда се прибавя 1М воден разтвор на натриев хидроксид и се разбърква в продължение на lh. Реакционната смес се утаява върху колона е фин Sephadex® G25 (5 χ 1000 cm), елуирана с натриев хлорид. Фракциите, които съдържат продукта, и които са получени от две процедури се обединяват. След лиофилизация се получават 999,2 mg съединението, посочено в опит 5.
ССМ: Rf= 0,42, етил ацетат/пиридин/оцетна киселина/вода 3/5/1/3 (об/об/об/об). Тегло: метод “ESL, негативна форма: химическо тегло= 2051,64; експериментално тегло= 2051,60 ± 0.43 и. .ш.а.
ОПИТ 6
Метил (2-[6-(6-биотинамидохексамидо) хексамидо]-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-Осулфонато-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —»4 )-(2,3 -ди-О-метил-В-Р-глюкопиранозилуронова киселина)-! 1 —»4)-(2,3,6-три-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозил)-(1 —>4)(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуронова киселина)-! 1-»4)-2,3,6-три-Осулфонато-а-Р-глюкопиранозид, натриева сол.
Разтварят се 30,1 mg, 17,6 pmol от съединение 44 в 7 mL 0.5% воден разтвор на натриев хидрогено карбонат. Прибавят се на капки 118 mg, 176 pmol 6-(6биотинамидохексамидо) сулфосукцинимидил в 1 mL 0.5% разтвор на натриев хидрогенокарбонат. След разбъркване в продължение на 16 h при температура на околната среда, се прибавя 1М воден разтвор на натриев хидроксид и се разбърква още lh. Реакционната смес се излива върху колона Sephadex® G-25 фин (2 х85 cm), която се елуира с натриев хлорид. Фракциите, които съдържат продукта се обединяват, концентрират се и се обезсолват върху колона с фин Sephadex® G-25 (2 х 85 cm), която се елуира е вода.
След лиофилизация се получават 26,5 mg от съединението от опит 6.
Тегло: метод “ESI”, негативна форма: химическо тегло = 2164,48; опитно тегло: 2164± 0,38 u.m. а.

Claims (15)

  1. ПРЕТЕНЦИИ
    1 .Синтетични полизахариди с антитромболитична активност и техните фармацевтично приемливи соли, характеризиращи се с това, че съдържат поне една ковалентна връзка с биотин или производно на биотин.
  2. 2. Полизахариди съгласно претенция 1 с формула (I):
    в която: - начупената линия означава връзка, разположена или над, или под равнината на пиранозиновия пръстен, (Ро)
    Ро означава полизахарид, съдържащ η еднакви или различни монозахаридни единици, свързани чрез техния аномерен въглероден атом към Ре.
    Горната формула е схематично представяне на една монозахаридна единица с пиранозинова структура, избрана между хексози, пентози и съответните дезокси захари, като тази единица е свързана чрез нейния аномерен въглерод за друга монозахаридна единица, и хидроксилните групи на тази единица са субституирани с групи Ri, които са еднакви или различни, и Ri е такова, както е дефинирано по долу,
    -Ре представлява пентазахарид със структура:
    и е цяло число и може да има всички стойности между 0 и 25,
    Ri представлява веригата -Τ-Βίοζ група (СгСб)алкокси или група -OSO
  3. 3
    R2 представлява веригата -T-Biot, група (С1-Сб)алкокси или група -OSCV,
    R3 представлява веригата -T-Biot, група (СгСб)алкокси,
    R4 представлява веригата -Τ-Βίοζ група (СгСб)алкокси или група -OSCh, или пък
    R4 създава мост -О-СН2-, групата -СН2-, която е свързана с въглеродния атом, носещ карбоксилната функция в същия пръстен;
    Като се подразбира, че поне един от заместителите Rb R2, R3 или R4 представлява групата -Τ-Βίοζ
    W представява кислороден атом или метиленова група,
    Т представлява някоя от връзките, избрана между: ΝΗ, или в които j и к са еднакви или различни и са единици, които могат да имат всички стойности от 1 до 10;
    -Biot представлява групата:
    • « • ♦ · · както и техните фармацевтично приемливи соли.
    (1.1) в която — ΠΊ означава специална фамилия полизахариди Ро, свързани чрез техния аномерен въглерод към Ре, както е дефинирано за формула (I).
    е както е дефинирано за формула (I).
    -групите Ri са такива, както са дефинирани във формула (I), и за един и същи монозахарид могат да бъдат еднакви или различни,
    -съдържанието на монозахарид в [ ]т се повтаря m пъти, съдържанието на монозахарид в [ ]t се повтаря t пъти, съдържанието на монозахарид в [ ]р се повтаря р пъти;
    • · · · ·· 9·
    -m е цяло число, което варира от 1 до 5; t е цяло число, което варира от 0 до 24; и р е цяло число, което варира от 0 до 24, като се има пред вид, че l<m + t + p>25; както и техните фармацевтично приемливи соли.
  4. 4. Полизахариди съгласно претенция 3, характеризиращи се с това, че само един от заместителите Ri, R.2, R3 или R4 представлява връзката -Τ-Biot-, където Т и Biot имат значенията, както са дефинирани за формула (I).
  5. 5. Хексадеказахариди с формула (1.2) в която:
    Т представлява връзка, избрана между:
    NH, или в които j и к, които са еднакви или различни, са цели числа, които могат да имат всички стойности от 1 до 10;
    Biot представлява групата
    О ···· (Ре) в която:
    - Ri представлява група (Cj-Ce) или група -OSO3 _,
    - R2 представлява група (Ci-C6) или група -OSO3,
    - R3 представлява група (СгСб);
    - R4 представлява група (Ci-Сб) или група -OSO3~, или R4 съдържа мост -О-СН2-, групата -СН2- е свързана с въглеродния атом, носещ карбоксилната функция в същия пръстен,
    - W представлява кислороден атом или метиленова група, както и техните фармацевтично приемливи соли.
  6. 6. Пентазахариди съгласно коя да е от претенции 1 или 2 с формула (1.3) характеризиращи се с това, че Rb R2, R3, R4 и W имат значенията, дефинирани за формула (I), както и техните фармацевтично приемливи соли.
  7. 7. Пентазахариди съгласно претенция 6, характеризиращи се с това, че само един от заместителите Rb R2, R3 или R4 представлява връзката -Τ-Biot-, където Т и Biot имат значенията, както са дефинирани за формула (I).
  8. 8. Пентазахариди съгласно претенции 6 или 7 с формула (1.3) до формула (1.4):
    в която
    T представлява някоя от връзките, избрани между: NH, • ·
    A A A A или
    J О в които j и к са еднакви или различни и представляват целости, които могат да имат всички стойности между 1 и 10;
    Biot представлява групата: в която:
    Ri представлява група (СрСб) или група -OSCV,
    R2 представлява група (СрСв) или група -OSO3-,
    R3 представлява група (Ci-C6);
    Rt представлява група (Ci-Cg) или група -OSO3, или R4 съдържа мост -О-СН2-, групата —СН2- е свързана с въглеродния атом, носещ карбоксилната функция в същия пръстен,
    W представлява кислороден атом или метиленова група, както и техните фармацевтично приемливи соли.
  9. 9. Полизахариди съгласно някоя от претенциите 1 или 2, избрани между:
    Метил (2,3,4,6-тетра-О-сулфонато-а-О-гликопиранозил)-(1—»4)-(2,3,6-три-Осулфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1 —> 4)-( 2,3,6-три-О-сулфонато-Р-О-глюкопиранозил)-( 1 —»4)-(6-биотин-амидо-6-дезокси-2,3-ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1 —► 4)-(2,3,6-три-О-метил-р-О-глюкопиранозил-(1—> 4)-((2,3,6-три-Ометил-3-0-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-( 2,3,6-три-О-метил-Р-О-глюкопиранозил)(1 4)]з-(6-О-сулфонато-2,3-ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-( 1 4)-(2,3 -ди-Ометил-р-О-глюкопиранозилуронова киселина)-( 1 —> 4)-(2,3,6-три-0-сулфонато-а-0глюкопиранозил)-(1 —> 4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуронова киселина)(1—* 4)-2,3,6-три-О-сулфонато-а-О-глюкопиранозид, натриева сол, Метил (2,3,4,6-тетра-0-сулфонато-а-0-гликопиранозил)-( 1 —>4 )-(2,3,6-три-Осулфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1—> 4)-( 2,3,6-три-0-сулфонато-Р-0глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-(6-[6-биотинамидо)хексамидо]-6-дезокси-2,3-ди-О-метилα-D- глюкопиранозил)-(1—> 4)-(2,3,6-три-О-метил-3-О-глюкопиранозил-(1—> 4)[(2,3,6- три-О-метил-Р-О-глюкопиранозил)-(1—> 4)-( 2,3,6-три-О-метил-р-Оглюкопиранозил)-( 1 —> 4)]з-(6-О-сулфонато-2,3-ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)(1—* 4)-(2,3-ди-О-метил-р-О-глюкопиранозилуронова киселина)-(1—> 4)-(2,3,6-три0-сулфонато-а-0-глюкопиранозил)-(1 —> 4)- (2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуронова киселина)-(1—> 4)-2,3,6-три-О-сулфонато-а-О-глюкопиранозид, натриева сол,
    Метил (2,3,4,6-тетра-О-сулфонато-а-О-гликопиранозил)-( 1 —>4)-(2,3,6-τpи-Ocyлφoнaτo-a-D-глюκoπиpaнoзил)-(l —> 4)-( 2,3,6-три-О-сулфонато-р-Оглюкопиранозил)-( 1 —> 4)-(6-[6-(6-биотинамидохексамидо) хексамидо]-6-дезокси2,3 -ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1 —* 4)-(2,3,6-три-О-метил-Р-Оглюкопиранозил-(1—> 4)-((2,3,6-три-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1—> 4)-( 2,3,6три-О-метил-p-D- глюкопиранозил)-(1 —> 4)]3-(6-О-сулфонато-2,3-ди-О-метил-а-Оглюкопиранозил)-( 1 —> 4)-(2,3-ди-О-метил-Р-О-глюкопиранозилуронова киселина)(1 —► 4)-(2,3,6-три-0-сулфонато-а-0-глюкопиранозил)-(1 —> 4)-(2,3 -ди-О-метил-a-Lидопиранозил-уронова киселина)-(1—> 4)-2,3,б-три-О-сулфонато-a-Dглюкопиранозид, натриева сол,
    Метил (2-биотинамидо-2-дезокси-3,4-ди-0-метил-6-0-сулфонато-а-0-глюкопиранозил)-( 1 —» 4)-(2,3-ди-О-метил-Р-О-глюкопиранозилуронова киселина)• <. · · (1 —> 4)-(2,3,6-три-О-сулфонато-а-Р-глюкопиранозил)-( 1 —> 4)-(2,3 -ди-О-метил-а-Lидопиранозил-уронова киселина)- (1—> 4)-2,3, б-три-О-сулфонато-а-Dглюкопиранозид, натриева сол,
    Метил (2-[6-(6-биотинамидохексамидо) хексамидо]-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-Осулфонато-а-О-глюкопиранозил )-(1-> 4)-(2,3-ди-О-метил-р-О-глюкопиранозилуронова киселина)- (1—* 4)-(2,3,6-три-О-сулфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1 —> 4)(2,3-ди-О-метил-а-Ь- идопиранозил-уронова киселина)-(1—> 4)-2,3,6-три-Осулфонато-а-D- глюкопиранозид, натриева сол.
    Метил (2-[6-(6-биотинамидохексамидо) хексамидо]-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-Осулфонато-а-О-гл юкопиранозил)-( 1 —* 4)-(2,3-ди-О-метил-р-О-глюкопиранозилуронова киселина)- (1—> 4)-(2,3,6-три-О-сулфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1—> 4)(2,3-ди-О-метил-а-Ь- идопиранозил-уронова киселина)-(1—► 4)-2,3,6-три-Осулфонато-а-D- глюкопиранозид, натриева сол.
  10. 10. Фармацевтични състави, характеризиращи се с това, че като активно вещество съдържат полизахарид съгласно коя да е претенция от 1 до 9, евентуално в комбинация с един или повече инертни ексципиенти и подходящи носители.
  11. 11. Използване на фармацевтичните състави съгласно претенция 10 при патологични състояния, които са вследствие на модификация на хомеостазията на коагулационната система, и които се проявяват при смущения на кардиоваскуларната и цереброваскуларната система като тромбоемболитични смущения, свързани с атеросклероза и диабет, каквито са нестабилна стенокардия, мозъчен удар, рестеноза след ангиопластия, ендартеректомия, поставяне на ендоваскуларни протези или тромбоемболитични смущения, свързани с ретромбоза след тромболиза, инфаркт, деменция с исхемичен произход, периферни артериални заболявания, хемодиализа, аурикуларни фибрилации, смущения по време на използване на сърдечни протези за аорто-коронарни понтажи, за лечение или профилактика на тромбоемболитични патологични състояния от венозен произход като сърдечна емболия, за лечение или профилактика на тромболитични усложнения, наблюдавани вследствие на хирургически операции, поява на туморни образувания или нарушено регулиране на коагулацията, предизвикано от бактериални, вирусни или ензимни активатори.
  12. 12. Използване на полизахарид съгласно коя да е претенция от 1 до 9 за препокриване на протези.
  13. 13. Използване на полизахарид съгласно коя да е претенция от 1 до 9 под форма на адювант по време на ендартеректомия, осъществена чрез порьозен балонет.
  14. 14. Метод за използване на авидин или стрептавидин, характеризиращ се с това, че позволява да се неутрализират полизахаридите съгласно коя да е претенция от 1 до
    9.
  15. 15. Използване на авидин или стрептавидин за приготвяне на лекарствени средства, предназначени за неутрализиране на полизахаридите съгласно коя да е претенция от 1 до 9.
BG107650A 2000-09-22 2003-03-20 Полизахариди с антитромболитична активност, които съдържат поне една ковалентна връзка с биотин или производно на биотин BG66191B1 (bg)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0012094A FR2814463B1 (fr) 2000-09-22 2000-09-22 Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine
PCT/FR2001/002918 WO2002024754A1 (fr) 2000-09-22 2001-09-20 Polysaccharides a activite antithrombotique comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BG107650A true BG107650A (bg) 2003-11-28
BG66191B1 BG66191B1 (bg) 2011-12-30

Family

ID=8854579

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG107650A BG66191B1 (bg) 2000-09-22 2003-03-20 Полизахариди с антитромболитична активност, които съдържат поне една ковалентна връзка с биотин или производно на биотин

Country Status (40)

Country Link
US (3) US6844329B2 (bg)
EP (1) EP1322673B1 (bg)
JP (2) JP5016778B2 (bg)
KR (2) KR20080049139A (bg)
CN (1) CN1235914C (bg)
AR (1) AR030774A1 (bg)
AT (1) ATE374215T1 (bg)
AU (2) AU9196001A (bg)
BG (1) BG66191B1 (bg)
BR (1) BR0114007A (bg)
CA (1) CA2418815C (bg)
CY (1) CY1108076T1 (bg)
CZ (1) CZ300856B6 (bg)
DE (1) DE60130669T2 (bg)
DK (1) DK1322673T3 (bg)
EA (1) EA005133B1 (bg)
EC (1) ECSP034514A (bg)
EE (1) EE05202B1 (bg)
ES (1) ES2292625T3 (bg)
FR (1) FR2814463B1 (bg)
GE (1) GEP20053616B (bg)
HK (1) HK1053316A1 (bg)
HR (1) HRP20030219B1 (bg)
HU (2) HU1400034D0 (bg)
IL (2) IL154848A0 (bg)
IS (1) IS2550B (bg)
ME (2) MEP23608A (bg)
MX (1) MXPA03002483A (bg)
NO (2) NO332905B1 (bg)
NZ (1) NZ524472A (bg)
PE (1) PE20020471A1 (bg)
PL (1) PL206727B1 (bg)
PT (1) PT1322673E (bg)
RS (1) RS50730B (bg)
SI (1) SI1322673T1 (bg)
SK (2) SK287054B6 (bg)
TW (1) TWI308153B (bg)
UA (1) UA79736C2 (bg)
WO (1) WO2002024754A1 (bg)
ZA (1) ZA200301692B (bg)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2814463B1 (fr) * 2000-09-22 2002-11-15 Sanofi Synthelabo Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine
FR2874924B1 (fr) * 2004-09-09 2006-12-01 Sanofi Aventis Sa Hexadecasaccharides biotinyles, leur preparation et leur utilisation therapeutique
TWI403334B (zh) * 2004-12-23 2013-08-01 Merck Sharp & Dohme 包含生物素殘基之抗血栓雙重抑制劑
TWI376234B (en) * 2005-02-01 2012-11-11 Msd Oss Bv Conjugates of a polypeptide and an oligosaccharide
KR20080055960A (ko) * 2005-10-10 2008-06-19 엔.브이.오가논 바이오틴 라벨을 포함하는 항응고 항혈전 이중 억제제
UA94593C2 (ru) * 2005-10-10 2011-05-25 Н.В. Органон Антитромбозные двойные ингибиторы с биотиновой меткой
CN1317035C (zh) * 2005-10-24 2007-05-23 天津大学 基于酰肼基的微粒表面多重生物功能因子组装方法
EP1886696A1 (en) * 2006-08-03 2008-02-13 Endotis Pharma Conjugates of antithrombin binding oligosaccharide derivatives and therapeutic proteins
FR2912409B1 (fr) * 2007-02-14 2012-08-24 Sanofi Aventis Heparines de bas poids moleculaire comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine leur procede de preparation,leur utilisation
EP2145624A1 (en) 2008-07-18 2010-01-20 Sanofi-Aventis Use of idrabiotaparinux for decreasing the incidence of bleedings during an antithrombotic treatment
TW201006479A (en) * 2008-07-18 2010-02-16 Sanofi Aventis Use of idrabiotaparinux for decreasing the incidence of bleedings during an antithrombotic treatment
EP2233143A1 (en) 2009-03-24 2010-09-29 Sanofi-Aventis Use of idrabiotaparinux for decreasing the incidence of bleedings during an antithrombotic treatment
FR2935386B1 (fr) * 2008-08-26 2010-09-10 Sanofi Aventis Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant une liaion covalente avec une chaine amine
US20110150976A1 (en) * 2008-09-10 2011-06-23 Transpharma Medical Ltd. Transdermal delivery of oligosaccharides
CA2746509C (en) 2008-12-19 2018-11-20 Supernus Pharmaceuticals, Inc. Use of molindone for the treatment of impulsive agression
FR2952935B1 (fr) * 2009-11-20 2011-12-02 Sanofi Aventis Procede de preparation du n-biotinyl-6-aminocaproate de n succinimidyle
CA2784529C (en) 2009-12-18 2018-05-22 Catalent France Beinheim Sa Pharmaceutical oral dosage form containing a synthetic oligosaccharide
CZ302669B6 (cs) * 2010-03-29 2011-08-24 Univerzita Palackého v Olomouci Efektivní zpusob biotinylace aminosloucenin pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie
CZ302510B6 (cs) * 2010-03-29 2011-06-22 Univerzita Palackého v Olomouci Efektivní zpusob biotinylace sloucenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie
JP6063377B2 (ja) 2010-03-31 2017-01-18 スパーナス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｃｎｓ化合物の安定化製剤
JP2013537181A (ja) * 2010-09-10 2013-09-30 サノフイ 抗血栓活性及び改善された代謝安定性を有するビオチン化多糖類
FR2964660B1 (fr) * 2010-09-10 2012-09-28 Sanofi Aventis Nouveaux polysaccharides biotinyles a activite antithrombotique et presentant une stabilite metabolique amelioree
EP2484366A1 (en) 2011-02-07 2012-08-08 Sanofi Idrabiotaparinux for the treatment of pulmonary embolism and for the secondary prevention of venous thromboembolic events
JP6051211B2 (ja) * 2011-06-17 2016-12-27 カルボミメティクス 半減期が短く活性が高い合成五糖類
AU2013344920A1 (en) * 2012-11-13 2015-04-30 Supernus Pharmaceuticals, Inc. Method of treatment of aggression
WO2015195404A1 (en) 2014-06-20 2015-12-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Methods for detection of an analyte by movement of tethered microparticles
WO2016205239A1 (en) 2015-06-15 2016-12-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Non-hormonal mammalian sperm decoy contraception based on the n-terminus of the zp2 protein
WO2018076025A1 (en) 2016-10-21 2018-04-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Molecular nanotags
CN108976318B (zh) * 2017-06-01 2021-03-30 首都医科大学 单-6-(生物素酰胺基)-6-脱氧-β-环糊精及其制备方法和应用
WO2019133727A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Universal influenza virus probe set for enrichment of any influenza virus nucleic acid
MX2022000343A (es) 2019-07-09 2022-03-11 Optimvia Llc Metodos para sintetizar polisacaridos anticoagulantes.
WO2021075165A1 (ja) * 2019-10-17 2021-04-22 株式会社オートネットワーク技術研究所 配線モジュール
WO2022056078A1 (en) 2020-09-11 2022-03-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Rnase h-assisted detection assay for rna (radar)

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3960884A (en) * 1974-04-24 1976-06-01 Sergei Ivanovich Zavyalov Method of preparing racemic biotin
AU563351C (en) * 1982-01-15 2003-06-19 Glaxo Group Limited Synthesis of oligosaccharides
IL102758A (en) * 1991-08-23 1997-03-18 Akzo Nv Glycosaminoglycanoid derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
US20010023288A1 (en) * 1999-07-07 2001-09-20 Wilbur D. Scott Trifunctional reagent for conjugation to a biomolecule
WO2000002050A1 (en) * 1998-07-07 2000-01-13 Department Of Radiation Oncology, University Of Washington Trifunctional reagent for conjugation to a biomolecule
FR2751334B1 (fr) * 1996-07-19 1998-10-16 Sanofi Sa Polysaccharides synthetiques, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant
FR2773801B1 (fr) * 1998-01-19 2000-05-12 Sanofi Sa Nouveaux pentasaccharides, procedes pour leurs preparations et compositions pharmaceutiques les contenant
FR2773804B1 (fr) * 1998-01-19 2000-02-18 Sanofi Sa Polysaccharides de synthese, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques le contenant
GB2335490B (en) * 1998-03-20 2003-05-14 Ortho Clinical Diagnostics An assay surface that permits an analyte releasiing step
AU4933099A (en) 1998-07-31 2000-02-21 Seikagaku Corporation Novel glycosaminoglycan and drug compositions containing the same
FR2814463B1 (fr) * 2000-09-22 2002-11-15 Sanofi Synthelabo Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine

Also Published As

Publication number Publication date
FR2814463B1 (fr) 2002-11-15
US8318696B2 (en) 2012-11-27
DE60130669D1 (de) 2007-11-08
CZ2003814A3 (cs) 2003-06-18
SK287218B6 (sk) 2010-03-08
GEP20053616B (en) 2005-09-26
EA200300237A1 (ru) 2003-08-28
HUP0303551A2 (hu) 2004-03-01
SK3562003A3 (en) 2003-11-04
TWI308153B (en) 2009-04-01
ATE374215T1 (de) 2007-10-15
JP2012131809A (ja) 2012-07-12
AR030774A1 (es) 2003-09-03
KR20080049139A (ko) 2008-06-03
HUP0303551A3 (en) 2004-03-29
EE200300114A (et) 2005-02-15
HK1053316A1 (en) 2003-10-17
HU1400034D0 (hu) 2004-03-01
HRP20030219B1 (en) 2011-10-31
NO20031295D0 (no) 2003-03-20
ZA200301692B (en) 2004-03-01
SK287054B6 (sk) 2009-10-07
HRP20030219A2 (en) 2003-06-30
KR100891388B1 (ko) 2009-04-02
US7943595B2 (en) 2011-05-17
DK1322673T3 (da) 2008-01-14
KR20030055269A (ko) 2003-07-02
US20110144042A1 (en) 2011-06-16
PT1322673E (pt) 2007-12-03
MEP23608A (en) 2010-06-10
WO2002024754A8 (fr) 2003-07-03
NZ524472A (en) 2004-10-29
AU2001291960B2 (en) 2007-03-01
US20060160768A1 (en) 2006-07-20
YU19703A (sh) 2006-05-25
CZ300856B6 (cs) 2009-08-26
IS2550B (is) 2009-10-15
NO20031295L (no) 2003-05-22
RS50730B (sr) 2010-08-31
IL154848A0 (en) 2003-10-31
CN1466594A (zh) 2004-01-07
EA005133B1 (ru) 2004-12-30
EP1322673B1 (fr) 2007-09-26
CA2418815A1 (en) 2002-03-28
WO2002024754A1 (fr) 2002-03-28
PE20020471A1 (es) 2002-06-01
UA79736C2 (uk) 2007-07-25
ECSP034514A (es) 2003-04-25
CY1108076T1 (el) 2014-02-12
CA2418815C (en) 2011-05-10
IS6733A (is) 2003-02-28
EP1322673A1 (fr) 2003-07-02
JP5016778B2 (ja) 2012-09-05
NO332905B1 (no) 2013-01-28
AU2001291960C1 (en) 2009-10-08
FR2814463A1 (fr) 2002-03-29
IL154848A (en) 2010-11-30
PL206727B1 (pl) 2010-09-30
US20040024197A1 (en) 2004-02-05
US6844329B2 (en) 2005-01-18
SI1322673T1 (sl) 2008-02-29
JP2004509902A (ja) 2004-04-02
AU9196001A (en) 2002-04-02
ES2292625T3 (es) 2008-03-16
PL363368A1 (en) 2004-11-15
MXPA03002483A (es) 2004-05-24
BG66191B1 (bg) 2011-12-30
DE60130669T2 (de) 2008-07-17
BR0114007A (pt) 2003-08-12
ME00080B (me) 2010-10-10
NO20110401L (no) 2003-05-22
CN1235914C (zh) 2006-01-11
EE05202B1 (et) 2009-08-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BG107650A (bg) Полизахариди с антитромболитична активност, коитосъдържат поне една ковалентна връзка с биотин илипроизводно на биотин
US8492352B2 (en) Polysaccharides with antithrombotic activity, including a covalent bond and an amino chain
US8703738B2 (en) Biotinylated hexadecasaccharides, preparation and use thereof
US20110212907A1 (en) Hexadecasaccharides with antithrombotic activity, including a covalent bond and an amino chain