PT98851A - Processo para a preparacao de derivados de diazepina uteis como agentes terapeuticos - Google Patents

Description

I

I O presente invento diz respeito a derivados de diazepi-na que são potentes antagonistas activos, quando administrados por via oral, do factor de activação de plaquetas e, como tal, clinicamente úteis no tratamento de estados alérgicos e inflamatórios tais como a asma e a artrite, respectivamente. 0 factor de activação de plaquetas (FAP, l-0-alquil-2--acetil-sn-gliceril-3-fosforilcolina) é um éter fosfolípido cuja estrutura foi elucidada pela primeira vez em 1979. Ê produzido e libertado por e interage com diversas células pro-inflamatõrias, com plaquetas e com os rins. Além de uma potente actividade agregadora de plaquetas, o FAP exibe um amplo espectro de activi-dades biológicas elicitadas quer directamente quer por intermédio da libertação de outros poderosos mediadores tais como o trombo-xano A2 ou os leucotrienes. In vitro o FAP estimula o movimento e a agregação de neutrõfilos e a libertação por parte destes de enzimas que danificam os tecidos e de radicais oxigénio. Estas actividades contribuem para actividades in vivo do FAP consistentes com o seu desempenho de um papel significativo nas reacções inflamatórias e alérgicas. Mostrou-se já que o FAP administrado intradermicamente induz uma reacção inflamatória, a que está associada dor, uma acumulação de células inflamatórias e uma acrescida permeabilidade vascular, comparáveis com a reacção alérgica cutânea subsequente à exposição a um alergénio. De modo semelhante, tanto a broncoconstrição aguda como as reacções inflamatórias crónicas elicitadas pelos alergénios na asma podem ser mimados mediante a administração intratraqueal de FAP. Em conformidade, os agentes que sejam antagonistas das acções do FAP e, consequentemente, também evitem a libertação mediada pelo FAP são clinicamente úteis no tratamento de diversos estados alérgicos e inflamatórios tais como a asma e a artrite, respectivamente.

Além das actividades atrás descritas, foi já estudado o envolvimento do FAP em diversos outros estados clínicos. Por exemplo no caso do choque circulatório, caracterizado por uma hipotensão sistémica, uma hipertensão pulmonar e uma acrescida permeabilidade vascular pulmonar, os sintomas podem ser mimados mediante a infusão de FAP. Este facto, acoplado com resultados que demonstram que os níveis de FAP na circulação podem ser aumentados mediante a infusão de endotoxinas, indica que o FAP é o principal mediador em determinadas formas de choque. A infusão

intravenosa do FAP em ratos, em doses compreendidas entre 20 e -1 -1

I 200 pmol.kg .min , tem como resultado a formação de erosões hemorrágicas extensas na mucosa gástrica. Consequentemente, o FAP é o mais potente ulcerogénio gástrico jamais descrito, podendo a sua libertação endógena estar subjacente a ou contribuir para determinadas formas de ulceração gástrica. A psoríase é uma doença inflamatória e proliferativa caracterizada por lesões cutâneas. 0 FAP é pro-inflamatório e foi já isolado de escamas lesionadas de pacientes que sofrem de psoríase, o que indica que o FAP desempenha um papel importante na evolução da psoríase. Finalmente, acumulam-se provas de um potencial papel patofisio-lógico desempenhado pelo FAP em doenças cardiovasculares. Estudos recentes realizados com pacientes que sofrem de angina de peito demonstram que o FAP é libertado no decurso das contracções cardíacas e que, nos porcos, a injecção intracoronária do FAP induz um prolongado decréscimo no fluxo coronário, enquanto que nos corações de porquinhos da índia induz "shunting" regional e isquemia. Também foi demonstrado que o FAP inicia a formação de trombos numa preparação arterial mesenténica tanto quando é administrado exogenamente como quando é libertado endogenamente. Mais recentemente, demonstrou-se que o FAP desempenha um papel importante na isquemia cerebral induzida em modelos animais de ataque cardíaco.

Consequentemente, os compostos de acordo com o presente invento, em virtude da sua capacidade para antagonizarem as acções do FAP, podem ser valiosos no tratamento de qualquer um dos estados clínicos atrás mencionados.

No pedido de patente europeia ns 0258033 os presentes inventores descrevem uma série de derivados de 1,4-di-hidropiri-dina substituída na posição 2 como antagonistas do FAP. No pedido de patente europeia ns 0310386 os presentes inventores descrevem outra série de di-hidropiridinas que são antagonistas do FAP e em que o substituinte na posição 2 pode ser um grupo 2-metil-imida-zo[4,5-c]pirid-l-fenilo. 0 presente invento diz respeito a compostos da fórmula I,

1 em que R representa H ou alquilo com 1 a 4 átomos de carbono facultativamente substituído com um substituinte selecciona-do entre fenilo, halofenilo, piridilo, (alcoxi com la 4 átomos de carbono) carbonilo e di(alquil com 1 a 4 átomos de carbono) amino, ou alquilo com 2 a 4 átomos de carbono substituído com hidroxilo ou com um ou dois grupos alcoxi ‘ * ' 7 8 com 1 a 4 átomos de carbono ou representa (CH2)nCONR R em que n representa um número inteiro compreendido entre 1 e 4 e R7 e R8 representam, independentemente um do outro, H ou alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, R é seleccionado entre H, OH e alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, R é seleccionado entre halo ou alquilo com la 4 átomos de carbono, 4 R representa metilo, p representa um número inteiro entre 0 e 3 e m representa um número inteiro entre 0 e 3, bem como aos seus sais farmaceuticamente aceitáveis. 1 . . 2

Sao exemplos de R H, CH3 e etoxicarbonilmetilo. R pode ser seleccionado entre H, OH e CH^. São compostos particularmente preferidos a 7-metil-4-[4-(2-metilimidazo[4,5-c]pirid- -1-il)fenil]-6,7-di-hidro-imidazo[l,4,5-ef][1,5]benzodiazepin-6-1 2 -ona, em que R representa CH3 e R representa H e m e p representam 0, e 4-[4-(2-metilimidazo[4,5-c]pirid-i-il)fenil]-7-eto-xicarbonilmetil-6,7-di-hidro-imidazo [4,5-c]pirid-l-il)fenil]- -6,7-di-hidro-imidazo[l,4,5-ef][1,5]benzodiazepin-6-ona, em que 1 2 R representa etoxicarbonil metilo e R representa He me p representam 0. 2

Nos casos em que R representa OH, a fórmula I pode ser escrita alternativamente sob a forma Ia, sendo estas formas do composto tautoméricas uma em relação à outra. 2

Estes compostos e os seus sais podem existir sob a forma de um tautómero ou sob a forma de uma mistura de tautõmeros que podem, em geral, ser separados mediante processos físicos tais como a cristalização fraccionada ou a cromatografia. 0 presente invento inclui todos os tautómeros, quer estejam separados, quer não. 12 3

Nos casos em que pelo menos um dos grupos R , R ou R contém um grupo alquilo ou alcoxi de cadeia ramificada com 4 átomos de carbono, o composto pode conter um centro quirálico e existir sob a forma de um par de isómeros que podem ser separados mediante processos convencionais. 0 presente invento inclui todos estes enantiómeros, quer estejam separados, quer não.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da fórmula I de acordo com o presente invento são os sais obtidos a partir de ácidos que formam sais de adição de ácido não tóxicos, por exemplo hidrocloretos, hidrobrometos, sulfatos ou bi-sulfa-tos, fosfatos ou fosfatos ácidos, acetatos, citratos, fumaratos, gluconatos, lactatos, maleatos, succinatos, tartratos, metanos-sulfonatos e dimetano-sulfonatos, benzeno-sulfonatos e p-tolue-no-sulfonatos. 2

Nos casos em que H e R representam H ou alquilo com 1 a 4 átomos de C, os compostos da fórmula I podem ser preparados de acordo com o seguinte método:

Neste método faz-se reagir a 6-amino-4-[4-(2-metilimi-dazo[4,5-c]pirid-l-il)fenil][l,5]benzodiazepin-4-ona (ver Preparação) , ou um seu derivado reactivo contendo os substituintes apropriados R1 2 e R3 (composto II) com um orto-éster do ácido carboxílico apropriado na presença desse ácido e o composto I pode ser isolado mediante processos convencionais. 1 2 0 composto I em que R representa OH pode ser preparado a partir do composto II mediante a reacção deste último com 3 cloroformiato de triclorometilo em 1,2-diclorometano como solvente. 1

Os compostos da formula I em que R · : representa alquilo facultativamente substituído podem ser preparados a partir dos correspondentes compostos em que R1 representa H mediante a reacção deste último com o composto R^X, em que X representa cloro, bromo ou iodo. A reacção é geralmente efectuada na presença de uma base tal como hidreto de sódio. A actividade dos compostos de acordo com o presente invento é demonstrada pela sua capacidade para inibir a activida-de de agregação de plaquetas do FAP in vitro. O teste é realizado do seguinte modo:

Recolhem-se amostras de sangue quer de coelho quer de ser humano para dentro de 0,1 vol. de tampão ácido di-sódio etilenodiamina tetra-acético e as amostras são centrifugadas durante 15 minutos de modo a obter-se plasma rico em plaquetas. A centrifugação do plasma é prosseguida até se obter um grão de plaquetas que é lavado com solução tampão (KH2P04 4 mM, Na2HPC>4 6 mM, NaCl lOOmM, glucose a 0,1% e albumina de soro bovino a 0,1%, pH 7,25) e finalmente suspendido de novo em solução tampão de

Q modo a obter-se uma concentração de 2x10 plaquetas/ml. Uma das amostras (0,5 ml) é prê-incubada durante dois minutos a 37°C num agregómetro Paton sob agitação, quer apenas com o veículo quer com o veículo e com o composto particular submetido a teste.

Adiciona-se FAP com uma concentração suficiente para se obter uma reacção de agregação máxima na ausência do composto submetido a —8 -a teste (10 a 10 molar) e a agregação das plaquetas é medida através do acompanhamento do aumento na transmissão de luz por parte da solução. A experiência é repetida na presença do composto submetido a teste com diversas concentrações e a concentração do composto requerida para que a reacção seja reduzida para 50% do seu valor máximo é registada como o valor da Cl^g. A actividade dos compostos da fórmula I também pode ser demonstrada in vivo mediante a sua capacidade para proteger os ratos do efeito letal de uma injecção de FAP. Injecta-se uma mistura (0,2 ml) de FAP (50 Mg/kg) e de DL-propanolol (5 mg/kg) em cloreto de sódio a 0,9% p/v nos ratos por intermédio da veia da cauda. Os compostos submetidos a teste são injectados na veia da cauda imediatamente antes da injecção de FAP/propanolol ou são administrados compulsivamente por via oral duas horas antes. Os compostos são testados em doses diversas em grupos de cinco ratos e a dose que reduz a mortalidade para 50% é registada como o valor da DP,-,,. ou

Quando se destinam a fins terapêuticos, os compostos da fórmula I são geralmente administrados em mistura com um suporte farmacêutico seleccionado em função da via de administração prevista e da prática farmacêutica padrão. Por exemplo, podem ser administrados oralmente sob a forma de comprimidos contendo excipientes tais como amido ou lactose, ou em cápsulas ou óvulos, quer isolados quer em mistura com excipientes, ou sob a forma de elixires ou suspensões contendo aromatizantes ou corantes. Podem ser injectados por via parentérica, por exemplo intravenosamente, intramuscularmente ou subcutaneamente. No caso da administração se realizar por via paentérica, utilizam-se de preferência sob a forma de uma solução aquosa estéril que pode conter outras substâncias, por exemplo sais ou glucose em quantidade suficiente para tornar a solução isotónica em relação ao sangue.

No caso de os compostos serem administrados a seres humanos para o tratamento curativo ou profilático de estados brônquicos alérgicos e de artrite, as dosagens dos compostos administradas por via oral a um paciente adulto padrão (70 kg) estarão geralmente compreendidas entre 2 e 100 mg diários. Assim, no caso de um paciente adulto típico, os comprimidos ou cápsulas individuais poderão conter quantidades de composto activo compreendidas entre 1 e 500 mg, num veículo ou suporte farmaceuti-camente aceitável. As dosagens utilizadas no caso da administração ser intravenosa estarão tipicamente compreendidas entre 1 e 10 mg por cada dose, consoante o requerido. No tratamento de estados alérgicos e brônquicos hiper-reactivos, a inalação mediante um nebulizador ou um aerosol pode constituir a via preferida de administração do medicamento. Os níveis de dosagem por esta via estarão compreendidos entre 0,1 e 50 mg por cada dose, consoante o requerido. Na prática, o clínico determinará a dose mais adequada a cada paciente, dose essa que será função da idade, peso e reacção de cada paciente. As dosagens atrás indicadas são exemplares para o caso padrão mas é evidente que podem verificar-se situações individuais que exigem a administração de doses superiores ou inferiores às máximas e mínimas atrás indicada, respectivamente, sendo estas doses igualmente abrangidas pelo âmbito do presente invento.

Por conseguinte, num seu outro aspecto, o presente invento diz respeito a uma composição farmacêutica constituída por um composto da fórmula I, ou por um seu sal farmaceuticamente aceitável, e por um diluente ou suporte farmaceuticamente aceitável. O presente invento diz ainda respeito a um composto da fórmula I, ou a um seu sal farmaceuticamente aceitável, útil em medicina, em particular no tratamento de estados alérgicos e inflamatórios num ser humano. A preparação dos compostos de acordo com o presente invento é melhor ilustrada pelos seguintes Exemplos. -12- -12-

EXEMPLO 1 4-Γ4-(2-MetxXimidazor4,S-clpirid-l-il)fenill -6.7-di-hidro-imidazo-Γ1.5 > 4-ef1-Γ1.51-benzodiazepin-6-ona

Suspendeu-se 9-amino-4-[4-(2-metilimidazo[4,5-c]pirid--1-il)fenil][1,5]benzodiazepin-4-ona (0,765 g, 2 mmol) em trie-tilortoformiato (10 ml, 60 mmol) e adicionou-se ácido fórmico (3 ml, 8 mmol), obtendo-se uma solução límpida que foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas, aquecida até à temperatura de refluxo e mantida a essa temperatura durante uma hora.

Depois de arrefecida até atingir a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi partilhada entre acetato de etilo e hidrogeno carbonato de sódio aquoso de modo a que o pH da fase aquosa tivesse o valor 8. 0 extracto orgânico foi lavado com água, secado sobre sulfato de magnésio e o agente de secagem foi retirado por filtração.

Adicionou-se sílica de pre-adsorção (Kieselgel 60, malha 70-230, 1 g) ao filtrado que foi concentrado até à secura sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado mediante cromato-grafia "flash” (Kieselgel 60, malha 230-400) usando dietilamina a 5% em acetato de etilo.

As fracções contendo o produto foram combinadas, concentradas sob pressão reduzida e o resíduo foi triturado com metanol, obtendo-se o composto em epígrafe (25 mg, 3%). P.f. > 3 00 °C.

Análise percentual;

Encontrado C 68,37; H 3,99; N 20,33 C23H16N6°*V4H20 requer C 68,o5; H 4,34; N 20,70 EXEMPLO 2 2-Meti1-4-Γ 4-(2-metilimidazo(4,51pirid-l-il)fenill-6,7-di-hidro— imidazon, 5,4-ef 1Γ1.51benzodiazepin-6-ona 0

0 composto em acordo com o método do acetato e por por epígrafe (90 mg, 26%) foi preparado de Exemplo 1, substituindo por trietilorto-ácido acético, respectivamente, o nesse trietilortoformiato e o ácido fórmicoacêtico utilizados exemplo. P.f. > 300°C.

Análise percentual: 24 18 6

Encontrado C24Hi8N6°*1/2H20 re<3uer C 69,37; H 4,43; N 19,87 C 69,38; H 4,61; N 20,23 EXEMPLO 3 2-Hidroxi-4-r4-(2-metilimidazor4.5-clpirid-:i-il) fenin-6y7-di-hi-dro-imidazori.5,4-efΊri.51benzodiazepin-6-ona 0

Adicionou-se triclorometilcloroformiato (0,1 g, 0,5 mmol) a uma suspensão agitada de 9-amino-4-[4-(2-metilimidazo-[4,5-c]pirid-l-il)fenil][1,5]benzodiazepin-4-ona (0,1 g, 0,26 mmol) em 1,2-diclorometano anidro (5 ml) sob uma atmosfera de azoto e a mistura de reacção foi aquecida até à temperatura de refluxo e mantida e agitada a essa temperatura durante 16 horas.

Adicionou-se metanol (5 ml), obtendo-se uma solução límpida, em seguida adicionou-se sílica de pré-adsorção

(Kieselgel 60, malha 70-230, 1 g) e a solução foi evaporada até à secura sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado mediante cromatografia "flash" (Kieselgel 60, malha 230-400), usando metanol a 25% em acetato de etilo como eluente.

As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas até à secura sob pressão reduzida e o resíduo foi triturado com metenol, obtendo-se o composto em epígrafe higros-cõpico (55 mg, 50%). Pf. > 300°C.

Análise- percentual:

Encontrado C23H16N6°2'H2° re<2uer EXEMPLO 4 C 64,52; H 3,99; N 19,3 C 64,78; H 4,25; N 19,7 4-Γ4-(2-Metilimidazor4,5-clpirid-l-il)fenil-7-etoxicarbonilmetil--6,7-di-hidro-imidazo Γ1.5,4-ef1(1,51benzodiazepin-6-ona

Adicionou-se hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral, 60 mg, 1,5 mmol) a uma suspensão agitada do produto em -16- epígrafe do Exemplo I (0,51 g, 1,3 mmol) dimetilformamida anidra (10 ml) sob uma atmosfera de azoto. Depois de aquecida até à temperatura de refluxo emantida a essa temperatura durante 1 hora, sob agitação, a mistura de reacção foi arrefecida até atingir a temperatura ambiente após o que lhe foi adicionado bromoacetato de etilo (0,166 ml, 1,5 mmol) e a solução resultante foi agitada durante mais 36 horas à temperatura ambiente. A dimetilformamida foi retirada mediante evaporação sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com agua, foi-lhe adicionado ácido clorídrico (2 M) de modo a que o valor do pH seja 1, seguido por hidrogeno carbonato de sódio de modo a que o valor do pH se eleve para 8 e o produto é extraído com acetato de etilo. O extracto orgânico foi lavado três vezes com água, secado sobre sulfato de magnésio e o agente de secagem foi retirado por filtração. Adicionou-se sílica de pré-adsorção (Kieselgel 60, malha 70-230, 2 g) ao filtrado que foi evaporado até â secura sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado mediante cromatografia "flash" (Kieselgel 60, malha 230-400) usando metanol a 2% em clorofórmio como eluente. As fracçpões contendo o produto foram combinadas, evaporadas até à secura sob pressão reduzida e o resíduo foi triturado com éter, obtendo-se o composto em epígrafe de cor amarela (30 mg, 5%). P.f. 237-239°C.

Análise percentual; C 66,08; H 4,65; N 16,91 C 65,91; H 4,81; N 17,08

Encontrado C27H22N603*3/4H2° Γβ(3υβΓ EXEMPLO 5 7-Metil-4-r4-(2-metilimidazor4, 5-clpirid-l-il)fenill-6,7-di-hidr-o-imidazofl,5,4,ef1ri,51benzodiazepin-6-ona

Seguindo o procedimento do Exemplo 4, mas usando iodeto de metilo em vez de bromo-acetato de etilo, obteve-se o composto em epígrafe (30 mg, 13%). P.f. 320-323°C.

Análise percentual: »

EncontradoC24H18N60-1/2H2° reguer C 69,32; H 4,50; N 20,25 C 69,38; H 4,61; N 20,23

PREPARAÇÃO 6-Amino-2,3-di-hidro-4-r4-(2-metilimidazor4.5-clPiricl-l-il) fenil- -1H-Γ1.51benzodiazepin-2-ona

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(a) 2,3-Di-hidro-4-Γ4-(2-metilimidazoΓ4.5-clPÍrid-l-il)fenil- -6-nitro-lH-Γl.51benzodiazepin-2-ona

Aqueceu-se uma mistura de 3-nitro-l,2-fenilenodiamina (5 g, 33 mmol) e 4/-(2-metilimidazo[4,5-c]pirid-l-il)benzoilace-tato de etilo (9,7 g, 10 mmol) em 100 ml de tolueno até à temperatura de refluxo e manteve-se a essa temperatura durante 16 horas. Após arrefecimento, o precipitado de cor vermelha alaranjada (12 g) foi filtrado e lavado com éter.

Este produto, p.f. 200°C (aprox.) foi directamente utilizado no Passo (b) descrito adiante sem ser submetido a qualquer purificação. 1H RMN (300 MHz, DSO-d^): 2,52 (3H, s), 4,30 (2H, s), 6,68 (1H,

D s), 7,27 (1H, d, J=5 Hz), 7,82 e 8,29 (cada um 2H, d, J=8 Hz), 8,33 (1H, d, J=5 Hz), 8,92 (1H, s) e 9,70 (1H, s largo). O 4'-(2-Metilimidazo[4,5-c]pirid-l-il)benzoilacetato de etilo pode ser preparado pelo processo descrito no pedido de patente europeia ns 0310386A.

X (b) Aqueceu-se até à temperatura de refluxo e manteve-se a essa temperatura durante 20 minutos uma solução do produto obtido no Passo (a) (10,3 g, 25 mmol) e de di-hidrato de cloreto estan-hoso (28 g, 125 mmol) em HC1 2 M (20 ml) , etanol (40 ml) e água (75 ml) e, em seguida, manteve-se à temperatura ambiente de um dia para o outro (16 horas). Os sólidos que se porecipitaram foram retirados mediante filtração, o pH do filtrado foi ajustado para o valor 6 mediante a adição de bicarbonato de sódio aquoso saturado e o filtrado foi extraído com diclorometano. A fracção orgânica foi secada (sulfato de magnésio) e evaporada, obtendo-se um sólido (3 g).

Cromatografaram-se duas porções em bruto, obtidas pelo processo atrás descrito, sobre gel de sílica usando como eluente um gradiente de dietilamina em acetato de etilo variando entre 2% e 10%. Obteve-se o composto em epígrafe sob a forma de um sólido amarelo (3,7 g, 20%). P.f. 259-263°C.

Análise percentual:

Encontrado C22H18NS‘1/2H2° re(3uer C 67,63; H 4,86; N 21,56 C 67,51; H 4,89; N 21,47

Claims (1)

1. ia. - Processo para a preparação de um composto da fórmula I,

   em que R representa alquilo com 1 a 4 átomos de C facultativamente substituído com um substituinte seleccionado entre fenilo, halofenilo, piridilo, (alcoxi com 1 a 4 átomos de C)carbo-nilo e di(alquilo com 1 a 4 átomos de C)amino, ou representa alquilo com 2 a 4 átomos de C substituído com hidroxilo ou 7 8 com um a dois grupos alcoxi ou representa (CH?) CONR R , em que n representa um número inteiro entre 1 e 4 e R e R representam, independentemente um do outro, H ou alquilo com 1 a 4 átomos de C, R é seleccionado entre H, OH e alquilo com 1 a 4 átomos de C, 3 R é seleccionado entre halo e alquilo com 1 a 4 átomos de C, -21- -21-

   4 R representa metilo, e p representa um número inteiro entre 0 e 3 e m representa um número inteiro entre 0 e 3, ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado por se fazer reagir um composto da fórmula II,

   em que , R , p e m têm os mesmos significados que na fórmula I, quer com um ácido da fórmula R CO^H e um seu ortoéster, em que R tem o mesmo significado que na fórmula I, quer com cloroformato de tricloroetilo, se necessário deixando o produto reagir com um 1 1 composto da fórmula R X, em que R representa um grupo alquilo facultativamente substituído tal como foi definido em relação à fórmula I e X representa Cl, Br ou I, e, se necessário, se formar um sal do produto. 2â. - Método para a preparação de uma composição farmacêutica, caracterizado por se misturar um composto da fórmula I, -22-

   tal como foi definido na reivindicação 1, com um suporte ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Lisboa, 3 de Setembro de 1991

   J. PEREIRA DA CRUZ Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VtCTOR CORDON, 10-A 3.B 1200 LISBOA i