NO326421B1 - Heterocykiske tripeptider, farmasoytisk preparat omfattende slike samt anvendelse av slike for fremstilling av medikamenter for behandling eller forebygging av sykdom - Google Patents

Heterocykiske tripeptider, farmasoytisk preparat omfattende slike samt anvendelse av slike for fremstilling av medikamenter for behandling eller forebygging av sykdom Download PDF

Info

Publication number
NO326421B1
NO326421B1 NO20043642A NO20043642A NO326421B1 NO 326421 B1 NO326421 B1 NO 326421B1 NO 20043642 A NO20043642 A NO 20043642A NO 20043642 A NO20043642 A NO 20043642A NO 326421 B1 NO326421 B1 NO 326421B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
compound
formula
hcv
butyl
hydroxy
Prior art date
Application number
NO20043642A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20043642L (no
Inventor
Montse Llinas-Brunet
Murray D Bailey
Elise Ghiro
Original Assignee
Boehringer Ingelheim Int
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Ingelheim Int filed Critical Boehringer Ingelheim Int
Publication of NO20043642L publication Critical patent/NO20043642L/no
Publication of NO326421B1 publication Critical patent/NO326421B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0827—Tripeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

Oppfinnelsens område
Foreliggende oppfinnelse angår heterocykliske tripeptider, farmasøytisk preparat omfattende slike samt anvendelse av slike for fremstilling av medikament for behandling eller forebygging av sykdom.
Bakgrunn for oppfinnelsen
Hepatitt C virus (HCV) er det etiologiske hovedagens for post-transfusjon og gruppe-tilegnet ikke-A ikke-B hepatitt verden over. Det er beregnet at over 200 millioner mennesker verden over er infisert med viruset. En høy prosentdel av bærere blir kronisk infisert og mange utvikler kronisk leversykdom, såkalt kronisk hepatitt C. Denne gruppen har igjen høy risiko for alvorlig leversykdom så som lever-cirrhose, hepatocellulært karsinom og terminal leversykdom, hvilket fører til død.
Mekanismen hvorved HCV oppnår viral persistens og forårsaker en høy grad av kronisk leversykdom er ikke grundig oppklart. Det er ikke kjent hvorledes HCV interagerer med og unngår vertens immunsystem. I tillegg må rollene for cellulære og humorale immunresponser ved beskyttelse mot HCV- infeksjon og sykdom fortsatt oppklares. Immunoglobuliner er rapportert for forebygging av transfusjon-assosiert viral hepatitt, men Center for Disease Control anbefaler for tiden ikke immunoglobulinbehandlinger for dette formål. Mangelen på en effektiv beskyttende immunrespons hemmer utviklingen av en vaksine eller tilstrekkelige post-eksponeringsforebyggingstiltak, slik at i nær fremtid er forhåpninger sterkt knyttet til antivirus-intervensjoner.
Forskjellige kliniske undersøkelser er utført med det mål å finne fram til farmasøytiske midler som er i stand til effektivt å behandle HCV-infeksjon hos pasienter som er rammet av kronisk hepatitt C. Disse undersøkelser har involvert anvendelse av interferon-alfa, alene og i kombinasjon med andre antivirusmidler. Slike undersøkelser har vist at et vesentlig antall av deltagerne ikke responderer på disse terapier, og blant dem som responderer godt, ble en stor andel funnet å få tilbakefall etter avslutning av behandlingen.
Inntil nylig var interferon (IFN) eneste tilgjengelige terapi med påviselige resultater godkjent klinisk for pasienter med kronisk hepatitt C. Imidlertid er den forlengete responsgrad lav, og interferonbehandling fremkaller også alvorlige bivirkninger (dvs. retinopati, thyreoiditt, akutt pankreatitt, depresjon) som reduserer livskvaliteten til behandlede pasienter. Nylig ble interferon i kombinasjon med ribavirin godkjent for pasienter som ikke var mottagelige for IFN alene. Imidlertid blir bivirkningene forårsaket av IFN ikke avhjulpet med denne kombinasjonsterapien. Pegylerte former av interferoner så som PEG-lntron® og Pegasys® kan tydeligvis delvis hjelpe på disse skadelige bivirkninger, men antivirusmedikamenter forblir fortsatt det aktuelle valg for oral behandling av HCV.
Derfor eksisterer et behov for utvikling av effektive antivirusmidler for behandling av HCV-infeksjon som overvinner begrensningene ved eksisterende farmasøytiske terapier.
HCV er et innkapslet positivt trådformet RNA-virus i Flaviviridae-familien. Det enkeltrådete HCV RNA-genom er omtrent 9500 nukleotider i lengde og har en enkel åpen leseramme (ORF) som koder for et enkelt stort polyprotein på ca. 3000 aminosyrer. I infiserte celler blir dette polyprotein spaltet på multiple seter med cellulære og virale proteaser for å produsere de strukturelle og ikke-strukturelle (NS) proteiner. I tilfellet av HCV blir dannelsen av ferdige ikke-strukturelle proteiner (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A og NS5B) utført med to virale proteaser. Det første hittil dårlig karakteriserte spalter på NS2-NS3 skjøten (følgelig referert til som NS2/3 protease); den andre er en serinprotease som sitter innenfor den N-terminale region av NS3 (NS3 protease) og medierer alle de påfølgende spaltninger nedstrøms for NS3, både i cis, på NS3-NS4A-spaltningssetet og i trans, for de gjenværende NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B seter. NS4A-proteinet synes å tjene multiple funksjoner, som virker som en kofaktor for NS3-proteasen og muligens hjelper membranlokaliseringen i NS3 og andre viral replikase- komponenter. Kompleksdannelsen av NS3-proteasen med NS4A synes nødvendig for prosesseringsforløpet og forsteker den proteolytisk effektivitet på alle setene. NS3-proteinet oppviser også nukleosid trifosfatase- og RNA helicase-aktiviteter. NS5B er en RNA-avhengig RNA polymerase som er involvert i replikasjonen av HCV.
En generell strategi for utviklingen av antivirusmidler er å inaktivere virus- kodete enzymer som er essensielle for replikasjonen av viruset.
Det følgende er en liste over patentsøknader publisert i de siste få år som beskriver HCV NS3-proteaseinhibitorpeptidanaloger som er strukturelt forskjellige fra forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse: GB 2,337,262; JP 10298151; JP 11126861; JP 11292840; JP 2001-103993;
US 6,159,938; US 6,187,905; WO 97/43310; WO 98/17679; WO 98/22496;
WO 98/46597; WO 98/46630; WO 99/38888; WO 99/50230; WO 99/64442;
WO 99/07733; WO 99/07734; WO 00/09543; WO 00/09558; WO 00/20400;
WO 00/59929; WO 00/31129; WO 01/02424; WO 01/07407; WO 01/16357;
WO 01/32691; WO 01/40262; WO 01/58929; WO 01/64678; WO 01/74768;
WO 01/77113; WO 01/81325; WO 02/08187; WO 02/08198; WO 02/08244;
WO 02/08251; WO 02/08256; WO 02/18369; WO 02/60926 og WO 02/79234.
En fordel ved foreliggende oppfinnelse er at den tilveiebringer tripeptid-forbindelser som er anvendlige for fremstilling av medikamenter som er hemmende for NS3-proteasen, et enzym som er essensielt for replikasjonen av hepatitt C virus.
En ytterligere fordel ved ett aspekt ved foreliggende oppfinnelse ligger i det faktum at forbindelsene spesifikt er anvendlige for fremstilling av medikamenter som hemmer NS3-proteasen og ikke viser nevneverdig hemmende aktivitet mot andre serinproteaser så som human leukocytt-elastase (HLE), svinepankreas-elastase (PPE) eller bovint pankreaschymotrypsin eller cysteinproteaser så som humant lever-cathepsin B (Cat B). Videre er forbindelsene aktive i cellekultur og har god farmakokinetisk profil in vivo.
i
En ytterligere fordel ved foreliggende oppfinnelse er at den tilveiebringer forbindelser som er anvendlige for fremstilling av medikamenter som er oralt biotilgjengelige i pattedyr.
Sammenfatning av oppfinnelsen
Omfattet innenfor omfanget av foreliggende oppfinnelse er en forbindelse med formel (I):
hvor R<1> er hydroksy eller NHS02R<1A> hvor R<1A> er (Ci-8)alkyl, (C3.7)cykloalkyl eller {(C1-6)alkyl-(C3-7)cykloalkyl}, som alle eventuelt er substituert fra 1 til 3 ganger med halogen, cyano, nitro, 0-(Ci-6)alkyl, amido, amino eller fenyl, eller R<1A> er C6 eller C10 aryl som eventuelt er substituert fra 1 til 3 ganger med halogen, cyano, nitro, (Ci-6)alkyl, 0-(Ci-6)alkyl, amido, amino eller fenyl; R2 er t-butyl, -CH2-C(CH3)3 eller -CH2-cyklopentyl; R<3> er t-butyl eller cykloheksyl, og R4 er cyklobutyl, cyklopentyl eller cykloheksyl; eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
Omfattet av omfanget av foreliggende oppfinnelse er et farmasøytisk preparat omfattende en anti-hepatitt C viralt effektiv mengde av en forbindelse med formel I eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav i blanding med et farmasøytisk akseptabelt bærermedium eller hjelpemiddel.
I henhold til én utførelsesform inneholder det farmasøytiske preparatet ifølge foreliggende oppfinnelse videre a-interferon (pegylert eller ikke) eller ribavirin eller ett eller flere andre anti-HCV-midler eller hvilken som helst kombinasjon av dem ovenfor.
Innenfor omfanget av foreliggende oppfinnelse ligger også anvendelse av en forbindelse med formel I som beskrevet her for fremstilling av et medikament for behandling eller forebygging av hepatitt C-virusinfeksjon.
Detaljert beskrivelse av foretrukne utførelsesformer
Definisjoner
Som anvendes her gjelder de følgende definisjoner hvis det ikke på annen måte er angitt i kravene: Med henvisning til tilfellene hvor ( R) eller ( S) blir anvendt for å betegne den absolutte konfigurasjon for et substituent- eller asymmetrisk senter i en forbindelse med formel I, blir betegnelsen anvendt i sammenheng med hele forbindelsen og ikke i sammenheng med substituenten eller det asymmetriske senter alene.
Betegnelsen "P1, P2 og P3" som anvendes her refererer til stillingen til aminosyrerestene ved å starte fra C-terminusenden til peptidanalogene og strekker seg mot N-terminus (dvs. P1 angir stilling 1 fra C-terminus, P2: andre stilling fra C-terminus, etc.) (se Berger A. & Schechter I., Transactions of the Royal Society London series B257. 249-264 (1970)).
Som anvendes heri angir betegnelsen "(1 R, 2S)-vinyl-ACCA" en forbindelse med formelen:
nemlig (7/?, 2S) 1-amino-2-etenylcyklopropylkarboksylsyre.
Betegnelsen "(Ci-6)alkyl" som anvendes her, enten alene eller i kombinasjon med en annen substituent, betyr acykliske, lineære eller forgrenete alkylsubstituenter inneholdende fra 1 til 6 karbonatomer og omfatter for eksempel metyl, etyl, propyl, butyl, 1-metyletyl, 1 -metylpropyl, 2-metylpropyl, 1,1-dimetyletyl og heksyl. Tilsvarende betyr betegnelsen "(Ci-8)alkyl" acyklisk, rettkjedet eller forgrenet alkyl inneholdende 1 til 8 karbonatomer, f.eks. oktyl.
Betegnelsen "(C3-7)cykloalkyl" som anvendes her, enten alene eller i kombinasjon med en annen substituent, betyr en cykloalkylsubstituent inneholdende fra 3 til 7 karbonatomer og omfatter cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cykloheksyl og cykloheptyl.
Betegnelsen "{(Ci.6)alkyl-(C3-7)cykloalkyl}" som anvendes her betyr en cykloalkylrest inneholdende fra 3 til 7 karbonatomer direkte bundet til en alkylenrest inneholdende 1 til 6 karbonatomer; for eksempel cyklopropylmetyl, cyklopentyletyl, cykloheksylmetyl, cykloheksyletyl og cykloheptylpropyl. I det tilfelle hvor R<4A> er en {(Ci-6)alkyl-(C3.6)cykloalkyl}, er denne gruppen bundet til S02 gruppen gjennom (Ci-6)alkyl (dvs. alkylen-delen).
Betegnelsen "Ce eller Cio aryl" som anvendes her, enten alene eller i kombinasjon med en annen rest, betyr enten en aromatisk monocyklisk gruppe inneholdende 6 karbonatomer eller en aromatisk bicyklisk gruppe inneholdende 10 karbonatomer. For eksempel omfatter aryl fenyl, 1-naftyl eller 2-naftyl.
Betegnelsen "0-(Ci.6)alkyl" som anvendes her, enten alene eller i kombinasjon med en annen rest, betyr resten -0-(Ci-6)alkyl, hvor alkyl er som definert ovenfor inneholdende opptil seks karbonatomer og omfatter metoksy, etoksy, propoksy, 1-metyletoksy, butoksy og 1,1-dimetyletoksy. Den sistnevnte rest er vanlig kjent som tert-butoksy.
Betegnelsen "halogen" som anvendes her, betyr en halogensubstituent valgt fra brom, klor, fluor eller jod.
Betegnelsen "farmasøytisk akseptabelt salt" betyr et salt av en forbindelse med formel (I) som er, innenfor omfanget av sunn medisinsk vurdering, egnet for anvendelse i kontakt med vevet til mennesker og lavere dyr uten unødvendig toksisitet, irritasjon, allergisk respons og lignende, som er i samsvar med et rimelig nytte/risiko-forhold, generelt vann- eller oljeløselige eller dispergerbare og effektive for deres tilsiktede anvendelse. Betegnelsen omfatter farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter og farmasøytisk akseptable baseaddisjonssalter. Lister over egnede salter finnes i f.eks. S.M. Birge et al., J. Pharm. Sei., 1977, 66, s. 1-19, som herved inntas som referanse i sin helhet.
Betegnelsen "farmasøytisk akseptabelt syreaddisjonssalt" betyr de salter som beholder den biologiske effektiviteten og egenskapene til den frie basen og som ikke er biologisk eller på annen måte uønskede, dannet med uorganiske syrer så som saltsyre, bromhydrogensyre, svovelsyre, sulfaminsyre, salpetersyre, fosforsyre og lignende, og organiske syrer så som eddiksyre, trifluoreddiksyre, adipinsyre, askorbinsyre, asparaginsyre, benzensulfonsyre, benzosyre, smørsyre, kamfersyre, kamfersulfonsyre, kanelsyre, sitronsyre, digluconsyre, etansulfonsyre, glutaminsyre, glykolsyre, glycerofosforsyre, hemisulfinsyre, heksansyre, maursyre, fumarsyre, 2-hydroksyetansulfonsyre (isetidnsyre), melkesyre, hydroksymaleinsyre, eplesyre, malonsyre, mandelsyre, mesitylenesulfonsyre, metansulfonsyre, naftalensulfonsyre, nikotinsyre, 2-naftalensulfonsyre, oksalsyre, pamoinsyre, pectinsyre, fenyleddiksyre, 3-fenylpropionsyre, pivalinsyre, propionsyre, pyrodruesyre, salisylsyre, stearinsyre, ravsyre, sulfanilic syre, vinsyre, p-toluensulfonsyre, undekansyre og lignende.
Betegnelsen "farmasøytisk akseptabelt baseaddisjonssalt" betyr de salter som beholder den biologiske effektiviteten og egenskapene til de frie syrene, og som ikke er biologisk eller på annen måte uønskede, dannet med uorganiske baser så som ammoniakk eller hydroksyd, karbonat eller bikarbonat av ammonium eller et metallkation så som natrium, kalium, litium, kalsium, magnesium, jern, sink, kobber, mangan, aluminium og lignende. Spesielt foretrukket er ammonium, kalium, natrium, kalsium og magnesiumsaltene. Salter avledet fra farmasøytisk akseptable organisk ikke-toksiske baser omfatter salter av primære, sekundære og tertiære aminer, kvaternære aminforbindelser, substituerte aminer omfattende naturlig forekommende substituerte aminer, cykliske aminer og basiske ionebytter-harpikser, så som metylamin, dimetylamin, trimetylamin, etylamin, dietylamin, trietylamin, isopropylamin, tripropylamin, tributylamin, etanolamin, dietanolamin, 2-dimetylaminoetanol, 2-dietylaminoetanol, dicykloheksylamin, lysin, arginin, histidin, koffein, hydrabamin, cholin, betain, etylendiamin, glucosamin, metylglucamin, theobrom, puriner, piperazin, piperidin, N-etylpiperidin, tetrametylammoniumforbindelser, tetraetylammonium- forbindelser, pyridin, N,N-dimetylanilin, N-metylpiperidin, N-metylmorfolin, dicykloheksylamin, dibenzylamin, N,N-dibenzylfenetylamin, 1-efenamin, N,N'-dibenzyletylendiamin, polyaminharpikser og lignende. Spesielt foretrukne organiske ikke-toksiske baser er isopropylamin, dietylamin, etanolamin, trimetylamin, dicykloheksylamin, cholin og koffein.
Betegnelsen "antivirusmiddel" som anvendes her betyr et agens (forbindelse eller biologisk) som effektivt hemmer dannelsen og/eller replikasjonen av et virus hos et pattedyr. Dette omfatter agenser som griper inn i enten vert- eller virusmekanismer som er nødvendig for dannelsen og/eller replikasjonen av et virus hos et pattedyr. Antivirusmidler omfatter for eksempel ribavirin, amantadine, VX-497 (merimepodib, Vertex Pharmaceuticals), VX-498 (Vertex Pharmaceuticals), Levovirin, Viramidin, Ceplen (maxamine), XTL-001 og XTL-002 (XTL Biopharmaceuticals).
Betegnelsen "annet anti-HCV middel" som anvendes her betyr de midler som er effektive for å sinke eller forhindre progresjonen av hepatitt C-relaterte symptomer på sykdom. Slike midler kan velges fra: antivirusmidler, immunomodulerende midler, inhibitorer av HCV NS3-protease, inhibitorer av HCV-polymerase eller inhibitorer av et annet mål i HCV-livssyklusen.
Betegnelsen "immunomodulerende middel" som anvendes her betyr de midler (forbindelser eller biologiske) som effektivt forbedrer eller forsterker immunsystemresponsen til et pattedyr. Immunomodulerende midler omfatter for eksempel klasse I interferoner (så som a-, p-, 5- og ou-interferoner, T-interferoner, konsensus interferoner og asialo-interferoner), klasse II interferoner (så som y-interferoner) og pegylerte interferoner.
Betegnelsen "inhibitor av HCV NS3 protease" som anvendes her betyr et agens (forbindelse eller biologisk) som effektivt hemmer funksjonen av HCV NS3 protease hos et pattedyr. Inhibitorer av HCV NS3-protease omfatter for eksempel forbindelsene beskrevet i WO 99/07733, WO 99/07734, WO 00/09558, WO 00/09543, WO 00/59929 eller WO 02/060926, Boehringer Ingelheim klinisk kandidat identifisert som BILN 2061 og Vertex/Eli Lilly pre-utviklingskandidat identifisert som VX-950 eller LY-570310. Spesielt kan forbindelser # 2, 3, 5, 6, 8, 10, 11, 18, 19, 29, 30, 31,32, 33, 37, 38, 55, 59, 71,91, 103, 104, 105, 112, 113, 114,115,116,120,122,123,124,125,126 og 127 beskrevet i tabellen på sidene 224-226 i WO 02/060926, anvendes i kombinasjon med forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse.
Betegnelsen "inhibitor av HCV-polymerase" som anvendes her betyr et agens (forbindelse eller biologisk) som effektivt hemmer funksjonen av en HCV-polymerase hos et pattedyr. Dette omfatter for eksempel inhibitorer av HCV NS5B-polymerase. Inhibitorer av HCV-polymerase omfatter ikke-nukleosider, for eksempel forbindelsene beskrevet i: US Application No. 10/198,680, som svarer til PCT/CA02/01127, begge innlevert 18. juli 2002 (Boehringer Ingelheim),
US Application No. 10/198,384, som svarer til PCT/CA02/01128, begge innlevert 18. juli 2002 (Boehringer Ingelheim),
US Application No. 10/198,259, som svarer til PCT/CA02/01129, begge innlevert 18. juli 2002 (Boehringer Ingelheim),
WO 02/100846 A1 og WO 02/100851 A2 (begge Shire),
WO 01/85172 A1 og WO 02/098424 A1 (begge GSK),
WO 00/06529 og WO 02/06246 A1 (begge Merck),
WO 01/47883 og WO 03/000254 (begge Japan Tobacco) og
EP 1 256 628 A2 (Agouron).
Ytterligere inhibitorer av HCV polymerase omfatter også nukleosidanaloger, for eksempel forbindelsene beskrevet i:
WO 01/90121 A2(ldenix),
WO 02/069903 A2 (Biocryst Pharmaceuticals Inc.) og
WO 02/057287 A2 og WO 02/057425 A2 (begge Merck/Isis).
Spesifikke eksempler på inhibitorer av en HCV-polymerase omfatter JTK-002, JTK-003 og JTK-109 (Japan Tobacco).
Betegnelsen "inhibitor av et annet mål i HCV-livssyklusen" som anvendes her betyr et agens (forbindelse eller biologisk) som effektivt hemmer dannelsen og/eller replikasjonen av HCV hos et pattedyr på annen måte enn ved å hemme funksjonen av HCV NS3-proteasen. Dette omfatter agenser som griper inn i enten vertens eller HCV-virusmekanismer som er nødvendige for dannelsen og/eller replikasjonen av HCV hos et pattedyr. Inhibitorer av et annet mål i HCV-livssyklusen omfatter for eksempel midler som hemmer et mål valgt fra en helicase, en HCV NS2/3-protease og et indre ribosomalt inngangssete (IRES). Et spesifikt eksempel på inhibitorer med et annet mål i HCV-livssyklusen omfatter ISIS-14803 (ISIS Pharmaceuticals).
Betegnelsen "HIV-inhibitor" som anvendes her betyr et agens (forbindelse eller biologisk) som effektivt hemmer dannelsen og/eller replikasjonen av HIV hos et pattedyr. Dette omfatter agenser som griper inn i enten verts- eller virusmekanismer som er nødvendige for dannelsen og/eller replikasjonen av HIV hos et pattedyr. HIV-inhibitorer omfatter for eksempel nukleosidiske inhibitorer, ikke-nukleosidiske inhibitorer, proteaseinhibitorer, fusjonsinhibitorer og integraseinhibitorer.
Betegnelsen "HAV-inhibitor" som anvendes her betyr et agens (forbindelse eller biologisk) som effektivt hemmer dannelsen og/eller replikasjonen av HAV hos et pattedyr. Dette omfatter agenser som griper inn i enten verts- eller virusmekanismer som er nødvendige for dannelsen og/eller replikasjonen av HAV hos et pattedyr. HAV-inhibitorer omfatter Hepatitt A vaksiner, for eksempel Havrix<®>
(GlaxoSmithKline), VAQTA<®> (Merck) og Avaxim<®> (Aventis Pasteur).
Betegnelsen "HBV-inhibitor" som anvendes her betyr et agens (forbindelse eller biologisk) som effektivt hemmer dannelsen og/eller replikasjonen av HBV hos et pattedyr. Dette omfatter agenser som griper inn i enten verts- eller virusmekanismer som er nødvendige for dannelsen og/eller replikasjonen av HBV hos et pattedyr. HBV-inhibitorer omfatter for eksempel midler som hemmer HBV viral DNA-polymerase eller HBV-vaksiner. Spesifikke eksempler på HBV-inhibitorer omfatter Lamivudine (Epivir-HBV<®>), Adefovir, Dipivoxil, Entecavir, FTC (Coviracil<®>), DAPD (DXG), L-FMAU (Clevudin<®>), AM365 (Amrad), Ldt (Telbivudin), monoval-LdC (Valtorcitabin), ACH-126,443 (L-Fd4C) (Achillion), MCC478 (Eli Lilly), Racivir (RCV), Fluor-L- og D-nukleosider, Robustaflavon, ICN 2001-3 (ICN), Barn 205 (Novelos), XTL-001 (XTL), Imino-sukkere (nonyl-DNJ)
(Synergy), HepBzyme; og immunomodulatorprodukter så som: interferon alfa 2b, HE2000 (Hollis-Eden), Theradigm (Epimmune), EHT899 (Enzo Biochem), Thymosin alfa-1 (Zadaxin<®>), HBV DNA-vaksine (PowderJect), HBV DNA-vaksine (Jefferon Center), HBV-antigen (OraGen), BayHep B<®> (Bayer), Nabi-HB<®> (Nabi) og Anti-hepatitt B (Cangen); og HBV-vaksineprodukter så som de følgende: Engerix B, Recombivax HB, GenHevac B, Hepacare, Bio-Hep B, TwinRix, Comvax, Hexavac.
Betegnelsen "klasse I interferon" som anvendes her betyr et interferon valgt fra en gruppe interferoner som alle binder til reseptor type I. Dette omfatter både naturlig og syntetisk fremstilte klasse I interferoner. Eksempler på klasse I interferoner omfatter a-, ©-interferoner, x-interferoner, konsensus- interferoner, asialo-interferoner.
Betegnelsen "klasse II interferon" som anvendes her betyr et interferon valgt fra en gruppe interferoner som alle binder til reseptor type II. Eksempler på klasse II interferoner omfatter y-interferoner.
Spesifikk foretrukne eksempler på noen av disse agenser er oppført nedenfor:
■ antivirusmidler: ribavirin og amantadin; ■ immunomodulerende agenser: klasse I interferoner, klasse II interferoner og pegylerte interferoner; ■ inhibitor av et annet mål i HCV-livssyklusen som hemmer et mål valgt fra: NS3-helicase, HCV NS2/3-protease eller indre ribosom-inngangsete (IRES); ■ HIV-inhibitorer: nukleosidiske inhibitorer, ikke-nukleosidiske inhibitorer, proteaseinhibitorer, fusjonsinhibitorer og integraseinhibitorer; eller ■ HBV-inhibitorer: agenser som hemmer HBV virus DNA-polymerase eller er en HBV-vaksine.
Som beskrevet ovenfor er kombinasjonsterapi tiltenkt hvor en forbindelse med formel (1) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav blir samadministrert med minst ett ytterligere agens valgt fra: et antivirusagensmiddel, et immunomodulerende middel, en annen inhibitor av HCV NS3-protease, en inhibitor av HCV-polymerase, en inhibitor for et annet mål i HCV-livssyklusen, en HIV-inhibitor, en HAV-inhibitor og en HBV- inhibitor. Eksempler på slike midler er gitt i definisjonsavsnittene ovenfor. Disse ytterligere midler kan kombineres med forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse for å skape en enkel farmasøytisk doseform. Alternativt kan disse ytterligere midler administreres separat til pasienten som del av en multippel doseform, for eksempel ved anvendelse av et sett. Slike ytterligere midler kan administreres til pasienten før, samtidig med eller etter administrering av en forbindelse med formel (1) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
Som det anvendes her, betyr betegnelsen "behandling" administrering av en forbindelse eller et preparat ifølge foreliggende oppfinnelse for å lindre eller fjerne symptomer på hepatitt C-sykdom og/eller å redusere virusangrep hos en pasient.
Som det anvendes her, betyr betegnelsen "forebygging" administrering av en forbindelse eller preparat ifølge foreliggende oppfinnelse etter eksponering av individet for viruset, men før symptomer på sykdommen opptrer og/eller før deteksjon av viruset i blodet.
Foretrukne utførelsesformer
Foretrukne er forbindelser med formel 1 som definert ovenfor hvor R<1> er hydroksy, NHS02Me, NHSC-2-cyklopropyl eller NHS02Ph. Mer foretrukket er R<1> NHS02Me eller hydroksy. Mest foretrukket er R<1> hydroksy.
Foretrukne er forbindelser med formel 1 som definert ovenfor hvor R<2> er t-butyl eller CH2-C(CH3)3. Mer foretrukket er R2 CH2-C(CH3)3.
Fortrinnsvis er R<3> t-butyl.
Fortrinnsvis er forbindelser med formel 1 som definert ovenfor hvor R<4> er cyklopentyl eller cykloheksyl. Mer foretrukket er R<4> cyklopentyl.
Mer foretrukket er en forbindelse med formelen 1 som definert ovenfor hvor R<1> er hydroksy, R<2> er CH2-C(CH3)3, R3 er t-butyl og R<4> er cyklopentyl.
Mer foretrukket er en forbindelse med formelen 1 hvor R<1> er hydroksy, R<2> og R<3 >hver er t-butyl og R<4> er cyklopentyl.
Mer foretrukket er en forbindelse med formelen 1 hvor R<1> er hydroksy, R2 er CH2-C(CH3)3, R<3> er cykloheksyl og R4 er cyklopentyl.
Mer foretrukket er en forbindelse med formelen 1 hvor R<1> er hydroksy, R2 er CH2-C(CH3)3 og R3 og R<4> hver er cykloheksyl.
Mer foretrukket er en forbindelse med formelen 1 hvor R<1> er hydroksy, R2 er cyklopentylmetyl, R<3> er t-butyl og R<4> er cyklobutyl.
Mer foretrukket er en forbindelse med formelen 1 hvor R<1> er hydroksy, R2 er CH2-C(CH3)3, R<3> er t-butyl og R4 er cyklobutyl.
Mer foretrukket er en forbindelse med formelen 1 hvor R<1> er NHS02Me, R2 er CH2-C(CH3)3 R3 er t-butyl og R4 er cyklopentyl.
Mer foretrukket er en forbindelse med formelen 1 hvor R<1> er NHS02Ph, R2 er CH2-C(CH3)3, R<3> er t-butyl og R4 er cyklopentyl.
I henhold til en alternativ utførelsesform kan det farmasøytiske preparatet ifølge foreliggende oppfinnelse i tillegg omfatte et annet anti-HCV-middel. Eksempler på anti-HCV-midler omfatter, a- (alfa), p- (beta), 6- (delta), y- (gamma), x- eller co (omega) interferon, ribavirin og amantadin.
I henhold til en annen alternativ utførelsesform kan det farmasøytiske preparatet ifølge foreliggende oppfinnelse i tillegg omfatte en annen inhibitor av HCV NS3-protease.
I henhold til en annen alternativ utførelsesform kan det farmasøytiske preparatet ifølge foreliggende oppfinnelse i tillegg omfatte en inhibitor av HCV-polymerase.
I henhold til enda en annen alternativ utførelsesform kan det farmasøytiske preparatet ifølge foreliggende oppfinnelse i tillegg omfatte en inhibitor for andre mål i HCV-livssyklusen, omfattende helicase, NS2/3-protease eller indre ribosominngangssete (IRES).
Det farmasøytiske preparatet ifølge foreliggende oppfinnelse kan administreres oralt, parenteralt eller via et implantert reservoir. Oral administrering eller administrering ved injeksjon er foretrukket. Det farmasøytiske preparatet ifølge foreliggende oppfinnelse kan inneholde hvilke som helst konvensjonelle ikke-toksiske farmasøytisk akseptable bærere, adjuvanser eller konstituenter. I noen tilfeller kan pH i preparatet reguleres med farmasøytisk akseptable syrer, baser eller buffere for å forbedre stabiliteten til den formulerte forbindelsen eller dens leveringsform. Betegnelsen parenteral som anvendes her omfatter subkutan, intrakutan, intravenøs, intramuskulær, intra-artikulær, intrasynovial, intrasternal, intratekal og intralesjonal injeksjon eller infusjonsteknikker.
Det farmasøytiske preparatet kan foreligge i form av et sterilt injiserbart preparat, for eksempel som en steril injiserbar vandig eller oljeaktig suspensjon. Denne suspensjonen kan formuleres i henhold til teknikker som er kjente på området ved anvendelse av egnete dispergerings- eller fuktemidler (så som for eksempel Tween 80) og oppslemmingsmidler.
Det farmasøytiske preparatet ifølge foreliggende oppfinnelse kan administreres oralt i hvilken som helst oralt akseptabel doseform omfattende kapsler, tabletter og vandige suspensjoner og løsninger. I tilfellet av tabletter for oral anvendelse, omfatter bærere som blir vanlig anvendt laktose og maisstivelse. Smøremidler, så som magnesiumstearat, blir også typisk tilsatt. For oral administrering i en kapsel-form omfatter anvendelige fortynningsmidler laktose og tørket maisstivelse. Når vandige suspensjoner blir administrert oralt, er den aktive bestanddel kombinert med emulgerings- og oppslemmingsmidler. Om ønsket kan visse søtnings-og/eller smaks- og/eller fargemidler tilsettes.
Andre egnete konstituenter eller bærere for de ovenfor nevnte formuleringer og preparater kan finnes i farmasøytiske standardverker, f.eks. i "Remington's Pharmaceutical Sciences", The Science and Practice of Pharmasy, 19<nde> utg. Mack Publishing Company, Easton, Penn., (1995).
Dosenivåer på mellom ca. 0,01 og ca. 100 mg/kg kroppsvekt pr. dag, fortrinnsvis mellom ca. 0,1 og ca. 50 mg/kg kroppsvekt pr. dag av
proteaseninhibitorforbindelse beskrevet heri er anvendelige i en monoterapi for fremstilling av medikament for forebygging og behandling av HCV-betinget sykdom. Typisk vil det farmasøytiske preparatet ifølge foreliggende oppfinnelse administreres fra ca. 1 til ca. 5 ganger pr. dag, eller alternativt som en kontinuerlig infusjon. Slik administrering kan anvendes som en vedvarende eller akutt terapi. Mengden av aktiv bestanddel som kan kombineres med bærermaterialene for å produsere en enkel doseform, vil variere avhengig med verten som blir behandlet og den spesielle administreringsmetode. Et typisk preparat vil inneholde fra ca. 5 vekt-% til ca. 95 vekt-% aktiv forbindelse. Fortrinnsvis inneholder slike preparater fra ca. 20% til ca. 80% aktiv forbindelse.
Som fagfolk vil forstå, kan lavere eller høyere doser enn de som er angitt ovenfor være nødvendige. Spesifikk dose og behandlingsregimer for hvilken som helst spesiell pasient vil avhenge av en rekke faktorer, omfattende aktiviteten til den spesifikke forbindelse som anvendes, alderen, kroppsvekten, den generelle helsestatus, kjønn, diett, tid for administrering, utskillingshastighet, medikamentkombinasjon, alvorlighetsgraden og forløpet av infeksjonen, pasientens disposisjon for infeksjonen og bedømmelsen til den behandlende lege. Generelt blir behandling igangsatt med små doser som hovedsakelig er mindre enn den optimale dose av peptidet. Deretter blir dosen øket med små inkrementer inntil den optimale effekt under omstendighetene blir oppnådd. Generelt blir forbindelsen mest ønskelig administrert i et konsentrasjonsnivå som generelt vil gi antiviralt effektive resultater uten å forårsake noen ugunstige eller skadelige bivirkninger.
Når preparatet ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter en kombinasjon av en forbindelse med formel I og ett eller flere ytterligere terapeutiske eller profylaktiske midler, bør både forbindelsen og det ytterligere middel foreligge i dosenivåer på mellom ca. 10 til 100% og mer foretrukket mellom ca. 10 og 80% av dosen som normalt blir administrert i et monoterapi-opplegg.
Når disse forbindelser eller deres farmasøytisk akseptable salter blir formulert sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer, kan det resulterende preparat administreres in vivo til pattedyr, så som mennesker, for å hemme HCV NS3-protease eller for fremstilling av medikament for å behandle eller forhindre HCV-virusinfeksjon. Slik behandling kan også oppnås ved anvendelse av en forbindelse i kombinasjon med midler som omfatter: a-, |3-, 5-, co-, x- eller y-interferon, ribavirin, amantadin; andre inhibitorer av HCV NS3-protease; inhibitorer av HCV-polymerase, inhibitorer av andre mål i HCV-livssyklusen, som omfatter, helicase, NS2/3-protease eller indre ribosominnganssete (IRES); eller kombinasjoner derav. De ytterligere midler kan kombineres med forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse for å danne en enkel doseform. Alternativt kan disse ytterligere midler administreres separat til et pattedyr som en del av en multippel doseform.
Følgelig tilveiebringer en annen utførelsesform av oppfinnelsen anvendelse av en forbindelse med formel I for fremstilling av medikament for å hemme HCV NS3-proteaseaktivitet hos et pattedyr.
I en foretrukket utførelsesform anvendes dette for å redusere NS3-proteaseaktiviteten til hepatitt C viruset som infiserer et pattedyr.
Hvis det farmasøytiske preparatet omfatter bare en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse som den aktive komponent, kan en slik anvendelse i tillegg omfatte trinnet administrering til nevnte pattedyr av et middel valgt fra et immunomodulerende middel, et antivirusmiddel, en HCV NS3- proteaseinhibitor, en inhibitor for HCV-polymerase eller en inhibitor for andre mål i HCV-livssyklusen så som helicase, NS2/3-protease eller IRES. Slike ytterligere midler kan administreres til pattedyret før, samtidig med eller etter administrering av preparatet ifølge foreliggende oppfinnelse.
En forbindelse med formel 1 angitt her kan også anvendes som et laboratoriereagens. En forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse kan også anvendes for å behandle eller forhindre viral forurensning av materialer og derfor redusere risikoen for virusinfeksjon av laboratorie- eller medisinsk personale eller pasienter som kommer i kontakt med slike materialer (f.eks. blod, vev, kirurgiske instrumenter og klesplagg, laboratorieinstrumenter og klesplagg og blodsamlingsapparater og materialer).
En forbindelse med formel 1 angitt her kan også anvendes som et forskningsreagens. En forbindelse med formelen 1 kan også anvendes som positiv kontroll for å bedømme surrogat-celle-baserte målinger eller in vitro virusreplikasjonsforsøk.
Ytterligere detaljer ved foreliggende oppfinnelse er illustrert i de følgende eksempler.
EKSEMPLER
Temperaturer er gitt i grader Celsius. Løsningsprosentdeler uttrykker et vekt- til— volum-forhold, og løsningsforhold uttrykker en volum-til-volum-forhold, hvis det ikke er angitt på annen måte. Kjernemagnetiske resonans(NMR)spektra ble registrert på et Bruker 400 MHz spektrometer; de kjemiske skift (5) er angitt i parts pr. million. Flashkromatografi ble utført på silikagel (Si02) i henhold til Still s flashkromatografiteknikk (W.C. Still et al., J. Org. Chem., (1978), 43, 2923).
Forkortelser anvendt i eksemplene omfatter: DBU: 1,8-diazabicyklo[5,4,0]undec-7-en; DCM: diklormetan; DIEA: diisopropyletylamin; DIPEA: diisopropyletylamin; DMF: N, N-dimetylformamid; DMAP: 4-(dimetylamino)pyridin; EtOAc: etylacetat; HATU: [0-7-azabenzotriazol-1 -yl)-1,1,3,3-tetrametyluronium-heksafluofrosfat]; HPLC: høy-ytelsevæskekromatografi; MS: massespektrometri (MALDI-TOF: Matrix Assisted Laser Disorption lonisation-Time of Fiight, FAB: Hurtig-atombombardement); Me: metyl;
MeOH: metanol; Ph: fenyl; RT: romtemperatur (18 til 22°); ferf-butyl eller t-butyl: 1,1-dimetyletyl; Tbg: ferf-butyl-glycin: ferf-leucin; TFA: trifluoreddiksyre; og THF: tetrahydrofuran.
Syntese av forbindelser med formel (I):
Generelt blir forbindelsene med formel 1 og mellomprodukter for disse fremstilt ved kjente metoder ved anvendelse av reaksjonsbetingelser som er kjent for å være egnet for reaktantene. Mange slike metoder er beskrevet i WO 00/09543, WO 00/09558 og US Pat. No. 6,323,180, inntatt her som referanse.
Fremstilling av tiourinstoffer
Fremstilling av Tiourinstoff 2a
Tiourinstoff (5,0 gm, 66 mmol) ble oppløst i toluen (50 ml) og tert-butylacetylklorid (8,88 gm, 66 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet ved tilbakeløp i 14 timer, hvilket ga en gul løsning. Blandingen ble konsentrert til tørrhet og residuet fordelt mellom EtOAc og mettet NaHC03. Den gule organiske fasen ble tørket over MgS04, filtrert og konsentrert, hvilket ga et gult, fast stoff. Det faste stoffet ble oppløst i en minimums- mengde av EtOAc og gnidd ut med heksan, hvilket ga 2a som et hvitt, fast stoff (8,52 g; 75%). M.S. (elektrospray): 173 (M-H)-175 (M+H)+. Revers- fase HPLC homogenitet (0,06 % TFA ; CH3CN : H20): 99 %.
Fremstilling av Tiourinstoff 2b
Anvendelse av metoden beskrevet ovenfor og ved anvendelse av kommersielt tilgjengelig cyklopentylacetylklorid istedenfor tert-butylacetylklorid ga tiourinstoff 2b.
Syntese av mellomprodukter 3
Fremstilling av karbamat 3a
Tetrahydrofuran (350 ml) ble satt til en kolbe inneholdende karbonsyre-cyklopentylester-2,5-diokso-pyrrolidin-1-ylester (9,00 g; 39,6 mmol) og fert-leucin (6,24 g; 47,5 mmol), hvilket resulterte i en suspensjon. Destillert vann (100 ml) ble tilsatt under kraftig røring. En liten mengde av fast stoff forble uoppløst. Trietylamin (16,6 ml; 119 mmol) ble deretter tilsatt, hvilket resulterte i en homogen løsning som ble rørt ved R.T. Etter 2,5 timer ble THF inndampet, og det vandige residuet fortynnet med vann (100 ml) og reaksjonsblandingen gjort basisk ved tilsetning av 1 N NaOH (25 ml - endelig pH >10). Løsningen ble vasket med EtOAc (2 x 200 ml) og den vandige fasen deretter surgjort med 1 N HCI (ca. 70 ml - endelig pH <2). Den uklare løsningen ble ekstrahert med EtOAc (200 + 150 ml). Ekstraktet ble tørket (MgS04) og inndampet, hvilket ga forbindelsen 3a som et hvitt, fast stoff (8,68 g).
Fremstilling av karbamater 3b, 3c og 3d
Ved anvendelse av metoden beskrevet ovenfor og ved anvendelse av de riktige kombinasjoner av ferf-butyl-glycin eller cykloheksyl-glycin og karbonsyre-cyklobutyl-, -cyklopentyl- eller-cykloheksylester-2,5-diokso-pyrrolidin-1-ylester ble de følgende karbamater fremstilt:
Fremstilling av mellomprodukt 5
Fremstilling av mellomprodukt 5a:
a-Bromketon 4 (3,61 g ; 5,71 mmol) ble kombinert med tiourinstoff 2a (1,09 g ; 6,28 mmol) i isopropanol (140 ml) og den gule løsningen ble plassert i et forvarmet oljebad på 70°C i 1,5 timer. Løsningen ble avkjølt til R.T. og inndampet til tørrhet. Residuet ble oppløst i EtOAc. EtOAc-løsningen ble vasket med mettet NaHC03 (2x), vann (2x) og saltvann (1x), tørket (MgS04) og inndampet, hvilket ga produktet som et oransjebrunt skum. Flash- kolonnekromatografi i 7:3 heksan : EtOAc fjernet de mindre polare urenheter, og 6:4 heksan : EtOAc ga rent produkt som et lysegult, fast stoff (3,05 g ; 76%). M.S.(elektrospray): 706,3 (M-H)- 708,4 (M+H)+. Reversfase-HPLC homogenitet (0,06 % TFA; CH3CN : H20): 99 %.
Fremstilling av mellomprodukt 5b:
Ved anvendelse av metoden beskrevet ovenfor og ved anvendelse av tiourinstoff 2b istedenfor tiourinstoff 2a blir det tilsvarende mellomprodukt 5b oppnådd:
Fremstilling av mellomprodukt 5c:
Ved anvendelse av metoden beskrevet ovenfor og ved anvendelse av kommersielt tilgjengelig tiourinstoff istedenfor tiourinstoff 2a blir det tilsvarende mellomprodukt 5c oppnådd:
EKSEMPEL 1
Syntese av Forbindelse 100
Trinn 1: Fremstilling av mellomprodukt 6a
Boc-dipeptid 5a (3,05 g ; 4,31 mmol) ble oppløst i 4N HCI/dioksan (22 ml). Etter røring ved R.T. i 30 min., falt HCI-saltet ut. MeOH (2 ml) ble tilsatt for å oppløse fellingen. Etter 2 timer ble reaksjonsblandingen inndampet til tørrhet. Det resulterende HCI-salt ble oppløst i DCM (22 ml) og DIEA (3,0 ml; 17,24 mmol); karbamat 3a (1,15 g; 4,47 mmol), og HATU (1,72 g ; 4,516 mmol) ble tilsatt. Løsningen ble rørt ved romtemperatur i 6 timer. Blandingen ble deretter fortynnet med EtOAc og løsningen vasket med mettet NaHC03 (2x), vann (2x) og saltvann (1x), tørket (MgS04), filtrert og inndampet for å oppnå forbindelsen 6a som et gult, fast stoff. Flash-kolonnekromatografi under eluering først med heksan : EtOAc 7:3 og deretter 6:4 ga ren Me-ester 6a som et hvitt skum (3,25 g ; 90%). M.S.
(elektrospray): 831,4 (M-H)- 833,4 (M+H)+ 855,4 (M+Na)+ . Reversfase- HPLC homogenitet (0,06 % TFA ; CH3CN : H20): 98 %.
Trinn 2: Hydrolyse av ester
Metylester 6a (3,24 mg; 3,89 mmol) ble oppløst i TH F (40 ml) og MeOH (20 ml) og en vandig løsning av LiOH (1,63 mg; 38,9 mmol i 25 ml) ble tilsatt. Den gule reaksjonsblanding ble rørt i 5,5 timer og deretter konsentrert for å oppnå en gråhvit suspensjon. Suspensjonen ble oppløst i EtOAc og saltvann, fremstilt med ionefritt vann. pH i den resulterende løsning ble regulert til 6 ved tilsetning av 1N HCI. Sjiktene ble separert og det vandige sjiktet videre ekstrahert med EtOAc (2x). De samlede EtOAc-ekstrakter ble vasket med ionefritt vann (2x), saltvann fremstilt fra ionefritt vann (1x), tørket (MgS04), filtrert og inndampet for å oppnå forbindelse 100 som et blekgul-hvitt fast stoff (3,02 g; 95% utbytte).
Omdannelse til Na-salt:
Den nøytrale forbindelsen 100 (1,22 g; 1,49 mmol) ble oppløst i MeOH (30 ml) og 1 ekvivalent 0,01 N NaOH (14,85 ml) ble tilsatt - ingen produkt- utfelling. Den klare gule løsning ble konsentrert, fortynnet med ionefritt vann, frosset og frysetørket for å oppnå produktet (Na-salt) som et gulhvitt amorft fast stoff (1,24 g; 99 % utbytte). Na Salt: MW : 840,98 C42H53N609SNa M.S.(elektrospray): 817,3 (M-H)- 819,4 (M+H)+ 841,4 (M+Na)+ . Revers- fase-HPLC homogenitet (0,06 % TFA ; CH3CN : H20): 98 %.
<1>H NMR (400 MHz,DMSO-d6): ca, 6:1 blanding av rotamerer; 5 8,11-7,65 (m, 4H), 7,33 (bs, 1H), 7,18-6,97 (m, 2H), 6,36-6,08 (m, 1H), 5,55-5,33 (m, 1H), 4,98 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 4,85 (bs, 1H), 4,80 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,50-4,41 (m, 1H), 4,22-4,02 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 2,72-2,45 (m, 1H), 2,50 ( under DMSO, s, 2H), 2,40-2,26 (m, 1H), 1,89-1,43 (m, 9H), 1,37-1,30 (m, 1H), 1,30-1,12 (m, 1H), 1,03 & 0,90 (2x s, 9H), 0,98 & 0,94 (2x s, 9H).
EKSEMPEL 2
Syntese av Forbindelse 101
Ved å følge samme prosedyre som beskrevet i det første trinn i eksempel 1 og ved anvendelse av Boc-dipeptid 5c istedenfor 5a ble forbindelse 6b oppnådd.
Forbindelse 6b (70 mg, 0,095 mmol) ble oppløst i 2 ml DCM og suksessivt behandlet med DIEA (0,045 ml, 0,26 mmol) og pivaloylklorid (0,015 ml, 0,12 mmol). Etter røring i 1 time ved 40° ble ytterligere pivaloylklorid (0,015 ml, 0,12 mmol) tilsatt og røring fortsatte i ytterligere 2 timer. Etter at løsningen var konsentrert, ble residuet oppløst i EtOAc. Løsningen ble vasket med en mettet løsning av NaHC03 og saltvann, tørket (MgS04) og konsentrert, hvilket ga 82 mg av råproduktet 6c som ble anvendt uten rensning.
Metylesterderivatet 6c ble hydrolyser! som i trinn 2 i eksempel 1 og renset ved preparativ HPLC ved anvendelse av en YMC Combi-Prep. ODS-AQ- kolonne, 50 x 20mm. ID, S - 5mikron, 120 A og et lineært gradientprogram fra 2 til 100% AcCN /vann (0,06% TFA).
Fraksjoner ble analysert ved analytisk HPLC, og de rene fraksjoner ble samlet, konsentrert, frosset og frysetørket, hvilket ga forbindelse 101 som trifluoracetatsaltet:
<1>H NMR (400 MHz.DMSO-de): ca, 85:15 blanding av rotamerer, hoved-isomerbeskrivelse: 8 8.56 (s, 1H), 8,40-8,22 (m, 1H), 8,17 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,67 (bs, 1H), 7,52 (bs, 1H), 7,24-7,15 (m, 1H), 7,03 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,78-5,67 (m, 1H), 5,61-5,53 (m, 1H), 5,19 (dd, J = 17,2, 1,6 Hz, 1H), 5,09-5,03 (m, 1H), 4,63-4,55 (m, 1H), 4,49-4,39 (m, 2H), 4,11-3,92 (m, 2H), 3,95 (s, 3H), 2,62-2,53 (m, 1H), 2,33-2,25 (m, 1H), 2,06-1,98 (m, 1H), 1,72-1,25 (m, 10H), 1,30 (s, 9H), 0,97 (s, 9H). M.S.(elektrospray): 803,3 (M-H)- 805,3 (M+H)+ . Reversfase-HPLC homogenitet (0,06 % TFA; CH3CN : H20): 97 %.
EKSEMPEL 3
Fremstilling av forbindelse 102
Ved å følge metoden beskrevet i eksempel 1 og ved anvendelse av karbamat 3d istedenfor 3a og ved anvendelse av preparativ HPLC for å rense sluttforbindelsen som beskrevet i eksempel 2, ble forbindelse 102 fremstilt som trifluoracetatsaltet:
<1>H NMR (400 MHz,DMSO-d6): ca, 90:10 blanding av rotamerer, hoved-isomerbeskrivelse: 812,37 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,40-8,06 (m, 2H), 7,67-7,40 (m,
2H), 7,26 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,26-7,13 (m, 1H), 5,77-5,65 (m, 1H), 5,62-5,49 (m, 1H), 5,23-5,16 (m, 1H), 5,10-5,03 (m, 1H), 4,57-4,37 (m, 3H), 4,03-3,88 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,64-2,54 (m, 1H), 2,41 (s, 2H), 2,37-2,22 (m, 1H), 2,04-1,95 (m, 1H), 1,79-1,21 (m, 16H), 1,17-0,85 (m, 5H), 1,04 (s, 9H). M.S.(elektrospray): 843,5 (M-H)- 845,4 (M+H)+ . Reversfase-HPLC homogenitet (0,06 % TFA; CH3CN : H20): 99 %.
EKSEMPEL 4
Fremstilling av forbindelse 103
Ved å følge metoden beskrevet i eksempel 1, men ved anvendelse av karbamat 3c istedenfor 3a og ved anvendelse av preparativ HPLC for å rense sluttforbindelsen som beskrevet i eksempel 2, ble forbindelse 103 oppnådd som trifluoracetatsaltet: <1>H NMR (400 MHz,DMSO-d6): ca, 85:15 blanding av rotamerer, hoved-isomerbeskrivelse: 812,35 (s, 1H), 8,52 (m, 1H), 8,43-8,06 (m, 2H), 7,67-7,41 (m, 2H), 7,26 (d, J =7,8 Hz, 1H), 7,24-7,11 (m, 1H), 5,77-5,65 (m, 1H), 5,62-5,48 (m, 1H), 5,23-5,15 (m, 1H), 5,10-5,03 (m, 1H), 4,52-4,38 (m, 2H), 4,15-4,05 (m, 1H), 4,03-3,89 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 2,63-2,52 (m, 1H), 2,41 (s, 2H), 2,35-2,23 (m, 1H), 2,05-1,96 (m, 1H), 1,81-1,41 (m, 11H), 1,38-0,86 (m, 12H), 1,04 (s, 9H). M.S.(elektrospray): 857,5 (M-H)- 859,4 (M+H)+ . Reversfase-HPLC homogenitet (0,06 % TFA; CH3CN : H20): 99 %.
EKSEMPEL 5
Fremstilling av forbindelse 104
Ved å følge metoden beskrevet i eksempel 1, men ved anvendelse av karbamat 3b istedenfor 3a og Boc-dipeptid 5b istedenfor 5a og ved anvendelse av preparativ HPLC for å rense den endelige forbindelse som beskrevet i eksempel 2, ble forbindelse 104 oppnådd som trifluoracetatsalt: <1>H NMR (400 MHz,DMSO-d6): ca, 3:1 blanding av rotamerer; 58,02 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,84 (d, J = 7,0Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,33 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,14 (dd, J = 2,5, 8,2 Hz, 1H), 7,09 (dd, J = 2,2, 9,2 Hz, 1H), 6,29-6,08 (m, 1H), 5,54-5,32 (m, 1H), 4,99 (d, J = 15,9Hz, 1H), 4,80 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,76-4,64 (m, 1H), 4,46 (dd, J = 6,7 ,13,9 Hz, 1H), 4,19-4,08 (m, 3H), 3,92 (s, 3H), 2,70-2,61 (m, 2H), 2,37-2,09 (m, 4H), 2,03-1,82 (m, 1H), 1,85 (bs, 2H), 1,77-1,44 (m, 8H), 1,35-1,29 (m, 1H), 1,29-1,15 (m,4H), 0,98 & 0,90 (2xs, 9H). M.S.(elektrospray): 815,3 (M-H)- 817,3 (M+H)+ . Reversfase-HPLC homogenitet (0,06 % TFA; CH3CN : H20): 98 %.
EKSEMPEL 6
Fremstilling av forbindelse 105
Ved å følge metoden beskrevet i eksempel 1, men ved anvendelse av karbamat 3b istedenfor 3a og ved anvendelse av preparativ HPLC for å rense sluttforbindelsen som beskrevet i eksempel 2, ble forbindelse 105 oppnådd som trifluoracetatsalt: <1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): ca, 7:1 blanding av rotamerer; 88,58 (s, 1H), 8,19 (d, J = 8,0Hz, 1H), 7,76-7,50 (m, 2H), 7,35-7,20 (m, 1H), 7,19 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,78-5,67 (m, 1H), 5,65-5,50 (m, 1H), 5,19 (d, J = 17,0 Hz, 1H), 5,07 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 4,51-4,42 (m, 2H), 4,42-4,31 ,(m, 1H), 4,02 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,02-3,93 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 2,63-2,52 (m, 1H), 2,42 (s, 2H), 2,35-2,25 (m, 1H), 2,07-1,95 (m, 3H), 1,90-1,76 (m, 1H), 1,70-1,41 (m, 3H), 1,30-1,23 (m, 1H), 1,04 (s, 9H), 0,96 & 0,87 (2xs, 9H), M.S.(elektrospray): 803,4 (M-H)- 805,4 (M+H)+ . Reversfase-HPLC homogenitet (0,06 % TFA; CH3CN : H20): 98 %.
EKSEMPEL 7
Fremstillin<g> av forbindelse 106
Forbindelse 100 fra eksempel 1 (29,8 mg, 0,036 mmol) ble kombinert med HATU (1,2 ekv., 19,7 mg, 0,052 mmol) og oppløst i vannfritt DMF (4 ml). Løsningen ble rørt ved R.T. og DIPEA (5 ekv., 31,4uL, 0,18 mmol) ble tilsatt dråpevis over ca. 1 min. Blandingen ble rørt i 20min. ved romtemperatur og analysert ved analytisk HPLC for dannelse av den aktiverte ester. En løsning av metansulfonamid (5,8ekv., 19,7 mg, 0,207 mmol), DMAP (5,4ekv., 23,5 mg, 0,193 mmol) og DBU (4,8ekv., 25,8uL, 0,172 mmol) ble tilsatt i DMF (1 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt 16 timer ved romtemperatur før den ble konsentrert / vakuum. Residuet ble rekonstituert i DMSO og renset ved preparativ HPLC. Lyofilisering ga sluttproduktet (23 mg, 71,3%) som et grå-hvitt amorft fast stoff.
<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6): 812,35 (s, 1H), 10,53 (s, 1H), 8,87 (s, 1H), 8,40-8,20 (m, 1H), 8,17 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,61 (bs, 1H), 7,51 (bs, 1H), 5,67-5,55 (m, 2H), 5,23-5,18 (m, 1H), 5,10 (d, J= 12 Hz, 1H), 4,68-4,57 (m, 1H), 4,50 (bd, J= 12 Hz, 1H), 4,46-4,37 (m, 1H), 4,07 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,17 (s, 3H), 2,78-2,58 (m, 1H), 2,42 (s, 2H), 2,29-2,19 (m, 1H), 2,19-2,09 (m, 1H), 1,71 (dd, J = 7,8, 7,6 Hz, 1H), 1,67-1,55 (m, 4H), 1,55-1,37 (m, 4H), 1,04 (s, 9H), 0,98 (s, 9H), 0,97-0,87 (m, 2H).
MS (elektrospray): 896,5 (M + H)+ og 894,5 (M - H)-.
RP-HPLC: Rt = 6,7 minutter (homogenitet = 100%).
EKSEMPEL 8
Fremstilling av forbindelse 107
Ved anvendelse av samme prosedyre beskrevet i Eksempel 7 og ved anvendelse av benzensulfonamid istedenfor metylsulfonamid ble forbindelsen 107 oppnådd som et blekgult amorft fast stoff i 54% utbytte.
<1>H NMR (DMSO-d6): 812,39 (s, 1H), 10,89 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8,40-8,22 (m, 1H), 8,18 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,67-7,63 (m, 1H), 7,63-7,54 (m, 3H), 7,54- 7,45 (m, 1H), 7,30-7,15 (m, 1H), 7,10 (d, J=7,8 Hz, 1H), 5,62-5,51 (m, 1H), 5,38-5,26 (m, 1H), 5,16-5,08 (m, 1H), 4,93 (d, J= 10,4 Hz, 1H), 4,70-4,58 (m, 1H), 4,57-4,49 (m, 1H), 4,48-4,39 (m, 1H), 4,09 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 2,69-2,59 (m, 1H), 2,41 (s, 2H), 2,28-2,16 (m, 1H), 2,14-2,04 (m, 1H), 1,72-1,52 (m, 4H), 1,51 -1,37 (m, 4H), 1,29-1,22 (m, 1H), 1,03 (s, 9H), 1,00 (s, 9H), 0,99-0,92 (m, 1H).
MS (elektrospray); 958,5 (M + H)+ og 956,5 (M - H)-.
RP-HPLC: Rt = 7,2 minutter (homogenitet = 95%).
Eksempel 9
NS3-NS4A proteasemåling
Den enzymatiske måling anvendt for å bedømme foreliggende forbindelse er beskrevet i WO 00/09543 og WO 00/59929.
Eksempel 10
Celle Basert HCV RNA Replikasjonsmåling
Cellekultur
Huh7 celler som stabilt opprettholdt et subgenomisk HCV-replikon ble opprettet
som tidligere beskrevet (Lohman et al., 1999. Science 285:110-113) og betegnet som S22.3 celle-linje. S22.3 celler blir holdt i Dulbecco's Modifisert Earle Medium (DMEM) supplert med 10% FBS og 1 mg/ml neomycin (Standard Medium). Under målingen ble DMEM-medium supplert med 10% FBS, inneholdende 0,5% DMSO, og som mangler neomycin, anvendt (Målemedium). 16 timer før forbindelsens tilsetning blir S22.3 celler trypsinisert og fortynnet til 50 000 celler/ml i Standard Medium. 200ul (10 000 celler) blir fordelt i hver brønn i en 96-brønners plate. Platen ble deretter inkubert ved 37° med 5% C02 til neste dag.
Reagenser og materialer:
Fremstilling av testforbindelse
10ul testforbindelse (i 100% DMSO) ble satt til 2 ml Målemedium til en sluttkonsentrasjon i DMSO på 0,5%, og løsningen ble ultralydbehandlet i 15 min og filtrert gjennom en 0,22 uM Millipore filterenhet. 900ul ble overført til rekke A i
en Polypropylen dyp-brønn titerplate. Rekkene B til H inneholder 400ul alikvoter av Målemedium (inneholdende 0,5% DMSO) og blir anvendt for å fremstille serie-fortynninger (1/2) ved overføring av 400 ul fra rekke til rekke (ingen forbindelse forlå i rekke H).
Applikasjon av testforbindelse til celler
Celledyrkningsmedium ble fordampet fra 96-brønners platen inneholdende S22.3 cellene. 175ul målemedium med den riktige fortynning av testforbindelse ble overført fra hver brønn i forbindelsesplaten til den tilsvarende brønn i cellekulturplaten (rekke H ble anvendt som "Ikke- hemningskontroll"). Cellekulturplaten ble inkubert ved 37° med 5% C02 i 72 timer.
Ekstraksjon av totalt cellulært RNA
Etter 72-timers inkuberingsperioden ble det totale cellulære RNA ekstrahert fra S22.3 cellene i 96-brønners platen ved anvendelse av RNeasy 96 settet (Qiagen®, RNeasy Handbook. 1999.). I korthet ble målemediet fullstendig fjernet fra celler og 100 ul RLT buffer (Qiagen®) inneholdende 143 mM p-merkaptoetanol ble satt til hver brønn i 96-brønners celle-kulturplaten. Mikroplaten ble forsiktig ristet i 20 sekunder. 100 pl 70% etanol ble deretter satt til hver mikroplatebrønn og blandet ved pipettering. Lysatet ble fjernet og påført brønnene i en RNeasy 96 (Qiagen®) plate som ble plassen" på toppen av en Qiagen® Square-Well Block. RNeasy 96 platen ble forseglet med tape og Square-Well Block med RNeasy 96 platen ble satt i holderen og plassert i en rotorbøtte i en 4K15C sentrifuge. Prøven ble sentrifugert ved 6000 opm (-5600 x g) i 4 min ved romtemperatur. Tapen ble fjernet fra platen og 0,8 ml Buffer RW1 (Qiagen® RNeasy 96 sett) ble satt til hver brønn i RNeasy 96 platen. RNeasy 96 platen ble forseglet med et nytt stykke tape og sentrifugert ved 6000 opm i 4 min ved romtemperatur. RNeasy 96 platen ble plassert på toppen av en annen ren Square-Well Block, tapen fjernet og 0,8 ml Buffer RPE (Qiagen® RNeasy 96 sett) ble satt til hver brønn i RNeasy 96 platen. RNeasy 96 platen ble forseglet med et nytt stykke tape og sentrifugert ved 6000 opm i 4 min ved romtemperatur. Tapen ble fjernet og ytterligere 0,8 ml Buffer RPE (Qiagen® RNeasy 96 sett) ble satt til hver brønn i RNeasy 96 platen. RNeasy 96 platen ble forseglet med et nytt stykke tape og sentrifugert ved 6000 opm i 10 min ved romtemperatur. Tapen ble fjernet, RNeasy 96 platen ble plassert på toppen av en rack inneholdende 1,2-ml samlemikrorør. RNA'et ble eluert ved tilsetning av 50 ul RNase-fritt vann til hver brønn, platen lukket med et nytt stykke tape og inkubert i 1 min ved romtemperatur. Platen ble deretter sentrifugert ved 6000 opm i 4 min ved romtemperatur. Elueringstrinnet ble gjentatt med en nytt volum av 50 pl RNase-fritt vann. Mikrorørene med totalt cellulært RNA blir lagret ved -70°.
Kvantifisering av totalt cellulært RNA
RNA ble kvantifisert på the STORM® system (Molecular Dynamics®) ved anvendelse av RiboGreen® RNA Quantification Kit (Molecular Probes®). I korthet ble RiboGreen reagens fortynnet 200 ganger i TE (10mM Tris-HCI pH =7,5,1mM EDTA). Generelt ble 50ul reagens fortynnet i 10 ml TE. En standardkurve av ribosomalt RNA ble fortynnet i TE til 2 Mg/m I og forut bestemte mengder (100, 50, 40, 20,10, 5, 2 og 0 pl) av den ribosomale RNA løsning blir deretter overført i en ny 96-brønners plate (COSTAR # 3997) og volumet ble fylt opp til 100ul med TE. Generelt ble kolonne 1 i 96-brønners platen anvendt for standardkurven, og de andre brønner blir anvendt for RNA prøvene som skal kvantifiseres. 10ul av hver RNA-prøve som skulle kvantifiseres, ble overført til den tilsvarende brønn i 96-brønners platen og 90pl av TE ble tilsatt. Et volum (100ul) av fortynnet RiboGreen reagens ble satt til hver brønn i 96-brønners platen og inkubert i 2 til 5 minutter ved romtemperatur beskyttet mot lys (en a 10 uJ RNA-prøve i en 200 uJ slutt-volum genererer en 20 X fortynning). Fluorescensintensiteten til hver brønn ble målt i STORM® systemet (Molecular Dynamics®). En standardkurve ble dannet på basis av de kjente mengder av det ribosomale RNA og de resulterende fluorescensintensiteter. RNA-konsentrasjonen i de eksperimentelle prøver ble bestemt fra standardkurven og korrigert for 20X fortynningen.
Reagenser og materialer:
Sanntid RT-PCR
Sanntid RT-PCR ble utført på ABI Prism 7700 Sequence Detection System ved anvendelse av TaqMan EZ RT-PCR Kit fra (Perkin-Elmer Applied Biosystems®). RT-PCR ble optimalisert for kvantifisering av 5' IRES i HCV RNA ved anvendelse av Taqman teknologi (Roche Molecular Diagnostic Systems) lignende teknikken tidligere beskrevet (Mariell et al., 1999. J. Clin. Microbiol. 37: 327-332). Systemet utnytter den 5'-3' nukleolytiske aktiviteten til AmpliTaq DNA polymerase. I korthet anvender metoden en dobbelt-merket fluorogen hybridiserings-probe (PUTR Probe) som spesifikt kobler til templatet mellom PCR-primerne (primere 8125 og 7028). 5'-enden av proben inneholder en fluorescerende rapportør (6-karboksyfluorescein [FAM]) og 3'-enden inneholder en fluorescerende stopper (6-karboksytetrametylrhodamin [TAMRA]). FAM rapportørens emisjonspektrum ble undertrykket med stopperen på den intakte hybridiseringsprobe. Nukleasenedbrytning av hybridiseringsproben frigjør rapportøren, hvilket resulterer i en økning i fluorescensemisjon. ABI Prisme 7700 sekvensdetektoren måler økningen i fluorescensemisjon kontinuerlig under PCR-amplifiseringen, slik at det amplifiserte produkt var direkte proporsjonalt med signalet. Amplifiserings- plotten ble analysert tidlig under reaksjonen på et punkt som representerer den logaritmiske fase av produktakkumulering. Et punkt som representerer en definert deteksjonsterskel for økningen i fluorescenssignalet forbundet med den eksponentielle vekst av PCR-produktet for sekvensdetektoren ble definert som syklusterskelen (Cr). Crverdier er omvendt proporsjonale med mengden av innført HCV RNA; slik at under identiske PCR-betingelser, var startkonsentrasjon av HCV RNA større jo lavere Cr var. En standard kurve ble dannet automatisk med ABI Prisme 7700 deteksjonssystemet ved plotting av Cr mot hver standardfortynning av kjent HCV RNA-konsentrasjon.
Referanseprøver for standardkurven inngår på hver RT-PCR-plate. HCV Replicon RNA ble syntetisert (ved T7 transkripsjon) in vitro, renset og kvantifisert ved OD26o-I betraktning av at 1ug av dette RNA = 2,15 X 10<11> RNA kopier, blir fortynninger gjort for å få 10<8>,10<7>,10<6>,10<5>,10<4>,10<3> eller 10<2> genomiske RNA-kopier/5ul. Totalt cellulært Huh-7 RNA ble også inntatt med hver fortynning (50ng / 5ul). 5ul av hver referansestandard (HCV Replicon + Huh-7 RNA) ble kombinert med 45ul Reagens Mix og anvendt i sanntid RT-PCR-reaksjonen.
Sanntid RT-PCR-reaksjonen ble satt opp for de eksperimentelle prøver som ble renset på RNeasy 96-brønners plater ved å kombinere 5ul av hver total cellulær RNA-prøve med 45pl Reagens Mix.
Reagenser og materialer:
Reagensblandingpreparat:
Forover primersekvens (SEQ ID. 1): 5' - ACG CAG AAA GCG TCT AGC KATT
GGC GTTAGT-3'
Revers primersekvens (SEKV ID NR. 2): 5' - TCC CGG GGC ACT CGC AAG
CAC CCT ATC AGG - 3'
Bemerkning: Primerne amplifiserer en region på 256-nt tilstede innenfor den 5' ikke-translaterte region av HCV.
PUTR probesekvens (SEKV ID NR. 3): 16FAM | - TGG TCT GCG GAA CCG
GTG AGT ACA CC - [ TAM RA
Inaen- templatkontroller ( NTC) : På hver plate blir 4 brønner anvendt som "NTC". For disse kontroller blir 5ul vann satt til brønnen istedenfor RNA.
Termiske sirkuleringsbetingelser:
Etter avslutningen av RT-PCR-reaksjonen krever dataanalysene fastsetting av terskelfluorescenssignal for PCR-platen, og en standardkurve ble konstruert ved å plotte Ct-verdien mot RNA-kopitall anvendt i hver referanse- reaksjon. Ct-verdiene oppnådd for måleprøvene blir anvendt til å interpolere et RNA-kopitall basert på standardkurven.
Til slutt ble RNA-kopitallet normalisert (basert på RiboGreen RNA kvantifisering av det totale RNA ekstrahert fra cellekulturbrønnen) og uttrykt som genom ekvivalenter / ug av totalt RNA [ge/ug].
RNA-kopitallet [g.e./ug] fra hver brønn i cellenkulturplaten var et mål for mengden av replikerende HCV RNA i nærvær av forskjellige konsentrasjoner av inhibitor. % hemning ble beregnet med den følgende formel:
En ikke-lineær kurvetilpasning med Hill-modellen ble anvendt på hemnings-konsentrasjonsdataene, og den 50% effektive konsentrasjon (EC5o) ble beregnet ved anvendelse av SAS programvare (Statistical Software System; SAS Institute, Inc. Cary, N.C.).
Når forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse ble evaluert i den forutgående enzymatiske og cellebaserte måling, ble forbindelsene funnet å være meget aktive. Mer spesifikt hadde forbindelsene IC5o'er under 0,1 uM i NS3-NS4A proteasemåling og EC5o'er under 0,5 uM i den cellebaserte HCV RNA-replikasjonsmåling.
Eksempel 11
Spesifisitetsmåling
Spesifisitetetsmåling anvendt for å bedømme selektiviteten av denne forbindelsen er beskrevet i WO 00/09543.
Når forbindelsene ble evaluert i spesifitetsmålingen, ble forbindelsene med formel 1 funnet å være selektive ved at de ikke viser nevneverdig hemning i human Leukocyte Elastase and Cathepsin B målingene.
Eksempel 12
Farmakokinetiske egenskaper
Foreliggende forbindelser viser også gode farmakokinetiske egenskaper så som detekterbare plasmanivåer i rotte ved 1 time og 2 timer etter en oral dose på 4 eller 5 mg/kg.
Mer eksplisitt ble den følgende måling, en in vivo oral absorpsjonscreen, anvendt for å bestemme plasmanivåer for testforbindelser i rotte etter oral administrering:
Materialer og metoder:
1. Metode anvendt til sammenslåing av forbindelser ("kassett- seleksjon"): Seleksjonen av forbindelser som skal samles i en "kassett" var basert på deres strukturelle likhet og fysiskalsk-kjemiske egenskaper. En fastfase-ekstraksjonsmetode som var anvendbar for alle de valgte forbindelser ble oppsatt. Basert på de innledende tester hvor hver forbindelse ble ført inn i rotteplasma og kjørt gjennom HPLC eller HPLC/MS i en konsentrasjon på 0,5 uM, ble retensjonstiden, ionisk masse og mulig separering av forbindelser ved HPLC og/eller HPLC/MS anvendt som grunnlag for samling av 3-4 forbindelser i én "kasser.
2. Oral konstituent- og forbi ndelsespreparat:
Hver "kassett" inneholder 3-4 forbindelser ved 5 eller 4 mg/kg for hver forbindelse. Kassettene ble fremstilt som en oral suspensjon i 0,5% vandig metylcellulose og 0,3% polyoksyetylen(20)sorbitonmonooleat (Tween-80). Doseringsvolumet varl 0 ml/kg gjennom oral gavage.
3. Dosering og plasmaprøvetaking:
Sprague Dawley hannrotter ble fastet natten over i individuelle bur med tilgang til vandig 10% dekstrose. To rotter ble dosert med hver "kassett". Plasmaprøver (~1 ml) ble oppsamlet ved 1 og 2 timer etter dosering fra de 2 rotter og samlet for ekstraksjon og analyse.
4. Forbindelsesekstraksjon og analyse:
Fra hver kassett blir plasmaprøver ved 1 og 2 timer, blindplasma, blind- plasma forsynt med alle forbindelsene ved 0,5 uM av hver, ekstrahert ved fastfase-ekstraksjonsmetoden. Prøver ble analysert med HPLC og HPLC/MS for sammenligningsformål. Plasmakonsentrasjoner blir beregnet basert på den ene konsentrasjon av 0,5 uM standard.
Resultater
Ved måling i den forutgående screen ble forbindelsene fra eksempler 1 til 8 ifølge foreliggende oppfinnelse funnet å være tilstede i signifikante nivåer i plasmaet ved 1 times og 2 timers intervaller etter oral administrering, henholdsvis gjennomsnittlige blodplasmanivåer på 0,83 uM og 0,75 uM.
Denne demonstrasjon av in vivo oral absorpsjon for tripeptidforbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse er bemrkelsesverdig i betraktning av den dårlige orale absorbsjon som generelt tilskrives denne klassen av peptider. Den raske orale absorpsjon gjør forbindelsene anvendelige for fremstilling av medikament for behandling av HCV-infeksjon.

Claims (24)

1. Forbindelse med formel (I): hvor R<1> er hydroksy eller NHS02R<1A> hvor R<1A> er (Ci-8)alkyl, (C3.7)cykloalkyl eller {(Ci-6)alkyl-(C3-7)cykloalkyl}, som alle eventuelt er substituert fra 1 til 3 ganger med halogen, cyano, nitro, 0-(Ci-e)alkyl, amido, amino eller fenyl eller R<1A> er C6 eller C10 aryl, som eventuelt er substituert fra 1 til 3 ganger med halogen, cyano, nitro, (Ci-e)alkyl, 0-(Ci-6)alkyl, amido, amino eller fenyl; R2 er t-butyl, -CH2-C(CH3)3 eller -CH2-cyklopentyl; R<3> er t-butyl eller cykloheksyl og R4 er cyklobutyl, cyklopentyl eller cykloheksyl; eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
2. Forbindelse med formel I ifølge krav 1, hvor R<1> er hydroksy, NHS02Me, NHS02-cyklopropyl eller NHS02Ph.
3. Forbindelse med formel I ifølge krav 2, hvor R<1> er NHS02Me eller hydroksy.
4. Forbindelse med formel I ifølge krav 3, hvor R<1> er hydroksy.
5. Forbindelse med formel I ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 4, hvor R<2> er t-butyl eller CH2-C(CH3)3.
6. Forbindelse med formel I ifølge krav 5, hvor R2 er CH2-C(CH3)3.
7. Forbindelse med formel I ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 6, hvor R<3> er t-butyl.
8. Forbindelse med formel I ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 7, hvor R<4> er cyklopentyl eller cykloheksyl.
9. Forbindelse med formel I ifølge krav 8, hvor R<4> er cyklopentyl.
10. Forbindelse med formel I som definert i krav 1, hvor R<1> er hydroksy, R2 er CH2-C(CH3)3, R3 er t-butyl og R<4> er cyklopentyl.
11. Forbindelse med formel I som definert i krav 1, hvor R<1> er hydroksy, R2 og R<3> hver er t-butyl og R<4> er cyklopentyl.
12. Forbindelse med formel I som definert i krav 1, hvor R<1> er hydroksy, R2 er CH2-C(CH3)3, R3 er cykloheksyl og R<4> er cyklopentyl.
13. Forbindelse med formel I som definert i krav 1, hvor R<1> er hydroksy, R2 er CH2-C(CH3)3 og R3 og R4 hver er cykloheksyl.
14. Forbindelse med formel I som definert i krav 1, hvor R<1> er hydroksy, R2 er cyklopentylmetyl, R3 er t-butyl og R<4> er cyklobutyl.
15. Forbindelse med formel I som definert i krav 1, hvor R<1> er hydroksy, R2 er CH2-C(CH3)3, R3 er t-butyl og R<4> er cyklobutyl.
16. Forbindelse'med formel I som definert i krav 1, hvor R<1> er NHS02Me, R<2> er CH2-C(CH3)3 R3 er t-butyl og R4 er cyklopentyl.
17. Forbindelse med formel I som definert i krav 1, hvor R<1> er NHS02Ph, R<2> er CH2-C(CH3)3, R3 er t-butyl og R<4> er cyklopentyl.
18. Farmasøytisk preparat omfattende en anti-hepatitt C viralt effektiv mengde av en forbindelse med formel I ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 17 eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav i blanding med en farmasøytisk akseptabelt bærermedium eller hjelpemiddel.
19. Farmasøytisk preparat ifølge krav 18, videre omfattende en terapeutisk effektiv mengde av én eller flere andre anti-HCV-midler.
20. Farmasøytisk preparat ifølge krav 19, hvor nevnte andre anti-HCV-middel er valgt fra: a-interferon eller pegylert a-interferon. r
21. Farmasøytisk preparat ifølge krav 19 eller 20, hvor nevnte andre anti-HCV- middel er ribavirin.
22. Farmasøytisk preparat ifølge krav 19, 20 eller 21, hvor nevnte andre anti-HCV middel er valgt fra inhibitorer av: helicase, NS2/3 protease og indre ribosom-inngangsete (IRES).
23. Anvendelse av en forbindelse med formel I ifølge hvilket som helst av kravene 1 til c 17 for fremstilling av et medikament for behandling eller forebygging av hepatitt C virusinfeksjon.
24. Farmasøytisk preparatet ifølge krav 19, 20 eller 21, hvor nevnte andre anti-HCV-middel er en inhibitor for HCV-polymerase.
NO20043642A 2002-02-01 2004-08-31 Heterocykiske tripeptider, farmasoytisk preparat omfattende slike samt anvendelse av slike for fremstilling av medikamenter for behandling eller forebygging av sykdom NO326421B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CA002369970A CA2369970A1 (en) 2002-02-01 2002-02-01 Hepatitis c inhibitor tri-peptides
PCT/CA2003/000091 WO2003064416A1 (en) 2002-02-01 2003-01-24 Heterocyclic tripeptides as hepatitis c inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20043642L NO20043642L (no) 2004-08-31
NO326421B1 true NO326421B1 (no) 2008-12-01

Family

ID=27626567

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20043642A NO326421B1 (no) 2002-02-01 2004-08-31 Heterocykiske tripeptider, farmasoytisk preparat omfattende slike samt anvendelse av slike for fremstilling av medikamenter for behandling eller forebygging av sykdom

Country Status (30)

Country Link
US (1) US20030191067A1 (no)
EP (1) EP1474423B1 (no)
JP (1) JP4073872B2 (no)
KR (1) KR20040081167A (no)
CN (1) CN1304416C (no)
AR (1) AR038382A1 (no)
AT (1) ATE369364T1 (no)
AU (1) AU2003202348B2 (no)
BR (1) BR0307517A (no)
CA (1) CA2369970A1 (no)
CO (1) CO5611112A2 (no)
DE (1) DE60315420T2 (no)
EA (1) EA007739B1 (no)
EC (1) ECSP045224A (no)
ES (1) ES2290425T3 (no)
HK (1) HK1078870A1 (no)
HR (1) HRP20040696A2 (no)
MX (1) MXPA04007446A (no)
MY (1) MY133719A (no)
NO (1) NO326421B1 (no)
NZ (1) NZ534730A (no)
PE (1) PE20030854A1 (no)
PL (1) PL371283A1 (no)
RS (1) RS67104A (no)
SA (1) SA03240006B1 (no)
TW (1) TWI274056B (no)
UA (1) UA77757C2 (no)
UY (1) UY27638A1 (no)
WO (1) WO2003064416A1 (no)
ZA (1) ZA200406014B (no)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NO332427B1 (no) * 2002-05-20 2012-09-17 Bristol Myers Squibb Co Hepatitt C virus inhibitorer, preparat omfattende slike forbindelser samt anvendelse av slike forbindelser for fremstilling av preparat for behandling av sykdom

Families Citing this family (143)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL129407A0 (en) 1996-10-18 2000-02-17 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases particularly hepatitis C virus NS3 protease pharmaceutical compositions containing the same and the use thereof
SV2003000617A (es) 2000-08-31 2003-01-13 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m
WO2002060926A2 (en) 2000-11-20 2002-08-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c tripeptide inhibitors
US6867185B2 (en) 2001-12-20 2005-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
DE60336550D1 (de) 2002-05-20 2011-05-12 Bristol Myers Squibb Co Inhibitoren des hepatitis-c-virus
EP1506000B9 (en) 2002-05-20 2011-08-31 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclicsulfonamide hepatitis c virus inhibitors
DE60324552D1 (en) 2002-05-20 2008-12-18 Bristol Myers Squibb Co Substituierte cycloalkyl p1' hepatitis c virus inhibitoren
EP1601685A1 (en) * 2003-03-05 2005-12-07 Boehringer Ingelheim International GmbH Hepatitis c inhibiting compounds
DE602004029866D1 (de) * 2003-03-05 2010-12-16 Boehringer Ingelheim Pharma Peptidanaloga mit inhibitorischer wirkung auf hepatitis c
US7176208B2 (en) 2003-04-18 2007-02-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
CN1791599A (zh) * 2003-05-21 2006-06-21 贝林格尔.英格海姆国际有限公司 丙型肝炎抑制剂化合物
MY148123A (en) 2003-09-05 2013-02-28 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
WO2005030194A1 (en) * 2003-09-30 2005-04-07 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Hcv inhibitiing sulfonamides
RU2006115558A (ru) 2003-10-10 2007-11-20 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед (Us) Ингибиторы сериновых протеаз, особенно hcv ns3-ns4a протеазы
US7491794B2 (en) * 2003-10-14 2009-02-17 Intermune, Inc. Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication
EP2407470A3 (en) * 2003-10-14 2015-06-10 F. Hoffmann-La Roche Ltd. Macrocyclic carboxylic acids and acylsulfonamides as inhibitors of HCV replication
EP1944042A1 (en) 2003-10-27 2008-07-16 Vertex Pharmceuticals Incorporated Combinations for HCV treatment
US8187874B2 (en) 2003-10-27 2012-05-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Drug discovery method
US7132504B2 (en) 2003-11-12 2006-11-07 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7309708B2 (en) 2003-11-20 2007-12-18 Birstol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7135462B2 (en) * 2003-11-20 2006-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP1730167B1 (en) 2004-01-21 2011-01-12 Boehringer Ingelheim International GmbH Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus
ATE461209T1 (de) * 2004-01-30 2010-04-15 Medivir Ab Hcv ns-3 serine protease inhibitoren
ES2431314T3 (es) 2004-02-20 2013-11-26 Boehringer Ingelheim International Gmbh Inhibidores de polimerasa vírica
EA012389B1 (ru) * 2004-03-30 2009-10-30 Интермун, Инк. Макроциклические соединения в качестве ингибиторов вирусной репликации
EP1763531A4 (en) 2004-06-28 2009-07-01 Boehringer Ingelheim Int ANALOGUE OF HEPATITIS-C INHIBITING PEPTIDES
EA200700336A1 (ru) * 2004-07-16 2009-12-30 Джилид Сайэнс, Инк. Противовирусные соединения
CA2573346C (en) * 2004-07-20 2011-09-20 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
UY29016A1 (es) * 2004-07-20 2006-02-24 Boehringer Ingelheim Int Analogos de dipeptidos inhibidores de la hepatitis c
EP2374464A3 (en) 2004-10-01 2011-10-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated HCV N3S-NS4A protease inhibition
TWI437990B (zh) 2004-10-29 2014-05-21 Vertex Pharma Vx-950之醫藥用途
US7323447B2 (en) 2005-02-08 2008-01-29 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7592336B2 (en) 2005-05-10 2009-09-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7608592B2 (en) * 2005-06-30 2009-10-27 Virobay, Inc. HCV inhibitors
US7601686B2 (en) 2005-07-11 2009-10-13 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
TWI389908B (zh) * 2005-07-14 2013-03-21 Gilead Sciences Inc 抗病毒化合物類
BRPI0613962A2 (pt) 2005-07-25 2009-03-24 Intermune Inc inibidores macrocìclicos inovadores de replicação de vìrus da hepatite c
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
EP1915378A4 (en) 2005-08-12 2009-07-22 Boehringer Ingelheim Int VIRUS POLYMERASE INHIBITORS
AR055395A1 (es) 2005-08-26 2007-08-22 Vertex Pharma Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c
US7964624B1 (en) 2005-08-26 2011-06-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
GEP20104956B (en) 2005-10-11 2010-04-12 Array Biopharma Inc Compounds for inhibiting hepatitis c viral replication and use thereof
US7772183B2 (en) 2005-10-12 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7741281B2 (en) 2005-11-03 2010-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7816348B2 (en) 2006-02-03 2010-10-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
AU2007217355B2 (en) 2006-02-27 2012-06-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Co-crystals comprising VX-950 and pharmaceutical compositions comprising the same
CA2646229A1 (en) 2006-03-16 2007-09-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Deuterated hepatitis c protease inhibitors
KR20090024834A (ko) 2006-07-05 2009-03-09 인터뮨, 인크. Ｃ형 간염 바이러스 복제의 신규 억제제
US7935670B2 (en) 2006-07-11 2011-05-03 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP1886685A1 (en) 2006-08-11 2008-02-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition
RU2009109355A (ru) 2006-08-17 2010-09-27 БЕРИНГЕР ИНГЕЛЬХАЙМ ИНТЕРНАЦИОНАЛЬ ГмбХ (DE) Ингибиторы вырусной полимеразы
US8343477B2 (en) 2006-11-01 2013-01-01 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
US7772180B2 (en) 2006-11-09 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8003604B2 (en) 2006-11-16 2011-08-23 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7888464B2 (en) 2006-11-16 2011-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2008070358A2 (en) * 2006-11-16 2008-06-12 Phenomix Corporation N-cyclopropyl-hydroxyproline-based tripeptidic hepatitis c serine protease inhibitors containing an isoindole, pyrrolopyridine, pyrrolopyrimidine or pyrrolopyrazine heterocycle in the side chain
US7763584B2 (en) 2006-11-16 2010-07-27 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2008106058A2 (en) 2007-02-27 2008-09-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
TW200846343A (en) 2007-02-27 2008-12-01 Vertex Pharma Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
AU2008251425A1 (en) * 2007-05-10 2008-11-20 Array Biopharma, Inc. Novel peptide inhibitors of hepatitis C virus replication
TW200914013A (en) * 2007-06-29 2009-04-01 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds
AP2874A (en) * 2007-06-29 2014-03-31 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds
AR067180A1 (es) * 2007-06-29 2009-09-30 Gilead Sciences Inc Compuestos antivirales
US8242140B2 (en) 2007-08-03 2012-08-14 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
ATE530546T1 (de) 2007-08-30 2011-11-15 Vertex Pharma Kokristalle und pharmazeutische zusammensetzungen damit
CA2708150A1 (en) 2007-12-05 2009-06-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Fluorinated tripeptide hcv serine protease inhibitors
JP5623289B2 (ja) 2007-12-19 2014-11-12 ベーリンガーインゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウイルスポリメラーゼインヒビター
US8202996B2 (en) 2007-12-21 2012-06-19 Bristol-Myers Squibb Company Crystalline forms of N-(tert-butoxycarbonyl)-3-methyl-L-valyl-(4R)-4-((7-chloro-4-methoxy-1-isoquinolinyl)oxy)-N- ((1R,2S)-1-((cyclopropylsulfonyl)carbamoyl)-2-vinylcyclopropyl)-L-prolinamide
MX2010008523A (es) 2008-02-04 2010-08-31 Idenix Pharmaceuticals Inc Inhibidores macrociclicos de serina proteasa.
CA2713108A1 (en) * 2008-02-07 2009-08-13 Virobay, Inc. Inhibitors of cathepsin b
AP2010005416A0 (en) 2008-04-15 2010-10-31 Intermune Inc Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication.
US8163921B2 (en) 2008-04-16 2012-04-24 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7964560B2 (en) 2008-05-29 2011-06-21 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP2300491B1 (en) 2008-05-29 2016-01-06 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
BRPI0913677A2 (pt) 2008-07-02 2015-12-15 Idenix Pharmaceuticals Inc composto, metabólito purificado, método para tratar um hospedeiro infectado com um vírus flaviviridade, composição farmacêutica, método para preparar o composto purificado, e, processo para preparar o composto
US8207341B2 (en) 2008-09-04 2012-06-26 Bristol-Myers Squibb Company Process or synthesizing substituted isoquinolines
UY32099A (es) 2008-09-11 2010-04-30 Enanta Pharm Inc Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c
US8044087B2 (en) 2008-09-29 2011-10-25 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8563505B2 (en) 2008-09-29 2013-10-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8283310B2 (en) 2008-12-15 2012-10-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
AU2009335904A1 (en) * 2008-12-19 2011-08-04 Gilead Sciences, Inc. HCV NS3 protease inhibitors
AU2010203656A1 (en) 2009-01-07 2011-07-21 Scynexis, Inc. Cyclosporine derivative for use in the treatment of HCV and HIV infection
EP2396028A2 (en) 2009-02-12 2011-12-21 Vertex Pharmceuticals Incorporated Hcv combination therapies comprising pegylated interferon, ribavirin and telaprevir
AR075584A1 (es) 2009-02-27 2011-04-20 Intermune Inc COMPOSICIONES TERAPEUTICAS QUE COMPRENDEN beta-D-2'-DESOXI-2'-FLUORO-2'-C-METILCITIDINA Y UN DERIVADO DE ACIDO ISOINDOL CARBOXILICO Y SUS USOS. COMPUESTO.
JP5690286B2 (ja) 2009-03-04 2015-03-25 イデニク プハルマセウティカルス，インコーポレイテッド ホスホチオフェン及びホスホチアゾールｈｃｖポリメラーゼ阻害剤
WO2010118078A1 (en) 2009-04-08 2010-10-14 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic serine protease inhibitors
CA2761650C (en) 2009-05-13 2015-05-26 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors
WO2011017389A1 (en) 2009-08-05 2011-02-10 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic serine protease inhibitors useful against viral infections, particularly hcv
WO2011063076A1 (en) 2009-11-19 2011-05-26 Itherx Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating hepatitis c virus with oxoacetamide compounds
MY159958A (en) 2009-12-18 2017-02-15 Idenix Pharmaceuticals Inc 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitors
RU2012136824A (ru) 2010-01-29 2014-03-10 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед Способы лечения вирусной инфекции гепатита с
MX2012011222A (es) 2010-04-01 2013-01-18 Centre Nat Rech Scient Compuestos y composiciones farmaceuticas para el tratamiento de infecciones virales.
WO2011156545A1 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Viral dynamic model for hcv combination therapy
WO2012009503A1 (en) 2010-07-14 2012-01-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Palatable pharmaceutical composition comprising vx-950
KR101990279B1 (ko) 2010-09-21 2019-06-19 이난타 파마슈티칼스, 인코포레이티드 매크로사이클릭 프롤린 유도된 ｈｃｖ 세린 프로테아제 억제제
EP2658859A4 (en) 2010-12-30 2014-07-30 Enanta Pharm Inc MACROCYCLIC HEPATITIS C SERIN PROTEASE INHIBITORS
MX2013007698A (es) 2010-12-30 2013-08-15 Abbvie Inc Inhibidores de serina proteasa de hepatitis c macrociclicos de fenantridina.
US9353100B2 (en) 2011-02-10 2016-05-31 Idenix Pharmaceuticals Llc Macrocyclic serine protease inhibitors, pharmaceutical compositions thereof, and their use for treating HCV infections
WO2012109646A1 (en) 2011-02-11 2012-08-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Treatment of hcv in hiv infection patients
WO2012107589A1 (en) 2011-02-11 2012-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections
US20120252721A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating drug-resistant hepatitis c virus infection with a 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitor
WO2012154321A1 (en) 2011-03-31 2012-11-15 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US8957203B2 (en) 2011-05-05 2015-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US10201584B1 (en) 2011-05-17 2019-02-12 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating HCV
US8691757B2 (en) 2011-06-15 2014-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
AU2012308900A1 (en) 2011-09-12 2013-05-09 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
WO2013039920A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Substituted carbonyloxymethylphosphoramidate compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
EP2768838A1 (en) 2011-10-14 2014-08-27 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Substituted 3',5'-cyclic phosphates of purine nucleotide compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US9089574B2 (en) 2011-11-30 2015-07-28 Emory University Antiviral JAK inhibitors useful in treating or preventing retroviral and other viral infections
US20130195797A1 (en) 2012-01-31 2013-08-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated High potency formulations of vx-950
US20130217644A1 (en) 2012-02-13 2013-08-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical Compositions of 2'-C-Methyl-Guanosine, 5'-[2[(3-Hydroxy-2,2-Dimethyl-1-Oxopropyl)Thio]Ethyl N-(Phenylmethyl)Phosphoramidate]
WO2013177188A1 (en) 2012-05-22 2013-11-28 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3',5'-cyclic phosphoramidate prodrugs for hcv infection
AP3913A (en) 2012-05-22 2016-11-26 Idenix Pharamaceuticals Inc D-amino acid compounds for liver disease
EP2852605B1 (en) 2012-05-22 2018-01-31 Idenix Pharmaceuticals LLC 3',5'-cyclic phosphate prodrugs for hcv infection
PE20151318A1 (es) 2012-10-08 2015-10-03 Idenix Pharmaceuticals Inc Analogos de 2'-cloro nucleosido para infeccion por vhc
WO2014063019A1 (en) 2012-10-19 2014-04-24 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Dinucleotide compounds for hcv infection
RS55592B1 (sr) 2012-10-19 2017-06-30 Bristol Myers Squibb Co 9-metil supstituisani heksadekahidrociklopropa(e)pirolo(1,2-a)(1,4)diazaciklopentadecinil karbamat derivati kao nestrukturalni 3 (ns3) proteazni inhibitori za lečenje infekcijavirusom hepatitisa c
US10723754B2 (en) 2012-10-22 2020-07-28 Idenix Pharmaceuticals Llc 2′,4′-bridged nucleosides for HCV infection
US9643999B2 (en) 2012-11-02 2017-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2014070964A1 (en) 2012-11-02 2014-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
WO2014071007A1 (en) 2012-11-02 2014-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
EP2914614B1 (en) 2012-11-05 2017-08-16 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US20140140951A1 (en) 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-Alanine Ester of Rp-Nucleoside Analog
WO2014078436A1 (en) 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of sp-nucleoside analog
EP2935304A1 (en) 2012-12-19 2015-10-28 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. 4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
ES2831625T3 (es) 2013-02-20 2021-06-09 Kala Pharmaceuticals Inc Compuestos terapéuticos y sus usos
WO2014137926A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3'-deoxy nucleosides for the treatment of hcv
US9339541B2 (en) 2013-03-04 2016-05-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Thiophosphate nucleosides for the treatment of HCV
WO2014137869A1 (en) 2013-03-07 2014-09-12 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US9187515B2 (en) 2013-04-01 2015-11-17 Idenix Pharmaceuticals Llc 2′,4′-fluoro nucleosides for the treatment of HCV
EP3004130B1 (en) 2013-06-05 2019-08-07 Idenix Pharmaceuticals LLC. 1',4'-thio nucleosides for the treatment of hcv
WO2015017713A1 (en) 2013-08-01 2015-02-05 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease
EP3046924A1 (en) 2013-09-20 2016-07-27 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c virus inhibitors
WO2015061683A1 (en) 2013-10-25 2015-04-30 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate and d-alanine thiophosphoramidate pronucleotides of nucleoside compounds useful for the treatment of hcv
EP3063165A1 (en) 2013-11-01 2016-09-07 Idenix Pharmaceuticals LLC D-alanine phosphoramidate pronucleotides of 2'-methyl 2'-fluoro guanosine nucleoside compounds for the treatment of hcv
US20170198005A1 (en) 2013-11-27 2017-07-13 Idenix Pharmaceuticals Llc 2'-dichloro and 2'-fluoro-2'-chloro nucleoside analogues for hcv infection
EP3083654A1 (en) 2013-12-18 2016-10-26 Idenix Pharmaceuticals LLC 4'-or nucleosides for the treatment of hcv
WO2015103490A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 Abbvie, Inc. Solid antiviral dosage forms
US20170066779A1 (en) 2014-03-05 2017-03-09 Idenix Pharmaceuticals Llc Solid forms of a flaviviridae virus inhibitor compound and salts thereof
US20170135990A1 (en) 2014-03-05 2017-05-18 Idenix Pharmaceuticals Llc Pharmaceutical compositions comprising a 5,5-fused heteroarylene flaviviridae inhibitor and their use for treating or preventing flaviviridae infection
US20170066795A1 (en) 2014-03-05 2017-03-09 Idenix Pharmaceuticals Llc Solid prodrug forms of 2'-chloro-2'-methyl uridine for hcv
EP3131914B1 (en) 2014-04-16 2023-05-10 Idenix Pharmaceuticals LLC 3'-substituted methyl or alkynyl nucleosides for the treatment of hcv
RU2650610C1 (ru) * 2017-02-28 2018-04-16 Васильевич Иващенко Александр Противовирусная композиция и способ ее применения

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6323180B1 (en) * 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
UA74546C2 (en) * 1999-04-06 2006-01-16 Boehringer Ingelheim Ca Ltd Macrocyclic peptides having activity relative to hepatitis c virus, a pharmaceutical composition and use of the pharmaceutical composition

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NO332427B1 (no) * 2002-05-20 2012-09-17 Bristol Myers Squibb Co Hepatitt C virus inhibitorer, preparat omfattende slike forbindelser samt anvendelse av slike forbindelser for fremstilling av preparat for behandling av sykdom

Also Published As

Publication number Publication date
CO5611112A2 (es) 2006-02-28
ZA200406014B (en) 2006-05-31
TW200307680A (en) 2003-12-16
TWI274056B (en) 2007-02-21
EP1474423B1 (en) 2007-08-08
EA007739B1 (ru) 2006-12-29
EP1474423A1 (en) 2004-11-10
AU2003202348B2 (en) 2008-01-17
CA2369970A1 (en) 2003-08-01
MXPA04007446A (es) 2004-10-14
ES2290425T3 (es) 2008-02-16
WO2003064416A1 (en) 2003-08-07
ATE369364T1 (de) 2007-08-15
UY27638A1 (es) 2003-09-30
ECSP045224A (es) 2004-09-28
CN1304416C (zh) 2007-03-14
HK1078870A1 (en) 2006-03-24
PE20030854A1 (es) 2003-11-25
NZ534730A (en) 2005-12-23
JP4073872B2 (ja) 2008-04-09
SA03240006B1 (ar) 2007-03-05
CN1642951A (zh) 2005-07-20
DE60315420T2 (de) 2008-04-17
MY133719A (en) 2007-11-30
EA200400986A1 (ru) 2005-02-24
KR20040081167A (ko) 2004-09-20
NO20043642L (no) 2004-08-31
DE60315420D1 (de) 2007-09-20
US20030191067A1 (en) 2003-10-09
HRP20040696A2 (en) 2005-06-30
BR0307517A (pt) 2004-12-28
AR038382A1 (es) 2005-01-12
JP2005529069A (ja) 2005-09-29
PL371283A1 (en) 2005-06-13
RS67104A (en) 2006-10-27
UA77757C2 (en) 2007-01-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7091184B2 (en) Hepatitis C inhibitor tri-peptides
NO326421B1 (no) Heterocykiske tripeptider, farmasoytisk preparat omfattende slike samt anvendelse av slike for fremstilling av medikamenter for behandling eller forebygging av sykdom
US6642204B2 (en) Hepatitis C inhibitor tri-peptides
EP1474441B1 (en) Tripeptides having a hydroxyproline ether of a substituted quinoline for the inhibition of ns3 (hepatitis c)
JP4040578B2 (ja) Ｃ型肝炎ウイルスに対して活性な大環状ペプチド
US7119072B2 (en) Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US6919423B2 (en) Hepatitis C inhibitor compound
AU2003202348A1 (en) Heterocyclic tripeptides as hepatitis c inhibitors
US20040224900A1 (en) Hepatitis C inhibitor peptide analogs
NO332056B1 (no) Hepatitt C inhibitor-forbindelser, farmasoytisk preparat inneholdende slike samt slike forbindelser for behandling av sykdom
AU2003202347A1 (en) Tripeptides having a hydroxyproline ether of a substituted quinoline for the inhibition of NS3 (Hepatitis C)
CA2474156C (en) Tripeptides having a hydroxyproline ether of a substituted quinoline for the inhibition of ns3 (hepatitis c)
CA2474031C (en) Heterocyclic tripeptides as hepatitis c inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees