NO163595B - Fremgangsmaate for fremstilling av forbindelsen 3-(n-fenylacetylaminopiperidin)-2,6-dion fra urin. - Google Patents
Fremgangsmaate for fremstilling av forbindelsen 3-(n-fenylacetylaminopiperidin)-2,6-dion fra urin. Download PDFInfo
- Publication number
- NO163595B NO163595B NO822218A NO822218A NO163595B NO 163595 B NO163595 B NO 163595B NO 822218 A NO822218 A NO 822218A NO 822218 A NO822218 A NO 822218A NO 163595 B NO163595 B NO 163595B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- antineoplaston
- fraction
- urine
- fractions
- compound
- Prior art date
Links
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 title claims description 44
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- ITESSSIUDOPQKI-UHFFFAOYSA-N 2-phenyl-n-piperidin-1-ylacetamide Chemical compound C1CCCCN1NC(=O)CC1=CC=CC=C1 ITESSSIUDOPQKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title 1
- 229920004518 DION® Polymers 0.000 title 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 28
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 15
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 10
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 9
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000011236 particulate material Substances 0.000 claims description 2
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 claims description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 20
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- OQGRFQCUGLKSAV-JTQLQIEISA-N n-[(3s)-2,6-dioxopiperidin-3-yl]-2-phenylacetamide Chemical compound N([C@@H]1C(NC(=O)CC1)=O)C(=O)CC1=CC=CC=C1 OQGRFQCUGLKSAV-JTQLQIEISA-N 0.000 description 19
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- JFLIEFSWGNOPJJ-JTQLQIEISA-N N(2)-phenylacetyl-L-glutamine Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CC1=CC=CC=C1 JFLIEFSWGNOPJJ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 18
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 18
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 16
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 13
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 10
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 10
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 10
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 description 10
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 description 10
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 9
- 206010027452 Metastases to bone Diseases 0.000 description 8
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 8
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010027457 Metastases to liver Diseases 0.000 description 5
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 5
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 5
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 5
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000011418 maintenance treatment Methods 0.000 description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 description 4
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 3
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 3
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000001223 reverse osmosis Methods 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- VMZCDNSFRSVYKQ-UHFFFAOYSA-N 2-phenylacetyl chloride Chemical compound ClC(=O)CC1=CC=CC=C1 VMZCDNSFRSVYKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 206010059282 Metastases to central nervous system Diseases 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 231100000215 acute (single dose) toxicity testing Toxicity 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000037189 immune system physiology Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 201000009546 lung large cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 230000017363 positive regulation of growth Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000011045 prefiltration Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000001599 sigmoid colon Anatomy 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 2
- WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 2-phenylacetic acid Chemical compound O[14C](=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 0.000 description 1
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010065553 Bone marrow failure Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical class [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 206010053155 Epigastric discomfort Diseases 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical group OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000002397 Kinins Human genes 0.000 description 1
- 108010093008 Kinins Proteins 0.000 description 1
- 208000007433 Lymphatic Metastasis Diseases 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010052178 Lymphocytic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 206010027459 Metastases to lymph nodes Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000006877 Pituitary Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010047386 Pituitary Hormones Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010037423 Pulmonary oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000009125 Sigmoid Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000036765 Squamous cell carcinoma of the esophagus Diseases 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011047 acute toxicity test Methods 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940069428 antacid Drugs 0.000 description 1
- 239000003159 antacid agent Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001458 anti-acid effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 1
- 108010005569 antineoplaston A5 Proteins 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- RTYJTGSCYUUYAL-YCAHSCEMSA-L carbenicillin disodium Chemical compound [Na+].[Na+].N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C([O-])=O)(C)C)C(=O)C(C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 RTYJTGSCYUUYAL-YCAHSCEMSA-L 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003109 clavicle Anatomy 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000007276 esophageal squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000960 hypophysis hormone Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000000966 lung oat cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000005243 lung squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 238000009115 maintenance therapy Methods 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 208000011645 metastatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002032 methanolic fraction Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 201000002513 peritoneal mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 201000005825 prostate adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000005333 pulmonary edema Diseases 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000006215 rectal suppository Substances 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- JBJWASZNUJCEKT-UHFFFAOYSA-M sodium;hydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[Na+] JBJWASZNUJCEKT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K4/00—Peptides having up to 20 amino acids in an undefined or only partially defined sequence; Derivatives thereof
- C07K4/12—Peptides having up to 20 amino acids in an undefined or only partially defined sequence; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/834—Urine; urinary system
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Hydrogenated Pyridines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse gjelder en fremgangsmåte ved ekstrahering av peptidfraksjon inneholdende peptider med 2 til 9 aminosyrerester og forbindelsen 3-[N-fenylacetylaminopiperi-din] -2 , 6-dion fra urin.
Undersøkelser på nærvær av fysiologisk eller patologisk aktive peptider i urin har foregått i de siste 80 år. Biologisk aktive polypeptider er isolert fra urin som har vist hormon-lignende aktivitet eller ved regulering av biologisk funksjon. Eksempler på biologisk aktive polypeptid-preparater isolert fra urin omfatter vekst-faktorer, pituitære hormoner og kininer.
Den praktisk talt uendelige variasjon av peptidet som kan dannes ved kombinasjon av de tyve vanlige aminosyrene har fått mange forskere til å foreslå at peptidet kan utgjøre et system som kan overføre informasjon fra celle til celle og organ til organ. Ved å følge dette syn på den regulerende betydning av peptider, har forskere isolert urinære peptider som utøver en påvirkning på blodtrykket, modifisering av oppførselen, hjerte-kar-regulering og aktivitet i glatte muskler.
En rekke forskere har,derfor ment at neoplastisk vekst kan reguleres ved hjelp av naturlig forekommende biokjemiske forsvars-mekanismer. Den immunologiske prosess har for det meste vært tilskrevet antineoplastisk aktivitet (se for eksempel Aoki et al, Prog. Exp. Tumor Res., 19:23, 1974). Det er imidlertid andre mulige mekanismer.
Det er foreslått at neoplasi er en celle-differensierings-sykdom. Med det store antall av differensierende celler og antatt muligheten av feil i programmet for differensieringen,
kan grupper av unormalt voksende celler ofte oppstå under inn-virkning av karcinogene faktorer. Uten en pålitelig mekanisme for "normalisering" av slike feilaktig utviklede celler, ville organismene ikke leve meget lenge. En slik mekanisme skulle være i stand til å rette opp veksten av nylig utviklede neoplastiske celler og rette dem inn på normal differensiefings-
vei. Det er søkerens antagelse at peptider er ideelle forbindelser for å fungere som informasjonsbærende molekyler for å regulere celle-differensiering.
I de siste årene har søkeren beskrevet en rekke peptider
av middels størrelse som er oppnådd fra human urin, som demonstrerer inhibering av DNA-syntese og mitosis i kulturer
av forskjellige neoplastiske celler uten signifikant inhibering av normal celle-reproduksjon [se Burzynski, Physiol. Chem. Phys., 5: 437 (1973); Burzynski et al, Fred. Proe, 32 : 766 (1973), Burzynski et al, Physiol. Chem. Phys., 8:13 (1976), Burzynski
et al, Fred. Proe, 35 : 623 (1976); Gross et al, Physiol. Chem. Phys., 8:275 (1976); og Burzynski et al, Physiol. Chem. Phys., 9:485 (1977)].
De aktive forbindelser, men hittil uidentifiserte adskilte forbindelser, fra disse fraksjoner er gitt arbeidsnavnet "antineoplastoner". Søkeren har definert antineoplastoner som substanser fremstilt av en levende organisme som beskytter det mot utvikling av neoplastisk vekst ved hjelp av en ikke immunologisk prosess som ikke signifikant inhiberer veksten av normalt vev.
Selv om noen polypeptider er syntetisert som demonstrerer antineoplastiske egenskaper, (se de Barbieri et al, Boll. Chim. Farm., 111:216, 1972), kjenner ikke søkeren at det er kjent på området å beskrive lavmolekylære polypeptider av liten størrelse (mindre enn 10 aminosyrer) som er isolert og identifisert fra vev eller legemsvæsker som oppviser antineoplastisk aktivitet som er signifikant høyere enn inhibering av normal celle-vekst. Heller ikke kjenner søkeren til at det på det kjente område er beskrevet peptidet 3-[N-fenylacetylaminopiperidin]-2,6-dion eller dets bruk som antineoplastisk middel.
Substanser med lav molekylvekt (molekylvekt mindre enn 2-5000) er anvendbare ved behandling av human neoplastisk sykdom isolert og konsentrert fra human urin. Isoleringen omfatter først ultrafiltreringsoperasjoner som separerer forbindelser med lavere molekylvekt (mindre enn 2000-5000 molekylvekt) fra forbindelser med høyere molekylvekt og proteiner. Etter filtrerings- og ultrafiltreringsoperasjonene, underkastes det resulterende urin-ultrafiltratet som inneholder forbindelsene med lavere molekylvekt forskjellige separeringssekvenser som spesielt gir en antineoplaston-fraksjon omfattende peptidfor-bindelser av liten størrelse (mindre enn 10 aminosyrer).
Ifølge foreliggende oppfinnelse skilles det fra et urinvolum partikkelformet materiale og materiale med en større molekylvekt enn ca. 5000; urinen surgjøres til pH 2 til 3; alt utfelt materiale skilles fra den surgjorte urin; den surgjorte urin innføres i en PHLC (high performance liquid chromato-graphy)-kolonne med C-18-bundet-fase silikagel; og den cytostatisk aktive peptidfraksjon utvinnes, hvilken peptidfraksjon inneholder forbindelsen 3-[N-fenylacetylaminopiperidin]-2,6-dion.
Fortrinnsvis surgjøres urinen til pH ca. 2,5. Det kan
være hensiktsmessig å rense det oppnådde 3-[N-fenylacetylamino-piperidin] -2 , 6-dion fra peptidfraksjonen ved en andre HPLC-operasjon. Denne utføres med fordel på en sulfonert polystyren-kolonne for aminosyrer eller et ekvivalent system.
Den viktigste aktive komponent, 3-[N-fenylacetylamino-piperidin] -2,6-dion, syntetiseres ved omsetning av L-glutamin og fenylacetylklorid sammen fulgt av flere ekstraksjonsopera-sjoner for å isolere produktet 3-[N-fenylacetylaminopiperidin]-2,6-dion fra biproduktene.
Ved hydrolyse av 3-[N-fenylacetylaminopiperidin]-2,6-dion oppnås nedbrytningsproduktene, fenylacetylglutamin og fenyleddiksyre.
Antineoplaston-fraksjonene, 3-[N-fenylacetylaminopiperidin]-2,6-dion og nedbrytningsproduktene er anvendbare ved behandling av human neoplastisk sykdom.
Kort beskrivelse av tegningene
Figur 1 representeter et kromatogram av antineoplaston-fraksjon Al. Figur 2 representeter et kromatogram av antineoplaston-fraksjon A2. Figur 3 representerer et kromatogram av antineoplaston-fraksjon A3. Figur 4 representerer et kromatogram av antineoplaston-fraksjon A4. Figur 5 representerer et kromatogram av antineoplaston-fraksjon A5.
Oppfinnelsen skal beskrives i form av foretrukne utførelses-former som er kjent for søkeren på innleveringstidspunktet for denne søknad å representere den beste fremgangsmåte for isolering, rensing og anvendelse av urin antineoplaston-fraksjoner og syntetiske antineoplastoner oppvisende antineoplastisk aktivitet.
Ifølge slike foretrukne utførelsesformer er startmaterialet for fremstilling av hver antineoplaston-fraksjon urin samlet fra friske personer. Typisk varierer mengden urin som kreves for å utarbeide anvendbare utbytter av en ønsket antineoplaston-fraksjon A1-A5 fra ca. 2000-3000 liter. Brukbare utbytter ekstrahert fra 2000-3000 liter urin er i størrelsesorden 100-8 00 gram tørt stoff for hver av de respektive antineoplaston-fraksjonene. Oppsamlede urin-prøver kan lyofiliseres til en tørr pulverform dersom ekstraksjons-, isolasjons- og rense-fremgangsmåtene ikke skal gjennomføres straks. Typisk utføres imidlertid isolasjonen og rensningen av de respektive antineoplaston-f raks joner straks ved anvendelse av nylig samlet urin.
Det skal bemerkes at standard forsiktighetsregler mot bakterie-forurensning tas hele tiden og fremstillingene sjekkes rutinemessig på pyrogenisitet, toksisitet og sterilitet ifølge standard-teknikker. Pyrogen-fritt,sterilt vann anvendes i slutt-trinnene,og alle fremgangsmåter gjennomføres ved om-givende værelsestemperatur om ikke annet er konstatert.
A. Isolasjon og rensning av anti-
neoplaston- fraksjon Al fra human urin
Rekonstituert lyofilisert urin ( gjenoppløst i deionisert eller destillert vann) eller nyinnsamlet urin filtreres først fysisk gjennom papir, membran eller patron-filter med gjennomsnittlig porestørrelse på 3 u. Det første filtratet filtreres så gjennom et andre filter med en gjennomsnittlig porestørrelse på 0,2 y. Disse filtreringstrinnene gjennomføres for å skille suspendert partikkelformig eller sedimentert stoff fra urin-væsken.
Deretter underkastes den forfiltrerte urin ultrafiltrering. Ultrafiltrering gjennomføres ønskelig gjennom et hult fibersystem, fortrinnsvis et Amicon eller Romicon system-filter med en molekylvekt avkutting på ca. 5000 daltons. For ultra-filtreringsformålet kan ethvert annet ultrafiltreringsmembran eller hul fiber ultrafilter anvendes med et molekylvekt avkutt egnet i området 5000 til 2000. Slik ultrafiltrering tjener til å fjerne materialer med molekylvekter større enn 2000 til 5000 avhengig av det valgte filter som anvendes.
Ultrafiltratet surgjøres med konsentrert syre, passende
salt- eller svovel-syre, tilsatt langsomt under kraftig omrøring inntil løsningen når et pH-område fra 2 til 3, fortrinnsvis pH 2,5. Det surgjorte ultrafiltratet filtreres så gjennom et 0,2 u filter for å fjerne eventuelt utfelt partikkelformig stoff.
Høy-ytelses væske-kromatografi-teknikker anvendes for ytterligere å rense og konsentrere antineoplaston-fraksjon Al.
En prøve , gjerne 250 ml (mengden avhenger naturligvis av kapasiteten til systemet), av det surgjorte ultrafiltratet innføres i en,høy-ytelses væske-kromatografi-kolonne, ønskelig et Waters Prep 500 HPLC-system under anvendelse av Prep 500 C-18 silikagel patron-kolonne (silikagel av bundet fase-type). Systemet er også utstyrt med en refraktiv indeks detektor. Imidlertid kan enhver egnet deteksjonsmetode som for eksempel UV-fotometri, ionedetektor, osv. anvendes. Antineoplaston-fraksjon A2 elueres med deionisert eller destillert vann og er karakterisert som den peptid-fraksjon som har en refraktiv indeks-topp som opptrer etter passasje av ca. 450 ml vann gjennom kolonnen. Den resulterende antineoplaston-fraksjon Al oppsamles og konsentreres ved rotasjonsfordampning under redusert trykk og så ytterligere frysetørket ved lyofiliser-
ing.
Antineoplaston-fraksjon Al kan anvendes i en rekke farma-søytiske former omfattende, men ikke begrenset til, intravenøs, intramuskulær, subkutan, intrakavital og intratumor-injeksjoner, kapsler og tabletter for oral administrasjon, rektale supposi-torier og løsninger og sprayer for lokalt bruk.
B. Isolasjon og rensning av anti-
neoplaston- fraksjon A2 fra human urin
Urin som er forfiltrert og ultrafiltrert ifølge
beskrivelsen av fremstilling av antineoplaston-
fraksjon Al, surgjøres med konsentrert syre, typisk saltsyre. Syren tilsettes langsomt til ultrafiltrat-løsningen under kraftig omrøring inntil løsningen når et pH-område fra ca. 1 til ca. 2, fortrinnsvis pH 1,5.
Ultrafiltratet fra det ovenstående trinn innføres i en kromatografi-kolonne som inneholder en polymer-harpiks-adsorbent, fortrinnsvis Amberlite XAD-8 polymer-harpiks-adsorbent, et produkt fra Rohm & Haas Co., Philadelphia, Pennsylvania. Ethvert annet materiale som har lignende kjemisk struktur eller fysisk kjemiske egenskaper kan anvendes istedenfor Amberlite-adsorbenten. De aktive antineoplastiske materialene elueres fra kolonnen ved å anvende vaskninger i rekkefølge omfattende en første vaskning med deionisert eller revers osmose-vann (Wl), en andre vaskning med en blanding av vann og metanol (for eksempel 8 % volum/volum) (M), en tredje vaskning av deionisert eller revers osmose-vann (W2), en fjerde vaskning med 4 %ig vandig natriumhydroksyd-løsning (N), og en femte vaskning med deionisert eller revers osmose-vann inntil pH i eluatet ligger i det nøytrale område. Eluatene Wl, W2 og M oppsamles. pH i løsningene av Wl, W2 og M justeres til ca. 2,5 med dråpevis tilsetning av syre, for eksempel svovelsyre.
Eluatene Wl, W2 og M fra det foregående trinn føres gjennom en kromatografi-kolonne pakket med silikagel-preparat C-18 (silikagel av bundet fase-type) tilgjengelig fra Waters Associates, Whatman eller andre kompanier. Kolonnen vaskes først med deionisert eller destillert vann og elueres så med metanol. Tre brungulaktig farvede fraksjoner opptrer som bånd, betegnet MW1, MW2 og MM. Farvede fraksjoner MW1, MW2
og MM oppsamles hver for seg og hver fraksjon konsentreres på en sirkulerende fordamper til 1 liters volum. Hver fraksjon inndampes videre til tørrhet enten ved rotasjonsfordampning eller f rysetørkning. Tørre fraksjoner MVJl, MW2 og MM er egnet for farmasøytisk anvendelse separat eller sammenblandet. Blandingen av dem kalles .antineoplaston-fraksjon A2, og blandingen er egnet for farmasøytisk administrasjon på samme måte som administrasjonen beskrevet for antineoplaston-fraksjon Al.
C. Isolasjon og rensning av anti-
neoplaston- fraksjon A3 fra human urin
Antineoplaston-fraksjon A3 isoleres fra urin under samme operasjon som isolasjonen og rensningen av antineoplaston-fraksjon A2. Prefiltrering, ultrafiltrering, surgjøring, XAD-8-adsorpsjon og eluering er identisk med dem som utføres
for isolasjonen av antineoplaston-fraksjon A2.
Fraksjon N eluert fra XAD-8-kolonnen med 4 %ig natriumhydroksyd oppsamles og pH justeres til 2,5 med syre, fortrinnsvis svovelsyre. Fraksjon N underkastes så oksydasjonsoperasjoner. Oksydasjonen av fraksjon N gjennomføres fortrinnsvis ved dråpevis tilsetning av en mettet vandig løsning av kaliumpermanganat inntil den fiolette farve av kalium-permanganat forsvinner.
Etter oksydasjonsoperasjonen filtreres fraksjon N i rekke-følge gjennom et 3 u og 0,2 u filter,og det klare filtratet separeres videre ved C-18-kromatografi. Dette kromatografi-trinnet gjentas på samme måte som beskrevet for isolasjon av antineoplaston-fraksjon A2. Det farvede båndet som er synlig på kolonnen betegnet MN elueres med metanol. Det farvede båndet MN oppsamles og inndampes til tørrhet eller frysetørkes. Denne fraksjon kalles antineoplaston-fraksjon A3 og er egnet for direkte farmasøytisk anvendelse. Antineoplaston-fraksjon A3 kan brukes i samme variasjoner av farmasøytiske sammensetninger og administrasjonsmåter som angitt for antineoplaston-fraksjon Al.
D. Isolasjon og rensning av anti-
neoplaston- fraksjon A4 fra human urin
pH i rekonstituert eller ny urin justeres til 2,5 med syre, passende svovelsyre. Innholdet av urin oksyderes så
ved å blande urinen med en mettet løsning av kaliumpermanganat i vann inntil den fiolette farven av kaliumpermanganat forsvinner. Etter oksydasjonen filtreres den behandlede urin,
og det klare filtratet separeres ved C-18-kromatografi ut-ført på samme måte som beskrevet for isolasjonen av antineoplaston-f raksjon A2 .
Det farvede båndet som er synlig på kolonnen betegnes fraksjon U og elueres med metanol og inndampes til tørrhet eller frysetørkes. Denne fraksjon kalt antineoplaston-fraksjon A4 er egnet for farmasøytisk anvendelse i de samme variasjoner av farmasøytiske sammensetninger og administrasjonsmåter som beskrevet for antineoplaston-fraksjon Al.
E. Isolasjon og rensning av anti-
neoplaston- fraksjon A5 fra human urin
Prefiltreringen, ultrafiltreringen og surgjøringen av rekonstituert eller ny urin gjentas som beskrevet ovenfor for fremstilling av antineoplaston-fraksjon Al. Det surgjorte materialetsiLtreres igjen gjennom et 0,2 filter for å fjerne eventuelt utfelt eller sedimentert rest. Dette filtrat inn-føres så i en kromatografi-kolonne fylt med C-18-silikagel av bundet fase-type, (tilgjengelig eksempelvis fra Waters Associates eller Whatman). Andre silikagel-pakninger med samme fysisk kjemiske egenskaper kan erstatte kolonne-pakningen med C-18.
Kolonnen vaskes først med deionisert, destillert vann og elueres så med metanol. En farvet metanolisk fraksjon oppsamles, som inndampes til tørrhet eller frysetørkes. Den tørre fraksjon kalles antineoplaston-fraksjon A5. Antineoplaston A5 er egnet for farmasøytisk anvendelse i samme variasjoner av sammensetninger og administrasjonsmåter som beskrevet for antineoplaston-fraksjon Al.
F. Kromatografisk karakterisering
av antineoplaston- fraksjoner A1- A5
For det formål å identifisere hver av de oppnådde antineoplaston-f raksjoner, ble det utviklet et kromatografisk fingeravtrykk. Hver av de oppnådde antineoplaston-fraksjonene fra de respektive ovenfor beskrevne fremgangsmåter ble under-kastet høy-ytelses væske-kromatografi, med et Waters Prep 500 HPLC-system utstyrt med et Prep 500 C-18 silikagel-kolonne av bundet fase-type og refraktiv indeks-detektor.
Hver antineoplaston-fraksjon ble utviklet ifølge samme rekke-følge av vaskerutine. Først ble en forhåndsbestemt mengde av rekonstituert antineoplaston-fraksjon innført i kolonnen. Typisk ble antineoplaston-fraksjonen i pulverform rekonstituert med destillert vann.
Etter innføring av antineoplaston-fraksjonprøven, ble en første vasking på 100 ml vann ført gjennom kolonnen. Denne vann-vaskingen ble fulgt av 1000 ml av en eddiksyre-løsning, pH 2,5. Endelig ble 1000 ml vann ført gjennom kolonnen og 600 ml metanol. Når eluatene forlot kolonnen, målte og nedtegnet detektoren den tilsynelatende refraktive indeks til bestanddelene som ble eluert med et utløpende løsningsmiddel.
Med henvisning til figurene illustreres et karakteristisk kromatogram for hver av antineoplaston-fraksjonene. Figurene illustrerer den relative refraktive indeks som tilsvarer komponenter som er til stede i eluatene som går ut av kolonnen med de relative elueringsvolumene, tilsvarende passasje av hver av løsningsmiddel-vaskingene. Det vil forståes av de som er kjent med kromatografisk utvikling, at hvert kromatogram representerer en oppløsning av topp-fordeling som er karakteristisk for en spesiell blanding. Et kromatogram tjener som en fingeravtrykk-analyse for blandingen eller i dette tilfelle et fingeravtrykk for antineoplaston-fraksjonene. Det er derfor tydelig at de respektive produkt-antineoplaston-fraksjoner renset ifølge fremgangsmåtene i oppfinnelsen vil oppvise det karakteristiske kromatogram som tilsvarer figurene illustrert her når de utvikles ifølge de betingelser som er beskrevet ovenfor. Det vil også være klart for fagmannen at de relative høyder av toppene vil variere med konsentrasjonen av bestanddels-elementene det som er til stede i hver fraksjon, for-delingen av toppene vil imidlertid ikke variere vesentlig fra sats til sats i hver fraksjon.
I figur 1 er det avbildet et kromatogram hvor antineoplaston-f raks jon Al oppviser en adskilt skarp topp i området ved første vann-vasking. Videre oppviser antineoplaston-fraksjon Al en bred topp-fordeling omfattende en serie av moderat definerte topper konsentrert i området av enden av eddiksyre-vaskingen og av den andre vann-vaskingen. I tillegg opptrer skarpt definerte topper etter 450 ml av metanol-vaskingen.
Figur 2 angir kromatogrammet av antineoplaston-fraksjon
A2, hvori en serie av skarpt definerte topper er synlig i området av slutten av eddiksyre-vaskingen og strekker seg inn i området av den andre vann-vaskingen. Videre er det skarpt definerte topper i metanol-vaskingen.
Figur 3 avbilder kromatogrammet av antineoplaston-
fraksjon A3, som oppviser en liten topp i den første vann-vaskingen og et konsentrert bånd av topper i området av slutten av eddiksyre-vaskingen og som strekker seg inn i den andre vann-vaskingen. I tillegg er det vel definerte topper i metanol-vaskingen.
I figur 4 avbildes et kromatogram av antineoplaston-fraksjon A4 som oppviser en liten topp i den første vann-vaskingen og
en bred topp oppløst i eddiksyre-vaskingen og den andre vann-vaskingen. Videre er det skarpe topper i metanol-vaskingen.
I figur 5 er det et kromatogram av antineoplaston-fraksjon AS. Kromatogrammet avbilder en liten topp i den første vann-vaskingen og en bred topp omfattende en serie av moderat definerte topper i enden av eddiksyre-vaskingen som strekker seg inn i den andre vann-vaskingen. Det er også vel definerte topper i metanol-vaskingen.
Det ble gjort ytterligere forsøk på å isolere og identifisere bestanddelene i hver antineoplaston-fraksjon. Bestanddels-elementene i antineoplaston-fraksjonene A1-A5 ble separert ved høy-ytelses væske-kromatografi på en kolonne pakket med sulfonert polystyren. Et system utviklet av Glenco Scientific Inc. for aminosyre-analyse ble brukt. Elueringen ble gjennomført med 0,2M citrat-buffer i tre forskjellige pH-verdier, nemlig 3,25, 3,80 og 4,10 og ved temperaturer fra 50 til 70°C. For-andringene av buffere og temperaturer ble selektivt regulert ifølge programmet for aminosyre-analyse av Glenco Scientific, Inc.
Eluatene ble omsatt etter hvert som de kom ut av kolonnen
med ninhydrin ved 110°C for å gi absorpsjons-topper som samtidig ble målt og nedtegnet ved 47 0 y og 44 0 y. For å standardisere fremgangsmåten, ble en blanding av 18 aminosyrer separert for å etablere de oppholdstider som er vist i tabell 1.
Hver av antineoplaston-fraksjonene A1-A5 ble separert i adskilte homogene bestanddeler under samme betingelser som den standardiserte aminosyre-blandingen. Tabell 2 oppsummerer oppholdstidene for de adskilte bestanddelene som utgjør hver av de heterogene antineoplaston-fraksjonene.
Preparatene av antineoplaston-fraksjonene Al, A2, A3, A4 og A5 inneholder hverken aminosyrer eller proteiner. De topper
som er nedtegnet under analysen av antineoplaston-fraksjonene tilsvarer de forskjellige forbindelser som reagerer med ninhydrin, nemlig aminosyre-derivater og peptider. Som notert i tabell 2 måles den relative konsentrasjon av hver bestanddel-forbindelse i den spesielle antineoplaston-fraksjonen i forhold til reaktiviteten mellom ninhydrin og a-amino-nitrogenet i bestanddels-forbindelsen. Ifølge den kromatografiske analyse som er beskrevet i dette avsnitt, oppviser hver antineoplaston-fraksjon en signifikant tydelig topp ved en oppholdstid som tilsvarer 7 9 minutter. Ifølge metodene for fremstilling av hver antineoplaston-fraksjon omfattet av foreliggende oppfinnelse, er videre den relative konsentrasjon av den bestanddel som tilsvarer en 79 minutters oppholdstid minst to ganger den relative konsentrasjon av enhver annen gjenværende bestanddelsforbindelse. Det skal imidlertid forståes at den relative konsentrasjon av hver bestanddels-forbindelse som utgjør en antineoplaston-fraksjon vil variere med urin-kilden. Avhengig av urin-kilden
vil flere av bestanddels-forbindelsene i en antineoplaston-fraksjon ikke være selvklar. Søkeren påstår ikke at hver bestanddels-forbindelse i en antineoplaston-fraksjon har antineoplastisk aktivitet. Antineoplastisk aktivitet er demonstrert for hver antiplaston-fraksjon A1-A5 og for den bestanddels-f orbindelse som er karakterisert ved en 79 minutters oppholdstid oppnådd ved den ovenfor beskrevne separeringsteknikk.
Den felles aktive hovedkomponent i antineoplaston-fraksjon Al, A2, A3, A4 og A5 ble til slutt renset ved høy-ytelses væske-kromatografi og tynnsjikt-kromatografi. Søkeren har kalt denne forbindelse antineoplaston A10. Dens kjemiske struktur ble bestemt ved masse-spektrometri, 13^(NMR)-spektro-skopi, og infrarød spektrometri. Strukturen er avbildet neden-for og kalles 3-[N-fenylacetyl-aminopiperidin]-2, 6-dion.
G. Syntese av antineoplaston A10,
3-[ N- fenylacetylaminopiperidin]- 2, 6- dion
Natriumbikarbonat (4,7 mol) og L-glutamin (2,3 mol) ble oppløst i vann (13,5 liter). Fenylacetylklorid (3,0 mol) ble gradvis tilsatt til reaksjonsblandingen og omrørt kraftig i 90 minutter. Etter fullført reaksjon, ble løsningens pH justert til 2,5 med syre og løsningen filtrert. Filtratet ble ekstrahert to ganger med diklormetan og de nedre organiske sjiktene ble kastet. Det øvre vandige sjiktets pH ble justert til 7,0 med base, typisk IN NaOH. Det øvr e sjiktet ble så ytterligere renset ved blanding med Norit A (20 g) (tilgjengelig fra American Norit Co., Jacksonville, Florida). Blandingen ble filtrert etter 30 minutters kontakt med Norit A. Det resulterende filtratet ble inndampet og resten gjenoppløst i metanol. Den oppnådde metanoliske løsning ble filtrert og frysetørket eller inndampet. Den tørkede resten ble gjenoppløst i vann og pH justert til 2,5 passende med HC1. To sjikt ble dannet etter henstand ved værelsestemperatur. Det nedre sjiktet ble oppvarmet inntil det ble mørkebrunt. Det viskøse brune sjiktet ble gjenoppløst i metanol hvori rå antineoplaston A10 utfalt ved avkjøling. Det rå antineoplaston A10 ble gjenoppløst i varm metanol og Norit A ble tilsatt for å fjerne enhver farve. Løsningen ble filtrert mens den var varm. Ved avkjøling dannet det seg hvite krystaller av antineoplaston A10. Strukturen av det syntetiske materiale ble oppklart ved massespektrometri, 13c(NMR)-spektroskopi og infrarød spektrometri, og ble funnet å være identisk med den felles aktive hovedkomponenten i antineoplaston-f raks jonene Al, A2, A3, A4 og A5 med en 7 9 minutters oppholdstid.
Antineoplaston A10 er mest egnet for farmasøytiske anvendelser i form av salter, natriumsaltet foretrekkes. For å fremstille natriumsaltet, suspenderes antineoplaston A10 i etanol og oppvarmes med en løsning av natriumhydroksyd-vann inntil alt materiale er oppløst. Reaksjonsblandingen frysetørkes så. Den faste resten holdes ved værelsestemperatur inntil saltet krystalliserer ut. Etanol tilsettes og omrøres. Filtrering gir et hvitt krystallinsk fast stoff tilsvarende natriumsaltet av antineoplaston A10. Egnede løsninger for parenteral administrasjon fremstilles ved å oppløse natriumsaltet av antineoplaston A10 i pyrogen-fritt vann opp til en konsentrasjon av 100 mg/ml og justere pH til 7,0.
H. Nedbrytningsprodukter av antineoplaston AlO
Den første hydrolyse av antineoplaston A10 gir fenylacetyl-glutamin, og når den føres videre fremstilles fenyleddiksyre:
Fenylacetyl-glutamin ble først beskrevet av Thierfelder •
og Sherwin [se J. Physiol. Chem. 94:1 (1915)] som en bestanddel av normal human-urin. I senere undersøkelser av forbindelsen fenylacetyl-glutamin ble det vist at den hadde en svak effekt på veksten av murin-tumorer [se Lichtenstein et al, Israel J. Med. Sei., 13:316 (1977)] men det var ingen indikasjon på
at forbindelsen var anvendbar med behandling av human kanser. Natriumsaltet ble brukt av Neish ved behandling av Rd/3 sarkon hos rotter men mislyktes i å inhibere tumor-vekst. Resultatene antydet faktisk at behandlingen med fenyleddiksyre forårsaket noen økning av tumor-veksten [se Neish, Experientia, 27:860
(1971)]. Søkeren har i sine kliniske studier demonstrert at fenylacetyl-glutamin alene og en blanding av fenylacetyl-glutamin og fenyleddiksyre hver er anvendbare ved behandling av human kanser.
En blanding av natriumsaltene av fenylacetyl-glutamin og fenyleddiksyre i forholdet 1 til 4 er den foretrukne sammensetning for anvendelse ved behandling av human kanser.
Løsninger for parenteral administrasjon fremstilles ved å rekonstituere de respektive kjemikaliene i form av natrium-salter i pyrogen-fritt vann til ønsket total konsentrasjon, for eksempel 100 mg/ml. Løsningens pH justeres til 7,0 med IN NaOH eller IN HC1. Sterilisering av den rekonstituerte løsningen gjøres ved filtrering ifølge retningslinjene i U.S. Pharmacopeia. Steriliteten til materialet testes som nødvendig ved hjelp av regler og reguleringer til Food and Drug Administration, Section 610.12. De resulterende sterile blandingene er egnede for parenteral injeksjon.
I. Farmasøytiske anvendelser for anti-
neoplaston-f raks joner A1-A5, antineo-
plaston A10 og nedbrytningsprodukter
Løsninger for parenteral administrasjon fremstilles ved re-konstituering av hver av respektive antineoplaston-fraksjoner, antineoplaston A10 og nedbrytningsprodukter i pyrogen-fritt vann til en ønsket hensiktsmessig konsentrasjon, for eksempel 100 mg/ml. Løsningens pH justeres til 7,0 med IN HC1 eller IN NaOH.
Sterilisering av den rekonstituerte løsning utføres ved filtrering ifølge retningslinjene i U.S. Pharmacopeia. Alterna-tivt kan de lyofiliserte pulvere av de respektive antineoplaston-f raks jonene først gass-steriliseres, for eksempel med etylenoksyd, og pulverne deretter innblandes i det pyrogen-frie vannet som naturligvis i seg selv er sterilt. Steriliteten til materialet testes om nødvendig ved hjelp av Rules and Regulations of the Food and Drug Administration, Section 610.12. De resulterende sterile blandingene er egnede for intravenøs, intramuskulær, subkutan, intrakavital og intratumor-injeksjon.
Om de rekonstituerte lyofiliserte antineoplaston-fraksjonene ikke skal brukes straks, kan hindring av mikrobe-vekst oppnåes ved tilsetning av forskjellige antibakterielle og anti-fungale midler til antineoplaston-løsningene, for eksempel parabener, klorbutanol, benzylalkohol, fenol, sorbinsyre, thimerosal og lignende. I mange tilfeller vil det være ønskelig å innblande isotoniske midler til de injiserbare løsningene, for eksempel sukkere eller natriumklorid.
Den antineoplastiske aktiviteten til antineoplaston-fraksjonene A1-A5, antineoplaston A10 og nedbrytningsproduktene ble først fastslått eksperimentelt ved å observere de cytostatiske effektene preparatene ville ha på en tumor-linje sammen-lignet med den totale toksisiteten preparatet ville ha på eksperiment-dyrene. Derfor ansees preparatet med den største cytostatiske aktiviteten og den laveste dyre-toksisiteten å ha ,den beste antineoplastiske aktiviteten, eller terapeutiske effektiviteter.
Den cytostatiske aktiviteten til antineoplaston-fraksjon
Al ble testet i en kultur av human karcinom av bryst-typen MDA-MB-231 oppnådd fra M.D. Anderson Cancer Institute, Houston, Texas. MDA-MB-231 er en raskt voksende type av human bryst-kanser etablert av Cailleau et al, J. Nati. Cancer Inst., 53:661 (1974). Den beregnede fordoblingstid av disse celler er 18 timer når de dyrkes i det orginale medium beskrevet av Beall et al, Physiol. Chem. Physics, 8:281 (1976). For kort
å oppsummere den foretrukne metode og det foretrukne medium, dyrkes cellene i monosjikt ved 37°C i Leibovitz L-15-medium tilsatt 20 % kvegfoster-serum, 1,6 y g/ml glutation, 0,25 U/ml insulin, 100 y g/ml dinatrium-karbenicillin og 100 y g/ml gentamycin.
For bioforsøkene ble antineoplaston-fraksjon Al oppløst i det ovenfor beskrevne medium i fire forskjellige konsentrasjoner dersom var tilfeldig valgt i området 0,5 til 50 mg/ml. Monosjikt-kulturer ble inkubert med det antineoplaston-fraksjon Al-holdige medium i 96 timer. Cellene ble tellet ved visuell metode ved 24 timers intervaller. Kontroll-kulturer ble dyrket i standard-mediet uten tilsatt antineoplaston-fraksjon Al.
Antineoplaston-fraksjon Al i konsentrasjoner på 5 mg/ml produserer en cytostatisk effekt i slike human bryst-karcinom-kulturer. Den cytostatiske effekt bestemmes som et stabilt antall celler (innen grensene fra 80 % til 120 %) tellet etter 24 timer fra inkuberingen og fortsettes i minst ytterligere
48 timer.
Den cytostatiske konsentrasjon av antineoplaston-fraksjon A2-A5 og antineoplaston A10 og nedbrytningsprodukter ble bestemt på samme måte som beskrevet ovenfor. Den cytostatiske konsentrasjon for hver antineoplaston-fraksjon er som følger:
Over disse konsentrasjoner produserer alle antineoplaston-fraksjoner cytotoksisk effekt i human bryst-karcinom-kulturer.
Forsøk på akutt toksisitet på eksperiment-dyr avslører at antineoplaston-fraksjon Al har meget lav toksisitet. Forsøk omfattende 2 5 sveitsiske HA/ICR-mus injisert intraperitonealt med antineoplaston-fraksjon Al resulterte eksempelvis i en LDj-q på 1,3 5 g/kg. Autopsi og mikroskopiske studier av vevene til dyrene som døde under forsøket avslørte kongestion av leveren og markert lunge-ødem. Dyrene som overlevde ble holdt i 1 uke under nær observasjon og ble notert og ha normal aktivitet. Etter 1 uke ble et valgt antall av musene avlivet. Autopsi og mikroskopisk undersøkelse av vevene til disse dyrene var identisk med de til de uinjiserte kontroll-dyrene.
Undersøkelse av akutt toksisitet omfattende antineoplaston-fraksjonene A2-A5, antineoplaston A10 og nedbrytningsproduktene ble utført på samme måte som beskrevet ovenfor. De respektive LD.-Q for mus for hver fraksjon er som følger:
J. Klinisk vurdering av antineoplaston
Definisjonene av remisjon forbundet med neoplastisk sykdom er som følger: fullstendig remisjon er forsvinnin<q> av all klinisk evidens på sykdom,og delvis remisjon er reduksjon med minst 50 % i summen av produktene av to loddrette diametere av all målbar sykdom som varer minst 4 uker. Pasienter er ansett stabilisert dersom målbar tumor-regressjon opptrer men ikke tilsvarer kriteriene for delvis remisjon.
Human neoplastisk sykdom ble behandlet med forskjellige antineoplaston-fraksjoner. For hver neoplastisk sykdom som er undersøkt, var hver testet antineoplaston-fraksjon, antineoplaston A10 og nedbrytningsprodukt, fenylacetyl-glutamin, og en kombinasjon av fenylacetyl-glutamin og fenyleddiksyre effektive i noen grad for hjelp til regresjon av tumorer. Slik det kunne ventes, oppviste noen fraksjoner eller preparater større effektivitet for noen former av neoplasi enn andre fraksjoner.
Doseringen av den valgte antineoplaston-fraksjon for behandingen av den indikerte neoplastiske tilstand avhenger av alder, vekt og tilstand hos pasienten, den spesielle neoplastiske sykdommen og dens styrkegrad, og administrasjonsmåten. En dose på fra ca. 0,5 til ca, 12 g/m<2>/24 timer eller en total dose på fra ca. 0,9 til ca. 20 g gitt i oppdelte doser på opp til 6 ganger om dagen omfatter det effektive området for behandlingen av de fleste neoplastiske tilstander for hvilket som helst av antineoplaston-fraksjonene A1-A5, antineoplaston A10 og nedbrytningsproduktene.
EKSEMPEL I
Til idag har 14 pasienter med fremskredet kreft blitt behandlet med antineoplaston-fraksjon A2 og fulgt i opp til 1 sr. Den foretrukne administrasjonsmåte for preparatet er intravenøs injeksjon gitt hver tolvte time gjennom et kateter innført i venen under kravebenet. Direkte intrapleurale eller intra-peritionale injeksjoner kan også gis. Den gjennomsnittlige gitte dose var 0,8 5 g/m o og maksimum var 2,2 g/m 2 intravenøst hver tolvte time. Intravenøs behandling med full dose av antineoplaston-f raks jon A2 ble vanligvis gitt inntil det ble oppnådd fullstendig remisjon og så fortsatt i minst 6 uker for å fjerne eventuelt gjenværende mikroskopisk sykdom. Etterpå-ble IV-injeksjonene avbrutt og vedlikeholdsbehandlingen ble startet. Vedlikeholdsbehandlingen besto av IM-injeksjoner på 2 til 3 ml av 50 mg/ml antineoplaston-fraksjon A2 som opprinne-lig ble gitt annen hver dag. Dersom det ikke kom tilbake noe nytt tegn på kreft, ble frekvensen av IM-injeksjoner redusert hver 6-8 uke , avtagende fra en injeksjon hver tredje dag til en injeksjon en gang i uken.
I gruppen på 14 pasienter som ble behandlet med antineoplaston-f raks jon A2, oppnådde fire fullstendig remissjon.
Disse fire tilfeller omfattet udifferensiert stor-celle
karcinom i lungen, trinn III (T3N0M0), dårlig differensiert metastatisk karcinom i leveren med ukjent opprinnelse, og to tilfeller av tilbakekommende transitional celle-karcinom i blæren, grad II. I et ytterligere tilfelle omfattende adenokarcinom i brystet med multiple ben-og lever-metastaser,
trinn IV (TONOW 10SS, HEP) ble det oppnådd en fullstendig remissjon av store lever-metastaser og stabilisering av ben-metastaser. Det var også et annet tilfelle av transitionalt celle-karcinom i blæren, grad II i hvilken det ble oppnådd fullstendig remissjon ved hjelp av antineoplaston-fraksjon A2. I dette tilfelle ble antineoplaston-fraksjon A2 gitt som en vedlikeholdsbehandling etter at fullstendig remissjon var oppnådd med antineoplaston A.
Delvis remissjon ble oppnådd i tre tilfeller: peritoneal mesotheliomal, bryst-karcinom med multiple ben-metastaser,
trinn IV, TONOM10SS, og skjellett celle-karcinom i spiserøret med multiple lunge-metastaser, trinn III, T3N0M1PUL.
Stabilisering av sykdommen ble oppnådd i fire tilfeller som omfattet gliom, trinn IV, adenokarcinom i leveren med multiple lunge-metastaser, bryst-karcinom med multiple ben-metastaser, trinn IV, TONOM10SS og bryst-karcinom med lymfeknute-innbefat-ning, trinn IV, T0N3M0.
Den totale respons-grad på behandling med antineoplaston-fraksjon A2 er 93 % idet bare én pasient (7 %) viste fortsatt progressiv sykdom. Behandlingen tolereres meget godt. Få bi virk-ninger kunne registreres og omfattet stimulering av vekst av epidermis, stimulering av benmargen og meget sjelden feber. Stimulering av vekst av epidermis var tydelig etter 3 ukers behandling i form av raskere vekst av negler og tykkere hud på hånd-flaten. Stimulering av benmargen ble vist som forhøyet tall på hvite blodlegemer og plater. Disse bivirkninger er nyttige i de fleste tilfeller fordi dårlig heling av huden og myelo-undertrykking foreligger hos mange kreftpasienter.
EKSEMPEL II
Følgende sykdomshistorie illustrerer en vellykket be-handlingsmetode ved anvendelse av antineoplaston-fraksjon A3
for behandling av adenokarcinom i prostata med ben-metastase, trinn IV (RONOM10SS, G3).
Behandling av en 72 år gammel hvit mann ble startet med antineoplaston A [se Burzynski et al, Physiol. Chem. Phys. 9:485, 1977) i 3 måneder. Den opprinnelige behandling med antineoplaston A resulterte i stabilisering av sykdommen og en viss tvilsom minskning av størrelsen av metastasene.
Etter 3 måneder ble antineoplaston A avbrutt og pasienten ble startet på antineoplaston-fraksjon A3. Han fikk først injeksjon av 1 ml antineoplaston-fraksjon A2, 100 mg/ml, gitt gjennom et kateter under kravbenet fulgt av 3 ml normal saltløsning og 250 enheter heparin. Dosen ble ytterligere øket opp til 5 ml av samme preparat gitt intravenøst hver tolvte time. Slik be-handlings-regime tilsvarer dosering av 0,47 g/m 2/24 timer. Etter ca. 7 måneder ble frekvensen av injeksjonene minsket til 2 ml antineoplaston-fraksjon A3, 100 mg/ml, gitt intramuskulært hver tredje dag, og endelig etter 4 måneder ble dose-regimet ytterligere minsket til 2 ml av preparatet administrert intramuskulært en gang i uken.
Behandlingen med antineoplaston-fraksjon A3 resulterte i fullstendig remissjon av ben-metastasene fastslått ved ben-undersøkelser. Behandlingen ble meget godt tolerert uten noen synlig bivirkning.
Pasienten fortsetter en vedlikeholdsbehandling med antineoplaston-f raks jon A3, og har ikke vist noen tilbakekomst av sin kanser til nå.
EKSEMPEL III
Fenylacetyl-glutamin i form av dets natriumsalt ble gitt
på to administrasjonsmåter, intravenøst og oralt. Det obser-verte effektive doseringsområde var mellom 1,1 g/m 2'/24 timer til 3,0 g/m<2>/24 timer IV og 0,5 g/m<2>/24 timer til 2,87 g/m<2>/24 timer po. De intravenøse injeksjonene ble vanligvis gitt i oppdelte doser fortrinnsvis hver sjette time. Orale preparater ble gitt i form av 500 mg kapsler hver tolvte eller hver sjette time. Seks pasienter ble behandlet med natriumfenylacetyl-
glutamin. Fullstendig remissjon ble oppnådd i to tilfeller som omfattet skjellet celle-karcinom i strupen, trinn II og udifferensiert karcinom i store celler i lungen med lymfeknute og lever-metastaser, trinn III. Stabilisering av sykdommen ble observert i et tilfelle av adenokarcinom i lungen, trinn III. Progressjon av sykdommen ble notert hos tre pasienter
som led av adenokarcinom i den sigmoide tykktarm med multiple lever-metastaser, trinn IV og adenokarcinom i tykktarmen med flere metastaser, trinn IV og bryst-karcinom med multiple lunge og ben-metastaser, trinn IV. Behandlingen ble vanligvis startet med intravenøse injeksjoner og fortsatte inntil fullstendig remissjon ble oppnådd. Etterpå ble vedlikeholdsbehandling startet ved bruk av det orale preparatet. Oral administrasjon av natriumsaltet av fenylacetyl-glutamin produserte ofte svak irritasjon i maven, som ble mildnet ved samtidig administrasjon av antacide preparater.
EKSEMPEL IV
I kliniske studier omfattende den terapeutiske undersøkelse av fenylacetyl-glutamin og fenyleddiksyre ble en blanding på
1:4 av natriumsaltene valgt som basis-sammensetning. Denne blanding rekonstituert i sterilt, bufret vann ble først administrert intravenøst i et doseringsområde fra 0,24 g/m 2/24 timer til 5,3 g/m 2/24 timer. Den daglige mengde ble vanligvis gitt i oppdelte doser fortrinnsvis hver sjette time. 10 pasienter med forskjellige avanserte neoplastiske tilstander ble behandlet .
Det var bare ett tilfelle i hvilket fullstendig remissjon ble oppnådd, men fenylacetyl-glutamin og fenyleddiksyre ble brukt etter at pasienten hadde fått strålebehandling. Den nyttige effekten av behandling kunne derfor være forårsaket av kombinasjonseffekten fra strålingen og kjemoterapien. Denne pasient led av karcinom i livmorhalsen, trinn IA. Det var fire tilfeller av delvis remissjon oppnådd under behandlingen med blandingen. I tre av disse tilfeller ble det ikke gitt noen annen konvensjonell behandling i tillegg til blandingen. Disse tilfeller omfattet: bryst-karcinom med multiple ben-metastaser, trinn IV, lymfocytisk lymfom, trinn IV, og kronisk myelocytisk leukemi. I et ytterligere tilfelle av lunge-adenokarcinom med multiple hjerne-metastaser, trinn III ble behandlingen med fenyl-acetyl-glutamin og fenyleddiksyre-blanding gitt etter stråle-terapi. Stabilisering av sykdommen ble sett i tre tilfeller som omfattet karcinom i sigmoid tykktarm med multiple lever-metastaser, trinn IV, gliom (primær malign hjerne-tumor) og karcinom i strupen med multiple lunge-metastaser, trinn IV.
Anvendelse av de beskrevne antineoplaston-fraksjoner Al-
A5, antineoplaston A10, fenylacetyl-glutamin og en kombinasjon
av fenylacetyl-glutamin og fenyleddiksyre har hatt suksess i regresjon av tumorer forbundet med human kreft i spiserøret, brystkreft, blærekreft, tykktarmkreft, udifferensiert karcinom i store celler i lungen, mesotheliom, adenokracinom og skjellet celle-karcinom i lungen, havrecelle-karcinom, hjernemetastaser, ben-metastaser, lungemetastaser, prostatakreft, pankreakreft, lymfatisk lymfom, livmorhalskreft, primær malign hjernetumor.
Videre er hver av antineoplaston-fraksjonene A1-A5, antinoeplaston A10, fenylacetyl-glutamin og kombinasjonene av fenyl-acetyl-glutamin og fenyleddiksyre anvendbare ved behanding av andre former av neoplastisk sykdom omfattende myelocytisk leukemi, kreft i strupen, kreft i livmoren, lymfom, kreft i tykktarmen og sigmoid.
Den forangående beskrivelse av oppfinnelsen er rettet mot spesielle eksempler for ekstraksjon av antineoplastiske peptid-fraksjoner fra human urin for forklarings- og illustrasjonsformål. ■ Skal imidlertid forståes at mange modifikasjoner og forandringer
i produktsammensetninger, fremgangsmåtene for ekstrahering av antineoplaston-fraksjonene, syntesen av antineoplaston A10 og metodene for anvendelsene av de samme kan utføres for innføring og anvendelse av foreliggende oppfinnelse uten å avvike fra innen oppfinnelsens område som er definert i kravene. For eksempel antas det at peptider med antineoplastisk aktivitet kan ekstraheres fra andre kilder enn urin, som for eksempel blod, spytt,organer, eller vevprøver. Det skal forståes at søkeren har rettet sine fraksjoneringsfremgangsmåter mot urin basert på den økonomiske muligheten for å oppnå et stort volum av væsken som er nødvendig for å oppnå brukbare mengder av den antineoplaston-fraksjonen som normalt foreligger i slike væsker i meget lave konsentrasjoner. Det vil imidlertid forståes av fagmannen at andre vev-væsker eller vev-prøver også inneholder små mengder
av peptider som oppviser antineoplastisk aktivitet, og at slike peptider kan ekstraheres ved modifikasjon av de fremgangsmåter som er beskrevet her.
Claims (4)
1. Fremgangsmåte ved ekstrahering av en peptidfraksjon inneholdende peptider med 2 til 9 aminosyrerester og forbindelsen 3-[N-fenylacetylaminopiperidin]-2,6-dion fra urin, karakterisert ved at det fra et urinvolum utskilles partikkelformet materiale og materiale med en større molekylvekt enn ca. 5000;
urinen surgjøres til pH 2 til 3;
alt utfelt materiale skilles fra den surgjorte urin;
den surgjorte urin innføres i en HPLC (high performance liguid chromatography)-kolonne med C-18-bundet-fase silikagel;
og
den cytostatisk aktive peptidfraksjon utvinnes, hvilken peptidfraksjon inneholder forbindelsen 3-[N-fenylacetyl-
aminopiperidin] -2,6-dion.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert ved at urinen surgjøres til pH Cd. • 2 f 5 •
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert ved at forbindelsen 3-[N-fenylacetylaminopiperidin]-2,6-dion fra peptidfraksjonen renses videre ved en andre HPLC-operasjon.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 3,
karakterisert ved at den andre HPLC-operasjonen utføres på sulfonert polystyren kolonne for aminosyrer eller et ekvivalent system.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US27972881A | 1981-07-02 | 1981-07-02 | |
US06/330,383 US4470970A (en) | 1981-07-02 | 1981-12-15 | Purified antineoplaston fractions and methods of treating neoplastic disease |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO822218L NO822218L (no) | 1983-01-03 |
NO163595B true NO163595B (no) | 1990-03-19 |
NO163595C NO163595C (no) | 1990-06-27 |
Family
ID=26959856
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO822218A NO163595C (no) | 1981-07-02 | 1982-06-29 | Fremgangsmaate for fremstilling av forbindelsen 3-(n-fenylacetylaminopiperidin)-2,6-dion fra urin. |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4470970A (no) |
EP (1) | EP0069232B1 (no) |
JP (3) | JPH0729925B2 (no) |
AU (1) | AU551109B2 (no) |
CA (1) | CA1188218A (no) |
DE (1) | DE3273952D1 (no) |
DK (2) | DK162813C (no) |
ES (1) | ES512894A0 (no) |
HK (1) | HK30289A (no) |
IL (1) | IL65960A (no) |
MY (1) | MY102918A (no) |
NO (1) | NO163595C (no) |
NZ (1) | NZ200805A (no) |
SG (1) | SG4489G (no) |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4559325A (en) * | 1981-12-15 | 1985-12-17 | Burzynski Stanislaw R | Purified antineoplaston fractions and methods of treating neoplastic disease |
US4593038A (en) * | 1985-04-03 | 1986-06-03 | Burzynski Stanislaw R | Topical use of 3-phenylacetylamino-2,6-piperidinedione for treatment of skin wrinkles and hyperpigmentation |
US4705796A (en) * | 1986-08-25 | 1987-11-10 | Stereochemical Genetics, Inc. | Use of 3-N-phenylacetylamino-2,6-piperidinedione for treatment of neuropsychiatric disorders |
US5238947A (en) * | 1990-04-12 | 1993-08-24 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Synthetic piperidinediones with cytostatic activity |
WO1991016309A1 (en) * | 1990-04-12 | 1991-10-31 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Synthetic piperidinediones with cytostatic activity |
US5089508A (en) * | 1990-09-04 | 1992-02-18 | Burzynski Stanislaw R | Methods for treating aids |
US5116622A (en) * | 1990-09-12 | 1992-05-26 | Burzynski Stanislaw R | Methods for treating parkinson's disease |
US5605930A (en) * | 1991-10-21 | 1997-02-25 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Compositions and methods for treating and preventing pathologies including cancer |
US6037376A (en) * | 1991-10-21 | 2000-03-14 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Methods for therapy of cancer |
US5635532A (en) * | 1991-10-21 | 1997-06-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Compositions and methods for therapy and prevention of pathologies including cancer, AIDS and anemia |
AU2804592A (en) * | 1991-10-21 | 1993-05-21 | Dvorit Samid | Compositions and methods for therapy and prevention of cancer, aids, and anemia |
IT1257184B (it) * | 1992-12-22 | 1996-01-10 | Applied Research Systems | Preparato ad attivita' antinfiammatoria, anticoagulante e antitumorale |
US5783605A (en) * | 1995-02-27 | 1998-07-21 | Kuo; Sheng-Chu | Helper inducers for differentiation therapy and chemoprevention of cancer |
ATE310505T1 (de) * | 1996-05-14 | 2005-12-15 | Stanislaw R Burzynski | Liposomale antineoplaston therapie mit bemerkenswert verbesserter antineoplastischer aktivität |
EP1886677A1 (en) * | 1996-07-26 | 2008-02-13 | Susan P. Perrine | Use of an inducing agent for the treatment of blood, viral and cellular disorders |
US6258849B1 (en) | 1998-07-23 | 2001-07-10 | Stanislaw R. Burzynski | Treatment regimen for administration of phenylacetylglutamine, phenylacetylisoglutamine, and/or phenylacetate |
US6127419A (en) * | 1998-11-23 | 2000-10-03 | Burzynski; Stanislaw R. | Phenylacetic acid compositions for treating or preventing atherosclerosis and restenosis |
AU1553799A (en) * | 1998-12-18 | 2000-07-12 | Chang, Ming-Lieh | Pharmaceutical composition inducing cancer cell differentiation and the use for treatment and prevention of cancer thereof |
US6987131B1 (en) | 2000-06-26 | 2006-01-17 | Burzynski Stanislaw R | Phenylacetic acid compositions for treating or preventing hypercholesterolemia |
MXPA05001267A (es) * | 2002-08-01 | 2005-10-18 | Aesgen Inc | Tratamiento mejorado de cancer con glutamina. |
US20060246016A1 (en) * | 2003-05-28 | 2006-11-02 | Burzynski Stanislaw R | Toothpaste containing anticancer agents |
US7087219B2 (en) * | 2003-05-28 | 2006-08-08 | Stanislaw R. Burzynski | Toothpaste containing anticancer agents |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BE463549A (no) * | ||||
GB2003887A (en) * | 1977-09-06 | 1979-03-21 | Nyegaard & Co As | Isolation of peptides from urine |
JPS57115330A (en) * | 1981-01-08 | 1982-07-17 | Toshiba Mach Co Ltd | Forming process for thick plastic products and its metal mold |
JP2897285B2 (ja) * | 1989-10-19 | 1999-05-31 | 東洋紡績株式会社 | 熱可塑性樹脂フィルム積層物 |
-
1981
- 1981-12-15 US US06/330,383 patent/US4470970A/en not_active Expired - Lifetime
-
1982
- 1982-05-26 CA CA000403789A patent/CA1188218A/en not_active Expired
- 1982-05-27 AU AU84239/82A patent/AU551109B2/en not_active Expired
- 1982-05-28 DK DK242082A patent/DK162813C/da not_active IP Right Cessation
- 1982-05-31 NZ NZ200805A patent/NZ200805A/en unknown
- 1982-06-03 EP EP82104867A patent/EP0069232B1/en not_active Expired
- 1982-06-03 DE DE8282104867T patent/DE3273952D1/de not_active Expired
- 1982-06-03 IL IL65960A patent/IL65960A/xx not_active IP Right Cessation
- 1982-06-07 ES ES512894A patent/ES512894A0/es active Granted
- 1982-06-29 NO NO822218A patent/NO163595C/no not_active IP Right Cessation
- 1982-07-02 JP JP11533082A patent/JPH0729925B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-09-29 MY MYPI87002172A patent/MY102918A/en unknown
-
1989
- 1989-01-26 SG SG44/89A patent/SG4489G/en unknown
- 1989-04-13 HK HK302/89A patent/HK30289A/xx not_active IP Right Cessation
-
1991
- 1991-05-09 JP JP3133638A patent/JPH0780764B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1991-05-09 JP JP3133639A patent/JPH0739390B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1991-08-06 DK DK911434A patent/DK143491D0/da not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE3273952D1 (en) | 1986-12-04 |
MY102918A (en) | 1993-03-31 |
DK143491A (da) | 1991-08-06 |
NO163595C (no) | 1990-06-27 |
DK162813B (da) | 1991-12-16 |
JPH0729925B2 (ja) | 1995-04-05 |
EP0069232A3 (en) | 1984-07-04 |
IL65960A0 (en) | 1982-09-30 |
NZ200805A (en) | 1986-08-08 |
US4470970A (en) | 1984-09-11 |
JPH0780764B2 (ja) | 1995-08-30 |
EP0069232B1 (en) | 1986-10-29 |
AU8423982A (en) | 1983-01-06 |
EP0069232A2 (en) | 1983-01-12 |
JPH0558886A (ja) | 1993-03-09 |
CA1262907C (no) | 1989-11-14 |
JPH0532548A (ja) | 1993-02-09 |
ES8502417A1 (es) | 1985-01-01 |
DK242082A (da) | 1983-01-03 |
AU551109B2 (en) | 1986-04-17 |
ES512894A0 (es) | 1985-01-01 |
DK162813C (da) | 1992-05-04 |
DK143491D0 (da) | 1991-08-06 |
IL65960A (en) | 1985-11-29 |
SG4489G (en) | 1989-05-26 |
JPS5810521A (ja) | 1983-01-21 |
JPH0739390B2 (ja) | 1995-05-01 |
HK30289A (en) | 1989-04-21 |
NO822218L (no) | 1983-01-03 |
CA1188218A (en) | 1985-06-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO163595B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av forbindelsen 3-(n-fenylacetylaminopiperidin)-2,6-dion fra urin. | |
US9029326B2 (en) | Polypeptides, nucleic acid molecule encoding polypeptides, and uses of polypeptides | |
US4558057A (en) | Purified antineoplaston fractions and methods of treating neoplastic disease | |
CN109369783A (zh) | 一种多肽rdp1及其提纯方法与应用 | |
WO2007136294A1 (en) | Peptide substance enhancing capillaries resistance, pharmaceutical composition on its base and method of its application | |
US4559325A (en) | Purified antineoplaston fractions and methods of treating neoplastic disease | |
EP1570272A2 (de) | Bestimmung agonistischer autoantikörper | |
PT1299541E (pt) | Processo para obtenção e utilização de novas defensinas humanas como proteínas biologicamente activas para o tratamento de infecções e outras doenças | |
KR100207040B1 (ko) | 미네랄, 생약재엑기스 및 아미노산이 함유된 건강식품조성물 | |
CN104127473B (zh) | 一种治疗骨疾病的药物组合物及其注射剂和制法 | |
Waddell et al. | Production of human nerve-growth factor in a patient with a liposarcoma | |
CA1262907A (en) | 3-¬n-phenylacetylaminopiperidine|-2,6 dion and process of synthesizing same | |
NO138852B (no) | Fremgangsmaate ved fremstilling av et nytt hormon, litoralon | |
FI92391C (fi) | Menetelmä 3-(N-fenyyliasetyyliaminopiperidiini)-2,6-dionin valmistamiseksi | |
DE19543628A1 (de) | Humanes, im Blut zirkulierendes Peptid mit insulinotroper Wirkung (GCAP-II-(89-112), (Guanylyl Cyclase C Aktivierendes Peptid II) und seine GCAP-Analoga, insbesondere das GCAP-I-(99-115), seine Anwendung als pharmakologischer Wirkstoff und Benutzung seines Wirkungsprinzipes zur Bereitstellung neuer GC-C-abhängiger insulinotroper Wirkstoffe | |
Rowntree et al. | Further studies of renal function in renal, cardiorenal and cardiac diseases | |
CN112516218B (zh) | 一种熟地黄中类黑精及其应用 | |
WO1997040073A2 (de) | BIOLOGISCH AKTIVER EIWEISSSTOFF - KOLLAGENFRAGMENT HF-COLL-18/514cf - ZUR HEMMUNG DES WACHSTUMS VON TUMOREN UND VON GEFÄSSWUCHERUNGEN | |
EP4353248A1 (en) | Calcium-sensing receptor agonist composition and application thereof | |
Terasawa et al. | Disposition of glycyrrhetic acid after oral administration of Kanzo-to and Shyakuyaku-kanzo-to in the rat | |
Rose | A modified method for the clinical estimation of pepsin | |
CN118005741A (zh) | 一种抗菌多肽ap16a及其制备方法和应用 | |
CN118240007A (zh) | 多肽及其在预防或修复黏膜损伤和促进角膜损伤恢复上的应用 | |
KR101505239B1 (ko) | 심근 펩타이드, 이의 제조방법 및 용도 | |
DE4309815A1 (de) | Verfahren zur Gewinnung und Anwendung des Guanylatzyklavaktivierenden Peptid I (GAP-I) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MK1K | Patent expired |
Free format text: EXPIRED IN JUNE 2002 |