FI91748B

FI91748B - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten kinolinonijohdannaisten valmistamiseksi

Info

Publication number: FI91748B
Application number: FI894803A
Authority: FI
Inventors: Jonathan Frost; Philippe Manoury; Daniel Obitz; Michel Peynot
Original assignee: Synth Labo
Priority date: 1988-10-11
Filing date: 1989-10-10
Publication date: 1994-04-29
Also published as: ATE71617T1; DK500189D0; FI894803A0; HU204813B; ZA897672B; IL91930A; NO894036L; CS404891A3; NZ230959A; KR900006317A; EP0364327A1; FI91748C; DE68900717D1; PT91939A; NO894036D0; HUT51612A; JPH02157267A; PT91939B; GR3003921T3; NO173058C

Description

91748

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten kinolinonijohdannaisten valmistamiseksi Tämän keksinnön kohteena on menetelmä kaavan (I) 5 mukaisten, terapeuttisesti käyttökelpoisten kinolinoni johdannaisten sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuolojen ja, kun X ja Y ovat kumpikin vetyato-meita, niiden diastereoisomeerien ja enantiomeerien valmistamiseksi , 10 X^n-r4 X ^ Ύί? k 20 jossa Rj ja R2 ovat kumpikin toisistaan riippumatta vety-atomeita tai halogeeniatomeita tai ()alkyyliradikaale- ja,

Ra on vetyatomi tai (C^)alkyyliradikaali, R4 on naftyyli-, tetrahydronaftyyli-, bentsyyli-, fenyy-25 li-, pyridyyli-, isokinolyyli- tai bentsoyyliradikaali, jotka voivat sisältää substituentin, kuten metoksin, kloorin, fluorin tai ()sykloalkyylin, X ja Y ovat kumpikin vetyatomeita tai muodostavat yhdessä sidoksen.

30 Kun X ja Y ovat kumpikin vetyatomeita, kaavan (I) mukaisissa yhdisteissä on yksi tai useampia asymmetrisiä hiiliatomeita. Näiden yhdisteiden diastereoisomeerit ja enantiomeerit muodostavat osan keksintöä.

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden happoadditiosuolat 35 farmaseuttisesti hyväksyttävien happojen kanssa muodostavat myös osan keksintöä.

2 91748

Parhaita keksinnön mukaisia yhdisteitä ovat ne, joissa R3 ja R2 ovat kumpikin toisistaan riippumatta vety-atomeita tai fluoriatomeita tai metyyliradikaaleja, R3 on vetyatomi tai metyyli- tai etyyliradikaali, R4 on naftyy-5 li- tai tetrahydronaftyyliradikaali, joka on mahdollisesti substituoitu, X ja Y esittävät sidosta tai ovat kumpikin vetyätomeita.

FI-patentissa 76323 on kuvattu karbostyriilijohdannaisia, joilla on antihistamiiniominaisuuksia ja jotka 10 vaikuttavat keskushermostojärjestelmään.

Keksinnön mukaisesti kaavan (I) mukaisia yhdisteitä valmistetaan patenttivaatimuksessa 1 kuvatulla tavalla.

Kun X ja Y esittävät yhdessä sidosta, valmistetaan yhdisteitä (I) reaktiokaavion 1 mukaisesti: « 3 91748

C0_CH Reaktiokaavio 1 COOH

Λ ' * R,rx —- R,r\ ΛΑ£ O^O-^O Rr^^NHi κΓ^^Ν Ο (Π) H <m> 100° h2so4

COO-CH3 ▼ COOH

soo2.ch3oh »MA -- «ΜΛ ««i <m » (THF) LiAlH4 ,r ^ f^ci

p OH

‘xrx -=^- yxx, r/^^N^O R2 ,

H H

(vn) (VI) "yyC1^' ‘Ό-

Rf^^N^O +-----

H

+ HNa (I) R3 = H , x ja y = sidos + R3-X

',χχζϊ^1',“ r/^^n^o r3 (I) x ja y = sidos 4 y 1748

Kaavan (II) mukainen fenyyliamiini saatetaan reagoimaan 4-asetyylioksi-2H,3H-pyran-2,6-dionin kanssa ja saatu kaavan (lii) mukainen yhdiste syklisoidaan kaavan (IV) mukaiseksi hapoksi, joka muutetaan kaavan (V) mukai-5 seksi esteriksi, sitten kaavan (VI) mukaiseksi alkoholiksi ja lopuksi kaavan (VII) mukaiseksi kloridiksi, joka kon-densoidaan l-R4-piperatsiiniksi, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, joka alkyloidaan haluttaessa kaavan R3X (X= labiili ryhmä) mukaisella yhdisteellä.

10 Kun X ja Y ovat kumpikin vetyatomeita, voidaan kaa van (I) mukaisia yhdisteitä valmistaa hydraamalla oksoki-nolyylirengas missä tahansa synteesivaiheessa, jopa lop-putuotevaiheessa.

Reaktiokaaviossa 2 kaavan (V) mukainen esteri hyd-15 rataan kaavan (VIII) mukaiseksi esteriksi, joka pelkistetään kaavan (IX) mukaiseksi alkoholiksi (jälkimmäinen voidaan myös valmistaa hydraamalla kaavan (VI) mukainen alkoholi). Tämä kaavan (IX) mukainen yhdiste muutetaan kaavan (X) mukaiseksi klooratuksi yhdisteeksi, joka kondensoidaan 20 l-R4-piperatsiinilla, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R3=H ja joka voidaan mahdollisesti alkyloida yhdisteellä R3X. 1 5 91748

Reaktiokaavio 2 COOCH3 vA ·» R^^S^O (CH3OH)

H H

(V) + LiAiH4 (vm) + L1AIH4 (THF) (eetteri-dioksaani) V <’

f"OH H y^0H

RirrS +* R,rYi

(CH3OH) Rf^^N^O

H H

(VI) (IX) + soci2 (CHC13) ry* h R.n"'-') „__a 1Ä soft

h H

(I) R3 = H (X) 6 91748

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden enantiomeerejä, joissa X ja Y ovat kumpikin vetyatomeita, valmistetaan reaktiokaavion 3 mukaisesti toisiintumisreaktiolla kaavan (XI) mukaisesta haposta (joka on valmistettu saippuoimalla 5 kaavan (Vili) mukainen esteri) noudattamalla klassista menetelmää diastereoisomeerisuolojen erottamiseksi, jotka ovat tuloksena tämän hapon suolojen muodostumisesta optisesti aktiivisilla amiineilla, kuten L-tyrosiinihydratsi-dilla tai l-(1-naftyyli)etyyliamiinilla. Sitten kaavan 10 (XI) mukaiset dekstro- tai levo-hapot pelkistetään seka-anhydridiensä kautta kaavan (IX) mukaisiksi alkoholeiksi (sama merkki), jotka sitten muutetaan kaavan (X) mukaisiksi dekstro- ja levo-muotoisiksi klooratuiksi yhdisteiksi. Jälkimmäinen kondensoidaan l-R4-piperatsiinilla siten, että 15 saadaan kaavan (I) mukaisia dekstro- ja levo-muotoisia yhdisteitä, joissa R3 on H ja joka voidaan mahdollisesti alkyloida.

ti 7 91748

Reaktiokaavio 3 Ην/ COOCHj R|V^Vl (HjO-CjHjOH) JL· Jl +NaOH -

H

(vm>

Hv/^"COOH

1) L Tyrosiinihydrok- I) (+) naf tyyli- xW etyyliamiiilii 2) HCl-HjO R2 N O 2)HO-H20

* H

(XI)

H y^rnoH «w^COOH

vX Yft + (XI) -(XI) RJ ? °

H H

nacooc2H3 dcicooei 2) NaBH4 2)NaBH« I (THF) ^ I +

oh OH

'r?x Ä

+CDO -(IX) Rr^^N^O

H H

+ SOQj + SOCLj I I (CHQj)

I (CHQj) I

:ä! .» )ä” I “ I

-(I) R,-H

+ (1) R,»H

8 91748

Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä; IR- ja NMR analyysit ja spektrit vahvistavat yhdisteiden rakenteen .

Esimerkki 1 5 6-metyyli-4-{2- [4 — (1-naftyyli )piperatsin-l-yyli] - etyyli}-lH-kinolin-2-oni (reaktiokaavio 1) 1.1. 6-metyyli-2-okso-l,2-dihydro-4-kinoliinietik- kahappo a) Liuokseen, jossa on 31 g (0,29 moolia) 4-metyy-10 lianiliinia 100 mlrssa etikkahappoa, lisätään melko nopeasti sekoittaen 50 g (0,29 moolia) 4-asetyylioksi-2H,3H-pyran-2,6-dionia [valmistettu E.G. Frandsenin ja N. Jacob-senin mukaan, J. Chem. Soc. Perkin, I 933-6 (1978)].

30 minuutin huoneen lämpötilassa tapahtuneen se-15 koittamisen jälkeen lisätään 800 ml vettä ja annetaan sekoittua 1 tunnin. Kiinteä aine sentrifugoidaan, pestään vedellä ja kuivataan 50 °C:ssa 24 tunnin ajan. Näin saadaan 68,4 g (85 %) kiinteää ainetta, joka sulaa 141 -142 °C:ssa.

20 b) 500 ml:aan rikkihappoa (95 - 97 %) lisätään pie nissä erissä 90 g (0,325 moolia) edellisen kohdan anili-dia, kuumennetaan sitten 100 °C:ssa 2 tuntia koko ajan sekoittaen. Jäähdyttämisen jälkeen reaktioseos kaadetaan 500 g:aan jäätä ja 200 ml:aan vettä, sekoitetaan ja kiin-25 teä aine sentrifugoidaan ja pestään kolme kertaa vedellä ennen 8 tunnin kuivattamista 60 °C:ssa. Saadaan talteen 60 g (85 %) kiinteätä ainetta, joka sulaa 253 - 5 eC:ssa.

1.2. 6-metyyli-2-okso-l,2-dihydro-4-kinoliinime-tyyliasetaatti 30 Lisätään tipoittain noin 1 tunnin aikana 95 g (0,8 moolia) tionyylikloiridia sekoituksessa olevaan suspensioon, jossa on 60 g (0,276 moolia) edellä valmistettua happoa 1 litrassa metanolia, annetaan sitten sekoittua 4 tuntia. 500 ml:aan konsentroinnin ja jäissä jäähdyttämi-35 sen jälkeen kiinteä aine sentrifugoidaan, pestään metano- i.

9 91748 lilla, sitten eetterillä ja kuivataan 60 °C:ssa 8 tunnin ajan. Näin saadaan 57 g (89 %) kiinteätä ainetta, joka sulaa 219 - 220 °C:ssa.

1.3. 4-(2-hydroksi)etyyli-6-metyyli-lH-kinolin-2- 5 oni

Suspensioon, jossa on 45,6 g (1,2 moolia) litium-ja alumiinihydridiä 1,5 l:ssa kuivaa tetrahydrofuraania, lisätään pienissä erissä argonatmosfäärissä 56,5 g (0,244 moolia) edellisen kohdan esteriä jäähdyttäen jäillä 10 reaktionesteen lämpötilan pitämiseksi alle 30 °C:ssa. Lisäyksen jälkeen annetaan sekoittua 4 tuntia huoneen lämpötilassa. Reaktioseos hydrolysoidaan lisäämällä hyvin hitaasti 200 ml vettä, annetaan seistä yli yön, kaadetaan sitten seokseen, jossa on 1 kg jäitä ja 200 ml rikkihap-15 poa; THF poistetaan haihduttamalla alennetussa paineessa.

Halutun yhdisteen suspensio happovedessä sentrifugoidaan, kiinteä aine pestään vedellä ja kuivataan. Sitten sitä pestään suspendoimalla 500 ml:aan etanolia ja pitämällä pystyjäähdyttäjän alla 1 tunnin ajan. Jäähdyttämisen jäl-20 keen sentrifugoidaan, pestään eetterillä ja kuivataan 60 °C:ssa 35,5 g (72 %) kiinteätä ainetta, joka sulaa 252 - 255 °C:ssa.

1.4. 4-(2-kloori)etyyli-6-metyyli-lH-kinolin-2-oni

Suspensioon, jossa on 15 g (0,074 moolia) edellä ; 25 valmistettua karbinolia 700 ml:ssa kloroformia, lisätään sekoittaen 29 ml (0,4 moolia ) tionyylikloridia ja 10 tippaa pyridiiniä. Muodostuu öljyä, joka kiteytyy vähitellen huoneen lämpötilassa. Suspensiota kuumennetaan pystyjäähdyttäjän alla, kunnes aine liukenee täysin (noin 4 tun-30 tia). Jäähdyttäen ja sekoittaen lisätään hitaasti ja varovasti 400 ml vettä reaktioseokseen ja annetaan vielä sekoittua 30 minuuttia. Saatu kiteytynyt yhdiste sentrifugoidaan ja suodoksen kloroformifaasi dekantoidaan, pestään vedellä ja kuivataan. Liuottimen haihduttamisen jälkeen 35 jäännös hienonnetaan alkoholissa, jolloin saadaan toinen 10 91748 erä kiinteätä ainetta. Molemmat kiinteät fraktiot yhdistetään ja kiteytetään uudelleen etanolista. Näin saadaan 10,25 g (62,5 %) kiinteätä ainetta, joka sulaa 215 -216 °C:ssa.

5 1.5 6-metyyli-4-{2-[4—(1-naftyyli)piperatsin-l- yyli]etyyli}-lH-kinolin-2-oni

Kuumennetaan 30 minuuttia pystyjäähdyttäjän alla liuosta, jossa on 1,5 g (0,0068 moolia) edellä valmistettua kloorattua johdannaista ja 3,2 g (0,015 moolia) 1-(1-10 naftyyli)piperatsiinia [Prelogin ja Blazekin kuvaamana Collect. Czech. Chem. Comm. 6, 211-5 (1934)] 50 ml:ssa alkoholia, sitten alkoholi haihdutetaan kuiviin. Tahna-maista jäännöstä kuumennetaan 1 tunti 120 - 130 °C:ssa. Syntynyt suolan ja emäksen seos on öljy, joka hienonnetaan 15 kyllästettyyn natriumkarbonaattiliuokseen, sitten se haihdutetaan kuiviin. Tavanomaisiin liuottimiin liukenematto-muutensa takia orgaaniset emäkset uutetaan metyleeniklo-ridi-metanoliseoksella (50 - 50), saatu suspensio suodatetaan ja suodos konsentroidaan. Jäljelle jäänyt öljy puh-20 distetaan silikageelipylväällä eluoimalla metyleeniklori- di-metanoliseoksella (95 - 5). Saatu fraktio kiteytetään uudestaan metyylisellosolvista ja eristetty kiinteä aine kuivataan 100 °C:ssa alennetussa paineessa. Näin saadaan 1,9 g (71 %) kiinteätä ainetta, joka sulaa 241 -• 25 242 °C:ssa.

Esimerkki 2 7-fluori-4-{2-[4-(7-metoksi-l-naftyyliJpiperatsin- 1-yyli]etyyli}-lH-kinolin-2-oni.

2.1. 7-fluori-2-okso-l,2-dihydro-4-kinoliinietik- 30 kahappo

Yhdiste valmistetaan kohdassa 1.1 kuvatulla tek niikalla käyttämällä lähtöaineena 3-fluorianiliinia. Se sisältää 17 % 5-fluori-2-okso-l,2-dihydro-4-kinoliinietik-kahappoa. Tämä seos sulaa 224 - 225 eC:ssa.

11 91748 2.2. 7-fluori-2-okso-l,2-dihydro-4-kinoliinimetyy-liasetaatti

Yhdiste valmistetaan kohdissa 1-2 kuvatulla tekniikalla. Se on 92-%risen puhdasta ja sisältää 8 % 5-fluo-5 ri-2-okso-l,2-dihydro-4-kinoliinimetyyliasetaattia. Se sulaa 255 - 256 eCrssa.

2.3. 7-fluori-4-(2-hydroksi)etyyli-lH-kinolin-2- oni

Valmistettuna kohdissa 1-3 kuvatuilla valmistus-10 tavoilla 70,4 %:n saannolla tämä yhdiste on 97,5-%risen puhdasta ja sulaa 221 - 222 °Crssa.

2.4. 4-(2-kloori)etyyli-7-fluori-lH-kinolin-2-oni

Valmistettuna kohdissa 1-4 kuvatulla tekniikalla 34 %rn saannolla tämä yhdiste sulaa 190 -191 °Crssa.

15 2.5. 7-fluori-4-{2-[4-(7-metoksi-l-naftyyli)pipe- ratsin-l-yyli]etyyli}-lH-kinolin-2-oni

Valmistettu (57 %) käyttämällä lähtöaineena FR-pa-tentissa nro 88.10481 kuvattua l-(7-metoksi-l-naftyyli)-piperatsiinia kohdassa 1.5 kuvatulla tekniikalla. Tämä 20 yhdiste sulaa 250 - 252 “Crssa.

Esimerkki 3 (± )-4-(2-[4-(7-metoksi-l-naftyyli)piperatsin-l- yyli]etyyli}-3,4-dihydro-lH-kinolin-2-oni (reak- tiokaavio 2) ; 25 3.1. 3-asetyylioksi-5-okso-5-fenyyliamino-2-pen- teenikarboksyylihappo

Suspensioon, jossa sekoitetaan 120 g (0,705 moolia) 4-asetyylioksi-2H,3H-pyran-2,6-dionia 250 mlrssa etikka-happoa, lisätään 65,7 g (0,705 moolia) aniliinia. Reak-30 tioseosta sekoitetaan 1 tunti huoneen lämpötilassa, sitten '· laimennetaan lisäämällä 500 ml vettä. Kiinteä aine sen- trifugoidaan, pestään vedellä ja kuivataan uunissa (50 eC) 24 tuntia. Näin saadaan 150 g (81 %) haluttua yhdistettä, joka sulaa 125 - 126 “Crssa.

35 Tämän yhdisteen ovat kuvanneet E.G. Frandsen ja N. Jacobsen (referenssi mainittu kohdassa 1.1).

' · » 91 748 12 3.2. 2-okso-l,2-dihydro-4-kinoliinietikkahappo

Kaadetaan pienissä erissä 150 g (0,57 moolia) 3- asetyylioksi-5-okso-5-fenyyliamino-2-penteenikarboksyyli-happoa sekoittaen 500 ml:aan 95 - 95-% rikkihappoa, sitten 5 reaktioseosta kuumennetaan 100 eC:ssa 2 tunnin ajan.

Jäähdyttämisen jälkeen tämä liuos kaadetaan sekoittaen seokseen, jossa on 1 kg jäätä ja 500 ml vettä. Näin saatu kiinteä aine sentrifugoidaan. Se pestään 3 kertaa 100 ml:11a vettä ja kuivataan sitten 8 tuntia 60 °C:ssa. Näin 10 saadaan 60,5 g (52 %) 2-okso-l,2-dihydro-4-kinoliinietik-kahappoa, joka sulaa 213 - 215 °C:ssa.

Tämän yhdisteen ovat kuvanneet E.Besthorn ja E. Garben, Chem. Ber. (1900),_33, 3439.

3.3. 2-okso-l,2-dihydro-4-kinoliinimetyyliasetaat- 15 ti

Lisätään tipoittain noin 1 tunnin aikana 95 g (0,8 moolia) tionyylikloridia sekoitettuun suspensioon, jossa on 60 g (0,295 moolia) 2-okso-l,2-dihydro-4-kinolii-nietikkahappoa 1 l:ssa metanolia. Annetaan seistä yli yön.

20 Liuotin haihdutetaan ja saatu jäännös liuotetaan 300 ml:aan kiehuvaa metanolia. Jäähdyttämisen jälkeen seokseen lisätään 300 ml eetteriä. Kiinteä aine sentrifugoidaan, kiteytetään sitten uudestaan metanolista. Näin saadaan 51,5 g (80 %) 2-okso-l,2-dihydro-4-kinoliinimetyyliaset-25 aattia, joka sulaa 209 - 210 °C:ssa. Tämän yhdisteen ovat kuvanneet M. Uchida, F. Tabusa, M. Komatsu, S. Morita, t. Kanbe ja K. Nakagawa, Chem. Pharm. Bull. (1985), 33, 3775.

3.4. (±)-2-okso-1,2,3,4-tetrahydro-4-kinoliinime-tyyliasetaatti 30 Parrin laitteessa hydrataan 50 g (0,23 moolia) 2- · okso-1,2-dihydro-4-kinoliinimetyyliasetaattia liuotettuna 1 l:aan metanolia, jossa on 2 g Adamsin platinaoksidia, 40 - 45 psi:ssä ja 60 °C:ssa noin tunnin ajan. Katalysaattorin suodattamisen ja liuottimen haihduttamisen jälkeen 35 öljymäinen jäännös kromatografoidaan silikageelillä.

13 9 Ί 7 4 8

Eluoimalla di-kloorimetaani/asetoniseoksella (95:5) saadaan öljyä, joka liuotetaan 250 ml:aan kiehuvaa tolueenia. Jäähdyttämisen jälkeen tämä liuos laimennetaan 250 ml:11a petrolieetteriä. Näin saatu kiteinen yhdiste sentrifugoi-5 daan, pestään ja kuivataan. Näin saadaan 36,8 g (73 %) (± )-2-okso-l, 2,3,4-tetrahydro-4-kinoliinimetyyliasetaat-tia, joka sulaa 115 - 116 °C:ssa.

3.5 (±)-4-(2-hydroksi)etyyli-3,4-dihydro-lH-kino- lin-2-oni 10 Suspensioon, jossa on 2,65 g (0,07 moolia) litium- ja alumiinihydridiä 250 ml:ssa kuivaa eetteriä, kaadetaan koko ajan sekoittaen inertissä atmosfäärissä tipoittain liuos, jossa on 11 g (±)-2-okso-l,2,3,4-tetrahydro-4-kino-liinimetyyliasetaattia 50 ml:ssa dioksaania. Sitten 15 seosta kuumennetaan 4 tuntia pystyjäähdyttäjän alla. Jäähdyttämisen jälkeen reaktioseos hydrolysoidaan lisäämällä hitaasti 10 ml vettä voimakkaasti sekoittaen. Suspensio suodatetaan ja kiinteä epäorgaaninen aine pestään 20 ml:11a dioksaania. Suodos haihdutetaan ja saatu öljy hie-20 nonnetaan eetterissä, joka saa sen kiteytymään. Kiinteä aine kiteytetään uudelleen etyyliasetaatista. Näin saadaan 5,3 g (55 %) (±)-4-(2-hydroksi)etyyli-3,4-dihydro- lH-kinolin-2-onia, joka sulaa 119 - 120 °C:ssa.

3.6. (±)—4 — (2-kloori)etyyli-3,4-dihydro-lH-kino- : 25 lin-2-oni

Kuumennetaan pystyjäähdyttäjän alla 4 tunnin ajan seosta, jossa on 5,2 g (0,027 moolia) (± )-4-(2-hydroksi)-etyyli-3,4-dihydro-lH-kinolin-2-onia, 15 g (0,126 moolia) tionyylikloridia, 200 ml kuivaa kloroformia ja 10 tippaa 30 pyridiiniä. Jäähdyttämisen jälkeen lisätään tipoittain 50 | ml vettä ja sekoitetaan 30 minuutin ajan. Orgaaninen faa si dekantoidaan, kuivataan magnesiumsulfaatin päällä ja konsentroidaan vakuumissa. Jäännös kromatografoidaan si-likageelipylväällä. Eluoimalla dikloorimetaani/asetoni-35 seoksella (90/10) saadaan öljyä, joka kiteytetään syklo- 4 14 91748 heksaanista. Näin saadaan 5 g (88 %) (±)-4-(2-kloori)- etyyli-3,4-dihydro-lH-kinolin-2-onia, joka sulaa 112 -113 °C:ssa.

3.7. (±)-4-{2-[4-(7-metoksi-l-naftyyli)piperatsin-5 l~yyli]etyyli}-3,4-dihydro-2(2H)-kinolinoni

Sekoitetaan hyvin 1,5 g (7,15 mmoolia) (±)-4-(2-kloori)etyyli-3,4-dihydro-lH-kinolin-2-onia 3,65 g:aan (15 nunooliin) 1-(7-metoksi-l-naftyyli)piperatsiinia ja kuumennetaan 130 °C:ssa 1 tunnin ajan koko ajan sekoit-10 taen. Jäähdytetty jäännös liuotetaan uuttamalla 25 ml:aan 2N natriumhydroksidia ja 2 kertaa 50 ml:11a dikloorimetaa-nia. Orgaaninen uute pestään vedellä, kuivataan magnesiumsulfaatin päällä ja konsentroidaan. Jäännös puhdistetaan eluoimalla dikloorimetaani/metanoliseoksella (95/5) sili-15 kageelipylväässä. Puhdistettu fraktio kiteytetään uudes taan eetteristä ja tämä kiinteä aine sentrifugoidaan ja kuivataan. Näin saadaan 2,6 g (87,5 %) (±)-4-{2-[4-(7-me-toksi-1-naftyyli)piperatsin-l-yyli]etyyli}-3,4-dihydro-2(2H)-kinolinonia, joka sulaa 177 - 178 °C:ssa.

20 3.8. (±)-4-{2-[4-(7-metoksi-l-naftyyli)piperatsin- 1-yyli]etyyli}-3,4-dihydro-lH-kinolin-2-onin seskvifuma-raatti (emäs/happo 2/3)

Liuokseen, jossa on 2,5 g (602 mmoolia) edellä valmistettua emästä 100 ml:ssa kiehuvaa etanolia, lisätään 25 1,06 g (9,1 mmoolia) fumaarihappoa. Kun kaikki on liuen nut kuumana, annetaan liuoksen jäähtyä hitaasti. Kiteytynyt suola sentrifugoidaan, pestään alkoholilla, kuivataan sitten alennetussa paineessa 100 °C:ssa. Näin saadaan 2,9 g (82 %) (±)-4-{2-[4-(7-metoksi-l-naftyyli)pipe-30 ratsin-l-yyli]etyyli}-3,4-dihydro-lH-kinolin-2-onin ses- • kvifumaraattia (emäs/happo 2/3), joka sulaa 208 - * .

209 °C:ssa.

Yhdisteen 3.5 valmistamiseksi voidaan käyttää reak-tiokaaviossa 2 olevaa menetelmää.

35 4-(2-hydroksi)etyyli-lH-kinolin-2-oniavalmistetaan käyttämällä lähtöaineena 2-okso-l,2-dihydro-4-kinoliinime- 15 91748 tyyliasetaattia (valmistettu kohdassa 3.3) kohdassa 1.3 kuvatulla valmistustavalla. Se on kiinteä aine, joka sulaa 213 - 215 °C:ssa. Tämä yhdiste hydrataan katalyytti-sesti Adamsin platinalla, jolloin saadaan (+)-4-(2-hydrok-5 si)etyyli-3,4-dihydro-lH-kinolin-2-onia.

Esimerkki 4 4-{2-[4-(1-naftyyli)piperatsin-l-yyli]etyyli}-l- metyylikinolin-2-oni 4.1. 4-(2-kloorietyyli)-lH-kinolin-2-oni 10 Tämä yhdiste valmistetaan käyttämällä lähtöaineena kohdassa 3.9 kuvattua karbinolia kohdassa 1.4 kuvatun tekniikan mukaisesti. Näin saadaan 62,5 % kiinteätä ainetta, joka sulaa 212 eC:ssa. Tämä yhdiste on kuvattu Otsuka Pharm. Co. Ltd:in patenttijulkaisussa Ger. Offen 15 3324034 (5/1/84), sen sulamispiste on 186 - 187 °C.

4.2. 4-{2-[4-(1-naftyyli)piperatsin-l-yyli]etyyli }-lH-kinolin-2-oni Tätä yhdistettä valmistetaan 50 %:n saannolla käyttämällä kohdassa 1.5 kuvattua tekniikkaa, yhdiste sulaa 20 230 - 232 °C:ssa.

4.3. 4-{2-[4-(1-naftyyli)piperatsin-l-yyli]etyyli }-l-metyylikinolin-2-oni

Kuumennetaan 1 tunti 60 - 70 °C:ssa argonatmosfäärissä suspensiota, jossa on 0,312 g natriumhydridiä (pen-25 taanilla pestyä) 50 ml:ssa dimetyylisulfoksidia. Tähän jäähdytettyyn liuokseen lisätään huoneen lämpötilassa 2,5 g (6,5 mmoolia) edellä valmistettua yhdistettä ja annetaan sekoittua 30 minuuttiia, sitten jäähdytetään 10 eC:seen ja lisätään liuos, jossa on 1 g metyylijodidia 30 10 mlrssa DMS0:ta. Normaalilämpötilassa tapahtuneen 12 tunnin reaktion jälkeen lisätään 200 ml vettä ja sentrifu-goidaan kumimainen kiinteä aine, joka eluoidaan silikagee-lipylväästä metyleenikloridin ja metanolin seoksella (95-5). Puhdistetusta fraktiosta, joka sulaa liian alhai-35 sessa lämpötilassa, valmistetaan monofumaraatti alkoholis- 16 91748 sa. Uudelleen kiteyttämisen, sentrifugoinnin ja eetteri-kuivauksen jälkeen saadaan 2,2 g (66 %) kiinteätä ainetta, joka sulaa 208 - 209 °C:ssa.

Esimerkki 5 5 (+)-4-{2-[4—(7-metoksi-l-naftyyli)piperatsin-l- yyli] - etyyli}-3,4-dihydro-lH-kinolin-2-oni 5.1. (±)-2-okso-l,2,3,4-tetrahydro-4-kinoliini-etikkahappo

Suspensioon, jossa on 58 g (0,265 moolia) kohdassa 10 3.4 saatua esteriä 500 ml:ssa metanoli/vesi-liuosta (50/50), lisätään sekoittaen 11 g 97-% NaOH (0,27 moolia). Huoneen lämpötilassa tapahtuneen 1 tunnin sekoittamisen jälkeen homogeeninen liuos saa seistä yli yön. Metanolin haihduttamisen jälkeen lisätään 250 ml vettä, sitten 6 N 15 HC1 tipoittain ja sekoittaen, kunnes pH = 1.

Saostunut happo suodatetaan huoneen lämpötilassa tapahtuneen 1 tunnin sekoittamisen jälkeen. Se pestään 3 kertaa vedellä ja kuivataan 100 °C:ssa vakuumissa. Näin saadaan 52,5 g (96,5 %) kiinteätä ainetta, joka sulaa 20 183 - 184 eC:ssa.

5.2. (±) -2-okso-l,2,3,4-tetrahydro-4-kinoliini-etikkahapon L-tyrosiinihydratsidisuola

Kiehuvaan liuokseen, jossa on 19,5 g (0,1 moolia) L-tyrosiinihydratsidia 1 l:ssa metanoli/vesi-seosta 25 (90/10), lisätään 20,5 g (0,1 moolia) kohdassa 5.1 saatua happoa.

Reaktioseosta sekoitetaan 4 tuntia pitämällä lämpötila 30 - 40 °C:ssa, sitten sen annetaan seistä yli yön huoneen lämpötilassa. Kiinteä aine suodatetaan, pestään 30 metanolilla ja kuivataan. Kahden uudelleen kiteyttämisen . jälkeen CH30H/H20 (90/10) seoksesta saadaan 8,25 g (20,6 %) yhdistettä, joka sulaa 209 - 210 °C:ssa.

[a]p4 = + 32,5° (c=l, DMF).

5.3. (±)-2-okso-l,2,3,4-tetrahydro-4-kinoliini-35 etikkahappo

Suspensiota, jossa on 8 g kohdassa 5.2 saatua L-tyrosiinihydratsidisuolaa 250 ml:ssa tislattua vettä, kuu- 17 91748 mennetaan kunnes aine liukenee. Lisätään sekoittaen 5 ml väkevää (36 - 38-%) kloorivetyhappoa ja annetaan dekstro-muotoisen hapon kiteytyä kylmässä (noin 5-10 eC). Kiteet suodatetaan, pestään ainakin 3 kertaa jäävedellä ja 5 kuivataan 8 tuntia 100 eC:ssa vakuumissa. Näin saadaan 3,8 g (93 %) kiinteätä ainetta, joka sulaa 154 -155 °C:ssa.

[a]*4 = + 63,2° (c=l, DMF).

5.4. (+)-4-(2-hydroksietyyli)-3,4-dihydro-lH-kino- 10 lin-2-oni Jäähdytetään -10 °C:een sekoittaen ja kuivassa ar-gonatmosfäärissä liuos, jossa on 4,1 g (0,02 moolia) kohdassa 5.3 saatua happoa ja 2,02 g (0,02 moolia) trietyy-liamiinia 100 mlissa vedetöntä THF:a. Lisätään tipoittain 15 15 minuutin aikana liuos, jossa on 2,17 g (0,02 moolia) etyylikloroformaattia 10 ml:ssa kuivaa THF:a. Tunnin sekoituksen jälkeen -5 °C, -7 °C:ssa lisätään pienissä erissä noin 5 minuutin aikana 1,5 g (0,04 moolia) natriumboro-hydridiä. Reaktioseoksen annetaan lämmetä huoneen lämpö- 20 tilaan, ja sekoitetaan vielä 30 minuuttia. Lisätään ti poittain 20 ml vettä (noin 30 minuutin aikana). Orgaaninen faasi dekantoidaan ja jäljelle jäänyt vesifaasi, joka sisältää liukenemattoman epäorgaanisen aineksen, uutetaan 3 kertaa dikloorimetaanilla. Uutteet kuivataan magnesium-: 25 sulfaatin päällä, liuotin haihdutetaan ja jäännös puhdistetaan silikageelipylväällä eluoimalla dikloorimetaani/-metanoliseoksella (95/5). Puhdistettu fraktio haihdutetaan, näin saadaan 2,7 g (70,7 %) öljyä, joka kiteytyy hienonnettaessa eetterissä.

30 Sp. = 105-6 eC.

[a]*4 = +44,5° (c = 1, DMF).

5.5. (+)-4-(2-kloori)etyyli-3,4-dihydro-lH-kino-lin-2-oni

Kuumennetaan 4 tuntia kiehumislämpötilassa pysty-35 jäähdyttäjän alla kuivassa argonatmosfäärissä seosta, jos- • · 91 748 18 sa on 2,5 g (13,07 mmoolia) kohdan 5.4 yhdistettä, 5 ml (69 mmoolia) tionyylikloridia, 5 tippaa pyridiiniä ja 100 ml kuivaa kloroformia. Kylmään liuokseen lisätään ti-poittain ja sekoittaen 30 ml vettä ja liuos dekantoidaan.

5 Kloroformiuute, joka on kuivattu magnesiumsulfaa tin päällä ja haihdutettu, puhdistetaan sitten silikagee-lipylväällä eluoimalla dikloorimetaani/asetoniseoksella (95/5, sitten 90/10). Puhdistetuista fraktioista saadaan öljy, joka kiteytyy hienonnettaessa sykloheksaanissa.

10 Suodattamisen, pentaanipesun ja 8 tunnin vakuumikuivauksen jälkeen saadaan 1,3 g (47,5 %) yhdistettä, joka sulaa 110 - 111 °C.

[a]j;4 = +77,1° (C = 1, DMF).

5.6. (+)-4-(-2-[4-(7-metoksi-l-naftyyli)piperat- 15 sin-l-yyli]etyyli}-3,4-dihydro-lH-kinolin-2-oni

Kuumennetaan 4 tuntia kiehumislämpötilassa pysty-jäähdyttäjän alla seosta, jossa on 1,2 g (5,72 mmoolia) kohdan 5.5 johdannaista, 1,45 g (6 mmoolia) l-(7-metoksi-1-naftyyli)piperatsiinia, 20 ml metyyli-isobutyyliketonia 20 (MIBC) ja joitakin natriumjodidikiteitä. Lisätään 0,32 g (3 mmoolia) natriumkarbonaattia ja seosta kuumennetaan kiehumislämpötilassa 8 tunnin ajan.

Lisätään vielä 0,32 g (3 mmoolia) natriumkarbonaattia ja annetaan seoksen kiehua vielä 8 tuntia. Kun on li-25 sätty 1 ml vettä ja kiehutettu 4 tuntia pystyjäähdyttäjän alla, MBIC haihdutetaan ja jäännös liuotetaan 50 ml:aan vettä. Emäs uutetaan dikloorimetaanilla. Uute, joka on kuivattu magnesiumsulfaatin päällä ja haihdutettu, puhdistetaan silikageelipylväällä eluoimalla dikloorimetaani/me-30 tanoli-seoksella (95/5).

Puhdistettu fraktio kiteytyy eetteristä ja kiinteä aine kiteytetään uudestaan isopropyylialkoholista. Näin saadaan 1,55 g (65 %) kiinteätä ainetta, joka sulaa 149 -150 eC:ssa.

35 [a]p4 = +50,5° (c = 1, DMF).

19 91748

Esimerkki 6 (-)-4-{-2-[4-(7-metoksi-l-naftyyli)piperatsin-l- yyli]etyyli}-3,4-dihydro-lH-kinolin-2-oni 6.1. (+)-l-(naftyyli)etyyliamiinin ja (-)-2-okso- 5 1,2,3,4-tetrahydro-4-kinoliinietikkahapon suola

Haihdutetaan kuiviin L-tyrosiinihydratsidin ja (±)-2-okso-l,2,3,4-tetrahydro-4-kinoliinietikkahapon 3:sta uudelleen kiteytyksestä saadut emäliuokset (ks. esimerkki 5.2). Jäännös liuotetaan 200 ml:aan 50 - 60 °C vettä ja 10 lisätään 20 ml väkevää kloorivetyhappoa. Happo, joka on rikastettu levo-muotoisen enantiomeerin suhteen, kiteytyy kylmässä ja sulaa 178 - 180 °C:ssa.

Liuotetaan 13,5 g (65,8 mmoolia) tätä rikastettua happoa ja 11,3 g (66 mmoolia) (R)-(+)-1-(1-naftyyli)etyy-15 liamiinia 350 ml:aan kiehuvaa isopropyylialkoholia. Huo neen lämpötilassa tapahtuneen 4 tunnin sekoittamisen jälkeen reaktioseos suodatetaan ja kiinteä aine pestään eetterillä. Kahden uudelleen kiteyttämisen jälkeen isopro-pyylialkoholi-vesi-seoksesta (95/5) saadaan 6,1 g (24,6 %) 20 yhdistettä, joka sulaa 192 - 193 °C:ssa.

[a]o4 = -1,75° (C = 1, DMF).

6.2. (-)-2-okso-l,2,3,4-tetrahydro-4-kinoliini-etikkahappo

Kuumennetaan suspensiota, jossa on 6 g (15,9 mmoo-' 25 lia) edellisessä kohdassa 6.1 saatua suolaa 100 ml:ssa tislattua vettä ja 5 ml:ssa väkevää (36 - 38-%) kloorive-tyhappoa, kunnes se on liuennut. Yhdisteen annetaan kiteytyä kylmässä (noin 5-10 eC:ssa). Kiinteä aine suodatetaan ja pestään jäävedellä. Sitä kuivataan 8 tuntia 30 100 °C:ssa vakuumissa, jolloin saadaan 2,95 g (90,5 %) yh distettä, joka sulaa 154 - 155 °C:ssa.

[a]p4 = -62,7° (c = 1, DMF).

6.3. (-)-4-(2-hydroksietyyli)-3,4-dihydro-lH-kino-lin-2-oni 35 Jäähdytetään -10 °C:seen sekoittaen ja kuivassa ar- gonatmosfäärissä liuos, jossa on 2,85 g (13,9 mmoolia) 20 91748 (-)-2-okso-l,2,3,4-tetrahydro-4-kinoliinietikkahappoa ja 1,42 g (14 mmoolia) trietyyliamiinia 70 ml:ssa kuivaa THF:a.

Lisätään tipoittain 20 minuutin aikana liuos, jossa 5 on 152 g (14 mmoolia) etyylikloroformaattia 10 mlzssa kuivaa THF:a. 1 tunnin sekoittamisen jälkeen -5 °C:ssa lisätään pienissä erissä 5 minuutin aikana 1,13 g (30 mmoolia) natriumborohydridiä.

Reaktioseoksen annetaan lämmetä huoneen lämpötilaan 10 ja sekoitetaan vielä 30 minuuttia, sitten lisätään tipoittain 15 ml vettä. Seos haihdutetaan ja jäännös uutetaan dikloorimetaanilla (3x50 ml). Uute kuivataan magnesium-sulfaatin päällä ja haihdutetaan, puhdistetaan silikagee-lipylväällä eluoimalla dikloorimetaani/metanoli-seoksella 15 (95/5). Puhdistetusta fraktiosta saadaan haihdutettaessa öljyä. Yhdiste kiteytyy hienonnettaessa eetterissä. Näin saadaan 1,9 g (71,4 %) kiinteää ainetta, joka sulaa 105 -106 °C:ssa.

[a]p4 = -44,7° (c = 1, DMF) .

20 6.4 (-)-4-(2-kloori)etyyli-3,4-dihydro-lH-kinolin- 2-oni

Kuumennetaan pystyjäähdyttäjän alla typpiatmosfäärissä 4 tuntia seosta, jossa on 1,8 g (9,4 mmoolia) yhdistettä 6.3, 3,4 ml tionyylikloridia (“47 mmoolia), 70 ml 25 kuivaa kloroformia ja 5 tippaa pyridiiniä.

Lisätään kylmässä tipoittain ja voimakkaasti sekoittaen ylimäärä vettä ja dekantoidaan. Kloroformiuute kuivataan magnesiumsulfaatin päällä, haihdutetaan sitten ja puhdistetaan silikageelipylväällä eluoimalla dikloori-30 metaani/asetoni-seoksella (90/10). Puhdistetusta fraktiosta saadaan kuumana tapahtuvan liuottamisen jälkeen öljyä, joka kiteytyy sykloheksaanista. Näin saadaan 1,55 g (79 %) kiinteää ainetta, joka sulaa 109 - 110 eC:ssa.

[a]“ = -76,8° (c = 1, DMF).

li 21 91748 6.5. ( - )-4-(-2-[4-(7-metoksi-l-naftyyli)piperat- sin-l-yyli]etyyli}-3,4-dihydro-lH-kinolin-2-oni

Kuumennetaan 4 tuntia kiehumislämpötilassa pysty-jäähdyttäjän alla seosta, jossa on 1,45 g (6,9 mmoolia) 5 kloorattua johdannaista 6.4, 1,7 g (7 mmoolia) l-(7-me- toksi-l-naftyyli)piperatsiinia, joitakin kaliumjodidiki-teitä ja 20 ml metyyli-isobutyyliketonia.

Lisätään 0,37 g (3 mmoolia) natriumkarbonaattia ja pidetään reaktioseosta kiehumislämpötilassa 8 tunnin ajan.

10 Lisätään vielä 0,37 g natriumkarbonaattia ja annetaan kiehua vielä 8 tuntia. Kun on lisätty 1 ml vettä ja 4 tunnin kiehumisen jälkeen metyyli-isobutyyliketoni haihdutetaan ja jäännös liuotetaan 50 ml:aan vettä. Emäs uutetaan dik-loorimetaanilla. Magnesiumsulfaatin päällä kuivattu ja 15 haihdutettu uute puhdistetaan silikageelipylväällä eluoi-malla dikloorimetaani/metanoli-seoksella (95/5). Puhdistettu fraktio kiteytyy eetteristä ja kiinteä aine kiteytetään uudelleen isopropyylialkoholista. Suodattamisen ja kuivauksen jälkeen saadaan 1,8 g (68 %) kiteitä, jotka 20 sulavat 149 - 150 °C:ssa.

[a]*4 = -49,8° (c = 1, DMF) 91748

TAULUKKO

22

5 XjuC

R2T [ 0 U) 10 L,· Rl R2 r3 χ/γ r4 „ ,o01 (su°-

Yhdiste 1 Δ J q Sp. ( C) la) 1 H H H sidos )=/ 230-2 15 2 H F H sidos —226-7 3 H H H sidos /v^S 167-8

20 O

O

4 H H H sidos 172-4 ' 25 5 CH3 H H sidos \—/ 241-2 30 6 CH3 H H sidos 254'6 /ΓΛ 227-9 7 CH3 H H sidos 'n=/ (emäs) \:i 204-5 /—λ. (malaatti) 35 —p y 8 H H H sidos Yi // 234-5 MM__ I; TAULUKKO (jatkoa) 23 91748 5 Yhdiste R1 r2 R3 X'Y R4 3p. (°C) (suola) ΖΤΛ 9 H F H sidos ζ=\ 250-2 10 10 H H H sidos —0 J 236-8 (emäs) 206-7

Cl (malaatti) -<ΓΛ 15 /Λ 11 H H H H,H // 177-8 (emäs)

Ch/Z 20Q~91 —f/ 12 H H CH3 sidos /\ 208-9 20 \\ /7 (fumaraatti) 13 H H CH2CH3 sidos /\ 197-8 ^ n (fumaraatti) 25 -ö 14 H H H sidos / \ 226-7

1M

30 __ 15 H H H sidos '""x 215-6

Cl 16 CH3 H H H,H / \ 181-2 ( emäs) 35 \ /) 226-7 / (fumaraatti) ______ seskvifumaraatti TAULUKKO (jatkoa) 24 91748 R1 r2 r3 X,Y R4 o

Yhdiste Sp. (°C)(suola) 5 : =rr 17 H H H sidos r=< 180-1 p CH3or 10 18 H H H H,H \ / 175-6 (emäs) / \ 237-8 '—' (fumaraatti) 19 CH3 H H H,H 181-2 (emäs) 15 / \ 203-5 (fumaraatti)

-Q

20 H H H H, H )—( 167-8 (emäs) V. /) 209-10 20 — (fumaraatti)

_/A

21 CH3 H H H,H V=/ 168-9 (emäs) ( ) 200-2 '—' (fumaraatti) 25 22 H H CH3 H,H \r=/ 135-6 (emäs) O i92-3 '—' (fumaraatti) 30 23 H H H H,H 101-2 (emäs) \=/ 228-9 J (fumaraatti) ► * TAULUKKO (j atkoa) 25 91748

Yhdiste r1 r2 R3 X,Y R4 3p. (°C)(suola) 5 ____[_

-O

24 H H CH3 H,H J /) 226-227 / (oksalaatti) CH,0 10 3 25 H H H sidos > 225-6

F

15 — 26 H H H H, H f \ 197-8 (emäs) V // 225-6 (fumaraatti) 20 27 ( + ) H H Η H,H Λχ 149-50 CH33t\ 25 28 (-) H H H H,H 149-50 CHjO7

“O

30 V Q ... .

29 H F H H, H Γ— 165-6 CH3O' 26 91748

Keksinnön mukaisille yhdisteille on tehty sarja farmakologisia kokeita, jotka osoittavat niiden vaikutuksen terapeuttisesti vaikuttavina aineina.

Täten yhdisteillä on tutkittu niiden affiniteettia 5 5-HT^-tyyppisiin serotoninergisiin reseptoreihin. Yhdis teet syrjäyttävät rotan hippokampuksessa spesifisen merkatun ligandin, [3H]-8-hydroksi-2-dipropyyliaminotetralii-nin (jota kutsutaan jatkossa " [3H]-8-OH-DPAT":ksi), jonka ovat kuvanneet Gozlan et ai., nature, (1983), 305, 140 -10 142.

Käytettävät eläimet ovat koiraspuolisia Sprague-Dawley-rottia, joiden paino on 160 - 200 g. Pään katkaisun jälkeen aivot poistetaan ja hippokampus irroitetaan. Kudos hienonnetaan 10 tilavuuteen 50 mM tris-puskuria, jonka 15 pH on säädetty 7,4:ään kloorivetyhapolla (eli 100 mg tuoretta kudosta ml:aan) Ultra-Turrax Polytron-laitteella 30 sekuntia puolella maksimaalisesta nopeudesta. Homogenoidut kudokset pestään kolme kertaa 4 °C:ssa sentrifugoimal-la kullakin kerralla 48 000 g:ssä ja suspendoimalla sakka 20 10 minuutin ajan tuoreeseen jäähdytettyyn puskuriin. Lo puksi viimeinen sakka suspendoidaan puskuriin niin, että konsentraatioksi tulee 100 mg alkuperäistä kudosta ml:ssa 50 mM puskuria. Annetaan seoksen sitten inkuboitua 37 eC:ssa 10 min.

25 Sitotutuminen [3H]-8-OH-DPAT:hen määritetään inku- boimalla 10 μΐ membraanisuspensiota 1 ml:n lopputilavuu-dessa puskuria, joka sisältää 10 μΜ pargylliiniä. Inku-baation jälkeen membraanit otetaan talteen suodattamalla Whatman GF/B suodattimilla, jotka pestään kolme kertaa 5 30 ml:n erillä jääkylmää puskuria. Suodattimet uutetaan tui-,, kenesteeseen ja ne mitataan nestetuikelaskurilla. [3H]-8- 0H-DPAT:n spesifinen sitoutuminen määritetään suodatti-miin sitoutuneena radioaktiivisuutena, jota voidaan inhiboida inkuboimalla yhtaikaa 1 μΜ 5-hydroksitryptamiinissa.

35 [3H]-8-OH-DPAT:n 1 nM:ssa konsentraatiossa spesifinen si- « li 27 91748 toutuminen on 70 - 80 % suodattimille jääneestä kokonais-radioaktiivisuudesta.

Kullekin tutkittavan yhdisteen konsentraatiolle määritetään [3H]-8-0H-DPAT:n sitoutumisen prosentuaalinen 5 inhibiitio, sitten konsentraatio IC50, joka inhiboi 50 % sitoutumisesta.

Keksinnön mukaisille yhdisteille IC50 on välillä 0,001 - 0,03 μΜ.

Keksinnön mukaisten yhdisteiden keskushermostovai-10 kutus on määritetty reserpiinin aiheuttamina vaikutuksina PGO-pisteisiin (ponto-geniculo-occipitalis) (PGO-R-koe) kissalla H. Depoorteeren kuvaamalla menetelmällä, Sleep, 1976, 3rd Europ. Congr. Sleep. Res., Montpellier 1976, 358 - 361 (Karger, Basel 1977).

15 Tutkittavia yhdisteitä annetaan kasvavina annoksina (0,01 - 3 mg/kg suonensisäisesti) 30 minuutin välein 4 tuntia sen jälkeen, kun on annettu vatsaonteloon 0,75 mg/kg reserpiiniä curarea saaneille kissoille, jotka on kytketty hengityskoneeseen. Aivokuoreen ja syvemmälle 20 (lateraalinen taive) kiinnitettyjen elektrodien avulla rekisteröidään vaikutukset EEGrhen ja faaseihin (PG0-R-pisteet). Kullekin tutkittavan yhdisteen annokselle määritetään PGO-pisteiden lukumäärän väheneminen prosentteina, sitten AD50, vaikuttava annos, joka vähentää 50 % pis-25 teiden määrää. Keksinnön mukaisille yhdisteille AD50 on 0,001 - 0,1 mg/kg suonensisäisesti annosteltuna.

Kokeiden tulokset osoittavat, että tietyillä kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä on suuri affiniteetti ja selek-tiivisyys 5-HT1Ä-tyyppisiin serotoninergisiin reseptorei-30 hin. In vivo niillä on joko agonistinen tai osittainen agonistinen tai antagonistinen vaikutus näihin reseptoreihin.

Tietyillä keksinnön mukaisilla yhdisteillä on lisäksi antiserotoninerginen vaikutus 5HT2-tyyppisiin resep-35 toreihin. Tämä vaikutus on on näytetty "in vitro" seroto- 28 91748 ninergisiin reseptoreihin spesifisesti sitoutuneiden li-gandien syrjäyttämisenä (SBS binding-testi) ja "in vivo" serotoniinivaikutusten antagonismina perifeerisesti (OES-testi) tai keskushermostotasolla (AHT-testi).

5 SBS-testi: Keksinnön mukaisilla yhdisteillä on suoritettu spiroperidolin sitotumisen (binding) syrjäytymiskoe rotan aivojen kuorikerroksen serotoninergisistä (5-HT2) reseptoreista.

Tätä koetta varten rotan aivot poistetaan, niistä 10 erotetaan kuorikerros ja homogenisoidaan se 0 eC:ssa 10 tilavuuteen seosta, joka sisältää litraa kohti 50 milli-moolia Tris/HCl puskuria, jonka pH on 7,4, 120 millimoolia natriumkloridia ja 5 millimoolia kaliumkloridia. Homogeeninen seos sentrifugoidaan 40 000 g:ssä 10 minuutin ajan, 15 sitten sakka otetaan talteen kahdessa erässä, se pestään suspendoimalla samaan puskuriseokseen, homogenisoimalla uudelleen ja sentrifugoimalla. Määritystä varten lopullinen sakka laimennetaan samalla puskuriseoksella 100 mg kosteata kudosta 1 ml:aa kohti puskuria.

20 Kudos pannaan ennen määritystä inkuboitumaan 10 minuutiksi 37 eC:een 10 mikromolaarisen pargylliinin kanssa, sitten inkuboidaan 20 minuuttia 37 °C:ssa 3H-spirope-ridolin läsnäollessa (spesifinen aktiivisuus: 25,6 Ci/- mmooli) konsentraatiossa 0,3 nanomoolia/1 ja tutkittavaa ·, 25 yhdistettä konsentraatioissa 0,0001 - 100 mikromoolia/1.

Otetaan 1 ml:n näyte, joka suodatetaan vakuumissa, suodattimet pestään kaksi kertaa 5 ml:11a kylmää puskuria ja kuivataan. Radioaktiivisuus mitataan tolueenissa 5 g/1 2,5-difenyylioksatsolin (PPO) ja 0,1 g/1 bis-1,4-(5-fenyy-30 li-2-oksatsolyyli)bentseenin (Ρ0Ρ0Ρ) läsnä ollessa. Yh-.! disteiden vaikutuksen laskemiseksi tehdään 3H-spiroperido- lin spesifisen sitoutumisen prosentuaalinen inhibiitio-käyrä syrjäyttävän lääkkeen konsentraation funktiona. Määritetään graafisesti CI50, konsentraatio, joka inhiboi 35 50 % spesifistä sitoutumista.

I: 29 91748

Spesifinen sitoutuminen määritellään 100 mikromo-laarisen 5-HT:n sitoutumisen syrjäytymisenä.

Keksinnön mukaisten yhdisteiden CI50 ovat yleensä 1-50 nanomoolia/1.

5 OES-testi: Keksinnön mukaisten yhdisteiden antiserotonin- erginen vaikutus on myös määritetty vaikutuksena seroto-niinin aiheuttamaan turvotukseen rotalla Maling et ai.:in kuvaamalla menetelmällä, J. Pharmacol. Exp. Therap., 191, (2), 300 - 310 (1974).

10 Eläimet ovat CD-lajin koirasrottia (Ch. River,

Ranska), jotka painavat 120 - 150 g ja joita on pidetty paastolla 18 tuntia, ja ne on jaettu mielivaltaisiin ryhmiin.

Liuoksessa olevia tai Tween 80"teen suspendoituja 15 1 % yhdisteitä annetaan suun kautta 0,5 ml 100 g ruumiin painoa kohti tuntia ennen toisen takatassun jalkapohjaan annettua 1 pg:n serotoniini-injektiota (liuotettuna steriiliin fysiologiseen liuokseen 0,1 ml:n tilavuudessa. Turvotustilavuus mitataan 1 tunnin kuluttua serotoniini-20 injektiosta Ugo Basilen elohopeapletysmometrin avulla. AD40 (annos, joka vähentää 40 % turvotustilavuutta kont-rollieläimiin verrattuna) määritetään graafisesti.

Keksinnön mukaisten yhdisteiden AD40 suun kautta annosteltuna on 0,1 - 2 mg/kg.

. 25 ΆΗΤ-testi: Yhdisteiden antiserotoniinierginen vaikutus on määritetty antagonismivaikutuksena "head-twitches" oireisiin (pään nykiminen), jotka on aikaansaatu L-5-hydroksi-tryptofäänillä (L-5-HTP) hiirillä Corne et ai.:in kuvaamalla menetelmällä, Br. J. Pharmacol., 20, 106 - 120 30 (196 2).

Hiiret (CDl koiraita, Charles River, Ranska; 18 -22 g painoisia) saavat tutkittavia yhdisteitä kasvavina annoksina tai liuotinta vatsaontelon sisäisesti tai suun kautta yhtaikaa (i.p.) tai tuntia ennen (suun kautta) ihon 35 alle annettua L-5-HTP injektiota 250 mg/kg annoksena.

« • » 30 91748

Neljäkymmentäviisi minuuttia tämän 5-HTP-injektion jälkeen lasketaan nykäykset kullakin hiirellä minuutin aikana.

Kussakin käsittelyssä lasketaan nykäysten keskiarvo, sekä variaatioprosentti kontrollierään verrattuna.

5 Annos-vaste-käyrältä määritetään AD50 (50 % vaikut tava annos tai annos, joka vähentää 50 % nykäysten keskimääräisestä määrästä kontrollieläimiiin verrattuna) Millerin ja Taintlerin graafisella menetelmällä [Proc. Soc. Exp. Biol. Med., (1944), 57, 261].

10 Keksinnön mukaisten yhdisteiden AD50 ovat 0,05 - 2 mg/kg vatsaontelon sisäisesti ja 1 - 4 mg/kg suun kautta.

Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää hoidettaessa migreeniä, levottomuutta, masentuneisuutta, lii- 15 kalihavuutta, skitsofreniaa, suonenvetoa tai vatsakouristuksia, korkeata verenpainetta ja trombosyyttien aggre-goitumista ja pahoinvointia. Niitä voidaan myös käyttää hoidettaessa aivojen vanhenemiseen liittyviä psyykkisiä käyttäytymishäiriöitä.

20 Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan myös antaa suun kautta tai parenteraalisesti sopiviin täyteaineisiin sekoitettuna.

Päivittäinen annos voi olla 1 - 1000 mg.

• ·

Claims

31 91748

1. Menetelmä kaavan (I) mukaisten, terapeuttisesti käyttökelpoisten kinolinonijohdannaisten sekä niiden far-5 maseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuolojen ja, kun X ja Y ovat kumpikin vetyatomeita, niiden diastereoisomee-rien ja enantiomeerien valmistamiseksi, x- N-R4 io \ \ y N-/ 15 r3 jossa Rx ja R2 ovat kumpikin toisistaan riippumatta vetyatomeita tai halogeeniatomeita tai (C^Jalkyyliradikaale-ja,

20 R3 on vetyatomi tai (01-4 )alkyyliradikaali, R4 on naftyyli-, tetrahydronaftyyli-, bentsyyli-, fenyy- li-, pyridyyli-, isokinolyyli- tai bentsoyyliradikaali, jotka voivat sisältää substituentin, kuten metoksin, kloorin, fluorin tai (C^^sykloalkyylin, 25. ja Y ovat kumpikin vetyatomeita tai muodostavat yhdessä sidoksen, tunnettu siitä, että A) kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa X ja Y muodostavat yhdessä sidoksen, kaavan (II) mukainen fenyyliamiini 30 *χχ 35 saatetaan reagoimaan 4-(asetyylioksi)-2H,3H-pyran-2,6-di-onin kanssa ja saatu kaavan (III) mukainen yhdiste 32 91748 COOH Xo-Ac <jii> .ΛΛΑ. H syklisoidaan kaavan (IV) mukaiseksi hapoksi 10 COOH ΧΎχ <iv) 15 H joka muutetaan kaavan (V) mukaiseksi esteriksi 20 COO-CH3 (v) 25 » sitten kaavan (VI) mukaiseksi alkoholiksi i^OH Κ'Υΐ'ΝΪΓ%ϊΊ (vi) . 30 RAjkNA0 H ja lopuksi kaavan (VII) mukaiseksi kloridiksi I: 33 91748 YyC 5 H joka kondensoidaan l-R4-piperatsiinilla, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, joka alkyloidaan haluttaessa 10 kaavan R3X mukaisella yhdisteellä (X = labiili ryhmä), tai B) kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa X ja Y esittävät kumpikin vetyatomeita, la) kaavan (V) mukainen esteri hydrataan kaavan (Vili) mukaiseksi esteriksi 15 R,^yCC00CH’ ll^N^O <VIII> H 20 joka pelkistetään kaavan (IX) mukaiseksi alkoholiksi H /^OH 25 <I!t)

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 15 tunnettu siitä, että R3 ja R2 ovat kumpikin toisistaan riippumatta vetyatomeita tai fluoriatomeita tai me-tyyliradikaaleja, R3 on vetyatomi tai metyyli- tai etyyliradikaali, R4 on naftyyli- tai tetrahydronaftyyliradikaali, joka on 20 mahdollisesti substituoitu, ja X ja Y esittävät sidosta tai kumpikin vetyatomeita.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan (±)-4-{2-[4-(7-metoksi-l-naftyyli)piperatsin-l-yyli]etyyli}-3,4-dihydro- 25 lH-kinolin-2-oni, sen suola tai enantiomeeri.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan (±)-6-metyyli- 4-{2- [4-( 7-metoksi-l-naf tyyli )piperatsin-l-yyli]etyyli}- 3,4-dihydro-lH-kinolin-2-oni, sen suola tai enantiomeeri.

4 I H 34 91748 joka 2) muutetaan kaavan (X) mukaiseksi kloridiksi * I H joka 3) kondensoidaan l-R4-piperatsiinilla, jolloin saadaan 10 kaavan (I) mukainen yhdiste (X,Y=H,H),joka alkyloidaan haluttaessa kaavan R3X mukaisella yhdisteellä (X = labiili ryhmä), tai C) kaavan (I) mukaisten yhdisteiden enantiomeerien valmistamiseksi, joissa X ja Y ovat vetyatomeita, kaavan 15 (VIII) mukainen esteri saippuoidaan kaavan (XI) mukaiseksi hapoksi «^COOH (XI) 20 H joka saatetaan toisiintumaan kahdeksi enantiomeerikseen optisesti aktiivisen amiinin avulla, kuten L-tyrosiini-25 hydratsidilla, tai toisella kahdesta l-(1-naftyyli)etyyli-amiinin enantiomeereistä, nämä kaksi happoa (+)(XI) ja (-)(XI) pelkistetään sitten kaavojen ( + )(IX) ja (-)(IX) mukaisiksi alkoholeiksi 30 H O» i H I; • · 35 91748 jotka sitten muutetaan kaavojen (+)(X) ja (-)(X) mukaisiksi klooratuiksi johdannaisiksi H 10 joka kondensoidaan l-R4-piperatsiinilla, jolloin saadaan kaavojen (+)(I) ja (—)(!) (X,Y=H,H) mukaiset yhdisteet, jotka haluttaessa alkyloidaan kaavan R3X mukaisella yhdisteellä (X = labiili ryhmä).

4 I H tai lb) kaavan (VI) mukainen alkoholi hydrataan kaavan 30 (IX) mukaiseksi alkoholiksi H ^ OH R'Xjtx

35 N

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 4-{2-[4-(1-naf-tyyli)piperatsin-l-yyli]etyyli}-lH-kinolin-2-oni tai sen suola. 36 91748