NO329503B1

NO329503B1 - Pyrrolotriazinanilinforbindelser nyttige som kinaseinhibitorer og farmasoytisk preparat

Info

Publication number: NO329503B1
Application number: NO20044560A
Authority: NO
Inventors: Katerina Leftheris; John Hynes; Stephen T Wrobleski; Alaric Dyckman; Chunjian Liu
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2002-04-23
Filing date: 2004-10-22
Publication date: 2010-11-01
Also published as: WO2003090912A9; MXPA04010379A; NO20044560L; RS92004A; CN102093363A; RU2004134337A; NZ536014A; IL164573A0; WO2003090912A1; IL185604A0; US20040082582A1; GEP20074148B; EP1497019A1; DK1497019T3; AR039649A1; EP2289894A2; CA2483164A1; CN1662509A; PL219736B1; PT1497019E

Abstract

Legemiddel Forbindelser med formel (I) og farmasøytisk akseptable salter, prodroger og solvater derav er nyttige som kinaseinhibitorer, hvor R1, R2, R3, R4, R5, R6, Z og Z er som beskrevet i beskrivelsen.

Description

Område for oppfinnelsen

Foreliggende oppfinnelse vedrører pyrrolotriazinforbindelser, mer spesielt cykloalkyl, heterocyklo og heteroarylpyrrolotriazinanilinforbindelser som er nyttige for behandling av p38kinase-assosierte tilstander. Foreliggende oppfinnelse vedrører videre farmasøytiske sammensetninger inneholdende minst en forbindelse ifølge oppfinnelsen.

Bakgrunn for oppfinnelsen

Et stort antall cytokiner deltar i den inflammatoriske responsen og disse inkluderer IL-1, IL-6, IL-8 og TNF-a. Overproduksjon av cytokiner så som IL-1 og TNF-a er implisert i en rekke forskjellige sykdommer som inkluderer inflammatorisk tarmsykdom, revmatoid artritt, psoriasis, multippel sklerose, endotoksin sjokk, osteoporose, Alzheimers sykdom og kongestiv hjertesvikt, blant andre [Henry et al., Drugs Fut., 24:1345-1354 (1999); Salituro et al., Curr. Med. Chem., 6:807-823 (1999)]. Bevis i humane pasienter indikerer at proteinantagonister av cytokiner er effektive for behandling av kroniske inflammatoriske sykdommer, så som for eksempel monoklonalt antistoff mot TNF-a (Enbrel) [Rankin et al., Br. J. Rheumatol., 34:334-342 (1995)], og oppløselig TNF-a reseptor-Fc fusjonsprotein (Etanercept) [Moreland et al., Ann. Intern. Med., 130:478-486 (1999)].

Biosyntese av TNF-a oppstår i mange celletyper i respons til et ytre stimuli, så som for eksempel, et mitogen, en infeksiøs organisme, eller traume. Viktige mediatorer av TNF-a produksjon er mitogen-aktivert protein (MAP) kinaser og spesielt p38 kinase. Disse kinasene blir aktivert i respons til forskjellige stress stimuli, inkludert, men ikke begrenset til proinflammatoriske cytokiner, endotoksin, ultrafiolett lys og osmotisk sjokk. Aktivering av p38 krever dobbel fosforylering av oppstrøms MAP kinase kinaser (MKK3 og MKK6) på treonin og tyrosin innenfor et Thr-Gly-Tyr motiv karakteristisk for p38 isozymer.

Det er fire kjente isoformer av p38, dvs. p38-a, p38p, p38y og p388. a og isoformer blir uttrykt i inflammatoriske celler og er hovedmediatorer av TNFa-produksjon. Inhibering av p38a og (i enzymer i celler resulterer i reduserte nivåer av TNFa ekspresjon. Videre har administrering av p38a og p inhibitorer i dyremodeller til inflammatorisk sykdom vist seg at slike inhibitorer er effektive for behandling av disse sykdommene. Følgelig har p38 enzymer en viktig rolle i inflammatoriske prosesser mediert av IL-1 og TNF-a. Forbindelser som er vist å inhibere p38 kinase og cytokiner så som IL-1 og TNF-a for anvendelse ved behandling av inflammatoriske sykdommer er beskrevet i US pat. nr. 6.277.989 og 6.130.235 til Scios, Inc; US pat. nr. 6.147.080 og 5.945.418 til Vertex Pharmaceuticals Inc; US pat nr. 6.251.914, 5.977.103 og 5.658.903 til Smith-Kline Beecham Corp.; US pat. nr. 5.932.576 og 6.087.496 til G.D. Searle & Co.; WO 00/56738 og WO 01/27089 til Astra Zeneca; WO 01/34605 til Johnson & Johnson; WO 00/12497 (kinazolin derivater som p38 kinase inhibitorer); WO 00/56738 (pyridin og pyrimidin derivater for det samme formålet); WO 00/12497 (diskuterer forholdet mellom p38 kinaseinhibitorer); og WO 00/12074 (piperazin og piperidin forbindelser nyttige som p38 inhibitorer).

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer visse pyrrolotriazinforbindelser, spesielt, pyrrolotriazinanilinforbindelser nyttige som kinase inhibitorer, spesielt kinasene p38a og p. Pyrrolotriazinforbindelser som er nyttige som tyrosin kinase inhibitorer er beskrevet i US-patent søknad serie nr. 09/573.829, inngitt 18. mai, 2000, som er overdratt til foreliggende søker. Fremgangsmåte for behandling av p38 kinase assosierte tilstander samt pyrrolotriazinforbindelser som er nyttige for det formålet er beskrevet i US-patentsøknad serie nr. 10/036.293 og som er overdratt til foreliggende søker og har de samme oppfinnerene og som krever fordel av US Provisional søknad nr. 60/249.877, inngitt 17. november, 2000, og US Provisional søknad nr. 60/310.561, inngitt 7. august, 2001. Pyrrolotriazinforbindelser substituert med en sur gruppe har som beskrevet sPLA2-inhibitorisk aktivitet er beskrevet i WO 01/14378 A1 til Shionogi & Co., Ltd, publisert 1. mars, 2001 i Japan.

Oppsummering av oppfinnelsen

Foreliggende oppfinnelse vedrører forbindelser med

formelen

eller en enantiomer, diastereomer eller salt derav, hvor R3er metyl eller CF3;

X er -C(=0)- eller -C(=0)NH-;

R4er lineær eller forgrenet C2-6alkyl; cykloalkyl eventuelt substituert med keto og/eller opptil to R16; heterocyklisk gruppe eller heteroaryl eventuelt substituert med keto og/eller opptil to R16; Ci^alkyl substituert med opptil tre av halogen, trifluormetyl, cyano, hydroksy, alkoksy, halogenalkyl, halogenalkoksy, nitro, fenyl, fenyloksy eller benzyloksy, hvor nevnte fenylgruppe eventuelt er substituert med én til to R26; eller fenyl eventuelt

substituert med null til to R16;

R6aog R6ber uavhengig valgt fra hydrogen, lavere alkyl, halogen,

trifluormetoksy, trifluormetyl, hydroksy, d^alkoksy, nitro, amino, Ci-4alkylamino og cyano;

B er fenyl substituert med heterocyklo og én til to R12; cyklopropyl eller cyklobutyl eventuelt substituert med én til to R7; eller B er valgt fra én av:

R7 er Ci^alkyl, trifluormetyl, trifluormetoksy, halogen, cyano, amino, Ci_

4alkylalmino, hydroksy, Ci^alkoksy, fenyl, benzyl, fenyloksy eller

benzyloksy;

R12 og R16er ved hver forekomst er uavhengig valgt fra hydrogen, alkyl,

trifluormetyl, trifluormetoksy, halogen, cyano, nitro, amino, Ci-4alkylamino, aminoCi^alkyl, halogenCi^alkyl, hydroksy, hydroksyCi-4alkyl, alkoksy, fenyl, benzyl, fenyloksy og benzyloksy;

R26er ved hver forekomst uavhengig valgt fra Ci-6alkyl, C2-6alkenyl, halogen,

halogenalkyl, halogenalkoksy, cyano, nitro, amino, Ci^alkylamino, aminoCi^alk<y>l, h<y>droks<y>, hvdroksvCi^alkvI, alkoksy, alkyltio, fenyl,

benzyl, fenyloksy og benzyloksy: og

n erO, 1 eller 2.

Oppfinnelsen vedrører videre farmasøytiske preparat som omfatter én eller flere forbindelser ifølge krav 1 og en farmasøytisk akseptabel bærer eller fortynningsmiddel. Preparatet er for behandling av en inflammatorisk lidelse. Den inflammatoriske lidelsen er valgt fra astma, åndenødssyndrom hos voksne, kronisk obstruktiv lungesykdom, kronisk lunge inflammatorisk sykdom, diabetes, inflammatorisk tarmsykdom, osteoporose, psoriasis, graft vs. vert avvisning, aterosklerose og artritt omfattende rhematoid artritt, psoriatisk artritt, traumatisk artritt, rubella artritt, giktisk artritt og osteoartritt.

Beskrivelse av oppfinnelsen

Angitt nedenfor er definisjoner av forskjellige betegnelser anvendt for å beskrive denne oppfinnelsen. Disse definisjonene gjelder betegnelser som de blir anvendt i i denne beskrivelsen dersom det ikke i spesielle tilfeller blir begrenset, enten individuelt eller som en del av en større gruppe.

Betegnelsen "alkyl" refererer til lineær eller forgrenet usubstituert hydrokarbongrupper med 1 til 20 karbonatomer, fortrinnsvis 1 til 7 karbonatomer. Uttrykket "lavere alkyl" refererer til usubstituerte alkylgrupper med 1 til 4 karbonatomer. Når en indeks blir anvendt med referanse til en alkyl eller en annen gruppe angir indeksen det antallet av karbonatomer som gruppen kan inneholde. For eksempel innbefatter betegnelsen "Co^alkyl" en binding og alkylgrupper med 1 til 4 karbonatomer.

Betegnelsen "substituert alkyl" refererer til en alkylgruppe substituert med 1 til 4 substituenter valgt fra halogen, hydroksy, alkoksy, keto(=0), alkanoyl, aryloksy, alkanoyloksy, NRaRb, alkanoylamino, aroylamino, aralkanoylamino, substituert alkanoylamino, substituert arylamino, substituert aralkanoylamino, tiol, alkyltio, aryltio, aralkyltio, alkyltiono, aryltiono, aralkyltiono, alkylsulfonyl, arylsulfonyl, aralkylsulfonyl, -S02NRaRb, nitro, cyano, -CO2H, -CONRaRb, alkoksykarbonyl, aryl, guanidino og heteroaryler eller heterocyklogrupper (så som indolyl, imidazolyl, furyl, tienyl, tiazolyl, pyrrolidyl, pyridyl, pyrimidyl og lignende), hvor Ra og Rber valgt fra hydrogen, alkyl, aryl, aralkyl, cykloalkyl, cykloalkylalkyl, heteroaryl, heteroarylalkyl, heterocykel og heterocykelalkyl. Substituenten på alkyl kan videre eventuelt være ytterligere substituert, i hvilket tilfelle det vil være med substituert en eller flere Ci^alkyl, C2-4alkenyl, halogen, halogenalkyl, halogenalkoksy, cyano, nitro, amino, Ci^alkylamino, aminoCi^alkyl, hydroksy,

hydroksyCi^alkyl, alkoksy, alkyltio, fenyl, benzyl, fenyloksy, og/eller benzyloksy.

Betegnelsen "alkenyl" refererer til lineær eller forgrenet hydrokarbongruppe med 2 til 20 karbonatomer, fortrinnsvis 2 til 15 karbonatomer, og mest foretrukket 2 til

8 karbonatomer, som har minst en dobbeltbinding, og avhengig av antall

karbonatomer, opp til fire dobbeltbindinger.

Betegnelsen "substituert alkenyl" refererer til en alkenylgruppe substituert med en til to substituenter valgt fra de som er angitt ovenfor for substituerte alkylgrupper.

Betegnelsen "alkynyl" refererer til til lineære eller forgrenede hydrokarbongrupper med 2 til 20 karbonatomer, fortrinnsvis 2 til 15 karbonatomer, og mest foretrukket 2 til 8 karbonatomer, som har minst en trippelbinding, og som er avhengig av antallet karbonatomer, opp til fire trippelbindinger.

Betegnelsen "substituert alkynyl" refererer til en alkynylgruppe substituert med en til to substituenter valgt fra de som er angitt ovenfor for alkylgruppene.

Når betegnelsen alkyl blir anvendt i sammenheng med en annen gruppe, som i heterocykloalkyl eller cykloalkylalkyl, betyr dette den identifiserte (første betegnede) gruppen er bundet direkte gjennom en alkylgruppe som kan være forgrenet eller lineær (for eksempel betyr cyklopropyl Ci^alkyl en cyklopropylgruppe bundet gjennom en lineær eller forgrenet alkylgruppe som har 1 til 4 karbonatomer). I tilfelle av substituenter, som i "substituert cykloalkylalkyl" kan alkyldelen til gruppen, bortsett fra å være lineær eller forgrenet, kan være substituert som angitt ovenfor for substituerte alkylgrupper og/eller den første betegnede gruppen (for eksempel cykloalkyl) kan være substituert som angitt heri for den gruppen.

Betegnelsen "halogen" eller "halo" refererer til fluor, klor, brom og jod.

Betegnelsen "aryl" refererer til monocykliske eller bicykliske aromatiske substituerte eller usubstituerte hydrokarbongrupper med 6 til 12 karbonatomer i ringdelen, så som fenyl, naftyl, og bifenyl(grupper). Arylgruppene kan eventuelt innbefatte en til tre ytterligere ringer (enten cykloalkyl, heterocyklo eller heteroaryl) kondensert dertil.

Eksempler innbefatter:

og lignende. Hver ring i aryl kan være eventuelt substituert med en til tre Rcgrupper, hvori Rcved hver forekomst er valgt fra alkyl, substituert alkyl, halogen, trifluormetoksy, trifluormetyl, -SR, -OR, -NRR', -NRS02R', -S02R, -S02NRR', - C02R', -C(=0)R', -C(=0)NRR', -OC(=0)R'T-OC(=0)NRR', -NRC(=0)R', - NRC02R', fenyl, C3-7cykloalkyl og fem-til-seks leddet heterocyklo eller heteroaryl, hvori hver R og R' er valgt fra hydrogen, alkyl, substituert alkyl, alkenyl, substituert alkenyl, fenyl, C3-7cykloalkyl, og fem-til-seks leddet heterocyklo eller heteroaryl, unntatt i tilfellet av en sulfonylgruppe, da er R ikke hydrogen. Hver substituent Rckan eventuelt deretter være ytterligere substituert med en eller flere (fortrinnsvis 0 til 2) Rd grupper, hvor Rd er valgt fra Ci-6alkyl, C2-6alkenyl, halogen, halogenalkyl, halogenalkoksy, cyano, nitro, amino, Ci-C4alkylamino, aminoCi^alkyl, hydroksy, hydroksyd^alkyl, alkoksy, alkyltio, fenyl, benzyl, fenyletyl, fenyloksy og benzyloksy.

Betegnelsen "aralkyl" refererer til en arylgruppe bundet direkte gjennom en alkylgruppe, så som benzyl, hvori alkylgruppen kan være forgrenet eller lineær.

I tilfellet av en "substituert aralkyl" kan alkyldelen av gruppen bortsett fra å være forgrenet eller lineær, være substituert som angitt ovenfor for substituerte alkylgrupper og/eller aryldelen kan være substituert som angitt heri for aryl.

Betegnelsen "eventuelt substituert benzyl" refererer

følgelig til gruppen, hvor hver R gruppe kan være hydrogen eller kan bli valgt fra Rcsom definert ovenfor, deretter eventuelt substituert med en eller flere Rd. Minst to av disse "R" gruppene bør være hydrogen og fortrinnsvis minst fem av "R" gruppene er hydrogen. En foretrukket benzylgruppe innbefatter at alkyl-delen er forgrenet for å definere

Betegnelsen "heteroaryl" refererer til en substituert eller usubstituert aromatisk gruppe for eksempel, som er en 4 til 7 leddet monosyklisk, 7 til 11 leddet bisyklisk, eller 10 til 15 leddet trisyklisk ringsystem, som har minst et heteroatom og minst en karbonatom-inneholdende ring. Hver ring av heteroarylgruppen inneholdende et heteroatom kan inneholde en eller to oksygen eller svovelatomer og/eller fra 1 til 4 nitrogenatomer, forutsatt at det totale antallet heteroatomer i hver ring er 4 eller mindre og hver ring har minst et karbonatom. De kondenserte ringene som fullfører bicykliske og tricykliske grupper kan inneholde kun karbonatomer og kan være mettet, delvis mettet eller umettet. Nitrogen og svovelatomer kan eventuelt være oksiderte og nitrogenatomene kan eventuelt være kvaterniserte. Heteroarylgrupper som er bicykliske eller tricykliske må innbefatte minst en fullstendig aromatisk ring, men den andre kondenserte ringen eller ringene kan være aromatiske eller ikke-aromatiske. Heteroarylgruppen kan bli koblet ved et hvilke som helst tilgjengelig nitrogen eller karbonatom til en hvilke som helst ring. Den kan eventuelt være substituert med en til tre, (fortrinnsvis 0-2) Rcgrupper, som definert ovenfor for aryl, som igjen kan være substituert med en eller flere (fortrinnsvis 0 til 2) Rd grupper, også som angitt ovenfor.

Eksempler på monocykliske heteroarylgrupper innbefatter pyrrolyl, pyrazolyl, pyrazolinyl, imidazolyl, oksazolyl, isoksazolyl, tiazolyl (dvs.

tiadiazolyl, isotiazolyl, furanyl, tienyl, oksadiazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, triazinyl og lignende.

Eksempler på bicykliske heteroarylgrupper innbefatter indolyl, benzotiazolyl, benzodioksolyl, benzoksazolyl, benzotienyl, kinolinyl, tetrahydroisokinolinyl, isokinolinyl, benzimidazolyl, benzopyranyl, indolizinyl, benzofuranyl, kromonyl, coumarinyl, benzopyranyl, cinnolinyl, kinoksalinyl, indazolyl, pyrrolopyridyl, furopyridinyl, dihydroisoindolyl, tetrahydrokinolinyl og lignende.

Eksempler på tricykliske heteroarylgrupper innbefatter karbazolyl, benzidolyl, fenantrollinyl, akridinyl, fenantridinyl, xanthenyl og lignende.

Betegnelsen "cykloalkyl" refererer til et mettet eller delvis umettet ikke-aromatisk cyklisk hydrokarbon ringsystem, fortrinnsvis inneholdende 1 til 3 ringer og 3 til 7 karbonatomer per ring, som kan være substituerte eller usubstituerte og/eller som kan bli kondenserte med en C3-C7karbocyklisk ring, en heterocyklisk ring, eller som kan ha en bro med 3 til 4 karbonatomer. Cykloalkylgruppene innbefatter hvilke som helst tilgjengelige karbon eller nitrogenatomer på en hvilke som helst kondensert eller brodannet ring som eventuelt har 0 til 3 (fortrinnsvis 0-2) substituenter valgt fra Rcgrupper, som angitt ovenfor, og/eller fra keto (hvor hensiktsmessig) som igjen kan være substituert med en til tre Rd grupper, som angitt ovenfor. Følgelig, når det er angitt at en karbon-karbon bro kan være eventuelt substituert, er det ment at karbonatomene i den brodannede ringen eventuelt kan være substituert med en Rcgruppe, som er fortrinnsvis valgt fra d-*alkyl, C2-4alkenyl, halogen, halogenalkyl, halogenalkoksy, cyano, amino, Ci^alkylamino, aminoCi^alkyl, hydroksy, hydroksyCi^alkyl og d-4alkoksy. Eksempelvise cykloalkylgrupper innbefatter cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cykloheksyl, cykloheptyl, bicykloheptan, cyklooktyl, cyklodecyl, cyklododecyl og adamantyl.

Betegnelsene "heterocykel", "heterocyklisk" og "heterocyklo" refererer hver til en fullstendig mettet eller delvis umettet ikke-aromatisk cyklisk gruppe, som kan være substituert eller usubstituert, for eksempel, som er et 4 til 7 leddet monocyklisk, 7 til 11 leddet bicyklisk, eller 10 til 15 leddet tricyklisk ringsystem, mens et heteroatom i minst en karbonatom-inneholdende ring. Hver ring av den heterocykliske gruppen inneholdende et heteroatom kan ha 1, 2 eller 3 heteroatomer valgt fra nitrogen, oksygen og svovelatomer, hvor nitrogen og svovelatomene også eventuelt kan være oksidert og nitrogenheteroatomene kan også eventuelt være kvaterniserte. Det er foretrukket at to ved siden av liggende heteroatomer ikke blir samtidig valgt fra oksygen og nitrogen. Den heterocykliske gruppen kan være bundet ved et hvilket som helst nitrogen eller karbonatom. Den heterocykliske gruppen kan være bundet ved et hvilket som helst nitrogen eller karbonatom. De heterocykliske gruppene kan ha eventuelt 0 til 3 (fortrinnsvis 0-2) substituenter valgt fra keto (=0) og/eller en flere Rcgrupper, som angitt ovenfor, som igjen kan være substituert med 1 til 3 R4grupper, også som angitt ovenfor.

Eksempler på monocykliske heterocykliske grupper innbefatter pyrrolidinyl, pyrrolyl, indolyl, pyrazolyl, oksetanyl, pyrazolinyl, imidazolyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, oksazolyl, oksazolidinyl, isoksazolinyl, isoksazolyl, tiazolyl, tiadiazolyl, tiazolidinyl, isotiazolyl, isotiazolidinyl, furyl, tetrahydrofuryl, tienyl, oksadiazolyl, piperidinyl, piperazinyl, 2-oksopiperazinyl, 2-oksopiperidinyl, 2-oksopyrrolidinyl, 2-oksazepinyl, azepinyl, 4-piperidonyl, pyridyl, N-okso-pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, tetrahydropyranyl, morfolinyl, tiamorfolinyl, tiamorfolinylsulfoksid, tiamorfolinylsulfon, 1,3-dioksolan og tetrahydro-1,1-dioksotienyl, dioksanyl, isotiazolidinyl, tietanyl, tiiranyl, triazinyl og trazolyl og lignende.

Eksempler på bicykliske heterocykliske grupper innbefatter 2,3-dihydro-2-okso-1 H-indolyl, benzotiazolyl, benzoksazolyl, benzotienyl, kinuklidinyl, kinolinyl, kinolinyl-N-oksid, tetrahydroisokinolinyl, isokinolinyl, benzimidazolyl, benzopyranyl, indolizinyl, benzofuryl, kromonyl, coumarinyl, cinnolinyl, kinoksalinyl, indazolyl, pyrrolopyridyl, furopyridinyl (så som furo[2,3-c]pyridinyl, furo[3,1-b]pyridinyl] eller furo[2,3-b]pyridinyl), dihydroisoindolyl, dihydrokinazolinyl (så som 3,4-dihydro-4-okso-kinazolinyl), benzisotiazolyl, benzisoksazolyl, benzodiazinyl, benzofurazanyl, benzotiopyranyl, benzotriazolyl, benzpyrazolyl, dihydrobenzofuryl, dihydrobenzotienyl, dihydrobenzotiopyranyl, dihydrobenzotiopyranylsulfon, dihydrobenzopyranyl, indolinyl, isokromanyl, isoindolinyl, nafthyridinyl, ftalazinyl, piperonyl, purinyl, pyridopyridyl, kinazolinyl, tetrahydrokinolinyl, tienofuryl, tienopyridyl, tienotienyl og lignende.

Også inkludert er mindre heterocykliske grupper, så som epoksider og aziridiner.

Dersom ikke annet er angitt, når det refereres til en spesifikk angitt aryl (for eksempel fenyl), cykloalkyl (for eksempel cykloheksyl), heterocyklo (for eksempel pyrrolidinyl) eller heteroaryl (for eksempel indolyl), skal referansen inkludere ringer med 0 til 3, fortrinnsvis 0-2, substituenter valgt fra de som er angitt ovenfor for aryl, cykloalkyl, heterocyklo og/eller heteroarylgrupper, etter behov. Ytterligere, når det refereres til en spesifikk heteroaryl eller heterocyklogruppe er referansen men å innbefatte de systemene med maksimalt antall av ikke-kumulative dobbeltbindinger eller mindre enn det maksimale antallet dobbeltbindinger. Derfor refererer for eksempel betegnelsen "isokinolin" til isokinoline og tetrahydroisokinoline.

I tillegg, er det underforstått at fagfolk innenfor dette området kan gjøre hensiktsmessige valgt for substituenter for aryl, cykloalkyl, heterocyklo og heteroarylgruppene for å tilveiebringe stabile forbindelser og forbindelser som er nyttige som farmasøytisk-akseptable forbindelser og/eller mellomprodukter nyttige for å danne farmasøytisk akseptable forbindelser. Dermed for eksempel, i forbindelser med formel (I) når B er en cyklopropylring har ringen fortrinnsvis ikke mer enn to substituenter, og nevnte substituenter omfatter fortrinnsvis ikke nitro (NO2), mer enn en cyanogruppe eller tre halogengrupper. Likeledes, når m er 3, er fortrinnsvis R6, substituentene på fenyl ring A, ikke alle nitro, og så videre.

Betegnelsen "heteroatomer" skal innbefatte oksygen, svovel og nitrogen.

Betegnelsen "halogenalkyl" betyr en alkyl med en eller flere halogensubstituenter.

Betegnelsen "perfluormetyl" betyr en metylgruppe substituert med en, to eller tre fluoratomer, dvs. CH2F, CHF2og CF3. Betegnelsen "perfluoralkyl" betyr en alkylgruppe med fra en til fem fluoratomer, så som pentafluoretyl.

Betegnelsen "halogenalkoksy" betyr en alkoksygruppe med en eller flere halogensubstituenter. For eksempel innbefatter "halogenalkoksy" -OCF3.

Betegnelsen "karbocyklisk" betyr en mettet eller umettet monocyklisk eller bicyklisk ring hvor alle atomene til alle ringene er karbon. Følgelig innbefatter betegnelsen cykloalkyl og arylringer. Den karbocykliske ringen kan være substituert i hvilket tilfellet substituentene er valgt fra de som er angitt ovenfor for cykloalkyl og arylgrupper.

Når betegnelsen "umettet" blir anvendt heri og referere til en ring eller gruppe kan ringen eller gruppen være fullstendig umettet eller delvis umettet.

Definisjoner for forskjellige andre grupper som er angitt ovenfor i sammenheng med substituert alkyl, substituert alkenyl, aryl, cykloalkyl og så videre er som følger: alkoksy er -ORe, alkanoyl er -C(=0)R<e>, aryloksy er -OAr, alkanoyloksy er -OC(=0)R<e>, amino er -NH2, alkylamino er -NHR<e>eller -N(R<e>)2, arylamino er

-NHAr eller -NR<e>At, aralkylamino er -NH-Rf-Ar, alkanoylamino er -NH-C(=0)R<e>, aroylamino er-NH-C(=0)Ar, aralkanoylamino er-NH-C(=0)Rf-Ar, tiol er -SH, alkyltio er -SR<e>, aryltio er -SAr, aralkyltio er -S-Rf-Ar, alkyltiono er - S(=0)R<e>, aryltiono er -S(=0)Ar, aralkyltiono er -S(=0)R<f>-Ar, alkylsulfonyl er - SO(q)R<e>, arylsulfonyl er-SO(q)Ar, arylsulfonylamin er -NHSO(q)Ar, alkylsulfonylamin er -NHS02Re, aralkylsulfonyl er -SO(q>R<f>Ar, sulfonamido er-S02NH2, substituert sulfonamid er-S02NHR<e>er-S02N(R<e>)2, nitro er-N02, karboksy er-C02H, karbamyl er-CONH2, substituert karbamyl er-C(=0)NHR<9>eller-C(=0)NR<9>R<h>, alkoksykarbonyl er-C(=0)OR<e>, karboksylalkyl er-Rf-C02H, sulfonamidsyre er-S03H, arylsulfonylamin

Re er alkyl eller substituert alkyl som definert ovenfor, Rf er alkylen eller substituert alkylen som definert ovenfor, R<9>og Rh er valgt fra alkyl, substituert alkyl, aryl, aralkyl, cykloalkyl, heterocyklo og heteroaryl; Ar er en aryl som definert ovenfor, og q er 2 eller 3.

I beskrivelsen kan grupper og substituenter derav bli valgt av fagfolk innenfor dette området for å tilveiebringe stabile grupper og forbindelser. Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan danne salter som også hører inn under rammen av denne oppfinnelsen. Farmasøytisk akseptable (dvs. ikke-toksiske, fysiologisk akseptable) salter er foretrukket til tross for at andre salter også er nyttige, for eksempel for isolering eller rensing av forbindelsene ifølge denne oppfinnelsen.

Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan danne salter med alkalimetaller så som natrium, kalium og litium, i det jordalkaliske metaller så som kalsium og magnesium, med organiske baser så som dicykloheksylamin, tributylamin, pyridin og aminosyrer så som arginin, lysin og lignende. Slike salter kan bli dannet som kjent for fagfolk innenfor dette området.

Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan danne salter med forskjellige organiske og uorganiske syrer. Slike salter innbefatter de som blir dannet med hydrogenklorid, hydrogenbromid, metansulfonsyre, svovelsyre, eddiksyre, trifluoreddiksyre, oksalsyre, maleinsyre, benzensulfonsyre, toluensulfonsyre og forskjellige andre (for eksempel nitrater, fosfater, borater, tartrater, citrater, suksinater, benzoater, askorbater, salicylater og lignende). Slike salter kan bli dannet som kjent for fagfolk innenfor dette området. Saltformer av forbindelsene kan være fordelaktig for å forbedre oppløsningsraten til forbindelsen og den orale biotilgjengeligheten.

I tillegg kan zwitterioner ("indre salter") bli dannet.

Alle stereoisomerene av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kommer i betraktning, enten blandet sammen eller i ren eller vesentlig ren form. Definisjonen på forbindelser ifølge oppfinnelsen omfatter alle mulige stereoisomerer og blandinger derav. Det omfatter racemiske former og isolerte og optiske isomerer med den spesifiserte aktiviteten. De racemiske formene kan bli oppløst ved fysiske metoder, så som, for eksempel, fraksonskrystallisering, separering eller krystallisering av diastereomere derivater eller separering ved chiral kolonnekromatografi. De individulle optiske isomerene kan bli oppnådd fra racematene ifølge de konvensjonelle metodene, så som, for eksempel, saltdannelse med en optisk aktiv syre etterfulgt av krystallisering.

Det er videre underforstått at solvater (for eksempel hydrater) av forbindelsene med formel (I) også hører inn under rammen av foreliggende oppfinnelse. Metoder for oppløsning er generelt kjent innenfor fagområdet.

Foreliggende oppfinnelse vedrører videre forbindelse med formelen (2a) eller (2b),

eller en enantiomer, diastereomer eller salt, derav, hvor:

R3er metyl eller CF3;

R+aer fenyl eller fem eller seks leddet heteroaryl eventuelt substituert med opptil to Ri6;

R*ber lineær eller forgrenet C2-6alkyl; cykloalkyl eventuelt substituert med keto og/eller opptil to_Ri6; heterocyklisk gruppe eventuelt substituert med keto og/eller opptil to R16; eller Ci^alkyl substituert med opptil tre av halogen, trifluormetyl, cyano, hydroksy, alkoksy, halogenalkyl, halogenalkoksy, nitro, fenyl, fenyloksy eller benzyloksy, hvor nevnte fenyl eller benzylgruppe videre er eventuelt substituert med én til to R26;

R6aer Ci^alkyl, halogen, trifluormetoksy, trifluormetyl, hydroksy, Ci^alkoksy, amino, Ci^alkylalmino eller cyano;

B er valgt fra fenyl substituert med heterocyklo og opptil to R12, cyklopropyl eller cyklobutyl idet hvilken som eventuelt kan være eventuelt substituert med én til to R7eller B er valgt fra én av:

R7 er Ci^alkyl, trifluormetyl, trifluormetoksy, halogen, cyano, nitro, amino, Ci-4alkylalmino, hydroksy, d^alkoksy, fenyl, benzyl, fenyloksy eller benzyloksy; R12 og R16er ved hver forekomst uavhengig valgt fra hydrogen, alkyl, trifluormetyl, trifluormetoksy, halogen, cyano, nitro, amino, Ci^alkylalmino, hydroksy, alkoksy, fenyl, benzyl, fenyloksy og benzyloksy;

R26er ved hver forekomst valgt fra Ci^alkyl, trifluormetyl, trifluormetoksy, halogen, cyano, amino, Ci^alkylalmino, hydroksy, alkoksy, fenyl, benzyl, fenyloksy og benzyloksy;

n er 0 eller 1.

Oppfinnelsen vedrører videre forbindelse eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, hvor B er cyklopropyl eventuelt substituert med én til to R7eller B er valgt fra: Foreliggende oppfinnelse vedrører videre forbindelse som er valgt fra

salter derav.

Videre vedrører foreliggende oppfinnelse forbindelse som er valgt fra

enantiomerer, diasteriomerer og salter derav. En foretrukket forbindelse ifølge oppfinnelsen er

og enantiomerer, diasteriomerer og salter derav.

Videre omfatter oppfinnelsen en foretrukket forbindelse med formelen:

eller en enantiomer, diastereomer eller et

farmasøytisk akseptabelt salt derav.

Oppfinnelsen vedrører videre farmasøytisk preparat som inneholder forbindelsen ifølge krav 10 og en farmasøytisk akseptabel bærer eller fortynningsmiddel.

Det er videre beskrevet preparat ifølge krav 11 som er for behandling av en inflammatorisk lidelse. Den inflammatoriske lidelsen er valgt fra astma, åndenødssyndrom hos voksne, kronisk obstruktiv lungesykdom, kronisk pulmonal inflammatorisk sykdom, diabetes, inflammatorisk tarmsykdom, osteoporose, psoriasis, graft vs. vert avvisning, aterosklerose og artritt omfattende rhematoid artritt, psoriatisk artritt, traumatisk_artritt, rubella artritt, giktisk artritt og osteoartritt.

Anvendbarhet

Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse er selektive inhibitorer av p38 kinase aktivitet, og spesielt, isoformene p38a og p38p. Forbindelsene ifølge formel (I) kan anvendes for behandling av tilstander assosiert med p38 kinase aktivitet. Slike tilstander innbefatter sykdommer hvor cytokinnivåer blir modulert som en konsekvens av intracellulær signalisering via p38, og spesielt, sykdommer som er assosiert med en overproduksjon av cytokinene IL-1, IL-4, IL-8 og TNF-a. Som anvendt heri omfatter betegnelsene "å behandle" eller "behandling" enten eller både responsiv og profylaksemål, for eksempel målinger konstruert for å inhibere eller forsinke begynnelse av sykdom eller forstyrrelse, oppnå en fullstendig eller delvis reduksjon av symptomene eller sykdomstilstand, og/eller å lindre, gjøre mindre eller lege sykdommen eller forstyrrelse og/eller symptomene derav. Når det refereres heri til inhibisjon av "p-38a/p kinase" betyr dette at enten p38a og/eller p38p kinase blir inhibert. Referanse til en IC50verdi for inhibering av p-38a/p kinase betyr følgelig at forbindelsen har en slik effektivitet for å hemme minst en av, eller både p38a og p38p kinaser.

I lys av deres aktivitet som inhibitorer av p-38a/p kinase er forbindelsene med formel (I) nyttige for behandling av p-38 assosierte tilstander som inkluderer, men er ikke begrenset til, inflammatoriske sykdommer, autoimmune sykdommer, destruktive benforstyrrelser, proliferative forstyrrelser, angiogene forstyrrelser, infeksiøse sykdommer, neurodegenerative sykdommer og virale sykdommer.

Mer spesielt innbefatter spesifikke tilstander eller sykdommer som kan bli behandlet med forbindelsene ifølge oppfinnelsen pankreatitt (akutt eller kronisk), astma, allergier, respiratorisk distressyndrom hos voksne, kronisk obstruktiv lungesykdom, glomerulonefritt, revmatoid artritt, systemisk lupus erytematosis, skleroderm, kronisk tyroiditt, Graves sykdom, autoimmun gastritt, diabetes, autoimmun hemolyttisk anemi, autoimmun neutropeni, trombocytopeni, atopisk dermatitt, kronisk aktiv hepatitt, myastenia gravis, multippel sklerose, inflammatorisk tarmsykdom, ulcerativ kolitt, Chrons sykdom, psoriasis, graft vs. host sykdom, inflammatorisk reaksjon indusert av endotoksin, tuberkulose, aterosklerose, muskel degenerasjon, kakheksi, psoriatisk artritt, Reiters syndrom, gout, traumatisk artritt, rubella artritt, akutt synovitt, pankreatisk p-celle sykdom; sykdommer kjennetegnet ved massiv neutrofil infiltrering; revmatoid spondulitt, giktisk artritt og andre artritt tilstander, cerebral malaria, kronisk lungeinflammatorisk sykdom, silikose, lunge sarkoisose, benresorpsjonssykdom, allograftavstøtninger, feber og myalgier grunnet infeksjon, kakheksi sekundært for infeksjon, meloid dannelse, arrvevsdannelse, ulcerativ kolitt, pyrese, influensa, osteoporose, osteoartritt og multippel myelom-relatert benforstyrrelse, akutt myelogen leukemi, kronisk myelogen leukemi, metastatisk melanom, Kaposis sarkom, multippel myelom, sepsis, septisk sjokk og Shigellose; Alzheimers sykdom, Parkinsons sykdom, cerebral ischemi eller neurodegenerativ sykdom forårsaket av traumatisk skade; angiogene forstyrrelser som innbefatter faste tumorer, okkulær neovaskularisering, og infantile haemangiomer; virale sykdommer som innbefatter akutt hepatitt infeksjon (inkludert hepatitt A, hepatitt B og hepatitt C), HIV infeksjon og CMV retinitt, AIDS, ARC eller malignhet, og herpes; slag, myokardial ischemi, ischemi i hjerteinfarkt, organ hyposi, vaskulær hyperplasi, hjerte og renal reperfusjonsskade, trombose, hjertehypertrofi, trombin-indusert blodaggregasjon, endotoksemi og/eller toksisk sjokksyndrom, og tilstander assosiert med prostaglandin endoperoksidase syndase-2.

I tillegg hemmer p38 inhibitorene ekspresjonen av induserbare proinflammatoriske proteiner så som prostaglandin endoperoksid syntase-2 (PGHS-2), også referert til som cyklooksygenase-2 (COX-2). Følgelig innbefatter ytterligere p38-assosierte tilstander ødem, analgesi, feber og smerte, så som neuromuskulær smerte, hodepine, smerte forårsaket av cancer, tannpine og artrittsmerte. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan også bli anvendt for å behandle veterinær virale infeksjoner, så som lentivirus infeksjoner, ekvine infeksiøse anemiviruser; eller retrovirus infeksjoner, inkludert felin immunsviktvirus, bovin immunsviktvirus og kanin immunsviktvirus.

Når betegnelsene "p38 assosiert tilstand" eller "p38 assosiert sykdom eller fostyrrelse" blir anvendt heri, er hver ment å omfatte alle tilstandene som er referert ovenfor som om de blir gjentatt i lengde, samt en hvilke som helst annen tilstand som blir påvirket av p38 kinase aktivitet.

p38 kinase-assosierte tilstander kan behandles ved administrering av forbindelsene med formel (I) alene eller i kombinasjon med hverandre og/eller andre egnede terapeutiske midler som er nyttige for behandling av slike tilstander. Eksempler på slike andre terapeutiske midler innbefatter kortikosteroider, rolipram, kalfostin, CSAID, 4-substituerte imidazo [1,2-A]kinoksaliner som beskrevet i US-PS 4.200.750; lnterleukin-10, glukokortikoider, salicylater, nitrogenoksid og andre immunsuppresive midler; nukleære translokasjonsinhibitorer, så som deoksyspergualin (DSG); ikke-steroidale antiinflammatoriske medikamenter (NSAID) så som ibuprofen, celecoxib og rofocoxib; steroider så som prednison eller deksametason; antivirale midler så som abacavir; antiproliferative midler så som metotreksat, leflunomid, FK506 (takrolimus, Prograf); cytotoksiske medikamenter så som azatiprin og cyklofosfamid; TNF-a inhibitorer så som tenidap, anti-TNF antistoffer eller oppløselig TNF-reseptor, og rapamycin (sirolimus eller Rapamune) eller derivater derav.

De ovenfor andre terapeutiske midlene, når anvendt i kombinasjon med forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse, kan for eksempel bli anvendt i de mengdene som er angitt i Physicians' Desk Reference (PDR) eller som bestemt på annen måte av fagfolk innenfor dette området.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer videre som angitt ovenfor også farmasøytiske preparater. Preparatene ifølge oppfinnelsen kan inneholde andre terapeutiske midler som beskrevet ovenfor og kan bli formulert, for eksempel, ved anvendelse av konvensjonelle faste eller flytende bærere eller fortynningsmidler, samt farmasøytiske additiver av en type som er hensiktsmessig for metoden til ønsket administrering (for eksempel eksipienter, bindemidler, stabiliseringsmidler, smaksstoffer osv.) ifølge teknikker som de som er velkjente innenfor fagområdet farmasøytisk formulering.

Forbindelsene med formel (I) kan bli administrert ved hvilke som helst metoder egnede for tilstanden som skal bli behandlet, som kan avhenge av behovet for sete-spesifikk behandling eller mengden av medikamentet som skal bli levert. Topisk administrering er generelt foretrukket for hud-relaterte sykdommer, og systematisk behandling foretrukket for cancer eller pre-cancerøse tilstander, til tross for at andre metoder for levering også kommer i betraktning. For eksempel kan forbindelsene bli levert oralt, så som i form av tabletter, kapsler, granuler, pulvere, eller flytende formuleringer som innbefatter siruper; topisk, så som i form av løsninger, suspensjoner, geler eller salver; sublingual; bukkal; parenteralt; så som ved subkutan, intravenøs, intramuskulær eller intrasternal injeksjons- eller infusjonsteknikker (for eksempel som sterile injiserbare aq. eller ikke aq. løsninger eller suspensjoner); nasalt så som ved inhaleringsspray; topisk, så som i form av en krem eller en salve; rektalt så som i form av suppositorier; eller liposomalt. Doseringsenhetsformuleringer inneholdende ikke-toksiske, farmasøytisk akseptable bærere eller fortynningsmidler kan bli administrert. Forbindelsene kan bli administrert i en form egnet for øyeblikkelig frigjøring eller utvidet frigjøring. Øyeblikkelig frigjøring eller utvidet frigjøring kan bli oppnådd med egnede farmasøytiske sammensetninger eller, spesielt når det gjelder forlenget frigjøring, med innretninger så som subkutane implantater eller osmotiske pumper.

Eksempler på sammensetninger for topisk administrering innbefatter en topisk bærer så som PLASTIBASE® (mineralolje geldannet med polyetylen).

Eksempler på sammensetninger for oral administrering innbefatter suspensjoner som kan inneholde, for eksempel, mikrokrystallinsk cellulose for å oppnå masse, alginsyre eller natriumalginat som et suspenderingsmiddel, metylcellulose et viskositetsfremmende middel, og søtningsmidler eller smaksmidler så som de som er kjent innenfor fagområdet; og tabletter med øyeblikkelig frigjøring som kan inneholde, for eksempel, krystallinsk cellulose, dikalsiumfosfat, stivelse, magnesiumstearat og/eller laktose og/eller andre eksipienter, bindemidler, utvidende midler, oppløsningsmidler, fortynningsmidler eller smøremidler som de som er kjent innenfor fagområdet. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan også bli levert oralt ved sublingual og/eller bukkal administrering, foreksempel, med støpte, komprimerte ellerfrysetørkede tabletter. Eksempler på sammensetninger kan innbefatte hurtig-oppløsenede fortynningsmidler så som mannitol, laktose, sukrose og/eller cyklodekstriner. Også inkludert i slike formuleringer kan veie eksipienter med høy molekylvekt så som celluloser (AVICEL®) eller polyetylenglykoler (PEG); en eksipient for å hjelpe mukosal adhesjon så som hydroksypropylcellulose (HPC), hydroksypropylmetylcellulose (HPMC), natriumkarboksymetylcellulose (SCMC), og/eller maleinsyre anhydrid kopolymer (for eksempel GANTREZ®); og midler for å kontrollere frigjøring så som polyakrylkopolymer (for eksempel CARBOPOL 934®). Smøremidler, glidemidler, smaksmidler, fargemidler og stabiliseringsmidler kan også bli tilsatt for å hjelpe med fremstilling og anvendelse.

Eksempler på sammensetninger for nasal aerosol eller

inhaleringsadministrering innbefatter løsninger som kan inneholde, for eksempel, benzylalkohol eller andre egnede konserveringsmidler, absorpsjonsfremmende midler for å øke absorpsjon og/eller biotilgjengeligheten og/eller andre oppløsningsmidler eller dispergeringsmidler som de som er kjent innenfor fagområdet.

Eksempler på sammensetninger for parenteral administrering innbefatter injiserbare løsninger eller suspensjoner som kan inneholde, for eksempel, egnede ikke-toksiske, fortrinnsvis egnede fortynningsmidler eller løsningsmidler, så som mannitol, 1,3-butandiol, vann, Ringers løsning, en isotonisk natriumkloridløsning, eller andre egnede dispergeringsmidler eller fuktmidler og suspenderingsmidler, inkludert syntetiske mono- eller diglycerider, og fettsyrer, inkludert oljesyre.

Eksempler på sammensetninger for rektal administrering innbefatter suppositorier som kan inneholde, for eksempel, egnede ikke-irriterende eksipienter, så som kakaosmør, syntetiske glyceridestere eller polyetylenglykoler, som er faste ved vanlige temperaturer, men flytende og/eller oppløses i det rektale hulrommet for å frigjøre medikamentet.

Effektiv mengde av en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli bestemt av fagfolk innenfor dette området, og innbefatter eksempelvise doseringsmengder for et pattedyr på fra omtrent 0,05 til 100 mg/kg kroppsvekt av den aktive forbindelsen per dag, som kan bli administrert i en enkeltdose eller i form av individuelt oppdelte dose, så som fra 1 til 4 ganger per dag. Det er underforstått at det spesifikke doseringsnivået og frekvens av dosering for et bestemt individ kan varieres og vil avhenge av forskjellige faktorer som inkluderer aktiviteten til den spesifikke forbindelsen som blir anvendt, metabolsk stabilitet og lengde på virkningen av den forbindelsen, arten, alder, kroppsvekt, generell helse, kjønn og dietten til individet, metode og tid for administrering, utskillingsrate, medikamentkombinasjon og hvor alvorlig den bestemte tilstanden er. Foretrukne individer for behandling innbefatter dyr, mest foretrukket pattedyrarter så som mennesker, og husdyr så som hunder, katter, hester og lignende. Når betegnelsen "pasient" blir anvendt heri skal denne betegnelsen innbefatte alle individer, mest foretrukket er pattedyrarter, som blir påvirket ved mediering av p38 enzymnivåene.

Forbindelser med formel (I), inkludert forbindelsene beskrevet i eksemplene heri, er blitt testet i en eller flere av analysene beskrevet nedenfor og har vist aktivitet som inhibitorer av p38oc/p enzymer og THF-a.

Biologiske analyser

Dannelse av p38 kinaser

cDNA av humane p38a, p og y isozymer ble klonet ved PCR. Disse cDNA ble subklonet i pGEX ekspresjonsvektor (Pharmacia). GST-p38 fusjonsprotein ble

uttrykt i E. coli og renset fra bakterielle pellets ved affinitetskromatografi ved anvendelse av glutationagarose. p38 fusjonsprotein ble aktivert ved inkubering med konstitutivt aktiv MKK6. Aktiv p38 ble separert fra MKK6 ved affinitetskromatografi. Konstitutiv aktiv MKK6 ble dannet ifølge Raingeaud et al.

[Mol. Cell. Biol., 1247-1255 (1996)].

TNF- g produksjon ved LPS- stimulert PBMC

Heparinisert humant fullblod ble oppnådd fra friske frivillige. Perifere blodmononukleære celler (PBMC) ble renset fra humant fullblod ved Ficoll-Hypaque tetthetsgradientssentrifugering og resuspendert ved en konsentrasjon på 5x10<6>/ml i analysemedium (RPMI medium inneholdende 10% føtalt bovint serum). 50 jaI av cellesuspensjonen ble inkubert med 50 jaI av testforbindelsen (4X konsentrasjon i analysemedium inneholdende 0,2% DMSO) i 96-brønn vevskulturplater i 5 minutter ved RT. 100 ul av LPS (200 ng/ml stamløsning) ble deretter tilsatt til cellesuspensjonen og platen ble inkubert i 6 timer ved 37°C. Etter inkubasjon ble kulturmediet samlet og lagret ved -20°C. TNFa-konsentrasjonen i mediet ble kvantifisert ved anvendelse av et standard ELISA sett (Pharmingen-San Diego, CA). Konsentrasjoner av TNF-a og IC50verdier for testforbindelsene (konsentrasjon av forbindelse som hemmer LPS-stimulert TNF-a produksjon med 50%) ble beregnet ved lineær regressjonsanalyse.

p38 analyse

Analysene ble utført i V-bunnede 96-brønn plater. Det endelige analysevolumet var 60 ul og dannet ut fra tre 20 ul tilsetninger av enzym, substrater (MBP og ATP) og testforbindelser i analysebuffer (50 mM Tris pH 7,5, 10 mM MgCb, 50 mM NaCI og 1 mM DTT). Bakterielt uttrykt, aktivert p38 ble pre-inkubert med testforbindelser i 10 min. før initiering av reaksjonen med substrater. Reaksjonen ble inkubert ved 25°C i 45 minutter og avsluttet ved tilsetning av 5 fil 0,5 M EDTA til hver prøve. Reaksjonsblandingen ble utsugd på et på forhånd fuktet filtermatte ved anvendelse av en Skatron Micro96 Cell Harvester (Skatron, Inc.), og deretter vasket med PBS. Filtermatten ble deretter tørket i en mikrobølgeovn i 1 min. og behandlet med MeltilLex A scintillasjonsvoks (Wallac) og opptelt på en Microbeta scintillasjonsteller modell 1450 (Wallac). Inhibisjonsdata ble analysert ved ikke-lineær minste kvadratregressjon ved anvendelse av Prizm (GraphPadSoftware). Den endelige konsentrasjonen av reagensene i analysene er ATP, 1 \ iM; [y-<33>P] ATP, 3 nM; MBP (Sigma, #M1891), 2 ug/brønn; p38, 10 nM; og DMSO, 0,3%.

TNF- g produksjon av LPS- stimulerte mus

Mus (balb/c hunkjønn, 6-8 uker gamle, Harlan Labs; n=8/behandlingsgruppe) ble injisert intraperitonealt med 50 ug/kg lipopolysakkarid (LPS; E coli stamme 0111 :B4; Sigma) suspendert i sterilt saltvann. 90 minutter senere ble musene bedøvd ved C02:02inhalering og en blodprøve ble oppnådd. Serum ble separert og analysert for TNF-alfa konsentrasjoner ved kommersiell ELISA analyse ifølge fremstillerens instruksjoner (R&D Systems, Minneapolis, MN).

Testforbindelser ble administrert oralt ved forskjellige tidspunkter før LPS injeksjon. Forbindelsene ble dosert enten som suspensjoner eller som løsninger i forskjellige bærere eller oppløsningsmidler.

Forkortelser

For å lette referansen blir følgende forkortelser anvendt heri, inkludert metoder for fremstilling og eksempler som følger:

Ph = fenyl

Bz = benzyl

t-Bu - tertiær butyl

Me - metyl

Et = etyl

Pr - propyl

Iso-P = isopropyl

MeOH= metanol

EtOH =etanol

EtOAc= etylacetat

Boe = tert-butyloksykarbonyl

DCM = diklormetan

DCE = 1,2-dikloretan

DMF = dimetylformamid

DMSO= dimetylsulfoksid

TFA = trifluoreddiksyre

THF = tetrahydrofuran

HATU = 0-(7-azabenzotriazol-1-yl-N,N,N',N'-tetrametyluronim heksafluorfosfat

KOH = kaliumhydroksid

K2C03= kaliumkarbonat

POCI3= fosforokcyklorid

EDC eller EDCI = 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid hydroklorid DIPEA= diisopropyletylamin

HOBt = 1-hydroksybenzotriazolhydrat

m-CPBA= m-klorperbenzosyre

NaH = natriumhydrid

NaOH = natriumhydroksid

Pd = palladium

Pd/C = palladium på karbon

min = minutt(er)

L = liter

ml_ = milliliter

fil_ = mikroliter

g = gram

mg - milligram

mol = mol

mmol = millimol

meq = milliekvivalent

RT eller rt = romtemperatur

ret. t = HPLC retensjonstid (minutter)

met = mettet

aq. = vandig

TLC = tynnsjiktskromatografi

HPLC = høy ytelse væskekromatografi

RP HPLC = revers fase HPLC

LC/MS = høy ytelse væskekromatografi/massespektrometri

MS = massespektrometri

NMR = nukleær magnetisk resonans

smp - smeltepunkt

I eksemplene reflekterer angivelser assosiert med HPLC data følgende betingelser: a. kolonne: YMC ODSA S-5 5u C18 4,6 x 50 mm; løsningsmiddel: løsningsmiddel A = 10% MeOH/90% vann/0,1% THF og løsningsmiddel B = 90% MeOH/10% vann/0,1% THF; fremgangsmåte: 4 min. gradient; b. kolonne: YMC s5 ODS 4,6 x 50 mm; løsningsmiddel: løsningsmiddel A = 10% MeOH/90% vann/0,2% H3P04og løsningsmiddel B = 90% MeOH/10% vann/0,2% H3P04;

fremgangsmåte: 4 min. gradient.

Fremgangsmåte for fremstilling

Forbindelser med formel I kan generelt bli fremstilt ifølge følgende skjemaer og kunnskap til fagfolk innenfor dette området, og/eller fremgangsmåtene beskrevet i US patent søknader med serie nr. 10/036,293 og/eller 09/573.829, innkorporert heri som referanse. I skjemaene blir gruppene R1-R7, X, Y, m, n og p beskrevet heri for forbindelser med formel (I). Referanse til "B" er ment å omfatte en eventuell-substituert cykloalkyl, heterocyklo eller heteroarylring i formel (I), inkludert uten begrensning ringene vist som:

Kommersielt tilgjengelig forbindelse (1) kan bli omsatt med oksalylklorid med oppvarming og deretter konsentrert i vakuum og omsatt med et amin B-NH2i nærvær av en base, så som diisopropylamin, i et organisk løsningsmiddel, så som DCM for å gi forbindelse (2). Forbindelse (2) kan bli omsatt med hydrogen i nærvær av en katalysator, så som Pd, i et alkoholholdig løsningsmiddel, så som EtOH, ved rt for å gi forbindelse (3). Forbindelse (3) kan deretter bli anvendt som i skjema 2 for å danne forbindelsene (8) i skjema 2.

3-metyl-1-pyrrol-2,4-dietylester kan bli omsatt med kloramin i eter for å danne forbindelse (4). Omsetning av forbindelse (4) i formamid med eddiksyre danner forbindelse (5). Forbindelse (5) kan bli omsatt med DIPEA og POCI3i toluen for å danne forbindelse (6). Forbindelse (6) kan bli omsatt med DIPEA og forbindelse (3) i DM F for å danne forbindelse 7. Forbindelse (7) kan bli omsatt i THF med NaOH for å danne et syremellomprodukt som ved behandling med HOBt, EDCI og hensiktsmessig amin (NR2R10) i DMF produserer forbindelsene (8).

Forbindelse (3) kan bli fremstilt ved 1) omsetning av kommersielt tilgjengelig 4-amino-3-metylbenzosyre og N-(tert-butoksykarbonyl)anhydrid i THF for å danne et BOC-beskyttet anilin mellomprodukt; 2) omsetning av anilin mellomproduktet med -(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid hydroklorid, HOBt, og DM F, etterfulgt av tilsetning av metoksyaminhydroklorid og DIPEA for å danne et BOC-beskyttet N-metoksyamid mellomprodukt; og 3) omsetning av det metoksyamid mellomproduktet i en løsning av HCI i dioksan for å danne forbindelse (3) som et hydrokloridsalt. Alternativt kan forbindelse (3) bli fremstilt som vist i skjema 1.

Et substituert hydroksamat (9) kan bli omsatt med syre, så som HCI, i vandig MeOH, for å gi forbindelse (10). Forbindelse (10) kan deretter bli omsatt med en aq. base så som KOH med oppvarming for å danne forbindelse (11). Forbindelse (11) blir omsatt med et amin B-NH2i nærvær av et koblingsreagens så som HATU, og en base så som diisopropylamin, i et organisk løsningsmiddel, så som N-metylpyrrolidinon for å gi forbindelsene (12). Hydroksamat (9) kan bli fremstilt som beskrevet i skjemaene 1 og 2 og/eller som vist i US-patentsøknad serie nr. 10/036.293.

Kommersiell tilgjengelig forbindelse (13) kan bli omsatt med et sulfonylklorid i nærvær av en base, så som TEA i et organisk løsningsmiddel, så som DCM for å gi forbindelsen (14). Omsetning av forbindelsen (14) med hydrogen i nærvær av en katalysator så som Pd i et løsningsmiddel, så som MeOH gir forbindelse (15). Omsetning av forbindelsen (15) med klorid (6) (se skjema 2) i et organisk løsningsmiddel, så som DMF, ved rt gir forbindelsen (16).

Omsetning av forbindelse (16) med aq. KOH med oppvarming gir forbindelsen (17). Forbindelsen (17) kan bli omsatt med et amin R2NH2i nærvær av et koblingsreagens, så som EDCI, og en base så som diisopropylamin i et organisk løsningsmiddel så som DMF for å gi forbindelse (18). Klorpyrrolotriazin (6) (se skjema 2) kan bli omsatt med et anilin (13) (for eksempel se skjema 4) i vannfri DMF ved rt for å gi forbindelse (19). Omsetning av forbindelse (19) med en aq. base så som NaOH med oppvarming gir forbindelse (20). Forbindelse (20) kan bli omsatt med et amin R4NH2i nærvær av et koblingsreagens, så som HOBt, med eller uten en base så som diisopropylamin, i et organisk løsningsmiddel, så som DMF for å gi forbindelse (21). Forbindelse (21) kan deretter bli omsatt med hydrogen i nærvær av en katalysator, så som Pd/C, i et organisk løsningsmiddel, så som MeOH for å gi forbindelse (22). Omsetning av forbindelse (22) med et isocyanat i et organisk løsningsmiddel, så som DCE gir forbindelsen (23).

Kommersielt tilgjengelig forbindelse (13) kan bli omsatt med karbonyldiimidazol og et amin B-NH2i et organisk løsningsmiddel, så som DCE, for å gi forbindelse (24). Omsetning av forbindelse (24) med hydrogen i nærvær av en katalysator, så som Pd, i et alkoholholdig løsningsmiddel så som EtOH gir forbindelse (25). Omsetning av (25) med klorid (6) i et organisk løsningsmiddel, så som DMF, gir forbindelse (26). Omsetning av (26) med aq. NaOH med oppvarming gir produktet (27). Produktet (27) kan bli omsatt med et amin R4NH2i nærvær av et koblingsreagens, så som EDCI, og en base så som diisopropylamin, i et organisk løsningsmiddel, så som DMF for å gi forbindelse (28).

Skjema 7 viser fremgangsmåte for fremstilling av forbindelsene (4a) (se skjema 2), hvor R3er amino (4b), halogen (4c), eller cyano (4d). Glycinetylester (29) kan bli tilsatt til et alkylalkoksymetylencyanoacetat ved fra rt til 80°C for å oppnå forbindelse (30). Forbindelse (30) blir syklisert for å danne pyrrol (4b) ved behandling med en sterk base, så som litiumheksametyldisilazan, ved fra -78°C til rt i et organisk løsningsmiddel så som THF. Pyrrol (4b) kan bli omdannet til et halid ved anvendelse av natriumnitritt i et organisk løsningsmiddel, så som DMF, og en halidkilde, så som CuBr for å gi forbindelse (4c). Forbindelse (4c) kan bli omdannet til forbindelse (4d) ved anvendelse av CuCN i et organisk løsningsmiddel så som NMP ved forhøyede temperaturer. Alternativt kan forbindelse (4b) bli direkte omdannet til forbindelse (4d) ved anvendelse av natriumnitritt i et organisk løsningsmiddel, så som DMF, og en cyanidkilde så som CuCN. Forbindelsene (4a)-(4d) kan bli anvendt som beskrevet i tidligere skjemaer (for eksempel skjema 2) for å danne forbindelser med formel (I) heri. Reduksjon av estergruppen til pyrralotriazin 5 (se skjema 2) med et egnet reduksjonsmiddel så som LAH i et aprotisk organisk løsningsmiddel så som THF produserer alkoholen (31). Alkoholen (31) blir oksidert for å gi aldehydet (32) med en egnet oksidant, så som Jones reagens. Aldehydet (32) blir omsatt med et egnet organometallisk reagens (så som fenylmagnesiumbromid) for å gi intermediær sekundær alkoholprodukt som deretter blir oksidert til keton (33) med en egnet oksidant, så som Jones reagens. Et klorineringsmiddel, så som POCI3, blir anvendt for å omdanne (33) til klorid (34). Klorid (34) blir omsatt med et anilin i et egnet løsningsmiddel, så som DMF, ved rt eller forhøyet temperatur for å gi produktet (35), en forbindelse med formel (I).

Kobling av forbindelse (6) (se skjema 2) med en hensiktsmessig aminobenzosyre i DMF for å gi forbindelse (36). Reduksjon av estergruppen til forbindelse (36), med et egnet reduksjonsmiddel så som DIBAL-H i et aprotisk organisk løsningsmiddel så som THF produserer alkoholen (37). Alkohol (37) kan bli omsatt med et amin RNH2i nærvær av et koblingsreagens, så som BOP, i et organisk løsningsmiddel, så som DMF, for å gi produktet (38). Produktet (38) blir oksidert til aldehyd (39) med en egnet oksidant, så som Mn02, i et organisk løsningsmiddel så som THF. Aldehydet (39) blir omsatt med et egnet organometallisk reagens (så som fenylmagnesiumbromid) for å gi et intermediært sekundært alkoholprodukt som deretter blir oksidert til keton (40) med en egnet oksidant, så som PCC.

I tillegg kan andre forbindelser med formel I bli fremstilt ved anvendelse av prosedyrer som generelt er kjente for fagfolk innenfor dette området. Spesielt følgende eksempler gir ytterligere metoder for fremstilling av forbindelsene ifølge denne oppfinnelsen.

Oppfinnelsen vil nå bli ytterligere beskrevet ved følgende arbeidseksempler som er foretrukne utførelsesformer av oppfinnelsen. HPLC rensninger ble utført på C18 revers fase (RP) kolonner ved anvendelse avvann MeOH blandinger og TFA som bufferløsning. Disse eksemplene er illustrerende og ikke begrensende. Det kan være andre utførelsesformer som faller inn under rammen og ånden til oppfinnelsen som definert i vedlagte krav.

Eksempel 1

Til en løsning av 3-amino-4-metylbenzosyre (5,12 g, 33,9 mmol, 1,0 ekv.), EDC (9,97 g, 52,0 mol, 1,5 ekv.) og 4-(dimetylamino)pyridin (0,89 g, 7,3 mol, 0,2 ekv.) i DMF (100 ml) ved 0°C ble det dråpevis tilsatt cyklopropylamin (4,0 ml, 57,7 mol, 1,7 ekv.). Etter omrøring i 15 minutter ble det kalde badet fjernet, og reaksjonsblandingen ble omrørt ved rt over natt. De flyktige stoffene ble fjernet ved 50^ under redusert trykk. Resten ble fortynnet med vann og ekstrahert med DCM (3x). De organiske lagene ble deretter kombinert, tørket over natriumsulfat og konsentrert i vakuum for å gi en olje. Silikagelkromatografi ved anvendelse av DCM:MeOH (20:1) ga forbindelse 1A som en gul olje (6,98 g, 108% utbytte). HPLC ret. t. = 0,637 min.; LC/MS (M+H)<+>= 191,09<+>.

Trinn B:

Til en suspensjon av utgangs oksopyrrolotriazin (3,00 g, 13,6 mmol) i toluen (45 ml) ble det dråpevis tilsatt fosforholdig okcyklorid (1,90 ml, 20,4 mmol) og N,N-DIPEA (2,37 ml, 13,6 mmol) suksessivt ved rt. Den resulterende blandingen ble deretter oppvarmet ved tilbakeløp i 36 timer, latt bli avkjølt til rt og deretter helt i en iskald blanding av mettet natriumbikarbonat løsning (150 ml) og toluen (60 ml). Det organiske laget ble separert og det vandige laget ble ekstrahert med toluen (3 x 50 ml). Det kombinerte ekstraktet ble vasket med mettet natriumbikarbonatløsning og saltvann og tørket over vannfri MgS04. Avdampning av løsningsmidlet i vakuum ga forbindelse 1B (3,26 g, 100% utbytte) som et gult faststoff.

Trinn C: Eksempel 1

En løsning av produktene 1A (1,60 g, 8,40 mmo, 1,6 ekv.) og 1B (1,30 g, 5,40 mmol, 1,0 ekv.) i DMF (13 ml) ble omrørt ved rt over natt. Vann ble tilsatt og presipitatet samlet ved filtrering, vasket med vann og tørket. Triturering med dietyleter ga eksempel 1 (1,70 g, 80% utbytte) som et off-white faststoff. HPLC ret. t. = 3,190 min.; LC/MS (M+H)<+>=394,31<+>.

Eksempel 2

En løsning av eksempel 1 (0,86 g, 2,20 mmol, 1,0 ekv.) i THF (4,0 ml) og 1 N vandig NaOH (9,0 ml, 4,1 ekv.) ble omrørt ved 60°C over natt. Etter avkjøling til rt ble reaksjonsblandingen konsentrert i vakuum, men ikke til tørrhet. Til løsningen ved 0°C ble det tilsatt 1N vandig saltsyre helt til det var surt og presipitatet ble samlet og tørket for å gi rå eksempel 2 (0,51 g, 64,0% utbytte). HPLC ret. t. = 2.400 min.; LC/MS (M+H)<+>= 366,06<+>. Filtratet ble deretter ekstrahert med EtOAc (3x) og de organiske lagene ble kombinert, tørket over natriumsulfat og konsentrert i vakuum for å gi eksempel 2 (0,035 g, 4,4% utbytte).

Eksempel 3

En løsning av eksempel 2 (0,026 g, 0,071 mmol, 1,0 ekv.), EDC (0,021 g, 0,11 mmol, 1,5 ekv.), HOBt (0,015 g, 0,11 mmol, 1,5 ekv), n-butylamin (0,015 ml, 0,15 mmol, 2,1 ekv.) og DIPEA (0,040 ml, 0,23 mmol, 3,2 ekv.) i DMF (0,20 ml) ble ristet ved rt over natt. Vann (1 ml) ble tilsatt og presipitatet samlet ved filtrering, vasket med vann og tørket for å gi eksempel 3 (0,021 g, 70% utbytte); HPLC ret. t. = 2,883 min.; LC/MS (M+H)<+>= 421,18<+>.

Eksemplene 4- 22

Forbindelser med formel (Id), ovenfor, hvor R4har verdiene angitt i følgende tabell, ble fremstilt ved å følge den samme prosedyren som beskrevet i eksempel 3 ved anvendelse av hensiktsmessig amin i stedet for n-butylamin.

Eksemplene 23- 24

Forbindelser med formel (le), ovenfor, hvor R4har verdiene angitt i følgende tabell ble fremstilt ved å følge den samme prosedyren som beskrevet for eksempel 3, ved anvendelse av piperizinylamin og morfolinylamin i stedet for n-butylamin. Eksemplene 25- 27

Forbindelser med formel (lf), hvor R4har verdiene angitt i tabellen angitt nedenfor ble fremstilt ved å følge den samme prosedyren som beskrevet i eksemplene 1 til og med 3 ved anvendelse av hensiktsmessig amin i stedet for n-butylamin, og i stedet for cyklopropylamin i trinn 1A, (±)-trans-etoksycyklopropylamin, som ble fremstilt ved å følge trinnene A-D, nedenfor.

Trinn A:

Til en godt omrørt blanding av etylvinyleter (47,9 ml, 0,500 mol) og Rhodium (II) acetat dimer (0,221 g, 0,500 mmol) i dietyleter (10 ml) ble det sakte innført etyldiazoacetat (10,5 ml, 0,100 mol) i dietyleter (30 ml) via en sprøytepumpe ved rt over 8 timer. Det uoppløselige materialet ble fjernet ved filtrering gjennom celitt, og et overskudd av etylvinyleter og løsningsmiddel ble avdampet i vakuum. Resten ble deretter destillert i vakuum for å gi produktet 25A (10,3 g, 65% utbytte) som en fargeløs olje som var en blanding av cis og trans isomerer i et forhold på omtrent 1:1.

Trinn B:

Til en løsning av produktet 25A (10,3 g, 65,4 mmol) i MeOH (200 ml) ble det tilsatt en løsning av NaOH (7,85 g, 196,2 mmol) i en porsjon og den resulterende løsningen ble deretter oppvarmet ved tilbakeløp i 5 timer. Blandingen ble deretter konsentrert under vakuum. Resten ble surgjort med 6 N HCI til pH = 2 og ekstrahert med EtOAc (5x). Den kombinerte organiske fasen ble tørket over MgS04. Avdampning av løsningsmidlet i vakuum ga produktet 25B (8,46 g, 99% utbytte) som en fargeløs olje som var en blanding av cis og trans isomerer i et forhold på omtrent 1:1.

En blanding av produktet 25B (1,00 g, 7,68 mmol), difenylfosforylazid (1,82 ml, 8,44 mmol) og TEA (1,18 ml, 8,47 mmol) i vannfri t-BuOH (30 ml) ble oppvarmet ved 90°C i 27 timer. De flyktige stoffene ble avdampet i vakuum. Resten ble fortynnet med 10% Na2C03løsning (30 ml) og ekstrahert med dietyleter (4 x 30 ml). Den kombinerte organiske fasen ble vasket med saltvann, tørket over MgS04og løsningen ble konsentrert i vakuum. Silikagelkromatografi (40% Et20/heksan) av resten ga produktet 25C (0,901 g, 58% utbytte) som en fargeløs olje som var en blanding av cis og trans isomerer i et forhold på omtrent 15:85 i favør av transisomeren.

Trinn D:

En blanding av produktet 25C (0,881 g, 4,38 mmol) og 1 N HCI (20 ml) ble oppvarmet ved tilbakeløp i 5 timer. Etter at det ble latt bli avkjølt til rt ble blandingen ekstrahert med dietyleter. Det vandige laget ble deretter justert til pH = 11 med 1 N NaOH løsning, og deretter ekstrahert med dietyleter (4x). Den kombinerte organiske fasen ble tørket over MgS04og avdampning av løsningsmidlet ga (±)-trans-etoksycyklopropylamin (0,224 g, 50% utbytte) som en noe gul olje. Eksempel 28

Til en løsning av eksempel 27 (30,0 mg, 0,0585 mmol) i DCE (6 ml) ble det tilsatt BBr3ved 0°C. Den resulterende blandingen ble deretter omrørt ved rt i 20 minutter og deretter stoppet med vann. Blandingen ble justert til pH = 9 med mettet Na2C03løsning og ekstrahert med EtOAc (3x). Den kombinerte organiske fasen ble deretter vasket med saltvann og tørket over MgSCv Løsningen ble konsentrert under vakuum og silikagelkromatografi (6% MeOH/CHCU) av resten ga eksempel 28 (3,2 mg) som et hvitt faststoff. HPLC ret. t. = 3,09 min. (b); LC/MS (M+H)<+>= 485,38<+>.

Eksemplene 29- 30

Forbindelser med formel (lg), hvor B har verdiene anført i tabellen angitt nedenfor ble fremstilt ved å følge de samme prosedyrene som beskrevet for eksemplene 1 og 3 ved anvendelse av hensiktsmessig substituert cyklopropylamin i trinn 1A og etylamin i stedet for n-butylamin. Eksempel 31

Trinn A:

Forbindelse 31A ble fremstilt ved å følge prosedyrene beskrevet i US-patent søknad serie nr. 10/036.293, overdratt til foreliggende søker, som er innkorporert heri som referanse.

Trinn B:

en blanding av forbindelse 31 A, 3-aminoisoksazol (0,30 ml, 4,06 mmol), benzotriazol-1-yloksytris(dimetylamino)fosfonium heksafluorfosfat (0,720 g, 1,63 mmol) og N-metylmorfolin (0,54 ml, 4,91 mmol) i DMF (4 ml) ble vasket oppvarmet ved 65^ i 2 dager. Blandingen ble deretter fortynnet med EtOAc og vasket med vann (2x), 10% Na2C03løsning og saltvann. Løsningen ble deretter konsentrert i vakuum og produktet isolert ved preparativ HPLC. HPLC ret. t. = 2,48 min. (a); LC/MS (M+H)<+>= 434,11<+>.

Eksemplene 32- 38

Forbindelser med formel (lg) ovenfor, hvor B har verdiene angitt i tabellen angitt nedenfor ble fremstilt ved å følge de samme prosedyrene som beskrevet i eksempel 31 ved anvendelse av etylamin i stedet for propylamin for å danne utgangsforbindelsen og i trinn B, et hensiktsmessig aminoheteroaryl i stedet for aminoisooksazol.

Eksempel 39

Trinn A:

Til en løsning av LAH (13,7 g, 362 mmol) i THF (800 ml) ble det tilsatt ester med formelen

(8 g, 36,2 mmol) i flere porsjoner ved rt.

Reaksjonsblandingen ble deretter oppvarmet til tilbakeløp i 30 minutter, deretter avkjølt til rt, forsiktig stoppet ved å bli helt i isvann (1 I), og hurtig omrørt i 1 time. Blandingen ble deretter ekstrahert med EtOAc og de kombinerte ekstraktene ble vasket med saltvann, tørket over MgS04, filtrert og konsentrert for å gi forbindelse 39A (5,60 g, 86%).

Trinn B:

Til en suspensjon av forbindelse 39A (1,0 g, 5,58 mmol) i aceton (80 ml) ved 0°C ble det tilsatt Jones reagens dråpevis (1,9 ml). Reaksjonen ble deretter omrørt ved 0°C i 1 time og deretter forsiktig stoppet med 2-propanol. Mettet daq. natriumbikarbonat (100 ml) ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med EtOAc (5 x 100 ml). De kombinerte ekstraktene ble vasket med mettet aq. natriumbikarbonat (1 x 100 ml), vann (1 x 100 ml) og saltvann (1 x 100 ml) og tørket over MgSCM, filtrert og konsentrert for å gi forbindelse 39B (647 mg, 65%). HPLC ret. t. (min): 1,50, MW: 177,16, LCMS[M+H]<+>=178.

Trinn C:

Til en løsning av forbindelse 39B (600 mg, 3,39 mmol) i THF (80 ml) ved 0°C ble det dråpevis tilsatt fenylmagnesiumbromid (3M, 2,94 ml, 8,8 ml) over 5 minutter. Etter omrøring ved 30 minutter ved 0°C ble reaksjonen varmet til rt over 1 time og stoppet med mettet aq. ammoniumklorid. Blandingen ble deretter ekstrahert med EtAOc og ekstraktene ble tørket, filtrert og konsentrert for å gi benzylalkohol mellomproduktet. Rå benzylalkohol ble deretter løst opp i aceton (50 ml) og avkjølt til 0°C. Jones reagens (1 ml) ble dråpevis tilsatt og reaksjonen ble omrørt ved 0°C i 1 time og deretter forsiktig stoppet med 2-propanol. Mettet aq. natriumbikarbonat (50 ml) ble deretter tilsatt og blandingen ble ekstrahert med EtOAc (4 x 50 ml). De kombinerte ekstraktene ble vasket med mettet aq. natriumbikarbonat (1 x 50 ml), vann (1 x 50 ml) og saltvann (1 x 50 ml) før de ble tørket over MgS04, filtrert og konsentrert for å gi forbindelsen 39C (563 mg, 66% over 2 trinn). HPLC ret. t. (min): 2,82, MW: 253,26, LCMS[M+H]<+>=254.

Trinn D:

Keton 39C (152 mg, 0,6 mmol) ble plassert i POCU (5 ml) og oppvarmet til 100oC i 1,75 timer. Reaksjonen ble deretter avkjølt til rt og et overskudd av POCI3ble avdampet under vakuum. Resten ble løst opp i vannfri DCM (10 ml) og dråpevis tilsatt til en hurtig omrørende løsning av mettet aq. natriumbikarbonat (50 ml) og DCM (50 ml) ved CC. Blandingen ble deretter omrørt i 1 time og deretter ble den vandige fasen ekstrahert med DCM (3 x 50 ml). De organiske fasene ble vasket med mettet aq. natriumbikarbonat (1 x 50 ml), vann (1 x 50 ml) og saltvann (1 x 50 ml), deretter tørket over MgSCt, filtrert og konsentrert for å gi klorid 39D (163 mg, 100%).

Trinn E:

til en løsning av klorid 39D (31,5 mg, 0,116 mmol) i DMF (1 ml) ble det tilsatt 3-amino-N-cyklopropyl-4-metyl-benzamid (forbindelse 1A) (44 mg, 0,23 mmol) og løsningen ble oppvarmet til 60^ i 3 timer. Vann (5 ml) ble tilsatt for å presipitere produktet som ble samlet ved filtrering, vasket med vann og latt bli lufttørket for å gi eksempel 39. HPLC ret. t. (min): 3,34, MW: 425,49, LCMS[M+H]<+>=426.

Eksemplene 40- 42

Forbindelser med formel (lh) hvor Y og B har verdiene angitt i tabellen angitt nedenfor ble fremstilt ved å følge den samme eller lignende prosedyre som beskrevet ovenfor for eksempel 39 ved anvendelse av hensiktsmessig amin i trinn E.

Eksempel 43

Trinn A:

Til en løsning av forbindelse 39D (60 mg, 0,221 mmol) i DMF (1 ml) ble det tilsatt 3-amino-4-metyl-benzosyre (66,8 mg, 0,442 mmol) og løsningen ble oppvarmet til 60°C i 3 timer. Vann (5 ml) ble tilsatt for å presipitere produktet som ble samlet ved filtrering, vasket med vann og latt bli lufttørket for å gi forbindelse 43A (75 mg, 88%). HPLC ret. t. (min): 3,38, MW: 386,41, LCMS[M+H]<+>=387.

Trinn B:

til en løsning av syren 43A (30 mg, 0,078 mmol) og HATU (44 mg, 0,117 mmol) og DIPEA (17 pl, 0,1 mmol) i DMF (0,5 ml) ved rt ble det tilsatt 3-aminoisoksazol. Reaksjonen ble deretter omrørt ved rt i 1 time og vann (5 ml) ble tilsatt for å presipitere produktet, som ble samlet ved filtrering og renset ved preparativ HPLC for å gi eksempel 43. HPLC ret. t. (min): 3,39, MW: 452,48, LCMS[M+H]<+>=453.

Eksempel 44

Trinn A:

Til en løsning av forbindelse 39B (160 mg, 0,90 mmol) i THF (10 ml) ved 0°C ble det tilsatt 6-metyl-2-pyridylmagnesiumbromid (0.25M, 14,4 ml, 3,6 mM) dråpevis over 5 minutter. Etter omrøring i 30 minutter ved CC ble reaksjonen varmet til rt og omrørt i 16 timer. Ytterligere alikvoter av 6-metyl-2-pyridylmagnesiumbromid ble tilsatt for å fullføre omdanningen av utgangsmaterialet og reaksjonen ble stoppet med mettet aq. ammoniumklorid. Blandingen ble deretter ekstrahert med EtOAc og ekstraktene ble tørket, filtrert og konsentrert for å gi et rødbrunt halvfast materiale. Dette materialet ble løst opp i aceton (10 ml) og avkjølt til 0°C. Jones reagens (0,4 ml) ble dråpevis tilsatt og reaksjonen ble omrørt ved 0°C i 1 time og deretter forsiktig stoppet med 2-propanol. Mettet aq. natriumbikarbonat (15 ml) ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med EtOAc (4x20 ml). De kombinerte ekstraktene ble vasket med mettet aq. natriumbikarbonat (1x20 ml), vann (1x20 ml), og saltvann (1x20 ml) og deretter tørket over MgS04, filtrert og konsentrert for å gi forbindelse 44A (145 mg, 60% over 2 trinn).

Trinn B:

Keton 44A (75 mg, 0,28 mmol) ble plassert i POCb (4 ml) og oppvarmet til 1 00°C over natt. Reaksjonen ble avkjølt til rt og et overskudd av POCI3ble avdampet under vakuum. Resten ble løst opp i vannfri DCM (10 ml) og dråpevis tilsatt til en hurtig omrørende løsning av mettet aq. natriumbikarbonat (50 ml) og DCM (50 ml) ved 0°C. Blandingen ble deretter omrørt i 1 time og deretter ble den vandige fasen ekstrahert med DCM (3x50 ml). De organiske fasene ble vasket med mettet aq. natriumbikarbonat (1x50 ml), vann (1x50 ml) og saltvann (1x50 ml), og deretter tørket over MgS04, filtrert og konsentrert for å gi kloridet 44B (64 mg, 79%).

Trinn C: Eksempel 44

Til en løsninkg av forbindelse 44B (53 mg, 0,18 mmol) i DMF (0,5 ml) ble det tilsatt forbindelse 1A (84 mg, 0,44 mmol) og løsningen ble oppvarmet til 60°C i 2 timer. Vann (5 ml) ble tilsatt for å presipitere produktet som ble samlet ved filtrering, vasket med vann og latt bli lufttørket for å gi eksempel 44 (34,2 mg, 41%). HPLC ret. t. (min.): 3,39, MW: 452,48, LCMS[M+H]<+>=453.

Eksempel 45

Eksempel 45 ble fremstilt ved å følge den samme prosedyren som i eksempel 44, ved anvendelse av et annet benzamid i trinn C. HPLC ret. t. (min): 3,22, MW: 467,49, LCMS[M+H]<+>=468.

Eksempel 46

Trinn A: Til en løsning av kloridet med formel

(10 mg, 41,8 mmol) i DMF (60 ml) ble det tilsatt 3-amino-4-metyl-benzosyre (6,3 g, 41,8 mmol) ved rt. Reaksjonsblandingen ble deretter omrørt i 16 timer, helt i vann (500 ml) og omrørt hurtig i 1 time. Faststoffene ble filtrert, vasket med vann (500 ml) og lufttørket for å gi forbindelse 46A (13,6 g, 92%) som et lysrosa faststoff. MS[M+H]<+>=355.

Trinn B:

Til en løsning av forbindelse 46A (1 g, 2,8 mmol) i DCM (6 ml) ved -78°C ble det dråpevis tilsatt DIBAL-H (1M, 8,5 ml, 8,5 mmol). Reaksjonen ble omrørt i 2 timer ved - 78* 0, varmet til rt over 1,5 timer, stoppet med mettet aq. NH4CI, og deretter ble HCI (1 N) tilsatt for å justere pH til 4 og løsningen ble ekstrahert med EtAOc. Etter tørking av de organiske fasene og konsentrering ble forbindelse 46B oppnådd som et rosa faststoff (874 mg, 100%). HPLC ret. t.

(min): 1,74, MW: 312,33, og LCMS[M+H]<+>=313.

Trinn C: Eksempel 46

Til en løsning av forbindelse 46B (1,8 g, 5,9 mmol) i DMF (10 ml) ble det tilsatt BOP (2,9 g, 615 mmol), cyklopropylamin (2 ml, 29,8 mmol). Reaksjonen ble deretter omrørt over natt ved rt, deretter helt i vann (60 ml) for å presipitere produktet. Faststoffene ble deretter samlet ved filtrering og renset ved preparativ HPLC for å gi eksempel 46 (1,5 g, 74%). HPLC ret. t. (min): 1,64, MW: 351,41, LCMS[M+H]<+>= 352.

Eksempel 47

Til en løsning av eksempel 46 (1,5 g, 4,3 mmol) i THF (30 ml) ved rt ble det tilsatt Mn02(5,4 g, 64 mmol). Etter omrøring i 40 minutter var reaksjonen fullført. Produktet ble samlet ved filtrering og presipitatet ble vasket med acetonitril. Etter tørking av filtratet og konsentrering ble eksempel 47 oppnådd som som en gul olje (1,5 g, kvantitativt). HPLC ret. t. (min): 2,52, MW: 349,40, LCMS[M+H]<+>=350.

Eksempel 48

Til en løsning av 2-brompyridin (54 ul, 0,57 mmol) og TMEDA (85 0,57 mmol) i THF (10 ml) ved -78°C ble det dråpevis tilsatt nBuLi (1,6 M, 356 0,57 mmol). Til denne løsningen ble det tilsatt eksempel 47 (50 mg, 0,14 mmol). Reaksjonen ble deretter omrørt i 0,5 timer ved -78°C og deretter varmet til rt og stoppet med vann. Blandingen ble ekstrahert med EtAOc og ekstraktene ble tørket, filtrert og konsentrert for å gi rå mellomprodukt alkohol. Til en løsning av rå alkohol i DCM (5 ml) ved rt ble det tilsatt pyridiniumklorkromat (24,1 mg, 0,11 mmol). Etter omrøring i 1 time ble reaksjonen stoppet med vann (2 ml). Det ønskede produktet ble deretter ekstrahert med EtAOc og tørket. Etter rensing ved preparativ HPLC ble eksempel 48 oppnådd som et gult faststoff (24,6 mg, 40%). HPLC ret. t (min): 2,95, MW: 426,48; LCMS[M+H]<+>=427.

Eksemplene 49- 68

Forbindelser med struktur

ble fremstilt ifølge prosedyren bekskrevet i eksempel 3 ved anvendelse av hensiktsmessig amin i stedet for n-butylamin. Eksempel 69

Trinn 1, mellomprodukt A:

Til en rt løsning av 3-fluorpyridin (5,0 g) i diklormetan (25 ml) og 30% vandig hydrogenperoksid (10 ml) ble det tilsatt metyltrioksorhenium (25 mg) og den resulterende blandingen ble omrørt over natt. Manganoksid (25 mg) ble tilsatt og løsningen ble omrørt ved rt i en ytterligere time. Natriumklorid ble deretter tilsatt til den mettede vandige delen og lagene ble separert. Den vandige delen ble deretter ekstrahert med ytterligere diklormetan (3 x 100 ml) og de kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over vannfri natriumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum for å gi en lysegul olje som stivnet ved henstand for å gi produkt A som et lysegult faststoff (4,92 g, 84%). HPLC ret. tid: 0,30 min.

Trinn 2, mellomprodukt B:

Til en løsning av mellomprodukt A (2,85 g, 25,2 mmol) i diklormetan (25 ml) ved rt ble det tilsatt trimetylsilylcyanid (10,0 ml, 75,6 mmol) og blandingen ble tilbakestrømmet i 10 timer. Etter avkjøling til rt ble mettet vandig natriumbikarbonat løsning (30 ml) tilsatt og den resulterende blandingen ble deretter ekstrahert med diklormetan (3 x 150 ml). De kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over vannfri natriumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum for å gi en lysebrun olje (4,60 g) som råprodukt. Dette materialet ble deretter renset ved flash kolonnekromatografi på silikagel ved eluering med 30% etylacetat i heksan for å gi en lysebrun olje som stivnet ved henstand for å gi produktet B som et lysebrunt faststoff (2,48 g, 84). HPLC ret. tid: 1,03 min.

Trinn 3, mellomprodukt C:

Til mellomprodukt B (1,40 g) i etanol (50 ml) ble det suksessivt tilsatt 10% palladium på karbon (500 mg) og konsentrert saltsyre (2,9 ml) og den resulterende blandingen ble deretter ristet under hydrogen (40 psi) i 20 timer. Løsningen ble deretter filtrert gjennom et sjikt av celitt og filtratet ble konsentrert i vakuum for å gi 1,80 g av produkt C som et hvitt faststoff. HPLC ret. tid: 0,19 min.

Trinn 4, tittelforbindelsen:

En blanding av mellomprodukt D (40 mg, 0,11 mmol), ED AC (25 mg, 0,13 mmol), og HOBt (16 mg, 0,12 mmol) vannfri DMF ble omrørt ved rt i 2 timer og deretter ble aminhydroklorid C (0,13 mmol) og Hunigs base (38 0,22 mmol) suksessivt tilsatt. Etter omrøring over natt ved rt ble den rå reaksjonsblandingen utsatt for rensing ved revers fase preparativ HPLC for å gi titteIforbindeIsen.

Eksempel 70 og 71

Eksempel 70 og 71 ble fremstilt på samme måte som beskrevet i eksempel 23-24.

Eksempel 72

Trinn 1, mellomprodukt F:

Til mellomprodukt E (10,0 g, 45,2 mmol) i POCI3(30 ml) ved rt under argon ble det sakte tilsatt vannfri DMF (7,0 ml, 90,4 mmol) og den resulterende blandingen ble deretter oppvarmet ved 95°C i 15 timer. Etter avkjøling til rt ble innholdet sakte helt i en godt omrørt blanding av 1 I mettet aq. natriumbikarbonat løsning og 200 ml knust is. Etter å tillate at den heterogene oppslemmingen ble omrørt ved rt i 2,5 timer ble det resulterende faststoffet samlet ved vakuumfiltrering og faststoffet ble vasket med 250 ml porsjoner vann og deretter latt bli delsvis tørket i trakten. Faststoffet ble til slutt vasket med to porsjoner diklormetan (100 ml hver) og det resulterende organiske filtratet ble tørket over vannfri natriumsulfat og konsentrert i vakuum for å gi produkt F som et gult faststoff (5,35 g, 47%) som ble anvendt direkte uten ytterligere rensing. HPLC ret. tid: 2,96 min.

Trinn 2, mellomprodukt G:

Mellomprodukt F (3,19 g, 11,9 mmol) og korresponderende anilinhydroklorid (3,52 g, 15,5 mmol) i 40 ml av vannfri DMF ble omrørt ved rt over natt og deretter fortynnet med 200 ml vann og 30 ml av mettet vandig natriumbikarbonat løsning. Etter omrøring ved rt i 1 time ble det resulterende faststoffet samlet ved vakuumfiltrering, vasket med vann og tørket i vakuum for å gi produkt G som et orangefarget faststoff (4,2 g, 84%) som ble anvendt direkte uten ytterligere rensing. HPLC ret. tid: 2,97 min. MH<+>= 422,1 (m/z).

Trinn 3, tittelforbindelse:

Til mellomprodukt G (0,8 g, 1,90 mmol) i vannfri THF (10 ml) ved rt under argon ble det suksessivt tilsatt 1-metylpiperazin (0,24 g, 2,47 mmol) og NaBH(OAc)3(1,21 g, 5,70 mmol) etterfulgt av omrøring ved rt i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter stoppet ved tilsetning av 50 ml metanol etterfulgt av omrøring i en ytterligere time ved rt og deretter konsentrert og fordelt mellom 50 ml mettet vandig natriumbikarbonat løsning og 200 ml etylacetat. Lagene ble deretter separert og den vandige delen ble mettet med natriumklorid og ekstrahert med ytterligere etylacetat (4 x 100 ml). De kombinerte organiske ekstraktene ble tørket over vannfri natriumsulfat og konsentrert i vakuum for å gi tittelforbindelsen som et lysegult faststoff (1,02 g, utbytte 89%). HPLC ret. tid: 2,25 min. MH<+>(m/z) 506,2.

Eksemplene 73- 80

Følgende forbindelser ble fremstilt på samme måte som beskrevet i eksempel 72.

Eksemplene 81-83

Trinn 1, mellomprodukt H:

Til forbindelsen 4 (0,80 g, 1,67 mmol) i metanol (10 ml) ved rt ble det tilsatt 6N vandig natriumhydroksid løsning (1,8 ml, 10,8 mmol) og blandingen ble tilbakestrømmet i 20 timer. Etter avkjøling til rt ble metanol fjernet i vakuum og blandingen ble brakt til pH 3 med 1N HCI og fryse tørket for å gi 1,02 g av råprodukt H som et svakt gult faststoff inneholdende gjenværende natriumklorid. Dette materialet ble anvendt uten ytterligere rensing i påfølgende reaksjon. HPLC ret. tid: 1,65 min. MH<+>(m/z) 478,14.

Trinn 2, tittelforbindelser:

Mellomprodukt H (40 mg, 0,083 mmol), ED AC (25 mg, 0,13 mmol) og HOBt (16 mg, 0,12 mmol) ble omrørt ved rt i 2 timer og deretter ble tilsvarende amin RNH2(0,13 mmol) og Hunigs base (38 pJ, 0,22 mmol) suksessivt tilsatt etterfulgt av omrøring over natt ved rt. Den resulterende blandingen ble deretter utsatt for revers-fase preparativ HPLC for å oppnå tittelforbindelsene.

Eksemplene 84-86

Eksemplene 84-86 ble fremstilt fra mellomproduktet H som følger: mellomprodukt H (40 mg, 0,083 mmol), ED AC (25 mg, 0,13 mmol) og HOBt (16 mg, 0,12 mmol) ble omrørt ved rt i 2 timer og deretter ble tilsvarende alkohol ROH (1 ml) og Hunigs base (38 jaI, 0,22 mmol) suksessivt tilsatt etterfulgt av omrøring over natt ved rt. Den resulterende blandingen ble deretter utsatt for revers fase-preparativ HPLC for å oppnå tittelforbindelser. Eksempel 87

Til en løsning av aldehyd [eksempel 47] (0,040 g, 0,114 mmol) i DMF (1 ml) ved rt ble det tilsatt 2-klorkinoksalin (0,0188 g, 0,114 mmol), natriumhydrid (0,0054 mg, 0,138 mmol), N.N-dimetylimadizoliumiodid (0,084 mg, 0,038 mmol)og p-toluensulfinsyre, natriumsalt (0,008 mg, 0,044 mmol). Etter omrøring over natt ved rt ble løsningen oppvarmet til 80°C og ytterligere porsjoner av N,N'-dimetylimadizoliumiodid og natriumhydrid ble tilsatt. Etter 1 time ble reaksjonen avkjølt til rt og vann ble tilsatt. Det resulterende presipitatet ble deretter samlet og ytterligere renset ved preparativ revers fase HPLC for å gi tittelforbindelsen (0,003 g).). HPLC ret. t. (min): 3,61, MW: 477,5, LCMS[M+H]<+>=478.

Eksempel 88

Trinn A:

Til eksempel 2 (500 mg) ble det tilsatt tionylklorid (6 ml) ved rt. Etter omrøring i 30 min. ved rt ble tionylklorid avdampet under redusert trykk for å gi 88A som et hvitt faststoff (HCI salt, 580 mg)

Trinn B:

til en løsning av syreklorid 88A (0,020 g, 0,048 mmol) og anisol (0,026 ml, 0,238 mmol) i 1,2-dikloretan (1 ml) ved 0oC ble det tilsatt aluminiumtriklorid (0,0095 g, 0,071 mmol). Etter 2 timer ved 0°C ble løsningen varmet til rt og ytterligere aluminiumtriklorid (0,140 g) ble tilsatt. Etter omrøring ved rt over natt ble reaksjonen stoppet med vann (0,2 ml) og løsningsmidlet ble deretter avdampet. Resten ble omkrystallisert fra et minimum av metanol/vann og samlet ved filtrering for å gi tittelforbindelsen (0,0065 g).). HPLC ret. t. (min): 3,29, MW; 455,5, LCMS[M+H]<+>=456.

Eksemplene 89- 96

Følgende forbindelser ble oppnådd på en måte som ligner den i eksempel 88.

Eksempel 97

Trinn A:

En blanding av 3-fluornitrobenzen (10,0 g, 71 mmol), morfolin (27 ml) og DMSO (118 ml) ble omrørt ved 110°C i 36 timer og deretter avkjølt til rt og helt i 800 ml vann. Den resulterende blandingen ble deretter omrørt i 20 minutter og faststoffet ble samlet ved vakuumfiltrering og tørket i vakuum for å gi 13,6 g (92%) av 97A som et skarpt gult faststoff.). LCMS (M+H<+>)=209,1. HPLC ret. tid: 1,48 min.

Trinn B:

Til en oppslemming av 97A (13,6 g, 65 mmol) i metanol (225 ml) ved rt ble det suksessivt tilsatt ammoniumformat (20,5 g, 326 mmol) og 10% palladium på trekull (2,0 g) og blandingen ble omrørt ved rt i 48 timer. Den resulterende blandingen ble filtrert gjennom et stykke celitt og det klare filtratet ble konsentrert i vakuum og den resulterende resten ble fordelt mellom vann (50 ml) og etylacetat (150 ml). Lagene ble separert og den vandige delen ble ekstrahert med ytterligere etylacetat (2 x 50 ml). De kombinerte ekstraktene ble vasket med saltvann (50 ml), tørket over vannfri natriumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum for å gi 10,8 g (93%) av 97B som et brunt faststoff. LCMS (M+H<+>)= 179,2.

Trinn C: Til en oppslemming av 2,0 g (4,2 mmol) av forbindelsen

(97<*>) (syntetisert som beskrevet i WO 02/40486)

i 12 ml vannfri metanol ble det tilsatt 18 ml av en 4 N løsning av vannfri saltsyre i dioksan ved romtemperatur. Den resulterende klare løsningen ble deretter omrørt ved romtemperatur i 16 timer og reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum. Den resulterende oljen ble løst opp i 16 ml av 1,5 N vandig kaliumhydroksid løsning og oppvarmet til 50°C i 3 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble blandingen fortynnet med 50 ml vann og 10% vandig saltsyre ble tilsatt helt til pH var omtrent 3 eller 4. Det resulterende presipiterte produktet ble samlet ved vakuumfiltrering og vasket med 50 ml vann og tørket i vakuum for å gi 1,47 g (99%) av 97C som et hvitt faststoff. En analytisk prøve av 97C ble fremstilt ved omkrystallering fra 10% vandig acetonitril.<1>H NMR (CD3OD): 8 8,21 (br s, 1H), 8,11 (br s, 1H), 7,89-7,91 (m, 2H), 7,67 (br s, 1H), 7,44 (d, 1H), 3,40 (q, 2H), 2,86 (s, 3H), 2,36 (s, 3H), 1,25 (s, 3H). LCMS (M+H<+>)=354,2. HPLC: 2,24 min.

Trinn D: Tittelforbindelse

En blanding av 97C (40 mg, 0,11 mmol), HATU (65 mg, 0,17 mmol), diisopropylamin (20 ul, 0,11 mmol) og 97B (39 mg, 0,22 mmol) i 0,3 ml N-metylpyrrolidinon ble oppvarmet ved 80°C i 16 timer og reaksjonsblandingen ble deretter reneset ved revers fase preparativ HPLC for å gi 41 mg (74%) av tittelforbindelsen av et lysebrunt faststoff.<1>H NMR (CD3OD w/TFA): 8 8,28 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,16 (d, 1H), 8,11 (d, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,58 (t, 2H), 7,47 (d, 1H), 3,44 (q, 2H), 2,94 (s, 3H), 2,47 (s, 3H), 1,26 (t, 3H). LCMS (M+H<+>) = 497,5. HPLC ret. tid: 3,30 min.

Eksempel 98

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet for fremstilling i eksempel 97 ved substituering av 97C<*>i trinn C med eksempelforbindelsen 70 i WO 02/40486. LCMS (M+H<+>)=590,2. HPLC ret. tid: 3,26.

Eksempel 99

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet for fremstillingen i eksempel 97 ved substituering av 97C<*>i trinn C med eksempelforbindelse 70 i WO 02/40486 og ved substituering av 97B med 4-aminopyridin i trinn D. LCMS (M+H<+>) = 506,4. HPLC ret. tid: 2,95 min.

Eksempel 100

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet for fremstilling av eksempel 97 ved substituering av 97C<*>i trinn C med eksempelforbindelse 70 i WO 02/40486 og ved substituering 97B med 2-aminopyridin i trinn D. LCMS (M+H<+>) = 590,2. HPLC ret. tid: 3,01 min.

Eksemplene 101- 104

Følgende forbindelser ble fremstilt på en lignende måte som beskrevet for eksempel 100. Eksempel 105

Trinn A:

En løsning av 3-nitro-4-metyl benzoylklorid (215 mg, 1,08 mmol) og N-tolyl-3-tert-butyl-5-aminopyrazol hydroklorid (287 mg, 1,08 mmol) i diklormetan (5 ml) ble tilsatt DIPEA (0,38 ml, 2,2 mmol) og reaksjonsblandingen ble omrørt i 2 timer. Reaksjonen ble konsentrert til en olje som ble løst opp i EtOAc (50 ml) og vasket fortløpende med aq NaHC03, vann, 1N HCI, vann og saltvann. Det organiske laget ble tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert til en olje som ble renset via kolonnekromatografi (10% deretter 30% EtOAc/heksan) for å gi nitroamidet (420 mg, 99%).

Ovennevnte faststoffer ble løst opp i EtOH (156 ml) og det ble tilsatt 5% Pd-C (våt, 10035 mg) og evakuert og tilbakefylt under en hydrogen ballong. Reaksjonen ble omrørt i 32 timer, filtrert og konsentrert til et hvitt faststoff som ble anvendt uten ytterligere rensing (403 mg, 99%), LRMS 363,6 (M+H).

Trinn B: tittelforbindelse

Tittelforbindelsen ble fremstilt fra mellomproduktet oppnådd i trinn A ved å følge prosedyren beskrevet for eksempel 1 og 2.

Eksempel 106

Trinn A:

En blanding av 3,5-difluornitrobenzen (4,1 g, 26 mmol) og morfolin (11 ml) ble oppvarmet til lOCC i 16 timer og deretter avkjølt til rt over natt. Det resulterende faststoffet ble samlet ved vakuumfiltrering og løst opp i metylenklorid (250 ml) og løsningen ble suksessivt vasket med 1N vandig HCI (2 x 100 ml) og saltvann (100 ml), og deretter tørket over vannfri natriumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum for å gi 4,0 g (69%) av 106A som et gult faststoff. LCMS (M+H<+>) = 227,2. HPLC ret. tid: 2,85 min.

Trinn B:

En blanding av 106A (4,0 g, 18 mmol) og 10% palladium på trekull (0,4 g) i 150 ml etanol ble omrørt under en atmosfære av hydrogen ved rt i 16 timer. Den resulterende blandingen ble deretter filtrert gjennom et stykke celitt og filtratet ble konsentrert i vakuum for å gi 3,4 g (96%) av 106B som et offwhite fast stoff. LCMS (M+H<+>) = 197,1. HPLC ret. tid: 0,92 min.

Trinn C: tittelforbindelse

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet for fremstilling av eksempel 97 ved substituering av 97B med 106B i trinn D. LCMS (M+H<+>) = 532,0. HPLC ret. tid: 3,04 min.

Eksempel 107

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet for fremstilling av eksempel 97 ved substituering av 97C<*>i trinn C med eksempelforbindelse 70 i WO 02/40486 og ved substituering av 97B med 106B i trinn D. LCMS (M+H<+>) = 608,5. HPLC ret. tid: 3,52 min.

Eksempel 108

Trinn A:

En blanding av 3-fluornitrobenzen (1,0 g, 7,1 mmol) og 1-metylpiperazin (5 ml) ble oppvarmet til 130°C i 3 dager. Etter avkjøling til rt ble blandingen fortynnet med vann (100 ml) og ekstrahert med etylacetat (4 x 40 ml). Konsentrering av de kombinerte ekstraktene ga en mørkerød olje som ble løst opp i diklormetan (75 ml) og vasket med 1N vandig HCI (3 x 25 ml). De kombinerte sure vandige ekstraktene ble nøytralisert til pH~7 ved tilsetning av 3 N vandig kalium hydroksidløsning og ekstrahert med diklormetan (3 x 40 ml). Kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann (40 ml), tørket over vannfri natriumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum for å gi 0,92 g (59%) av 108A som en mørkebrun olje. LCMS (M+H<+>) = 222,1. HPLC ret. tid: 0,97 min.

Trinn B:

108B ble fremstilt som beskrevet for fremstilling av 106B. LCMS (M+H<+>) = 192,3. HPLC ret. tid: 0,17 min.

Trinn C: Tittelforbindelse

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet for fremstilling av eksempel 97 ved substituering av 97B med 108B i trinn D. LCMS (M+H<+>) = 527,3. HPLC ret. tid: 2,14 min.

Eksempel 109

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet for fremstilling av eksempel 97. LCMS (M+H<+>) = 571,4. HPLC ret. tid: 2,22 min.

Eksempel 110

Trinn A:

En blanding av 3-fluornitrobenzen (1,0 g, 7,1 mmol), pyrazol (0,58 g, 8,5 mmol), og cesiumkarbonat (2,8 g, 8,5 mmol) i 4 ml N-metylpyrrolidinon ble oppvarmet til lOCC i 17 timer. Etter avkjøling til rt ble blandingen fortynnet med vann (75 ml) og ekstrahert med etylacetat (3 x 75 ml) og kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann (20 ml), tørket over vannfri natriumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum for å gi 1,7 g (71 %) av 110A som en mørkerød olje. LCMS (M+H<+>) = 190,1. HPLC ret. tid: 2,42 min.

Trinn B:

En blanding av 11 OA (0,95 g, 5,0 mmol) og 10% palladium på trekull (0,27 g) i 10 ml etylacetat ble omrørt ved rt under en atmosfære av hydrogen i 17 timer. Den resulterende blandingen ble filtrert gjennom et stykke celitt og det resulterende filtratet ble konsentrert i vakuum for å gi 0,73 g (91 %) av 110B som en svak gul olje. LCMS (M+H<+>) = 160,1. HPLC ret. tid: 0,74 min.

Trinn C: Tittelforbindelse

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet for fremstilling av eksempel 97 ved substituering av 97B med 11 OB i trinn D. LCMS (M+H<+>) = 495,3. HPLC ret. tid: 2,91 min.

Eksempel 111

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet for fremstilling av eksempel 97. LCMS (M+H<+>) = 539,3. HPLC ret. tid: 2,97 min.

Eksempel 112

Trinn A:

En blanding av 3-bromnitrobenzen (1,0 g, 5,0 mmol), imidazol (0,51 g, 7,5 mmol), 1,10-fenantrolin (0,89 g, 5,0 mmol), dibenzylidenaceton (0,06 g, 0,25 mmol), cesiumkarbonat (1,8 g, 5,5 mmol) og kobber( 11 )trif lat benzen addukt (0,12 g, 0,25 mmol) i 1 ml xylener ble oppvarmet ved 120oC i 36 timer. Etter avkjøling til rt ble blandingen fortynnet med diklormetan (100 ml) og vasket med mettet vandig ammoniumklorid løsning (2 x 50 ml) og 1 N vandig HCI (2 x 75 ml). De kombinerte sure vandige delene ble nøytralisert til pH~7 ved tilsetning av 3N vandig KOH og deretter ekstrahert med diklormetan (3 x 40 ml). De organiske ekstraktene ble vasket med saltvann (30 ml), tørket over vannfri natriumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum for å gi 0,55 g (58%) av 112A som en et mørkerødt halvfast faststoff. LCMS (M+H<+>) = 190,1. HPLC ret. tid: 0,44 min.

Trinn B:

En blanding av 112A (0,55 g, 2,9 mmol) og 10% palladium på trekull (0,15 g) i 15 ml av metanol ble omrørt ved rt under en atmosfære av hydrogen i 17 timer. Den resulterende blandingen ble filtrert gjennom et stykke celitt og det resulterende filtratet ble konsentrert i vakuum for å gi 0,36 g (77%) av 112B som et lysegult faststoff. LCMS (M+H<+>) = 160,1. HPLC ret. tid: 0,19 min.

Trinn C: Tittelforbindelse

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet for fremstilling av eksempel 97 ved substituering av 97B med 112B i trinn D. LCMS (M+H<+>) = 495,2. HPLC ret. tid: 2,12 min.

Eksempel 113

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet for fremstilling av eksempel 97. LCMS (M+H<+>) = 539,3. HPLC ret. tid: 2,32 min.

Eksempel 114

Trinn A:

Til en blanding av 3-bromnitrobenzen (1,0 g, 5,0 mmol), 2-pyrrolidinon (0,50 g, 5,9 mmol), kaliumkarbonat (1,37 g, 9,9 mmol) og trans-1,2-cykloheksandiamin (0,06 ml, 0,50 mmol) ble det suksessivt tilsatt 2,5 ml av vannfri 1,4-dioksan og kobber (I) iodid (94 mg, 0,50 mmol) og innholdet ble oppvarmet til 110°C i 24 timer. Etter avkjøling til rt ble blandingen fordelt mellom vann (50 ml) og etylacetat (75 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med ytterligere etylacetat (2 x 50 ml) og de kombinerte ekstraktene ble vasket med saltvann (30 ml), tørket over vannfri natriumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum for å gi råproduktet som et mørkebrunt faststoff. Rensing ved flashkromatografi på silikagel ved anvendelse av en gradienteluering fra 70% etylacetat i heksaner til 100% etylacetat ga 0,68 g (68%) av 114A som et svakt gult faststoff etter konsentrering i vakuum. LCMS (M+H<+>) = 208,1. HPLC ret. tid: 2,11 min.

Trinn B:

En blanding av 114A (0,68 g, 3,3 mmol) og 10% palladium på trekull (0,35 g) i 10 ml metanol ble omrørt ved rt under en atmosfære av hydrogen i 17 timer. Den resulterende blandingen ble filtrert gjennom et stykke celitt og det resulterende filtratet ble konsentrert i vakuum for å gi 0,55 g (95%) av 114B som et off-white faststoff. LCMS (M+H<+>) = 177,1. HPLC ret. tid: 0,34 min.

Trinn C: Tittelforbindelse

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet for fremstilling av eksempel 97 ved substituering av 97B med 114B i trinn D. LCMS (M+H<+>) = 512,2. HPLC ret. tid: 2,68 min.

Eksempel 115

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet for fremstilling av eksempel 97. LCMS (M+H<+>) = 556,3. HPLC ret. tid: 2,77 min.

Eksempel 116

Trinn A:

Til en løsning av 4-metyl-3-nitroanilin (3,93 g, 25,8 mmol) i 200 ml diklormetan ved rt under argon ble det tilsatt 2-klorpyridin-4-karbonylklorid (5,00 g, 28,4 mmol) etterfulgt av trietylamin (8,0 ml, 56,7 mmol) via sprøyte og den resulterende blandingen ble omrørt i 2 timer. Løsningsmidlet ble fjernet i vakuum og resten ble triturert med 20 ml diklormetan og faststoffet ble samlet ved filtrering for å gi 7,50 g (99,6%) av 116A som et gult fast stoff. HPLC ret. tid: 3,13 min. MH<+>(m/z) 292,3.

Trinn B:

Til 116A (7,50 g) ble det tilsatt 50 ml morfolin og blandingen ble oppvarmet til lOCC under argon i 20 timer og deretter avkjølt til rt og sakte helt i isvann (600 ml) med sprøyte. Denne blandingen ble omrørt ved rt i 15 minutter og det resulterende faststoffet ble samlet ved filtrering og tørket i vakuum for å gi 5,50 g (62,5%) av 116B som et lysegult faststoff. HPLC ret. tid: 2,39 min. MH<+>(m/z) 343,4.

Trinn C:

Til forbindelsen 116B (1,50 g) i absolutt etanol (100 ml) ble det tilsatt 10% palladium på karbon (200 mg) og blandingen ble ristet under hydrogen (30 psi) i 6 timer. Løsningen ble filtrert gjennom et stykke celitt og løsningsmidlet ble fjernet i vakuum for å gi en 1,33 g av 116C som et lysegult faststoff. HPLC ret. tid: 0,94 min. MH<+>(m/z) 313,3.

Trinn D:

Forbindelse 116C (0,20 g, .58 mmol) og 4-klor-5-metylpyrrolotriazin-6-etylkarboksylat (0,14 g, 0,58 mmol) i vannfri DMF ble omrørt ved rt i 20 timer. Reaksjonen ble fortynnet med iskaldt vann og mettet vandig natriumbikarbonat og det resulterende presipiterte faststoffet ble samlet og vasket med vann for å gi 0,30 g av 116D som et lysegult faststoff. HPLC ret. tid: 2,96 min. MH<+>(m/z) 516,2.

Trinn E:

116D (0,30 g, 0,58 mmol) i 3 ml av 1N natriumhydroksid og 2 ml metanol ble oppvarmet ved 60°C i 4 timer. Metanol ble fjernet i vakuum og den vandige blandingen ble surgjort med 1N vandig HCI til pH~2. Det resulterende faststoffet ble samlet og vasket med vann for å gi 0,24 g av 116E som et lysegult faststoff. HPLC ret. tid: 2,26 min. MH<+>(m/z) 488,2.

Trinn F:

116E (40 mg, 0,082 mmol), ED AC (19 mg, 0,098 mmol), HOBt (13 mg, 0,098 mmol) og Hunigs base (43 pJ, 0,25 mmol) ble omrørt ved rt i 0,5 timer og etylamin hydroklorid (13 mg, 0,16 mmol) ble tilsatt etterfulgt av omrøring over natt. Den rå reaksjonsblandingen ble renset ved revers fase preparativ HPLC for å gi 28 mg av tittelforbindelsen som et hvitt fast stoff. HPLC ret. tid: 2,12 min. MH<+>(m/z) 515,1.

Eksempel 117

Tittelforbindelsen ble fremstilt fra 116E som beskrevet i trinn F for fremstilling av eksempel 116. HPLC ret. tid: 2,82 min. MH<+>(m/z) 591,2.

Eksempel 118

Tittelforbindelsen ble fremstilt fra 116E som beskrevet i trinn F for fremstilling av eksempel 116. HPLC ret. tid: 1,82 min. MH<+>(m/z) 592,2.

Eksempel 119

Trinn A:

3-fluorbenzonitril (10,0 g, 82,6 mmol) og morfolin (40 ml, 0,45 mol) i DMSO (70 ml) ble oppvarmet ved 100oC i 3 dager. Blandingen ble avkjølt til rt og helt i 500 ml kaldt vann. Det resulterende faststoffet ble deretter samlet ved filtrering for å

gi 9,52 g av 119A som et rosa faststoff. HPLC ret. tid: 2,30 min. MH<+>(m/z) 189,2.

Trinn B:

En blanding av 119A (9,50 g) i 6N vandig svovelsyre (80 ml) ble tilbakestrømmet i 20 timer. Etter avkjøling til 0°C ble blandingen brakt til pH 2 ved sakte tilsetning av vandig natriumhydroksid løsning (50% v/v). Etter omrøring i 15 minutter ble det resulterende faststoffet samlet ved filtrering og vasket med vann og deretter triturert med etylacetat (600 ml). Det vandige filtratet ble ekstrahert med ytterligere etylacetat (450 ml) og kombinerte organiske ekstrakter ble tørket over vannfri natriumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum for å gi 9,50 g av 119B som et lyst rosa faststoff. HPLC ret. tid: 1,94 min. MH<+>(m/z) 208,1.

Trinn C:

Til 119B (10,3 g, 50,0 mmol) i vannfri diklormetan (300 ml) ved rt ble det sakte tilsatt oksalylklorid (5,2 ml, 60,0 mmol) etterfulgt av 1 dråpe vannfri DMF. Reaksjonen ble omrørt ved romtemperatur i 3 timer og løsningsmidlet ble deretter fjernet i vakuum for å gi en olje som ble løst opp i vannfri diklormetan (200 ml). Til denne løsningen ble det tilsatt 4-metyl-3-nitroanilin (50 mmol) etterfulgt av sakte tilsetning av trietylamin (20 ml, 140 mmol) og blandingen ble omrørt ved rt over natt. Reaksjonen ble fortynnet med diklormetan (400 ml) og vasket med vann (150 ml x 2), mettet vandig natriumbikarbonat (150 ml x 2), og deretter tørket over vannfri magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum for å gi råproduktet som ble omkrystallisert fra etylacetat for å gi 9,57 g (56%) av 119C som et gult faststoff. HPLC ret. tid: 3,07 min. MH<+>(m/z) 342,1.

Trinn D:

Forbindelsen 119D ble fremstilt som beskrevet for forbindelse 116C.

Trinn E:

119E ble fremstilt fra 4-klor-5-metylpyrrolotriazin-6-etylkarboksylat som beskrevet for 116D ved substituering av forbindelse 119D for forbindelse 116C. HPLC ret. tid: 3,39 min. MH<+>(m/z) 515,1.

Trinn F:

119F ble fremstilt fra 119E som beskrevet for 116E. HPLC ret. tid: 2,78 min. MH<+>(m/z) 487,2.

Trinn G: tittelforbindelse

Tittelforbindelsen ble fremstilt fra 119F som beskrevet i trinn F for fremstilling av eksempel 116. HPLC ret. tid: 2,68 min. MH<+>(m/z) 514,1.

Eksemplene 120- 123

Eksemplene 120-123 ble fremstilt som beskrevet for eksempel 119.

Trinn A:

Forbindelse 124A ble fremstilt fra 4-metyl-3-nitroanilin ved anvendelse av den samme prosedyren som anvendt for forbindelse 114A ved substituering av 3,5-difluorbenzoylklorid for 2-klorpyridin-4-karbonylklorid.

Trinn B:

Forbindelse 124A (12,2 g) i 80 ml morfolin ble tilbakestrømmet under argon i 3 dager. Den resulterende blandingen ble avkjølt til rt og helt i isvann (1000 ml) med omrøring. Blandingen ble omrørt ved rt i 15 minutter og det resulterende faststoffet ble samlet ved filtrering og tørket i vakuum for å gi 14,6 g av 124B som et lysegult faststoff. HPLC ret. tid: 3,35 min. MH<+>(m/z) 360,1.

Trinn C:

Forbindelse 124C ble fremstilt ved hydrogenering ved anvendelse av Pd/C katalysator og hydrogen.

Trinn D:

124D ble fremstilt fra 4-klor-5-metylpyrrolotriazin-6-etylkarboksylat som beskrevet for 116D ved substituering av forbindelse 124C for forbindelse 119D. HPLC ret. tid: 3,59 min. MH<+>(m/z) 533,3.

Trinn E:

124E ble fremstilt fra 124D som beskrevet for 116E. HPLC ret. tid: 3,06 min. MH<+>(m/z) 505,0,

Trinn F: tittelforbindelse

Tittelforbindelsen ble fremstilt fra 124E som beskrevet i trinn F for fremstilling av eksempel 116. HPLC ret. tid: 2,93 min. MH<+>(m/z) 532,1.

Eksemplene 125- 147

Eksemplene 125-147 ble fremstilt som beskrevet for eksempel 124.

Eksempel 148

Trinn A:

148A ble fremstilt fra 4-klor-5-metylpyrrolotriazin-6-etylkarboksylat som beskrevet for 116D ved substituering av 2-metyl-5-nitroanilin for forbindelse 119D. HPLC ret. tid: 3,55 min. MH<+>(m/z) 356,3.

Trinn B:

148B ble fremstilt fra 148A som beskrevet for 116E. HPLC ret. tid: 2,89 min. MH<+>(m/z) 328,1.

Trinn C:

Forbindelse 148C ble fremstilt fra 148B som beskrevet i trinn F for fremstilling av eksempel 116 ved substituering av etylaminhydroklorid med (S)-(a)-(-)-metylbenzamin. HPLC ret. tid: 3,32 min. MH<+>(m/z) 431,2.

Trinn D:

Forbindelse 148D ble fremstilt ved hydrogenering ved anvendelse av Pd/C katalysator og hydrogen. HPLC ret. tid: 2,37 min. MH<+>(m/z) 401,3.

Trinn E: tittelforbindelse

Til en rt løsning av 148D (30 mg, 0,075 mmol) i vannfri DMF (0,3 ml) ble det suksessivt tilsatt trietylamin (0,14 mmol) og 2-metyl benzoylklorid (0,11 mmol) og den resulterende blandingen ble omrørt over natt. Den rå reaksjonsblandingen ble utsatt for rensing ved revers fase preparativ HPLC for å gi tittelforbindelsen. HPLC ret. tid: 3,37 min. MH<+>(m/z) 519,2.

Eksemplene 149- 206

Følgende forbindelser ble fremstilt som beskrevet for fremstilling av eksempel 148 ved substituering av (S)-(a)-(-)-metylbenzylamin i trinn C med hensiktsmessig amin og ved substituering av 2-metyl benzoylklorid i trinn E ved hensiktsmessig syreklorid.

Eksempel 207

Trinn A:

En suspensjon av klorpyrrolotriazin (2,03 g, 8,47 mmol) og 3-nitro-5-metylanilin (1,41 g, 9,3 mmol) i DMF (25 ml) ble omrørt ved rt i 24 timer. Vann (125 ml) ble tilsatt over 30 min. og løsningen ble omrørt i 1 time hvorpå pH ble justert til nøytral med mettet aq. NaHC03. Faststoffene ble filtrert, vasket med vann og tørket for å gi forbindelse A (2,589 g, 85% utbytte) som et svakt brunt faststoff.

Trinn B:

Til en løsning av forbindelse A (825 mg, 2,32 mmol) i THF (2 ml) og MeOH (1 ml) ble det tilsatt 1N NaOH (6 ml) og reaksjonen ble oppvarmet ved 60oC i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter avkjølt, konsentrert for å fjerne de organiske løsningsmidlene og pH ble justert til nøytral med 1 N HCI. Faststoffene ble filtrert, vasket med vann og tørket for å gi forbindelse B. LCMS (M+H<+>)=328,1. HPLC (tilstand A): 3,40 min.

Trinn C:

En løsning av forbindelse B (2,32 mmol), EDCI (489 mg, 2,55 mmol) og HOBt (345 mg, 2,55 mmol) i DMF (6 ml) ble omrørt ved rt i 1 time og deretter ble n-proylamin (0,38 ml, 6,4 mmol) tilsatt. Reaksjonen ble omrørt i 4 timer og vann ble tilsatt for å presipitere produktet. Faststoffene ble filtrert og renset via kolonnekromatografi på silika (33% etylacetat/heksaner) for å gi forbindelse C (0,79 g, 93% utbytte) som et hvitt faststoff.<1>H NMR (CDCI3): 8 9,11 (s, 1H), 7,92 (m, 2H), 7,71 (s, 1H), 7,36 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,82 (br m, 1H), 3,34 (q, J = 6,7 Hz, 2H), 2,86 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 1,58 (m, 2H), 1,16 (t, J = 7,5 Hz, 3H). LCMS (M+H>369,3. HPLC (tilstand A): 3,42 min.

Trinn D:

En løsning av forbindelse C (794 mg, 2,16 mmol) og 10% Pd/C (250 mg, våt) i MeOH (20 ml) ble avgasset og tilbakefylt med hydrogen tre ganger og omrørt i 2 timer. Løsningen ble deretter filtrert og konsentrert for å gi forbindelse D (691 mg, 95% utbytte).<1>H NMR (CDCI3): 5 7,94 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,23 (m, 1H), 7,06 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,53 (dd, J = 8,1, 2,2 Hz, 1H), 5,86 (br m, 1H), 3,43 (q, J = 6,6 Hz, 2H), 2,91 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 1,68 (m, 2H), 1,02 (t, J = 7,3 Hz, 3H). LCMS (M+H<+>)=339,2. HPLC (tilstand A): 2,39 min.

Trinn E: tittelforbindelse

Til en suspensjon av 2,5 g (7,4 mmol) av forbindelse D i 50 ml CH2CI2ble det tilsatt 1,42 |xl DIPEA ved rt. Reaksjonsblandingen ble deretter avkjølt til 0°C og det blir tilsatt etylklorformat (0,77 ml). Reaksjonen ble omrørt i 2 timer ved romtemperatur og deretter stoppet med MeOH. Løsningsmidlene ble deretter fjernet og produktet presipitert med vann (40 ml). Produktet ble samlet ved vakuumfiltrering og vasketmed vann (2x) og deretter løst opp i varm MeOH, avfarget med trekull og omkrystallisert fra EtOH forp gi 2,10 g (70%) av tittelforbindelsen som et rent produkt.

Eksemplene 208- 233

Forbindelser med formelen nedenfor, hvor W og Ba har verdiene angitt i

tabellen angitt nedenfor, ble fremstilt ved å følge den samme prosedyren som beskrevet for eksempel 1 ved anvendelse av hensiktsmessig syreklorid, klorformat eller isocyanat.

Eksempel 234

Trinn A:

p-tolyl eddiksyre (0,6 g, 4,1 mmol) ble det tilsatt H2SO4(5,5 ml) med avkjøling i et isbad. NaN03(0,35 g, 4,1 mmol) ble sakte tilsatt og blandingen ble omrørt ved 0-5°C i 8 timer. Løsningen ble forsiktig helt på is og faststoffene ble filtrert og vasket med vann for å gi 3-nitro-p-tolyleddiksyre (0,59 g, 74%).

Det rå faststoffet (160 mg) ble hydrogenert under H2ballong i MeOH (15 ml) i nærvær av 10% Pd-C ved rt i 2 timer. Filtrering ga 3-amino p-tolyleddiksyre som et gult faststoff (131 mg, 97%).

Trinn B:

3-amino p-tolyleddiksyre (131 mg, 0,8 mmol) og 1B (220 mg, 0,92 mmol) ble omrørt i 18 timer i DMF (2 ml). Vann ble tilsatt for å presipitere produktet og pH ble justert til 6 med aq NaHC03. Faststoffene ble filtrert, vasket med vann og tørket for å gi ovennevnte ester (62%).

Trinn C: tittelforbindelse

Til ovennevnte syre (86 mg, 0,23 mmol) i DMF (2 ml) ble det tilsatt EDC (49 mg, 0,26 mmol) og HOBt (35 mg, 0,26 mmol). Blandingen ble omrørt i 1 time etterfulgt av tilsetning av metylamin (0,25 ml, 2M i THF). Reaksjonen ble omrørt i 18 timer og deretter ble det tilsatt vann (12 ml). Faststoffene ble filtrert for å oppnå tittelforbindelsen (75 mg, 84%). (M+H)+: 395,2, HPLC retensjonstid: 2,85 min.

Eksempel 235 og 236

Eksemplene 235 og 236 ble fremstilt fra eksempel 234 ved å følge prosedyren beskrevet i eksempel 2 og 3. Eksempel 237

Trinn A:

Forbindelse 1B ble hydrolysert under standard forsåpningsmetoder og koblet med n-propylamin ved anvendelse av EDC/HOBt metoden for å gi C-6 n-propylamido oksopyrrolotriazin. En løsning av denne forbindelsen (1,65 g, 7 mmol) i toluen (50 ml) ble tilsatt POCI3(0,8 ml, 8,45 mmol) og DIPEA (1 ml, 5,6 mmol) og løsningen oppvarmet til tilbakeløp i 10 timer. Reaksjonen ble avkjølt og helt inn i iskald vandig NaHC03. Løsningen ble ekstrahert med EtAOc (3x), tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert for å gi kloridet som et gult faststoff (1,65 g, 93%) som ble anvendt uten ytterligere rensing.

Trinn B:

En løsning av 3-nitro-4-metyl benzamid (402 mg, 2,2 mmol) i dikloretan (15 ml) ble tilsatt propionsyreanhydrid (2,45 mmol) og DMAP (381 mg, 3,1 mmol) og reaksjonsblandingen ble oppvarmet ved 55°C. Ytterligere propionsyreanhydrid (2,45 mmol) og DMAP (1,4 ekv.) ble tilsatt og reaksjonstemperaturen ble øket til 85°C i 2 timer. Reaksjonsbeholderen ble deretter avkjølt og helt i CH2CI2(50 ml) og vann (25 ml). Det organiske laget ble deretter vasket med 1N HCI og saltvann, tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert i vakuum til en olje som ble renset via kolonnekromatografi (15% deretter 30% EtOAc/heksan) for å gi nitroimid (333 mg, 63%).

Ovennevnte forbindelse (152 mg, 0,6 mmol) ble deretter løst opp i EtOH (6 ml) og det ble tilsatt 5% Pd-C (våt, 35 mg) og evakuert og tilbakefylt under en hydrogenballong. Reaksjonen ble deretter omrørt i 2 timer, filtrert og konsentrert til et hvitt faststoff som blir anvendt uten ytterligere rensing (132 mg, 99%).

Ovennevnte anilin (20 mg) og klorid (20 mg) ble kombinert i DMF (0,25 ml) og omrørt i 18 timer. Løsningen ble tilført vann dråpevis (1 ml) og nøytralisert med fortynnet med aq. NaHC03. Faststoffet ble hurtig omrørt i 2 timer og deretter filtrert og vasket med vann for å gi 33,6 mg, 98% utbytte.

Eksempel 238

Trinn A:

3-nitro-4-metyl benzamid (0,2 g, 1,1 mmol) ble suspendert i dikloretan (6 ml) og det ble tilsatt oksalylklorid (0,12 mol, 1,3 mmol) ved 0°C. Løsningen ble deretter

latt bli varm til romtemperatur og omrørt i 1 time etterfulgt av oppvarming ved tilbakeløp i 18 timer. Reaksjonen ble avkjølt, konsentrert for å fjerne de flyktige stoffene og tørket under vakuum for å gi ønsket produkt som ble anvendt ytterligere rensing.

Trinn B:

Til rå acylisocyanat ble det tilsatt CH2CI2(5 ml) og tørr EtOH (1 ml) og reaksjonen ble omrørt i 1 time. Oppløsnigsmidlene ble fjernet i vakuum og faststoffene ble filtrert med EtOAc og vasket med eter for å gi et hvitt faststoff (203 mg, 73%). De rå faststoffene ble deretter løst opp i MeOH (25 ml) og hydrogenert under hydrogenballong i nærvær 5% Pd-C i 2 timer for å gi et hvitt fast stoff etter filtrering (174 mg, 97%).

Trinn C: tittelforbindelse

dette faststoffet fra det tidligere trinn ble koblet med ovennevnte pyrrolotriazinklorid under standardbetingelser for å gi tittelforbindelsen i 55% utbytte.

Eksemplene 239- 267

Eksemplene 239-267 ble fremstilt som beskrevet i eksempel 238 ved omsetning av acylisocyanat med et hensiktsmessig amin.

Eksemplene 268-284

Trinn A:

En løsning av 4-metyl-3-nitrobenzylklorid (1,09 g, 5,87 mmol) i DMF (10 ml) ble tilsatt ftalamid (0,86 g, 5,87 mmol), Bu4NI (50 mg) og K2C03(0,97 g) og reaksjonsblandingen ble hurtig omrørt i 4 timer. Vann (40 ml) ble deretter tilsatt dråpevis og oppslemmingen ble omrørt i 15 minutter. Faststoffene ble deretter filtrert og vasket med vann for å gi beskyttet amin (1,68 g, 97%).

Ovennevnte faststoffer (0,75 g) ble suspendert i EtOH (25 ml) og det ble tilsatt hydrazin (0,39 ml). Reaksjonsblandingen ble deretter oppvarmet til 60oC i 8 timer og deretter avkjølt. MeOH (25 ml) ble tilsatt og suspensjonen ble hurtig omrørt for å bryte opp faststoffene. Produktet ble deretter filtrert og skylt med MeOH (2x) for å gi produktet (0,38 g, 90%).

Trinn B:

Aminet (0,38 g, 2,3 mmol) ble løst opp i CH2CI2(10 ml) og avkjølt til 0°C og det ble tilsatt DIPEA (0,44 ml, 2,5 mmol). Etylklorformat (0,22 ml, 2,3 mmol) ble tilsatt og reaksjonen ble omrørt i 5 minutter etterfulgt av tilsetning av MeOH (0,1 ml). Blandingen ble konsentrert til en olje og oppløst i EtOAc (30 ml) etterfulgt av vasking med vann, fortynnet aq NaHC03og saltvann. Det organiske laget ble deretter tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert til en olje. Rensing via kolonnekromatografi (25% EtOAc/heksan) ga nitroproduktet (500 mg, 92%). Ovennevnte produkt ble løst opp i EtOH (5 ml) og EtOAc (5 ml) og det ble tilsatt 5% Pd-C (våt) etterfulgt av avdampning og tilbakefylt med hydrogen (3x). Blandingen ble deretter omrørt i 1 time og filtrert for å gi produktet (177 mg, 99%).

Dette aminet ble deretter koblet og utviklet på en lignende måte som beskrevet i eksempel 1 for å gi eksemplene i tabellen angitt nedenfor.

Eksemplene 285- 290

Følgende forbindelser ble fremstilt ifølge prosedyren angitt i eksempel 31.

Eksemplene 291 -293

Trinn A:

En løsning av 3-nitro-4-metylacetofenon (0,4 g, 2,23 mmol) i EtOH (12 ml) ble tilført 5% Pd-C (våt, 100 mg). Flasken ble evakuert og tilbakefylt under nitrogenballong (3x). Reaksjonen ble deretter omrørt i 3 timer, filtrert og konsentrert for å gi 3-amino-4-metylacetofenon (330 mg, 99%).

Trinn B:

3-amino-4-metylacetofenon ble deretter koblet med 1B som i eksempel 1 og utviklet til C-6 aminet på en lik måte som i eksempel 2 og 3 for å danne forbindelsene oppført i tabellen nedenfor. Eksempel 294

Trinn A:

En løsning av 3-nitro-4-metylacetofenon (0,1 g, 0,53 mmol) i MeOH (5 ml) ble tilsatt Accufluor og løsningen ble oppvarmet ved tilbakeløp i 18 timer. Reaksjonen ble deretter avkjølt, konsentrert og suspendert i CH2CI2. Løsningen ble filtrert og de organiske filtratene ble deretter vasket med met. NaHC03og vann. Det organiske laget ble tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert til en olje som ble renset via kolonnekromatografi (10% av 25% EtOAc/heksan) for å gi ovennevnte produkt (70 mg, 54%).

Trinn B: tittelforbindelse

Dette produktet ble redusert til aminet på en lignende måte som ovennevnte eksempler for å gi 60 mg (98%) som ble koblet direkte med mellomproduktet oppnådd i trinn A ved fremstilling av eksempel 237, for å gi 73 mg av rå ketal som ble behandlet med 3N HCI (0,1 ml) i aceton (3 ml) i 2 dager. Reaksjonen ble deretter nøytralisert med mettet aq. NaHC03og fortynnet med vann (3 ml). Faststoffene ble filtrert for å gi 55,3 mg av tittelforbindelsen.

Eksempel 295

Trinn A:

En løsning av 3-nitro-4-metylbenzoylklorid (1,6 g) i THF (50 ml) og MeCN (50 ml) ble tilsatt trimetylsilyldiazometan (5 ml, 2M i heksaner) og TEA (1,4 ml) ved CC. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 24 timer. De flyktige stoffene ble deretter fjernet i vakuum for å gi 3,3 g av rått gult faststoff. En del ble renset via kolonnekromatografi (25% EtOAc/heksan).

Ovennevnte diazoketon (44 mg, 0,22 mmol) ble løst opp i CH2CI2(1 ml) og EtOH (0,09 ml) og det ble tilsatt BF3OEt2(0,006 ml). Blandingen ble omrørt i 90 minutter og en ytterligere tilsetning av BF3OEt2(0,005 ml) ble utført. Reaksjonsblandingen ble deretter omrørt i 16 timer og renset direkte gjennom en silikagel plugg for å gi ketonet (42,1 mg, 88%).

Trinn B:

HlCX)u

Ketonet ble redusert til amino-alkohol på en identisk måte som ovennevnte eksempler og koblet til klorpyrrolotriazin som i eksempel 1 for å gi alkoholen (58 mg).

Trinn C: tittelforbindelse

Alkoholen (56 mg, 0,14 mmol) ble løst opp i CH2CI2og det ble tilsatt PCC (36,3 mg, 0,17 mmol). Reaksjonen ble omrørt ved rt i 24 timer, filtrert gjennom celitt og renset via kolonnekromatografi (25% EtOAc/heksan) for å gi ketonet (44 mg, 79%).

Eksemplene 296- 305

Eksemplene 296-305 ble fremstilt ifølge prosedyren beskrevet i eksempel 31.

Eksemplene 306- 307

Eksemplene 306-307 ble fremstilt ved å følge den samme prosedyren som beskrevet i eksempel 3.

Eksemplene 308- 311

Eksemplene 308-311 ble fremstilt ved å følge prosedyrer som ligner de beskrevet i eksempel 48.

Claims

1. Forbindelse,karakterisert vedat den har formelen

eller en enantiomer, diastereomer eller salt derav, hvor R3er metyl eller CF3; X er -C(=0)- eller -C(=0)NH-; R4er lineær eller forgrenet C2-6alkyl; cykloalkyl eventuelt substituert med keto og/eller opptil to R16; heterocyklisk gruppe eller heteroaryl eventuelt substituert med keto og/eller opptil to R16; Ci^alkyl substituert med opptil tre av halogen, trifluormetyl, cyano, hydroksy, alkoksy, halogenalkyl, halogenalkoksy, nitro, fenyl, fenyloksy eller benzyloksy, hvor nevnte fenylgruppe eventuelt er substituert med én til to R26; eller fenyl eventuelt substituert med null til to R16; R6aog R6ber uavhengig valgt fra hydrogen, lavere alkyl, halogen, trifluormetoksy, trifluormetyl, hydroksy, Ci^alkoksy, nitro, amino, Ci_4alkylamino og cyano; B er fenyl substituert med heterocyklo og én til to R12; cyklopropyl eller cyklobutyl eventuelt substituert med én til to R7; eller B er valgt fra én av:

R7 er Ci^alkyl, trifluormetyl, trifluormetoksy, halogen, cyano, amino, Ci- 4alkylalmino, hydroksy, Ci^alkoksy, fenyl, benzyl, fenyloksy eller benzyloksy; R12 og R16er ved hver forekomst er uavhengig valgt fra hydrogen, alkyl, trifluormetyl, trifluormetoksy, halogen, cyano, nitro, amino, Ci-4alkylamino, aminoCi^alkyl, halogenCi^alkyl, hydroksy, hydroksyCi-4alkyl, alkoksy, fenyl, benzyl, fenyloksy og benzyloksy; R26er ved hver forekomst uavhengig valgt fra Ci^alkyl, C2-6alkenyl, halogen, halogenalkyl, halogenalkoksy, cyano, nitro, amino, Ci^alkylamino, aminoCi^alk<y>l, h<y>droks<y>, hvdroksvCi^alkvI, alkoksy, alkyltio, fenyl, benzyl, fenyloksy og benzyloksy: og n er 0,1 eller 2.

2. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den har formelen (2a) eller (2b),

eller en enantiomer, diastereomer eller salt, derav, hvor: R3er metyl eller CF3; R+aer fenyl eller fem eller seks leddet heteroaryl eventuelt substituert med opptil to Ri6; R*ber lineær eller forgrenet C2-6alkyl; cykloalkyl eventuelt substituert med keto og/eller opptil to_Ri6; heterocyklisk gruppe eventuelt substituert med keto og/eller opptil to R16; eller Ci^alkyl substituert med opptil tre av halogen, trifluormetyl, cyano, hydroksy, alkoksy, halogenalkyl, halogenalkoksy, nitro, fenyl, fenyloksy eller benzyloksy, hvor nevnte fenyl eller benzylgruppe videre er eventuelt substituert med én til to R26; R6aer Ci^alkyl, halogen, trifluormetoksy, trifluormetyl, hydroksy, Ci^alkoksy, amino, Ci^alkylalmino eller cyano; B er valgt fra fenyl substituert med heterocyklo og opptil to R12, cyklopropyl eller cyklobutyl idet hvilken som eventuelt kan være eventuelt substituert med én til to R7eller B er valgt fra én av: R7 er Ci^alkyl, trifluormetyl, trifluormetoksy, halogen, cyano, nitro, amino, Ci_ 4alkylalmino, hydroksy, Ci^alkoksy, fenyl, benzyl, fenyloksy eller benzyloksy; R12 og R16er ved hver forekomst uavhengig valgt fra hydrogen, alkyl, trifluormetyl, trifluormetoksy, halogen, cyano, nitro, amino, Ci-4alkylalmino, hydroksy, alkoksy, fenyl, benzyl, fenyloksy og benzyloksy; R26er ved hver forekomst valgt fra Ci^alkyl, trifluormetyl, trifluormetoksy, halogen, cyano, amino, Ci^alkylalmino, hydroksy, alkoksy, fenyl, benzyl, fenyloksy og benzyloksy; n er 0 eller 1.

3. Forbindelse ifølge krav 2 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav,karakterisert vedat Ber cyklopropyl eventuelt substituert med én til to R7eller B er valgt fra:

4. Farmasøytisk preparat,karakterisert vedat det omfatter én eller flere forbindelser ifølge krav 1 og en farmasøytisk akseptabel bærer eller fortynningsmiddel.

5. Preparat ifølge krav 4,karakterisert veda t det er for behandling av en inflammatorisk lidelse.

6. Preparat ifølge krav 4,karakterisert vedat den inflammatoriske lidelsen er valgt fra astma, åndenødssyndrom hos voksne, kronisk obstruktiv lungesykdom, kronisk lunge inflammatorisk sykdom, diabetes, inflammatorisk tarmsykdom, osteoporose, psoriasis, graft vs. vert avvisning, aterosklerose og artritt omfattende rhematoid artritt, psoriatisk artritt, traumatisk artritt, rubella artritt, giktisk artritt og osteoartritt.

7. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er valgt fra

salter derav. 8. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er valgt fra enantiomererjjiasteriomerer og salter derav.

9. Forbindelse ifølge krav 8,karakterisert vedat den er

og enantiomerer, diasteriomerer og salter derav.

10. Forbindelse ifølge krav 9,karakterisert vedat den har formelen:

eller en enantiomer, diastereomer eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

11. Farmasøytisk preparat,karakterisert vedat den inneholder forbindelsen ifølge krav 10 og en farmasøytisk akseptabel bærer eller fortynningsmiddel.

12. Preparat ifølge krav 11,karakterisert vedat det er for behandling av en inflammatorisk lidelse.

13. Preparat ifølge krav 12,karakterisert vedat den inflammatoriske lidelsen er valgt fra astma, åndenødssyndrom hos voksne, kronisk obstruktiv lungesykdom, kronisk pulmonal inflammatorisk sykdom, diabetes, inflammatorisk tarmsykdom, osteoporose, psoriasis, graft vs. vert avvisning, aterosklerose og artritt omfattende rhematoid artritt, psoriatisk artritt, traumatisk_artritt, rubella artritt, giktisk artritt og osteoartritt.