Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia nowych fenetanoloamin o ogólnym wzorze 1, w którym R1 oznacza atom wodoru lub fluoru, R2 oznacza grupe hydroksylowa, aminokarbony- lowa, metyloaminokarbonylowa, dwumetyloamino- karbonylowa, acetyloaminowa lub metanosulfony- loaminowa, oraz ich farmakologicznie dopuszczal¬ nych soli. Zwiazki te zwiekszaja aktywnosc prze- ciwnowotworowa znanych leków onkolitycznych.Aczkolwiek wiele zwiazków badano pod wzgle¬ dem przydatnosci do leczenia chorób nowotworo¬ wych, tylko nieliczne okazaly sie dostatecznie uzy¬ teczne w leczeniu klinicznym nowotworów ludz¬ kich. Glówna wada wszystkich znanych leków onkolitycznych jest poziom ich toksycznosci. Usta¬ lono, na przyklad, ze uzycie pewnych leków prze- ciwnowotworowych w ilosciach wymaganych do klinicznego leczenia lub wyleczenia nowotworów, moze powodowac pózniej wzrost innych nowotwo¬ rów.Dazac do ograniczenia nadzwyczaj toksycznego wplywu kontynuowanych dawek róznych leków przeciwnowotworowyeh stosowano leczenie skoja¬ rzone. Przez uzycie wiecej niz jednego leku prze- ciwnowotworowego mozna osiagnac obnizenie wy¬ maganych dawek kazdego ze wspólnie uzytych le¬ ków i przez to kumulujacego sie wplywu toksycz¬ nego, zaleznego od kazdego indywidualnego leku.We wszystkich takich zastosowaniach chemotera¬ pii skojarzonej, kazdy ze wspólnie uzytych leków 15 20 25 30 byl klinicznie skutecznym czynnikiem przeciwno- wotworowym i wszystkie one wykazywaly indy¬ widualny wplyw toksyczny.Nowe zwiazki sa unikalne z tego wzgledu, ze same nie wykazuja aktywnosci przeciwnowotworo- wej w dawkach przewidywanej wielkosci, ale zdol¬ ne sa do zwiekszania dobroczynnych wplywów le¬ ków znanych jako klinicznie uzyteczne czynniki przeciwnowotworowe.Zwiazki podobne do zwiazków o wzorze 1 przed¬ stawiono w opisie patentowym Stanów Zjednoczo¬ nych Ameryki nr 3 8116 5)16. Wykazuja one dzialanie B-agonistów i sa przydatne w chemoterapii chorób serca.Nowe zwiazki sa uzyteczne we wzmaganiu aktywnosci przeciwnowotworowej znanych leków onkolitycznych.Do tych znanych leków naleza srodki takie, jak cytoksan, antymetabolity takie, jak 5-fluorouracyl i 6-merkaptopuryna, jak równiez alkaloidy roslin¬ ne takie, jak windezyna, winkrystyna i winblasty- na. Zwiazki te wzmagaja takze dzialanie meto- treksatu. Korzystnie stosuje sie je w celu wzmo¬ zenia aktywnosci onkoditycznej srodków takich, jak cytoksan, 5-fluorouracyl, 6-merkaptopuryna, meto- treksat i alkaloidy roslin z rodzaju Vinca. Do gu- i' zów, jakie mozna efektywnie leczyc lekami onko- litycznymi, których dzialanie wzmagaja nowe zwiazki naleza guzy lite, w szczególnosci takie, jak nerwiak niedojrzaly i lite guzy sutka, jajni- 123 990123 990 ka, pluc, okreznicy, zoladka, trzustki i dróg mo¬ czowych. Oprócz tego leczyc mozna równiez guzy takie, jak rak jadra, gruczolakorak i glejak siat¬ kówki.Praktyczne zastosowanie polega na podawaniu osobnikowi, otrzymujacemu lek przeciwnowotworo- wy znany jako uzyteczny w przypadku okreslonej leczonej choroby, nowego zwiazku w ilosciach po¬ wodujacych wzmozenie dzialania leku przeciw- nowotworowego. Skutecznosc tego znanego leku onkolitycznego znaczaco wzrasta pod wplywem dzialania nowego zwiazku o wzorze 1 tak, z£ fz&czfwiStTrm sie- pozadany wplyw kliniczny leku toiityCznego. - ¦ ? (Wynalazek pozwal^ zwiekszyc skutecznosc lecze- |ia chorób ^nowotworowych u ssaków. W trakcie eczenia podaje sie .klinicznie skuteczne lub subo- ptymalne ótarwki leku znanego jako skuteczny prze¬ ciw okreslonej leczonej chorobie nowotworowej, z dodatkowym podawaniem zwiazku o wzorze 1 w ilosci powodujacej wzmozenie wplywu leku on¬ kolitycznego. Zwiazki te korzystnie stosuje sie w celu wzmozenia przeciwnowotworowej aktywnosci zwiazków takich, jak cytoksan, 5-fluorouracyl, me- totreksat, 6-merkaptopuryna i alkaloidy roslin z rodzaju Vinca.Dalszym korzystnym aspektem jest mozliwosc leczenia guzów litych u ludzi za pomoca podawa¬ nia zwiazku o wzorze 1 i leku znanego jako sku¬ teczny w leczeniu tych guzów litych.Sposób wedlug wynalazku polega na tym, ze pochodna tlenku styrenu o ogólnym wzorze 2 pod¬ daje sie reakcji z amina o ogólnym wzorze 3, przy czym R1 i R2 maja wyzej podane znaczenie i ewentualnie rozdziela sie utworzony racemat i wyodrebnia sie R-izomer.Korzystnie l,2-dwumetylo-3-/4-podstawiona-feny- lo/-propyloamine poddaje sie reakcji z tlenkiem styrenu, tlenkiem o-fluor ostyrenu albo nawet z optycznie czynnym tlenkiem styrenu. Amine i tle¬ nek styrenu stosuje sie w ilosciach mniej wiecej równomólowych, a reakcje prowadzi sie w srodo¬ wisku rozpuszczalnika takiego, jak metanol lub etanol. Kondensacja prowadzaca bezposrednio do zwiazku o wzorze 1 zachodzi calkowicie w ciagu okolo dziesieciu do dwudziestu godzin, jesli reak¬ cje prowadzi sie w temperaturze okolo 50—80°C.Produkt, którym jest zwiazek o wzorze 1, wyod¬ rebnia sie po prostu przez usuniecie rozpuszczal¬ nika stanowiacego srodowisko reakcji, na przyk¬ lad przez odparowanie pod zmniejszonym cisnie¬ niem. Jesli jest to pozadane, wytworzona amine mozna dalej; oczyszczac przez krystalizacje z roz¬ puszczalników takich, jak aceton lub octan etylu, albo alternatywnie, mozna ja przeksztalcic w sól i krystalizowac z rozpuszczalników takich, jak me¬ tanol lub izopropanol.Zwiazki o wzorze 1 sa to aminy drugorzedowe, a poniewaz aminowy atom azotu jest zasadowy z samej swej natury, zwiazki te latwo tworza kwa¬ sowe sole addycyjne z kwasami nieorganicznymi i organicznymi. Totez wynalazek dotyczy takze nie¬ toksycznych farmaceutycznie dozwolonych soli ad¬ dycyjnych tych amin z kwasami. Poniewaz rodzaj danego kwasu uzytego do wytworzenia nietoksycz¬ nej farmaceutycznie dozwolonej soli nie jest de¬ cydujacy, wytworzona sól nie powinna posiadac niepozadanych wlasciwosci farmakologicznych ta¬ kich, jakich by nie posiadala macierzysta amina. 5 Do utworzenia nietoksycznych farmaceutycznie do¬ zwolonych soli mozna uzyc jakiegokolwiek z wie¬ lu róznych kwasów nieorganicznych, a do naj- powszechniej stosowanych nalezy kwas solny, kwas siarkowy, kwas nadchlorowy, kwas fosforowy, io kwas azotowy i tym podobne. Do zazwyczaj uzy¬ wanych kwasów organicznych nalezy kwas octo¬ wy, kwas maslowy, kwas maleinowy, kwas bur¬ sztynowy, kwas mlekowy, kwas szczawiowy, kwas p-toluenosulfonowy i kwasy pokrewne. 15 Podobnie do wiekszosci soli addycyjnych amin z kwasami, nietoksyczne farmaceutycznie dozwolo¬ ne kwasowe sole addycyjne objete niniejszym wy¬ nalazkiem sa w charakterystyczny sposób dobrze krystalizujacymi cialami stalymi i dzieki temu na- 20 daja sie do latwego oczyszczania przez krystaliza¬ cje ze zwyklych rozpuszczalników. Sole takie, oczy¬ wiscie, mozna z powrotem przeprowadzic w wol¬ na zasade aminowa w prosty sposób, na drodze reakcji z zasada, taka jak wodorotlenek sodowy 25 lub weglan potasowy. Poniewaz sole zwiazków o wzorze 1 szczególnie dobrze krystalizuja i sa rozpuszczalne w wodzie, czesto jest pozadane uzy¬ cie soli przy sporzadzaniu leku do podawania do¬ ustnego lub pozajelitowego. 30 Przedstawicielami zwiazków wytwarzanych spo¬ sobem wedlug wynalazku sa nastepujace zwiazki: N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo/-1,1-dwumetylo-3-/4- dwumetyloaminokarbonylofenylo/propyloamina; R-N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo-l,l-dwumetylo-3-/4- M -aimi^okairbonylofenylo/propyloamina; N-[2-/2-fluorofenylo/2-hydroksyetylo]-l,l-dwumety- lo-3/4-hydroksyfenylo/propyloamina; Bromowodorek N-([2-/-fluorofenylo/-2-hydroksyety- lo]-1,1-dwumetylo-3-/4-metyloaminokarbonylofeny- 40 lo/propyloaminy; Octan N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo/-l,l-dwumetylo- 3-/4-hydróksyfenylo/propyloaminy; Izomaclan R-N-/2-lfenyflo-l2-hydrK)kisyetylo/-lA-idwu- metylo-3-/4-metyloaminokarbonylofenylo/propyloa- 45 miny; Chlorowodorek R-N-[2-/2-fluorofenylo/-2-hydroksy- etylo]-l,l-dwumetylo-3-/4-hydroksyfenylo/propylo- aminy; Szczawian R-N-{2-/2-fluorofenylo/-2-hydroksyety- «o lo]-l,l-dwumetylo-3-/4-dwumetyloaminokarbonylo- fenylo/propyloaminy; p-Toluenosulfonian R-N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo/- l,l-dwumetylo-3-/4-aminokarbonylofenylo/pr6pyio- aminy i tym podobne.M Jak to wyzej zaznaczono, zwiazki wytworzone sposobem wedlug wynalazku sa uzyteczne jako czynniki wzmagajace skutecznosc znanych i aktual¬ nie uzywanych leków przeciwnowotworowych. In¬ nymi slowy, zwiazki te powoduja znaczacy i nieo- w czekiwany wzrost skutecznosci aktualnie uzywa¬ nych czynników onkolitycznych. Ten nieoczekiwany rezultat pozwala na stosowanie uzywanych obec¬ nie leków przeciwnowotworowych w mniejszych ilosciach niz obecnie dozwolone do skutecznego 05 leczenia, albo tez pozwala na skuteczniejsze le-123 990 6 czenie przy podawaniu leków onkolitycznych na poziomie aktualnie stosowanym klinicznie.Poniewaz zwiazki wytwarzane sposobem wedlug wynalazku ani nie sa sanie z siebie zwiazkami przeciwnowotworowymi, ani nie sa toksyczne dla komórek zdrowych w dawkach przewidywanej wielkosci, ogólnym wynikiem leczenia skojarzonego przy uzyciu nowych zwiazków jest to, ze w lecze¬ niu nowotworów z uzyciem znanych leków onko¬ litycznych moze osiagnac wieksza skutecznosc i mniej skutków ubocznych wynikajacych z tok¬ sycznosci.Aktywnosc wzmagajaca zwiazków wytwarzanych sposobem wedlug wynalazku wykazano w licz¬ nych testach laboratoryjnych. Jednym z tych tes¬ tów bylo, na przyklad, okreslenie aktywnosci in¬ hibitora mitoz. Zwiazki o wzorze 1 wykazuja zdol¬ nosc zatrzymywania hodowanych komórek w fa¬ zie mitozy (metafazie) cyklu zyciowego, bez rzeczy¬ wistego wplywu na inne stadia cyklu zyciowego komórek. Ta aktywnosc inhibitora mitoz jest wska¬ zówka, ze zwiazki!] moga miec dobrnczyirmjY wplyw na aktywnosc biologiczna leków przeciwnowotwo- rowych. Te aktywnosc inhibitora mitoz wykazano wobec komórek jajnika chomika chinskiego.Zwiazki o wzorze 1 stosowano w stezeniu 20 jjig/ml i liczono ilosc komórek zatrzymywanych w fazie mitotycznej na 1000 hodowanych komórek, co porównywano z próibaimli konltrolnymi, w któ¬ rych zachodzilo zatrzymywanie w fazie mitotycz- nej w nieobecnosci leku.Tablica 1 przedstawia wyniki badania zatrzymy¬ wania w fazie mitotycznej. Podane wyniki sa to procenty komórek utrzymanych w mitozie po uply¬ wie pieciu godzin kontaktu ze zwiazkiem wedlug wynalazku.Tablica 1 Indeks mitotyczny (srednia z prób kontrolnych = =procent w fazie mitotycznej) N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo/-l,l- dwumety/lo-3-/4-hydirokB'yfenyilo/ /propyloamina N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo/etylo/- l,l-dwumetylo-3-/4-aminokarbonylo- fenylo/-propyloamina N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo/-l,l- dwumetylo-3-/4-dwumetyloamino- karbonylofenylo/-propyloamina N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo/-l,l- dwumetylo-3-/4-metyloaminokarbo- nylofenylo/propyloamina 20,0 fig/ml 36 33 57 45 40 46 36 38 i Wykazano, ze zwiazki wytworzone sposobem wedlug niniejszego wynalazku, podane myszom i chomikom obarczonym guzami przeszczepialnymi, zwiekszaja skutecznosc czynników przeciwnowo- tworowych. W typowym eksperymencie myszy la borafloryjne szczepiono przez podskórna iimjplarita- 10 15 20 25 30 45 50 55 60 G5 cje tkanki nowotworowej do pachowego regionu ciala. Implantacji dokonywano za pomoca trój- granca. Poczatkowa wielkosc guza u kazdego zwie¬ rzecia wynosila ogólnie okolo 2 mm2. Wielkosc guza mierzono nastepnie okresowo jako dlugosc i szerokosc w mm.Do typowych ukladów guzów przeszczepialnych nalezy gruczolakorak 755, rak pochodzacy z oskrze¬ li szczep Aly Fast i miesak limfatyczny mecca.Do czynników onkolitycznych, uzywanych w te¬ stach w celu okreslenia wzmagajacego dzialania zwiazków o wzorze 1 nalezaly: cytoksan, 5-fluoro- uracyl, windezyna, metotreksat i 6-merkaptopury- na. Jako kontrole zazwyczaj wybierano dwadzies¬ cia lub trzydziesci zaszczepionych zwierzat, które otrzymywaly placebo. Normalnie dziesiec zaszcze¬ pionych zwierzat wybierano do podania im zna¬ nego czynnika onkolitycznego. Innym dziesieciu zaszczepionym zwierzetom podawano znany czyn¬ nik onkolityczny z dodatkiem zwiazku o wzorze 1.Tablica 2 przedstawia wyniki skojarzonej che¬ moterapii w leczeniu myszy zaszczepionych guzem gruczolakorakiem przypominajacym ludzki guz sut¬ ka (uklad guza 755). Tablica ukazuje wyniki le¬ czenia w ciagu 28 dni za pomoca placebo, sama 6-merkaptopuryna (oznaczona w tablicy jako 6 MP) oraz 6 MP w skojarzeniu ze zwiazkiem o wzo¬ rze 1: bromowodorkiem N-/2-fenylo-2-hydroksyety- lo/-l,l-dwumetylo-3-/4-hydroksyfenylo/-propyloami- ny (oznaczonym w tablicy jako A). Zgodnie z te¬ stem, sama 6 MP podawano 10 myszom doustnie, kazdego dnia jednorazowo w dawce 1,5 mg/kg w ciacu 28 dni. Inna grupa 10 myszy otrzymywala codziennie 6 MP (1,5 mg/kg) oraz zwiazek A, który podawano podskórnie w ilosci 3,75 mg/kg dwa razy dziennie w ciagu 28 dni.Wyniki leczenia podano dla kazdej grupy ba¬ danej jako srednia wielkosc wzrastajacego guza w mm2 oraz ilosc przezywajacych zwierzat ba¬ danych w stosunku do ilosci zwierzat poddawanych leczeniu. Pomiarów wielkosci guza dokonywano we wskazanych w tablicy dniach nastepujacych po ini¬ cjujacej implantacji guza. Srednia wielkosc guza dla kazdej badanej grupy we wskazanym dniu podano w kolumnie I pod kazdym z okreslonych dni pomiarów. W kolumnie drugiej odnoszacej sie do kazdego z dni pomiarów zanotowano ilosc zwie¬ rzat przezywajacych w poszczególnej badanej gru¬ pie.Podobne badania przeprowadzono w celu okresle^ nia synergicznego wplywu bromku N-/2-fenylo-2- hydroksyetylo/-l,l-dwumetylo-3-/4-hydroksyfenylo/ /propyloaminy (zwiazek A) na aktywnosc przeciw¬ nowotworowa 5-fluorouracylu (oznaczonego w tab¬ licy 3 jako 5 FU) w leczeniu miesaka limfatycz- nego mecca u myszy. 5-fluorouracyl podawano do- otrzewnowo kazdego dnia, jednorazowo w ilosci 4 me/kg grupie pieciu zwierzat laboratoryjnych.Inna grupa pieciu zaszczepionych zwierzat otrzy¬ mywala 4 mg/kg 5 FU dootrzewnowo, kazdego dnia jednorazowo, oraz czynnik wzmagajacy (zwia¬ zek A) podskórnie, dwa razy dziennie, w dawce 18,75 mg/kig. Grujpa 20 zaszczepionych zwierzat otrzymywala^ placebo. Pomiarów sredniej wielkos¬ ci guza w kazdej grupie zwierzat dokonywano dzie^123 990 Tablica 2 Zwiazek podawany Kontrola 6 /M1P 5 MP+A Dni 0 I — II 20/20 10/10 10/10 I 240 aoo 75 9 II 20/20 9/10 10/10 17 I 850 340 75 II 15/20 7/10 10/10 23 I '680 45 II 0/20 6/10 9/10 28 I 1050 40 II 0/20 1/10 9/10 siatego, czternastego i osiemnastego ,dnia od po¬ czatkowej implantacji guza i podawania leków.Kolumna I pod kazdym z okreslonych dni poda¬ je srednia wielkosc guza w mm2. Kolumna II pod kazdym z dni podaje ilosc zwierzat przezywaja¬ cych w kazdej badanej grupie. Jak to mozna wi¬ docznie stwierdzic na podstawie danych przedsta¬ wionych w tablicy 3, srednia wielkosc guza po 15 lezy zauwazyc, ze srednia wielkosc guza u zwierzat otrzymujacych wspólnie cytoksan i bromowodorek N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo/-l,l-dwumetylo-3-/4- -hydroksyfenylo/propyloaminy wynosila tylko 20 mm2 po 19 dniach leczenia, podczas gdy srednia wielkosc guza w grupie otrzymujacej cytoksan by¬ la prawie taka sarnia, jak dla zwierzat otrzymu¬ jacych placebo, a mianowicie okolo 1340 mmz.Tablica 3 Zwiazek podawany Kontrola 5 FU 5 FU+A Dni 1 0 I — II 20/20 5/5 5/5 10 I 750 490 240 II 20/20 5/5 5/5 14 I '660 490 235 II 6/20 4/5 4/5 18 I 140 II 0/20 0/5 3/5 czternastu dniach leczenia w grupie poddawanej skojarzonej chemoterapii, byla mniej wiecej o po¬ lowe mniejsza od wielkosci guza w grupie otrzy¬ mujacej sam 5 FU. Oprócz tego, po osiemnastu dniach leczenia trzy z pieciu zwierzat poddawa¬ nych skojarzonej chemoterapii zyly w dalszym cia¬ gu, podczas gdy wszystkie ze zwierzat kontrolnych i zwierzat otrzymujacych sam 5 FU padly.W podobnym tescie chomikom wszczepiono po¬ chodzacego z oskrzeli raka pluc szczep Aly Fast.Jednej grupie zaszczepionych zwierzat podawano 35 W tescie przeznaczonym do wykazania wzmaga¬ jacego wplywu zwiazku o wzorze 1 na aktywnosc onkolityczna alkaloidów roslin z rodzaju Vinca, myszom, którym wszczepiono gruczolakorak (guz 755), podawano placebo, windezyne wspólnie ze zwiazkiem o wzorze 1 chlorowodorkiem N-/2-feny- lo-2-hydroksyetylo/-l,l-dwumetylo-3-/4-aminokar- bonylofenylo/propyloaminy (oznaczonym w tablicy 5 jako zwiazek B). Windezyne podawano dootrzew- nowo w ilosci 0,6 mg/kg w dniu 1, 5, 9 i 13 testu.Zwierzetom poddanym skojarzonej chemoterapii Tablica 4 1 Zwiazek podawany Kontrola Cytoksan Cytoksan +A Dni 0 I — II 40/40 10/10 10/10 8 | 13 I 610 560 50 II 1 I 38/40 10/10 9/10 830 950 20 II 35/40 9/10 8/10 19 I 1360 1340 20 II 9/40 6/10 8/10 cytoksan dootrzewnowo w dawce 10 mg/kg raz dziennie. Zwiazek o wzorze 1, bromowodorek N-/2- -fenylo-2-hydroksyetylo/-l,l-dwumetylo-3-/4-hyd- roksyfenylo/propyloaminy (oznaczony w tablicy 4 jako A) wykazuje znaczny efekt synergistyczny, gdy podawany jest wspólnie z cytoksanem. Zwie¬ rzetom poddawanym skojarzonej chemoterapii po¬ dawano cytoksan dootrzewnowo w dawce 10 mg/kg raz dziennie, a zwiazek A podawano podskórnie w ilosci 10 mg/kg dwa razy dziennie.Wyniki testu przedstawiono w tablicy 4. Na- 55 podawano windezyne dootrzewnowo zgodnie z wy¬ zej wskazanym rezimem podawania, a chlorowodo¬ rek N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo/-l,l-dwumetylo-3-/ /4-aminokarbonylofenylo/propyloaminy podawano dootrzewnowo w ilosci 7,5 mg/kg dwa razy dzien- 50 nie przez pierwszych 15 dni testu.Wyniki testu przedstawi000 w tablicy 5. W ko¬ lumnie I podano srednia wielkosc nowotworu w mm2 dla kazdej grupy badanej we wskazanych dniach pomiarów. Kolumna II pod kazdym ze W wskazanych dni pomiarów podaje ilosc zwierzat123 990 9 10 wolnych od guza w stosunku do ilosci zwierzat zyjacych w dalszym ciagu w okreslonym dniu w kazdej grupie badanej. Jak to mozna widocznie stwierdzic na podstawie danych przedstawionych w tablicy 5, trzy z dziesieciu zwierzat poddawanych skojarzonemu leczeniu w sposób wedlug wynalaz¬ ku, zyly jeszcze w 40 dniu testu i z tych trzech zwierzat dwa byly wolne od guza. W przeciwien¬ stwie do tego, w ciagu 40 dni wszystkie zwierze¬ ta kontrolne i te, które otrzymywaly sama winde- zyne, padly, a zadne z nich nie bylo wolne od guza juz po 13 dniach testu. 5-Fluorouracyl jest zasadniczo nieskuteczny wo¬ bec gruczolakoraka 755 u myszy. Tym nie mniej, podawany wspólnie ze zwiazkiem o wzorze 1, 5 FU staje sie bardzo skuteczny. Dane przedstawio¬ ne w tablicy 6 wykazuja taki wlasnie wynik. My¬ szy szczepiono przez implantacje gruczolakoraka 755. Trzydziestu zwierzetom podawano placebo, dziesieciu sam 5-fluorouracyl, a dziesieciu chloro¬ wodorek N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo/-l,l-dwume- tylo-3-/4-aminokarbonylqfenylo/propyloaminy wspólnie z 5-fluorouracylem. 10 15 20 zwiazku o wzorze 1 wspólnie z 5-fluorouracylem jest skuteczna w leczeniu gruczolakoraka 755, pod¬ czas gdy sam 5-fluorouracyl jest nieskuteczny.Tablica 7 przedstawia wyniki, pozwalajace stwierdzic calkowita remisje guza. Myszy szcze¬ piono przez implantacje gruczolakoraka 755. Trzy¬ dziesci myszy utrzymywano jako kontrole i po¬ dawano im tylko placebo. Dziesieciu myszom po¬ dawano 6-merkaptopuryne (6 MP) dootrzewnowo w ilosci 4 mg/kg, raz na dzien, w 5, 9 i 13 dniu po implantacji.Innej grupie 10 myszy podawano chlorowodorek N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo/-l,l-dwumetylo-3-/4- aminokarbonylofenylo/propyloaminy podskórnie w ilosci 3,75 mg/kg, 2 razy dziennie w ciagu 10 dni, zaczynajac od 5 dnia po implantacji. Zwiazek ten podawano wspólnie z 6 MP wedlug wyzej przy¬ toczonego rezimu dawkowania. W tablicy 7 zare¬ jestrowano srednia wielkosc guza w kazdej grupie badanych zwierzat we wskazanym dniu pomiarów.Kolumna II pod kazdym z dni jest iloscia zwie¬ rzat wolnych od guza sposród jeszcze zyjacych zwierzat. Nalezy zauwazyc, ze do 23 dnia padly 24 I Zwiazek podawa¬ ny Kontrola VDS VDS+B Tablica 5 Dni 0 I — —~ II 0/30 0/10 0/10 8 I 190 35 20 II 0/30 3/9 6/8 13 I 410 170 15 II 0/30 0/8 6/7 19 i-i 620 600 25 II 0/13 0/8 5/7 I i 640 620 180 26 II 0/3 0/6 3/7 40 I — 220 II 0/0 0/0 2/3 Zwiazek poda¬ wany Kontrola 5 FU 5 FU+B I — o II UJ I 100 95 70 5 II 0/30 0/10 0A0 T ablica 6 12 I 400 350 100 II iii Dni 17 I 750 630 80 II 0/22 0/9 1/10 2 I 700 680 120 -3 II 0/6 0/6 1/9 29 I 500 II 0/0 0/0 1/7 73 | I -— II | 0/0 0/0 0/0 Leczenie we wszystkich przypadkach rozpoczeto po uplywie 5 dni od implantacji ukladu guza.Fluorouracyl podawano dootrzewnowo w ilosci 8 mg/kg jednorazowo, w 5, 9 i 13 dniu po implan¬ tacji, zarówno zwierzetom otrzymujacym sam 5 FU, jak i w skojarzeniu. Zwierzeta poddawane sko¬ jarzonej chemoterapii otrzymywaly, oprócz 5 FU, chlorowodorek N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo/-1,1- -dwumetylo-3-/4-aminokarbonylofenylo/propyloa- miny (zwiazek B) w ilosci 7,5 mg/kg podskórnie dwa razy dziennie w okresie od 5 do 14 dnia te¬ stu. Tablica 6 przedstawia wyniki testu. Srednia wielkosc guza mm2 dla kazdej grupy badanej podano w kolumnie I pod kazdym z dni pomiarów.Kolumna II pod kazdym z dni pomiarów jest to ilosc zwierzat wolnych od guza w stosunku do ilos¬ ci zwierzat zywych w okreslonym dniu. Dane wskazuja, ze skojarzona chemoterapia z uzyciem 50 65 zwierzeta z 30, które otrzymaly placebo. Wszy¬ stkich dziesiec zwierzat otrzymujacych sama 6- -merkaptopuryne padlo do dnia 29. Z dziesieciu zwierzat otrzymujacych 6 MP wspólnie ze zwiaz¬ kiem o wzorze 1 tylko cztery padly po 73 dniach po implantacji i wszystkich 6 zwierzat zyjacych w dalszym ciagu bylo wolnych od guza.Podobne badania przeprowadzono z cytoksanem w róznych dawkach oraz z cytoksanem wspólnie z chlorowodorkiem N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo/- -1,1 -dwumetylo-3-/4-aminokarboriylofenylo/propylo- aminy. Grupie dziesieciu zwierzat szczepionych gruczolakorakiem 755 podawano cytoksan dootrze¬ wnowo w ilosci 25 mg/kg raz na dzien w 5, 9 i 13 dniu. Inna grupa szczepionych zwierzat otrzymy¬ wala cytoksan w dawce 12,5 mg/kg raz dziennie w dniu 5, 9 i 13.Trzecia grupa szczepionych zwierzat ptrzymy-11 123 990 Tablica 7 12 Zwiazek poda¬ wany Kontrola 6 MP 6 MP+B Dni 0 I — II 0/30 0/10 0/10 5 I 100 130 65 II 0/30 0/10 0/10 12 I 400 370 50 II 0/30 0/10 0/10 17 I 730 570 25 n 0/30 0/10 0/10 23 I 680 650 20 II 0/6 0/8 6/8 29 I 15 II 0/0 0/t) 6/8 73 I 0 II 0/0 0/0 6/6 . Zwiazek poda¬ wany Kontrola Cytoksan 25 mg/kg Cytoksan 12,5 mg/kg Cytoksan 12,5 mg/kg +B 0 I II — —. — 0/30 0/10 0/10 0/10 5 I II 80 80 130 70 0/30 0/10 0/10 0/10 Tabl 12 I 390 60 190 40 II 0/30 1/10 0A0 2/10 ica 8 Dni 17 1 730 60 300 II 0/22 4/10 0/10 25 | 7/9 23 I 700 200 600 10 II 0/6 2/9 1/9 7/7 29 I 570 800 30 II 0/0 0/4 0/4 6/7 73 | i — — 0 n 0/0 0/0 0/0 6/6 1 wala cytoksan dootrzewnowo w ilosci 12,5 mg/kg w 5, 9, 13 dniu, wspólnie ze zwiazkiem o wzorze 1 (zwiazek B) podawanym podskórnie dwa razy dziennie od 5 do 14 dnia trwania testu w dawce 7,5 mg/kg.Tablica 8 przedstawia wyniki tych badan. Jak to wskazuja dane, wszystkie zwierzeta kontrolne i zwierzeta otrzymujace sam czynnik onkolitycz- ny padly w ciagu 73 dni. W przeciwienstwie do tego, szesc z dziesieciu zwierzat, które poddano skojarzonemu leczeniu, zyly w dalszym ciagu i wszystkie z tych jeszcze zywych zwierzat byly wol¬ ne od guza.Jak to wskazuja uprzednio zamieszczone wyniki testów, zwiazki otrzymane sposobem wedlug wy¬ nalazku sa uzyteczne we wzmaganiu skutecznosci czynników przeciwnowotworowych. Zgodnie z tytn, zwiazki te mozna stosowac wspólnie ze znanymi lekami onkolitycznymi do leczenia chorób nowo¬ tworowych.N-[2-fenylo/ i 2-fluorofenylo/-2-hydroksyetylo]- -l,l-dwumetylo-3-/4-podstawiony fenyl/propyloami- ny wytwarzane sposobem wedlug wynalazku moz¬ na formowac w leki do podawania w dogodny spo¬ sób, droga doustna lub pozajelitowa. Ogólnie srod¬ kibeda zawierac od okolo 1 do okolo 50*/o wago¬ wych zwiazku wedlug wynalazku. Zwiazki moz¬ na zmieszac z jakimkolwiek z licznych farmaceu¬ tycznych nosników, zarobek lub rozcienczalników.Do typowych nosników i rozcienczalników pospoli¬ cie uzywanych naleza: glukoza, sacharoza, sprosz¬ kowana skrobia, wlókno celulozowe, sorbit, man¬ nit, poliwinylopirolidon, metyloceluloza, mleczan etylu, hydroksybenzoesan metylu, krzemionka, pa¬ rafina plynna i pokrewne zarobki i nosniki.Preparaty farmaceutyczne moga zawierac jeden lub wiecej zwiazków o wzorze 1 i jesli jest to pozadane, srodek moze zawierac lek przeciwnowo- 30 35 40 45 50 tworowy, taki jak cytoksan, 6-merkaptopuryna lub podobne, tak, ze skojarzona chemoterapie mozna prowadzic przez podawanie skutecznej dawki po¬ jedynczej postaci leku zawierajacej aktywny lek i czynnik wzmagajacy. Tym niemniej jednak, zwiazki o wzorze 1 korzystnie stosuje sie do wy¬ twarzania preparatów pojedynczo, bez leków prze¬ ciwnowkatworowyich, przy czyim karzylstne jest po¬ dawanie dwóch lub wiecej czynników oddziel¬ nie.Do podawania doustnego zwiazek o wzorze 1 mozna zmieszac z nosnikiem, takim jak skrobia i sacharoza i prasowac w tabletki lub napelniac zelatynowe kapsulki. Alternatywnie, zwiazki mozna podawac w postaci syropu lub zawiesiny, np. w wodzie destylowanej, roztworze soli lub podobnym.Do podawania pozajelitowego, np. droga domies¬ niowa, podskórna lub dozylna, zwiazki mozna zmie¬ szac z nosnikami takimi, jak izotoniczny roztwór soli lub glukozy, albo alternatywnie, mozna je rozpuscic w odpowiednim rozpuszczalniku, takim jak woda, umiescic w ampulkach i zliofilizowac z otrzymaniem proszku. Proszek taki jest gotowy do rekonstytucji za pomoca jalowej wody lub roz¬ tworu soli do bezposredniego podawania domies¬ niowego. Zwiazki przy wytwarzaniu preparatów mozna umieszczac w czopkach, postaciach zam¬ knietych do stosowania podpoliczkowegfc i temu podobnych, do podawania z dogodnym czasem uwalniania.Zwiazki o wzorze ogólnym 1 podaje sie osobni¬ kowi z choroba nowotworowa wymagajacemu le¬ czenia, wspólnie z czynnikiem przeciwnowotworo- wym znanym jako uzyteczny w leczeniu tej cho¬ roby. Przewidywane dawkowanie zwiazków o wzo¬ rze! 1 obejmuje ilosc wystarczajaca do wzmozenia skutecznosci znanego czynnika onkolitycznego.Dozowanie to moze byc rózne, zalegnie rf co-123 990 13 14 azaju nowotworu podlegajacego leczeniu, czynnika przeciwnowotworowego, którego skutecznosc ma zostac wzmozona, nasilenia choroby, drogi poda¬ wania i tego rodzaju czynników. Tym niemniej, zwiazek o wzorze 1 bedzie rutynowo podawany w dawkach od okolo 0,5 do okolo 50 mg/kg wagi ciala zwierzecia. Korzystnym poziomem dawko¬ wania bedzie dawka wynoszaca od okolo 1 do okolo 20 mg/kg, przy podawaniu od jednego do czierech razy dziennie. Jak to powyzej zaznaczo¬ no, czynniki wzmagajace, tzn. zwiazki o wzorze 1, korzystnie podaje sie osobno, a nie lacznie z czyn¬ nikiem lub czynnikami przeciwnowotworowymi.Na przyklad, zwiazek taki jak octan N-/2-fenylo- -2-hydroksyetylo/-l,l-dwumetylo-3-/4-dwumetylo- aminokarbonylofenylo/propyloaminy mozna formu¬ lowac do podawania doustnego w dawkach okolo 10 mg/kg, podawany okolo dwa razy kazdego dnia.Czynnik onkolityczny, taki jak cytoksan lub temu podobny, mozna podawac pozajelitowo w zwykly sposób, albo na normalnym klinicznym poziomie aozowania, albo na poziomie suboptymalnym.Na przyklad, czynnik taki, jak cytoksan podaje sie w celu leczenia guzów, takich jak nerwiak niedojrzaly, gruczolakorak jajnika, glejak siatków¬ ki i podobne, na ogól w dawkach doustnych od okolo 1 do okolo 5 mg/kg jednorazowo kazdego dnia. Przy kontynuowaniu leczenia cytoksanem zwykle spotyka sie takie dzialania uboczne, jak rozwój wtórnych nowotworów zlosliwych, leukope- nia, nudnosci, brak laknienia, owrzodzenia sluzów¬ ki jamy ustnej i zóltaczka. Zwiazek o wzorze 1 podaje sie wspólnie z cytoksanem stosowanym w dawce od 1 do 5 mg/kg, albo w dawce subopty- malnej, z takim wynikiem, ze ogólny wplyw zna¬ nego czynnika onkolitycznego na tkanke zlosliwa ulega wzmozeniu.Wynalazek ilustruja nastepujace przyklady: Przyklad I. N-[2-/fluorofenylo/-2-hydroksy- etylo] -1,1-dwumetylo -3 -/4-hydroksyfenylo/propylo- amina.Do roztworu 10,0 g l,l-dwumetylo-3-/4-hydroksy- fenylo/propyloaminy w 100 ml etanolu, mieszajac i ogrzewajac pod chlodnica zwrotna wkrapla sie w ciagu 30 minut 9,1 g tlenku o-fluorostyrenu.Po zakonczeniu dodawania mieszanine reakcyjna ogrzewa sie pod chlodnica zwrotna w ciagu dwu¬ nastu godzin. Po ochlodzeniu mieszaniny reakcyj¬ nej do temperatury pokojowej, rozpuszczalnik usu¬ wa sie przez odparowanie pod zmniejszonym cis¬ nieniem, otrzymujac produkt w postaci oleju. Olej ten rozpuszcza sie w eterze etylowym i trzykrot¬ nie ekstrahuje 10°/o wodnym roztworem kwasu sol¬ nego, a nastepnie dwukrotnie woda. Kwasne ekstrakty wodne laczy sie, alkalizuje za pomoca wodorotlenku sodowego, a nastepnie ekstrahuje swiezym eterem etylowym.Ekstrakty eterowe laczy sie, przemywa woda i osusza. Zatezenie roztworu poprzez odparowa¬ nie czesci rozpuszczalnika powoduje wykrystalizo¬ wanie produktu w postaci ciala stalego o barwie bialej. Osad ten wyodrebnia sie przez odsaczenie i trzykrotnie rekrystalizuje z octanu etylu i jeden raz z metanolu. Krystaliczny produkt nastepnie rozpuszcza sie w swiezym octanie etylu i doda¬ je do eterowego roztworu chlorowodoru, przy czym wytraca sie krystaliczny osad, który odsacza sie i suszy, otrzymujac 3,4 g chlorowodorku N-{2-/2- -fluoroienylo/-2-hydroksyetylo]-l,l-dwumetylo-3-/4- 5 -hydroksyfenylo/propyloaminy. Temperatura top¬ nienia 157—159,5°C.Analiza elementarna dla C19H24NO2FCI: obliczono: C 64,49; H 7,12; N 3,96. znaleziono: C 64,57; n 7,19; ij 4,20. 10 Przyklad II. N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo/-l,l- dwumetylo-3-/4-aminokarbonylofenylo/propyloami- na.Roztwór 3,9 g l,l-dwumetylo-3-/4-aminokarbony- lofenylo/propyloaminy w 150 ml etanolu zawiera- 15 jacego 2,8 g tlenku styrenu ogrzewa sie pod chlod¬ nica zwrotna i miesza w ciagu 12 godzin. Po ochlodzeniu mieszaniny reakcyjnej do temperatury pokojowej rozpuszczalnik usuwa sie przez odparo¬ wanie, otrzymujac stala pozostalosc. Pozostalosc 20 te krystalizuje sie ze 100 ml goracego eteru ety¬ lowego, otrzymujac 3,3 g krystalicznego produktu.Tak utworzony produkt dwukrotnie rekrystalizuje sie z goracego acetonu, otrzymujac 1,98 g N-/2- -fenylo-2-hydroksyetylo/-l,l-dwumetylo-3-/4-amino- 25 karbonylofenylo/propyloaminy.Temperatura topnienia 146—150°C.Analiza elementarna dla C20H26N2O2: oonczono c V5,o9; H 8,03; N 8,58. znaleziono C 73,40; H 7,91; N 8,33. 30 Tak utworzona amine w postaci zasady rozpusz¬ cza sie w metanolu i dodaje do roztworu chloro¬ wodoru w eterze etylowym. Wytracony osad wy¬ odrebnia sie i rekrystalizuje z 30 ml acetonu i 5 ml etanolu, otrzymujac 1,79 g chlorku N-/2-hydro- 35 ksyetylo/-l,l-dwumetylo-3-/4-aminokarbonylofenylo /propyloaminy.Temperatura topnienia 204—206°C.Analiza elementarna dla C20H27N2O2&: obliczono C 66,19; H 7,50; N 7,72; Cl £,?7. 40 znaieziiono C 66,05; H 7,4(2; N 7,53; Cl 10, Przyklad III. Postepujac, jak w przykladzie II 4,6 g tlenku o-fluorostyrenu poddaje sie reakcji z 5,8 g l,l-dwumetylo-3-/4-aminokarbonylofenylo/ propyloaminy, otrzymujac, po krystalizacji z me- 45 tanolu i octanu etylu, 2,0 g N-{2-/2-fluorofenylo/-2- -hydroksyetylo]-l,l-dwumetylo-3-/4-aminokarloiur- lofenylo/propyloaminy. c .Analiza elementarna dla C20H35N2O1F: Obliczono C 69,74; H 7,32; N 8,13. 50 znaleziono C 69,58; H 7,12; N 8,28.Tak utworzona amine w postaci zasady przek¬ sztalca sie w chlorowodorek droga reakcji, z chlo¬ rowodorem w eterze etylowym, otrzymujac 1,2 g chlorowodorku N- [2-/2-fluorofenylo/-2-hydroksyety- 55 lo]-l,l-dwumetylo-3-/4-aminokarbonylofenylo/pro¬ pyloaminy. Temperatura topnienia 237—230°C.Analiza elementarna dla CjoH26N202C1F: obliczono C 63,07; H 6,88; N 7,35. znaleziono C 63,21; H 7,12; N 7,45. w Przyklady IV i V. Postepujac, jak w przy¬ kladzie II, tlenek styrenu poddaje sie reakcji z od¬ powiednia l,l-dwumetylo-3-/4-podstawiony fenyl/ propyloamina, otrzymujac po utworzeniu soli, na¬ stepujace zwiazki: 65 chlorowodorek N-/2-fenylo-2-hydroksyetylo/-l,l-17 123490 18 etanolu i 100 ml octanu etylu poddaje sie uwodor¬ nieniu w obecnosci niklu Eaneya. Katalizator usu¬ wa sie przez odsaczenie, a rozpuszczalniki usu¬ wa sie pod zmniejszonym cisnieniem, otrzymujac 14,8 g stalej pozostalosci. Po krystalizacji z mie¬ szaniny octanu etylu i acetonu otrzymuje sie 12,0 g N-[4-/3-hydroksy-3-metylobutylo/fenylo]acetami- du o temperaturze topnienia 128—130°C. c) N- [4-/3-formamido-3-metylobutylo/fenylo]aceta- mid.Mieszanine 12,3 g cyjanku sodowego i 35 ml kwasu octowego lodowatego miesza sie i oziebia w kapieli lodowej. Po uplywie 15 minut wkrapla sie roztwór 40 ml stezonego kwasu siarkowego i 35 ml lodowatego kwasu octowego. Po zakoncze¬ niu wkraplania dodaje sie w malych porcjach 50 g alkoholu z poprzedniego przykladu. Otrzymana mieszanine miesza sie w temperaturze otoczenia w ciagu 60 godzin, po czym ogrzewa w tempera¬ turze 55°C w ciagu 1/2 godziny i wylewa na lód.Mieszanine reakcyjna alkalizuje sie weglem so¬ dowym i ekstrahuje octanem etylu. Po przemyciu woda i odparowaniu rozpuszczalnika otrzymuje sie substancje stala, która oczyszcza sie przez kry¬ stalizacje z mieszaniny metanolu i octanu etylu, otrzymujac 43,7 g N-[4-/3-formamido-3-metylobu- tylo/fenylo]acetamidu o temperaturze topnienia 152,5—155°C.Analiza elementarna dla O1H20CI2N2: obliczono: C 52,60; H 8,03; N 11,15. znaleziono: C 52,36; H 7,82; N 11,15. e) Chlorowodorek N-[4-/3-amino-3-metylobutylo/ fenylo]acetamidu.Odczyn roztworu 46,2 g dwuchlorowodorku z eta¬ pu d). w 600 ml wody doprowadza sie do wartosci pH 4,2 za pomoca l*/o roztworu weglanu sodowego.Nastepnie wkrapla sie roztwór 22,1 g bezwodnika kwasu octowego w 100 ml tetrahydrofuranu, utrzy¬ mujac w tym czasie pH roztworu na stalym po¬ ziomie 4,2 przez powolne dodawanie l*/e roztworu weglanu sodowego. Mieszanine reakcyjna miesza sie w temperaturze 25°C w ciagu 16 godzin. Tetrahy- drofuran usuwa sie pod zmniejszonym cisnieniem, a pozostalosc odsacza sie i suszy, otrzymujac 48,8 g jednowodzianu chlorowodorku o temperaturze topnienia 236—239°C.Analiza elementarna dla Ci3H2iClN20*H20: obliczono: C 56,83; H 8,44; N 10,19. znaleziono: C 55,73; H 7,45; N 9,73.Miareczkowanie: masa czasteczkowa obliczono: 274,5 znaleziono: 272 f) N-[4-[3-[/2-hydroksy-2-fenyloetylo/amino]-3-me- tylobutylo]fenylo] acetamid. 8,0 g jednowodzianu chlorowodorku z etapu e) poddaje sie reakcji z weglanem sodowym, otrzy¬ mujac 6,2 g wolnej aminy. Amine te rozpuszcza sie w butanolu-1 i ogrzewa pod chlodnica zwrotna do temperatury wrzenia. Do otrzymanego roztworu dodaje sie 3,7 g tlenku styrenu i calosc ogrzewa sie pod chlodnica zwrotna w ciagu 8 godzin. Roz¬ puszczalnik usuwa sie pod zmniejszonym cisnie¬ niem, a stala pozostalosc zadaje eterem i saczy, otrzymujac 5,4 g krystalicznego produktu o tem¬ peraturze topnienia 142—145°C. Po rekrystalizacji z octanu etylu otrzymuje sie 4,8 g aminoalkoholu o temperaturze topnienia 146—148°C. 15 Analiza elementarna dla C21H28N2O2: obliczono: C 74,08; H 8,29; N 8,23; znaleziono: C 73,88; H 8,04; N 7,98.Wolna amine w postaci stalej otrzymana w po¬ wyzszej reakcji rozpuszcza sie w metanolu i zadaje 20 nadmiarem eterowego roztworu chlorowodoru. Roz¬ puszczalnik usuwa sie pod zmniejszonym cisnie¬ niem, a stala pozostalosc krystalizuje sie z mie¬ szaniny etanolu i octanu etylu, otrzymujac 1,4 g zwiazku tytulowego o temperaturze topnienia 204— 25 209°C.Analiza elementarna dla C21H29CIN2O2: obliczono: C 66,92; H 7,76; N 7,43; znaleziono: C 66,73; H 7,56; N 7,44.Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania nowych fenetanoloamin 35 o ogólnym wzorze 1, w którym R1 oznacza atom wodoru lub fluoru, R2 oznacza grupe hydroksylo¬ wa, aminokarbonylowa, metyloaminokarbonylowa lub dwumetyloaminokarbonylowa, oraz ich farma¬ kologicznie dopuszczalnych soli, znamienny tym, 40 ze pochodna tlenku styrenu o ogólnym wzorze 2 poddaje sie reakcji z amina o ogólnym wzorze 3, przy czym R1 i R2 maja wyzej podane znacze¬ nie, i ewentualnie rozdziela sie utworzony race- mat i wyodrebnia sie R-izomer. 45 2. Sposób wytwarzania nowych fenetanoloamin o ogólnym wzorze 1, w którym R1 oznacza atom wodoru lub fluoru, R2 oznacza grupe acetyloami- nowa lub metanosulfonyloaminowa, oraz ich far¬ makologicznie dopuszczalnych soli, znamienny tym, 50 ze pochodna tlenku styrenu o ogólnym wzorze 2 poddaje sie reakcji z amina o ogólnym wzorze 3, przy czym R1 i R2 maja wyzej podane zna¬ czenie, i ewentualnie rozdziela sie utworzony ra- cemat. i wyodrebnia sie R-izomer. 123 990 ; OH CH3 OiHCH^H-C-CH£HL-\\ // ^R1 CH3 Wzór 1 % V — CHZ Yizór Z CH CH3 ^zór 3 Drukarnia Narodowa, Zaklad Nr 6, 212/84 Cena 100 zl. PL