NO311692B1

NO311692B1 - Sukkersubstituerte 2-azetidinoner som er anvendbare som hypokolesterolemiske midler

Info

Publication number: NO311692B1
Application number: NO19981950A
Authority: NO
Inventors: Nathan P Yumibe; Kevin B Alton; Margaret Van Heek; Harry R Davis; Wayne D Vaccaro
Original assignee: Schering Corp
Priority date: 1995-10-31
Filing date: 1998-04-29
Publication date: 2002-01-07
Also published as: MX9803447A; MY114803A; PL184698B1; NO981950D0; CA2235943A1; BR9612998B1; HUP9802539A2; AR004701A1; GEP20033006B; SK283552B6; SK48398A3; IL124268A; CY2353B1; TW448181B; DK0877750T3; CN1103780C; CZ293957B6; HK1012507A1; CZ129498A3; DE69621952T2

Description

Foreliggende oppfinnelse angår sukker-substituerte 2-azetidinoner som er anvendbare for hypokolesterolemiske midler ved behandling og hindring av arteriosklerose, og kombinasjonen av et sukker-substituert 2-azetidinon ifølge oppfinnelsen og en kolesterolbiosynteseinhibitor for behandling og forebyggelse av arteriosklerose.

Arteriosklerotisk koronar hjertesykdom representerer hovedårsaken til død og kardiovaskulær sykelighet i den vest-lige verden. Risikofaktorer for arteriosklerotisk koronar hjertesykdom omfatter hypertensjon, sukkersyke, familiehistorie, hannkjønn, sigarettrøk og serumkolesterol. Et totalt kolesterol-nivå over 225 - 250 mg/dl er forbundet med signifikant risiko-økning.

Kolesterylestere er en hovedbestanddel i arteriosklerotiske skader og den viktigste lagringsform for kolesterol i arterieveggcellérv Dannelsen av kolesteryl-

estere er også et nøkkeltrinn i tarmabsorpsjonen av diettkolesterol. I tillegg til regulering av diettkolesterol omfatter reguleringen av hele kroppens kolesterolhomeostase hos mennesker og dyr modulasjon av kolesterolbiosynteser, gallesyrebiosyntese og nedbrytningen av de kolesterol-holdige plasmalipoproteiner. Leveren er hovedorganet som er ansvar-

lig for kolesterolbiosyntese og -nedbrytning og er av denne grunn viktigst for bestemmelse av plasmakolesterolnivåer. Leveren er stedet for syntese og utskillelse av lipoproteiner med meget lav densitet (VLDL) som deretter omdannes til lipoproteiner med lav densitet (LDL) i sirkulasjonen. LDL er de viktigste kolesterol-bærende lipoproteiner i plasmaet og en økning i deres konsentrasjon er korrelert med øket arteriosklerose.

Når kolesterolabsorpsjon i tarmen reduseres, av hvilken som helst grunn, avgis mindre kolesterol til leveren. Følgen av denne påvirkning er en minsket leverlipoprotein (VLDL)-produksjon og en økning i leverklareringen av plasma-kolesterol for det meste som LDL. Nettoeffekten av en inhibering av tarmkolesterolabsorpsjon er således en minskning i plasmakolesterolnivåer.

Det er rapportert at flere 2-azetidinonforbindelser er anvendbare for senkning av kolesterol og/eller for inhibering av dannelsen av kolesterolholdige skader i arterievegger hos pattedyr: WO 93/02048 beskriver 2-azetidinonforbindelser hvor substituenten i 3-stillingen er arylalkylen, arylalkenylen eller arylalkylen hvor alkylenet, alkenylenet eller alkylendelen er avbrutt av et heteroatom, fenylen eller cykloalkylen; WO 94/17038 beskriver 2-azetidinonforbindelser hvor substituenten i 3-stillingen er en arylalkylspirocyklisk gruppe;

WO 95/08532 beskriver 2-azetidinonforbindelser hvor substituenten i 3-stillingen er en arylalkylengruppe substi-

tuert i alkylendelen med en hydroxygruppe; PCT/US95/03196, innlevert 22. mars 1995, beskriver forbindelser hvor substituenten i 3-stillingen er en aryKoxo- eller thio) alkylengruppe substituert i alkylendelen ved en hydroxygruppe; og US serie nr. 08/463 619, innlevert 5. juni 1995, beskriver fremstillingen av forbindelser hvor substituenten i 3-stillingen er en arylalkylengruppe substituert i alkylendelen ved en hydroxygruppe, og hvor alkylengruppen er festet til azetidinonringen med en -S(0)Q_2~gruppe. De nevnte patentsøknader inntas her som referanse.

Europa-patent 199 630 og Europa-patentsøknad 337 549 beskriver elastasehemmende, substituerte azetidinoner som synes å være anvendbare ved behandling av inflammatoriske tilstander som resulterer i vevødeleggelse som er forbundet med forskjellige sykdomstilstander, f.eks. arteriosklerose.

Andre kjente hypokolesterolemiske stoffer omfatter planteekstrakter slik som sapogeniner, spesielt tigogenin og diosgenin. Glykosidderivater av tigogenin og/eller diosgenin er beskrevet i PCT internasjonale publikasjoner WO 94/00480 og WO 95/18143.

Inhiberingen av kolesterolbiosyntese ved 3-hydroxy-3-methylglutarylkoenzym A-reduktase (EC1.1.1.34)-inhibitorer har vist seg å være en effektiv måte å redusere plasma-kolesterol på (Witzum, Circulation, 80, 5 (1989), s. 1101-1114) og redusere arteriosklerose. Kombinasjonsterapi av en HMG CoA-reduktaseinhibitor og gallesyresekvestrant har vist seg å være mere effektiv hos humane hyperlipidemiske pasienter enn hvert middel i monoterapi (Illingworth, Drugs, 36 (Suppl. 3) (1988), s. 63 - 71) .

Foreliggende oppfinnelse angår sukker-substituerte 2-azetidinoner, spesielt glukose-avledede konjugater av kolesterolsenkede 2-azetidinoner med en aryl- eller en substituert arylgruppe som en substituent i 1-stillingen og med en hydroxy-substituert fenylgruppe, spesielt en 4-hydroxy-fenylgruppe, i 4-stillingen.

Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse er kjennetegnet ved strukturformelen

eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, hvori G er valgt fra gruppen bestående av

R, Ra ogR<b>uavhengig er valgt fra gruppen bestående av H, -0H eller -0-C (0) - (C^-Cg) alkyl,

R<2>og R6 uavhengig er valgt fra gruppen bestående av H, (Ci-C6) - alkyl eller benzyl,

R<3>,R<4>,R<5>,R<7>, R<3>a ogR4<a>uavhengig er valgt fra gruppen bestående av H, (Ci-C6) alkyl, benzyl og acetyl,

Ar<1>er fenyl eller R<10->substituert fenyl,

Ar<2>er fenyl eller R<1:L->substituert fenyl,

Q er en binding, og

R<1>er valgt fra gruppen bestående av

-(CH2)q-, hvor q er 2-6, som eventuelt er substituert med OH, eller Ci-C6-alkyl substituert med acetyloksy,

R1<0>er valgt fra gruppen bestående av 1-3 substituenter som uavhengig er valgt fra gruppen bestående av halogen eller Cx- C6-alkoksy, og

R<11>er valgt fra 1-3 substituenter som er valgt fra gruppen bestående av halogen, Ci-C6-alkoksy eller benzoyl.

Foretrukne forbindelser er: 2 , 3,4-tri-0-acetyl-1-0-[4-[trans-(3R,4S)-3- 0 3-[(S) -acetyloxy-3-(4-fluorfenyl)propyl-1-(4-fluorfenyl) -2-oxo-4-azetidinyl] fenyl] -beta-D-glukopyranuronsyre-methylester, l-0-[4-[trans-(3R,4S) -1- (4-f luorfenyl) -2-oxo-3-[ 3-[ (s) -hydroxy-4- f luorfenyl) propyl] ]-4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukuronsyre, l-0-[ 4-[ trans- (3R,4S) -1- (4-jodfenyl) -2-oxo-3-[ 3-[ (S) -hydroxy-4rf luorfenyl) propyl] ] -4-azetidinyl] fenyl]-beta-D-glukuronsyre, 2,3,6-tri-0-acety1-4-0-(2,3,4,6-tetra-0-acety1-B-D-glukopyranosyl) -1-0-[ 4-[ trans- (3R, 4S) — 3-[ 3 (S) -acetyloxy-3- (4-f luorfenyl) - propyl-1-(4-fluorfenyl)-2-oxo-4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukopyran, l-0-[4-[trans-(3R,4S)-1-(4-fluorfenyl)-2-oxo-3-[3-[(S)-hydroxy-4-fluorfenyl) propyl] ]-4-azetidinyl]fenyl]-3-0-(betaT-D-gluko-pyranosy1)-beta-D-glukopyranose, 2,3,4,5-tetra-0-acetyl-l-0-[4-[trans-(3R,4S)-3-[3(S)-acetyloxy-3- (4-f luorfenyl) propyl-1- (4-f luorfenyl) -2-oxo-4-azetidinyl]-fenyl ] -t-beta-D-glukopyran, l-0-[4-[trans- (3R,4S)-3-[3(S)-hydroxy-3-(4-fluorfenyl)propyl-1- (4-f luorfenyl) -2-oxo-4-azetidinyl] fenyl]-beta-D-glukopyranose, l-0-[4-[ trans- (3R,4S) -1- (4-f luorfenyl) -2-oxo-3-[ 3-[ (S) -hydroxy-4- fluorfenyl)propyl]]-4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukuronsyre-methylester, l-0-[4-[ trans-(3R,4S)-1-(4-methoxyfenyl)-2-oxo-3-(3-fenyl)-propyl ] -4-azetidinyl ] fenyl ] -beta-D-glukuronsyre-methy lester, l-0-[4-[trans-(3R,4S)-1-(4-(benzoyl) fenyl)-2-oxo-3-(3-fenyl)-propyl]-4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukuronsyre-methylester, l-0-[4-[trans-(3R,4S) -1-(4-methoxyfenyl)-2-oxo-3-(3-fenylpropyl)-4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukopyranose, l-0-[4-[trans-(3R,4S(-1-(4-methoxyfenyl)-2-oxo-3-(3-fenylpropyl)-4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukuronsyre, l-methyl-6-0-t4-[trans-(3R,4S)-1-(4-methoxyfenyl)-2-oxo-3-(3-fenylpropyl)-4-azetidinyl]fenyl]-alfa-D-glukopyranosid, l-0-[4-[trans- (3R,4S)-1-(4-(benzoyl) fenyl)-2-oxo-3-(3-fenyl)-propyl]-4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukuronsyre og l-0-[4-[trans- (3R,4S)-1-(4-fluorfenyl) -2-oxo-3-[3-[(S)-hydroxy-4-jodfenyl)propyl]]-4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukuronsyre.

Foreliggende oppfinnelse angår også anvendelse av et sukker-substituert 2-azetidinon, spesielt ett med formel I, for fremstilling av et hypokolesterolemisk middel for et pattedyr som har behov for en slik behandling.

I et annet aspekt angår oppfinnelsen et farmasøytisk preparat omfattende et sukker-substituert 2-azetidinon, spesielt ett med formel I, i en farmasøytisk akseptabel bærer.

En fremgangsmåte for å redusere leverkolesterolesternivåer, en fremgangsmåte for å redusere plasmakolesterolnivåer og en fremgangsmåte for å behandle eller forebygge arteriosklerose, omfatter å administrere til et pattedyr som har behov for en slik behandling, en effektiv mengde av en kombinasjon av et sukker-substituert 2-azetidinon ifølge oppfinnelsen, spesielt ett med formel I, og en kolesterolbiosynteseinhibitor.

I enda et annet aspekt angår oppfinnelsen et farmasøytisk preparat omfattende en effektiv mengde av et sukker-substituert 2-azetidinon, en kolesterolbiosynteseinhibitor, og en farmasøytisk akseptabel bærer. I et siste aspekt angår oppfinnelsen et utstyr omfattende i én beholder en effektiv mengde av et sukker-substituert 2-azetidinon i en farmasøytisk akseptabel bærer, og i en separat beholder, en effektiv mengde av en kolesterolbiosynteseinhibitor i en farmasøytisk akseptabel bærer.

Forbindelser ifølge oppfinnelsen har minst ett asymmetrisk carbonatom og derfor anses alle isomerer, inkludert distereomerer og rotasjonsisomerer å være en del av oppfinnelsen. Oppfinnelsen omfatter d- og 1-isomerer i både ren form og i blanding, inkludert racemiske blandinger. Isomerer kan fremstilles ved anvendelse av konvensjonelle teknikker, enten ved å omsette optisk rene eller optisk anrikede startmaterialer eller ved å separere isomerer av en forbindelse med formel I.

Fagmannen vil erkjenne at for noen forbindelser med formel I vil én isomer vise større farmakologisk aktivitet enn andre isomerer.

Forbindelser ifølge oppfinnelsen med en aminogruppe kan danne farmasøytisk akseptable salter med organiske og uorganiske syrer. Eksempler på egnede syrer for saltdannelse er salt-, svovel-, fosfor-, eddik-, sitron-, oxal-, malon-, salicyl-, eple-, fumar-, rav-, ascorbin-, malein-, methan-sulfon- og andre mineral- og carboxylsyrer som er vel kjent for fagmannen. Saltet fremstilles ved å bringe den fri baseform i kontakt med en tilstrekkelig mengde av den ønskede syre for å fremstille et salt. Den fri baseform kan regenereres ved å behandle saltet med en passende fortynnet vandig base-løsning slik som fortynnet vandig natriumbicarbonat. Den fri baseform skiller seg fra dens respektive saltform noe i visse fysiske egenskaper, som løselighet i polare løsningsmidler, men saltet er forøvrig ekvivalent med dens respektive frie baseform for formålene ifølge oppfinnelsen.

Visse forbindelser ifølge oppfinnelsen er sure (dvs. de forbindelser som har en carboxylgruppe). Disse forbindelser danner farmasøytisk akseptable salter med uorganiske og organiske baser. Eksempler på slike salter er natrium-, kalium-, calsium-, aluminium-, gull- og sølvsaltene. Salter som dannes med farmasøytisk akseptable aminer slik" som ammoniakk, alkyl-aminer, hydroxyalkylaminer, N-methylglukamin og lignende, omfat-tes også.

Kolesterolbiosynteseinhibitorer for anvendelse i kombinasjonen ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter HMG CoA-reduktaseinhibitorer slik som lovastatin, pravastatin, fluvastatin, simvastatin og Cl-981, HMG CoA-syntetaseinhibitorer, for eksempel L-659 699 ((E,E-ll-[31 R-(hydroxy-methyl)-4'-oxo-2k-oxetanyl]-3,5,7R-trimethyl-2,4-undecadiensyre), skvalen-synteseinhibitorer, for eksempel skvalestatin 1 og skvalen-oxydaseinhibitorer, for eksempel, NB-598 ((E)-N-ethyl-N-(6,6-dimethyl-2-heptan-4-ynyl)-3-[(3,3'-bithiofen-5-yl)methoxy]-benzen-methanamin-hydroklorid). Foretrukne HMG CoA-reduktaseinhibitorer er lovastatin, pravastatin, fluvastatin og simvastatin.

De kolesterol-senkende 2-azetidinondeler av forbindelsene med formel I kan fremstilles ved hjelp av kjente fremgangsmåter, for eksempel beskriver WO 93/02048 fremstillingen av forbindelser hvor -R -Q- er alkylen, alkenylen eller alkylen avbrutt av et heteroatom, fenylen eller cykloalkylen, WO 94/17038 beskriver fremstillingen av forbindelser hvor Q er en spirocyklisk gruppe, WO 95/08532 beskriver fremstillingen av forbindelser hvor -R^-Q- er en hydroxy-substituert alkylengruppe,PCT/US95/03196 beskriver forbindelser hvor -R<1>-Q er et hydroxy-substituert alkylen festet til Ar^-delen ved en -0-eller S(0)Q_2~gruppe og US serie nr. 08/463 619, innlevert 5. juni 1995, beskriver fremstillingen av forbindelser hvor -R -Q- er en hydroxy-substituert alkylengruppe festet til azetidinon-ringen ved en -S (0)Q_2~gruppe. Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse fremstilles generelt ved å omsette et 4-(hydroxy- eller dihydroxy)-fenyl-2-azetidinon med et sukkerderivat. Eksempelvis omsettes 26A et azetidinon av formel II, hvor R er H eller 0H, med en ekvivalent av et sukkerderivat med formel III:

hvor R^ er hydrogen eller -CNHCCl^og de gjenværende variable er som definert ovenfor for å oppnå en forbindelse med formel IA, hvor R er H eller 0H. For å fremstille en forbindelse

26 1 1

med formel IB, hvor R er OG , hvor G ikke er H og G er H, omsettes et azetidinon med formel IIA, hvor R 26 er0H ogR<27>er en egnet hydroxy-beskyttende gruppe med et sukkerderivat

30

med formel HIA, hvor R er som definert ovenfor, fulgt av

27

fjerning av den R -beskyttende gruppe:

>For å fremstille en forbindelse med formel IC, hvor både G"<*>";og G er like, men ikke er H, omsettes en dihydroxyforbindelse ;30 ;med formel IIC med et overskudd av G-OR : ; For å fremstille forbindelser med formel ID hvor G og G"*" begge ikke er H og ikke er det samme sukkerderivat, kan en forbindel-26A se med formel IA hvor R er OH omsettes med et sukker med formelen G 1 -OR 30. Alternativt beskyttes én av hydroxysub-stituentene på 4-stillingens fenyl i en forbindelse med formel IIC før reaksjon med sukkerderivatet for å festes til den ubeskyttede hydroxygruppe, og etter reaksjon med det første sukkerderivat fjernes den hydroxy-beskyttende gruppe og det andre sukkerderivat omsettes med den tidligere beskyttede hydroxygruppe. For eksempel:

Sukkere og derivatene derav som definert med

G-OR ^ og G^-OR"^ er kjente fagområder eller kan lett fremstilles ved hjelp av kjente fremgangsmåter.

De reaksjoner som er beskrevet ovenfor omfatter fortrinnsvis et sukkerderivat hvor de ikke-reaktive hydroxy-grupper er beskyttet med egnede beskyttende grupper som defi-2 3 3a 4 4a 5 7

nert ovenfor for R , R , R , R , R , R og R forskjellige fra hydrogen, fortrinnsvis lavere alkyl, acetyl eller benzyl, hvilke grupper kan fjernes etter reaksjonen for å gi sukker-konjugatet. Når sidekjedene i stilling 1 og 3 i 2-azetidinonet

omfatter substituentgrupper som er reaktive ved de betingelser som anvendes, beskyttes nevnte reaktive grupper ved egnede beskyttelsesgrupper før reaksjon med sukkeret eller derivatet derav, og beskyttelsesgruppene fjernes deretter. Avhengig av naturen av beskyttelsesgruppene kan beskyttelsesgruppene på sukkerdelen og på sidekjedene i 1- og 3-stillingen i azetidinonet fjernes i rekkefølge eller samtidig.

Forbindelser med formel I hvor Ar^-R^-Q- erAr<1->CH(OH)-(CH2)2~, dvs. forbindelser med formel Ia og Ib, kan for eksempel fremstilles overensstemmende med følgende reaksjons-skjema, hvor et azetidinon med formel Ila omsettes med et sukkerderivat av formelen G-0CNHCC1.,. Dette skjema vises for en forbindelse hvor R 26 er H og en spesifikk G-OCNHCCl^-gruppe er eksemplifisert, men en lignende fremgangsmåte kan anvendes for å fremstille forbindelser hvor R 26 er -OG 1 og for andre G-OCNHCC13-grupper:

I det første trinn omsettes azetidinonet med formel Ila med sukkerderivatet med formel Illa i nærvær av et k.oplingsmiddel slik som BF^-etherat i et inert løsningsmiddel slik som C^C^. Reaksjonen utføres ved temperaturer på -20 til -25 C i en periode på ca. 2 timer. I det andre trinn behandles det sukker-substituerte azetidinon med formel IV enten med en base slik som triethylamin i et løsningsmiddel slik som methanol og vann for å fjerne acetyl- og alkyl-beskyttende grupper for å oppnå en forbindelse med formel Ia, eller det sukker-substituerte azetidinon med formel IV behandles med et reagens slik som KCN

i et løsningsmiddel slik som methanol for å fjerne de acetyl-beskyttende grupper men etterlater den alkyl-beskyttende gruppe for å oppnå en forbindelse med formel Ib. Forbindelsen med formel Ib kan videre reduseres med et reagens slik som LiOH

for å oppnå forbindelsen med formel Ia.

Forbindelser med formel I hvor Ar -R -Q- er Ar1-(CH2)-j-/ dvs. forbindelser med formel Ic, kan fremstilles i overensstemmelse med det følgende reaksjonsskjerna, hvor et azetidinon med formel Ilb omsettes med et sukkerderivat med formel G-OH. Skjemaet vises for en forbindelse hvor R 2 6 er hydrogen og med en spesifikk G-OH-gruppe, men en lignende fremgangsmåte kan anvendes for å fremstille forbindelser hvor R2 6 er -OG og for andre G-OH-grupper:

I det første trinn omsettes azetidinonet med formel Ilb med et sukkerderivat med formel Illb i et inert løsningsmiddel slik et tetrahydrofuran i nærvær av n-tributylfosfin og 1,1'-(azodicarbonyl)dipiperidin. Det resulterende sukker-substituerte azetidinon reduseres med et reagens som Pd(OH)2/C i et alkoho-lisk løsningsmiddel under H2~gass for å fjerne de benzyl-beskyttende grupper for å oppnå en forbindelse med formel I.

Utgangsmaterialer med formel Ilb er kjent. Forbindelser med formel Ila kan fremstilles fra det tilsvarende (3-hydroxy-3 Ar^-propyl)-2-azetidinon ved behandling med eddiksyreanhydrid og dimethylaminopyridin (DMAP) i et inert løsnings-middel slik som CH2C12for å oppnå den tilsvarende di-acetyl-forbindelse, etterfulgt av behandling med guanidin for å oppnå 4-hydroxyfenylforbindelsen. Utgangsmaterialer med formel II hvor Ar^^-Q- er som definert ovenfor for formel I, kan fremstilles ved hjelp av lignende fremgangsmåter eller andre som er vel kjent for fagområdet.

Utgangsmaterialer med formel Illb er kjent på fagområdet eller kan fremstilles ved hjelp av vel kjente fremgangsmåter. Forbindelser med formel Illb fremstilles ved å behandle den tilsvarende forbindelse med formel Illb med trikloracetonitril i et inert løsningsmiddel slik som CH2C12i nærvær av Cs^<O>^.

Reaktive grupper som ikke er involvert i de oven-stående fremgangsmåter kan beskyttes under reaksjonene med konvensjonelle beskyttelsesgrupper som kan fjernes ved hjelp av standard fremgangsmåter etter reaksjonen. Den følgende Tabell 1 viser noen typiske beskyttelsesgrupper:

Søkerne har funnet at forbindelsene ifølge oppfinnelsen senker plasmalipidnivåer og leverkolesterolesternivåer. Forbindelser ifølge oppfinnelsen er funnet å hindre absorpsjon av kolesterol og signifikant å redusere dannelsen av lever-kolesterylestere i dyremodeller. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er således hypokolesterolemiske midler på grunn av deres evne til å hindre forestring og/eller tarmabsorpsjon av kolesterol. De er derfor anvendbare ved behandling og forebyggelse av arteriosklerose hos pattedyr, spesielt hos mennesker.

Sammenlignet med de 2-azetidinon-holdige, kolesterol-senkende midler som ikke er sukker-substituerte, har forbindelsene ifølge oppfinnelsen flere farmakologiske og fysiske fordeler. Forbindelsene absorberes med en lavere hastighet, gir lavere plasmanivåer og høyere tarmnivåer. Tidligere testing indikerte at tarmen var det sannsynlige aktivitetssted for de 2-azetidinonforbindelser som mangler en sukker-substituent. Se E.J. Sybertz et al, "SCH 48461, a Novel Inhibitor of Cholesterol Absorption", Athersclerosis X, red. F.P. Woodward et al (Elsevier, 1995), s. 311 - 315, og B.G. Salibury et al, "Hypercholesterolemic Activity of a Novel Inhibitor of Cholesterol Absorption". Atherosclerosis, 115

(1995), s. 45 - 63. De forbindelser som kreves ifølge oppfinnelsen, og som utskilles i gallen, gir effektiv avleve-ring av forbindelsen til det ønskede sted mens systemvis eksponering minskes, for derved å minske potensielle toksitets-problemer. Foreliggende oppfinnelse angår også et farmasøytisk preparat omfattende en forbindelse med formel I ifølge oppfinnelsen og en farmasøytisk akseptabel bærer. Forbindelsene med formel I kan administreres i en hvilken som helst konven-sjonell oral doseringsform slik som kapsler, tabletter, pulvere, suspensjoner eller.løsninger. Blandingene og de farmasøytiske preparater kan fremstilles ved anvendelse av konvensjonelle, farmasøytisk godtagbare bindemidler og additiver og konvensjonelle teknikker. Slike farmasøytisk akseptable bindemidler og additiver omfatter ikke-toksiske, forenlige fyllstoffer, bindemidler, desintegreringsmidler, buffere, konserveringsmidler, anti-oxidanter, smøremidler, smaksstoffer, fortykningsmidler, farvestoffer, emulgeringsmidler og lignende. Den daglige hypokolesterolemiske dose av en forbindelse med formel I er ca. 0,001 til ca. 30 mg/kg kroppsvekt pr. dag, fortrinnsvis ca. 0,001 til ca. 1 mg/kg. For en gjennom-snitts kroppsvekt på 70 kg er doseringsnivået derfor fra ca. 0,1 til ca. 100 mg medisin pr. dag, gitt i en enkelt dose eller 2-4 oppdelte doser. Den nøyaktige dose bestemmes imidlertid av den behandlende lege og er avhengig av styrken til den administrerte forbindelse, og pasientens alder, vekt, tilstand og respons hos pasienten. For kombinasjonene ifølge oppfinnelsen hvor det substituerte azetidinon administreres i kombinasjon med en kolesterolbiosynteseinhibitor, er den typiske daglige dose av kolesterolbiosynteseinhlbitoren 0,1 til 80 mg/kg pattedyrvekt pr. dag administrert i en enke2t eller oppdelte doseringer, vanligvis én eller to ganger pr. dag; for eksempel gis for HMG CoA-reduktaseinhibitorer, ca. 10 til ca. 40 mg pr. dose 1 til 2 ganger pr. dag, hvilket gir en total daglig dose på ca. 10 til 80 mg pr. dag, og for de andre kolesterolbiosynteseinhibitorer gis ca. 1 til 1000 mg pr dose 1 til 2 ganger pr. dag, hvilket gir en total daglig dose på ca. 1 mg til ca. 2 g pr. dag. Den nøyaktige dose av en hvilken som helst bestanddel i kombinasjonen som administreres bestemmes av den behandlende lege og er avhengig av styrken til den administrerte forbindelse, og pasientens alder, vekt, tilstand og respons hos pasienten. Der bestanddelene i en kombinasjon administreres separat, behøver antallet doser av hver bestanddel som gis pr. dag ikke nødvendigvis være den samme, f.eks. hvor en bestanddel kan ha en større aktivitets varighet, og derfor kan administreres sjeldnere. Ved reduksjon av plasmakolesterolnivåer ved behandling med en kombinasjon av aktive ingredienser hvor de nevnte aktive ingredienser kan administreres separat, kombineres separate farmasøytiske preparater i utstyrsform. Det vil si at det overveies et utstyr hvor separate enheter kombineres: et farmasøytisk preparat med en kolesterolbiosynteseinhibitor og et farmasøytisk preparat med en sukker-substituert 2-azetidinonabsorpsjonsinhibitor. Utstyret vil fortrinnsvis omfatte retningslinjer for administrasjonen av de separate bestanddeler. Utstyrsformen er spesielt fordelaktig når de separate bestanddeler må administreres i forskjellige dose ringsformer (f.eks. oral og parenteral) eller administreres med forskjellige doseringsintervaller. I det følgende gis eksempler på fremstilling av forbindelser med formel I. Den stereokjemi som er oppført er relativ stereokjemi med mindre annet er bemerket. Uttrykkene cis og trans refererer til de relative orienteringer ved (3-lactam 3- og 4-stillingene.

Fremstilling A

1-( 4- fluorfenyl)- 3 ( R) -[ 3( S)- acetyloxy- 3-( 4- fluorfenyl) propyl)]-4( S)-( 4- hydroxyoxyfenyl)- 2- azetidinon

Trinn 1: 1-(4-fluorfenyl-3(R)-[3(S)-acetyloxy-3-(4-fluorfenyl)-propyl)]-4(S)-(4-acetyloxyfenyl)-2-azetidinon

Tilsett eddiksyreanhydrid (1,03 ml, 10,96 mmol) til en romtemperaturløsning av 1-(4-fluorfenyl-3(R)-[3(S)-hydroxy-3- (4-f luorfenyl) propyl) ]-4 (S) - (4-hydroxyfenyl) -2-azetidinon (2,04 g, 4,98 mmol) og dimethylaminopyridin (DMAP) (1,46 g, 11,96 mmol) i 15 ml tetrahydrofuran (THF). Etter at TLC (5 % CH^OH/toluen) indikerer forbruk av utgangsmateriale (10 min), fortynnes blandingen med ether (Et20), vaskes med IM HC1 og saltvann, tørkes over vannfritt Na^O^, konsentreres til et klart skum, 2,4 7 g (100 %) og anvendes uten ytterligere rensing. NMR (400 MHz, CDCl-j) : 7,33 (2H, d, J=8,6 Hz), 7,27 (2H, m) . 7.21 (2H, m), 7,11 (2H, d, J=8,5 Hz), 7,02 (2H, t, J=8,6 Hz), 6,94 (2H, d, J=8,5 Hz), 5,70 (1H, t, J=7Hz), 4,60 (1H, d,

J=2,4 Hz), 3,06 (1H, dt, J=7,9, 2,4 Hz), 2,31 (3H, s), 2,06

(3H, s), 2,03 (1H, m) , 1,86 (2H, M). HRMS (FAB) : beregnet for M+<H:><C>2<8>H25N05F2, 493,1701. Funnet 493,1695.

Trinn 2: Natriumethoxyd (0,338 g, 4,97 mmol) tilsettes til

en løsning ved romtemperatur av guanidinhydroklorid (0,499 g, 5.22 mmol) i 15 mlCH30H. Etter 10 minutter tilsettes langsomt den resulterende løs<ning>Ved hjelp av en pipette til en løsning av produktet fra Trinn 1 (2,45 g, 4,97 mmol) i 15 ml CH3OH. Reaksjonen overvåkes med TLC (15 % EtOAc/toluen) og etter forbruk av utgangsmateriale (-'lh) , konsentreres blandingen ved romtemperatur i vakuum. Den resulterende rest gjenopp-løses i ethylacetat (EtOAc) og konsentreres på nok silicium-dioxyd slik at det oppnås et frittstrømmende pulver. Det resulterende pulver overføres på en kromatografikolonne

pakket med 15 % EtOAc/toluen. Det elueres med det samme løsningsmiddel for å oppnå 1,31 g (95 %) av tittelforbindelsen som et glass. HRMS (FAB): beregnet for M+H:<C>26<H>24N04F2'452;1673'funnet 452,1661.

Fremstilling A2

Trans-( 3R, 4S)- l-( 4-( benzoyl) fenyl)- 3-( 3- fenyl) propyl)- 4-( 4-hydroxy) fenyl- 2- azetidinon

Trinn 1: En blanding av 4-nitrobenzofenon (20,94 g, 92,2 mmol), ethylenglykol (25,6 ml, 461 mmol), p-toluensulfonsyre (0,87 g, 4,61 mmol) og 125 ml toluen tilbakeløpsbehandles over natten med azeotropisk fjerning av vann ved hjelp av en Dean-Stark-felle. Blandingen avkjøles til romtemperatur, fortynnes med Et20, vaskes med IN NaOH, vann og saltløsning, tørkes over vannfritt Na2SO^ og konsentreres for å oppnå 24,81 g (99 %) av et hvitt fast stoff. NMR (400 MHz, CDC13): 8,18 (2H, d, J=

9,0 Hz), 7,12 (2H, d, J=90 Hz), 7,50 (2H, d, J=8,0 Hz), 7,34 (3H, m), 4,09 (4H, m).

Trinn 2 . ; Produktet fra trinn 1 (24,8 g, 92 mmol) oppløses i

75 ml EtOAc, fortynnes med 75 ml ethanol og renses med N2-

Vask Raney-nikkel (~40 g) tre ganger med ethanol og overfør til reaksjonskolben. Den resulterende blanding hydrogeneres på en Parr-ryster ved 4,2 kg/cm 2 inntil TLC (30 % EtOAc/hexaner) indikerer forbruk av utgangsmateriale (<2h). Blandingen filtreres gjennom celitt under et teppe av N2. Filterkaken vaskes med 50 % EtOAc/ethanol og filtratet konsentreres for å gi 21,6 g (97 %) av et fast stoff. NMR (400 MHz, CDC13): 7>50 (2H, d, J=8,0 Hz), 7,30 (5H, m), 6,66 (2H, d, J=8,6 Hz), 4,03 (4H, m). Trinn 3; Produktet fra trinn 2 (8,49 g, 35,2 mmol) og 4-(benzyloxy)benzaldehyd (7,47 g, 35,2 mmol) oppløses i 150 ml varm isopropanol. Blandingen oppvarmes til tilbakeløp og isopropanolen får unnslippe inntil det er oppnådd et volum på 75 ml. Den resulterende løsning fortynnes med 200 ml hexaner og får stå over natten. De resulterende krystaller oppsamles, vaskes med hexaner og tørkes under vakuum for å gi 14,4 g

(95 %) av hvite krystaller. NMR (400 MHz, CDC13):

8,36 (1H, s), 7,54 (4H, m), 7,37 (8H, m), 7,08 (2H, m),

5,15 (2H, s) , 4,08 (4H, s) . MS (Cl) 436 (M+H, 78), 358(39),

149 (100).

Trinn 4: 5-fenylvalerylklorid (10,7 ml, 53,1 mmol) tilsettes til en løsning av produktet fra trinn 3 (15,4 g, 35,4 mmol)

og n-tributylamin (25,3 ml, 106,3 mmol) i 350 ml toluen,

og blandingen tilbakeløpsbehandles over

natten. Blandingen avkjøles til romtemperatur, tilsettes IMHC1, fortynnes med EtOAc, vaskes med IM HC1, NaHC03(mettet), vann og saltvann, tørkes over vannfritt Na2SO^og konsentreres på tilstrekkelig silicagel slik at det oppnås et frittstrøm-mende pulver. Pulveret påføres på en kromatografikolonne forhåndspakket med 20 % EtOAc/hexaner og elueres med det samme løsningsmiddel for å oppnå 14 g av et fast stoff. Det omkry-stalliseres fra EtOAc/hexaner for å oppnå 8,54 g (40 %) av hvite krystaller. NMR (400 MHz, CDC13): 7,30 (21H, m), 6,94 (2H, d, J=8,6 Hz), 5,03 (2H, s), 4,54 (1H,

d, J=2,4 Hz), 4,01 (4H, s), 3,07 (1H, s), 2,63 (2H, t, J=7,0 Hz), 1,92 (1H, m), 1,81 (3H, m).

Trinn 5: 6N HC1 (30 ml) tilsettes til en løsning av produktet fra trinn 4 (4,4 g, 7,4 mmol) i 120 ml THF. Etter 7 timer fortynnes det med EtOAc, vaskes med NaHC03(mettet) og saltvann, tørkes over vannfritt Na2S04og konsentreres for å gi 4,11 g (100 %) av et hvitt glass. NMR (400 MHz, CDC13): 7,72 (4H, m), 7,55 (1H, m), 7,40 (8H, m), 7,27 (3H, m), 7,18 (3H, m), 6,98 (2H, d, J=8,8 Hz), 5,05 (2H, s), 4,65 (1H, d,J=2,44 Hz), 3,16 (1H, m), 2,65 (2H, t, 7,6 Hz), 1,98 (1H, m), 1,85 (3H, m). HRMS(FAB) beregnet for M+H, C3gH34N03: 552,2539, funnet 552,2541.

Trinn 6: Bortriklorid-dimethylsulfid (14 ml, 28,3 mmol, 2M

i CH2CI2) tilsettes ved romtemperatur til en løsning av produktet fra trinn 5 (1,56 g, 2,83 mmol) i 30 ml CH2C12. NårTLC (20 % EtOAc/hexan) indikerer forbruk av startmateriale, stanses reaksjonen ved tilsetning av NaHC03(mettet).

Den resulterende blanding fortynnes med EtOAc, vaskes med NaHCO^(mettet) og saltløsning, tørkes over vannfritt Na2S04

og konsentreres med tilstrekkelig silicagel slik at det oppnås et frittstrømmende pulver. Pulveret påføres på en kromatografikolonne forhåndspakket med 33 % EtOAc/hexaner og elueres med det samme løsningsmiddel for å oppnå 1,02 g (78 %) av et hvitt glass. NMR (400 MHz, CDC13): 7,73 (4H, m) , 7,56 (1H, t, 7,6 Hz), 7,45 (2H, t, J=7,6 Hz),

7,34 (2H, d, J=8,6 Hz), 7,28 (3H, ra) , 7,2 (2H, m) , 7,16 (2H,

d, J=7,3 Hz), 6,85 (2H, d, J=8,3 Hz), 4,65 (1H, d, J=2,4 Hz), 3,15 (1H, m) , 2,65 (2H, t, J=7,6 Hz), 1,98 (1H, m) , 1,85 (3H, m) .

Trinn 7; Eddiksyreanhydrid (0,43 ml, 4,51 mmol) tilsettes ved romtemperatur til en løsning av produktet fra trinn 6 (1,61 g, 3,75 mmol) og N,N-dimethylaminopyridin (0,69 g, 5,64 mmol) i 20 ml CH2C12. Når TLC (30 % EtOAc/hexaner) indikerer forbruk av utgangsmateriale, fortynnes det med EtOAc, vaskes med IM HC1, vann og saltvann, tørkes over vannfritt Na^O^og konsentreres på tilstrekkelig silicagel slik at det oppnås fritt-strømmende pulver. Det påføres på en kromatografikolonne forhåndspakket med 30 % EtOAc/hexaner og elueres med det samme løsningsmiddel for å oppnå 1,64 g (78 %) av et hvitt glass. Chiral preparativ HPLC (Chiracel OD-kolonne, 20 % EtOH/hexaner, 65 ml/min) ga 0,55 g av enantiomerer A og 0,93 g av enantiomer B. NMR (400 MHz, CDC13): 7,73 (4H, m) , 7,56 (1H, t, J=7,2 Hz), 7,46 (2H, t, J=7,7 Hz), 7,32 (6H, m) , 7,19 (3H, m) , 7,12 (2H, d, J=8,4 Hz), 4,70 (1H,

d, J=2,44 Hz), 3,17 (1H, m), 2,67 (2H, t, J=7,6 Hz), 2,31 (3H, s) , 1,97 (1H, m), 1,86 (3H, m) , MS(C1) 504 (M+H, 100), 224

(100). Analytisk HPLC (Chiracel OD, 20 % EtOH/hexaner, 1,0 ml/min) enantiomer A, Rt=16,83 min, enantiomer B, Rt=23,83 min.

Trinn 8: LiOH (0,098 g, 2,35 mmol) oppløses i 2,5 ml vann og tilsettes til en .løsning av produktet fra trinn 7, enantiomer B (0,91 g, 1,8 mmol) i 7,5 ml THF. Det omrøres over natten inntil TLC (30 % EtOAc/hexaner) indikerer forbruk av utgangsmaterialer. Reaksjonen stanses med IM HC1, fortynnes: med EtOAc, vaskes med IM HC1, vann og saltvann, tørkes over vann fritt Na2S04og konsentreres på tilstrekkelig silicagel slik at det oppnås et frittstrømmende pulver. Pulveret påføres på en kromatografikolonne forhåndspakket med 30 % EtOAc/hexaner og elueres med det samme løsningsmiddel for å oppnå 0,36 g (46 %)

av et hvitt glass. Analytisk HPLC (Chiracel AS, 20 % EtOH/ hexaner, 0,5 ml/min), Rt=26,81 min. NMR

(400 MHz, CDC13) : 7,77 (4H, m) , 7,56 (1H, t, J=7,6 Hz), 7,45 (2H,t, J=7,6 Hz), 7,34 (2H, d, J=8,6 Hz), 7,28 (2H, m) , 7,21 (3H,m), 7,16 (2H, d, J=7 Hz), 6,85 (2H, d, J=8,4 Hz), 4,65

(1H, d, J=2,4 Hz), 3,15 (1H, m) , 2,65 (2H, t, J=7,4 Hz), 1,98 (1H, m), 1,85 (3H, m).

Fremstilling B

Methyl-( 2, 3, 4- tri- O- acetyl- D- glukopyranosyl) uronat- 1- ( 2, 2, 2-trikloracetimidat)

Cs2C03(0,49 g, 1,5 mmol) tilsettes ved romtemperatur til en løsning av methyl-2,3,4-tri-O-acetyl-D-glukopyranuronat (5,0 g, 15 mmol) og trikloracetonitril (3,75 ml, 37,4 mmol) i

48 ml CH2C12og omrøres over natten. Den resulterende brune løsning filtreres gjennom en bomullsplugg, filtratet vaskes med vann, tørkes over vannfritt Na2S04og konsentreres. Resten oppløses i EtOAc og konsentreres på tilstrekkelig silicagel slik at det oppnås et frittstrømmende pulver. Det resulterende pulver påføres på en kromatografikolonne pakket med 30 % EtOAc/ hexaner. Det elueres med det samme løsningsmiddel og bare de reneste fraksjoner taes slik at det oppnås 4,35 g (61 %) av tittelforbindelsen som et glass. NMR

(400 MHz, CDC13) : 8,74 (1H, s) , 6,65 (1H, d, J=3,7 Hz), 5,64 (1H, t, J=9,8Hz), 5,27 (1H, t, J=9,5 Hz), 5,15 (1H, dd, J=3,6, 10 Hz), 4,50 (1H, d, J=10,l Hz), 3,76 (3H, s), 2,06 (6H, s), 2,02 (3H, s) .

På lignende måte fremstilles:

Fremstilling B2

2, 3, 6- tri- 0- acetyl- 4- 0-( 2, 3, 4, 6- tetra- O- acetyl- B- D- glukopyranosyl) - ot- D- glukopyranosyl- l- ( 2, 2 , 2- trikloracetimidat)

NMR (400 MHz, CDC13): 8,66 (1H, s), 6,49 (1H, d, J=3,7 Hz),

5,53 (1H, t, J=10 Hz), 5,12 (3H, m) , 4,94 (1H, t, J=8,2 Hz), 4,53 (2H, m), 4,40 (1H, dd, J=4,2, 12,6 Hz), 4,12 (2H, m),

4,05 (1H, dd, J=2,l, 12,5 Hz), 3,85 (1H, t, J=9,4 Hz), 3,67

(1H, m), 2,12 (3H, s), 2,10 (3H, s), 2,05 (3H, s), 2,04 (3H, s), 2.02 (3H, s), 2,01 (3H, s), 2,00 (3H, s).

Fremstilling B3

2, 3, 4, 6- tetra- O- acetyl- a- D- glukopyranosyl- l-( 2, 2, 2- triklor-acetimidat)

NMR (400 MHz, CDC13): 8,70 (1H, s), 6,57 (1H, d,

J=3,8 Hz), 5,57 (1H, t, J=9,8 Hz), 5,19 (1H, t, J=9,8 Hz), 5,14 (1H, dd, J=3,7, 10,2 Hz), 4,29 (1H, dd, J=4, 12,2 Hz), 4,22

(1H, m), 4,13 (1H, m), 2,09 (3H, s), 2,06 (3H, s), 2,04 (3H, s), 2.03 (3H, s) . MS (elektrospray) : 509 (M+NH^).

Eksempel 1

l- 0-[ 4-[ trans-( 3R, 4S)- 1-( 4- fluorfenyl)-2-oxo-3-[3-[( S)- hydroxy-4- fluorfenyl) propyl3]- 4- azetidinyjf enyl]- beta- D- glukuronsyre Trinn 1: 2,3,4-tri-O-acetyl-l-O-[4-[trans-(3R,4S)-3-[3-[(S)-acetyloxy-3-(4-fluorfenyl)propyl-1-(4-fluorfenyl)-2-oxo-4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukopyranuronsyre-methylester

Bortrifluoridetherat (0,091 ml, 0,74 mmol) tilsettes til en -25° C løsning av produktet fra Fremstilling A (3,33 g, 7,38 mmol) og Fremstilling B (4,24 g, 8,86 mmol) i 74 ml CH2C12og reaksjonsblandingen holdes ved -20° C i 2 timer. Reaksjonen får varme seg opp til 10° C i løpet av 2 timer. Reaksjonen stanses med mettet NH^Cl, fortynnes med EtOAc, vaskes med mettet NH^Cl, vann og saltvann, tørkes over vannfritt Na2SO^ og konsentreres på tilstrekkelig silicagel slik at det oppnås et fritt-strømmende pulver. Det resulterende pulver påføres på en kromatografikolonne pakket med 40 % EtOAc/hexaner. Det elueres med det samme løsningsmiddel for å oppnå 5,39 g (95 %) som et skum. NMR (400 MHz, CDC13): 7,26 (4H, m), 7,21 (2H, m), 7,01 (4H, m), 6,93 (2H, t, J=8,4 Hz), 5,69 (1H, t, J=6,7 Hz), 5,34 (2H, m), 5,29 (1H, m) , 5,15 (1H, d, J=7,2 Hz), 4,56 (1H, d, J=2,l Hz), 4,17 (1H, m), 3,73 (3H, s), 3,02 (1H, dt, J=7,6, 2,3 Hz), 2,07 (14H, m), 1,85 (2H, m),

HRMS (FAB): beregnet for M+<H:><C>39<H>40NOi3F2'768/2468»funnet 768,2460.

Trinn 2: Produktet fra trinn 1 (5,08 g, 6,98 mmol) oppløses i en blanding av 127 ml CH30H og 127 ml triethylamin (Et^N) ved romtemperatur. 445 ml vann tilsettes langsomt via en tilset-ningstrakt i løpet av 10 minutter for å bibeholde en homogen løsning, den resulterende klare løsning omrøres over natten. Reaksjonen i en liten aliquot av reaksjonsblandingen stanses i et medisinglass inneholdende IM HC1 og EtOAc og forbruk av utgangsmateriale overvåkes ved TLC (5 % eddiksyre (HOAc)/20% CH3OH/75% CH2C12) i EtOAc-laget. CH3OH og Et3N fjernes på en rotasjonsfordamper, den gjenværende løsning surgjøres med IM HC1, fortynnes med EtOAc og ekstraheres med EtOAc. Ekstraktene kombineres, vaskes med IM HC1, vann og saltvann, tørkes over vannfritt Na2S04og konsentreres til et hvitt fast stoff 3,82 g (93 %). Faststoffet oppløses i CH2C12og konsentreres på tilstrekkelig silicagel slik at det oppnås et frittstrømmende pulver. Det resulterende pulver påføres på en kromatografikolonne pakket med silicagel og 15 % CH30H/CH2C12. Det elueres med 5 % HOAc/15% CH3OH/80% CH2C12. De fraksjoner som inneholder tittelforbindelsen konsentreres, azeotrop behandles først med toluen (3X) og så CH-jOH (5X) . Det resulterende faststoff oppvarmes til ca. 60 C under vakuum for å fjerne eventuelt gjenværende løsningsmiddel og tittelforbindelsen oppnås som et hvitt faststoff 2,6 g (64 %). NMR (400 MHz, CD3OD): 7,29 (6H, m), 7,09 (1H, d, J=8,6 Hz), 6,70 (4H, m), 4,96 (lH,m), 4,80 (1H, d, J=2,0 Hz), 4,59 (1H, m), 3,97 (1H, d, J=9,6 Hz), 3,59 (1H, m), 3,49 (2H, m), 3,09 (1H, m), 1,86 (4H, m).

HRMS (FAB): beregnet for<M+H:><C>3<0>H3QNO9F2, 586,1889.

Funnet 586,1883.

Eksempel IA

l- 0-[ 4-[ trans-( 3R, 4S)- 1-( 4- jodfenyl)- 2- oxo- 3-[ 3-[( S)- hydroxy- 4-fluorfenyl) propylj]- 4- azetidinyl] fenyl]- beta- D- glukuronsyre

1-(4-jodfenyl)-3(R)-[3(S)-acetyloxy-3-(4-fluorfenyl)-propyl)]-4(S)-(4-hydroxyoxyfenyl)-2-azetidinon og produktet

fra Fremstilling B behandles i overenssemmelse med den fremgangsmåte som er beskrevet i Eksempel 1 for å oppnå tittelforbindelsen. Sm.p. 135-137° C; FAB MS beregnet for C3Q<H>29<F>IN09NaCl m/z = 751,05, funnet m/z = 751,2.

Eksempel 2

1- 0-[ 4-[ trans-( 3R, 4S)- 1-( 4- fluorfenyl)-2-oxo-3- C3-[( S)- hydroxy-4- fluorfenyl) propyl]]- 4- azetidinyl] fenyl]- 3- 0-( beta- D- glukopyranosyl)- beta- D- glukopyranose

Trinn 1: 2,3,6-tri-0-acetyl-4-0-(2,3,4, 6-tetra-0-acetyl-B-D-glukopyranosyl)-1-0-[4-[trans-(3R,4S)-3-[3(S)-acetyloxy-3-(4-fluorfenyl)-propyl-1-(4-fluorfenyl)-2-oxo-4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukopyran

Ved å anvende en fremgangsmåte som er lik den som er beskrevet i eksempel 1, trinn 1, kombineres produktet av Fremstilling A og Fremstilling B2 for å oppnå tittelforbindelsen i trinn 1. NMR (400 MHz, CDC13): 7,23 (6H, m), 6,97 (6H, m), 5,69 (1H, t, 6,6 Hz), 5,26 (1H, t, J=9,l Hz), 5,11 (4H, m) , 4,95 (1H, t, J=8,2 Hz), 4,54 (3H, m), 4,39 (1H, dd, J=4,3, 12,5 Hz), 4,06 (2H, m), 3,87 (1H, t, J= 9,5Hz), 3,75 (1H, m), 3,68 (1H, m), 3,02 (1H, dt, J=2,l, 7,6 Hz), 2,05 (26H, m) , 1,85 (2H, m) . HRMS (FAB): beregnet for M+Na:<C>52<H>57N021F2Na'1092f3289rfunnet 1092,3308.

Trinn 2: Ved å anvende en fremgangsmåte som er lik den som er beskrevet i eksempel 1, trinn 2, behandles produktet fra trinn 1 ovenfor for å oppnå tittelforbindelsen i eksempel 2.

NMR (400 MHz, CD30D): 7,29 (6H, m) , 7,10 (2H, d, J=8,7 Hz),

7,01 (4H, m), 4,96 (1H, under CD30D), 4,81 (1H, d, J=2,2Hz), 4,60 (1H, m), 4,43 (1H, d, J=7,9 Hz), 3,88 (3H, m), 3,62 (4H, m) , 3,51 (1H, d, J=8,9 Hz), 3,34 (2H, m), 3,24 (1H, t, J=8,8 Hz), 3,08 (1H, m), 1,88 (7H, m). MS (FAB): 756 (M+Na, 70),

734 (M+, 100), 716 (716,20).

Eksempel 3

1- 0- f 4- f trans-( 3R, 4S)- 3-[ 3( S)- hydroxy- 3-( 4- fluorfenyl) propvl- 1-( 4- fluorfenyl)- 2- oxo- 4- azetidinyl] fenyl]- beta- D- glukopyranose Trinn 1: 2,3,4,5-tetra-0-acetyl-l-0-[4-[trans-(3R,4S)-3-[3(S)-acetyloxy-3-(4-fluorfenyl)propyl-1-(4-fluorfenyl)-2-oxo-4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukopyran

Ved å anvende en fremgangsmåte som er lik den som er beskrevet i eksempel 1, trinn 1, kombineres produktet av Fremstilling A og Fremstilling B3 for å oppnå tittelforbindelsen

i trinn 1. NMR (400 MHz, CDC13):

7,26 (4H, m), 7,20 (2H, m), 7,01 (4H, m), 6,93 (2H, t, J=8,5 Hz), 5,69 (1H, t, J=6,5 Hz), 5,29 (2H, m), 5,18 (1H, t, J=9,7 Hz), 5,09 (1H, d, J=7,3 Hz), 4,56 (1H, d, J=2,2 Hz), 4,29 (1H, dd, J=5,2, 12,2 Hz), 4,17 (1H, dd, J=2,2 Hz, 12,2 Hz), 3,85 (1H, m), 3,03 (1H, dt, J=2,l, 7,5 Hz), 2,06 (17H, m), 1,85 (2H, m).

HRMS (FAB): beregnet forM+<Na:><C4>QH41N013F2Na, 804,2444,

funnet 804,2432.

Trinn 2: Ved å anvende en fremgangsmåte som den som er beskrevet i Eksempel 1, trinn 2, behandles produktet fra trinn 1 ovenfor, for å oppnå tittelforbindelsen i Eksempel 3. NMR (400 MHz, CD3OD): 7,29 (6H,m), 7,11 (2H, d, J=8,8 Hz), 6,98 (4H, m), 4,89 (1H, under CD3OD), 4,80 (1H, d, J=2,2 Hz), 4,60 (1H, m), 3,88 (1H,

dd, J=2,0, 12,0 Hz), 3,68 (1H, dd, J=5,4, 12,0 Hz), 3,41 (3H,

m), 3,08 (1H, m), 1,86 (4H, m), MS (FAB): 572 (M+H, 40), 392(100).

Eksempel 4

l- O-[ 4-[ trans-( 3R, 4S)- 1-( 4- fluorfenyl) -2-oxo-3-[ 3-[ ( S)- hydroxy-4- fluorfenyl) propyl]]- 4- azetidinyl] fenyl]- beta- D- qlukuronsyre-methylester

KCN (0,028 g, 0,43 mmol) tilsettes til en løsning av produktet fra Eksempel 1, trinn 1, i 5 ml

CH3OH (0,312 g, 0,43 mmol) og omrøres over natten ved romtemperatur. Det overvåkes med TLC (10 % CH30H/CH2C12) , og blandingen oppvarmes til 40° C i 2,5 timer. Blandingen avkjøles ved romtemperatur, konsentreres på tilstrekkelig silicagel slik at det oppnås et frittstrømmende pulver. Det resulterende pulver påføres på en kromatografikolonne pakket med silicagel og 5 % CH30H/CH2C12. Det elueres med 5 % CH30H/CH2C12 og de reneste fraksjoner oppsamles for å oppnå 0,116 g av tittelforbindelsen. NMR (400 MHz, CDC13/CD30D): 7,16 (6H, m), 6,95 (4H, m), 6,86 (2H, t, J=8,6 Hz), 4,83 (1H,

d, J=7,6 Hz), 4,56 (1H, t, J=6,3 Hz), 4,55 (1H, d, J=2,l Hz), 3,90 (1H, d, J=9,8 Hz), 3,73 (3H, s), 3,67 (1H, t, J=9,l Hz), 3,51 (1H, m), 3,46 (1H, t, J=9,2 Hz), 3,30 (1H, s), 2,98 (1H,

m), 1,80 (4H, m). HRMS (FAB): beregnet for M+H: C31<H>32<N>09F2, 600,2045, funnet 600,2049.

Eksempel 5

l- 0-[ 4-[ trans-( 3R, 4S) - 1- ( 4- methoxyfenyl) -2-oxo-3- ( 3- fenyl) - propyl]- 4- azetidinyl] fenyl]- beta- D- glukuronsyre- methylester Trinn 1: 2 , 3,4-tri-0-acetyl-l-0-[4-[trans-(3R,4S)-3-[3-[(S)-acetyloxy-3- (4-fluorfenyl)propyl-1-(4-methoxyfenyl)-2-oxo-4-azetidiny1]fenyl]-beta-D-glukopyranuronsyre-methylester

Trifenylfosfin (0,19 g, 0,72 mmol) tilsettes til en løsning ved 0° C av 1,1'-(azodicarbonyl)dipiperidin (0,18 g, 0,72 mmol) i 3 ml THF. Etter 10 minutter tilsettes (3R,4S)-4-(4-hydroxyfenyl)-1-(4-methoxyfenyl) -3-(3-fenylpropyl)-2-azetidinon (0,2 g, 0,52 mmol), etterfulgt av methyl-2,3,4-tri-O-acetyl-D-glukopyranuronat (0,21 g, 0,62 mmol). Blandingen får varmes opp til romtemperatur over natten. Blandingen konsentreres på tilstrekkelig silicagel slik at det oppnås et fritt-strømmende pulver. Det resulterende pulver påføres en kroma-tograf ikolonne pakket med silicagel og 30 % EtOAc/hexaner.

Det elueres med 30 - 50 % EtOAc/hexaner for å oppnå 0,198 g materiale som renses ytterligere ved silicagelkromatografi og eluering med 20 % CH30H/CH2C12for å gi 0,074 g av tittelforbindelsen fra trinn 1. NMR (400 MHz, CDC13) : 7,27 (4H, m) , 7,17 (5H, m) , 6,98 (2H, J=8,5 Hz), 6,77 (2H, m) , 5,30 (3H, m) , 5,13 (1H, d, J=7,3 Hz), 4,56 (1H, d, J=l,9 Hz), 4,17 (1H, m) , 3,74 (3H, s) , 3,73 (3H, s), 3,04 (1H, m) , 2,64 (2H, t, J=7,6 Hz), 2,05 (9H, m) , 1,97 (1H, m), 1,82 (3H, m). HRMS (FAB): beregnet, f or. M+H: C38H42N012704'2707'funnet 704,2696.

Trinn 2: Ved å anvende en fremgangsmåte som er lik den i Eksempel 4, behandles produktet fra trinn 1 for å oppnå tittelforbindelsen. NMR (400 MHz, CDC13): 7,27 (4H, m) , 7,17 (5H, m), 7,04 (2H, J=8,6 Hz), 6,75 (2H, J=9,l Hz), 4,90 (1H, d, J=7,0 Hz), 4,55 (1H, d, J=l,8 Hz), 3,98 (1H, d, J=9,7 Hz), 3,88 (1H, t, J=8,6 Hz), 3,76 (8H, m) , 3,03 (1H, m) , 2,63 (2H, t, J=6,7Hz), 1,95 (1H, m) , 1,81 (3fy.ni). HRMS (FAB): beregn, for M+H: C^H^NOg, 578,2390, funnet 578,2379.

Eksempel 6

1- 0-[ 4-[ trans-( 3R, 4S)- 1-( 4-( benzoyl) fenyl)- 2- oxo- 3-( 3- fenyl)-propyl]- 4- azetidinyl] fenyl]- beta- D- glukuronsyre- methylester Trinn 1: 2,3,4-tri-O-acetyl-l-O-[4-[trans-(3R,4S)-1-(4-benzoyl)-fenyl)-2-oxo-3-(3-fenyl)propyl] -4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukuronsyre-methy le ster

På lignende måte som i Eksempel 5, trinn 1, behandles (3R, 4S)-1-(4-benzoylfenyl)-4-(4-hydroxyfenyl)-3-(3-fenylpropyl)-2- azetidinon og methyl-2,3,4-tri-0-acetyl-D-glukopyranuronat for å oppnå tittelforbindelsen fra trinn 1. NMR (400 MHz, CDC13): 7,73 (4H, m), 7,57 (1H, t, J=7,0 Hz), 7,46 (2H, t, J=8,0 Hz), 7,30 (6H, m), 7,21 (1H, d, J=7,l Hz), 7,16 (2H, d, J=8,0 Hz), 7,01 (2H, d, J=8,5 Hz), 5,31 (3H, m), 5,15 (1H, d, J=7,3 Hz), 4,67 (1H, d, J=2,2 Hz), 4,17 (1H, dd, J=2,7, 6,7 Hz), 3,73

(3H, s), 3,14 (1H, m), 2,66 (2H, t, J=7,4 Hz), 2,06 (9H, m), 1,98 (1H, m), 1,85 (3H, m). HRMS (FAB): beregnet for M+H:<C>44<H>44N012'778/2864/funnet 778,2849.

Trinn 2: Ved å anvende en fremgangsmåte som er lik den i Eksempel 4 behandles produktet fra trinn 1 for å oppnå tittelforbindelsen. NMR (400 MHz, CDC13): 7,72 (2H, overlapping d, J=8,6, 7,6 Hz), 7,56 (1H, t, J=7,6 Hz), 7,45 (2H, t, J=7,7 Hz), 7,30 (6H, m), 7,20 (1H, d, J=7,0 Hz), 7,16 (2H, d, J=7,6 Hz), 7,08 (2H, d, J=8,6 Hz), 4,93 (1H, d, J=7,0Hz), 4,67 (1H, dd, J=2,l Hz), 3,99 (1H, d, J=9,8 Hz),

3,88 (1H, t, J=8,6 Hz), 3,81 (3H, s), 3,73 (2H, m) , 3,14

(1H, m), 2,65 (2H, t, J=7,6 Hz), 1,98 (1H, m), 1,84 (3H, m). HRMS (FAB): beregnet forM+H: C38H3gN09, 652,2547, funnet 652,2528.

Eksempel 7

l- 0-[ 4-[ trans-( 3R, 4S)- 1-( 4- methoxyfenyl)- 2- oxo- 3- ( 3- fenylpropyl) - 4- azetidinyl] fenyl]- beta- D- glukopyranose

Trinn 1: 1-0-[4-[trans-(3R,4S) -1-(4-methoxyfenyl)-2-oxo-3-(3-fenylpropy1)-4-azetidinyl]fenyl]-2,3,4,6-tetra-O-(fenylmethyl)-beta-D-glukopyranose

n-tributylfosfin (1,45 ml, 5,81 mmol) tilsettes til

en 0° C løsning av 1,1<1->(azodicarbonyl)dipiperidin (1,47 g, 5,81 mmol) i 30 ml THF. Etter 5 minutter tilsettes (3R,4S)-4-(4-hydroxyfenyl)-1- (4-methoxy-fenyl)-3-(3-fenylpropyl)-2-azetidinon (1,5 g, 3,87 mmol), etterfulgt av 2,3,4,6-tetra-O-benzyl-D-glukopyranose (2,72 g, 5,03 mmol). Reaksjonsblandingen blir meget tykk og ytterligere 30 ml THF tilsettes for å lette omrøringen. Blandingen får varme seg opp til romtemperatur over natten. Blandingen filtreres gjennom celitt, filterkaken vaskes med EtOAc og filtratet konsentreres på nok silicagel slik at det oppnås et f rittstrømmende pulver. Det resulterende pulver påføres på en kromatografikolonne med silicagel og 5 % EtOAc/ toluen. Det elueres med det samme løsningsmiddel for å oppnå 3,57 g (-"'100 %) av tittelf orbindelsen fra trinn 1 som en tykk sirup. NMR (400 MHz, CDC13) : 7,16 (19H, m) , 7,19 (10H, m), 7,04 (2H, d, J=8,7 Hz), 6,76 (2H, d, J=9,2 Hz), 4,98 (3H, m), 4,83 (3H, rn), 4,55 (4H, m), 3,70 (9H, m) , 3,05 (1H, m) , 2,65 (2H, t, J=7,3 Hz), 1,96 (1H, m) , 1,83 (3H, m), MS (FAB): 910(M+, 55), 568(40), 478(100), 386 (55) .

Trinn 2: Produktet fra trinn 1 (0,20 g, 0,35 mmol) oppløses i 4,5 ml CH^OH, fortynnes med 4,5 ml EtOAc og renses med nitrogen. Det tilsettes 20 % Pd(OH)2på 0,35 g carbon, den resulterende blanding renses med hydrogen (3X) og omrøres under en ballong med hydrogen over natten. Blandingen filtreres gjennom celitt og filterkaken vaskes med EtOAc etterfulgt av CH3OH. Filtratet konsentreres til et klart skum 0,161 g (83 % rått). Skummet renses ytterligere ved silicagelkromatografi og eluering med 5 % CH3OH/EtOAc for å oppnå 0,127 g (66 %) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver. NMR (400 MHz, CT>3OD) : 7,18 (11H, m), 6,78 (2H, d, J=8,9 Hz), 4,88 (1H, delvis skjult av CD3OD), 4,72 (1H, d, J=l,2 Hz), 3,88 (1H, d, J=ll,7Hz), 3,70 (4H, m), 3,41 (4H, m), 3,03 (1H, m), 2,60 (2H, t, J=7,0 Hz), 1,79 (4H, m) . HRMS (FAB): beregnet for M+H: C^H^NOg, 550,2441, funnet 500,2424. Eksempel 8 l- 0-[ 4-[ trans- ( 3R, 4S) - 1- ( 4- methoxyfenyl) -2-oxo-3- ( 3- fenylpropyl) - 4- azetidinyl] fenyl]- beta- D- glukuronsyre Trinn 1: 2,3,4-tri-0-benzyl-l-0-[4-[trans-(3R,4S)-1-(4-fluorfenyl) -2-oxo-3-[3-[(S)-hydroxy-4-fluorfenyl)propyl]]-4-azeti-dinyl]fenyl]-beta-D-glukuronsyre-benzylester (3 R, 4S) -4-(4-hydroxyfenyl)-1-(4-methoxy-fenyl)-3-(3-fenylpropyl)-2-azetidinon og benzyl-2,3,4-tri-O-benzyl-D-gluko-pyranuronat anvendes i en fremgangsmåte som er lik den som er beskrevet i Eksempel 7, trinn 1, for å oppnå tittelforbindelsen fra trinn 1. NMR (400 MHz, CDC13): 7,22 (29H, m), 7,01 (2H, d, J=8,7 Hz), 6,77 (2H, d, J=9,l Hz), 5,15 (2H, tilsynelatende d, J=3,8 Hz), 5,01 (1H, d, J=7,2 Hz), 4,97 (1H, d, J=ll Hz), 4,90 (1H, d, J=ll Hz), 4,80 (2H, d, J=ll Hz), 4,74 (1H, d, J=10,7 Hz), 4,56 (1H, d, J=2,2 Hz), 4,50 (1H, d, J=10,7 Hz), 4,04 (1H, d, J=9,6 Hz), 3,93 (1H, t, J=8,6 Hz), 3,73 (5H, m), 3,05 (1H, m), 2,65 (2H, t, J=7,6Hz), 1,96 (1H,

m), 1,83 (3H, m) . HRMS (FAB): beregnet for MH: C59H5gN09924,4112, funnet 924,4119.

Trinn 2: Ved å anvende en fremgangsmåte lignende den i Eksempel 7, trinn 2, behandles produktet fra trinn 1 for å oppnå tittelforbindelsen i Eksempel 8. NMR (400 MHz, CD3OD) ,

7,31 (2H, d, J=8,9 Hz), 7,21 (7H, m) , 7,09 (2H, d, J=8,7 Hz), 7,81 (2H, d, J=8,9 Hz), 4,97 (1H, dd, J=l,9, 5,5 Hz), 4,76 (1H, d,J=2,0 Hz), 3,97 (1H, d, J=9,7 Hz), 3,72 (3H, s) , 3,60 (1H, m), 3,49 (2H, m) , 3,08 (1H, m), 2,64 (2H, t, J=7,2 Hz), 1,83

(4H, m) . HRMS (FAB): beregnet forM+H: C^H^NOo, 564,2234, funnet 564,2242.

Eksempel 9

l- mehyl- 6- O-[ 4-[ trans- ( 3R, 4S) - 1- ( 4- methoxyfenyl) - 2- oxo- 3- ( 3-fenylpropyl)- 4- azetidinyl] fenyl]- alfa- D- glukopyranosid Trinn 1: l-methyl-2,3,4-tri-0-benzyl-6-0— [ 4-[ trans-(3R,4S)-1-(4-methoxyfenyl)-2-oxo-3-(3-fenylpropyl)-4-azetidinyl]fenyl]-alfa-D-glukopyranosid

(3R,4S)-4-(4-hydroxyfenyl)-1-(4-methoxy-fenyl)-3-(3-fenylpropyl)-2-azetidinon og methyl-2,3,4-tri-O-benzyl-D-gluko-

pyranosid anvendes i en fremgangsmåte lik den som er beskrevet i Eksempel 7, trinn 1, for å oppnå tittelforbindelsen fra trinn 1. NMR (400 MHz, CDC13): 7,26 (24H, m), 6,85 (2H, d, J=8,6 Hz), 6,74 (2H, d, J=9 Hz), 5,01 (1H, d, J=10,7 Hz), 4,86 (1H, d, J=11,0 Hz), 4,85 (1H, d, J=10,7 Hz), 4,82 (1H, d, J=12,l Hz), 4,69 (1H, d, J=12,l Hz), 4,63 (1H, d, J=3,6 Hz), 4,54 (1H, d, J=2,3 Hz), 4,51 (1H, d, J=11,0 Hz), 4,09 (2H, d, J=2,8 Hz), 4,03 (1H, t, J=9,6 Hz), 3,90 (1H, d, J=10,l Hz), 3,72 (3H, s), 3,60 (1H, dd, J=3,6, 9,6 Hz), 3,38 (3H, s), 3,06 (1H, m) , 2,64 (2H, t, J=7,6 Hz), 1,97 (1H, m), 1,83 (3H, m). Trinn 2; Ved å anvende en fremgangsmåte som er lik den i Eksempel 7, trinn 2, behandles produktet fra trinn 1 for å oppnå tittelforbindelsen i Eksempel 9. NMR (400 MHz, CDC13): 7,22 (9H, m) , 6,94 (2H, d, J=8,6 Hz), 6,76 (2H, d, J=8,9 Hz), 4.81 (1H, d, J=3,9 Hz), 4,54 (1H, d, J=2,2 Hz), 4,22 (2H, m) , 3,97 (1H, m), 3,71 (5H, m), 3,56 (1H, dd, J=3,9, 9,1 Hz), 3,44 (3H, s) , 3,06 (1H, m), 2,64 (2H, d, J=7,4 Hz), 1,91 (1H, m) , 1.82 (3H, m) . HRMS (FAB): beregnet for M+H: C32H38N08564,2597, funnet 564,2578. Eksempel 10 l- 0-[ 4-[ trans-( 3R, 4S)- 1-( 4- ( benzoyl) fenyl)- 2- oxo- 3-( 3- fenyl)-propyl]- 4- azetidinyl] fenyl]- beta- D- glukuronsyre LiOH (0,6 ml, 0,6 mmol, IM) tilsettes til en romtemperatur-løsning av produktet fra Eksempel 6 (0,064 g, 0,1 mmol) i 2 ml THF. Etter 50 minutter fortynnes blandingen med EtOAc, reaksjonen stanses med IM HC1, vaskes med IM HC1 og saltvann, tørkes over vannfritt Na2S04og konsentreres til et hvitt skum 0,60 g (97 %) . NMR (400 MHz, CT>3OD) : 7,67 (4H, m), 7,60 (1H, m), 7,48 (3H, m), 7,36 (2H, d, J=8,8 Hz), 7,34 (2H, d, J=8,8 Hz), 7,23 (2H, m), 7,14 (2H, d, J=7,5 Hz), 7,10 (2H, d, J=8,7 Hz), 4,97 (1H, m), 4,87 (1H, d, J=2,2 Hz), 3,97 (1H, d, J=9,7 Hz), 3,60 (1H, m) , 3,49 (2H, m), 3,17 (1H, m) , 2,63 (2H, t, J=7,4 Hz), 1,89 (1H, m) , 1,81 (3H, m) . HRMS (FAB): beregnet for M+<H:><C>37H36NOg 638,2390, funnet 638,2377.

Eksempel 11

l- 0-[ 4-[ trans-( 3R, 4S)- 1-( 4- fluorfenyl)-2-oxo-3-[3-[ ( S)- hydroxy-4- jodfenyl) propyl3]- 4- azetidinyl] fenyl]- beta- D- glukuronsyre Trinn 1: 1-(4-fluorfenyl)-3(R)-[3 (S)-acetyloxy-3- (4-brom-fenyl)propyl)3-4(S)-(4-hydroxyfenyl)-2-azetidinon og produktet fra Fremstilling B kondenseres med trifluoridetherat i overensstemmelse med den fremgangsmåte som er beskrevet i Eksempel 1. Til en løsning av det resulterende tetraacetat (250 mg, 0,30 mmol) i 2 ml CH3OH avkjølt til 0° C, tilsettes KCN (10 mg, 0,15 mmol) og omrøres ved romtemperatur i 2 timer, oppvarmes så til 45° Ci 4,5 timer. Blandingen avkjøles til romtemperatur og fordeles mellom 20 ml vann og 30 ml EtOAc. EtOAc-laget vaskes med vann og saltvann, tørkes (Na2SO^) og konsentreres i vakuum. Resten (230 mg) adsorberes på Si02og kromatograferes over 25 g Si02, elueres med 2 % CH3OH i CH2C12til 10 % CH-jOH i CH2C12

for etter konsentrasjon å gi 84 mg (43 %) av arylbromidet som et fast stoff.

Trinn 2: Til produktet fra trinn 1 (25 mg, 0,038 mmol) oppløst i 0,4 mlDMFtilsettes hexabutylditinn (220 mg, 38 mmol) og tetra-kistrifenylfosfinpalladium (4,4 mg, 0,0038 mmol) og blandingen oppvarmes til 95° C under argon i 5 timer. Reaksjonsblandingen avkjøles, konsentreres i vakuum og den resulterende rest absorberes direkte på Si02«Det kromatograferes over 4 g Si02, elueres med CH2C12som øker til 10 % CH30H i CH2C12. Den ønskede fraksjon rekromatograferes som ovenfor og etter konsentre-ring oppnås 7,4 mg (22 %) av det ønskede arylstannan som et voksaktig fast stoff.

Trinn 3; Til produktet fra trinn 2 (ll,8mg, 0,0135 mmol) oppløst i 2 ml CH30H inneholdende fosfatbuffer med pH 5,8

(0,3 ml), tilsettes en IM løsning av Nal i vann (14 ml, 0,014 mmol). Til denne blanding tilsettes 68 "iodobeads" H37 mmol) og den resulterende blanding rystes forsiktig i 1,5 timer ved romtemperatur. "Iodobeads" filtreres og vaskes med EtOH og en liten mengde ether. Filtratet konsentreres og resten fordeles mellom EtOAc og 10 % vandig Na2S03, EtOAc-laget tørkes

(MgSO^) og konsentreres i vakuum. Resten adsorberes på Si02

og kromatograferes over 2 g SiC^, elueres med CI^C^ som øker til 6 % CH^OH i CH2CI2. De passende fraksjoner konsentreres for å oppnå 6,1 mg (64 %) av methylesteren av tittelforbindelsen som et fast stoff.

Trinn 4: En løsning av produktet fra trinn 3 (6,1 mg, 8,6 mmol) i en blanding av 0,7 ml vann, 0,2 ml triethylamin og 0,1 ml CH^OH omrøres ved romtemperatur i 30 minutter. Blandingen konsentreres i vakuum for å gi 5 mg (83 %) av tittelforbindelsen som et fast stoff. Sm.p. 157 - 159° C, FAB MS beregnet for C30H30FINO9 m^ z = 694'1'funnet m/z = 694,1.

De følgende blandinger eksemplifiserer noen av dose-ringsformene ifølge oppfinnelsen. I hver av dem betegner "aktiv forbindelse" en forbindelse med formel I.

Eksempel A - Tabletter

Fremstillingsfremgangsmåte

Bland partikler nr. 1 og 2 i en passende blander i

10 - 15 minutter. Blandingen granuleres med partikkel nr. 3. De fuktige granuler males gjennom en grov sikt (f.eks. 0,63 cm) om nødvendig. De fuktige granuler tørkes. De tørkede granuler siktes om nødvendig og blandes med partikkel nr. 4 og blandes i 10 - 15 minutter. Tilsett partikkel nr. 5 og bland i 1 - 3 minutter. Blandingen komprimeres til passende størrelse og vekt på en passende tablettmaskin. Eksempel B - kapsler

Fremstillingsfremgangsmåte

Partikler nr. 1, 2 og 3 blandes i en passende blande-maskin i 10 - 15 minutter. Partikkel nr. 4 tilsettes og blandes i 1 - 3 minutter. Blandingen fylles i egnede to-delte hårde gelatinkapsler på en passende innkapslingsmaskin.

Representative blandinger omfattende en kolesterolbiosynteseinhibitor er godt kjente på fagområdet. Det antas at der de to aktive ingredienser administreres som et enkelt preparat, kan de doseringsformer som er beskrevet ovenfor for substituerte azetidinonforbindelser, lett modifiseres under anvendelse av fagmannens kunnskaper.

In vivo-aktiviteten for forbindelsene med formel I

kan bestemmes ved hjelp av følgende fremgangsmåte.

In vivo- analyse av hypolipidemiske midler under anvendelse av hyperlipidemiske hamstere

Hamstere skilles i grupper på seks og gis en kontrol-lert kolesteroldiett (Purina Chow#5001 inneholdende 0,5 % kolesterol) i 7 dager. Diettkonsumpsjonen overvåkes for å bestemme diettkolesteroleksponering i nærvær av testforbindelser. Dyrene doseres med testforbindelsen én gang daglig med begynnel-se ved starten av dietten. Dosering foregår oralt med 0,2 ml maisolje alene (kontrollgruppe) eller løsning (eller suspensjon) av testforbindelsen i maisolje. Alle døende dyr eller dyr i dårlig fysisk tilstand drepes. Etter 7 dager anestetiseres dyrene ved IM-injeksjon av ketamin og drepes ved hodekapping. Blod oppsamles i "Vacutainer"-rør inneholdende EDTA for total plasmakolesterol- og triglyceridanalyse og leveren skjæres ut for fri og forestret kolesterol- og triglyceridvevanalyse.

Data oppgis som prosent reduksjon av plasma-kolesterol- og leverkolesterolestere i forhold til kontrollnivåer.

Ved å anvende de testfremgangsmåter som er beskrevet ovenfor, ble følgende in vivo-data oppnådd for forbindelser med formel I. Data er angitt som prosent forandring (dvs. prosent reduksjon i plasmakolesterol- og i leverkolesterolestere) i forhold til kontrollen, og derfor indikerer negative tall en positiv kolesterolsenkende effekt. For racemiske forbindelser med formel I eller aktive diastereomerer eller enantiomerer av forbindelser med formel I, viser forbindelser administrert i doser på 3 til 10 mg/kg. et område på 0 til -98 % reduksjon i leverkolesterolestere, mens forbindelser administrert i doser på 0,01 til 1 mg/kg viser et område på -19 til -94 % reduksjon i leverkolesterolestere. Forbindelser viser fortrinnsvis et område på -50 til -98 % reduksjon i leverkolesterolestere i et doserings område på 0,01 til 1 mg/kg.

Den etterfølgende tabell viser aktiviteten av forbindelser som også er angitt som mellomprodukter. I den etter-følgende tabell er CE kolesterolestere, og SC er serumkolesterol.

Claims

1. Forbindelse, karakterisert vedstrukturformelen

R, Ra ogR<b>uavhengig er valgt fra gruppen bestående av H, -OH eller -0-C (0) - (Cx-C6) alkyl, R<2>ogR<6>uavhengig er valgt fra gruppen bestående av H, (C^-Cg) - alkyl eller benzyl, R<3>,R<4>,R<5>, R<7>,R3aogR4<a>uavhengig er valgt fra gruppen bestående av H, (Ci-C6) alkyl, benzyl og acetyl, Ar<1>er fenyl eller R<10->substituert fenyl, Ar<2>er fenyl eller R<11->substituert fenyl, Q er en binding, og R<1>er valgt fra gruppen bestående av -(CH2)q-, hvor g er 2-6, som eventuelt er substituert med OH, eller Ci-Cg-alkyl substituert med acetyloksy, R<10>er valgt fra gruppen bestående av 1-3 subst ituenter som uavhengig er valgt fra gruppen bestående av halogen eller C1-C6-alkoksy, og R11 er valgt fra 1-3 substituenter som er valgt fra gruppen bestående av halogen, Cx-C6-alkoksy eller benzoyl.

2. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat G er valgt fra gruppen bestående av

hvor R<2>, R<3>, R<4>, R5,R6og R<7>er som definert i krav l.

3. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat den er valgt fra gruppen bestående av 2,3,4-tri-O-acetyl-l-0-[4-[trans-(3R,4S) - 3- 0 3-[ (S)-acetyloxy-3- (4-fluorfenyl)propyl-1-(4-fluorfenyl) -2-oxo-4-azetidinyl] fenyl] -be ta-D-glukopyranuronsyre-methy les ter,

1-O-0 4-[trans-(3R,4S) -1- (4-f luorfenyl) -2-oxo-3-[ 3-[ (S) -hydroxy-4- f luorfenyl) propyl] ]-4-azetidinyl] fenyl]-beta-D-glukuronsyre, 1-0-[4-[trans-(3R,4S)-1-(4-jodfenyl)-2-oxo-3-[3-[(S) -hydroxy-4-f luorfenyl) propyl ] ] -4-azetidinyl ] fenyl ]-beta-D-glukuronsyre, 2,3, 6-tri-O-acety 1-4-0- (2 ,3 ,4 ,6-tetra-O-acetyl-B-D-glukopyranosyl) -1-0-[4-[ trans- (3R,4S) — 3-[3 (S) -acetyloxy-3-(4-f luorfenyl) - propyl-1-(4-fluorfenyl)-2-oxo-4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukopyran,

1-O-0 4-t trans- (3R, 4S) -1- (4-f luorfenyl) -2-oxo-3-[ 3-[ (S) -hydroxy-4-f luorfenyl) propyl] ]-4-azetidinyl] f enyl]-3-0- (béta-rD-glukopyranosyl)-beta-D-glukopyranose, 2,3,4,5-tetra-0-acetyl-l-O-[4-[trans-(3R,4S)-3-[3(S)-acetyloxy-3- (4-fluorfenyl)propyl-1- (4-fluorfenyl)-2-oxo-4-azetidinyl]-fenyl]^beta-D-glukopyran, 1-0-[4-[ trans-(3R,4S) -3-[3 (S) -hydroxy-3-(4-f luorfenyl) propyl-1- (4-f luorfenyl) -2-oxo-4-azetidinyl] f enyl]-beta-D-glukopyranose, l-0-[4-[trans-(3R,4S)-1-(4-fluorfenyl)-2-oxo-3-[3-[(S)-hydroxy-4- f luorfenyl) propyl] ] -4-azetidinyl] fenyl] -beta-D-glukuronsyre-methylester, 1-0-t 4-[trans-(3R,4S)-1-(4-methoxyfenyl)-2-oxo-3-(3-fenyl) - propyl ] -4-azetidinyl ] fenyl ] -beta-D-glukuronsyre-methylester, l-0-[4-[trans-(3R,4S)-1- (4- (benzoyl)fenyl)-2-oxo-3-(3-fenyl)-propyl ] -4-azetidinyl ] fenyl ] -beta-D-glukuronsyre-methylester, 1-0-[4-[trans-(3R,4S)-1- (4-methoxyfenyl)-2-oxo-3-(3-fenylpropyl) -4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukopyranose, 1-0-[4-[trans-(3R,4S(-1-(4-methoxyfenyl)-2-oxo-3-(3-fenylpropyl) -4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukuronsyre, l-methyl-6-0-[4-[trans- (3R,4S)-1-(4-methoxyfenyl)-2-oxo-3-(3-fenylpropyl) -4-azetidinyl] fenyl]-alfa-D-glukopyranosid, l-0-[4-[trans-(3R,4S)-1- (4- (benzoyl)fenyl)-2-oxo-3-(3-fenyl)-propyl]-4-azetidinyl] fenyl]-beta-D-glukuronsyre og l-0-[4-[trans-(3R,4S)-l- (4-f luorfenyl)-2-oxo-3-[3-[(S)-hydroxy-4-jodfenyl)propyl]]-4-azetidinyl]fenyl]-beta-D-glukuronsyre.

4. Farmasøytisk preparat for behandling eller forebyggelse av arteriosklerose eller for reduksjonen av kolesterolnivåer, karakterisert vedat det omfatter en forbindelse som definert i et hvilket som helst av kravene 1-3, alene eller i kombinasjon med en kolesterolbiosynteseinhibitor og en farmasøytisk akseptabel bærer.

5. Fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat som definert i krav 4, karakterisert vedat en forbindelse som er krevet i et hvilket som helst av kravene 1-3, sammenblandes alene eller i kombinasjon med en kolesterolbiosynteseinhibitor, med en farmasøytisk akseptabel bærer.

6. Anvendelse av en forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1-3, alene eller i kombinasjon med en kolesterolbiosynteseinhibitor, for fremstilling av et medikament for behandling eller forebyggelse av arteriosklerose eller for reduksjon av kolesterolnivåer.