PT1255749E

PT1255749E - Derivados de tirosina com actividade anti-leucotrieno

Info

Publication number: PT1255749E
Application number: PT01905744T
Authority: PT
Inventors: Francesco Makovec; Lucio Claudio Rovati; Walter Peris
Original assignee: Rottapharm Spa
Priority date: 2000-02-09
Filing date: 2001-02-07
Publication date: 2007-05-31
Also published as: ATE354571T1; JP4817577B2; JP2003522768A; DE60126745T2; AU776214B2; EP1255749B1; IT1320162B1; WO2001058892A1; CA2399451A1; ITTO20000127A1; CA2399451C; AU3374201A; DE60126745D1; EP1255749A1; US20030087910A1; US6605722B2; ES2282234T3

Description

DESCRIÇÃO

DERIVADOS DE TIROSINA COM ACTIVIDADE ΑΝΤΙ-LEUCOTRIENO 0 objecto da presente invenção são novos derivados de tirosina que podem ser representados pela fórmula geral (I) que é indicada a seguir e em que:

- Ri e P-2 são seleccionados, independentemente, de entre hidrogénio, um grupo alquilo tendo de 1 a 4 átomos de carbono, um grupo halogéneo tal como um grupo flúor, cloro ou bromo, o grupo metoxi, o grupo ciano, ou o grupo trifluorometilo e - R3 é seleccionado, independentemente, de entre um grupo fenilo ou um grupo 2 (ou 3 ou 4)-piridilo, não substituído ou mono- ou dissubstituído com um grupo alquilo ou alcoxilo tendo de 1 a 4 átomos de carbono, com um grupo halogéneo, tal como um grupo flúor ou cloro, com 0 grupo trifluorometilo, com o grupo ciano, com o grupo nitro, com o grupo amino, ou com o grupo fenilo, um grupo 1 (ou 2)-naftilo, um grupo 2 (ou 3)-indolilo, tal qual ou N-alquilado com um grupo alquilo tendo de 1 a 3 átomos de carbono, um grupo 2 (ou 3, 4, 5, 6, 7 ou 8)-quinolinilo, ou um grupo 1 (ou 3, 4, 5, 6, 7 ou 8)-isoquinolinilo, não substituído ou mono- ou dissubstituído com um grupo 1 seleccionado, independentemente, de entre grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo, metoxilo, flúor, cloro, trifluorometilo, ciano, amino, ou nitro, um grupo 2 (ou 5 ou 6)-quinoxalilo, um grupo 3 (ou 4, 5, 6, 7 ou 8)cinolilo, ou um grupo 2 (ou 4, 5, 6 ou 7)-benzimidazolilo. A configuração do centro quiral marcado com um asterisco (*) na fórmula geral (I) pode ser, independentemente, L, D ou DL (racémico).

De preferência, Ri é o grupo hidrogénio, R2 é hidrogénio, ou o grupo 7-metilo, ou 7-flúor e R3 é o grupo 2-quinolinilo, ou o grupo 3-isoquinolinilo.

Verificou-se que os compostos da presente invenção são antagonistas de receptor potentes dos cisteinil-leucotrienos (ou LTD4 peptidil-leucotrienos, daqui para a frente designados por leucotrienos).

Os leucotrienos são sintetizados de novo a partir do ácido araquidónico associado a membranas celulares. São produzidos por uma grande variedade de células inflamatórias, tais como mastócitos, basófilos, eosinófilos e macrófagos. Considera-se que estes compostos estão entre os principais mediadores químicos que induzem a asma brônquica no homem; isto parece ser totalmente justificado pelo facto de o parênquima pulmonar, epitélio e musculatura lisa brônquica no homem serem ricos em receptores de leucotrieno. A estimulação do receptor induzida pelos péptido-leucotrienos origina uma contracção imediata da musculatura lisa e aumenta a 2 secreção de muco pelas células epiteliais. Os compostos da presente invenção podem assim ser considerados úteis no tratamento de várias doenças no homem que são induzidas por hiperestimulação de leucotrienos, tais como, por exemplo, asma brônquica, doenças pulmonares obstrutivas, febre dos fenos e rinite, no tracto respiratório, bem como em conjuntivites alérgicas ou noutras condições patológicas de outros órgãos ou regiões, tais como, por exemplo, colite ulcerativa, doença de Crohn ou alergias alimentares e intolerâncias no sistema gastrointestinal, ou no tratamento de condições patológicas do sistema cardiovascular, inflamatórias ou baseadas em aterosclerose, que são sensíveis à inibição de leucotrieno.

Além dos antagonistas de receptores de leucotrieno que começaram a ser utilizados recentemente para o tratamento da asma, tais como montelukast (EP480717B1), pranlukast (US4780469) e zafirlukast (US4859692), muitas publicações e patentes descrevem compostos novos com actividade anti-leucotrieno. Assim, por exemplo, a patente US 5508408 descreve derivados de quinolina com actividade antagonista de leucotrieno, entre os quais se refere o composto iralukast (CGP 45715Ά), a patente europeia 335315B1 descreve derivados de alcanofenona e a patente WO 96/33181 descreve derivados de etiniltiazolo. Um trabalho monográfico publicado no J. Med. Chem. (1996), 39 (2629-2654), também descreve as estruturas químicas e as actividades farmacológicas de vários antagonistas do receptor de cisteinil-leucotrieno entre os quais, além dos já mencionados, se referem também, por exemplo, os compostos tomelukast, sulukast, ritolukast, 3 verlukast e ablukast. Recentemente, foi publicado um trabalho monográfico sobre dois antagonistas que são estruturalmente correlacionados com os agonistas do receptor, isto é, pobilukast e SKF 106203, (Novel inhibitors of leukotrienes, G. Folco, B. Samuelsson, R. C. Murphy, Eds., Birkháuser Verlag, 1999, p. 317). Toda esta pesquisa demonstra que há uma grande necessidade terapêutica de encontrar drogas novas, ainda mais potentes, selectivas e melhor toleradas com actividade antagonista de leucotrieno. De acordo com esta necessidade, o objecto da presente invenção é disponibilizar para terapia, drogas novas com uma actividade antagonista de leucotrieno potente e selectiva, para o tratamento de todas as condições patológicas em que um grau elevado de síntese e libertação de péptido-leucotrienos pode assumir um papel principal, tal como no caso de doenças alérgicas em geral e asma brônquica em particular.

As formas farmacêuticas dos compostos da invenção podem ser preparadas por técnicas convencionais, por exemplo, na forma de comprimidos, cápsulas, suspensões, soluções, aerossóis ou pachos e podem ser administradas por via oral, parentérica, inalação, transdérmica ou transmucosal, ou noutras formas adequadas para se obter o efeito terapêutico, tais como, por exemplo, preparações sólidas de acção retardada para utilização oral que permitem a libertação controlada da substância activa ao longo do tempo. O ingrediente activo é normalmente administrado ao paciente com uma dose de referência variável de 0,01 a 1 4 mg/kg âe peso corporal por dose. Para administração parentérica, é preferida a utilização de um sal solúvel em água dos compostos da invenção, tal como sal de sódio ou outro sal não tóxico e farmaceuticamente aceitável. Para a via de inalação, a administração de um sal solúvel em água, tal como, por exemplo, o sal de sódio, também é preferível; além disso, para esta via é preferível dispensar o ingrediente activo na forma de um pó micronizado, fino com um diâmetro de partícula médio de preferência entre 1 e 3 mícrons.

Como ingredientes inactivos, podem-se utilizar substâncias normalmente utilizadas em medicamentos, tais como excipientes, ligantes, aromatizantes, desagregantes, substâncias para estimular a absorção transdérmica e transmucosal, corantes, humectantes, etc., e também se utilizam para dispensar por meio de um aerossol pressurizado para inalação, propulsores ou misturas de propulsores ecologicamente aceitáveis. 0 método para a preparação dos derivados da invenção consiste de uma série de reacções que compreendem: a) reagir éster de metiltirosina na configuração desejada com o ácido aromático ou heterocíclico de fórmula (V): r3-cooh (V) em que R3 tem 0 significado indicado acima, pelo método do anidrido misto, num solvente anidro inerte e a uma temperatura entre -5SC e +15aC, para se obterem os 5 derivados de N-aciltirosina de fórmula esquema de síntese geral, passo 1); (IV) (ver o b) reagir os compostos de fórmula (IV) com a halogenometilquinolina de fórmula (III):

h em que Ri e R2 têm os significados indicados acima e X pode ser cloro ou bromo, na presença de uma base, tal como, por exemplo, carbonato de potássio, num solvente inerte, tal como, por exemplo, Ν,Ν-dimetilformamida (DMF) e a uma temperatura entre 202C e a temperatura de refluxo do solvente utilizado, para se obterem os ésteres de fórmula (II) , em que Ri, R2 e R3 têm os significados indicados acima (ver o esquema de síntese geral, passo 2); c) hidrolisar os ésteres de fórmula (II): (Fórmula II)

6 dissolvidos num solvente inerte, tal como, por exemplo, metanol, com uma base inorgânica, tal como, por exemplo, hidróxido de sódio, numa razão molar de 1 a 1,5, para se obterem os derivados finais correspondentes de fórmula (I) em que Ri, R2 e R3 têm o significado indicado acima, de acordo com 0 esquema de síntese geral, passo 3.

Os ácidos aromáticos e heterocíclicos de fórmula (V), assim como a halogenometilquinolina de fórmula (III) estão disponíveis comercialmente, ou são preparados por métodos convencionais de acordo com a literatura existente.

Os derivados finais de fórmula (I) são obtidos nas formas L, D ou DL (racémicas), de acordo com o composto de partida ser L, D ou DL tirosina.

Esquema de síntese geral (Esquema 1) 7

Passo 1

Passo 3

Os exemplos seguintes são dados para ilustrar melhor a invenção.

Exemplo 1

Preparação de éster N-quinaldoil-D-L-tirosinametílico

Dissolveram-se 20 g de ácido quináldieo (0,115 moles) em 200 ml de tetra-hidrofurano. A solução foi arrefecida até -10sc e adicionaram-se 16,4 ml de trietilamina (0,1178 moles), com agitação. Adicionou-se, gota a gota, uma solução de 11,3 ml de clorofornato de etilo (0,1178 moles), ainda com agitação. No final, a 8 agitação foi continuada a -10 2C durante mais cerca de 15 minutos e em seguida adicionou-se, gota a gota, uma solução de 25,0 g de éster D,L-tirosinametílico (0,127 moles) em 50 ml de tetra-hidrofurano, deixou-se em seguida a temperatura aumentar até à temperatura ambiente e a agitação foi continuada durante a noite. A suspensão foi concentrada sob vácuo, o resíduo foi recolhido com ácido cítrico 1M e éter etílico, filtrado, lavado com água e éter etílico e seco, para se obterem 32,5 g. Fórmula :C2oHi8N204 (PM 350, 4). Rendimento 80%. TLC (Tolueno/acetato de etilo 7/3) rf 0,28; (acetato de etilo/MetOH 9/1) rf 0,85, P.F.: 218fiC.

Todos os compostos de fórmula (IV) foram sintetizados utilizando o mesmo método (ver esquema 1, passo 1).

Exemplo 2

Preparação de éster 0-(2-quinolinilmetil)-N-q[uinaldoil-D,L-tirosinametílico

Suspenderam-se 16 g de éster N-quinaldoil-D-L-tirosinametílico (0,046 moles), 11 g de cloridrato de 2-clorometilquinolína (0,05 moles) e 19 g de carbonato de potássio (0,137 moles) em 200 ml de DMF. A suspensão foi aquecida até 80 2C durante 8 horas, com agitação. A suspensão foi arrefecida à temperatura ambiente, vazada em gelo e acidificada com ácido cítrico. A extracção foi realizada com acetato de etilo e a fase orgânica foi lavada com água e extraída mais uma vez com ácido 9 clorídrico 2N. A fase aquosa ácida foi lavada com éter, alcalinizada com NaHCC>3 e extraída mais uma vez com acetato de etilo. A fase orgânica foi lavada com água, acidificada e evaporada sob vácuo. Obtiveram-se 20 g de um óleo denso e utilizou-se no passo seguinte, tal qual, sem posterior purificação. Fórmula :C3oH25N3Q4 (PM 491,5), Rendimento 90%. TLC: (acetato de etilo/MetOH 9/1) rf 0,84.

Todos os compostos intermediários de fórmula (II) foram sintetizados com a utilização do mesmo método (ver esquema 1, passo 2).

Exemplo 3

Preparação de O-(2-quinolinilmetil)-N-quinaldoil-D,L-tirosina. (Composto 1 da Tabela 1)

Dissolveram-se 13 g de éster O-(2-quinolinilmetil)-N-quinaldoil-D,L-tirosinametílico (0,026 moles) em 260 ml de metanol a que se juntaram 15 ml de hidróxido de sódio 2N (0,030 moles), com agitação. Após 4 horas, a solução foi concentrada sob vácuo, o resíduo recolhido com água foi acidificado a pH ácido com ácido cítrico, filtrado, lavado com água e éter etílico e recristalizado a partir de uma mistura 1/1 (v/v) de acetonitrilo/isopropanol.

Obtiveram-se 9,9 g. Fórmula: C29H23N3O4 (PM 477,5). Rendimento 80%. TLC: (álcool isoamílico/acetona/água 5/2/1) rf 0,49; (acetato de etilo/MetOH 9/1) rf 0,08. P.F. 2352C. 10 HPLC: tempo de retenção (rt) 10,0 + 0,5 minutos.

Condições de HPLC: coluna C8 simetria, 4,6x150 mm, eluente KH2P04/Met0H 35/65 0,01M (pH 4,1), fluxo 1 ml/min, 233 nm detector de UV. RMN (DMS0-d6) , ppm : 3,20 (d largo, 2H) ; 4,77 (m, 1H) ; 5,29 (s, 2H) ; 6,94 (d, 2H); 7,21 (d, 2H) ; 7,39-8,62 (m, 12 H); 8,79 (d,1H); 11,0 (s largo, 1H).

Exemplo 4

Preparação de 0-(7-fluoro-2-quinolinilmetil)-N- quinaldoil-D,L-tirosina. (Composto 17 da Tabela 1). O método seguido para a preparação do composto foi semelhante ao descrito nos Exemplos 1-3 e de acordo com o esquema 1. Utilizou-se 7-fluoro-2-clorometilquinolina em vez de 2-clorometilquinolina (exemplo 2) . O rendimento global foi de 55%. Fórmula: C29H22FN3O4 (PM 495,5). P.F. : 248flC. HPLC: rt 10,80 + 2 minutos.

As condições cromatográficas foram idênticas às indicadas no Exemplo 3. RMN (DMSO-d6) , ppm : 3,19 (d largo, 2H) ; 4,76 (m,lH); 5,28 (s, 2H) ; 6,92 (d, 2H) ; 7,20 (d, 2H) ; 7,33-8,62 (m, 11H); 8,78 (d, 1H); 11,0 (s largo, 1H).

Exemplo 5 11

Preparação de 0-(7-fluoro-2-quinolinilmetil)-N-quinaldolil-L-tirosina. (Composto 18 da Tabela 1) 0 método seguido para a preparação do composto foi semelhante ao descrito para o Exemplo 4, utilizando-se l-tirosina em vez de D,L-tírosina. 0 rendimento global foi de 49% Fórmula:C29H22FN304 (PM 495,5). P.F. 2292C.

Potência rotatória [a]21D =-40ê(DMF).

Pureza óptica (HPLC após derivatização):>90%.

Condições analíticas para a derivatização: preparou-se uma solução do produto em teste a uma concentração de 0,5 mg/ml numa solução de trietilamina em MeCN (7 μΐ em 10 ml); 0,4 ml desta solução foram arrefecidos a -5/-10aC. Após cerca de 5 minutos, adicionaram-se 0,2 ml de uma solução de cloroformato de etilo em MeCN (56 μΐ em 10 ml de MeCN) e a mistura foi deixada reagir a frio durante 10 minutos. Adicionaram-se 0,2 ml de uma solução de 1-fenilalaninamida em MeCN (170 mg em 5 ml de MeCN) e a mistura foi deixada reagir a frio durante 20 minutos. A mistura foi diluída com 5 ml de água e o volume foi acertado para 10 ml com MeOH. Após derivatização, o composto foi injectado numa coluna (50 μΐ) nas condições descritas para a HPLC não quiral (ver Exemplo 3).

Tempo de retenção: 22,6 + 0,7 minutos.

Exemplo 6 12 0- (7-fluoro-2-guinolinilmetil) -Ν'-

Preparação de quinaldoil-D-tirosina. (Composto 19 da Tabela 1) 0 método seguido para a preparação do composto foi semelhante ao descrito para o Exemplo 4, utilizando-se D-tirosina em vez de D,L-tirosína. 0 rendimento global foi de 45% Fórmula: C29H22FN3O4 (PM 495,5) P.F.: 2272C.

Potência rotatória [a]21D =+44s(DMF).

Pureza óptica (HPLC após derivatização): >90%. O método de derivatização e as condições cromatográficas foram idênticos aos descritas para o composto 18 (Exemplo 5).

Tempo de retenção: 23,8 + 0,7 minutos.

Alguns derivados de fórmula (I) (Fórmula I)

produzidos de acordo com a invenção com algumas características químicas e físicas que os identificam, 13 são apresentados na Tabela 1 a seguir, sem com isso se limitar em nenhum modo o espírito ou âmbito da invenção.

Tabela I

Composto® R2 R3 Fórmula bruta PF {solvente de cristalização) TLC(R£)c 1 H 2-quinolinil C23H23N3O4 235 2C(B) 0,35 2 H fenil α26Η22Ν20/ 140 2C(A) 0,27 3 H 4-clorofenil c26h21cin2o4 197 2C (A) 0,34 4 H 3-clorofenil c26h21cin2o4 187 2C (A) 0,35 5 xl 4-metoxifenil c27h24n205 212 2C (A) 0,36 6 H 4- trifluorometil fenil c27h21f3n2g4 2112C(A) 0,37 7 H 2-bifenil C32H26N20i 155 aC(A) 0,43 8 H 4-bifenil C3SH26N204d 230 eC(D) 0,40 9 7-C1 4-bifenil c32h25cin2o4 193 2C(A) 0,65 10 H 2-piridil c25h21n3o4 1712C(A) 0,16 11 H 2,-naf til C3oH24N204 196 SC(A) 0,39 12 H 3-quinolinil C29H23N304 230SC(A) 0,25 13 H 6-quinolinil C29H23N304 248SC(A) 0,16 14 H 8-quinolinil C23R23N304 1412C(D) 0,32 15 7-Me 2-quinolinil C30H25N304 214 2C(A) 0,43 16 H 4-quinolinil c29h23n304 224SC(A) 0,10 17 7-F 2-quinolinil C29H22FN304 2488C{B) 0,47 18 (L) 7-F 2-quinolinil c29h22fn3o4 2 2 92 C (B) 0,47 19 (D) 7-F 2-quinolinil c29h22fn3o4 2 2 72 C í B) 0,47 20 H 1-isoquinolinil C29Hj3N304 157SC(A) 0,25 21 H 3-isoquinolinil C29H23N304 2049C(A) 0,32 22 7-F 3-isoquinolinil c29h22fn3o4 227°C(E) 0,51 23 H 2-indolil C2BH23N3Õ4 223 eC(A5 0,42 24 H 3-indolil C28H23N304 2262CÍA) 0,41 25 H 2-indoliI~N-iea 1 C29H25N304 198SC(B) 0,28 26 H 3-inâolil-N- C2jK25N304 180aC(A) 0,20 metil 14 27 H 2-quinoxalinil 28 H 4-cinolinil 29 H 6- benziirddazolil 30 H 2-¢5- fenilpiridil) C28H22N4O4 >240BC(A) 0,17 C29H22N4O4 232 SC(A) 0,14 C27lÍ22-^404 >250SC (A) 0,29 C3A5N3O4 1702C(F) 0,44

Para todos os compostos Ri = H a Todos os compostos excepto os indicados estão na configuração (D,L) h Solvente de cristalização: A (MeCN); B (MeCN/i-PrOH 1:1); C (Ac0Et/Et20 1:1); D (MeCN/i-PrOH 3:1); E (MeCN/i-

PrOH 2:1); F (MeCN/i-PrOH/H20 1:1,3). ' Eluente: álcool isoamílico/acetona/água (5/2/1) (v/v) . 0 Isolado como cloridrato

DESCRIÇÃO DA ACTIVIDADE FARMACOLÓGICA a) A actividade antagonista dos compostos da invenção ao nível do receptor de péptido-leucotrieno foi determinada como a sua capacidade de inibir a ligação do agonista específico [3H]-LTD4 a membranas de pulmão de porquinho-da-índia. Seguiu-se o método descrito por Frey et al. [Eur. J. Pharmacol. 244 (1993): 239-250] com ligeiras modificações. A concentração de radioligando [3H]-LTD4 utilizada foi 0,3 nM com um teor de membrana correspondente a um teor de proteína de 100-120 μg de proteína por amostra; o tempo de incubação foi de 30 minutos a 252C. A separação entre o ligado e o livre foi realizada por filtração rápida em filtros de papel Whatman GF/B. Os resultados obtidos são apresentados na Tabela 2, em que A IC50, isto é a concentração (nanomolar) de antagonista capaz de desalojar 50% do ligando [3H]-LTD4 do receptor é dada 15 para alguns dos compostos da invenção já mencionados a título de exemplo na Tabela 1.

Tabela 1: Inibição da ligação de [3H] -LTD4 a membranas de pulmão de porquinho-da-índia

Composto ICsoxlO-3 M composto IC5oxlO's M 1 20,0 16 200 2 190 17 7,9 3 98,1 18 5,5 4 110 19 12,2 5 117 20 64,1 6 42,7 21 9,7 7 181 22 5,3 8 61,7 23 103 9 217 24 55,3 10 32,3 25 34,8 11 39,0 26 50,8 12 76,0 27 161 13 135 28 >300 14 64,0 29 90,3 15 11,3 30 24,1 LTD4 3,2

Pode ver-se pelos dados apresentados na Tabela 2 que alguns dos compostos da invenção são inibidores potentes da ligação de [3H]-LTD4 aos receptores de membranas de pulmão de porquinho-da-índia. Assim, por exemplo, os compostos 17, 18 e 22, neste modelo experimental, têm uma afinidade que é comparável, ao nível nanomolar, com a do agonista de LTD^ específico. 16 b) para alguns dos compostos que eram particularmente activos na inibição da ligação de [3H]-LTD4 a membranas de pulmão de porquinho-da-índia era desejável determinar a actividade anti-leucotrieno contra LTD4 num teste funcional utilizando traqueia de porquinho-da-índia isolada de acordo com o método de Jones et al. [Can. J.Physiol. Pharmacol. 67_ (1989): 17-28] com ligeiras modificações. As curvas dose-resposta de LTD4 cumulativas foram construídas na ausência (preparações de controlo) e na presença de antagonista adicionado ao banho, para órgãos isolados 15 minutos antes da curva de LTD4 cumulativa ser realizada. Os resultados foram expressos como o efeito, como uma percentagem da contracção máxima induzida por 300 μΜ de acetilcolina. Os resultados assim obtidos são dados na Tabela 3.

Os compostos da invenção que foram analisados produziram um desvio para a direita dependente da concentração, das curvas dose-resposta cumulativas da contracção induzida por LTD4 em tiras de traqueia de porquinho-da-índia. A partir de uma análise das curvas assim obtidas de acordo com Schild, foi possível calcular o pA2 relativo; também se verificou que os compostos da invenção analisados eram antagonistas de leucotrienos potentes neste teste funcional: por exemplo, o composto 22 tinha um pA2 calculado de 8,76, equivalente a um valor de X. de 1,73 nM.

Tabela 3: Antagonismo exercido pelos compostos da invenção nas contracções induzidas por LTD* (curvas dose-resposta cumulativas) em traqueia de porquinho-da-índia 17 isolada in vitro e linhas de regressão e pA2 calculados de acordo com Schild1*1

Equações das linhas Concentrações utilizadas (nM) β EDtjQ (nM) rectas Composto Solvente 3 10 30 100 300 1 2,89 4,53 15,31 31,75 log(A1/A-l)=9,78-1,24B pA2=7,88 17 2,37 4,69 9,48 19,78 log (A·/A-l) =3,75-0,44B pA2=8,53 22 2,09 8,03 13,71 25,39 log (A1/A-l) =5,2-0,59B pA2=8,76

Em que A'/A = razão entre a concentração do agonista, com e sem antagonista, que causa 50% da contracção máxima :B = logaritmo negativo da concentração de antagonista (*) Van Rossum et al. (Arch. Int. Pharmacodyn. Ther. 143 (1963) p. 240)

Actividade in vivo

Além da potência demonstrada in vitro nos modelos dados a título de exemplo acima, uma característica vantajosa e importante dos compostos da presente invenção é a sua óptima biodisponibilidade oral. Assim, por exemplo, o composto 1 administrado a ratos a uma dose de 20 mg/kg, proporcionou uma concentração plasmática máxima (Cmax) de cerca de 20 ^g/ml, 1 hora após administração. A AUC calculada foi de cerca de 50 /ig/ml.h e, mesmo 8 h após a administração, os níveis plasmáticos originaram uma concentração superior a 2 /xg/ml.

Ambas estas características, isto é, a biodisponibilidade óptima e a potência exibida nos testes in vitro explicam a actividade elevada de alguns dos compostos da invenção in vivo. Assim, por exemplo, o 18 composto 17 a uma dose de 0,3 mg/kg administrado oralmente 30 minutos antes do desafio realizado com ovalbumina em aerossol (0,5% p/v em solução salina) em porquinhos-da-índia previamente sensibilizados de acordo com o método descrito por Makovec et al. [J. Med. Chem. 35 (1992), 3633-3640] inibiu completamente os sinais de broncoconstrição que foram registados como o primeiro aparecimento de contracções abdominais.

Os compostos de acordo com a invenção também têm um perfil de baixa toxicidade. Assim, por exemplo, o composto 17 que, como referido, é capaz de desempenhar a sua actividade oral a uma dose de 0,3 mg/kg, tem uma toxicidade aguda (LD50) nos ratinhos que é superior a 50 mg/kg intravenosamente e superior a 300 mg/kg oralmente. O facto da dose tóxica aguda nos ratinhos pela via oral ser mais do que 1000 vezes superior à dose farmacologicamente eficaz, permite prever que o composto 17, bem como outros objectos da invenção, possa exibir um perfil terapêutico extremamente favorável.

Lisboa, m >nni \yúh 19

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Compostos que podem ser representados pela fórmula geral (I) indicada a seguir e em que: (Fórmula I) R,

- Ri e R2 são seleccionados, independentemente, de entre hidrogénio, um grupo alquilo tendo de 1 a 4 átomos de carbono, um grupo halogéneo tal como um grupo flúor, cloro ou bromo, o grupo metoxi, o grupo ciano ou os grupos trifluorometilo e - R3 é seleccionado, independentemente, de entre um grupo fenilo ou um grupo 2, ou 3, ou 4-piridilo, não substituído ou mono- ou dissubstituído com um grupo alquilo ou alcoxilo tendo de 1 a 4 átomos de carbono, com um grupo halogéneo, tal como um grupo flúor ou cloro, com 0 grupo trifluorometilo, com o grupo ciano, com o grupo nitro, com o grupo amino, ou com o grupo fenilo, um grupo 1 ou 2-naftilo, um grupo 2 ou 3-indolilo, tal qual ou N-alquilado com um grupo alquilo tendo de 1 a 3 átomos de carbono, um grupo 2 ou 3, 4, 5, 6, 7 ou 8-quinolinilo ou um grupo 1 ou 3, 4, 5, 6, 7 ou 8-isoquinolinilo, não substituído ou mono- ou dissubstituído com um grupo 1 seleccionado, independentemente, de entre os grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo, metoxilo, flúor, cloro, trifluorometilo, ciano, amino, ou nitro, um grupo 2 ou 5, ou 6-quinoxalilo, um grupo 3 ou 4, 5, 6, 7 ou 8-cinolilo, ou um grupo 2 ou 4, 5, 6 ou 7-benzimidazolilo e em que a configuração do centro quiral marcado com um asterisco (*) na fórmula geral (I) pode ser, independentemente, L, D ou DL (racémico).
2. Compostos de acordo com a reivindicação 1, de fórmula geral (I), em que Ri é hidrogénio (H), R2 é H, ou o grupo 7-metilo ou 7-flúor e R3 é o grupo 2-quinolinilo, ou o grupo 3-isoquinolinilo e a estequiometria do centro quiral marcada com um asterisco (*) em (I) é L, D ou DL (racémica).
3. Preparação farmacêutica que compreende, como substância activa, pelo menos um dos compostos de acordo com a reivindicação 1 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
4. Preparação farmacêutica de acordo com a reivindicação 3 para utilização no tratamento terapêutico de condições patológicas sensíveis a inibição por leucotrieno.
5. Preparação farmacêutica de acordo com a reivindicação 3 para utilização no tratamento terapêutico de condições patológicas do sistema respiratório ligadas a fenómenos alérgicos ou inflamatórios, tais como, por exemplo, asma brônquica, doenças pulmonares obstrutivas, febre dos fenos, rinite alérgica, ou no tratamento de condições dos 2 olhos irritativas, tais como, por exemplo, conjuntivite alérgica.
6. Preparação farmacêutica de acordo com a reivindicação 3 para utilização no tratamento terapêutico de condições patológicas do tracto gastrointestinal, tais como, por exemplo, colite ulcerativa, doença de Crohn e alergias e intolerâncias alimentares.
7. Preparação farmacêutica de acordo com a reivindicação 3 para utilização no tratamento terapêutico de condições patológicas do sistema cardiovascular, inflamatórias ou baseadas em aterosclerose, que são sensíveis a inibição de leucotrieno.
8. Preparação farmacêutica de acordo com a reivindicação 3, que compreende ainda ingredientes inactivos farmaceuticamente aceitáveis seleccionados do grupo que consiste em veículos, ligantes, aromatizantes, adoçantes, desagregantes, conservantes, humectantes e suas misturas, ou ingredientes que facilitam a absorção transdérmica ou transmucosal, ou que permitem a libertação controlada da substância activa ao longo do tempo ou, para dispensar por meio de um aerossol pressurizado para inalação, propulsores ou misturas de propulsores ecologicamente aceitáveis.
9. Método para a preparação de um derivado de fórmula geral (I) em que Ri, R2 e R3 têm os significados indicados na reivindicação 1, e em que os substituintes no centro quiral marcado com um asterisco (*} têm a configuração L, D ou DL (racémica) que compreende os passos de: 3 a) reagir éster de metiltirosina na configuração desejada com o ácido aromático ou heterocíclico de fórmula (V): (V) R3-COOH em que R3 tem o significado indicado acima, pelo método do anidrído misto, num solvente anidro inerte e a uma temperatura entre -5aC e +15eC, para se obterem os derivados de N-aciltirosina de fórmula (IV) (Fórmula IV) CH.

b) reagir os compostos de fórmula (IV) com a halogenometilquinolina de fórmula (III): (Fórmula III)

em que Fu e Fu têm os significados indicados acima e X pode ser cloro ou bromo, na presença de uma base, tal como, por exemplo, carbonato de potássio, num solvente inerte, tal como, por exemplo, Ν,Ν-dimetilformamida (DMF) 4 e a uma temperatura entre 202C e a temperatura de refluxo do solvente utilizado, para se obterem os ésteres de fórmula (II) , em que Ri, R2 e R3 têm os significados indicados acima c) hidrolisar os ésteres de fórmula (II): (Fórmula II)

dissolvidos num solvente inerte, tal como, por exemplo, metanol, com uma base inorgânica, tal como, por exemplo, hidróxido de sódio, numa razão molar de 1 a 1,5, para se obterem os derivados finais correspondentes de fórmula (I) correspondentes: (Fórmula I)

em que Ri, R?, e R3 têm o significado indicado acima, sendo os compostos de fórmula (I) finais recuperados da massa reaccional como tal, ou como saís farmaceuticamente aceitáveis e sendo purificados por métodos convencionais. 18 Lisboa 5