EA005133B1 - Полисахариды с антитромботической активностью, содержащие по меньшей мере одну ковалентную связь с биотином или производным биотина - Google Patents

Полисахариды с антитромботической активностью, содержащие по меньшей мере одну ковалентную связь с биотином или производным биотина Download PDF

Info

Publication number
EA005133B1
EA005133B1 EA200300237A EA200300237A EA005133B1 EA 005133 B1 EA005133 B1 EA 005133B1 EA 200300237 A EA200300237 A EA 200300237A EA 200300237 A EA200300237 A EA 200300237A EA 005133 B1 EA005133 B1 EA 005133B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
methyl
glucopyranosyl
tri
group
alpha
Prior art date
Application number
EA200300237A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200300237A1 (ru
Inventor
Филипп Дюшоссуа
Жан-Марк Эрбер
Морис Птиту
Пьер Сави
Original Assignee
Санофи-Синтелябо
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Санофи-Синтелябо filed Critical Санофи-Синтелябо
Publication of EA200300237A1 publication Critical patent/EA200300237A1/ru
Publication of EA005133B1 publication Critical patent/EA005133B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

Данное изобретение относится к новым синтетическим полисахаридам с антитромботической активностью, имеющим по меньшей мере одну ковалентную связь с биотином или производным биотина, и к способу использования авидина или стрептавидина для нейтрализации указанных полисахаридов.

Description

Настоящее изобретение относится к новым синтетическим олиго- и полисахаридам, имеющим по меньшей мере одну ковалентную связь с биотином или производным биотина и обладающим антикоагулянтной и антитромботической фармакологической активностью гепарина.
Гепарин катализирует, в частности через антитромбин III (АТ III), ингибирование двух ферментов, участвующих в каскаде коагуляции крови, а именно фактора Ха и фактора На (или тромбина). Препараты, содержащие низкомолекулярные гепарины (ГМ\УН5). содержат цепи, образованные 4-30 моносахаридами, и обладают свойством действовать более селективно в отношении фактора Ха, чем в отношении тромбина.
Известно, что ингибирование фактора Ха требует присоединения гепарина к АТ III через антитромбинсвязывающий домен (Домен-А) и что ингибирование фактора На (тромбина) требует присоединения к АТ III через Домен-А и к тромбину через менее хорошо охарактеризованный связывающий домен (Домен-Т).
Известны синтетические олигосахариды, соответствующие домену Домен-А гепарина. Они раскрыты, например, в патентах ЕР 84999 и ЕР 529715, в патентной заявке, опубликованной под номером XVО 99/36428, и в публикации Вюогд. Мед. СЬет., 1998, 6, 1509-1516. Эти синтетические олигосахариды обладают свойством селективного ингибирования, через антитромбин III, фактора Ха коагуляции без какоголибо действия в отношении тромбина. Они проявляют антитромботическую активность при венозном тромбозе.
Синтетические олигосахариды, способные ингибировать тромбин или фактор Ха через активацию АТ III, раскрыты в патентных заявках, опубликованных под номерами νθ 98/03554 и νθ 99/36443.
В этих патентных заявках раскрыты новые биологически активные сульфатированные и алкилированные производные полисахаридов. Они являются, в частности, антикоагулянтами и антитромботическими средствами. В частности, было показано, что эти сульфатированные и алкилированные полисахариды могут быть мощными антитромботическими средствами и антикоагулянтами в зависимости от расположения алкильных групп и сульфатных групп, которые несет глюцидная основная цепь. Более обобщенно, было обнаружено, что путем получения полисахаридных последовательностей можно точно регулировать активности СЛС5 (глюкозаминоглюканового) типа с целью получения очень активных продуктов, проявляющих антикоагулянтные и антитромботические фармакологические свойства гепарина. По сравнению с гепарином их преимущество в том, что они имеют специфическую структуру и не взаимодействуют с тромбоцитарным фактором 4, фактором тромбоцитопенических эффектов гепарина.
Однако применение в терапевтическом лечении человека некоторых продуктов, раскрытых в патентных заявках, опубликованных под номерами νθ 98/03554 и νθ 99/36443, и в патенте ЕР 529715, может оказаться проблематичным, в частности, если эти продукты имеют большие периоды полувыведения. В случае предупреждения и лечения тромбоза указанными выше продуктами необходимо восстанавливать или поддерживать текучесть крови, одновременно предотвращая вызываемое ими кровотечение.
Это необходимо, поскольку хорошо известно, что у пациента, находящегося на лечении, кровотечение может быть инициировано любой случайной причиной. Пациенту, находящемуся на антитромботическом лечении, может также потребоваться хирургическое вмешательство. Кроме того, во время некоторых хирургических операций могут применяться антикоагулянты в высоких дозах для предотвращения коагуляции крови, и в конце операции их необходимо нейтрализовать. Следовательно, полезно иметь антитромботические агенты, которые в любое время могут быть нейтрализованы в целях прекращения антикоагулянтного действия. В действительности, известные синтетические олигосахариды, описанные выше, не могут быть легко нейтрализованы известными антидотами для гепарина или ΕΜνΗδ, включая протаминсульфат.
Настоящее изобретение относится к новым синтетическим полисахаридам со структурой, аналогичной структуре соединений, раскрытых в патентных заявках, опубликованных под номерами νθ 98/03554 и νθ 99/36443, и в патенте ЕР 529715: структуры синтетических олигосахаридов, которые являются объектом данного изобретения, модифицированы таким образом, что они имеют ковалентную связь с биотином (гексагидро-2-оксо-1Н-тиено[3,4-б]имидазол-4пентановой кислотой) или с производным биотина. Оказывается, и это неожиданно, что введение биотина или производного биотина не модифицирует фармакологическую активность полисахаридов. Действительно, новые полисахариды, которые являются объектом данного изобретения, обладают антитромботической активностью, сравнимой с активностью олигосахаридов, известных из уровня техники. Однако они дополнительно имеют преимущество в том, что в критических ситуациях их можно быстро нейтрализовать специфическими антидотами. Этими специфическими антидотами являются авидин (ТЬе Мегск Мех, Т\се1П11 еФΐίοη, 1996, М. N. 920, страницы 151-152) или стрептавидин, два тетрамерных белка с относительными массами, равными приблизительно 66000 и 60000 Да, которые имеют очень высокое сродство к биотину.
В общем, данное изобретение относится к синтетическим полисахаридам с антитромботической активностью, имеющим по меньшей ме ре одну ковалентную связь с биотином или производным биотина.
В качестве производного биотина можно упомянуть производные биотина, приведенные в каталоге Р1егсе, 1999-2000, страницы 62-81, например 6-биотинамидогексаноат
или 6-(6-биотинамидогексанамидо)гексаноат
или 2-биотинамидоэтантиол
или соединения следующих формул:
н
В частности, объектом настоящего изобретения являются полисахариды формулы (I)
(I) где волнистая линия обозначает связь, расположенную либо ниже, либо выше плоскости коль ца пиранозы,
Ро обозначает полисахарид, содержащий η одинаковых или разных моносахаридных единиц, связанных с Ре через свой аномерный углерод,
является схематическим представлением моносахаридной единицы с пиранозной структурой, выбранной из гексоз, пентоз и соответствующих дезоксисахаров, причем эта единица связана с другой моносахаридной единицей через свой аномерный углерод, и гидроксильные группы этой единицы замещены одинаковыми или разными группами К1, причем К1 является таким, как определено ниже,
Ре представляет собой пентасахарид
η является целым числом и может принимать любое значение от 0 до 25,
К1 представляет собой связь -Τ-Βίοΐ, (С1С6)алкоксигруппу или группу -О8О3 -,
К2 представляет собой связь -Τ-Βίοΐ, (С1С6)алкоксигруппу или группу -О8О3 -,
К3 представляет собой связь -Τ-Βίοΐ или (С1-С6)алкоксигруппу,
Кд представляет собой связь -Τ-Βίοΐ, (С1С6)алкоксигруппу или группу -О8О3- или же Кд является мостиком -О-СН2-, причем группа -СН2связана с атомом углерода, несущим карбоксильную функциональную группу на том же кольце;
при этом подразумевается, что по меньшей мере один из заместителей К1, К2, К3 или Кд представляет собой группу -Τ-Βίοΐ, представляет собой атом кислорода или метиленовую группу,
Т представляет собой одну из связей, выбранную из ΝΗ,
или
где ) и к, которые являются одинаковыми или разными, представляют собой целые числа, которые могут принимать любое значение от 1 до 10;
Βίοΐ представляет собой группу
и их фармацевтически приемлемые соли.
Как указано выше, следует отметить, что вообще в настоящем описании волнистая линия обозначает связь, расположенную либо ниже, либо выше плоскости кольца пиранозы.
Моносахариды, присутствующие в Ро, могут быть одинаковыми или могут отличаться друг от друга, и межгликозидные связи могут быть α или β типа.
Эти моносахариды выбирают предпочтительно из I) или к гексоз: алозы, альтрозы, глюкозы, маннозы, галозы, идозы, галактозы или талозы (в этом случае Ь=2), или из I) или к пентоз: рибозы, арабинозы, ксилозы или ликсозы (в этом случае Ь=2). Также можно использовать другие моносахариды, такие как, например, дезоксисахара (Ь=1 и/или -СН2К1=СН3).
Полисахаридная часть Ро может состоять из 0-25 алкилированных и ди- или трисульфатированных моносахаридных единиц.
Полисахаридная часть Ро может также состоять из 0-25 алкилированных и моно- или дисульфатированных моносахаридных единиц.
Полисахаридная часть Ро может состоять из 0-25 незаряженных, и/или частично заряженных, и/или полностью заряженных алкилированных моносахаридных единиц.
Заряженные или незаряженные единицы могут быть рассредоточены вдоль цепи или, с другой стороны, они могут быть сгруппированы в заряженные или незаряженные сахаридные домены.
Связи между единицами могут быть 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; и α или β типа.
В настоящем описании выбор сделан таким образом, чтобы представить 1С4 конформацию для Ь-идуроновой кислоты и 4С1 конформацию для ϋ-глюкуроновой кислоты, однако, общеизвестно, что в общем случае в растворе конформация моносахаридных единиц меняется.
Так, Ь-идуроновая кислота может иметь 1С4, 280 или 4С1 конформацию.
Согласно одному из своих аспектов данное изобретение относится к полисахаридам формулы (1.1)
(1.1) где
обозначает специфическое семейство полисахаридов Ро, которые связаны с Ре через свой аномерный углерод, как определено для (I),
является таким, как определено для (I), группы В1 являются такими, как определено для (I), и для одного и того же моносахарида могут быть одинаковыми или разными;
моносахарид, присутствующий в [ ]т, повторяется т раз, моносахарид, присутствующий в [ ф, повторяется ΐ раз, и моносахарид, присутствующий в [ ]р, повторяется р раз, т является целым числом в пределах от 1 до 5, ΐ является целым числом в пределах от 0 до 24 и р является целым числом в пределах от 0 до 24, причем подразумевается, что 1<т+ΐ+р<25, и их фармацевтически приемлемым солям.
Среди этих полисахаридов формулы (1.1) полисахариды, в которых только один из заместителей В1, Р2, И3 или Р4 представляет собой связь Τ-Βίοΐ, где Т и Βίοΐ такие, как определено для (I), и их фармацевтически приемлемые соли составляют еще один аспект изобретения.
Согласно конкретному аспекту данное изобретение относится к гексадекасахаридам формулы (Т2)
(1.2) где Т представляет собой одну из связей, выбранную из ΝΗ,
О или
где и к, которые являются одинаковыми или разными, представляют собой целые числа, которые могут принимать любое значение от 1 до 10;
Βίοι представляет собой группу
Ре представляет собой пентасахарид структуры
где Кд представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу или группу -О8О3 -,
К2 представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу или группу -О8О3 -,
К3 представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу,
Кд представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу или группу -О8О3 - или же Кд является мостиком -О-СН3-, причем группа -СН2- связана с атомом углерода, несущим карбоксильную функциональную группу на том же кольце;
представляет собой атом кислорода или метиленовую группу, и их фармацевтически приемлемым солям.
Согласно еще одному из своих аспектов данное изобретение относится к пентасахаридам формулы (1.3)
где К1, К2, К3, Кд и являются такими, как определено для (I), и к их фармацевтически приемлемым солям.
Среди этих пентасахаридов формулы (1.3) пентасахариды, в которых только один из заместителей К1, К2, К3 или Кд представляет собой связь -Τ-Βϊοΐ, где Т и Βίοι являются такими, как определено для (I), и их фармацевтически приемлемые соли составляют другой аспект данного изобретения.
Среди этих пентасахаридов формулы (1.3) другим объектом данного изобретения является пентасахарид формулы (1.4)
где Т представляет собой одну из связей, выбранную из ΝΗ,
или
где и к, которые являются одинаковыми или разными, представляют собой целые числа, которые могут принимать любое значение от 1 до 10;
Βίοι представляет собой группу
К1 представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу или группу -О8О3 -,
К2 представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу или группу -О8О3 -,
К3 представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу,
Кд представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу или группу -О8О3 - или же Кд является мостиком -О-СН2-, причем -СН2- группа связана с атомом углерода, несущим карбоксильную функциональную группу на том же кольце, представляет собой атом кислорода или метиленовую группу, и их фармацевтически приемлемые соли.
Согласно другому аспекту данное изобретение относится к следующим полисахаридам:
метил (2,3,4,6-тетра-О-сульфонато-а-В-глюкопиранозил )-(1 ^4)-(2,3,6-три-О-сульфонатоа-В-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-З-В-глюкопиранозил)-(1^4)-(6-биотинамидо-6-дезокси-2,3-ди-О-метил-а-В-глюкопиранозил )-(1 ^4)-(2,3,6-три-О-метил-3-О-глюкопиранозил)-( 1 ^4)- [(2,3,6-три-О-метил-а-В-глюкопиранозил)-(1^4)-О-(2,3,6-три-О-метил-З-Вглюкопиранозил)-(1^4)]3-(6-О-сульфонато-2,3ди-О-метил-а-В-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3ди-О-метил-З-В-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-а-В-глюкопиранозил )-(1 ^4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота )-(1 ^4)-2,3,6-три-Осульфонато-а-В-глюкопиранозид, натриевая соль, метил (2,3,4,6-тетра-О-сульфонато-а-В-глюкопиранозил )-(1 ^4)-(2,3,6-три-О-сульфонатоа-В-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-З-В-глюкопиранозил)-(1^4)-(6-[6-(биотинамидо)гексамидо]-6-дезокси-2,3-ди-О-метила-В-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метилЗ-В-глюкопиранозил)-( 1 ^4)- [(2,3,6-три-О-метила-В-глюкопиранозил)-(1^4)-О-(2,3,6-три-О-метил-З-В-глюкопиранозил)-( 1 ^4)]3-(6-О-сульфонато)-2,3-ди-О-метил-а-В-глюкопиранозил)-(1^4)(2,3-ди-О-метил-З-О-глюкопиранозилуроновая кислота)-( 1 ^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-а-В-глюкопиранозил )-(1 ^4)-(2,3-ди-О-метил-а-Е-идопиранозилуроновая кислота )-(1 ^4)-2,3,6-три-Осульфонато-а-В-глюкопиранозид, натриевая соль, метил (2,3,4,6-тетра-О-сульфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-аЭ-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-в-Э-глюкопиранозил)-(1^4)-(6-[6-(6-биотинамидогексамидо)гексамидо] -6 -дезокси-2,3 -диО-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-триО-метил-3-О-глюкопиранозил)-( 1 ^4)-[(2,3,6-триО-метил-а-Э-глюкопиранозил)-(1^4)-О-(2,3,6три-О-метил-в-Э-глюкопиранозил)-(1^4)]3-(6О-сульфонато-2,3-ди-О-метил-а-Э-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метил-3-О-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1 ^-4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-Ометил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-( 1 ^-4)2,3,6-три-О-сульфонато-а-О-глюкопиранозид, натриевая соль, метил (2-биотинамидо-2-дезокси-3,4-ди-Ометил-6-О-сульфонато-а-О-глюкопиранозил)(1 ^4)-(2,3-ди-О-метил-3-Э-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-(1 ^-4)2,3,6-три-О-сульфонато-а-О-глюкопиранозид, натриевая соль, метил (2-[Ы-(6-биотинамидогексаноил)]-2дезокси-3,4-ди-О-метил-6-О-сульфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метил-3-Э-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-(2,3,6-триО-сульфонато-а-Э-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-2,3,6-три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозид, натриевая соль, метил (2-[6-(6-биотинамидогексамидо)гексамидо]-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-О-сульфонатоа-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метилβ-Ό-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1 ^4)(2,3,6-три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозил)(1^4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-(1 ^4)-2,3,6-три-О-сульфонато-аΌ-глюкопиранозид, натриевая соль.
Данное изобретение охватывает полисахариды в их кислотной форме или в форме любой из их фармацевтически приемлемых солей. В кислотной форме функциональные группы -СОО и -8О3- присутствуют соответственно в -СООН и -8О3Н форме.
Подразумевается, что термин фармацевтически приемлемая соль полисахаридов по изобретению означает полисахарид, в котором одна или более чем одна из функциональных групп -СОО- и/или -8О3 - связана ионной связью с фармацевтически приемлемым катионом. Предпочтительными солями по изобретению являются те соли, для которых катион выбран из катионов щелочных металлов, и, еще более предпочтительно, те соли, катионом для которых является Να' или К+.
Соединения указанной выше формулы (I) также включают те соединения, в которых один или более чем один атом водорода или углерода заменен его радиоактивным изотопом, например тритием или углеродом-14. Такие меченые соединения используют в научно-исследовательских, метаболических или фармакокинетических исследованиях и в биохимических анализах в качестве лигандов.
В основе способа получения соединений по данному изобретению лежит использование основных ди- или олигосахаридных синтонов, полученных, как сообщается в вышеуказанной литературе. В частности, следует упомянуть патенты или патентные заявки ЕР 300099, ЕР 529715, ЕР 621282 и ЕР 649854 и документы С. уап Воеске1, М. РсШон. Апдете Сйеш. Ιηΐ. Еб. Епд1., 1993, 32, 1671-1690. Эти синтоны последовательно подвергают реакциям сочетания друг с другом, с тем чтобы получить полностью защищенный эквивалент полисахарида по данному изобретению. Этот защищенный эквивалент затем превращают в соединение по изобретению.
Один из основных синтонов, упомянутых выше, содержит конкретную защищенную функциональную группу, что делает возможным последующее введение биотина или производного биотина, например латентную аминную функциональную группу в форме азидогруппы или защищенную в форме Ν-фталимидогруппы.
В упомянутых выше реакциях сочетания донорный ди- или олигосахарид, активированный по его аномерному углероду, взаимодействует с акцепторным ди- или олигосахаридом, имеющим свободный гидроксил.
Настоящее изобретение относится к способу получения соединений формулы (I), отличающемуся тем, что на первой стадии синтезируют полностью защищенный эквивалент целевого полисахарида (I), содержащий защищенный предшественник домена Ре, удлиненный по его невосстановительному концу защищенным предшественником сульфатированного полисахарида Ро, и один из этих предшественников содержит, в частности, соответственно защищенную аминную функциональную группу для последующего введения биотина или производного биотина; на второй стадии вводят и/или демаскируют отрицательно заряженные группы; на третьей стадии снимают защиту с аминной функциональной группы, а затем вводят биотин или производное биотина.
Синтез Ре проводят по методикам, описанным, в частности, в патентных заявках, опубликованных под номерами XVО 98/03554 и XVО 99/36443, и в литературе (приведенной выше).
Полисахаридную часть, которая является предшественником Ро, синтезируют по реакциям, хорошо известными специалистам в данной области техники, с использованием методов синтеза олигосахаридов (6.1. Воопз, Тейайебтоп, 1996, 52, 1095-1121, ΧΧΌ 98/03554 и ΧΧΌ 99/36443) или олигосахарида, когда олигосахарид, который является донором гликозидной связи, подвергают реакции сочетания с олигосахаридом, который является акцептором гликозидной связи, с получением в результате другого олигосахарида, размеры которого равны сумме размеров двух реагирующих веществ. Эту последовательность повторяют до тех пор, пока не получат целевое соединение формулы (I). Природа и параметры заряда конечного соединения определяют природу химических веществ, используемых на различных стадиях синтеза, в соответствии с правилами, общеизвестными для специалиста в данной области техники. В частности, можно сослаться, например, на С. уаи Воеске1, аиб М. РеШои, Аидем Сйет. Ιηί. Еб. Еид1., 1993, 32, 1671-1690 или на Н. Раи1кеи, Абуаисек ίη ке1есбме сйетюа1 кугийемк о! сотр1ех ойдокассйапбек, Аидем. Сйет. Ιηί. Еб. Еид1., 21, 155-173 (1982).
Соединения по изобретению получают из их полностью защищенных полисахаридных предшественников, используя следующую последовательность реакций:
снимают защиту со спиртовых функциональных групп, которые потом должны быть превращены в О-сульфогруппу и карбоновые кислоты, путем удаления защитных групп, использованных в процессе получения основной цепи, после этого вводят сульфогруппы, снимают защиту с аминной функциональной группы, что делает возможным введение биотина или производного биотина, вводят биотин или производное биотина обычной реакцией сочетания амин/кислота.
Соединения по изобретению легко могут быть получены с использованием различных стратегий синтеза олигосахаридов, известных специалистам в данной области техники.
Способ, описанный выше, является предпочтительным способом по изобретению. Однако соединения формулы (I) могут быть получены другими способами, хорошо известными в химии сахаров, описанными, например, в Моиокассйапбек, 1Пе1 г сйет1к!гу аиб ίПе1 г го1ек ш иа!ига1 ргобис!к, Р.М. СоШик аиб К.Э. Еетег, 1. \УПеу & 8оик, 1995, и в 0.1. Вооик, Те!гайебгои, 1996, 52, 1095-1121.
Пентасахариды Ре могут быть получены соответственно из дисахаридных синтонов способом, описанным в публикации С. уаи Воеске1 аиб М. РеШои, Аидем. Сйет. Ιπί. Еб. Еид1., 1993, 32, 1671-1690.
Защитные группы, используемые в способе получения соединений (I), являются защитными группами, обычно используемыми в химии сахаров, например в РгсИесбме Огоирк ш Огдашс 8уи1йек1к, Т.^. Огееие, .Гойи \УПеу & 8оик, №\ν Уогк, 1981.
Защитные группы предпочтительно выбирают из, например, ацетильной, галогенометильной, бензоильной, левулинильной, бензильной, замещенной бензильной, возможно, замещенной тритильной, тетрагидропиранильной, аллильной, пентенильной, трет-бутилдиметилсилильной ПВЭМ8) или триметилсилилэтильной групп.
Активирующими группами являются группы, обычно используемые в химии сахаров в соот ветствии, например, с Об. Вооик, Тей^ебгои, 1996, 52, 1095-1121. Эти активирующие группы выбирают, например, из имидатов, тиогликозидов, пентенилгликозидов, ксантатов, фосфитов или галогенидов.
Что касается способа, которым биотин связывают с олигосахаридом, и природы производного биотина, химическая литература предлагает другие возможности, которые могут быть реализованы при помощи ряда защитных групп, хорошо известных специалистам в данной области техники. Предпочтительным будет использование аминной функциональной группы, или тиольной функциональной группы, или карбоновокислотной функциональной группы, или альдегидной функциональной группы, которая будет взаимодействовать с производным биотина, содержащим реакционную группу типа активированной сложноэфирной, малеимидной, йодацетильной или типа первичного амина, причем взаимодействие протекает согласно условиям, описанным в литературе (сравни 8ауаде е! а1., Аν^б^η-Β^оί^η Сйетщйу: А НаибЬоок; Р1егсе Сйет1са1 Сотраиу, 1992).
Способ, описанный выше, дает возможность получать соединения по изобретению в форме солей. Чтобы получить соответствующие кислоты, соединения по изобретению в форме солей приводят в контакт с катионообменной смолой в кислотной форме.
Соединения по изобретению в форме кислот потом можно нейтрализовать основанием с получением желательной соли. Для получения солей соединений формулы (I) можно использовать любое неорганическое или органическое основание, которое дает фармацевтически приемлемые соли с соединениями формулы (I). В качестве основания предпочтительно использовать гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид кальция или гидроксид магния. Предпочтительными солями являются натриевая и калиевая соль соединений формулы (I).
Были проведены биохимические и фармакологические исследования соединений по изобретению.
Общую антитромботическую активность этих продуктов и их нейтрализацию исследовали на модели венозного тромбоза, предусматривающей инъекцию тканевого фактора с последующим стазом полой вены крыс, как описано Ι-Μ. НегЬей е! а1., В1ооб, 1998, 91, 4197-4205. В этой модели после внутривенной инъекции 0,130 ммоль/кг соединений достигается 60% ингибирование тромбоза. Инъекция авидина в молярном соотношении 1 к 1000 значительно снижает антитромботический эффект этих соединений, причем достигается снижение более чем на 50%. Таким же путем прогеморрагическая активность соединений нейтрализуется инъекцией авидина в указанных выше дозах. Так же действие олигосахаридов на кровообращение, измеренное по анти-Ха активности и/или анти-Па активности, нейтрализуется инъекцией авидина.
Таким образом, другим объектом настоящего изобретения является способ использования авидина или стрептавидина, отличающийся тем, что он делает возможной нейтрализацию полисахаридов согласно изобретению. Авидин или стрептавидин можно использовать для изготовления лекарств, предназначенных для нейтрализации полисахаридов по настоящему изобретению.
Благодаря своей биохимической и фармацевтической активности олигосахариды по настоящему изобретению представляют собой чрезвычайно полезные лекарства. Их токсичность полностью совместима с данным применением. Они также очень стабильны и, следовательно, особенно подходят для составления активного начала запатентованных фармацевтических продуктов.
Их можно применять при различных патологиях, являющихся результатом модификации гомеостаза системы коагуляции, проявляющейся при нарушениях сердечно-сосудистой и церебрально-васкулярной системы, таких как тромбоэмболические нарушения, связанные с атеросклерозом и диабетом, например нестабильная стенокардия, апоплексия, рестеноз после ангиопластики, эндартерэктомия или введение эндоваскулярных протезов, или тромбоэмболические нарушения, связанные с ретромбозом после тромболиза, с инфарктом, с деменцией ишемического происхождения, с периферическими артериальными заболеваниями, с гемодиализом или с предсердными фибрилляциями, во время использования сосудистых протезов для аортокоронарного шунтирования. Кроме того, эти продукты можно применять для лечения или предупреждения тромбоэмболических патологий венозного происхождения, таких как легочные эмболии. Их можно применять для предупреждения или для лечения тромботических осложнений, наблюдаемых, например, после хирургических операций, роста опухолей или нарушений коагуляции, вызываемых бактериальными, вирусными или ферментными активаторами. В случае их применения во время введения протезов, соединениями по изобретению можно покрывать протезы и таким образом делать их гемосовместимыми. В частности, их можно присоединять к внутрисосудистым протезам (стентам). В этом случае, их можно химически модифицировать путем введения подходящего ответвления по невосстановительному или восстановительному концу, как раскрыто в ЕР 649854.
Соединения по настоящему изобретению можно применять также в качестве адъювантов во время эндартерэктомии, осуществляемой с использованием пористых баллонов.
Соединения по изобретению можно использовать в изготовлении лекарств, предназначенных для лечения вышеперечисленных заболеваний.
Соответственно, согласно еще одному аспекту объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного начала синтетический полисахарид по изобретению или одну из его фармацевтически приемлемых солей, возможно, в комбинации с одним или более чем одним инертным и подходящим эксципиентом.
Указанные эксципиенты выбирают в соответствии с желательной фармацевтической формой и желательным способом введения: пероральным, подъязычным, подкожным, внутримышечным, внутривенным, чрескожным, через слизистые, местным или ректальным.
Активное начало также может присутствовать в форме комплекса с циклодекстрином, например α-, β- или γ-циклодекстрином, 2-гидроксипропилβ-циклодекстрином или метил-в-циклодекстрином.
Активное начало также можно высвобождать при помощи содержащего его баллона или при помощи эндоваскулярного расширителя, вводимого в кровеносные сосуды. При этом исключается влияние на фармакологическую эффективность активного начала.
В каждой стандартной дозе активное начало присутствует в количествах, соответствующих суточным дозам, предусмотренных для получения желаемого профилактического или терапевтического эффекта. Каждая стандартная доза может содержать от 0,1 до 100 мг активного начала, предпочтительно от 0,5 до 50 мг. Эти дозы антикоагулянтных соединений могут быть нейтрализованы дозами авидина или стрептавидина в пределах от 1 до 1000 мг посредством в.в. (внутривенной) инъекции, болюса или инфузии.
Соединения по изобретению можно применять также в комбинации с одним или более чем одним другим активным началом, применяемым в требуемой терапии, таким как, например, антитромботические средства, антикоагулянты, ингибиторы агрегации тромбоцитов, такие как, например, дипиридамол, аспирин, тиклопидин или клопидогрел, или антагонисты гликопротеинового 11б/111а комплекса.
Приведенные ниже методики, подготовительные примеры и схемы иллюстрируют синтез различных промежуточных соединений, используемых при получении полисахаридов по данному изобретению.
Использованы следующие сокращения:
Вп: бензил;
Βζ: бензоил;
ТСХ: тонкослойная хроматография;
Т§: тозил;
Ьеу: левулинил;
Е1: этил;
РН: фенил;
Ме: метил;
Ас: ацетил;
8Е: триметилсилилэтил;
Е81: электрораспылительная ионизация;
Βίοΐίη: гексагидро-2-оксо-1Н-тиено [3,4-ά] имидазол-4-пентановая кислота;
Ζ: бензилоксикарбонил.
Также с целью иллюстрации подробно описаны примеры синтеза соединений по изобретению.
Схема 1
Синтез трисахарида 9
Подготовительный пример 1. 2-(Триметилсилил)этил 4,6-О-бензилиден-2,3-ди-О-метил-вΌ-глюкопиранозид (2).
Гидрид натрия (18 г) добавляют порциями при 0°С к раствору соединения 1 (15,8 г, 42,8 ммоль) (полученного в соответствии с К. 1апккои е1 а1., 1. Отд. СЬет., 1988, 53, 5629-5647) и метилйодида (20 мл, 319 ммоль) в тетрагидрофуране (350 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 4 ч при температуре окружающей среды. Избыток гидрида натрия ликвидируют метанолом и реакционную смесь вливают в ледяную воду (1,5 л). После экстракции этилацетатом органическую фазу промывают насыщенным раствором хлорида натрия и водой, сушат над сульфатом натрия и затем концентрируют под вакуумом. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (15/1 (об./об.) циклогексан/ этилацетат) с получением 16,8 г соединения 2.
|α 1,,=-41° (с=0,69, дихлорметан).
Подготовительный пример 2. 2-(Триметилсилил)этил 6-О-бензил-2,3-ди-О-метил-3-Э-глюкопиранозид (3).
Порошок молекулярных сит 3 А (82 г), метилоранж (цветной индикатор), цианоборгидрид натрия (34 г, 526 ммоль) и затем, по каплям, насыщенный раствор соляной кислоты в диэтиловом эфире последовательно добавляют к раствору соединения 2 (16 г, 40,3 ммоль) в тетрагидрофуране (600 мл) до получения розовой окраски. После фильтрации и экстракции этилацетатом органическую фазу промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и водой, сушат над сульфатом натрия и затем концентрируют под вакуумом. Хроматография на колонке с силикагелем (3/1 (об./об.) толуол/ этилацетат) делает возможным получение 12,5 г соединения 3. |</.|,,=-42° (с=1,2, дихлорметан).
Подготовительный пример 3. 2-(Триметилсилил)этил (2,3-ди-О-бензоил-4,6-О-бензилидена-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3,6-три-О-бен зоил-в-И-глюнопиранозил)-(1^4)-6-О-бензил2,3-ди-О-метил-3-Э-глюкопиранозид (5).
Смесь тиогликозида 4 (16,52 г, 16,60 ммоль) (полученного в соответствии с подготовительным примером 1 патентной заявки, опубликованной под номером АО 99/36443), соединения 3 (6,0 г, 15,05 ммоль) и порошка молекулярных сит 4 А (16,7 г) в толуоле (300 мл) перемешивают в атмосфере аргона в течение 1 ч. Смесь затем охлаждают до -20°С. Раствор Ν-йодсукцинимида (3,9 г, 17,4 ммоль) и трифторметансульфоновой кислоты (0,17 мл, 1,97 ммоль) в смеси 1/1 (об./об.) дихлорметан/диоксан (86 мл) по каплям добавляют к реакционной смеси. Через 10 мин реакционную смесь фильтруют, разбавляют дихлорметаном, чрезмерно промывают 1М раствором тиосульфата, 10% раствором гидрокарбоната натрия и водой, сушат над сульфатом натрия и затем концентрируют под вакуумом. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (6/1 (об./об.) толуол/ этилацетат) с получением 18,8 г трисахарида 5.
|α|,,=+34° (с=1,26, дихлорметан).
Подготовительный пример 4. 2-(Триметилсилил)этил (4,6-О-бензилиден-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(3-О-глюкопиранозил)-(1^4)-6-Обензил-2,3-ди-О-метил-в-О-глюкопиранозид (6).
трет-Бутилат калия (3,15 г) добавляют к раствору соединения 5 (18,7 г, 14 ммоль) в смеси 1/1 (об./об.) метанол/диоксан (140 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при температуре окружающей среды. Ее нейтрализуют смолой Иотех® 50АХ4 Н+, фильтруют и концентрируют под вакуумом. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (20/1 (об./об.) дихлорметан/метанол) с получением 10,0 г соединения 6.
|α|,,=+29° (с=1,11, дихлорметан).
Подготовительный пример 5. 2-(Триметилсилил)этил (4,6-О-бензилиден-2,3-ди-О-метила-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метилв-О-глюкопиранозил)-(1^4)-6-О-бензил-2,3-диО-метил-в-Э-глюкопиранозид (7).
Гидрид натрия (5,2 г, 216 ммоль) добавляют порциями в атмосфере аргона к охлажденной смеси (0°С) соединения 6 (9,93 г, 12,24 ммоль) и метилйодида (9,0 мл, 138 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (100 мл). Эту смесь перемешивают в течение 20 ч при температуре окружающей среды. Избыток гидрида натрия ликвидируют метанолом и реакционную смесь вливают в ледяную воду (500 мл). После экстракции этилацетатом органическую фазу промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом натрия и затем концентрируют под вакуумом с получением 11 г соединения 7, которое используют на следующей стадии без очистки.
ТСХ: К(=0,38, силикагель, 3/2 (об./об.) толуол/этилацетат.
Подготовительный пример 6. 2-(Триметилсилил)этил (2,3-ди-О-метил-а-Э-глюкопирано зил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-в-О-глюкопиранозил)-(1 ^4)-6-О-бензил-2,3-ди-О-метил-3-Оглюкопиранозид (8).
Соединение 7 (11 г) растворяют в 60% уксусной кислоте (180 мл) и перемешивают в течение 1 ч 30 мин при 80°С. Смесь концентрируют и упаривают совместно с толуолом. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (2/1 (об./об.) толуол/ацетон) с получением 8,46 г соединения 8.
ТСХ: К(=0,36, силикагель, 1/1 (об./об.) толуол/ацетон.
Подготовительный пример 7. 2-(Триметилсилил)этил (6-О-бензоил-2,3 -ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-гри-О-метил-в-О-глюкопиранозил)-(1^4)-6-О-бензил-2,3-ди-О-метилβ-Ό-глюкопиранозид (9).
1-Бензоилокси-1Н-бензотриазол (5,36 г, 22,4 ммоль) и триэтиламин (3,32 мл) добавляют к раствору соединения 8 (8,41 г, 10,6 ммоль) в дихлорметане (110 мл). Эту смесь перемешивают в течение 20 ч при температуре окружающей среды и затем разбавляют дихлорметаном, промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и водой, сушат над сульфатом натрия и затем концентрируют под вакуумом. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (5/0,5/0,25 (об./об./об.) циклогексан/этилацетат/этанол) с получением 8,40 г соединения 9.
|а||,=+15° (с=2, дихлорметан).
Схема 2
Подготовительный пример 8. 2-(Триметилсилил)этил (2,3 -ди-О-бензоил-4,6-О-бензилидена-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-бензоил-в-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(6-О-бензил-2,3ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3,6три-О-метил-в-О-глюкопиранозил)-(1^4)-6-Обензил-2,3 -ди-О-метил-β-Ό -глюкопиранозид (10).
Соединение 9 превращают в соединение 10 по методике, описанной в подготовительном примере 3.
|α|ι,=+42° (с=2, дихлорметан).
Подготовительный пример 9. 2-(Триметилсилил)этил (4,6-О-бензилиден-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(в-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3,6три-О-метил-в-О-глюкопиранозил)-(1^4)-6-Обензил-2,3-ди-О-метил-в-О-глюкопиранозид (11).
Соединение 10 превращают в соединение по методике, описанной в подготовительном примере 4.
ТСХ: К(=0,35, силикагель, 10/1 (об./об.) дихлорметан/метанол.
Подготовительный пример 10. 2-(Триметилсилил)этил (4,6-О-бензилиден-2,3-ди-О-метил-аЭ-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-вЭ-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метила-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метилв-О-глюкопиранозил)-(1^4)-6-О-бензил-2,3-диО-метил-в-О-глюкопиранозид (12).
Соединение 11 превращают в соединение по методике, описанной в подготовительном примере 5.
ТСХ: К(=0,11, силикагель, 1/2 (об./об.) циклогексан/этилацетат.
Подготовительный пример 11. 2-(Триметилсилил)этил (2,3-ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-в-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-в-О-глюкопиранозил)-(1^4)-6-О-бензил-2,3-ди-О-метилβ-0-глюкопиранозид (13).
Соединение 12 превращают в соединение по методике, описанной в подготовительном примере 6.
ТСХ: К(=0,33, силикагель, 2/0,5/0,5 (об./ об./об.) циклогексан/этилацетат/этанол.
Подготовительный пример 12. 2-(Триметилсилил)этил (6-О-бензоил-2,3-ди-О-метил-а-Оглюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-вЭ-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метила-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метилв-О-глюкопиранозил)-(1^4)-6-О-бензил-2,3-диО-метил-в-О-глюкопиранозид (14).
Соединение 13 превращают в соединение по методике, описанной в подготовительном примере 7.
ТСХ: К{=0,16, силикагель, 3/0,5/0,5 (об./ об./об.) циклогексан/этилацетат/этанол.
Схема 3
силил)этил (2,3-ди-О-бензоил-Д,6-О-бензилидена-О-глюкопиранозил)-(1^Д)-(2,3,6-три-О-бензоил-в-О-глюкоииранозил)-( 1 ^Д)-(6-О-бензоил-2,3ди-О-метил-а-Э-глюкоииранозил)-(1 ^4)-(2,3,6три-О-метил-в-П-глюкопиранозил)-(1^Д)-(2,3,6три-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^Д)-(2,3,6три-О-метил-в-О-глюкопиранозил)-(1^4)-6-Обензил-2,3-ди-О-метил-в-О-глюкопиранозид (15).
Реакцию сочетания соединения 1Д с дисахаридом Д проводят по методике, описанной в подготовительном примере 3, с получением соединения 15.
|α|ι,=+52° (с=1,1, дихлорметан).
Подготовительный пример 1Д. 2-(Триметилсилил)этил (Д,6-О-бензилиден-а-О-глюкопиранозил)-(1^Д)-(в-П-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3ди-О-метил-а-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3,6три-О-метил-в-О-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3,6три-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^Д)-(2,3,6три-О-метил-в-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-6-Обензил-2,3-ди-О-метил-в-О-глюкопиранозид (16).
Соединение 15 превращают в соединение 16 по методике, описанной в подготовительном примере д.
ТСХ: К(=0,31, силикагель, 10/1 (об./об.) дихлорметан/метанол.
Подготовительный пример 15. 2-(Триметилсилил)этил (д,6-О-бензилиден-2,3-ди-О-метила-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метилв-О-глюкопиранозил)-( 1 ^4)- [(2,3,6-три-О-метила-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил в-О-глюкопиранозил)-(1^4)]2-6-О-бензил-2,3ди-О-метил-З-О-глюкопиранозид (17).
Соединение 16 превращают в соединение по методике, описанной в подготовительном примере 5.
ТСХ: К(=046. силикагель, 10/1 (об./об.) дихлорметан/метанол.
Подготовительный пример 16. 2-(Триметилсилил)этил (2,3-ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^Д)-(2,3,6-три-О-метил-в-Э-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^Д)-(2,3,6-три-О-метил-в-Э-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-в-Эглюкопиранозил)-(1^4)-6-О-бензил-2,3-ди-Ометил-в-Э-глюкопиранозид (18).
Соединение 17 превращают в соединение по методике, описанной в подготовительном примере 6.
ТСХ: К(=0,Д2, силикагель, 1/0,5/0,5 (об./ об./об.) циклогексан/этилацетат/этанол.
Подготовительный пример 17. 2-(Триметилсилил)этил (6-О-бензоил-2,3-ди-О-метил-а-Оглюкопиранозил)-(1^Д)-(2,3,6-три-О-метил-вП-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метила-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-в-Э-глюкопиранозил)-(1^Д)-(2,3,6-три-Ометил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-триО-метил-в-Э-глюкопиранозил)-(1^Д)-6-О-бензил-2,3-ди-О-метил-в-О-глюкопиранозид (19).
Соединение 18 превращают в соединение по методике, описанной в подготовительном примере 7.
ТСХ: К£ 0,25, силикагель, 3/0,5/0,5 (об./ об./об.) циклогексан/этилацетат/этанол.
Схема д
Подготовительный пример 18. 2-(Триметилсилил)этил (2,3 -ди-О-бензоил-Д,6-О-бензилидена-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-бензо21 ил-в-О-глюкопиранозил)-( 1 ^-4)-(6-О-бензоил-2,3ди-О-метил-а-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3,6три-О-метил-в-П-глюкопиранозил)-(М4)-[(2,3,6три-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6три-О-метил-в-О-глюкопиранозил)-(1^4)]2-6-Обензил-2,3-ди-О-метил-в-Э-глюкопиранозид (20).
Смесь тиогликозида 4 (5,2 г, 5,23 ммоль), гептасахарида 19 (4,72 г, 2,75 ммоль) и порошка молекулярных сит 4 А в толуоле перемешивают в атмосфере аргона в течение 1 ч. Затем по каплям добавляют раствор Ν-йодсукцинимида (1,36 г, 5,85 ммоль) и трифторметансульфоновой кислоты (0,140 мл, 1,56 ммоль) в смеси 1/1 (об./об.) дихлорметан/диоксан (32 мл) при 0°С. Через 15 мин реакционную смесь фильтруют, разбавляют дихлорметаном, промывают последовательно 1М раствором тиосульфата натрия, 10% раствором гидрокарбоната натрия и водой, сушат над сульфатом натрия и концентрируют под вакуумом. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (3/0,5/0,5) (об./об./об.) циклогексан/этилацетат/этанол) с получением 7,13 г соединения 20.
|(/.|и=+65° (с=1,4, дихлорметан).
Подготовительный пример 19. 2-(Триметилсилил)этил (4,6-О-бензилиден-а-Э-глюкопиранозил)-(М4)-(в-П-глюкопиранозил)-(М4)-(2,3ди-О-метил-а-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3,6три-О-метил-в-П-глюнопиранозил)-(М4)-[(2,3,6три-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6три-О-метил-в-О-глюкопиранозил)-(1^4)]2-6-Обензил-2,3-ди-О-метил-в-О-глюкопиранозид (21).
Соединение 20 превращают в соединение по методике, описанной в подготовительном примере 4.
ТСХ: К(=0,27, силикагель, 10/1 (об./об.) дихлорметан/метанол.
Подготовительный пример 20. 2-(Триметилсилил)этил (4,6-О-бензилиден-2,3-ди-О-метила-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метилв-О-глюкопиранозил)-(М4)-(2,3,6-три-О-метила-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метилв-Э-глюкопиранозил)-(М4)]3-6-О-бензил-2,3ди-О-метил-З-Э-глюкопиранозид (22).
Соединение 21 превращают в соединение по методике, описанной в подготовительном примере 5.
ТСХ: К{=0,31, силикагель, 5/1/1 (об./ об./об.) циклогексан/этилацетат/этанол.
Подготовительный пример 21. 2-(Триметилсилил)этил (2,3-ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(М4)-(2,3,6-три-О-метил-в-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-[(2,3,6-три-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-в-Э-глюкопиранозил)-(1^4)]3-6-О-бензил-2,3-ди-О-метилβ-Ό-глюкопиранозид (23).
Соединение 22 превращают в соединение по методике, описанной в подготовительном примере 6.
ТСХ: К(=0,35, силикагель, 2/1/1 (об./ об./об.) циклогексан/этилацетат/этанол.
Схема 5
Синтез нонасахарида 29
Подготовительный пример 22. 2-(Триметилсилил)этил (2,3-ди-О-метил-6-О-тозил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-в-П-глюкопиранозил)-(1^4)-[(2,3,6-три-О-метил-а-Эглюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-вО-глюкопиранозил)-(М4)]3-6-О-бензил-2,3-диО-метил-в-Э-глюкопиранозид (24).
Соединение 23 (1,09 г) растворяют в пиридине (10 мл) в атмосфере аргона и затем добавляют тозилхлорид (1,03 г). После перемешивания в течение 2 ч реакционную смесь разбавляют дихлорметаном (100 мл). Органическую фазу промывают последовательно 10% раствором гидросульфата калия и затем водой, сушат и упаривают до сухости. После хроматографии на колонке с силикагелем (2,3/2 (об./об.) толуол/ацетон) получают 1,77 г соединения 24.
ТСХ: Я(=0,5, силикагель, 3/1/1 (об./об./об.) циклогексан/этилацетат/этанол.
Подготовительный пример 23. 2-(Триметилсилил)этил (6-дезокси-2,3-ди-О-метил-6-фталимидо-а-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3,6-три-Ометил-в-О-глюкопиранозил)-(1^4)-[(2,3,6-триО-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-триО-метил-в-О-глюкопиранозил)-(1^4)]3-6-О-бензил-2,3 -ди-О-метил- β -Ό -глюкопиранозид (25).
Фталимид калия (225 мг, 1,38 ммоль) и затем 18-краун-6 краун-эфир (121,5 мг, 0,46 ммоль) добавляют к раствору соединения 24 (500 мг, 0,23 ммоль) в безводном Ν,Ν-диметилформами де (11 мл), содержащем порошок молекулярных сит 4 А. Смесь перемешивают в течение 4 ч при 80°С. После охлаждения реакционную смесь разбавляют дихлорметаном, фильтруют через целит и концентрируют. Остаток очищают хроматографией на геле 8ерйабех® ЬН20 (3х100 см) (1/1 (об./об.) дихлорметан/этанол), а затем хроматографией на колонке с силикагелем (11/2 (об./об.) толуол/этанол) с получением 417,4 мг соединения 25.
ТСХ: Я(=0,38, силикагель, 11/2 (об./об.) толуол/этанол.
Подготовительный пример 24. 2-(Триметилсилил)этил (2,3,4,6-тетра-О-ацетил-а-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-ацетил-а-Б-глюкопиранозил)-( 1 ^4)-(2,3,6-три-О-ацетил-в-Б-глюкопиранозил)-( 1 ^4)-(6-дезокси-2,3-ди-О-метил6-фталимидо-а-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6три-О-метил-в-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-[(2,3,6три-О-метил-а-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6три-О-метил-в-Б-глюкопиранозил)-(1^4)]3-6-Обензил-2,3-ди-О-метил-в-Б-глюкопиранозид (27).
Смесь тиогликозида 26 (1,515 г, 1,564 ммоль) (полученного в соответствии с соединением 41, подготовительный пример 36 из АО 99/36443), акцептора 25 (840 мг, 0,391 ммоль) и порошка молекулярных сит 4 А (2,15 г) в толуоле (33 мл) перемешивают в атмосфере аргона в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждают до 0°С и в нее вводят раствор Ν-йодсукцинимида (387 мг) и трифторметансульфоновой кислоты (55,4 мкл) в смеси 1/1 (об./об.) дихлорметан/диоксан (7 мл). Через 10 мин смесь фильтруют, разбавляют толуолом, промывают последовательно 1М раствором тиосульфата натрия, в 10% растворе гидрокарбоната натрия и в воде, сушат над сульфатом натрия и затем концентрируют под вакуумом. Остаток очищают хроматографией на геле 8ер11абех® ЬН20 (1/1 (об./об.) дихлорметан/этанол), а затем хроматографией на колонке с силикагелем (5/4 (об./об.) толуол/ацетон) с получением 887 мг соединения 27.
|α 1,,=+70° (с=0,35, дихлорметан).
Подготовительный пример 25. 2-(Триметилсилил)этил (2,3,4,6-тетра-О-ацетил-а-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-ацетил-а-Б-глюкопиранозил)-( 1 ^4)-(2,3,6-три-О-ацетил-в-Б-глюкопиранозил)-( 1 ^4)-(6-дезокси-2,3-ди-О-метил6-фталимидо-а-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6три-О-метил-в-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-[(2,3,6три-О-метил-а-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6три-О-метил-в-Б-глюкопиранозил)-(1^4)]3-2,3ди-О-метил-в-Б-глюкопиранозид (28).
Раствор соединения 27 (750 мг, 0,245 ммоль) в уксусной кислоте (37 мл) обрабатывают под давлением водорода (5 бар (500 кПа)) в присутствии 10% палладия на угле (750 мг) в течение 2 ч 30 мин. После фильтрации раствор концентрируют и остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (6/1 (об./об.) толуол/ этанол) с получением 728 мг соединения 28.
ТСХ: Я(=0,32, силикагель, 6/1 (об./об.) толуол/этанол.
Подготовительный пример 26. 2-(Триметилсилил)этил (2,3,4,6-тетра-О-ацетил-а-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-ацетил-а-Б-глюкопиранозил)-( 1 ^4)-(2,3,6-три-О-ацетил-в-Б-глюкопиранозил)-( 1 ^4)-(6-дезокси-2,3-ди-О-метил6-фталимидо-а-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6три-О-метил- β-Б -глюкопиранозил)-( 1 ^4) -[(2,3,6три-О-метил-а-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6три-О-метил-в-Б-глюкопиранозил)-(1^4)]3-6-Оацетил-2,3-ди-О-метил-в-Б-глюкопиранозид (29).
Триэтиламин (51,1 мкл, 0,368 ммоль), уксусный ангидрид (32,5 мкл, 0,344 ммоль) и диметиламинопиридин (6,0 мг, 0,049 ммоль) добавляют к раствору соединения 28 (728 мг, 0,245 ммоль) в дихлорметане (10 мл). После перемешивания в течение 1 ч реакционную смесь разбавляют дихлорметаном, промывают последовательно 10% раствором гидросульфата калия, водой, насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и водой, сушат над сульфатом натрия и концентрируют под вакуумом. Очистка остатка, осуществленная хроматографией на колонке с силикагелем, делает возможным получение 0,618 мг соединения 29.
ТСХ: Я(=0,37, силикагель, 6/1 (об./об.) толуол/этанол.
Схема 6
Синтез олигосахарида 31
Подготовительный пример 27. (2,3,4,6-тетраО-Ацетил-а-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6три-О-ацетил-а-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6три-О-ацетил-в-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-(6-дезокси-2,3-ди-О-метил-6-фталимидо-а-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-в-Б-глюкопиранозил)-( 1 ^4)-[(2,3,6-три-О-метил-а-Б-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-в-Б-глюкопиранозил)-(1^4)]3-6-О-ацетил-2,3-ди-О-метил-Бглюкопираноза (30).
Раствор соединения 29 (579 мг, 0,192 ммоль) в смеси 2/1 (об./об.) трифторуксусная кислота/ дихлорметан (11,5 мл) перемешивают в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляют смесью 2/1 (об./об.) толуол/н-пропилацетат (69 мл), концентрируют и выпаривают совместно с толуолом. Остаток очищают хроматографией на ко лонке с силикагелем (5/1 (об./об.) толуол/ этанол) с получением 523 мг соединения 30.
ТСХ: К(=0,31, силикагель, 5/1 (об./об.) толуол/этанол.
Подготовительный пример 28. (2,3,4,6-тетраО-Ацетил-а-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3,6три-О-ацетил-а-Э-глюкопиранозил)-( 1 ^4)-(2,3,6три-О-ацетил-в-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(6дезокси-2,3-ди-О-метил-6-фталимидо-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-в-П-глюкопиранозил)-(1^4)-[(2,3,6-три-О-метил-а-Эглюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-в-Пглюкопиранозил)-(1^4)]3-6-О-ацетил-2,3-ди-Ометил-Э-глюкопиранозы трихлорацетимидат (31).
Трихлорацетонитрил (65,5 мкл, 0,85 ммоль) и карбонат цезия (88,4 мг, 0,27 ммоль) добавляют к раствору соединения 30 в дихлорметане (3 мл). После перемешивания в течение 2 ч смесь фильтруют и концентрируют. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (6/1 (об./об.) толуол/этанол+0,1% триэтиламина) с получением 477 мг соединения 31.
ТСХ: К(=0,35, силикагель, 6/1 (об./об.) толуол/этанол.
Схема 7
Синтез гексадекасахарида 35
Подготовительный пример 29. Метил (2,3, 4,6-тетра-О-ацетил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)(2,3,6-три-О-ацетил-а-О-глюкопиранозил)-( 1 ^4)(2,3,6-три-О-ацетил-в-П-глюкопиранозил)-(1^4)(6-дезокси-2,3-ди-О-метил-6-фталимидо-а-О-глюкопиранозил)-( 1 ^4)-(2,3,6-три-О-метил-в-О-глюкопиранозил)-(1^4)-[(2,3,6-три-О-метил-а-Эглюкопиранозил)-(1^4)-О-(2,3,6-три-О-метилв-П-глюкопиранозил)-(1^-4)]3-(6-О-ацетил-2,3ди-О-метил-а-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(бензил 2,3 -ди-О-метил-в-О-глюкопиранозилуронат)(1 ^4)-(3,6-ди-О-ацетил-2-О-бензил-а-О-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(бензил-2,3-ди-О-метил-а-Ьидопиранозулуронат)-(1^-4)-2,3,6-три-О-бензилα-Ό-глюкопиранозид (33).
Имидат 31 (370 мг, 0,121 ммоль) и соединение 32 (336 мг, 0,242 ммоль) (полученное согласно Р. Ас51сгбшп с1 а1., ВюОгд. Меб. СНсш.. 1994, 2, 1267) растворяют в смеси 1/2 (об./об.) дихлорметан/диэтиловый эфир (5,5 мл). После добавления порошка молекулярных сит 4 А смесь охлаждают до -20°С и добавляют 0,1М раствор триметилсилилтрифторметансульфоната в дихлорметане (181,5 мкл). Через 25 мин смесь нейтрализуют добавлением твердого гидрокарбоната натрия. После фильтрации и концентрирования остаток очищают хроматографией на геле 8ербабех® ЬН20, а затем хроматографией на колонке с силикагелем (6/5 (об./об.) толуол/ацетон) с получением 302 мг соединения 33.
|α|ι,=+86° (с=1, дихлорметан).
Подготовительный пример 30. Метил (2,3, 4,6-тетра-О-ацетил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)(2,3,6-три-О-ацетил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4·)(2,3,6-три-О-ацетил-в-П-глюкопиранозил)-(1^4)(6-дезокси-2,3-ди-О-метил-6-фталимидо-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-в-П-глюкопиранозил)-( 1 ^4)-[(2,3,6-три-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^-4)-О-(2,3,6-три-О-метил-в-Эглюкопиранозил)-(1^4)]3-(6-О-ацетил-2,3-ди-Ометил-α-Ό -глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3-ди-Ометил-в-Э-глюкопиранозилуроновая кислота)(1 ^4)-(3,6-ди-О-ацетил-а-О-глюкопиранозил)(1^4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-а-О-глюкопиранозид (34).
Раствор соединения 33 (104 мг, 0,024 ммоль) в уксусной кислоте (5 мл) обрабатывают под давлением водорода (4 бар (400 кПа)) в присутствии 10% палладия на угле (104 мг) в течение 4 ч. После фильтрации раствор лиофилизируют с получением соединения 34 (87 мг), которое используют на следующей стадии без очистки.
Подготовительный пример 31. Метил (α-Όглюкопиранозил)-(1 ^4)-(а-О-глюкопиранозил)(1^4)-ф-П-глюкопиранозил)-(1^4)-(6-дезокси-2,3ди-О-метил-6-фталимидо-а-О-глюкопиранозил)(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-в-О-глюкопиранозил)(1^-4)-[(2,3,6-три-О-метил-а-О-глюкопиранозил)(1 ^4)-О-(2,3,6-три-О-метил-в-П-глюкопиранозил)(1^4)]3-(2,3-ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)(1 ^4)-(2,3-ди-О-метил-в-О-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-(а-О-глюкопиранозил)(1 ^4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-(1 ^4)-а-О-глюкопиранозид (35).
Молярный раствор метилата натрия в метаноле (140 мкл) добавляют к раствору соединения 34 (80 мг, 0,021 ммоль) в безводном метаноле (6,9 мл) в присутствии порошка молекулярных сит 3 А (875 мг). После 20 ч при температуре окружающей среды реакционную смесь фильтруют и фильтрат нейтрализуют уксусной кислотой. Раствор концентрируют наполовину и наносят на колонку 8ербабех® 6-25 Рте (3х92 см). После элюирования водой и лиофилизации получают соединение 35 (66 мг).
Схема 8
Синтез олигосахарида 37
Подготовительный пример 32. Метил (2,3,
4.6- тетра-О-сульфонато-а-О-глюкопиранозил)(1 ^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-в-Э-глюкопиранозил)-( 1 ^4)-(6-дезокси-2,3-ди-О-метил6-фталимидо-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6три-О-метил-в-П-глюкопиранозил)-(1^4)-[(2,3,6три-О-метил-а-Э-глюкопиранозил)-( 1 ^-4)-0-(2,3,6три-О-метил-в-О-глюкопиранозил)-(1^4)]3-(6О-сульфонато-2,3-ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метил-3-О-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1 ^-4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-Ометил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-( 1 ^-4)-
2.3.6- три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозид, натриевая соль (36).
Полиол 35 (66,4 мг, 0,021 ммоль) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (1,8 мл). Добавляют комплекс триоксид серы-триэтиламин (320 мг, 1,77 ммоль) и смесь перемешивают в течение 20 ч при 55°С. Этот раствор наносят на колонку 8ерйайех® С-25 Ппс (3х92 см), элюируемую 0,2М хлоридом натрия. Фракции, содержащие продукт, концентрируют и обессоливают, используя такую же колонку, элюируемую водой. После лиофилизации получают 83 мг соединения 36.
Масс-спектр: Ε8Ι метод, отрицательный режим: химическая масса=4968,92, экспериментальная масса=4966,52±0,16 а.е.м (атомных единиц массы).
Подготовительный пример 33. Метил (2,3,
4.6- тетра-О-сульфонато-а-О-глюкопиранозил)(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозил)-(1^-4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-в-Э-глюкопиранозил)-(1^-4)-(6-амино-6-дезокси-2,3-диО-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-триО-метил-в-Э-глюкопиранозил)-(1^4)-[(2,3,6-триО-метил-а-Э-глюкопиранозил)-(1^4)-О-(2,3,6три-О-метил-в-Э-глюкопиранозил)-(1^-4)]3-(6О-сульфонато-2,3-ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1 ^-4)-(2,3-ди-О-метил-в-Э-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1 ^-4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозил)-(1^-4)-(2,3-ди-Ометил-а-Е-идопиранозилуроновая кислота)-( 1 ^-4)-
2.3.6- три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозид, натриевая соль (37).
Соединение 36 (83 мг, 0,017 ммоль) растворяют в смеси 2/1 этанол/вода (1,67 мл). Добавляют гидразингидрат (81,2 мкл, 1,67 ммоль) и смесь доводят до кипения с обратным холодильником в течение 20 ч. Раствор наносят на колонку 8ерйайех® С-25 Еше (3х92 см), элюируемую водой. После концентрирования фракций, содержащих продукт, остаток растворяют в смеси 2/1 (об./об.) этанол/вода (5,00 мл) и снова обрабатывают в предыдущих условиях гидразингидратом (81,2 мкл) с получением 71 мг соединения 37.
Масса-спектр: Ε8Ι метод, отрицательный режим: химическая масса=4838,32; экспериментальная масса=4814,6±0,70 а.е.м.
Схема 9
Синтез пентасахарида 39
О*1 ΝΗ / хо II С1
Подготовительный пример 34. Метил (6-Оацетил-2-азидо-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-а-Оглюкопиранозил)-(1^-4)-(бензил-2,3-ди-О-метилв-О-глюкопиранозилуронат)-(1^4)-(3,6-ди-Оацетил-2-О-бензил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)(бензил 2,3-ди-О-метил-а-Е-идопиранозилуронат)(1 ^4)-2,3,6-три-О-бензил-а-О-глюкопиранозид (39).
Соединение 6-О-ацетил-2-азидо-2-дезокси3,4-ди-О-метил-а, β-Ό-глюкопиранозы трихлорацетимидат 38 (265 мг, 0,631 ммоль) (полученное в соответствии с 1. ВаЧеп е1 а1., Вюотд. Мей. СИет. Ьей. (1992), 2 (9), 901) и соединение 32 (584 мг, 0,420 ммоль) (полученное в соответствии с Р. ХУеЧегйшп е1 а1., Вюотд. Мей. СИет., 1994, 2, 1267) растворяют в смеси 1/2 (об./об.) дихлорметан/диэтиловый эфир (28,5 мл). После добавления порошка молекулярных сит 4 А смесь охлаждают до -20°С и добавляют 0,1М раствор триметилсилилтрифторметансульфоната в дихлорметане (94,6 мкл). Через 10 мин снова добавляют имидат (53,8 мг), а затем 0,1М раствор триметилсилилтрифторметансульфоната в дихлорметане (19,2 мкл). Через 10 мин смесь нейтрализуют добавлением твердого гидрокарбоната натрия. После фильтрации и концентрирования остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (3/1 (об./об.) толуол/ этилацетат) с получением 499 мг соединения 39.
|α|υ=+66° (с=1,07, дихлорметан).
Схема 10
Синтез пентасахарида 44 (способ I)
Подготовительный пример 35. Метил (6-0ацетил-2-амино-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-а-Оглюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метил-в-Оглюкопиранозилуроновая кислота)-(1 ^-4)-(3,6ди-О-ацетил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-а-Э-глюкопиранозид (40).
Раствор соединения 39 (552,6 мг, 0,335 ммоль) в смеси 5/1 (об./об.) трет-бутанол/этилацетат (16 мл) обрабатывают под давлением водорода (10 бар (1000 кПа)) в присутствии 10% палладия на угле (1,10 г) и 1М соляной кислоты (0,336 мл) в течение 4 ч 30 мин. После фильтрации раствор концентрируют с получением соединения 40, которое используют на следующей стадии без очистки.
Подготовительный пример 36. Метил (2амино-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метил-в-О-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1 ^4)-(а-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-(1 ^4)-а-Э-глюкопиранозид (41).
Соединение 40 (324 мг, 0,300 ммоль) растворяют в метаноле (8,8 мл). Добавляют 5М раствор гидроксида натрия (2,2 мл) и реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 16 ч. Ее нейтрализуют смолой Эо^ех® 50 Н+ и фильтруют. Раствор пропускают через колонку 8ерйабех® С-25 Иие, элюируемую водой. Фракции, содержащие продукт, концентрируют с получением 254,2 мг соединения 41. На этой стадии, что подтверждено ЯМР (ядерным магнитным резонансом), защитные группы (бензильная и ацетильная группы) были удалены.
ТСХ: ^£=0,26, силикагель, 5/5/1/3 (об./об./ об./об.) этилацетат/пиридин/уксусная кислота/ вода.
Подготовительный пример 37. Метил (2(бензилоксикарбонил)амино-2-дезокси-3,4-диО-метил-а-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3-диО-метил-в-Э-глюкопиранозилуроновая кислота)(1 ^4)-(а-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3-ди-Ометил-а-Е-идопиранозилуроновая кислота)-( 1 ^-4)α-Ό-глюкопиранозид (42).
Соединение 41 (241,1 мг, 0,253 ммоль) растворяют в воде (12,4 мл) и добавляют гидрокарбонат натрия (63,7 мг), затем по каплям добавляют бензилхлорформиат (41 мкл). После перемешивания в течение 12 ч реакционную смесь пропускают через колонку 8ерйабех® С-25 Иие, элюируемую водой. Фракции, содержащие продукт, концентрируют. После очистки хроматографией на колонке с силикагелем (21/17/ 3,6/10 (об./об./об./об.) этилацетат/пиридин/ уксусная кислота/вода) получают 221 мг соединения 42.
ТСХ: ^£=0,63, силикагель, 5/5/1/3 (об./об./ об./об.) этилацетат/пиридин/уксусная кислота/ вода.
Подготовительный пример 38. Метил (2(бензилоксикарбонил)амино-2-дезокси-3,4-диО-метил-6-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозил)(1^4)-(2,3-ди-О-метил-в-О-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1 ^4)-(2,3,6-три-О-сульфонатоа-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метила-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-( 1 ^4)-2,3,6три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозид, натриевая соль (43).
Полиол 42 (19,6 мг, 0,018 ммоль) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (1,62 мл). Добавляют комплекс триоксид серы-триэтиламин (114 мг) и смесь перемешивают в течение 20 ч при 55°С без света. Этот раствор наносят на колонку 8ерйабех® С-25 Ппе. элюируемую 0,2М хлоридом натрия. Фракции, содержащие продукт, концентрируют и обессоливают, используя такую же колонку, элюируемую водой. После лиофилизации получают 28,5 мг соединения 43.
[а]с=+48° (с=2,75, вода).
Подготовительный пример 39. Метил (2амино-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-О-сульфонатоа-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метилβ-Ό-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1 ^4)(2,3,6-три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозил)(1 ^4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-2,3,6-три-О-сульфонатоα-Ό-глюкопиранозид, натриевая соль (44).
Раствор соединения 43 (27,5 мг, 0,015 ммоль) в смеси трет-бутанол (333 мкл)/вода (500 мкл) обрабатывают под давлением водорода (5 бар (500 кПа)) в присутствии 10% палладия на угле (8,25 мг) в течение 16 ч. После фильтрации раствор концентрируют и остаток наносят на колонку 8ерйайех® 6-25 Еше (3х92 см). После элюирования водой и лиофилизации получают 23,7 мг соединения 44.
[а]с=+58° (с=1, вода).
Схема 11
Подготовительный пример 40. Метил (4-Олевулинил-2,3-ди-О-метил-в-О-глюкопиранозилуроновая кислота)-( 1 ^4)-(3,6-ди-О-ацетил-а-Оглюкопиранозил)-( 1 ^4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ьидопиранозилуроновая кислота)-(1 ^4)-а-Э-глюкопиранозид (46).
Раствор соединения 45 (4,50 г, 3,02 ммоль) (полученного согласно Р. ХУеЦегйшп е! а1., ΒίοοΓβ. Мей. СНет., 1994, 2, 1267) в смеси этилацетат/ трет-бутанол (72 мл, 1/1, об./об.) обрабатывают под давлением водорода (4 бар (400 кПа)) в присутствии 10% палладия на угле (9,0 г) в течение 6 ч. После фильтрации и концентрирования полученное соединение 46 используют непосредственно на следующей стадии без очистки.
ТСХ: Н(=0,54, 26/22/4,6/17 (об./об./об./об.) этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода.
Подготовительный пример 41. Метил (метил-4-О-левулинил-2,3-ди-О-метил-в-О-глюкопиранозилуронат)-(1^4)-(2,3,6-три-О-ацетил-аО-глюкопиранозил)-( 1 ^4)-(метил-2,3-ди-Ометил-а-Ь-идопиранозилуронат)-(1 ^4)-2.3.6три-О-ацетил-а-Э-глюкопиранозид (47).
Гидрокарбонат калия (2,71 г), а затем метилйодид (3,4 мл) добавляют при 0°С к раствору соединения 46 (2,57 г, 2,71 ммоль) в безводном Ν,Ν-диметилформамиде (35 мл). После перемешивания в течение 16 ч при температуре окружающей среды реакционную смесь охлаждают до 0°С. Затем последовательно добавляют диметиламинопиридин (132 мг) и уксусный ангидрид (1,5 мл). Смесь перемешивают в течение 16 ч. После нейтрализации избытка уксусного ангидрида смесь разбавляют этилацетатом. Органическую фазу промывают последовательно 10% раствором гидросульфата калия и водой, а затем насыщенным гидрокарбонатом натрия и водой, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и затем упаривают до сухости. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем [9/5 циклогексан/(1/1 этилацетат/этанол)] с получением 2,51 г соединения 47.
ТСХ: К.(=0,41, 2/1 (об./об.) толуол/ацетон.
Подготовительный пример 42. Метил (метил-2,3-ди-О-метил-в-О-глюкопиранозилуронат)(1^4)-(2,3,6-три-О-ацетил-а-О-глюкопиранозил)(1 ^4)-(метил-2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопирано зилуронат)-(1 ^4)-2,3,6-три-О-ацетил-а-О-глюкопиранозид (48).
Соединение 47 (2,5 г, 2,56 ммоль) растворяют в смеси 1/1 (об./об.) толуол/этанол (500 мл). Добавляют гидразина ацетат (1,01 г). После перемешивания в течение 2 ч при температуре окружающей среды реакционную смесь концентрируют до сухости. Остаток растворяют в дихлорметане. Органическую фазу промывают последовательно 2% раствором гидрокарбоната натрия и водой, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и затем выпаривают до сухости. После хроматографии на колонке с силикагелем (1/4 об./об.) толуол/этилацетат), получают 2,01 г соединения 48.
ТСХ: К.(=0,37, 2/1 об./об. толуол/ацетон.
Схема 12
Синтез пентасахарида 49
за
Подготовительный пример 43. Метил (6-О ацетил-2-азидо-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-а-О глюкопиранозил)-( 1 ^4)-(метил 2,3-ди-О-метилв-О-глюкопиранозилуронат)-(1^4)-(2,3,6-триО-ацетил-а-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(метил2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуронат)-(1^4)2,3,6-три-О-ацетил-а-Э-глюкопиранозид (49).
Имидат 38 (1,18 г, 2,81 ммоль) (полученный в соответствии с 1. Вайеп е! а1., Вюогд. Мей. СНет. Ье!!. (1992), 2 (9), 901) и соединение 48 (1,83 г, 1,75 ммоль) растворяют в смеси 1/2 (об./об.) дихлорметан/диэтиловый эфир (126 мл). После добавления порошка молекулярных сит 4 А смесь охлаждают до -20°С и добавляют 1М раствор трет-бутилдиметилсилилтрифторметансульфоната в дихлорметане (421 мкл). Через 30 мин добавляют дополнительное количество имидата (266 мг) и 1М раствор трет-бутилдиметилсилилтрифторметансульфоната в дихлорметане (168 мкл). Через 10 мин смесь нейтрализуют добавлением твердого гидрокарбоната натрия и фильтруют. В раствор доливают дихлорметан, промывают последовательно 2% раствором гидрокарбоната натрия и водой, сушат над сульфатом натрия и затем концентрируют под вакуумом. Полученный остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (4/3, а затем 1/1 (об./об.) дихлорметан/этилацетат) с получением 1,814 г соединения 49.
ТСХ: В(=0,57, 3/1 (об./об.) толуол/этил ацетат.
|(/.|и=+93° (с=1,15, дихлорметан).
Схема 13
Подготовительный пример 44. Метил (2азидо-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метил-3-О-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1 ^4)-(а-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-(1 ^4)-а-Э-глюкопиранозид (50).
30% водный раствор перекиси водорода (42 мл) добавляют при -5°С к раствору соединения 49 (845,3 мг) в тетрагидрофуране (104 мл). После перемешивания в течение 5 мин по каплям добавляют 0,7 М водный раствор гидроксида лития (19,2 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при -5°С, затем в течение 4 ч при 0°С и наконец в течение 16 ч при температуре окружающей среды. Ее нейтрализуют 1М раствором соляной кислоты.
Раствор наносят на колонку 8ерйайех® С-25 Е1ие (5х1000 см), элюируемую водой. Фракции, содержащие ожидаемое соединение, объединя ют, концентрируют и наносят на колонку со смолой Эслтех АС 50 №Х4 Н+ (50 мл). Соеди нение собирают при 0°С и концентрируют с получением 618 мг соединения 50.
ТСХ: В(=0,56, 26/22/4,6/17 (об./об./об./об.) этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода.
Подготовительный пример 45. Метил (2азидо-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-О-сульфонатоа-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метил-вЭ-глюкопиранозилуронат)-(1 ^4)-(2,3,6-три-Осульфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3ди-О-метил-а-Е-идопиранозилуронат)-(1 ^4)2,3,6-три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозид, натриевая соль (51).
Непосредственно перед использованием соединение 50 перегоняют совместно с Ν,Ν-диметилформамидом (3х29 мл). К раствору соединения 50 (612 мг, 0,624 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (58 мл) добавляют комплекс триоксид серы-триэтиламин (3,84 г). Смесь перемешивают в течение 16 ч при 55°С без света. Эту смесь, охлажденную до 0°С, по каплям добавляют к раствору гидрокарбоната натрия (5,33 г) в воде (200 мл). Смесь перемешивают в течение 16 ч при температуре окружающей среды и концентрируют до сухости.
Остаток растворяют в воде и раствор наносят на колонку 8ерйайех® С-25 Еше, элюируемую 0,2М хлоридом натрия. Фракции, содержащие продукт, концентрируют и обессоливают, используя такую же колонку, элюируемую водой. После лиофилизации получают 1,06 г соединения 51.
ТСХ: В(=0,5, 3/5/1/3 (об./об./об./об.) этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода.
Подготовительный пример 46. Метил (2амино-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-О-сульфонатоа-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метилβ-Ό-глюкопиранозилуроновая нислота)-(1 ^4)(2,3,6-три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозил)(1 ^4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-2,3,6-три-О-сульфонатоα-Ό-глюкопиранозид, натриевая соль (44).
Данный гидрогенолиз выполняли дважды, и в каждом случае на 534,4 мг соединения 51.
Раствор соединения 51 (534,4 мг) в смеси трет-бутанол (6,7 мл, 12,6 мл/г)/вода (10 мл, 19 мл/ г) обрабатывают под давлением водорода (5 бар) в присутствии 10% палладия на угле (160 мг) при 40°С в течение 4 ч. После фильтрации (фильтр М1Шроге® Ь8№Р 5 мкм) раствор концентрируют до сухости с получением 530 мг соединения 44.
ТСХ: В(=0,49, 3/5/1/3 (об./об./об./об.) этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода.
Пример 3.
Пример 1. Метил (2,3,4,6-тетра-О-сульфонато-а-П-глюкопиранозил)-(1—14)-(2,3,6-три-Осу льфонато-ос-Л-т люкопиранозил)-( 1-14)-(2,3,6три-О-сульфонато-р-О-глюкопиранозил)-( 1->4)(6 -биотинамидо-6 -де зо кси-2,3 -ди-0 -метил-α - Л глюкопиранозил)-(1—14)-(2,3,6-три-О-метил-3-Пглюкопиранозил)-(1—>4)-[(2,3,6-три-О-метил-аП-глюкопиранозил)-(1—14)-0-(2,3,6-три-О-метилР-0-глюкопиранозил)-(1-14)]з-(6-0-сульфонато2,3 -ди-О-метил-а-Л-глюкопиранозил)-( 1 -14)-(2,3 ди-О-метил-З-О-глюкопиранозилуроновая кислота)-( 1-14)-(2,3,6-три-О-су льфонато-α-Л-глюкопиранозил)-( 1 -14)-(2,3-ди-О-метил-ос-Ь-идоииранозилуроновая нислота)-( 1-14)-2,3,6-три-Осульфонато-ос-П-глюкопиранозид, натриевая соль.
Сульфосукцинимид биотина (16,5 мг) добавляют к раствору соединения 37 (18 мг, 3,72 мкмоль) в 0,5% гидрокарбонате натрия (1,5 мл).
После перемешивания в течение 16 ч при температуре окружающей среды реакционную смесь наносят на колонку Зерйабех® 6-25, элюируемую хлоридом натрия.
Фракции, содержащие продукт, концентрируют и обессоливают на такой же колонке, элюируемой водой.
После лиофилизации получают 15,9 мг соединения примера 1.
[а]с=+59° (с=0,78, вода).
Масс-спектр: Ε8Ι метод, отрицательный режим: химическая масса=5065,12; экспериментальная масса=5064,18±1,04 а.е.м.
Пример 2.
Метил (2,3,4,6-тетра-О-сульфонато-а-Л-глюко пиранозил)-(1—14)-(2,3,6-три-О -сульфо нато-аЛ-глюко пиранозил)-( 1-14)-(2,3,6-три-О-су льфо нато-3-О-глюкопиранозил)-( 1 —14)-(6-[6-(биотинамидо)гексамидо]-6-дезокси-2,3-ди-0-метил-ос-Лглюкопиранозил)-(1—14)-(2,3,6-три-0-метил-3-0глюкопиранозил)-(1^4)-[(2,3,6-три-О-метил-аЛ-глюкопиранозил)-(1—14)-0-(2,3,6-три-О-метил3-0-глюкопиранозил)-(1-14)]з-(6-0-сульфонато2,3 -ди-0-метил-ос-Л-глюкопиранозил)-( 1 -14)(2,3 -ди-0 -метил- β -Л -г люко пиранозиду роновая кислота)-( 1-14)-(2,3,6-три-О-су ль фонато-а-Лглюкопиранозил)-( 1 -14)-(2,3-ди-О-метил-а-Ьидопиранозилуроновая кислота)-( 1 -14)-2,3,6-триО-сульфонат-а-Л-глюкопиранозид, натриевая соль.
6-(Биотинамидо)гексаноат (16,5 мг) добавляют к раствору соединения 37 (18 мг, 3,72 мкмоль) в 0,5% гидрокарбонате натрия (1,5 мл). После перемешивания в течение 16 ч при температуре окружающей среды реакционную смесь наносят на колонку Берйабех® 6-25 Ρίπε, элюируемую хлоридом натрия.
Фракции, содержащие продукт, концентрируют и обессоливают на такой же колонке, элюируемой водой.
После лиофилизации получают 17,9 мг соединения примера 2.
[а]с=+60° (с=1,0, вода).
Масс-спектр: Ε8Ι метод, отрицательный режим: химическая масса=5178,28; экспериментальная масса=5176,3±0,77 а.е.м.
Пример 3.
Метил (2,3,4,6-тетра-О-сульфонато-а-Л-глюкопиранозил)-(1—14)-(2,3,6-три-О-су льфонато-аЛ-глюко пиранозил)-( 1-14)-(2,3,6-три-О-су ль фонато-3-П-глюкопиранозил)-(1—14)-(6-[6-(6-биотинамидогексамидо)гексамидо] -6-дезокси-2,3 -ди-Ометил-ос-Л-глюкопиранозил)-(1—14)-(2,3,6-три-Ометил-3-Л-глюкопиранозил)-( 1 -14)-((2,3,6-три0-метил-ос-Л-глюкопиранозил)-(1—14)-0-(2,3,6три-О-метил-3-Л-глюкопиранозил)-(1—14)]з-(6О-сульфонато-2,3-ди-О-метил-а-Л-глюкопиранозил)-(1—14)-(2,3-ди-О-метил-р-Л-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1—14)-(2,3,6-три-О-сульфонато-а-Л-глюкопиранозил)-( 1 -14)-(2,3-ди-Ометил-а-Е-идопиранозилуроновая кислота)-( 1 -14)2,3,6-три-О-сульфонато-а-Л-глюкопиранозид, натриевая соль.
Сульфосукцинимидил 6-(6-биотинамидогексамидо)гексаноат (23,6 мг) добавляют к раствору соединения 37 (17 мг, 3,51 мкмоль) в 0,5% гидрокарбонате натрия (1,4 мл).
После перемешивания в течение 16 ч при температуре окружающей среды реакционную смесь наносят на колонку Берйабех® 6-25 Ρίπε, элюируемую хлоридом натрия. Фракции, содержащие продукт, концентрируют и обессоливают на такой же колонке, элюируемой водой.
После лиофилизации получают 17,4 мг соединения примера 3.
[а]с=+64° (с=1,0, вода).
Масс-спектр: Е8I метод, отрицательный режим: химическая масса=5291,44; экспериментальная масса=5292,1±0,83 а.е.м.
Пример 4. Метил (2-биотинамидо-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-О-сульфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1 ^-4)-(2,3-ди-О-метил-в-О-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-(2,3,6-триО-сульфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)(1 ^4)-2,3,6-три-О-сульфонато-а-О-глюкопиранозид, натриевая соль.
Раствор Ν-гидроксисукцинимида биотина (42 мг) в Ν,Ν-диметилформамиде (750 мкл) добавляют к раствору соединения 44 (21,2 мг, 0,012 ммоль) в 0,5% гидрокарбонате натрия (750 мкл). После перемешивания в течение 16 ч при температуре окружающей среды реакционную смесь наносят на колонку 8ерйабех® 0-25 Рте.
После элюирования водой и лиофилизации получают 22,3 мг соединения примера 4.
[а]о=+38° (с=0,15, вода).
Масс-спектр: Е8I метод, отрицательный режим: химическая масса=1938,48; экспериментальная масса=1937,48±0,11 а.е.м.
Пример 5. Метил (2-[№(6-биотинамидогексаноил)]-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-О-сульфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3-ди-Ометил-в-Э-глюкопиранозилуроновая кислота)(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-а-О-глюкопиранозил)-(1 ^-4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-2,3,6-три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозид, натриевая соль.
Данную реакцию проводили дважды и в каждом случае на 494,5 мг соединения 44.
Соединение 44 (494,5 мг, 0,289 ммоль) растворяют в 0,5% водном растворе гидрокарбоната натрия (116 мл).
К нему по каплям добавляют раствор 6-биотинамидогексаноата сульфосукцинимида (1,46 г, 2,63 ммоль) в 0,5% растворе гидрокарбоната натрия (12 мл). После перемешивания в течение 16 ч при температуре окружающей среды добавляют 1М водный раствор гидроксида натрия и смесь перемешивают в течение 1 ч. Реакционную смесь наносят на колонку 8ерйабех® 0-25 Рте (5х1000 см), элюируемую хлоридом натрия.
Фракции, содержащие продукт и полученные в результате этих двух реакций, объединяют.
После лиофилизации получают 999,2 мг соединения примера 5.
ТСХ: Κί=0,42, 3/5/1/3 (об./об./об./об.) этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода.
Масс-спектр: Е8I метод, отрицательный режим: химическая масса=2051,64; экспериментальная масса=2051,60±0,43 а.е.м.
Пример 6. Метил (2-[6-(6-биотинамидогексамидо)гексамидо]-2-дезокси-3,4-ди-О-метил6-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозил)-(1^4)(2,3-ди-О-метил-в-Э-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метил-а-й-идо пиранозилуроновая кислота)-(1^4)-2,3,6-три-Осульфонато-а-Э-глюкопиранозид, натриевая соль.
Соединение 44 (30,1 мг, 17,6 мкмоль) растворяют в 0,5% водном растворе гидрокарбоната натрия (7 мл). К нему по каплям добавляют раствор сульфосукцинимидил-6-(6-биотинамидогексамидо) (118 мг, 176 мкмоль) в 0,5% растворе гидрокарбоната натрия (1 мл). После перемешивания в течение 16 ч при температуре окружающей среды добавляют 1М водный раствор гидроксида натрия и смесь перемешивают в течение 1 ч. Реакционную смесь наносят на колонку 8ерйабех® 0-25 Рте (2х85 см), элюируемую хлоридом натрия.
Фракции, содержащие продукт, объединяют, концентрируют и обессоливают на колонке 8ерйабех® 0-25 Рте (2х85 см), элюируемой водой.
После лиофилизации получают 26,5 мг соединения примера 6.
ТСХ: Κί=0,42, 3/5/1/3 (об./об./об./об.) этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода.
Масс-спектр: Е8I метод, отрицательный режим: химическая масса=2164,48; экспериментальная масса=2164,29±0,38 а.е.м.

Claims (15)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Синтетические полисахариды с антитромботической активностью и их фармацевти чески приемлемые соли, отличающиеся тем, что они имеют по меньшей мере одну ковалентную связь с биотином или производным биотина.
  2. 2. Полисахариды по п.1 формулы ^Ре
    П (ΐ) где волнистая линия обозначает связь, расположенную либо ниже, либо выше плоскости коль ца пиранозы,
    Ро обозначает полисахарид, содержащий и одинаковых или разных моносахаридных единиц, связанных с Ре через свой аномерный уг лерод, является схематическим представлением моносахаридной единицы с пиранозной структурой, выбранной из гексоз, пентоз и соответствующих дезоксисахаров, причем эта единица связана с другой моносахаридной единицей через свой аномерный углерод и гидроксильные группы этой единицы замещены одинаковыми или разными группами Кь причем Кд является таким, как определено ниже,
    Ре представляет собой пентасахарид структуры
    Ь равно 1 или 2, и является целым числом и может принимать любое значение от 0 до 25,
    Βί представляет собой связь -Τ-Βίοΐ, (С1С6)алкоксигруппу или группу -О8О3 -,
    К2 представляет собой связь -Τ-Βίοΐ, (С1С6)алкоксигруппу или группу -О8О3-,
    К3 представляет собой связь -Τ-Βίοΐ или (С1-С6)алкоксигруппу,
    Кд представляет собой связь -Τ-Βίοΐ, (С1С6)алкоксигруппу или группу -О8О3- или же Кд является мостиком -О-СН2-, причем группа -СН2- связана с атомом углерода, несущим карбоксильную функциональную группу на том же кольце;
    при этом подразумевается, что по меньшей мере один из заместителей Κι, К2, К3 или Кд представляет собой группу -Τ-Βίοΐ,
    А представляет собой атом кислорода или метиленовую группу,
    Т представляет собой одну из связей, выбранную из ΝΗ, или где и к, которые являются одинаковыми или разными, представляют собой целые числа, которые могут принимать любое значение от 1 до 10;
    Βίοΐ представляет собой группу и их фармацевтически приемлемые соли.
  3. 3. Полисахариды по любому из пп.1 и 2 формулы (1.1) (1.1) где обозначает специфическое семейство полисахаридов Ро, которые связаны с Ре через свой аномерный углерод, как определено для (I), является таким, как определено для (I), группы К1 являются такими, как определено для (I), и для одного и того же моносахарида, могут быть одинаковыми или разными;
    моносахарид, присутствующий в | |т, повторяется т раз, моносахарид, присутствующий в [ ]ΐ, повторяется ΐ раз и моносахарид, присутствующий в [ ]р, повторяется р раз, т является целым числом в пределах от 1 до 5, ΐ является целым числом в пределах от 0 до 24 и р является целым числом в пределах от 0 до 24, причем подразумевается, что 1<т+ΐ+р<25, и их фармацевтически приемлемые соли.
  4. 4. Полисахариды по п.3, отличающиеся тем, что только один из заместителей Кь К2, К3 или К4 представляет собой связь -Τ-Βίοΐ, где Т и Βίοΐ являются такими, как определено для (I).
  5. 5. Гексадекасахариды по любому из пп.1-4 формулы (Г2) (1.2) где Т представляет собой одну из связей, выбранную из ΝΗ, или где _| и к, которые являются одинаковыми или разными, представляют собой целые числа, которые могут принимать любое значение от 1 до 10;
    Βίοΐ представляет собой группу
    Ре представляет собой пентасахарид структуры где К, представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу или группу -О8О3 -,
    К2 представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу или группу -О8О3‘,
    К3 представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу,
    Кд представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу или группу -О8О3 или же Кд является мостиком -О-СН2-, причем группа -СН2- связана с атомом углерода, несущим карбоксильную функцио нальную группу на том же кольце;
    представляет собой атом кислорода или метиленовую группу, и их фармацевтически приемлемые соли.
  6. 6. Пентасахариды по любому из пп.1 и 2 формулы (1.3) где К,, К2, К3, Кд и являются такими, как определено для (I), и их фармацевтически приемлемые соли.
  7. 7. Пентасахариды по п.6, отличающиеся тем, что только один из заместителей К,, К2, К3 или Кд представляет собой связь -Τ-Βΐοΐ, где Т и
    Βίοι являются такими, как определено для (I).
  8. 8. Пентасахариды по любому из пп.6 и 7 формулы (1.3) формулы (1.4) вы где Т представляет собой одну из связей, выбранную из ΝΗ,
    О или где з и к, которые являются одинаковыми или разными, представляют собой целые числа, которые могут принимать любое значение от 1 до 10;
    Βίοι представляет собой группу
    ΗΝ. ,ΝΗ
    К1 представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу или группу -О8О3‘,
    К2 представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу или группу -О8О3‘,
    К3 представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу,
    К4 представляет собой (С1-С6)алкоксигруппу или группу -О8О3‘ или же К4 является мостиком
    -О-СН2-, причем -СН2- группа связана с атомом углерода, несущим карбоксильную функциональную группу на том же кольце, представляет собой атом кислорода или метиленовую группу, и их фармацевтически приемлемые соли.
  9. 9. Полисахариды по любому из пп.1 и 2, выбранные из метил-(2,3,4,6-тетра-О-сульфонато-а-П-глюкопиранозил)-(1^-4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-аИ-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-З-О-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(6-биотинамидо-6-дезокси-2,3-ди-О-метил-а-П-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3,6-три-О-метил-З-О-глюкопиранозил)-( 1 ^4)- [(2,3,6-три-О-метил-а-П-глюкопиранозил)-(1^4)-О-(2,3,6-три-О-метил-З-О-глюкопиранозил)-(1^4)]3-(6-О-сульфонато-2,3-ди-Ометил-а-О-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3-ди-Ометил-З-И-глюкопиранозилуроновая кислота)(1 ^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-а-И-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота )-(1 ^4)-2,3,6-три-О-сульфонато-а-И-глюкопиранозид, натриевая соль, метил-(2,3,4,6-тетра-О-сульфонато-а-П-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-аИ-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-З-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(6-[6-(биотинамидо)гексамидо]-6-дезокси-2,3-ди-О-метил-а-Иглюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-метил-З-Оглюкопиранозил)-(1^4)-[(2,3,6-три-О-метил-аП-глюкопиранозил)-(1 ^4)-О-(2,3,6-три-О-метилЗ-И-глюкопиранозил)-(1 ^4)]3-(6-О-сульфонато2,3-ди-О-метил-а-П-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3ди-О-метил-З-О-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-а-И-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-2,3,6-три-Осульфонато-а-И-глюкопиранозид, натриевая соль, метил-(2,3,4,6-тетра-О-сульфонато-а-П-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-аИ-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-З-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(6-[6-(6-биотинамидогексамидо)гексамидо]-6-дезокси-2,3-ди-Ометил-а-П-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3,6-три-Ометил-З-О-глюкопиранозил)-(1^4)-[(2,3,6-триО-метил-а-И-глюкопиранозил)-(1^4)-О-(2,3,6три-О-метил-З-О-глюкопиранозил)-(1^4)]3-(6О-сульфонато-2,3-ди-О-метил-а-О-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-О-метил-З-О-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1 ^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато-а-И-глюкопиранозил)-(1^4)-(2,3-ди-Ометил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)(1 ^4)-2,3,6-три-О-сульфонато-а-И-глюкопиранозид, натриевая соль, метил-(2-биотинамидо-2-дезокси-3,4-ди-Ометил-6-О-сульфонато-а-О-глюкопиранозил)(1 ^4)-(2,3-ди-О-метил-З-О-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1 ^4)-(2,3,6-три-О-сульфонато43 а-О-глюкопнранозил)-(1^-4)-(2,3-дн-О-метил-аЬ-идопиранозилуроновая кислота)-2,3,6-(1 ^4)(три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозид, натриевая соль, метил-(2-|6-(6-биотинамидогексамидо)гексамидо]-2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-О-сульфонатоа-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3-ди-О-метилβ-Ό-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1 ^4)(2,3,6-три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозил)(1^4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-2,3,6-три-О-сульфонатоα-Ό-глюкопиранозид, натриевая соль, метил-(2-|6-(6-биотинамидогексамидо)гексамидо] -2-дезокси-3,4-ди-О-метил-6-О-сульфонатоа-Э-глюкопиранозил)-(1 ^4)-(2,3-ди-О-метилβ-Ό-глюкопиранозилуроновая кислота)-(1 ^4)(2,3,6-три-О-сульфонато-а-Э-глюкопиранозил)(1 ^4)-(2,3-ди-О-метил-а-Ь-идопиранозилуроновая кислота)-(1^4)-2,3,6-три-О-сульфонатоα-Ό-глюкопиранозид, натриевая соль.
  10. 10. Фармацевтические композиции, содержащие в качестве активного начала полисахарид по любому из пп.1-9, возможно, в комбинации с одним или более чем одним инертным и подходящим эксципиентом.
  11. 11. Применение фармацевтических композиций по п.10 при патологиях, являющихся результатом модификации гомеостаза системы коагуляции, проявляющейся при нарушениях сердечно-сосудистой и церебрально-васкулярной системы, таких как тромбоэмболические нарушения, связанные с атеросклерозом и диа бетом, например нестабильная стенокардия, апоплексия, рестеноз после ангиопластики, эндартерэктомия или введение эндоваскулярных протезов, или тромбоэмболические нарушения, связанные с ретромбозом после тромболиза, с инфарктом, с деменцией ишемического происхождения, с периферическими артериальными заболеваниями, с гемодиализом или с предсердными фибрилляциями, во время использования сосудистых протезов для аортокоронарного шунтирования, при лечении или предупреждении тромбоэмболических патологий венозного происхождения, таких как легочные эмболии, для предупреждения или лечения тромботических осложнений, наблюдаемых после хирургических операций, роста опухолей или нарушений коагуляции, вызываемых бактериальными, вирусными или ферментными активаторами.
  12. 12. Применение полисахарида по любому из пп.1-9 для покрытия протезов.
  13. 13. Применение полисахарида по любому из пп.1-9 в качестве адъювантов во время эндартерэктомии, осуществляемой с использованием пористых баллонов.
  14. 14. Способ нейтрализации полисахаридов по любому из пп.1-9, включающий взаимодействие указанных полисахаридов с авидином или стрептавидином.
  15. 15. Применение авидина или стрептавидина в изготовлении лекарств, предназначенных для нейтрализации полисахаридов по любому из пп.1-9.
EA200300237A 2000-09-22 2001-09-20 Полисахариды с антитромботической активностью, содержащие по меньшей мере одну ковалентную связь с биотином или производным биотина EA005133B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0012094A FR2814463B1 (fr) 2000-09-22 2000-09-22 Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine
PCT/FR2001/002918 WO2002024754A1 (fr) 2000-09-22 2001-09-20 Polysaccharides a activite antithrombotique comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200300237A1 EA200300237A1 (ru) 2003-08-28
EA005133B1 true EA005133B1 (ru) 2004-12-30

Family

ID=8854579

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200300237A EA005133B1 (ru) 2000-09-22 2001-09-20 Полисахариды с антитромботической активностью, содержащие по меньшей мере одну ковалентную связь с биотином или производным биотина

Country Status (40)

Country Link
US (3) US6844329B2 (ru)
EP (1) EP1322673B1 (ru)
JP (2) JP5016778B2 (ru)
KR (2) KR100891388B1 (ru)
CN (1) CN1235914C (ru)
AR (1) AR030774A1 (ru)
AT (1) ATE374215T1 (ru)
AU (2) AU9196001A (ru)
BG (1) BG66191B1 (ru)
BR (1) BR0114007A (ru)
CA (1) CA2418815C (ru)
CY (1) CY1108076T1 (ru)
CZ (1) CZ300856B6 (ru)
DE (1) DE60130669T2 (ru)
DK (1) DK1322673T3 (ru)
EA (1) EA005133B1 (ru)
EC (1) ECSP034514A (ru)
EE (1) EE05202B1 (ru)
ES (1) ES2292625T3 (ru)
FR (1) FR2814463B1 (ru)
GE (1) GEP20053616B (ru)
HK (1) HK1053316A1 (ru)
HR (1) HRP20030219B1 (ru)
HU (2) HU1400034D0 (ru)
IL (2) IL154848A0 (ru)
IS (1) IS2550B (ru)
ME (2) MEP23608A (ru)
MX (1) MXPA03002483A (ru)
NO (2) NO332905B1 (ru)
NZ (1) NZ524472A (ru)
PE (1) PE20020471A1 (ru)
PL (1) PL206727B1 (ru)
PT (1) PT1322673E (ru)
RS (1) RS50730B (ru)
SI (1) SI1322673T1 (ru)
SK (2) SK287054B6 (ru)
TW (1) TWI308153B (ru)
UA (1) UA79736C2 (ru)
WO (1) WO2002024754A1 (ru)
ZA (1) ZA200301692B (ru)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2814463B1 (fr) * 2000-09-22 2002-11-15 Sanofi Synthelabo Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine
FR2874924B1 (fr) * 2004-09-09 2006-12-01 Sanofi Aventis Sa Hexadecasaccharides biotinyles, leur preparation et leur utilisation therapeutique
TWI403334B (zh) * 2004-12-23 2013-08-01 Merck Sharp & Dohme 包含生物素殘基之抗血栓雙重抑制劑
TWI376234B (en) * 2005-02-01 2012-11-11 Msd Oss Bv Conjugates of a polypeptide and an oligosaccharide
US8183228B2 (en) * 2005-10-10 2012-05-22 MSD OSS B.V. Netherlands Anticoagulant antithrombotic dual inhibitors comprising a biotin label
BRPI0617215A2 (pt) * 2005-10-10 2011-07-19 Organon Nv composto anti-trombótico, composição farmacêutica, e, uso do composto
CN1317035C (zh) * 2005-10-24 2007-05-23 天津大学 基于酰肼基的微粒表面多重生物功能因子组装方法
EP1886696A1 (en) * 2006-08-03 2008-02-13 Endotis Pharma Conjugates of antithrombin binding oligosaccharide derivatives and therapeutic proteins
FR2912409B1 (fr) * 2007-02-14 2012-08-24 Sanofi Aventis Heparines de bas poids moleculaire comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine leur procede de preparation,leur utilisation
EP2233143A1 (en) 2009-03-24 2010-09-29 Sanofi-Aventis Use of idrabiotaparinux for decreasing the incidence of bleedings during an antithrombotic treatment
EP2145624A1 (en) 2008-07-18 2010-01-20 Sanofi-Aventis Use of idrabiotaparinux for decreasing the incidence of bleedings during an antithrombotic treatment
TW201006479A (en) * 2008-07-18 2010-02-16 Sanofi Aventis Use of idrabiotaparinux for decreasing the incidence of bleedings during an antithrombotic treatment
FR2935386B1 (fr) * 2008-08-26 2010-09-10 Sanofi Aventis Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant une liaion covalente avec une chaine amine
WO2010029552A1 (en) * 2008-09-10 2010-03-18 Transpharma Medical Ltd. Transdermal delivery of oligosaccharides
US20100173907A1 (en) 2008-12-19 2010-07-08 Supernus Pharmaceuticals, Inc. Method of treatment of aggression
FR2952935B1 (fr) 2009-11-20 2011-12-02 Sanofi Aventis Procede de preparation du n-biotinyl-6-aminocaproate de n succinimidyle
JP6109574B2 (ja) 2009-12-18 2017-04-05 カタラン、フランス、バインハイム、ソシエテ、アノニムＣａｔａｌｅｎｔ Ｆｒａｎｃｅ Ｂｅｉｎｈｅｉｍ Ｓａ 合成オリゴサッカリドを含有する医薬経口剤形
CZ302669B6 (cs) * 2010-03-29 2011-08-24 Univerzita Palackého v Olomouci Efektivní zpusob biotinylace aminosloucenin pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie
CZ302510B6 (cs) * 2010-03-29 2011-06-22 Univerzita Palackého v Olomouci Efektivní zpusob biotinylace sloucenin s karboxylovou skupinou pomocí syntézy na pevné fázi pro potreby afinitní chromatografie
CA2793222C (en) 2010-03-31 2018-01-23 Supernus Pharmaceuticals, Inc. Stabilized formulations of cns compounds
FR2964660B1 (fr) * 2010-09-10 2012-09-28 Sanofi Aventis Nouveaux polysaccharides biotinyles a activite antithrombotique et presentant une stabilite metabolique amelioree
JP2013537181A (ja) * 2010-09-10 2013-09-30 サノフイ 抗血栓活性及び改善された代謝安定性を有するビオチン化多糖類
EP2484366A1 (en) 2011-02-07 2012-08-08 Sanofi Idrabiotaparinux for the treatment of pulmonary embolism and for the secondary prevention of venous thromboembolic events
JP6051211B2 (ja) * 2011-06-17 2016-12-27 カルボミメティクス 半減期が短く活性が高い合成五糖類
EP3524251A1 (en) * 2012-11-13 2019-08-14 Supernus Pharmaceuticals, Inc. Method of treatment of aggression
WO2015195404A1 (en) 2014-06-20 2015-12-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Methods for detection of an analyte by movement of tethered microparticles
WO2016205239A1 (en) 2015-06-15 2016-12-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Non-hormonal mammalian sperm decoy contraception based on the n-terminus of the zp2 protein
WO2018076025A1 (en) 2016-10-21 2018-04-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Molecular nanotags
CN108976318B (zh) * 2017-06-01 2021-03-30 首都医科大学 单-6-(生物素酰胺基)-6-脱氧-β-环糊精及其制备方法和应用
WO2019133727A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Universal influenza virus probe set for enrichment of any influenza virus nucleic acid
EP3997238A1 (en) 2019-07-09 2022-05-18 Optimvia, LLC Methods for synthesizing anticoagulant polysaccharides
US20230047654A1 (en) * 2019-10-17 2023-02-16 Autonetworks Technologies, Ltd. Wiring module
WO2022056078A1 (en) 2020-09-11 2022-03-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Rnase h-assisted detection assay for rna (radar)

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3960884A (en) * 1974-04-24 1976-06-01 Sergei Ivanovich Zavyalov Method of preparing racemic biotin
AU563351C (en) * 1982-01-15 2003-06-19 Glaxo Group Limited Synthesis of oligosaccharides
IL102758A (en) * 1991-08-23 1997-03-18 Akzo Nv Glycosaminoglycanoid derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
WO2000002050A1 (en) * 1998-07-07 2000-01-13 Department Of Radiation Oncology, University Of Washington Trifunctional reagent for conjugation to a biomolecule
US20010023288A1 (en) * 1999-07-07 2001-09-20 Wilbur D. Scott Trifunctional reagent for conjugation to a biomolecule
FR2751334B1 (fr) * 1996-07-19 1998-10-16 Sanofi Sa Polysaccharides synthetiques, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant
FR2773804B1 (fr) * 1998-01-19 2000-02-18 Sanofi Sa Polysaccharides de synthese, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques le contenant
FR2773801B1 (fr) * 1998-01-19 2000-05-12 Sanofi Sa Nouveaux pentasaccharides, procedes pour leurs preparations et compositions pharmaceutiques les contenant
GB2335490B (en) * 1998-03-20 2003-05-14 Ortho Clinical Diagnostics An assay surface that permits an analyte releasiing step
DE69918523T2 (de) 1998-07-31 2005-07-28 Seikagaku Corp. Neues glycosaminoglycan und dieses enthaltendes arzneimittel
FR2814463B1 (fr) * 2000-09-22 2002-11-15 Sanofi Synthelabo Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine

Also Published As

Publication number Publication date
ECSP034514A (es) 2003-04-25
FR2814463B1 (fr) 2002-11-15
DE60130669T2 (de) 2008-07-17
US20060160768A1 (en) 2006-07-20
MXPA03002483A (es) 2004-05-24
BG66191B1 (bg) 2011-12-30
PL206727B1 (pl) 2010-09-30
SI1322673T1 (sl) 2008-02-29
WO2002024754A8 (fr) 2003-07-03
AU2001291960B2 (en) 2007-03-01
CA2418815A1 (en) 2002-03-28
MEP23608A (en) 2010-06-10
US7943595B2 (en) 2011-05-17
KR20080049139A (ko) 2008-06-03
CY1108076T1 (el) 2014-02-12
RS50730B (sr) 2010-08-31
US20110144042A1 (en) 2011-06-16
BR0114007A (pt) 2003-08-12
KR20030055269A (ko) 2003-07-02
NO20110401L (no) 2003-05-22
DK1322673T3 (da) 2008-01-14
IL154848A (en) 2010-11-30
NO332905B1 (no) 2013-01-28
SK287218B6 (sk) 2010-03-08
JP5016778B2 (ja) 2012-09-05
EP1322673A1 (fr) 2003-07-02
AU2001291960C1 (en) 2009-10-08
EA200300237A1 (ru) 2003-08-28
PL363368A1 (en) 2004-11-15
EP1322673B1 (fr) 2007-09-26
CZ2003814A3 (cs) 2003-06-18
UA79736C2 (ru) 2007-07-25
SK3562003A3 (en) 2003-11-04
TWI308153B (en) 2009-04-01
KR100891388B1 (ko) 2009-04-02
HU1400034D0 (hu) 2004-03-01
ES2292625T3 (es) 2008-03-16
HUP0303551A3 (en) 2004-03-29
JP2004509902A (ja) 2004-04-02
BG107650A (bg) 2003-11-28
US20040024197A1 (en) 2004-02-05
NO20031295D0 (no) 2003-03-20
NO20031295L (no) 2003-05-22
NZ524472A (en) 2004-10-29
HRP20030219B1 (en) 2011-10-31
ATE374215T1 (de) 2007-10-15
US6844329B2 (en) 2005-01-18
AU9196001A (en) 2002-04-02
AR030774A1 (es) 2003-09-03
IS2550B (is) 2009-10-15
CA2418815C (en) 2011-05-10
IL154848A0 (en) 2003-10-31
FR2814463A1 (fr) 2002-03-29
ZA200301692B (en) 2004-03-01
US8318696B2 (en) 2012-11-27
EE200300114A (et) 2005-02-15
JP2012131809A (ja) 2012-07-12
ME00080B (me) 2010-10-10
HK1053316A1 (en) 2003-10-17
CN1235914C (zh) 2006-01-11
SK287054B6 (sk) 2009-10-07
YU19703A (sh) 2006-05-25
CN1466594A (zh) 2004-01-07
EE05202B1 (et) 2009-08-17
CZ300856B6 (cs) 2009-08-26
DE60130669D1 (de) 2007-11-08
GEP20053616B (en) 2005-09-26
WO2002024754A1 (fr) 2002-03-28
IS6733A (is) 2003-02-28
HRP20030219A2 (en) 2003-06-30
PT1322673E (pt) 2007-12-03
PE20020471A1 (es) 2002-06-01
HUP0303551A2 (hu) 2004-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA005133B1 (ru) Полисахариды с антитромботической активностью, содержащие по меньшей мере одну ковалентную связь с биотином или производным биотина
US8703738B2 (en) Biotinylated hexadecasaccharides, preparation and use thereof
JP2012500884A (ja) 共有結合およびアミノ鎖を含む、抗血栓活性を有する多糖類

Legal Events

Date Code Title Description
PC1A Registration of transfer to a eurasian application by force of assignment
TC4A Change in name of a patent proprietor in a eurasian patent

Designated state(s): MD TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AZ KG MD TJ TM

TK4A Corrections in published eurasian patents
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM BY KZ RU